CN101370390A - 涉及等电沉淀的卡诺拉分离蛋白的制备 - Google Patents

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Abstract

通过等电沉淀从卡诺拉油籽粉的盐水溶液提取物形成主要由7S卡诺拉蛋白组成的卡诺拉分离蛋白。从等电沉淀步骤的上清液中回收主要由2S卡诺拉蛋白组成的卡诺拉分离蛋白。

Description

涉及等电沉淀的卡诺拉分离蛋白的制备
相关申请的参考
[0001]基于35 USC 119(e)，本申请要求于2005年9月21日提交的美国临时专利申请No.60/718,754的优先权。
发明领域
[0002]本发明涉及从油籽粉，特别是卡诺拉油籽粉中制备分离蛋白。
发明的背景技术
[0003]转让给其受让人且其公开内容通过引用结合到本文中的美国专利Nos.5,844,086和6,005,076(“Murray II”)，描述了一种从具有显著油脂含量的油籽粉，包括具有该含量的卡诺拉油籽粉中分离出分离蛋白的方法。该方法涉及的步骤包括从油籽粉中溶解蛋白质类材料，该步骤也使粗粉中的油脂溶解，并从得到的蛋白质水溶液中去除油脂。蛋白水溶液可以在脱脂的步骤之前或之后从油籽粉残留物中分离出来。然后将经脱脂的蛋白溶液浓缩以提高蛋白质浓度，同时维持离子强度基本恒定，之后可对浓缩蛋白质溶液进行进一步的脱脂步骤。然后将浓缩的蛋白质溶液稀释，从而作为胶束形式的不连续蛋白质滴，形成高度凝聚蛋白分子的雾状块。允许将蛋白质胶束沉淀以形成凝聚、聚结、浓稠、无定型、粘性的面筋样分离蛋白块，称为“蛋白胶束块”或PMM，将其与残留物的水相部分分离并干燥。
[0004]该分离对比具有至少约90wt％的蛋白质含量(通过凯氏法或当量法N×6.25测量)，基本上是未变性的(通过差示扫描量热仪测量)，并具有低残余油脂含量。本文使用的术语“蛋白含量”指基于干重表示的分离蛋白中的蛋白质量。使用该方法所获得的分离蛋白的产量，以作为干分离蛋白回收的从油籽粉中提取的蛋白质的比例计，通常小于40wt％，典型地为约20wt％。
[0005]开发前述专利中描述的方法，作为对如美国专利4,208,323(Murray IB)中所述的从各种蛋白质原料包括油籽形成分离蛋白的方法的修改和改善，所述专利的公开内容通过引用结合到本文中。在美国专利4,208,323授权的1980年，可获得的油籽粉没有在Murray II专利时期的卡诺拉油籽粉的油脂污染水平，并且，因此美国专利4,208,323的方法不能根据Murray II方法而从这种加工油籽粉中生产出蛋白含量大于90wt％的蛋白质类物质。在美国专利4,208,323中没有使用芥菜籽(卡诺拉)粉作为起始材料实施任何特定实验的描述。
[0006]美国专利4,208,323其自身被设计为美国专利Nos.4,169,090和4,285,862(Murray LA)中描述方法的改进，其通过引用结合到本文中，通过引入稀释之前的浓缩步骤以形成PMM。使用后一个步骤可相对Murray LA方法提高大约20％的分离蛋白的产量。
[0007]在2002年5月3日提交的共同待审的美国专利申请Nos.10/137,391(美国专利申请公开No.20030125526)和2004年6月9日提交的10/476,230(美国专利申请公开No.20040254353)(WO02/089597)中，转让给其受让人并且其公开内容通过引用结合到本文中，描述了一种包含至少约100wt％蛋白质(Nx×6.25)的高纯度分离蛋白的生产方法。在前述美国专利申请中，分离蛋白通过下述方法制得，其中将油籽粉用食品级盐溶液提取，如果需要，所得的蛋白溶液在用色素吸附剂初始处理后，浓缩到至少为约200g/L的蛋白含量，并将浓缩蛋白溶液稀释于冷水中以形成蛋白胶束，允许该蛋白胶束沉淀以形成凝聚的、聚结的、浓厚无定型的、面筋样分离蛋白块，称为“蛋白胶束块”或PMM，其与残留水相部分分离并可原样应用或干燥。
[0008]上述方法的一个实施方案中，如美国专利申请Nos.10/137,391和10/476,320中的具体描述，处理得自PMM沉淀步骤的上清液，从而从湿PMM和上清液中回收包含干燥蛋白的分离蛋白。此方法可以通过最初使用超滤膜将上清液浓缩，将浓缩上清液和湿PMM混合并干燥混合物而实现。所得的卡诺拉分离蛋白具有高纯度，至少约90wt％，优选至少约100wt％的蛋白(Nx 6.25)。
[0009]在上述方法的另一个实施方案中，如美国专利申请Nos.10/137,391和10/476,230中的具体描述，处理得自PMM沉淀步骤的上清液，以变从上清液中回收蛋白。此方法可以通过最初使用超滤膜将上清液浓缩，并干燥浓缩物而实现。所得的卡诺拉分离蛋白具有高纯度，至少约90wt％，优选至少约100wt％的蛋白(Nx 6.25)。
[0010]前述美国专利申请中描述的方法基本上是分批方法。在2002年11月19日提交的共同待审的美国专利申请No.10/298,678(美国专利公开号No.20040039174)(WO03/043439)中，其转让给其受让人且其公开内容通过引用结合到本文中，描述了一种用于制造卡诺拉分离蛋白的连续方法。根据该申请，将卡诺拉油籽粉和盐溶液连续混合，通过管运送混合物，同时从卡诺拉油籽粉中提取分离蛋白以形成蛋白水溶液，将卡诺拉油籽粉残留物与蛋白水溶液连续分离，通过选择性膜操作连续运送蛋白水溶液，以提高蛋白水溶液中的蛋白含量到至少约200g/L，同时保持离子强度基本恒定，将所得的浓缩蛋白溶液和冷水连续混合，从而导致形成蛋白质胶束，且允许蛋白质胶束连续沉淀，同时使上清液连续地溢出直到在沉淀槽中聚集了预期量的PMM。将PMM从沉淀槽中去除，并可进行干燥。该PMM具有至少约90wt％(Nx6.25)，优选至少约100wt％的蛋白质含量。
[0011]在这种方法中，卡诺拉分离蛋白通过用冷水稀释浓缩蛋白溶液从而沉淀PMM而回收的。此外，可以从来自PMM沉淀步骤的上清液中回收更多的卡诺拉分离蛋白。
[0012]如共同待审的美国专利申请No.11/038,086(美国专利公开号No.2005018112)(WO2005/067729)中所描述，其转让给其受让人并且其证据通过引用结合到本文中，从PMM沉淀步骤得到的上清液可以经热处理以使得7S和12S蛋白从上清液中沉淀。随后从经热处理的上清液中回收的2S蛋白在具有各种pH值的含水介质中具有改善的溶解性，能够为软饮料溶液提供改善的澄清度，从而提供澄清的蛋白强化软饮料。
发明概述
[0013]目前，惊奇地发现，假如将浓缩卡诺拉蛋白溶液酸化，即沉淀出组成上与通过PMM途径获得的卡诺拉分离蛋白类似的卡诺拉分离蛋白，随后，在分离沉淀出的卡诺拉分离蛋白后，可处理上清液以获得组成上与从PMM沉淀上清液获得的卡诺拉分离蛋白类似的其它卡诺拉分离蛋白。从而该方法代表从浓缩蛋白溶液中获得卡诺拉分离蛋白的替代方式。由等电沉淀方法所产生的一个好处是生产出的卡诺拉分离蛋白与PMM—衍生的分离蛋白相比，具有明显更高的水结合能力。
[0014]在本发明另一方面的一个替代方法中，可以通过在盐水溶液中重悬PMM并酸化所得的溶液，从而将PMM转化成等电沉淀。PMM可以从湿团块或较不优选干分离物再次悬浮。该方法生产出的等电沉淀卡诺拉分离蛋白与转化成等电沉淀的PMM物质相比，具有高得多的水结合能力。
[0015]本发明的另一方面，在浓缩步骤之前产生等电沉淀，并处理从等电沉淀得到的上清液以进一步从中回收分离蛋白。
[0016]因此在本发明的一个方面，提供了一种制备分离蛋白的方法，包括(a)提取油籽粉以使得油籽粉中的蛋白溶解并形成pH为约5-约6.8的蛋白水溶液；(b)将油籽粉残留物与蛋白水溶液分离；(c)酸化蛋白水溶液以便从中沉淀蛋白含量至少为约90wt％(Nx6.25)的分离蛋白；和(d)将上清液与沉淀的分离蛋白分离。
[0017]本发明尤其涉及卡诺拉分离蛋白的制备。因此，本发明的另一个方面提供了一种制备卡诺拉分离蛋白的方法，包括(a)提取卡诺拉油籽粉以使卡诺拉油籽粉中的卡诺拉蛋白溶解并形成pH为约5-约6.8的蛋白水溶液；(b)将卡诺拉油籽粉残留物与蛋白水溶液分离；(c)酸化蛋白水溶液至pH值至约3-约4以从中沉淀蛋白含量至少为约90wt％(Nx6.25)且主要由7S卡诺拉蛋白组成的卡诺拉分离蛋白；和(d)将上清液与沉淀的卡诺拉分离蛋白分离。
[0018]基于本发明的一个进一步的方面，提供了一种制备分离蛋白的方法，其包括(a)提取油籽粉以便使油籽粉中的卡诺拉蛋白溶解并形成pH为约5-约6.8的蛋白水溶液；(b)将油籽粉残留物与蛋白水溶液分离；(c)通过使用选择性膜技术提高蛋白水溶液的蛋白质含量，同时维持离子强度基本恒定，从而提供浓缩的蛋白溶液；(d)将浓缩蛋白溶液稀释到温度低于约15℃的冷水中以在水溶液中形成胶束形式的不连续蛋白颗粒；(e)沉降蛋白胶束以形成无定型的、粘性、胶状、面筋样蛋白胶束块；(f)从上清液中分离蛋白胶束块，该蛋白胶束块具有至少约90wt％、优选至少约100wt％(Nx6.25)的蛋白质含量；(g)形成蛋白质胶束块的水溶液；(h)酸化蛋白胶束块的水溶液以便从中沉淀蛋白含量至少为约90wt％，优选至少约100wt％(Nx6.25)的分离蛋白；以及(i)将上清液与沉淀的分离蛋白分离。
[0019]本文所述方法生产的卡诺拉分离蛋白可以用于传统和新的分离蛋白应用中，例如加工食品的蛋白强化、油脂乳化、焙烤制品中的成型剂(body former)和充气产品中的发泡剂。此外，可以将分离蛋白成型为蛋白纤维，用于肉类似物中，也可以作为卵白替代物或补充剂用于卵白作为粘合剂的食物产品中。从下列给出的数据中可以看出，发现等电沉淀卡诺拉分离蛋白作为水结合剂/增稠剂特别有用。发现衍生自上清液的卡诺拉分离蛋白尤其可用于酸化饮料，包括澄清的蛋白强化软饮料。卡诺拉分离蛋白可以用作营养增补剂。卡诺拉分离蛋白的其它用途是用于宠物食品，动物饲料和工业以及化妆品应用和个人护理产品中。
本发明的一般描述
[0020]分离卡诺拉分离蛋白方法的起始步骤涉及从油籽粉，特别是卡诺拉粉中溶解蛋白质类物质，尽管该方法可以应用于其它油籽粉，例如大豆、传统的油菜籽、传统的亚麻，
Figure A200680043394D00091
葵花和芥子油籽粉。本文更详细的描述了关于卡诺拉油籽粉的本发明。
[0021]从卡诺拉油籽粉中回收的蛋白质类物质可以是卡诺拉种子中天然存在的蛋白质，或者蛋白质类物质可以是经过遗传操作修饰但仍然具有天然蛋白的疏水和极性特征的蛋白。卡诺拉油籽也通称为油菜籽或油料油菜种子。
[0022]通过使用食品级盐溶液最高效地实现蛋白质的溶解，因为盐的存在增强可溶性蛋白从油籽粉中的离开。如果打算将卡诺拉分离蛋白用作非食品用途，那么可以使用非食品级化学品。食品级盐通常是氯化钠，尽管可以使用其它盐类例如氯化钾。食品级盐溶液具有至少约0.05，优选至少约0.1的离子强度，从而能够有效实现相当量的蛋白质溶解。当盐溶液的离子强度增加时，油籽粉中蛋白质的溶解度最初增加，直到达到最大值。随后离子强度的任何增加不增加溶解的总蛋白质。导致最大蛋白质溶解的食品级盐溶液的离子强度根据所涉及的盐和所选择的油籽粉而变化。
[0023]食品级盐水溶液中可存在抗氧化剂。抗氧化剂可以是任何适宜的抗氧化剂，例如亚硫酸钠或抗坏血酸。在溶解步骤中使用的抗氧化剂的量可以在约0.01-约1wt％之间变动，优选约0.05wt％。抗氧化剂可用于抑制在蛋白质水溶液中存在的酚类的氧化。
[0024]分批方法中，在至少约5℃，优选最高约35℃下实现蛋白质的盐溶解，优选伴随搅拌以缩短溶解时间，所述溶解时间通常是约10-约60分钟。优选实现溶解以从油籽粉中提取基本最大量的蛋白质，以提供全面的高产率。
[0025]选择约5℃的温度下限，因为低于此温度溶解慢到无法实现，而选择35℃的温度上限是因为分批模式中在较高温度水平下该方法变得不经济。
[0026]在连续方法中，从卡诺拉油籽粉中提取蛋白质在任何可有效实现从卡诺拉油籽粉中连续提取蛋白质的方式下进行。一个实施方案中，将卡诺拉油籽粉与盐溶液连续混合，将混合物通过管或管道传送，其具有的长度和流速使得保留时间足以实现根据本文所述参数的所希望的提取。在这种连续方法中，在最多可达约10分钟的时间内，迅速实现盐溶解步骤，优选实现溶解以从卡诺拉油籽粉中提取基本最大量的蛋白质。连续方法中的溶解优选在升高的温度下进行，优选大于约35℃，通常高达约65℃或更高。
[0027]盐水溶液和卡诺拉油籽粉具有约5-约6.8的自然pH，优选为约5.3-约6.2的pH值。
[0028]如果需要，通过使用任何适宜的食品级酸，通常为盐酸，或食品级碱，通常为氢氧化钠，将食品级盐溶液的pH调整到约5-约6.8范围内的任何所期望的值，用于提取步骤。当将卡诺拉分离蛋白用于非食品用途的情况下，那么可以使用非食品级化学品。
[0029]在溶解步骤过程中食品级盐溶液中的油籽粉的浓度可以在很大程度上变化。典型的浓度值是约5-约15％w/v。
[0030]使用盐水溶液的蛋白质提取步骤具有溶解存在于卡诺拉粉中的油脂的额外效果，从而使水相中存在油脂。
[0031]提取步骤得到的蛋白质溶液通常具有约5-约40g/L的蛋白质浓度，优选约10-约30g/L。
[0032]随后可以以任何适宜的方式，例如通过使用滗析离心机，随后通过圆盘式离心机和/或过滤器以去除粗粉残留物，将提取步骤得到的水相与卡诺拉粉残留物分离。可以将分离出的粉残留物干燥用于储存。
[0033]通过将粉末化活性炭或其它色素吸附剂与分离的蛋白水溶液混合，并随后适宜地通过过滤去除吸附剂，从而提供蛋白质溶液，可以改善最终的卡诺拉分离蛋白的颜色，从而获得更浅且没那么强的黄色。也可以在浓缩之前或之后如下所述对分离的蛋白水溶液进行渗滤，以去除色素。
[0034]该脱色步骤可以在任何适宜的条件下进行，通常将分离的蛋白水溶液于室温下应用任何适宜的色素吸附剂。对于粉末化活性炭，应用约0.025％-约5％w/v的量，优选约0.05％-2％w/v。
[0035]当如前述美国专利Nos.5,844,086和6,005,076所描述，卡诺拉油籽粉含有显著量的油脂时，然后可以对分离的蛋白水溶液和下文讨论的浓缩蛋白水溶液实施其中描述的脱脂步骤。当实施颜色改善步骤时，该步骤可以在第一个脱脂步骤之后进行。
[0036]作为用食品级盐水溶液提取油籽粉的替代方式，该提取可以仅使用水完成，尽管与使用食品级盐水溶液相比，仅利用水倾向于从油籽粉中提取出更少的蛋白质。在应用该替代方式的情况下，则在上述讨论的浓缩中，可以在与油籽粉分离之后将食品级盐加入到蛋白质溶液中，以在下述描述的浓缩步骤过程中维持溶液中的蛋白质。当进行脱色步骤和/或第一油脂去除步骤的时候，食品级盐通常在该操作完成之后加入。
[0037]随后将蛋白质水溶液浓缩以提高其蛋白浓度，同时维持其中离子强度基本恒定。进行该浓缩通常是为了提供具有10-约300g/L之间或更高、优选约50-约100g/L的蛋白浓度的浓缩蛋白溶液。
[0038]浓缩步骤可以与分批或连续操作相容的任何适宜方式进行，例如通过应用任何适宜的选择性膜技术，例如超滤或渗滤，考虑到不同的膜材料和构造，使用具有适宜截留分子量，例如约3000-约100000道尔顿，优选约5000-约10000的膜，例如中空纤维膜或螺旋错流膜，并且，对于连续操作来说，当蛋白水溶液通过膜的时候，其尺寸允许所需程度的浓缩。
[0039]随后可以使用与提取溶液具有相同摩尔浓度和pH的盐水溶液，对浓缩蛋白溶液进行渗滤步骤。该渗滤可以使用约2-约20倍体积的渗滤溶液进行，优选约5-约10倍体积的渗滤溶液。在渗滤操作中，通过与渗透液一起穿过膜，从蛋白水溶液中去除了更多量的杂质。渗滤操作可进行到在渗透液中没有明显更多量的酚类和肉眼可见色素。考虑到不同膜的材料和构造，该渗滤可使用截留分子量在约3,000-约100,000道尔顿范围内的膜而进行，优选为约5,000-约10,000道尔顿。
[0040]在渗滤步骤的至少一部分中在渗滤介质中可存在抗氧化剂。抗氧化剂可以是任何适宜的抗氧化剂例如亚硫酸钠或抗坏血酸。在渗滤介质中应用的抗氧化剂的量取决于应用的物质，可以在约0.01-约1wt％之间变动，优选约0.05wt％。抗氧化剂可抑制浓缩卡诺拉分离蛋白溶液中存在的酚类的氧化。
[0041]浓缩步骤和渗滤步骤可以在任何适宜的温度下进行，通常是约20℃-约60℃，优选约20℃-约30℃，并且持续的时间有效实现所需的浓缩程度。所使用的温度和其它条件在某些程度上取决于所使用的膜装置，以实现溶液的浓缩和所期望的蛋白浓度。
[0042]众所周知，超滤和类似的选择性膜技术允许低分子量的组分透过，而阻止较高分子量的组分透过。低分子量组分不仅包括食品级盐溶液的离子组分，而且包括从原料物质中提取出来的低分子量物质，例如碳水化合物，色素和抗营养因子，以及任何低分子量形式的蛋白质。通常，考虑到不同膜材料和构造，选择膜的截留分子量以确保溶液中显著比例的蛋白质保留，而允许杂质透过。
[0043]如美国专利Nos.5,844,086和6,005,076中所描述，假如需要，可以对经浓缩和任选渗滤的蛋白溶液进行进一步的脱脂操作。
[0044]可以对经浓缩和任选渗滤的蛋白质溶液进行脱色操作，作为上文描述的脱色操作的替代。本文可以使用粉末活性炭以及颗粒化的活性炭(GAC)。另一种可以用作色素吸附剂的材料是聚乙烯吡咯烷酮。
[0045]色素吸附剂处理步骤可以在任何适宜的条件下进行，通常在卡诺拉蛋白溶液于室温下。对于粉末化活性炭，可以使用约0.025％-约5％w/v的量，优选约0.05％-约2％w/v。当使用聚乙烯吡咯烷酮用作色素吸附剂时，可以使用约0.5％-约5％w/v的量，优选约2％-约3％w/v。可以通过任何适宜的手段，例如过滤，将色素吸附剂从卡诺拉蛋白溶液中去除。
[0046]可以对由任选脱色步骤得到的浓缩和任选渗滤的蛋白溶液进行巴氏消毒以杀死任何细菌，这些细菌可由于贮藏或其它原因可能在最初的粉中存在，并在提取步骤中从粉中经提取进入卡诺拉分离蛋白溶液中。这种巴氏消毒可以在任何所期望的巴氏消毒条件下进行。通常，将经浓缩和任选渗滤的蛋白溶液加热到约55℃-约70℃，优选约60℃-约65℃的温度，保持约10-约15分钟，优选约10分钟。然后可以将经巴氏消毒的浓缩蛋白溶液冷却，以进行如下述进一步加工，优选冷却到约25-约40℃。
[0047]经过浓缩和任选渗滤以及任选巴氏消毒的水溶液其最佳蛋白浓度是约5-约10wt％，因为更高的浓度会导致粘性，使得难以使溶液均匀酸化和难以在酸化步骤分离沉淀的固体。该最佳蛋白浓度可以通将水相蛋白浓缩到所需浓度而实现，或通过首先将蛋白水溶液浓缩到更高的约20-约25wt％或更高的浓度，然后用食品级盐溶液将浓缩蛋白溶液稀释到约5-约10wt％范围内。
[0048]对于本文所提供的等电沉淀的形成，经浓缩和任选渗滤以及任选巴氏消毒的蛋白溶液应当具有至少约1mS的电导率，优选约10-约20mS。
[0049]然后使用任何适宜的酸例如盐酸，将经浓缩和任选渗滤和任选巴氏消毒的蛋白溶液在温度为约10℃-约70℃、优选约20℃-约40℃下酸化到约3.0-约4.0、优选约3.5的pH，使得形成卡诺拉分离蛋白沉淀。从上清液中回收沉淀并可通过任何适宜的技术例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空转鼓干燥来干燥，以提供卡诺拉分离蛋白。衍生自卡诺拉分离蛋白的干燥等电沉淀(IP)具有至少约90twt％(N x 6.25)，优选至少约100wt％的高蛋白质含量。
[0050]假如期望，可以对卡诺拉蛋白溶液直接进行等电沉淀步骤而不进行浓缩步骤。在等电沉淀步骤之前，可以对卡诺拉蛋白溶液进行上文描述的一个或多个任选的脱色、渗滤和巴氏消毒步骤。从上清液中回收沉淀的卡诺拉分离蛋白并干燥。
[0051]由等电沉淀得到的上清液包含相当显著量的未在沉淀步骤中沉淀的卡诺拉蛋白，对其进行处理以从中回收主要是2S蛋白形式的卡诺拉分离蛋白。可以在除去等电沉淀物后将酸化步骤的上清液浓缩以提高其中的蛋白质浓度。该浓缩可以使用任何适宜的选择性膜技术，例如超滤，使用具有适宜截留分子量的膜，允许低分子量物质包括盐和其它从蛋白来源材料中提取出的非蛋白类低分子量物质透过该膜，而将卡诺拉蛋白保持在溶液中。考虑到不同的膜的材料和构造，可以使用截留分子量为约3,000-10,000道尔顿，优选约5,000-约10,000道尔顿的超滤膜。这种方式的上清液浓缩也减少了回收蛋白所需要干燥的液体的量。通常在干燥之前，将上清液浓缩到蛋白含量为约100-约400g/L，优选约200-约300g/L。如同上文对蛋白溶液浓缩步骤的描述，这种浓缩操作可以以分批模式进行，或者以连续操作而进行。
[0052]可以使用水作为提取溶剂对浓缩的上清液进行渗滤步骤，以便从浓缩上清液中去除盐和其它杂质。可以使用约2-约20倍体积的水，优选约5-约10倍体积的水来进行该渗滤。考虑到不同膜的材料和构造，可以使用截留分子量在约3,000-约100,000道尔顿，优选约5,000-约10,000道尔顿的膜实现该渗滤。
[0053]在渗滤步骤的至少一部分中，在渗滤介质中可存在抗氧化剂。抗氧化剂可以是任何适宜的抗氧化剂，例如亚硫酸钠或抗坏血酸。在渗滤介质中使用的抗氧化剂的量可以在约0.01-约1wt％之间变动，优选约0.05wt％。
[0054]浓缩和任选渗滤的上清液可以通过任何适宜的技术干燥成干燥形式，例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空转鼓干燥，以提供其它卡诺拉分离蛋白。这种其它卡诺拉分离蛋白具有超过约90wt％，优选至少约100wt％蛋白(以凯氏Nx6.25计)的高蛋白含量。
[0055]假如期望，可以如前述美国专利申请No.11/038,086描述，将上清液进行热处理步骤，以引起存在于上清液中的7S蛋白和任何12S蛋白的沉淀，并回收具有增大的比例的2S蛋白的2S分离蛋白。
[0056]可以使用足以降低浓缩上清液中存在的7S比例，优选以显著程度降低7S蛋白比例的温度和时间曲线进行该热处理。通常，通过热处理将上清液中的7S蛋白含量降低至少约50wt％，优选至少约75wt％。通常，可以在约70℃-约100℃，优选约75℃-约95℃，持续约2-约30分钟，优选约5-约15分钟进行热处理。可以以任何适宜的方式例如离心或过滤去除沉淀的7S蛋白。
[0057]热处理操作可以在上清液浓缩之前进行，但优选在浓缩步骤之后。可以对获自等电沉淀步骤的上清液进行热处理步骤，或者可以在调整上清液的pH到较小酸值后进行，因为7S和12S蛋白在该较小酸值下易于降解并沉淀。可以将上清液的pH调整到约5-约6.8，优选约5.8-约6.2的pH。该pH调整可以使用任何适宜的碱化剂例如氢氧化钠进行。在该热处理之后，可以将pH调整到更高的酸值，优选在约5-约10wt％的范围内。
[0058]此外，对在浓缩之前或之后，和/或热处理之前或之后，可对上清液进行脱色操作以改善终产品的色泽，作为以上描述的脱色操作的替代或额外的步骤，可以使用任何适宜的色素吸附剂，例如上文描述的一定量的粉末化活性炭、颗粒活性炭和/或聚乙烯吡咯烷酮。
[0059]假如需要，可以将至少一部分湿的等电沉淀和至少一部分浓缩上清液合并，然后将合并的蛋白质物料流以任何适宜的技术干燥，以便提供合并的卡诺拉分离蛋白组合物。可以选择混合在一起的蛋白类材料的相对比例，以提供具有所期望的2S/7S/12S蛋白特征比的卡诺拉分离蛋白组合物。或者，将干燥的分离蛋白以任意所期望的比例混合以在混合物中提供任何期望的2S/7S/12S蛋白分布。合并的卡诺拉分离蛋白具有超过约90wt％，优选至少约100wt％(以凯氏Nx6.25计)的高蛋白含量。
[0060]另一个替代步骤中，当仅将部分浓缩的上清液和仅部分等电沉淀混合，并将所得混合物干燥时，可以将浓缩上清液中的保留物如任何等电沉淀中的保留物一样干燥。而且，也可以将干燥的等电沉淀和干燥的上清液如上文的讨论以任何所期望的相对比例进行干混。
[0061]通过这种方式的操作，可将大量的卡诺拉分离蛋白作为干燥的等电沉淀、干燥的上清液和源自等电沉淀的卡诺拉分离蛋白和源自上清液的卡诺拉分离蛋白的各种重量比例的干混合物形式回收，通常的重量比为5：95-95：5，这基于组合物中2S/7S/12S蛋白质的不同比例而对实现不同的功能和营养特性是所期待的。
[0062]如前文所指出，按照前述的美国专利申请No.10/137,391和10/476,630的方法，通过稀释经浓缩和任选渗滤以及任选巴氏消毒的蛋白溶液，可从生产的PMM生产衍生自卡诺拉蛋白的等电沉淀，其具有至少约90wt％(Nx6.25)，优选至少约100wt％的蛋白含量。
[0063]优选在室温下，尽管也可以使用提高的温度，将PMM，优选湿的形式但也可为干的形式，溶解于离子强度至少约0.05，优选至少约0.1的食品级盐溶液，例如氯化钠溶液中，以形成蛋白水溶液，通常具有约1-约30wt％或更高的蛋白浓度，优选为约5-约10wt％。随后对所得的水溶液进行上文讨论的等电沉淀步骤。
[0064]如上文所讨论，并如下文给出的实施例中所显示，与PMM衍生的卡诺拉分离蛋白相比，等电沉淀的卡诺拉分离蛋白具有高得多的水结合能力。实施该方法，允许生产出高溶解性卡诺拉分离蛋白，其为衍生自PMM沉淀步骤的上清液的卡诺拉分离蛋白，和通过将PMM转化为等电沉淀产生高持水力的卡诺拉分离蛋白。
实施例
实施例1
[0065]本实施例根据本发明的一个实施方案说明了卡诺拉分离蛋白的制备。
[0066]在60℃下，将150kg的市售卡诺拉油籽粉加入到1000L 0.1M的NaCl中，搅拌5分钟以提供蛋白水溶液。
[0067]60℃下，通过在分别具有5,000和10,000道尔顿截留分子量的聚二氟乙烯(PVDF)和聚醚砜(PES)膜的超滤系统(UF1)上浓缩，将蛋白含量为16.8g/L的澄清卡诺拉蛋白溶液体积缩减到60L。然后在60℃下，在使用分别具有5,000和10,000道尔顿截留分子量的PVDF和PES膜的渗滤系统中，使用包含0.05wt％抗坏血酸的0.1M NaCl溶液，对经超滤的卡诺拉蛋白溶液渗滤五次，至蛋白含量为174.7g/L的45L最终体积。
[0068]将4L经浓缩和渗滤的卡诺拉蛋白溶液样品(UF1保留物)和12L的0.1NaCl合并，以调整蛋白质浓度到46.8％。在22℃下加入浓HCl到稀释的溶液直至酸化卡诺拉蛋白溶液的pH为3.5，以进行等电沉淀。
[0069]样品变得浑浊并允许静置15分钟。然后将样品以4×1L的批次在7100g下离心15分钟以收集沉淀。从上清液中分离出收集的沉淀(IEP沉淀)并冷冻干燥。发现干燥沉淀(C302)具有102.43wt％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量(蛋白的百分比数值用LECO FP 328氮测定仪测定)。
[0070]在使用具有100,000道尔顿截留分子量的PES膜的超滤系统(UF2)上，将离心得到的大约16L的上清液(IEP上清液)浓缩到3L。然后在渗滤系统上，使用具有100,000道尔顿截留分子量的PES膜和9倍体积的水，对经浓缩的上清液进行渗滤，从而达到最终3.5L的体积，蛋白含量为72.1g/L。将蛋白溶液喷雾干燥。
[0071]发现干燥蛋白(C202)具有104.05wt％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。
实施例2
[0072]本实施例描述了通过前述美国专利申请No.10/137,391的方法制备卡诺拉分离蛋白样品。
[0073]在60℃下将“a”kg的卡诺拉粉加入到“b”L的0.1M NaCl溶液中，在5分钟的保持时间下连续提取，以提供蛋白水溶液。去除残留的卡诺拉粉，并通过离心和过滤澄清所得的蛋白溶液，以生产出“c”L具有“d”％重量的蛋白含量的过滤蛋白溶液。
[0074]通过在使用分别具有截留分子量5,000和10,000道尔顿的PVDF和PES膜的超滤系统上浓缩，将“e”L等分试样的蛋白提取溶液减少到“f”L的体积，然后用包含0.05wt％抗坏血酸的“g”L的0.1M NaCl溶液进行渗滤。所得的浓缩蛋白溶液具有“h”％重量的蛋白浓度。
[0075]在“i”℃下将浓缩的溶液(减去等电沉淀去除的部分)稀释到温度为“k”℃的冷RO水中。马上形成白色浑浊，并允许其沉淀。去除上层的稀释水，从容器下层回收沉淀的、粘稠的粘性块(PMM)，其产量占过滤蛋白溶液的“1”wt％。发现干燥的PMM衍生蛋白具有“m”％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。用符号“n”(C300)表示产品。
[0076]下面的表I列出了参数“a”到“n”。
表I
 
n BW-AL022-H23-04A BW-AL022-L15-04A
a 150 22.5
b 1000 150
c 847 95
d 1.68 2.01
e 847 95
f 60 5
g 300 25
h 17.47 21.85
i 29.6 30
j 1:10 1:10
k 2.4 3
l 33.24 41.88
m 105.45 106.67
[0077]通过在具有截留分子量为10,000道尔顿的PES膜进行超滤，将去除的稀释水减少到体积为“o”L。浓缩物包含“p”％重量的蛋白质。包括从上清液中回收额外的蛋白在内，经过滤的蛋白溶液的全部蛋白回收为“q”wt％。将浓缩物喷雾干燥形成“n”(C200)表示的最终产品，具有“r”％(Nx6.25)d.b.的蛋白含量。
[0078]下面的表II列出了参数“a”到“n”。
  表II
 
n BW-AL022-H23-04A
o 23.5
p 7.27
q 45.26
r 98.99
实施例3：
[0079]本实施例提供了对通过等电沉淀(C302)生产出的和得自所得上清液(C202)的分离蛋白的分析。
[0080]通过实施例1的方法生产出来的等电沉淀不溶于水，因此其蛋白质图谱不能通过HPLC来测量。然而，对在该方法的几个阶段中提供的材料进行了12S、7S和2S卡诺拉蛋白的HPLC分析，结果总结如下表III。蛋白质谱表示为总蛋白质峰面积的百分比。
                 表III—各级分的蛋白质谱
Figure A200680043394D00181
[0081]从这些数据可以看出，等电沉淀引起溶液中12S和7S的比例大幅下降。确信沉淀了这些组分，但低的pH环境使得12S和7S蛋白离解成与2S洗脱峰重叠的较小亚基。
[0082]进行对AL022-H23-04A产品的定性SDS-PAGE分析，以便提供对其组成的进一步的了解。C302不完全溶解于电泳缓冲液中，从而一部分样品没有进入凝胶中而保留在原始状态。与C300分析中观察到的类似，C302拆分的带显示主要存在7S/12S，以及较低浓度的2S。C202和C200都完全溶解，从而能够可靠地比较。看起来C202中保留的7S/12S的比例比C200中观察到的高。这与HPLC分析的结果相反，证实了在HPLC分析中的假设，某些降解的7S/12S和2S一起共洗脱。HPLC分析的结果列于下表IV：
表IV：上清液衍生分离物的蛋白谱(HPLC)
 
样品 ％12S ％7S ％2S
C202(实施例1) 1.1 17.2 81.7
C200(实施例2) 1.2 25.1 73.7
[0083]C302和C202分离物的颜色相当深，但仍然分别类似于按照实施例2中描述制备的C300和C200。使用安装有DP301数据处理器的Minota CR310色差计获得的结果列于下表V：
               表V：C302和C202的实验室色值
Figure A200680043394D00191
实施例4：
[0084]本实施例比较了以下蛋白质的溶解度：根据实施例1生产的通过等电沉淀(C302)生产的蛋白质和来自所得上清液(C202)的蛋白质，以及根据实施例2的方法生产的，PMM衍生蛋白(C300)、和来自PMM沉淀上清液(C200)的蛋白质。
[0085]使用基于Morr等，J.Food Sci.，50：1715-1718的方法测定溶解度。从足量的蛋白粉末中称取0.5g蛋白加入烧杯中，然后加入少量反渗透(RO)纯化水，搅拌混合物直至形成光滑的糊状。然后加入额外的水以使其体积达到大约45ml。使用磁力搅拌器缓慢搅拌烧杯中的内容物60分钟。
[0086]将蛋白分散之后迅速测量每个样品的pH值，用NaOH或HCl调节到4，5，6或7的值。在60分钟的搅拌期间测量并校正pH两次。搅拌完成之后，用RO水将样品总体积补足50ml，得到1％w/v的蛋白分散液。储存一个等分试样的蛋白分散液用于蛋白含量测定。将另一部分样品于8000g下离心10分钟，使所有未溶解的物质沉淀，并得到澄清的上清液。然后测量上清液的蛋白含量，如下计算溶解度：
溶解度(％)＝(上清液蛋白浓度/原始分散液的蛋白浓度)×100
[0087]此外，使用上述的方法，但用盐水代替水，测量0.1M NaCl中的样品C302和C202的溶解度。
[0088]C302样品在水中和0.1M NaCl中的溶解度以及C300样品在水中的溶解度分别列出于下表VI和VII：
表VI—C302与C300在水中的溶解度
 
pH C302溶解度(％) C300溶解度(％)
4 8.7 83.0
5 10.4 63.5
6 6.3 18.3
7 8.1 84.6
表VII—C302在0.1M NaCl中的溶解度
 
pH 溶解度(％)
4 0
5 1.5
6 8.0
7 3.8
[0089]如这些表中可以看出，无论pH，C302样品的溶解能力在水中和在0.1M盐水中都很差。C302样品在水中的溶解度比C300的要差得多。
[0090]C202样品在水中和在0.1M盐水中的溶解度以及C200样品在水中的溶解度分别在下表VIII和表IX中列出：
表VIII—C202与C200在水中的溶解度
 
pH C302溶解度(％) C300溶解度(％)
4 91.6 100.0
5 95.6 97.8
6 54.1 97.7
7 46.9 95.0
表IX—C202在0.1M NaCl中的溶解度
 
pH 溶解度(％)
4 70.8
5 65.9
6 66.0
7 67.2
[0091]如这些数据中可以看出，C202样品的溶解度远好于C302样品。在pH为4和5时，C202样品在水中的溶解度可与C200样品相比，但在pH为6和7时较差。
实施例5：
[0092]本实施显示了根据实施例1的方法生产的C302和C202卡诺拉分离蛋白样品的起泡性能，和与根据实施例2的步骤生产的C300和C200卡诺拉分离蛋白样品的比较。
[0093]从足量的蛋白粉末中称取7.5g蛋白加入烧杯中。向蛋白粉末中搅拌加入少量0.075M的NaCl溶液从而制得糊状物。然后加入足够的盐水以使其体积达到大约140ml，并使用磁力搅拌器搅拌混合物。控制搅拌速度以试图避免泡沫形成。经过10分钟的搅拌后，如果需要，用NaOH或HCl调整溶液的pH值到7。然后进一步搅拌混合物10分钟，并校正pH值。然后用0.075M NaCl将样品补足得到5％w/v分散液。
[0094]将蛋白分散液(75ml)样品倒入Hobart N-50混合器(Hobart公司，Troy，OH)的筒内，并用附带的搅拌器以混合器的最高速度(3档)搅打15分钟。每5分钟停止一次搅打，用两个测量杯(125ml)装满泡沫并称重。然后在进行搅打之前，将这些泡沫样品返回到筒中。对每个时间点使用下述等式(Phillips等，J.Food Sci.，55(5)；1441-1444，1453)来计算溢出：溢出(％)＝[(液体样品(125ml)重量—泡沫(125ml)重量)/泡沫(125ml)重量]×100
[0095]为了测量泡沫稳定性，将蛋白分散液第二样品(75ml)倒入Hobart N-50混合器的特定筒内，并用附带的搅拌器以混合器的最高速度(3档)搅打15分钟。所述特定的筒包含钻入筒底部且恰好在搅拌器通道之外的6mm直径孔。在搅打期间用一片条带覆盖住该孔。一旦完成搅打，就去除该条带，用搅拌棒清理该孔。15分钟内，每5分钟测量一次排出该筒的物质的重量。排出样品的重量除以泡沫的起始重量，来计算排出筒的物质的百分比。
[0096]C302的泡沫溢出和泡沫稳定性分别列出于表X和XI中：
表X—C302的泡沫溢出
 
搅打时间(分钟) 溢出(％)
5 304.4
10 315.0
15 311.1
表XI—C302的稳定性
 
搅打时间(分钟) 溢出(％)
5 16.7
10 27.2
15 33.7
[0097]如所看到的，C302产品显示出差的起泡性能和差的泡沫稳定性，其可与归因于其差的溶解度，如实施例3中所看到的。
[0098]C202与C200相比的泡沫溢出和泡沫稳定性分别列出于下表XII和XIII中：
表XII：C202和C200的泡沫溢出
 
搅打时间(分钟) C202溢出(％) C200溢出(％)
5 1707.6 3118.9
10 2178.8 3110.9
15 2357.4 3211.2
表XIII：C202和C200的泡沫稳定性
 
排出时间(分钟) C202物质损失(％) C200物质损失(％)
5 0 0
10 0 0
15 0 0.5
[0099]如这些表中可以看出的，C202具有良好的起泡性能，以及高溢出和优良的稳定性。然而，泡沫体积比C200要差。C202泡沫的外观也比C200的差。C200形成光滑的泡沫，而C202泡沫显得较干燥且具有一些未分散的蛋白颗粒，可能是由于C202在pH7的盐水中的部分溶解能力所造成。
实施例5：
[0100]本实施例显示了根据实施例1的方法生产的C302和C202卡诺拉分离蛋白样品的乳化活性。
[0101]从足量的蛋白粉末中取1.5g蛋白，添加RO水补足到150g。用Silverson混合器于4500rpm下处理样品直至蛋白充分分散。假如需要，随后用NaOH或HCl调节样品的pH值到7。加入卡诺拉油(150g)产生50％w/w油和0.5％w/w蛋白质的混合物。通过用Silverson混合器在5000rpm下处理5分钟而实现混合物的乳化。
[0102]将乳化液样品以1：500用0.1％ SDS溶液稀释，在500nm下读出吸光度(进行至少双份重复)。也计算乳化液样品的含水量。然后用Hill(1996)Emulsions In：Methods of Testing Protein Functionality.Hall，G.M.(ed).pp.153-185中的具体描述，计算浊度和乳化活性指数(稳定化的m2脂肪滴表面积/g蛋白质)。
[0103]样品C302、C300、C202和C200的乳化活性列于下表XIV：
表XIV—样品的乳化活性
 
样品 乳化活性(m2/g)
C302 6.9
C300 24.5
C202 14.6
C200 未检测到
[0104]如从该数据中可以看出，C302样品具有非常差的乳化活性，比C300样品明显更差。
实施例7：
[0105]本实施例显示了根据实施例1中的方法生产的样品C302和C202的持水力，和与根据实施例2中的方法生产的样品C300和C200的比较。
[0106]称取蛋白粉末(1g)放入已知重量的离心管(50ml)中。向该粉末中加入20ml自然pH的去离子水。用漩涡混合仪在中速下混合管内内容物1分钟。然后将样品于室温下保温共10分钟，且在5分钟和10分钟后漩涡混合30秒。接着将样品于20℃下在1000g下离心15分钟。离心后小心地倾倒去上清液，确保所有固体物质保留在管内。然后将离心管再次称重，测量水饱和样品的重量。
[0107]持水力(WBC)计算如下：
WBC(ml/g)—(湿样品重量—干样品重量)/(干样品重量×样品总固体含量)[0108]与C300和C200样品相比的C302和C202样品的持水力列出于下表XV：
表XV—C302和C202的持水力
 
样品 持水力(ml/g)
C302 7.35
C300 1.35
C202 0.00
C200 0.00
[0109]如从该数据中可以看出，C302样品的持水力优异，且远高于C300样品。如实施例3中所指明，C202和C200样品在水中高度可溶，从而在倾倒去水后留在管内的物质重量小于最初的蛋白粉末的重量。从而这些样品的持水力为零。
实施例8：
[0110]本实施例阐述了根据实施例1中的方法生产的样品C302和C202的油结合能力，和与根据实施例2中的方法生产的样品C300和C200的比较。
[0111]除了使用20ml的油来代替20ml的水之外，用与实施例6中描述的持水力相同的方法来评价油结合能力，油结合能力(OBC)计算如下：
OBC(ml/g)—[(湿样品重量—干样品重量)/油密度]/(干样品重量×样品总固体含量)
[0112]与C300和C200样品相比的C302和C202样品的结果列出于下表XVI：
表XVI：C302和C202的油结合能力
 
样品 油结合能力(ml/g)
C302 2.83
C300 3.26
C202 5.36
C200 3.49
[0113]如从该数据中可以看出，C202样品的油结合能力比C200样品的更好，而C302样品的油结合能力则比C300样品的稍差。
实施例9：
[0114]本实施例显示了由根据实施例2的方法生产的PMM制备的等电沉淀。
[0115]实施例2中描述的方法得到批次BW-AL022-L15-04A(100.47g，23.15％蛋白质)的含PMM的稀释团块，将其与0.1M的NaCl溶液(364.73g)合并，从而产生蛋白含量为4.54％的样品。使用5％的HCl将溶液的pH从最初的值6.02降低到3.50。允许样品静置放置15分钟，然后在7100g下离心15分钟以分离从上清液中沉淀的蛋白。将湿的沉淀(26.01g)冷冻干燥以生产出5.45g的C302蛋白。C302蛋白的蛋白含量以湿重计为90.17％(未测量水分含量)，表明蛋白是分离蛋白。
[0116]按照实施例7中的方法测量C302蛋白的持水力，用同批次的C300蛋白作比较。结果列出于下表XVII：
               表XVII—各种产物的持水力
Figure A200680043394D00261
*标注：C302的水分含量未检测，为了计算持水力假定为2％。
[0117]如从该表中可以看出的，C302产品与同一批次制备的C300蛋白相比结合了更多的水，并且与C300产品相比，如实施例7中的C302蛋白显示出相同的高持水力。
实施例10：
[0118]本实施例显示了进行未经浓缩步骤的蛋白水溶液上的等电沉淀，以及将上清液处理从而回收主要为2S蛋白的卡诺拉分离蛋白。
[0119]用150L 0.15M的NaCl在室温下搅拌30分钟，对15kg的卡诺拉油籽粉进行提取。通过滗析器将提取物从脱脂粉中分离出来并通过连续地通过孔径为2.0μm和0.8μm的过滤盘而进行进一步澄清。然后通过添加2M的HCl，将滤液的pH从最初的5.66的值降低到3.5，导致沉淀的形成，该沉淀通过将样品连续通过孔径为2.0μm和0.8μm的过滤盘而被去除。本实验中不回收沉淀。
[0120]然后将得自等电沉淀的上清液在小的膜单元上使用具有10,000Da的MWCO的PES膜进行浓缩。将样品的体积从106L减少到约5L。然后将浓缩样品用7倍体积的pH3.5的水渗滤从而降低盐含量。然后将经渗滤的保留物分为三份样品。
[0121]将第一样品(对照)于60℃巴氏消毒10分钟，冷却到25℃，于10200g下离心10分钟并通过#3(超细)过滤盘过滤。将第二样品在85℃加热10分钟，冷却到25℃，10200g离心10分钟并通过#3过滤盘过滤。通过添加氢氧化钠水溶液将第三样品的pH提高到6，在80℃下热处理10分钟，然后冷却到25℃。通过在10200g下离心10分钟，随后通过#3过滤盘进行过滤而回收形成的沉淀。然后将三种产品喷雾干燥，编号为C202(对照)、C202H pH3.5(在pH3.5下经热处理)和C202H pH6(在pH6下经热处理)。
[0122]分析加工样品的游离酚类(在330nm的吸光度)、可见色(在390nm的吸光度)、蛋白质含量(LECO)和/或蛋白谱(SEC HPLC)。酸化样品的HPLC色谱难以解释，因为低的pH条件将7S和12S转化成更小的亚基，该亚基和2S的洗脱峰重叠。也分析了最终产品的水分含量(烘箱法)、干品颜色(Minolta色差计)，并制备了溶液用于湿色分析。使用漩涡混合仪将蛋白粉末(0.35g)溶解于水(10ml)中。对于C202 pH6产品，通过添加加HCl将湿色样品的pH降低到4。用A390评价湿样品的可见色，通过600nm和测定pH下的吸光度测量澄清度。
[0123]等电沉淀步骤导致从澄清的提取物中去除了46％的氮。酸化之前的滤液的蛋白谱是48.9％ 7S：1.7％ 12S：49.4％ 2S，且去除等电沉淀后为2.0％ 7S：0.4％12S：97.6％ 2S。据信7S和12S是主要的沉淀物质，但它们的去除可能不是如HPLC数据显示的彻底。如上文所提到的，低pH条件引起7S和12S向和2S洗脱峰重叠的亚基的转化。因此，酸化样品中的某些“2S”可能是降解的7S和12S。对经浓缩样品在pH3.5下进行的热处理引起在浑浊方面稍稍增加，但没有明显的沉淀形成。在pH6下的热处理导致显著量的蛋白沉淀。
[0124]所有生产的C202产品是分离蛋白，如表XVIII所示。
表XVIII—C202产品的产量和蛋白含量
 
样品 所得重量(g) 蛋白含量(w.b.)(％) 水分含量(％)     蛋白含量(d.b.)(％)
C202对照 108 89.52 6.47 95.71
C202H pH3.5 102 90.59 5.21 95.57
C202H pH6 58 89.77 4.46 93.96
[0125]C202产品的干品颜色显示于表XIX。与对照样品相比，结果相当类似，尽管经在pH3.5热处理的样品更红，且黄色更少。与其它样品相比C202H pH6样品7S和12S的损耗更多，颜色最浅，最绿(红色最少)，也比对照的黄色浅。
表XIX—C202产品的干品颜色
 
样品 L a b
C202对照 85.39 —1.49 22.49
C202H pH3.5 85.45 —1.07 20.76
C202H pH6 86.02 —1.69 20.86
[0126]C202样品的湿色显示出相当近似。C202H pH6样品的澄清度显得最好。当通过吸光度测量来评价时，发现C202H pH6样品是颜色最浅且最澄清的。然而，三种样品之间的差异相当小，且全部是可接受的(表XX)。发现当将样品冷却到冷藏温度后所有样品的澄清度保持稳定。
   表XX—样品的湿色分析
 
样品 pH A390 A600
C202对照 3.71 1.75 0.213
C202H pH3.5 3.78 1.94 0.297
C202H pH6，调整到pH4 4.00 1.04 0.160
实施例11：
[0127]本实施例显示了如实施例10中所示制备的衍生自上清液的卡诺拉分离蛋白的功能特性：溶解度、泡沫溢出和泡沫稳定性。
[0128]评价如实施例10中所述制备的卡诺拉分离蛋白样品的功能特性。
溶解度：
[0129]使用基于Morr等报道的方法来测量产品的溶解度。在5个烧杯中各自放入从足够蛋白粉末中称取的0.5g蛋白，然后向每个样品中加入少量的反渗透(RO)纯化水，搅拌混合物直至形成光滑的糊状。然后加入额外的水以使样品体积达到约40ml。然后使用磁力搅拌器缓慢搅拌烧杯内内容物60分钟。将蛋白分散之后，立即测量pH值，一个样品在自然pH下搅拌，其它样品用NaOH或HCl将pH调节到pH4、5、6或7。在60分钟的搅拌期间，对调整过pH的样品进行两次测量并校准。在60分钟的搅拌之后，用RO水将样品体积补足到50ml，得到1％w/v的蛋白分散液。各蛋白分散液贮备一个等分试样用于LECO的蛋白含量测量。另一部分样品在7800g下离心10分钟。该措施使任何未溶解物质沉淀并得到澄清的上清液。然后测量上清液的蛋白含量。
溶解度(％)＝(上清液蛋白浓度/最初分散液的蛋白浓度)×100
[0130]C202对照的溶解度列出于下表XXI：
表XXI—C202对照的溶解度
 
pH 溶解能力(％)
自然(3.68) 96.4
4 100
5 100
6 94.9
7 92.7
[0131]如可从该表中看出的，发现C202对照的溶解度在所考虑到的整个pH范围内都非常好。
泡沫溢出：
[0132]将从足够的蛋白粉末中称取的8g蛋白放入烧杯中。然后向蛋白粉末中搅拌加入少量的水，制得糊状物。然后加入足量的水以使样品体积定容到约150ml，使用磁力搅拌器搅拌混合物。控制搅拌速度，从而试图避免泡沫形成。在搅拌大约20分钟后，假如需要，使用NaOH或HCl，将溶液的pH调整到7。然后将混合物再搅拌10分钟，校准pH值。然后用水将样品定容到160ml，得到5％w/v的分散液。
[0133]将蛋白分散液(75ml)样品倾入Hobart N-50混合器中(Hobart公司，Troy，OH)的筒内，并用附带的搅拌器以混合器的最高速度(3档)搅打5分钟。在搅打2、3.5和5分钟后，停止混合器，用两个测量杯(125ml)装满泡沫并称重。然后在继续搅打之前，将这些泡沫样品返回到筒中。对每个时间点使用下述等式(Phillips等)来计算溢出：
溢出(％)＝[(液体样品(125ml)重量—泡沫(125ml)重量)/泡沫(125ml)重量]×100
泡沫稳定性：
[0134]为了测量泡沫稳定性，将第二蛋白分散液样品(75ml)倒入Hobart N-50混合器的特定筒内，并用附带的搅拌器以混合器的最高速度(3档)搅打5分钟。所述特定的筒包含钻入筒底部、且恰好在搅拌器通道之外的6mm直径孔(Phillips等，1990)。在搅打期间用一片条带覆盖住该孔。一旦完成搅打，就去除该条带，用搅拌棒对该孔进行清理。15分钟内，每5分钟测量一次排出该筒的物质的重量。排出的样品重量除以泡沫的开始重量，来计算排出筒的物质的百分比。
[0135]搅打时间对C202溢出的效果列出于下表XXII：
表XXII—搅打时间对C202产品溢出的效果
 
搅打时间(分钟) 溢出(％)C202 溢出(％)C202H pH6
2 3078 2957
3.5 3090 3211
5 3070 3069
[0136]测得的C202产品的起泡性能优异，且具有高溢出(表XXII)和良好的稳定性。对于C202对照和C202H pH6样品，在搅打泡沫后的15分钟期间，没有记录到重量损失。观察到的C202对照的稳定性比C202H pH6样品要更好，因为后者样品在15分钟标记时，在筒上有悬挂的液滴，而在同样长的时间后，在对照样品中没有明显的液滴形成。
实施例12：
[0137]本实施例显示了进行在未经浓缩步骤的蛋白水溶液的等电沉淀，主要为7S蛋白的卡诺拉分离蛋白的回收，以及处理上清液以回收主要为2S蛋白的卡诺拉分离蛋白。
[0138]通过悬挂的搅拌器在室温下搅拌30分钟，用1800ml的0.15M NaCl对180g的卡诺拉粉进行提取。通过在7100g下离心10分钟从脱脂粉中分离提取物，通过一套#3(超细)过滤盘的过滤而进一步澄清提取物。然后通过添加6M HCl将滤液的pH值从最初的5.72降低到3.5，并允许样品保持10分钟，然后冷冻干燥。将该产品标记为C302。
[0139]通过一套#3的过滤盘，进一步纯化等电上清液。然后将纯化的上清液在Vivaflow膜上浓缩，其配有10000Da的MWCO的Hydrosart膜。将样品从大约950ml减少到大约26.5ml。然后将浓缩的样品用5倍体积的pH3.5的水进行渗滤以减少盐含量。然后将渗滤保留物分成两份样品。将第一样品(对照)冷冻干燥，作为(产品号C202)。将第二样品在85℃下热处理5分钟，冷却到25℃然后冷冻干燥(产品号C202H)。
[0140]分析加工样品的游离酚类(在330nm的吸光度)、可见色(在390nm的吸光度)、蛋白质含量(LECO)和/或蛋白谱(SEC HPLC)。注意到酸化样品的HPLC色谱难以解释，因为低pH条件将7S和12S转化成更小的亚基，该亚基和2S洗脱峰重叠。也分析了最终产品的水分含量(烘箱法)、干品颜色(美能达色差计)，并制备了C202和C202H溶液用于湿色分析。使用漩涡混合仪将蛋白粉末(0.35g)溶解于水(10ml)中。用A390评价湿样品的可见色，通过600nm下的吸光度测量澄清度。
[0141]等电沉淀步骤导致从澄清的提取物中去除了53.7％的氮。酸化之前滤液的蛋白谱(表示为总蛋白粉面积的百分比)是62.3％ 7S：3.4％ 12S：34.3％ 2S，去除等电沉淀后为3.0％ 7S：0.8％ 12S：96.2％ 2S。据认为7S和12S是主要的沉淀组分，但它们的去除可能不是如HPLC数据显示的彻底。如前所述，低pH条件引起7S和12S向与2S洗脱峰重叠的亚基的转化。因此，酸化样品中的某些“2S”可能是降解的7S和12S。对浓缩样品在pH3.5下进行的热处理引起在浑浊方面稍稍增加，但没有明显的沉淀形成。
[0142]在本研究中所有产生的产品都是分离蛋白，蛋白含量(d.b.)大于90％(表XXIII)。
表XXIII—IEP产品的产量和蛋白含量
 
样品 所获重量(g) 蛋白含量(w.b.)(％) 水分含量(％)     蛋白含量(d.b.)(％)
C302 7.29 91.68 5.47 96.99
C202 2.44 84.62 6.64 90.64
C202H 2.56 85.21 6.67 91.30
[0143]产品的干品颜色显示于表XXIV。C302的亮度分数良好，但C202产品的亮度分数较低。C302比C202产品的更黄和绿。热处理的C202H比未热处理的C202更暗且更少黄色。
表XXIV—IEP产品的干品颜色
 
样品 L a b
C302 86.00 -2.83 25.33
C202 79.76 0.05 21.69
C202H 78.07 0.07 20.34
[0144]C202和C202H湿色样品有些混浊。通过将样品在冷冻干燥之前过滤可能可以提高其澄清度，因为渗滤的保留物样品有点浑浊，特别是在热处理之后(C202H)。就视觉颜色来说，眼睛看起来样品类似。根据读出的吸光度，C202H比C202具有稍重的颜色，还更浑浊(表XXV)。
表XXV—IEP产品的湿物颜色
 
样品 A390 A600
C202 5.52 0.825
C202H 6.79 1.054
[0145]就颜色和澄清度来说，对经渗滤的浓缩上清液在pH3.5的热处理显得没有提供益处。从而，热处理步骤对这些样品来说不是必须的。
[0146]测量C302分离物的持水力。
[0147]称取蛋白粉末(1g)放入已知重量的离心管(50ml)中。向该粉末中加入大约20ml自然pH的反渗透纯化水。用漩涡混合仪在中速下混合管内内容物1分钟。然后将样品于室温下保温总达10分钟，且在5分钟和10分钟后提供漩涡混合30秒。接着，将样品于20℃下在1000g下离心15分钟。离心后小心地倾倒去上清液，确保所有固体物质保留在管内。然后将离心管再次称重，测量饱合水样品的重量。
[0148]持水力(WBC)计算如下：
WBC(ml/g)—(湿样品重量—干样品重量)/(干样品重量×样品总固体含量)
[0149]发现C302的持水力为2.95ml/g。这是比前面的IEP研究中观测到的C302产品(大约5-9ml/g，参见如实施例7)更低的水平。这个不同可能是由于以下事实：在本实施例中IEP步骤是对提取物进行，而非对更纯的物料流，例如UF1保留物稀释液团块和再次溶解的C300。尽管在本实施例中观测到的C302的持水力低于其它C302产品，其值仍然高于典型观测到的C300产品的值(大约1-2ml/g)。
发明概述
[0150]在对本公开的概述中，已经成功地利用等电沉淀来生产两种新的卡诺拉分离蛋白产品，命名为C302和C202。C302和C202产品与C300和C200的颜色和纯度类似。C202产品的功能特性可让人回忆C200产品。C302产品则与C300产品相比差异更显著，C302不溶且作为乳化剂表现不佳。然而，作为水分结合剂，C302产品表现得非常完美，显著优于C300产品的表现。修改可在本发明的范围内进行。

Claims (22)

1.一种制备分离蛋白的方法，包括：
(a)提取油籽粉，从而使得油籽粉中的蛋白质溶解，并形成pH约5-约6.8的蛋白水溶液；
(b)将蛋白水溶液与油籽粉残留物分离；
(c)酸化蛋白水溶液以从中沉淀具有至少约90wt％(N x 6.25)的蛋白含量的分离蛋白；并
(d)将已沉淀的分离蛋白与上清液分离。
2.权利要求1的方法，其中处理所述的上清液，以便从中回收具有至少约90wt％(Nx6.25)的蛋白含量的额外分离蛋白。
3.权利要求1的方法，其中在所述酸化步骤之前通过使用选择性膜技术将所述蛋白水溶液浓缩，同时维持离子强度基本恒定。
4.权利要求1的方法，其中使用具有至少约0.05，优选约0.1-约0.6的离子强度，以及约5-约6.8的pH，优选约5.3-约6.2的盐水溶液，进行对所述油籽粉的所述提取。
5.一种制备卡诺拉分离蛋白的方法，包括：
(a)提取卡诺拉油籽粉，从而使得卡诺拉油籽粉中的卡诺拉蛋白质溶解，并形成pH约5-约6.8的蛋白水溶液；
(b)将卡诺拉油籽粉残留物与蛋白水溶液分离；
(c)酸化蛋白水溶液到pH约3-约4，以便从中沉淀蛋白含量至少约为90wt％(Nx6.25)、主要由7S卡诺拉蛋白组成的卡诺拉分离蛋白；并
(d)从上清液中分离已沉淀的卡诺拉分离蛋白。
6.权利要求5的方法，其中处理所述上清液，以便从中回收蛋白含量至少约90wt％(Nx6.25)，主要由2S卡诺拉蛋白组成的额外的卡诺拉分离蛋白。
7.权利要求6的方法，其中将所述上清液进行热处理，以便从上清液中沉淀7S和任何12S蛋白，并且将经过热处理的上清液与沉解的7S/12S蛋白分离。
8.权利要求7的方法，其中在所述热处理步骤之前浓缩所述上清液。
9.权利要求7的方法，其中在所述热处理步骤之前，将所述上清液的pH调整到约5-约6.8，优选约5--约6.2。
10.权利要求8或9的方法，其中在将降解的7S/12S蛋白质分离之后，将主要由2S组成的卡诺拉分离蛋白回收之前，和/或在所述浓缩步骤之前或之后，对所述上清液进行脱色操作。
11.权利要求5的方法，其中所述蛋白水溶液具有约5-约10wt％的蛋白浓度。
12.权利要求5的方法，其中通过在所述酸化步骤之前使用选择性膜技术将所述卡诺拉蛋白水溶液浓缩，同时维持其离子强度基本恒定。
13.权利要求12的方法，其中将所述卡诺拉蛋白水溶液浓缩到浓度为约10-约300g/L，优选约50-约100g/L。
14.权利要求12的方法，其中将所述卡诺拉蛋白水溶液浓缩到约20-约25wt％蛋白的浓度，并在所述酸化步骤之前，通过添加盐水溶液，将所述卡诺拉蛋白溶液的浓度调节到约5-约10wt％。
15.权利要求12或14的方法，其中所述进行酸化步骤的蛋白水溶液的导电率至少为约1mS，优选约10-约20mS。
16.一种制备分离蛋白的方法，包括：
(a)提取油籽粉，从而使得油籽粉中的蛋白质溶解，并形成pH约5-约6.8的蛋白水溶液；
(b)将油籽粉残留物与蛋白水溶液分离；
(c)通过使用选择性膜技术提高所述蛋白水溶液的蛋白浓度，同时维持离子强度基本恒定，从而得到浓缩的蛋白溶液；
(d)将所述浓缩的蛋白溶液稀释到温度低于约15℃的冷水中，从而在水溶液中形成胶束形式的不连续蛋白颗粒；
(e)沉降蛋白胶束形成一种无定型、粘性、胶状、面筋样蛋白质胶束块；
(f)将蛋白质胶束块从上清液中分离出来，蛋白质胶束块具有至少约90wt％的蛋白含量，优选至少约100wt％(Nx6.25)；
(g)形成蛋白质胶束块的水溶液；
(h)将蛋白质胶束块的水溶液酸化，以便从中沉淀具有至少约90wt％，优选至少约100wt％(Nx6.25)的蛋白质含量的分离蛋白；并
(i)将上清液与沉淀的分离蛋白分离。
17.权利要求16的方法，其中处理来自蛋白质胶束块的沉淀的上清液，以便从中回收具有至少约90wt％，优选至少约100wt％(Nx6.25)的蛋白质含量的额外分离蛋白。
18.权利要求16的方法，其中通过用离子强度至少为约0.05，优选至少约0.1的盐水溶液，将蛋白胶束块溶解而形成所述蛋白胶束块的水溶液，所述蛋白胶束块可以是干燥形式。
19.权利要求16的方法，其中所述油籽粉来自卡诺拉种子，所述蛋白胶束块的水溶液具有约5-约10wt％的蛋白浓度，且所述蛋白胶束块的水溶液酸化到pH约3-约4。
20.通过权利要求6的方法生产的卡诺拉分离蛋白。
21.一种包含权利要求20的卡诺拉分离蛋白的酸化饮料。
22.权利要求21的饮料，其是澄清的蛋白强化软饮料。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102612322A (zh) * 2009-05-14 2012-07-25 伯康营养科学(Mb)公司 无热处理地生产卡诺拉蛋白产物(“C200CaC”)
CN102711509A (zh) * 2009-09-17 2012-10-03 伯康营养科学(Mb)公司 来自上清液的卡诺拉蛋白产物
CN103179865A (zh) * 2010-08-18 2013-06-26 伯康营养科学(Mb)公司 改进的从大豆制备蛋白溶液
CN107691963A (zh) * 2009-06-30 2018-02-16 伯康营养科学(Mb)公司 使用氯化钙提取制备大豆蛋白分离物(“s703”)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8460741B2 (en) * 2004-01-20 2013-06-11 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Process for the preparation of a canola protein isolate
US7611735B2 (en) * 2004-01-20 2009-11-03 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Canola protein isolate
US8470385B2 (en) 2004-01-20 2013-06-25 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Beverage having purified or isolate protein component
MX2007015476A (es) 2005-06-14 2008-02-25 Amgen Inc Formulaciones de proteina autoamortiguadoras.
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
TWI661833B (zh) * 2007-11-30 2019-06-11 百慕達商艾伯維生物技術有限責任公司 蛋白質調配物及製造其之方法
AU2013204044B2 (en) * 2007-11-30 2017-08-31 Abbvie Biotechnology Ltd. Protein formulations and methods of making same
US8821955B2 (en) 2008-05-16 2014-09-02 Siebte Pmi Verwaltungs Gmbh Protein concentrates and isolates, and processes for the production thereof
PL2591683T3 (pl) * 2008-05-16 2017-07-31 Siebte Pmi Verwaltungs Gmbh Koncentraty białkowe z nasion oleistych i sposoby ich wytwarzania
US8623445B2 (en) 2008-05-16 2014-01-07 Bio-Extraction Inc. Protein concentrates and isolates, and processes for the production thereof
US8609153B2 (en) * 2008-06-20 2013-12-17 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Canola protein isolate
US8142822B2 (en) 2008-06-20 2012-03-27 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Canola protein isolate
US7981450B2 (en) * 2008-06-20 2011-07-19 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Canola protein isolate
US20100036099A1 (en) * 2008-07-11 2010-02-11 Martin Schweizer Soluble canola protein isolate production ("nutratein")
NZ591100A (en) * 2008-07-11 2012-06-29 Burcon Nutrascience Mb Corp Soluble canola protein isolate production
EP2936994B1 (en) * 2008-08-18 2023-06-07 Burcon Nutrascience (MB) Corp. Production of canola protein isolate without heat treatment
NZ591364A (en) * 2008-08-19 2013-03-28 Burcon Nutrascience Mb Corp Soluble canola protein isolate production from protein micellar mass
CH699553A1 (de) 2008-09-16 2010-03-31 Resag Renewable En Switzerland Verfahren zur Verwertung von Ölpflanzen.
AU2009307003B2 (en) * 2008-10-21 2014-12-11 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of soluble protein solutions from soy ("S701")
MX2011007865A (es) * 2009-01-26 2012-01-30 Burcon Nutrascience Mb Corp Elaboracion de un producto de proteina de soya soluble a partir de una masa micelar de proteina de soya ("s200ca").
PT2395854E (pt) * 2009-02-11 2014-11-06 Burcon Nutrascience Mb Corp Produção de produto de proteína de soja por extração com cloreto de cálcio ( s702/s7300/s7200/s7301 )
KR20110119784A (ko) * 2009-02-11 2011-11-02 버콘 뉴트라사이언스 (엠비) 코포레이션 물 추출을 이용하는 콩 단백질 제품 및 그 제조방법
HUE035356T2 (en) 2009-02-27 2018-05-02 Fraunhofer Ges Forschung A method for preparing protein preparations from sunflower seeds
CN105585996B (zh) 2009-03-06 2019-04-05 爱福特立 含有蛋白的乳液和粘合剂以及它们的制造与用途
EP2403886A2 (en) 2009-03-06 2012-01-11 Biopolymer Technologies, Ltd. Protein-containing foams, manufacture and use thereof
NZ597838A (en) * 2009-06-30 2014-01-31 Burcon Nutrascience Mb Corp Production of acid soluble soy protein isolates (”s800”)
RU2551776C2 (ru) * 2009-06-30 2015-05-27 Баркон Ньютрасайнс (Мб) Корп. Получение кислоторастворимых изолятов соевого белка
US8389040B2 (en) * 2009-06-30 2013-03-05 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of acid soluble soy protein isolates (“S700”)
US8404299B2 (en) * 2009-06-30 2013-03-26 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of soy protein isolate using calcium chloride extraction (“S703 CIP”)
US9700066B2 (en) 2009-06-30 2017-07-11 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of soy protein isolate using calcium chloride extraction (“S703 cip”)
CA2801536C (en) 2009-11-11 2018-10-23 Bioexx Specialty Proteins Ltd. Protein concentrates and isolates, and processes for the production thereof from macroalgae and/or microalgae
WO2011057407A1 (en) 2009-11-11 2011-05-19 Bioexx Specialty Proteins Ltd. Protein concentrates and isolates, and processes for the production thereof from toasted oilseed meal
CN102791143B (zh) * 2009-12-22 2016-11-09 伯康营养科学(Mb)公司 pH调节的大豆蛋白分离物及用途
US20120135117A1 (en) * 2010-05-07 2012-05-31 Segall Kevin I Production of soluble protein solutions from pulses
CN107259067A (zh) * 2010-05-07 2017-10-20 伯康营养科学(Mb)公司 从豆类生产可溶性蛋白溶液
US10506821B2 (en) 2010-05-07 2019-12-17 Burcon Mutrascience (Mb) Corp. Production of soluble protein solutions from pulses
PL2576661T3 (pl) 2010-06-07 2017-07-31 Evertree Substancje adhezyjne zawierające białka i ich wytwarzanie i zastosowanie
WO2013036739A1 (en) 2011-09-09 2013-03-14 Biopolymer Technologies, Ltd. Protein-containing adhesives, and manufacture and use thereof
DK2753633T3 (en) 2011-09-09 2017-03-20 Evertree PROTEIN-CONTAINING ADHESIVES, THEIR PREPARATION AND APPLICATION THEREOF
US9598474B2 (en) 2012-03-26 2017-03-21 Axcella Health, Inc. Nutritive fragments, proteins and methods
US9605040B2 (en) 2012-03-26 2017-03-28 Axcella Health Inc. Nutritive proteins and methods
WO2013148329A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Pronutria, Inc. Charged nutritive proteins and methods
AU2013240271A1 (en) 2012-03-26 2014-10-02 Axcella Health Inc. Nutritive fragments, proteins and methods
EP2880116B1 (en) 2012-07-30 2020-02-05 Evertree Protein adhesives containing an anhydride, carboxylic acid, and/or carboxylate salt compound and their use
AU2013327357B2 (en) * 2012-10-02 2017-04-06 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of pulse protein product using calcium chloride extraction ("YP702")
AU2014324897A1 (en) 2013-09-25 2016-05-19 Axcella Health Inc. Compositions and formulations for maintaining and increasing muscle mass, strength, and performance and methods of production and use thereof
EP3188605A4 (en) 2014-07-28 2018-08-29 Burcon Nutrascience (MB) Corp. Preparation of pulse protein products ("yp810")
US10433571B2 (en) 2014-08-27 2019-10-08 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of soy protein products (“S810”)
TWI756203B (zh) * 2016-01-27 2022-03-01 加拿大商柏康營養科學公司 非大豆之含油種子蛋白產品(「*810」)之製備
RU2633501C1 (ru) * 2016-07-12 2017-10-12 Сергей Борисович Тришин Установка для получения соевого белкового изолята
BR112019007858A2 (pt) 2016-10-21 2019-07-02 Amgen Inc formulações farmacêuticas e métodos para produzir as mesmas
KR20220145855A (ko) 2020-02-21 2022-10-31 리플 푸드즈, 피비씨 식물 단백질 조성물의 용해도를 향상시키기 위한 공정
US20240317822A1 (en) * 2023-03-24 2024-09-26 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of isoelectrically precipitated sunflower protein products with improved colour

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US375452A (en) * 1887-12-27 hazaed lippincott
US3758452A (en) * 1971-12-01 1973-09-11 D Owen Traction and isolectric protein precipitation detoxification and isolation of rapeseed protein by aqueous saline ex
US4188399A (en) * 1974-12-23 1980-02-12 Miles Laboratories, Inc. Process for preparing a heat coagulable viscous protein
US4111927A (en) 1975-07-07 1978-09-05 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Extraction of protein from Phaseolus aureus, Phaseolus vulgaris and Phaseolus lunatus beans using sodium chloride
GB1540376A (en) * 1976-02-18 1979-02-14 Unilever Ltd Concentration of protein solutions by ultrafiltration
CA1028552A (en) 1976-09-30 1978-03-28 Edward D. Murray Protein product and process for preparing same
US4285862A (en) 1976-09-30 1981-08-25 General Foods, Limited Protein isolate product
CA1099576A (en) 1978-03-23 1981-04-21 Chester D. Myers Improved process for isolation of proteins
JPS55124457A (en) * 1979-03-19 1980-09-25 Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho Preparation of 7s protein
US4307014A (en) * 1980-09-22 1981-12-22 General Foods Inc. Soybean protein isolate production
US4349576A (en) * 1980-12-29 1982-09-14 A. E. Staley Manufacturing Company Soy isolate in meltable imitation cheese
US4418013A (en) * 1981-03-16 1983-11-29 General Foods, Inc. Rapeseed protein isolate
BE904225A (fr) * 1985-02-14 1986-05-29 Fuji Oil Co Ltd Procede de fractionnement de proteines.
US5844086A (en) * 1996-01-31 1998-12-01 Stilts Corporation Oil seed protein extraction
US8741356B2 (en) 2001-05-04 2014-06-03 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of oil seed protein isolate
US7687087B2 (en) 2001-05-04 2010-03-30 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Production of oil seed protein isolate
KR100934200B1 (ko) * 2001-05-04 2009-12-29 버콘 뉴트라사이언스 (엠비) 코포레이션 오일 시드 단백질 분리체의 제조
CN1283174C (zh) * 2001-05-04 2006-11-08 伯康营养科学(Mb)公司 卡诺拉蛋白分离物功能性ⅰ
EP1397052B1 (en) * 2001-05-29 2012-09-12 Levente Laszlo Diosady Production of high-quality protein isolates from defatted meals of brassica seeds
ES2314130T3 (es) * 2001-10-23 2009-03-16 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Funcionalidad ii de aislado de proteina de canola.
CA2363451C (en) * 2001-11-20 2005-05-10 Mcn Bioproducts Inc. Oilseed processing
US20070015910A1 (en) 2001-11-20 2007-01-18 Barker Larry D Continuous process for production of oil seed protein isolate
MXPA04008869A (es) * 2002-03-12 2004-11-26 Burcon Nutrascience Mb Corp Funcionalidad iii de la proteina de canola aislada.
EP1494541B1 (en) * 2002-04-15 2011-05-18 Burcon Nutrascience (MB) Corp. Canola protein isolate compositions
AU2003243865B2 (en) * 2002-06-20 2009-06-18 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Colour reduction in canola protein isolate
US7611735B2 (en) * 2004-01-20 2009-11-03 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Canola protein isolate
JP5749878B2 (ja) * 2004-02-17 2015-07-15 バーコン ニュートラサイエンス （エムビー） コーポレイションＢｕｒｃｏｎ Ｎｕｔｒａｓｃｉｅｎｃｅ （Ｍｂ） Ｃｏｒｐ． カノーラタンパク質単離物の調製および養殖におけるその使用

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102612322A (zh) * 2009-05-14 2012-07-25 伯康营养科学(Mb)公司 无热处理地生产卡诺拉蛋白产物(“C200CaC”)
CN107691963A (zh) * 2009-06-30 2018-02-16 伯康营养科学(Mb)公司 使用氯化钙提取制备大豆蛋白分离物(“s703”)
CN102711509A (zh) * 2009-09-17 2012-10-03 伯康营养科学(Mb)公司 来自上清液的卡诺拉蛋白产物
CN103179865A (zh) * 2010-08-18 2013-06-26 伯康营养科学(Mb)公司 改进的从大豆制备蛋白溶液

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