CN102711509A - 来自上清液的卡诺拉蛋白产物 - Google Patents
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Abstract
主要由2S卡诺拉蛋白组成和具有改良的溶解特性的新的卡诺拉蛋白产物,其具有增加比例的2S卡诺拉蛋白和减小比例的7S卡诺拉蛋白,且蛋白含量低于约90重量%(N×6.25)d.b.。该新的卡诺拉蛋白分离物通过热处理或等电沉淀卡诺拉蛋白胶束形成和沉淀所得水性上清液以进行沉降且被除去的7S蛋白的沉淀而形成。
Description
发明领域
本发明涉及卡诺拉(canola)蛋白产物的生产和其在水溶液中的使用,所述水溶液包括软饮料和运动饮料。
发明背景
在转让给其受让人且其公开内容通过引用结合到本文中的共同待审的于2005年1月21日提交的美国专利申请第11/038,086号(美国专利申请公开第2005-0181112号,WO 2005/067729)和于2008年6月20日提交的第12/213,500号(美国专利申请公开第2008-0299282号,WO 2009/152621)中,描述了具有基于干重基础(d.b.)至少约90重量%(N×6.25),优选至少约100重量%的蛋白含量的卡诺拉蛋白分离物的生产,其通过热处理或等电沉淀由卡诺拉蛋白胶束团(micellar mass)沉积而得的上清液(可部分浓缩或浓缩),以引起卡诺拉7S蛋白从上清液中沉淀。除去沉淀的卡诺拉7S蛋白之后,干燥处理过的上清液。
如此形成的与未处理的上清液比较增加了2S蛋白含量的卡诺拉蛋白分离物,相对于直接来源于未处理的上清液的卡诺拉蛋白分离物展示出在水溶液中优良的性能。除了在多种pH值下相当或更大的溶解度之外,其中提供的富含2S的卡诺拉蛋白分离物能够提供在软饮料和运动饮料溶液中改良的澄清度,提供澄清的蛋白强化饮料,包括酸性饮料,例如软饮料和运动饮料。
卡诺拉也被称为油菜籽或者油菜(oil seed rape)。
发明概述
现已发现,如果前述US 11/038,086和12/213,500中描述的步骤以下述方式进行,所述方式使得富含2S的卡诺拉蛋白产物含有低于约90重量% (N×6.25) d.b.,因此不是分离物,例如至少约60重量% (N×6.25) d.b.,该浓度的卡诺拉蛋白产物被认为是浓缩物,那么得到的卡诺拉蛋白产物在宽的pH值范围内同样地完全可溶,并能够提供澄清的蛋白强化饮料,包括酸性饮料,例如软饮料和运动饮料。
本文通过省略或减少对上清液进行的渗滤步骤或者通过较早停止对上清液进行的超滤步骤实现该结果,使得在这些步骤期间除去较少的污染物且因此得到的卡诺拉蛋白产物比分离物的纯度低。
依据本发明的一个方面,提供一种制备具有增加的2S卡诺拉蛋白比例的卡诺拉蛋白产物的方法,所述方法包括:
(a) 提供主要由2S蛋白组成的2S和7S蛋白的水溶液,
(b) 热处理水溶液以引起7S卡诺拉蛋白沉淀,
(c) 从水溶液中除去沉淀的7S蛋白,和
(d) 回收具有低于约90重量%(N×6.25) d.b.的蛋白含量和增加的2S卡诺拉蛋白比例的卡诺拉蛋白产物。
依据本发明另一个方面,提供一种制备具有增加的2S卡诺拉蛋白比例的卡诺拉蛋白产物的方法,所述方法包括:
(a) 提供主要由2S蛋白组成的2S和7S蛋白的水溶液,
(b) 从水溶液中等电沉淀7S蛋白,
(c) 从水溶液中除去沉淀的7S蛋白,
(d) 回收具有低于约90重量%(N×6.25) d.b.的蛋白含量且与2S和7S蛋白的水溶液相比具有增加的2S卡诺拉蛋白比例的卡诺拉蛋白产物。
本文生产的卡诺拉蛋白产物含有至少约85重量% 2S卡诺拉蛋白和低于约15重量% 7S卡诺拉蛋白,优选至少约90重量% 2S卡诺拉蛋白和低于约10重量% 7S卡诺拉蛋白和更优选尽可能高的2S蛋白比例。如上所述,这种卡诺拉蛋白产物通过热处理或等电沉淀上清液(部分浓缩上清液和浓缩上清液)得到,如下文更详细的描述。对上清液(部分浓缩上清液和浓缩上清液)热处理或等电沉淀,引起7S蛋白沉淀,其可通过任何合宜方法从处理的上清液中除去,例如离心或过虑。2S蛋白不受处理的影响,因此处理通过减少7S蛋白比例提高了存在的2S蛋白比例。
该卡诺拉蛋白产物在宽的pH值范围内的水溶液中可溶,pH值一般约pH 2至约pH 7.5,优选约2至约4,一般具有等于或大于主要由2S蛋白组成且在相同的制备实验条件下直接来源于卡诺拉蛋白胶束形成和沉淀所得上清液的卡诺拉蛋白产物的溶解度。另外,在软饮料中的卡诺拉蛋白产物的水溶液,具有比从主要由2S蛋白组成且在相同的制备条件下直接来源于卡诺拉蛋白胶束形成和沉淀所得上清液的卡诺拉蛋白产物生产的这样的水溶液更高的澄清度,所述软饮料包括碳酸和非碳酸的软饮料和运动饮料,包括碳酸和非碳酸的运动能量饮料,例如那些市售的。
卡诺拉蛋白产物在水溶液(包括软饮料和运动饮料中的溶液)中的浓度可视溶液的预期用途而变化。一般而言,蛋白浓度可从约0.1至约30重量%变化,优选约1至约5重量%。
本文提供的卡诺拉蛋白产物不仅适合酸性介质的蛋白强化,而且可用于多种蛋白产物的常规应用,包括但不限于加工食品和饮料的蛋白强化、油的乳化、在焙烤食品中作为成体剂(body former)和在截留气体的产品中作为发泡剂。此外,卡诺拉蛋白产物可形成在仿肉制品中有用的蛋白纤维,并且可用作其中蛋清用作粘合剂的食品产品中的蛋清代替物或者增补剂。卡诺拉蛋白产物也可用作营养补充剂。卡诺拉蛋白产物的其它用途为在宠物食品、动物饲料中和在工业和化妆品应用以及个人护理产品中。
发明的一般性说明
因此,本发明包括本文提供的卡诺拉蛋白产物的水溶液,不仅包括以上提到的那些,而且包括其他饮料,例如果汁、酒精饮料、基于咖啡的饮料和基于乳制品的饮料。
提供卡诺拉蛋白产物的方法的最初步骤包括溶解卡诺拉油粕的蛋白物质。从卡诺拉籽粕中回收的蛋白物质可以是天然存在于卡诺拉籽中的蛋白,或者蛋白物质可以是通过遗传操作改造但是具有天然蛋白特有的疏水性和极性的蛋白。卡诺拉粕可以是任何从卡诺拉油籽中除去卡诺拉油所得的含有不同水平的非变性蛋白的卡诺拉粕,例如得自热己烷提取或冷油挤出方法。从卡诺拉油籽中除去卡诺拉油通常是以与本文所述卡诺拉蛋白产物回收步骤分离的操作形式进行。
通过使用食品级盐溶液进行蛋白溶解最有效,因为盐的存在增强从油粕中除去可溶蛋白。如果卡诺拉蛋白分离物旨在用于非食品用途,那么可使用非食品级化学制品。盐通常是氯化钠,但是可使用其它盐,例如氯化钾。盐溶液的离子强度为至少约0.05,优选至少约0.10,以使能够进行显著量蛋白的溶解。随着盐溶液的离子强度增加,油粕中蛋白的溶解程度开始增加直到达到最大值。任何随后的离子强度增加不增加总的溶解蛋白。引起最大限度的蛋白溶解的食品级盐溶液的离子强度视涉及的盐和选择的油粕而不同。
鉴于随着离子强度增加,蛋白沉淀所需的稀释程度越大,通常优选使用的离子强度值小于约0.8,且更优选的值为约0.1至约0.15。
在分批过程中,蛋白的盐溶解在约5℃至约75℃的温度下进行,优选伴随搅拌以减少溶解时间,溶解时间通常为约10至约60分钟。优选进行溶解以从油粕中提取基本上与可实行的一样多的蛋白,以便提供总的高产物产率。
选择约5℃的温度下限是因为低于该温度溶解不可实行地慢,而选择约75℃的优选温度上限是由于部分存在的蛋白的变性温度。
在连续过程中,卡诺拉油粕中蛋白的提取以与进行卡诺拉油粕蛋白的连续提取一致的任何方式进行。在一个实施方案中,将卡诺拉油粕连续与食品级盐溶液混合,并将混合物通过有一定长度的管道或导管且以用于足以依照本文所述参数进行所需提取的停留时间的流速传送。在这种连续步骤中,以可达约10分钟的时间快速进行盐溶解步骤,优选进行溶解以从卡诺拉油粕中提取基本上与可实行的一样多的蛋白。连续步骤中的溶解在约10℃至约75℃的温度下进行,优选约15℃至约35℃。
食品级盐水溶液一般pH为约5至约6.8,优选约5.3至约6.2,视需要,可将盐溶液的pH调节为约5至约6.8范围内的任何所需值,以用于通过使用任何合宜的酸(通常是盐酸)或碱(通常是氢氧化钠)进行的提取步骤。
在溶解步骤期间食品级盐溶液中的油粕浓度可改变很大。典型的浓度值为约5至约15% w/v。
使用盐水溶液的蛋白提取步骤具有另外的溶解可能存在于卡诺拉粕中的脂肪的作用,这因此引起脂肪存在于水相中。
得自提取步骤的蛋白溶液一般蛋白浓度为约5至约40 g/L,优选约10至约30 g/L。
盐水溶液可包含抗氧化剂。抗氧化剂可以是任何合宜的抗氧化剂,例如亚硫酸钠或抗坏血酸。抗氧化剂的用量可从溶液的约0.01变化至约1重量%,优选约0.05重量%。抗氧化剂用来抑制蛋白溶液中酚的氧化。
然后可以任何合宜的方式将得自提取步骤的水相与残余卡诺拉粕分离,例如通过使用倾析式离心,接着碟式离心和/或过滤以除去残余粕。可干燥分离的残余粕以处理。
通过将粉末活性炭或者其它色素吸附剂与分离的蛋白水溶液混合,并随后合宜地通过过滤除去吸附剂以提供蛋白溶液,可在浅色和不太强烈黄色方面改进从卡诺拉蛋白溶液回收的卡诺拉蛋白产物的颜色。卡诺拉蛋白溶液的渗滤也可用于除去色素。
该色素除去步骤可在任何合宜条件下完成,通常在分离的蛋白水溶液的环境温度下,使用任何合适的色素吸附剂。对于粉末活性炭,用量为约0.025%至约5% w/v,优选约0.05%至约2% w/v。
如果卡诺拉籽粕包含显著量的脂肪,如转让给其受让人且其公开内容通过引用结合到本文中的美国专利第5,844,086和6,005,076号所述,那么可对分离的蛋白水溶液和下文所述的浓缩的蛋白水溶液进行其中所述的脱脂步骤或任何其他合宜的脱脂步骤。如果进行颜色改进步骤,那么可在第一次脱脂步骤后进行这种步骤。
作为使用盐水溶液提取油粕的备选,可单独使用水进行这种提取,但是与盐水溶液相比,单独使用水往往从油粕中提取较少的蛋白。如果使用该备选,那么可将上文所述浓度的盐加入与残余油粕分离后的蛋白溶液中,以便在下文所述浓缩步骤期间将蛋白维持在溶液中。如果进行第一次除脂步骤,那么通常在这种操作完成后加入盐。
另一个备选步骤是使用相对高pH值(高于约6.8,一般高至约9.9)的食品级盐溶液提取油粕。食品级盐溶液的pH可通过使用任何合宜的食品级碱(例如氢氧化钠水溶液)调节至所需的碱性值。备选地,可使用相对低pH (低于约pH 5,一般低至约pH 3)的盐溶液提取油粕。如果使用这种备选,那么然后以任何合宜方式将得自油粕提取步骤的水相与残余卡诺拉粕分离,例如通过使用倾析式离心,接着碟式离心和/或过滤以除去残余粕。可干燥分离的残余粕以处理。
然后在下文所述进一步处理之前,如上所述将得自高或低pH提取步骤的蛋白水溶液的pH调节为约5至约6.8的范围,优选约5.3至约6.2。视需要,这种pH调节可使用任何合宜的酸(例如盐酸)或碱(例如氢氧化钠)进行。
浓缩蛋白水溶液以提高其蛋白浓度,同时保持其离子强度基本上恒定。一般进行这种浓缩以提供蛋白浓度为至少约50 g/L的浓缩蛋白溶液,优选至少约200 g/L,更优选至少约250 g/L。
可以与分批或者连续操作一致的任何合宜方式进行浓缩步骤,例如通过使用任何合宜的选择性膜技术,例如使用膜(例如中空纤维膜或缠绕膜)的超滤或渗滤,考虑到不同膜材料和结构,膜具有合适的分子量分离点(cut-off),例如约3,000至约100,000道尔顿,优选约5,000至约10,000道尔顿,且对于连续操作,随着蛋白水溶液通过膜,膜尺寸允许所需浓缩程度。
如众所周知的,超滤和类似的选择性膜技术允许低分子量物类通过膜,同时防止较高分子量物类通过膜。低分子量物类不仅包括食品级盐的离子物类,而且包括提取自源材料的低分子量物质(例如碳水化合物、色素和抗营养因子),以及任何低分子量形式的蛋白。考虑到不同膜材料和结构,通常选择膜的分子量分离点以确保截留溶液中显著比例的蛋白,同时允许污染物通过。
然后,可使用摩尔浓度和pH与提取溶液相同的盐水溶液对浓缩蛋白溶液进行渗滤步骤。可使用约2至约20体积的渗滤溶液进行这种渗滤,优选约5至约10体积的渗滤溶液。在渗滤操作中,通过使渗透物通过膜从蛋白水溶液中除去更多量的污染物。可进行渗滤操作,直到在渗透物中不存在显著另外量的污染物和可见颜色。可使用与浓缩步骤相同的膜进行这种渗滤。然而,视需要,可使用有不同分子量分离点的分离膜进行渗滤步骤,例如考虑到不同膜材料和结构,具有在约3,000至约100,000道尔顿,优选约5,000至约10,000道尔顿范围内的分子量分离点的膜。
在至少部分渗滤步骤期间,抗氧化剂可存在于渗滤介质中。抗氧化剂可以是任何合宜的抗氧化剂,例如亚硫酸钠或抗坏血酸。在渗滤介质中所用抗氧化剂的量取决于使用的材料,且可从约0.01变化至约1重量%,优选约0.05重量%。抗氧化剂用来抑制存在于浓缩的卡诺拉蛋白分离物溶液中的酚的氧化。
浓缩步骤和渗滤步骤可在任何合宜温度下进行,一般约20℃至约60℃,优选约20℃至约30℃,并持续一段时间以完成所需程度的浓缩。使用的温度和其它条件在某种程度上取决于用于进行浓缩的膜设备和所需的溶液蛋白浓度。
视需要,如美国专利第5,844,086和6,005,076号所述,可对浓缩和任选渗滤的蛋白溶液进行进一步的脱脂操作。
作为上文所述脱色操作的备选,可对浓缩和任选渗滤的蛋白溶液进行脱色操作。本文可使用粉末活性炭,以及颗粒活性炭(GAC)。可用作颜色吸附剂的另一种材料是聚乙烯吡咯烷酮。
颜色吸附剂处理步骤可在任何合宜条件下进行,一般在浓缩的和任选渗滤的卡诺拉蛋白溶液的环境温度下。对于粉末活性炭,用量可为约0.025%至约5% w/v,优选约0.05%至约2% w/v。如果聚乙烯吡咯烷酮用作颜色吸附剂,那么用量可为约0.5%至约5% w/v,优选约2%至约3% w/v。从卡诺拉蛋白溶液中除去颜色吸附剂可通过任何合宜的方法,例如通过过滤。
可对得自任选脱色步骤的浓缩和任选渗滤的蛋白溶液进行巴氏消毒以减少微生物载量。这种巴氏消毒可在任何所需的巴氏消毒条件下进行。一般地,将浓缩和任选渗滤的蛋白溶液加热至温度为约55℃至约70℃,优选约60℃至约65℃,持续约10至约15分钟,优选约10分钟。然后可将巴氏消毒的浓缩蛋白溶液冷却,以用于如下文所述的进一步处理,优选冷却至温度为约25℃至约40℃。
取决于浓缩步骤和任选渗滤步骤使用的温度以及是否进行巴氏消毒,可将浓缩蛋白溶液加热至温度为至少约20℃,且可达约60℃,优选约25℃至约40℃,以减少浓缩蛋白溶液的粘度,利于进行随后的稀释步骤和胶束形成。不能加热浓缩蛋白溶液超过下述温度,高于该温度,在通过冷水稀释时不发生胶束形成。
然后,将得自浓缩步骤和任选渗滤步骤、任选脱色步骤、任选巴氏消毒步骤和任选脱脂步骤的浓缩蛋白溶液稀释,以进行胶束形成,稀释是通过将浓缩蛋白溶液与冷水混合,冷水具有达到所需稀释程度所需要的体积。取决于期望通过胶束途径得到的卡诺拉蛋白比例和来自上清液的比例,浓缩蛋白溶液的稀释程度可不同。一般地,对于较低稀释水平,较大比例的卡诺拉蛋白保留在水相中。
当期望通过胶束途径提供最大比例的蛋白时,将浓缩蛋白溶液稀释约5倍至约25倍,优选约10倍至约20倍。
浓缩蛋白溶液与之混合的冷水温度为低于约15℃,一般约1至约15℃,优选低于约10℃,因为在所用稀释因子下使用这些较冷的温度得到提高产率的蛋白胶束团形式的蛋白分离物。
如上所述,在分批操作中,将分批的浓缩蛋白溶液加入具有所需体积的静态冷水体中。浓缩蛋白溶液的稀释和随之发生的离子强度减少引起胶束形式的分离蛋白滴形式的高度缔合蛋白分子的云状团形成。在分批步骤中,使蛋白胶束能够在冷水体中沉降(settle)以形成聚集、并生、密集、无定形的粘性面筋样蛋白胶束团(PMM)。沉降可例如通过离心辅助。这种诱导沉降减少蛋白胶束团的液体含量,从而以总胶束团重量计,通常将水分含量从约70%重量至约95%重量减少至约50%重量至约80%重量的值。以这种方式减少胶束团的水分含量也减少胶束团吸留的盐含量,并因此减少干燥分离物的盐含量。
备选地,稀释操作可连续进行,通过使浓缩蛋白溶液连续地通过T-形管的一个入口,同时将稀释水喂入T-形管的另一个入口,允许在管中混合。将稀释水喂入T-形管的速率足以达到浓缩蛋白溶液的所需稀释程度。
浓缩蛋白溶液与稀释水在管中的混合起始蛋白胶束的形成,将混合物从T-形管的出口连续喂入沉降容器中,当装满时,允许上清液从沉降容器中溢出。优选将混合物以最小化液体中湍流的方式喂入沉降容器中的液体中。
在连续步骤中,允许蛋白胶束在沉降容器中沉降,以形成聚集、并生、密集、无定形、粘性、面筋样的蛋白胶束团(PMM),并继续该步骤直到在沉降容器底部积累了所需量的PMM,随后从沉降容器中除去积累的PMM。通过沉积(sedimentation)代替沉降,可通过离心连续分离PMM。
与使用上述美国专利中描述的任何已知的现有技术蛋白分离物形成步骤获得的相比,将蛋白溶液浓缩至至少约200 g/L的优选蛋白含量的过程参数的组合和使用约10至约20的稀释因子,就从初始粕提取物中回收蛋白胶束团形式的蛋白而言,产生更高的产率,通常显著更高的产率,且就蛋白含量而言产生纯得多的分离物。
与分批过程相比,通过使用回收卡诺拉蛋白分离物的连续过程,对于相同水平的蛋白提取,可显著减少初始蛋白提取步骤的时间,和显著较高的温度可用于提取步骤。此外,在连续操作中,与分批步骤相比存在较少的污染机会,产生较高产品质量,且过程可在更小型的设备中进行。
将沉降的卡诺拉蛋白分离物与残余水相或上清液分离,例如通过倾析沉淀团块的残余水相或者通过离心。PMM可以以湿的形式使用,或者可通过任何合宜的技术(例如喷雾干燥或冷冻干燥)干燥为干燥形式。干燥PMM有高的蛋白含量,超过约90重量%蛋白,优选至少约100重量%蛋白(以N×6.25计算),且基本上是未变性的(通过差示扫描量热法测定)。当视需要使用USP 5,844,086和6,005,076的步骤时,从含脂油粕中分离的干燥PMM也有低的残余脂肪含量,其可低于约1重量%。
如从转让给其受让人且其公开内容通过引用结合到本文中的美国专利第7,662,922号(WO 03/088760)所述的,PMM主要由7S卡诺拉蛋白组成,具有的蛋白组分含量为约60至98重量%的7S蛋白、约1至约15重量%的12S蛋白和0至约25重量%的2S蛋白。
来自PMM形成和沉降步骤的上清液包含在稀释步骤中未沉淀的显著量的卡诺拉蛋白,加工上清液以从中回收卡诺拉蛋白产物。如上述美国专利第7,662,922号所述,得自上清液的卡诺拉蛋白产物主要由2S卡诺拉蛋白组成,具有的蛋白组分含量为约60至约95重量%的2S蛋白、约5至约40重量%的7S蛋白和0至约5重量%的12S蛋白。
浓缩上清液以提高其蛋白浓度。这种浓缩使用任何合宜的选择性膜技术进行,例如超滤,使用有合适分子量分离点的膜,允许低分子量物类(包括从蛋白源材料中提取的盐和其它非蛋白物质的低分子量材料)通过膜,同时在溶液中保留卡诺拉蛋白。考虑到不同的膜材料和结构,可使用分子量分离点为约3,000至100,000道尔顿,优选约5,000至约10,000道尔顿的超滤膜。以这种方式浓缩上清液也减小需要干燥以回收蛋白的液体的体积。在干燥之前,通常将上清液浓缩至蛋白浓度为至少约50 g/L,优选约100至约300 g/L,更优选约200至约300 g/L。如上文对于蛋白溶液浓缩步骤所述,这种浓缩操作可以以分批方式或者以连续操作进行。
然后可使用水、盐水或酸化水对浓缩上清液进行渗滤步骤。可使用约2至约20体积的渗滤溶液进行这种渗滤,优选约5至约10体积的渗滤溶液。在渗滤操作中,通过使渗透物通过膜从水性上清液中除去更多量的污染物。可进行渗滤操作直到在渗透物中不存在显著另外量的污染物和可见颜色。可使用与浓缩步骤相同的膜进行这种渗滤。然而,视需要,可使用分离膜进行渗滤,考虑到不同的膜材料和结构,例如分子量分离点在约3,000至约100,000道尔顿、优选约5,000至约10,000道尔顿范围内的膜。
为了生产包含低于约90重量%的蛋白(N×6.25) d.b.的卡诺拉蛋白产物,对上清液进行如上所述的浓缩和/或渗滤步骤操作以从上清液中除去较少的污染物,使得回收的卡诺拉蛋白产物具有低于约90重量%的蛋白含量,例如至少约60重量%的蛋白(N×6.25) d.b.,例如通过省略或减少渗滤步骤和/或通过较早停止超滤步骤。
在至少部分渗滤步骤期间,抗氧化剂可存在于渗滤介质中。抗氧化剂可以是任何合宜的抗氧化剂,例如亚硫酸钠或抗坏血酸。在渗滤介质中使用的抗氧化剂的量取决于使用的材料,且可从约0.01变化至约1重量%,优选约0.05重量%。抗氧化剂用来抑制存在于浓缩卡诺拉蛋白分离物溶液中的酚的氧化。
可对浓缩和任选渗滤的蛋白溶液进行脱色操作。本文可使用粉末活性炭,以及颗粒活性炭(GAC)。可用作颜色吸附剂的另一种材料是聚乙烯吡咯烷酮。
颜色吸附剂处理步骤可在任何合宜的条件下进行,一般在卡诺拉蛋白溶液的环境温度下。对于粉末活性炭,用量可为约0.025%至约5% w/v,优选约0.05%至约2% w/v。如果聚乙烯吡咯烷酮用作颜色吸附剂,那么用量可为约0.5%至约5% w/v,优选约2%至约3% w/v。颜色吸附剂可通过任何合宜方法(例如通过过滤)从卡诺拉蛋白溶液中除去。
依据本发明的一个方面,在任选脱色操作后,热处理或等电沉淀浓缩和任选渗滤的上清液,以通过除去所得沉淀的7S蛋白减少存在于溶液中的7S蛋白的量,并因此增加了存在于浓缩上清液中的卡诺拉蛋白中2S蛋白的比例。
该热处理可使用足以降低存在于浓缩上清液中的7S比例的温度和时间范围进行,优选以显著程度减小7S蛋白比例。一般而言,将上清液的7S蛋白含量减少至少约50重量%,优选通过热处理减少至少约75重量%。一般而言,热处理可在温度约70℃至约120℃,优选约75℃至约105℃下,进行约1秒至约30分钟,优选约5至约15分钟。
在干燥之前,可酸化浓缩的热处理的上清液,以使pH符合干燥产品的预期用途。一般pH降至约2至约5,优选约2.5至约4。
在除去沉淀的7S蛋白之后,可通过任何合宜技术(例如喷雾干燥或冷冻干燥)将浓缩的热处理的上清液干燥为干燥形式,以提供本发明的卡诺拉蛋白产物。该卡诺拉蛋白产物基于干重基础的蛋白含量低于约90重量%,优选至少约70重量%,(以N×6.25计算),且被认为是基本未变性的。
该卡诺拉蛋白产物在产物的卡诺拉蛋白中包含高比例的2S蛋白,优选至少90重量%和最优选至少约95重量%。在产物中也有一定比例的7S蛋白。
备选地,热处理上清液以沉淀7S蛋白可在以上提到的浓缩和渗滤步骤之前对上清液进行。除去沉积的7S蛋白之后,然后浓缩上清液,任选渗滤,任选进行脱色操作,并干燥以提供本发明的卡诺拉蛋白产物。
作为另一备选,首先可将上清液部分浓缩至任何合宜水平。然后对部分浓缩的上清液进行热处理以沉淀7S蛋白。在除去沉淀的7S蛋白后,进一步浓缩上清液,一般浓缩至浓度为约50至约300 g/L,优选约200至约300 g/L,任选渗滤,任选进行脱色操作,并干燥以提供本发明的卡诺拉蛋白产物。
通过任何合宜方法从上清液(部分浓缩或浓缩上清液)中除去沉淀的7S蛋白,例如通过离心或过滤或其组合。
在除去沉淀的7S蛋白后,如上所述,可将热处理的上清液或部分浓缩的、热处理的上清液在浓缩或渗滤期间或以后的任何时间点酸化,然后干燥以回收卡诺拉蛋白产物。可进行该酸化至符合干燥分离物的预期用途的pH,一般pH降至约2至约5,优选约2.5至约4,用于酸性饮料。
在本发明的另一实施方案中,对胶束形成和沉淀所得上清液进行等电沉淀以形成本发明的新的卡诺拉蛋白产物。如上就热处理所述,首先可将上清液浓缩或部分浓缩,然后等电沉淀。
在该等电沉淀步骤中,首先将盐(通常是氯化钠,但可使用其他盐,例如氯化钾)加入上清液(部分浓缩上清液或浓缩上清液)中,以提供盐化溶液,其电导率至少约0.3 mS,优选约10至约20 mS。
调节盐化上清液的pH至引起7S蛋白等电沉淀的值,一般至pH为约2.0至约4.0,优选约3.0至约3.5。7S蛋白的等电沉淀可在宽的温度范围内进行,一般从约5℃至约70℃,优选约10℃至约40℃。通过任何合宜方法从等电沉淀的上清液中除去沉淀的7S蛋白,例如通过离心或过滤或其组合。
如果尚未浓缩,那么如上就热处理步骤所述地浓缩等电沉淀的上清液,并渗滤以除去盐,然后干燥浓缩和渗滤的上清液以形成本发明的卡诺拉蛋白产物。如上所述,可过滤浓缩和渗滤的上清液以除去残余的颗粒和进行任选脱色步骤,然后通过任何合宜技术(例如通过喷雾干燥或冷冻干燥)干燥为干燥形式,以提供本发明的卡诺拉蛋白产物,其具有低于约90重量%的蛋白(N×6.25) d.b.。
本文生产的卡诺拉蛋白产物可溶于酸性水环境,使得该产物对于加入饮料(碳酸的和非碳酸的)以对其提供蛋白强化是理想的。该饮料有宽范围的酸性pH值,从约2.5变化到约5。本文提供的卡诺拉蛋白产物可以以任何合宜的量加入该饮料中以对该饮料提供蛋白强化,例如,至少约5 g卡诺拉蛋白产物/份。加入的卡诺拉蛋白产物在饮料中溶解且经热处理不增加饮料的不透明度。在通过溶解于水使饮料复溶之前,卡诺拉蛋白产物可与干燥饮料混合。在某些情况下,如果存在于饮料中的组分可不利地影响本发明的组合物保持溶解在饮料中的能力,那么改变饮料的普通配方以耐受本发明的组合物可能是必要的。
实施例
实施例1:
该实施例阐明本发明一个实施方案低于90重量%蛋白(干重)的卡诺拉蛋白产物的生产。
在环境温度下将‘a’ kg卡诺拉粕加入‘b’ L的‘c’ M NaCl溶液中,并搅拌30分钟以提供蛋白水溶液。除去残余卡诺拉粕,并通过离心使所得蛋白溶液部分澄清,产生‘d’ L部分澄清的蛋白含量为‘e’ %重量的蛋白溶液。然后过滤部分澄清的蛋白溶液以进一步澄清,产生体积为‘f’的蛋白含量为‘g’重量的溶液。
通过在分子量分离点为‘j’道尔顿的聚醚砜(PES)膜上浓缩,使‘h’ L等分试样的蛋白提取物溶液的体积减少为‘i’ L。然后在60℃对渗余物进行巴氏消毒1分钟。所得巴氏消毒的浓缩蛋白溶液的蛋白含量为‘k’%重量。
将‘l’ ℃的浓缩溶液以‘m’稀释到温度为‘n’ ℃的冷RO水中。白色云状物立刻形成并使其沉降。除去上层稀释水并通过离心以‘o’重量%过滤蛋白溶液的产率回收沉淀的、粘滞的、粘性的团块(PMM)并干燥。发现干燥PMM蛋白的蛋白含量为‘p’重量% (N×6.25) d.b.。将产物命名为‘q’C300。
然后对上清液进行以上所述的热处理。
加热‘r’ L上清液至80℃持续10分钟,然后离心以除去沉淀的蛋白。将离心的热处理的上清液通过使用分子量分离点为‘t’道尔顿的聚醚砜(PES)膜超滤使体积减小为‘s’ L,然后用‘u’ L水在相同的膜上渗滤浓缩液,使用氯化钠调节水的电导率为1 mS。渗滤的浓缩液包含以重量计‘v’%的蛋白。加上从上清液中回收的另外蛋白,过滤蛋白溶液的总蛋白回收率为‘w’重量%。使用HCl将‘x’ L部分的浓缩液调节至pH 3,并通过使其以‘z’ BV/hr的速率在pH 3下通过‘y’ L床体积颗粒活性炭,来进行退色步骤。然后将退色且蛋白含量为‘ab’%重量的‘aa’ L GAC处理的溶液喷雾干燥,命名为‘s’C200HSC,其蛋白含量为‘ac’重量%(Nx6.25) d.b.。一次运行的参数‘a’-‘ac’示于下表I中。
实施例2:
该实施例阐明本发明另一个实施方案的低于90%重量蛋白的新的卡诺拉蛋白产物的生产。
在环境温度下将‘a’ kg卡诺拉粕加入‘b’ L的‘c’ M NaCl溶液中,并搅拌30分钟以提供蛋白水溶液。除去残余卡诺拉粕,并通过离心使所得蛋白溶液部分澄清,以产生‘d’ L部分澄清的蛋白溶液,其蛋白含量为‘e’%重量。将部分澄清的蛋白溶液过滤以进一步澄清,得到体积为‘f’的蛋白含量为‘g’%重量的溶液。
通过在分子量分离点为‘j’道尔顿的聚偏氟乙烯(PVDF)膜上浓缩使‘h’ L等分试样的蛋白提取溶液的体积减少为‘i’ L。然后在60℃对渗余物进行巴氏消毒10分钟。所得巴氏消毒的浓缩蛋白溶液的蛋白含量为‘k’%重量。
将‘l’℃下的浓缩溶液以‘m’稀释到温度为‘n’℃的冷RO水中。白色云状物立刻形成并允许沉降。除去上层稀释水,通过离心以‘o’重量%过滤蛋白溶液的产率回收沉淀的、粘滞的、粘性的团块(PMM)并喷雾干燥。发现干燥PMM衍生蛋白的蛋白含量为‘p’重量% (N x 6.25) d.b.。将产品命名为‘q’C300。
然后对上清液进行本文所述热处理。
通过使用分子量分离点为‘t’道尔顿的聚偏氟乙烯(PVDF)膜超滤使‘r’ L上清液体积减少为‘s’ L。浓缩液包含以重量计‘u’%的蛋白。加上从上清液回收的另外的蛋白,过滤蛋白溶液的总蛋白回收率为‘v’重量%。然后在进行进一步离心步骤以澄清之前,将浓缩液加热至85℃持续10分钟。通过使浓缩液以‘z’ BV/hr的速率通过‘y’ L BV吸附树脂,对所得蛋白含量为‘x’%重量的‘w’ L浓缩液进行退色步骤。然后将退色且蛋白含量为‘ab’%重量的‘aa’ L树脂处理的溶液喷雾干燥,并命名为‘s’ C200HR,其蛋白含量为‘ac’重量% (N×6.25) d.b.。
实施例1和2的参数‘a’-‘ac’示于下表I中:
表I
实施例1 | 实施例2 | 实施例1 | 实施例2 | ||
q | BW-SD076-I24-07A | BW-SD062-A12-06A | o | 57 | 17 |
a | 170 | 98 | p | 98.99 | 102.21 |
b | 1,700 | 1,080 | r | 1,346 | 398 |
c | 0.15 | 0.15 | s | 62.4 | 30.2 |
d | 1,321.5 | 735.8 | t | 5,000 | 5,000/30,000 |
e | 1.55 | 1.50 | u | 240 | 6.22 |
f | 1,280 | 1,020 | v | 8.43 | 30.7 |
g | 1.55 | 1.37 | w | 84 | 22.3 |
h | 1280 | 1,020 | x | 58.1 | 4.40 |
i | 88.35 | 37.5 | y | 5 | 5 |
j | 100,000 | 30,000 | z | 2 | 2 |
k | 19.24 | 14.35 | aa | 58.8 | 25.3 |
l | 30 | 29 | ab | 7.94 | 2.64 |
m | 1:15 | 1:10 | ac | 88.98 | 70.76 |
n | 4 | 4 |
实施例3:
该实施例阐明本发明另一个实施方案的低于90%重量蛋白的新的卡诺拉蛋白产物的生产。
在环境温度下将‘a’ kg卡诺拉粕加入‘b’ L的‘c’ M NaCl溶液中,并搅拌30分钟以提供蛋白水溶液。除去残余卡诺拉粕,并通过离心使所得蛋白溶液部分澄清,以产生‘d’ L部分澄清的蛋白溶液,其蛋白含量为‘e’%重量。然后将部分澄清的蛋白溶液过滤以进一步澄清,得到体积为‘f’的蛋白含量为‘g’%重量的溶液。
通过在分子量分离点为‘j’道尔顿的聚醚砜(PES)膜上浓缩使‘h’ L等分试样蛋白提取物溶液的体积减少为‘i’ L。然后在60℃对渗余物进行巴氏消毒1分钟。所得巴氏消毒的浓缩蛋白溶液的蛋白含量为‘k’%重量。
将‘l’ ℃的浓缩溶液以‘m’稀释到温度为‘n’℃的冷RO水中。白色云状物立刻形成并允许其沉降。除去上层稀释水,通过离心以‘o’重量%过滤蛋白溶液的产率回收沉淀的、粘滞的、粘性的团块(PMM)并喷雾干燥。发现干燥PMM衍生蛋白的蛋白含量为‘p’% (N x 6.25) d.b.。将产品命名为‘q’C300。
然后对上清液进行本文所述等电沉淀步骤。
通过加入氯化钠将‘r’ L上清液调节至电导率为约‘s’ ms。然后通过加入HcL酸化所得溶液至pH为‘t’,这引起7S蛋白沉淀。然后通过离心和过滤酸化的溶液使其澄清以提供‘u’ L具有蛋白含量为‘v’的溶液。然后通过使用分子量分离点为‘w’道尔顿的聚醚砜(PES)膜超滤使澄清蛋白溶液浓缩。然后使用体积为‘x’ L的pH 3的RO水渗滤浓缩的溶液。渗滤的溶液包含以重量计‘y’%的蛋白。加上从上清液回收的另外的蛋白,过滤的蛋白溶液的总蛋白回收率为‘z’重量%。通过使其以‘ac’ BV/hr的速率通过‘ab’ L BV颗粒活性炭,对‘aa’ L等分试样的渗余物进行退色步骤。然后将退色且蛋白含量为‘ae’%重量的‘ad’ L炭处理的溶液研磨过滤(polish filtered)并喷雾干燥,命名为‘q’ C200ISC,其蛋白含量为‘af’重量% (N×6.25) d.b.。实施例3的参数‘a’-‘af’示于下表II中:
表II
实施例3 | 实施例3 | ||
q | BW-SD087-L03-07A | p | 100.41 |
a | 60 | r | 530 |
b | 600 | s | 19 |
c | 0.15 | t | 3 |
d | 492 | u | 525 |
e | 1.65 | v | 0.24 |
f | 446 | w | 10,000 |
g | 1.48 | x | 120 |
h | 452 | y | 5.35 |
i | 27.1 | z | 58.7 |
j | 100,000 | aa | 17.3 |
k | 16.59 | ab | 1.7 |
l | 31 | ac | 2.5 |
m | 1:15 | ad | 18.1 |
n | 3 | ae | 5.10 |
o | 37 | af | 88.62 |
实施例4:
该实施例显示了实施例1、2和3生产的上清液衍生的卡诺拉蛋白产物的pH 3液体样品的颜色和澄清度。
将分别在实施例1、2和3中生产的干燥的卡诺拉蛋白样品BW-SD076-I24-07A、BW-SD062-A12-06A和BW-SD087-L03-07A,与干燥的卡诺拉蛋白分离物样品BW-SD062-A12-06A在其天然pH下制成蛋白含量为3.2 w/v%的水溶液。混合溶液直到完全溶解,然后在HunterLab ColorQuest XE仪器上分析颜色和澄清度。所得结果示于下表III:
表III
如可从表III看出的,当与卡诺拉蛋白分离物比较时,实施例1、实施例2和实施例3生产的产物的颜色和澄清度值非常相似。三种卡诺拉蛋白产物比卡诺拉蛋白分离物有更高的L*值,其表明白的颜色。读出的两种卡诺拉蛋白产物的a*值证明溶液比分离物颜色有较淡红色,同时b*值表明与分离物相比一种溶液黄色稍浓而一种黄色稍淡。所有产物的雾度值非常低,这显示它们当溶解时都非常澄清。
这些颜色和澄清度观察结果可得出结论:在实施例1、2和3中生产的卡诺拉蛋白产物具有低于90重量%的蛋白(Nx6.25) d.b.,与卡诺拉蛋白分离物非常相当且适合用于与卡诺拉蛋白分离物应用相似的食品和饮料应用。
公开的总结
在本公开的总结中,产生的2S-占优的卡诺拉蛋白产物在水溶液中的性质与US 11/038,086和12/213,500中生产的2S-占优的卡诺拉蛋白分离物相当。在本发明的范围内可作出修改。
Claims (32)
1.一种卡诺拉蛋白产物,其基于干重基础(d.b.)具有低于约90重量%(N×6.25)的蛋白含量,并包含至少约85重量%的2S 卡诺拉蛋白和低于约15重量%的7S卡诺拉蛋白的存在于分离物中的卡诺拉蛋白。
2.权利要求1的卡诺拉蛋白产物,其中分离物包含至少约90重量%的2S卡诺拉蛋白和低于约10重量%的7S卡诺拉蛋白的存在于分离物中的卡诺拉蛋白。
3.权利要求1的卡诺拉蛋白产物,其具有至少约60重量%(N×6.25) d.b.的蛋白含量。
4.权利要求1的卡诺拉蛋白产物,其通过热处理卡诺拉蛋白胶束形成所得水性上清液、除去沉淀和干燥残余溶液得到,所述水性上清液为部分浓缩上清液或完全浓缩上清液。
5.权利要求1的卡诺拉蛋白产物,其通过等电沉淀卡诺拉蛋白胶束形成所得水性上清液、除去沉淀和干燥残余溶液得到,所述水性上清液为部分浓缩上清液或完全浓缩上清液。
6.一种制备具有增加的2S卡诺拉蛋白比例的卡诺拉蛋白产物的方法,所述方法包括:
(a)提供主要由2S蛋白组成的2S和7S蛋白的水溶液,
(b)热处理水溶液以引起7S卡诺拉蛋白沉淀,
(c)从水溶液中除去降解的7S蛋白,和
(d)回收具有低于约90%重量%(N×6.25) d.b.的蛋白含量和具有增加的2S卡诺拉蛋白比例的卡诺拉蛋白产物。
7.权利要求6的方法,其中所述热处理步骤在足以使至少约50重量%的存在于所述水溶液中的7S卡诺拉蛋白降解的温度和时间条件下进行。
8.权利要求7的方法,其中所述热处理步骤降解的7S卡诺拉蛋白为至少75%的存在于所述水溶液中的7S卡诺拉蛋白。
9.权利要求6的方法,其中所述热处理步骤通过在温度约75℃至约95℃下加热水溶液约5至约15分钟进行。
10.权利要求6的方法,其中所述2S和7S卡诺拉蛋白的水溶液是卡诺拉蛋白胶束形成和沉淀所得上清液,其为部分浓缩上清液或浓缩上清液。
11.权利要求10的方法,其中所述卡诺拉蛋白胶束形成通过以下步骤进行:
(a)在至少约5℃的温度下提取卡诺拉油粕以引起所述卡诺拉油粕中蛋白的溶解和形成蛋白水溶液,
(b)将所述蛋白水溶液与残余油粕分离,
(c)通过选择性膜技术提高所述蛋白水溶液的浓度为至少约200 g/L,同时保持离于强度基本上恒定,以提供浓缩蛋白溶液,
(d)将所述浓缩蛋白溶液稀释到温度低于约15℃的冷水中以引起蛋白胶束形成,和
(e)将上清液与沉降的蛋白胶束团分离。
12.权利要求11的方法,其中在所述热处理之前将所述上清液浓缩至蛋白浓度为约100至约400 g/L。
13.权利要求12的方法,其中将所述上清液浓缩至蛋白浓度为约200至约300 g/L。
14.权利要求12的方法,其中所述浓缩步骤通过使用具有约3,000至约100,000道尔顿分子量分离点的膜的超滤进行。
15.权利要求14的方法,其中在所述热处理步骤之前对超滤所得上清液进行渗滤。
16.权利要求15的方法,其中所述渗滤步骤使用约2至20体积,优选约5至约10体积水和具有约3,000至约100,000道尔顿分子量分离点的膜进行。
17.权利要求6的方法,其中所述卡诺拉蛋白分离物的蛋白含量为至少约60重量%(N×6.25) d.b.。
18.一种制备具有增加的2S卡诺拉蛋白比例的卡诺拉蛋白产物的方法,所述方法包括:
(a)提供主要由2S蛋白组成的2S和7S蛋白的水溶液,
(b)从水溶液中等电沉淀7S蛋白,
(c)从水溶液中除去沉淀的7S蛋白,和,
(d)回收具有低于约90重量%(N×6.25) d.b.的蛋白含量且与2S和7S蛋白的水溶液相比具有增加的2S卡诺拉蛋白比例的卡诺拉蛋白产物。
19.权利要求18的方法,其中所述等电沉淀是在足以使至少约50重量%的存在于水溶液中的7S卡诺拉蛋白沉淀的pH和盐条件下进行。
20.权利要求19的方法,其中所述等电沉淀是在足以使至少约75重量%的存在于水溶液中的7S卡诺拉蛋白沉淀的pH和盐条件下进行。
21.权利要求18的方法,其中所述等电沉淀通过以下步骤进行:
(i)将水溶液盐化为至少约0.3 mS的电导率,和
(ii)将盐化水溶液的pH调节为约2.0至约4.0的值。
22.权利要求21的方法,其中所述电导率为约10至约20 mS和所述pH为约3.0至约3.5。
23.权利要求18的方法,其中所述2S和7S卡诺拉蛋白的水溶液是卡诺拉蛋白胶束形成和沉淀所得上清液,所述上清液为部分浓缩上清液或浓缩上清液。
24.权利要求23的方法,其中所述卡诺拉蛋白胶束形成通过以下步骤进行:
(a)在至少约5℃的温度下提取卡诺拉油粕以引起所述卡诺拉油粕中蛋白的溶解和形成蛋白水溶液,
(b)将所述蛋白水溶液与残余油粕分离,
(c)通过选择性膜技术提高所述蛋白水溶液的浓度为至少约200 g/L,同时保持离子强度基本上恒定,以提供浓缩蛋白溶液,
(d)将所述浓缩蛋白溶液稀释到温度低于15℃的冷水中以引起蛋白胶束形成,和
(e)将上清液与沉降的蛋白胶束团分离。
25.权利要求24的方法,其中在所述等电沉淀之前将所述上清液浓缩至蛋白浓度为约100至约300 g/L。
26.权利要求25的方法,其中将所述上清液浓缩至蛋白浓度为约200至约300 g/L。
27.权利要求25的方法,其中所述浓缩步骤通过使用至少一种具有约3,000至约100,000道尔顿分子量分离点的膜的超滤进行。
28.权利要求27的方法,其中在所述等电沉淀之前对超滤所得浓缩上清液进行渗滤。
29.权利要求16的方法,其中所述渗滤步骤使用约2至约20体积,优选约5至约10体积水、盐水或酸化水和使用至少一种具有约3,000至约100,000道尔顿分子量分离点的膜进行。
30.权利要求6或18的方法,进一步包括:
(e)将所述卡诺拉蛋白产物配制为水性饮料组合物。
31.一种水溶液,其是权利要求1的卡诺拉蛋白产物的水溶液。
32.权利要求31的水溶液,其是卡诺拉蛋白产物强化饮料。
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