CN101353687A - 具有血管紧张素转移酶抑制活性的蜂花粉肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有血管紧张素转移酶抑制活性的蜂花粉肽及其制备方法，其采用蛋白酶水解浓度为3～15％(W/W)的蜂花粉分离蛋白溶液，水解工艺条件为：pH值为4～12、反应温度30～60℃、加酶量0.5～5％、反应时间60～240分钟，搅拌酶解。酶解结束后溶液经2000Da～5000Da的超滤膜超滤，然后采用离子交换树脂脱盐，再经过凝胶层析分离、冷冻干燥得到具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的蜂花粉肽。本发明提供了一种制备具有血管紧张素转移酶抑制活性的蜂花粉肽的新方法，工艺科学合理，简单易行，获得的产品可加工成降血压各种制剂，具有良好的开发前景。

Description

具有血管紧张素转移酶抑制活性的蜂花粉肽及其制备方法

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及生物制药技术或功能性食品加工技术，特别是制备具有血管紧张素转移酶抑制活性蜂花粉肽的方法。

技术背景

目前，我国高血压患病率已上升到11.88％，患病人数估计已近1亿，每年死于心血管疾病的人数达200万。因此，高血压病已成为一个十分严重的社会公共卫生问题。我国临床常用的抗高血压药主要包括利尿药、肾上腺素受体阻断药等。虽然这些药具有很好的降压效果，但都具有一定的副作用或不良反应。由于来源于食品中的降血压肽具有降血压效果明显且对正常血压无影响、无副作用等优点，已成为目前研究的热点。

血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂是降血压药物中发展最快的一种，ACE在血压调节中扮演重要的角色。降压肽通过抑制血管紧张素I向血管紧张素II转换以及阻止ACE降解缓激肽而起降血压的作用。目前已有多种化学合成肽类药物，抑制ACE活性。这类合成降血压药物作用时间不长，停药后易引起“停药综合症”会使血压反弹，而且，这类药物经肾脏排出易造成肾功能的损伤。引发蛋白尿和白细胞减少等，严重威胁患者的生命安全。

来源于食物蛋白质的降压肽具有食用安全性高、无副作用，可以克服药物治疗中出现的种种副作用，特别是其对高血压患者具有降血压作用，而对血压正常的人无降压作用等优点，近来受到广泛重视。这些肽是经酶在温和条件下水解获得，安全性高，同时它还有免疫调节等其他作用。因此，开发天然降血压肽产品将成为非药物治疗中的重要组成部分。

目前已有研究发现胶原蛋白、酪蛋白等经胰蛋白酶水解后的产物具有ACE抑制活性，并通过高压液相色谱分离、分析了部分有抑制活性的组分。这些研究主要采用单一的胰蛋白酶，选择的原料多为动物蛋白质，且分离方法成本太高，或者肽中灰分含量较高而影响其活性等，不适合大规模生产。

蜂花粉是蜜蜂采集植物的精细胞加上自身腺体分泌物、唾液和蜂蜜混合而形成，是我国一种低附加值的蛋白资源，至今没有有效的开发利用。由于蜂花粉较高的蛋白含量和较低的脂肪含量，因此，蜂花粉是用于酶解的很好的蛋白资源，而且蜂花粉富含具有与降血压肽结构有关的支链氨基酸和芳香族氨基酸，是酶解分离降血压肽的好原料。利用蛋白酶水解蜂花粉蛋白生产具有血管紧张素转移酶抑制活性的肽国内外目前还未见报道。

发明目的

针对现有方法的不足，本发明利用来源广泛的可再生资源蜂花粉为原料，分离提取蜂花粉中的蛋白质，利用多种蛋白酶，如：木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶等，单独或不同组合水解蜂花粉蛋白，水解产物经进一步分离纯化，获得具有血管紧张素转移酶抑制活性的蜂花粉肽。

技术方案

本发明的目的可通过以下技术方案来实现：

将浓度为3～15％的蜂花粉蛋白溶液，用蛋白酶水解，水解的工艺条件为：反应温度30～60℃、加酶量0.5～5％、pH值4～12、反应时间60～240分钟，搅拌酶解。酶解后经2000Da～5000Da的超滤膜超滤，滤液经离子交换树脂脱盐，分离产物再经过SephadexG-15～SephadexG-25凝胶层析分离获得具有血管紧张素转移酶抑制活性的蜂花粉肽，经冷冻干燥即成干粉，可制成各种制剂。

本发明所具有的优点是：

1.提供了一种制备具有血管紧张素转移酶抑制活性的蜂花粉肽的新方法。本发明制品具有生物学功能，对血管紧张素转移酶(ACE)具有极强的抑制活性。同其他生物活性肽一样，具有直接、快速、主动、完整吸收的特点。特别是对高血压等心血管疾病有疗效。本发明的制成品可作为保健食品、食品、食品添加剂、药物增效剂、药品配方等，是一种适宜于工业化生产的方法。

2.工艺科学合理、简单易行。本发明工艺包括3个主要步骤，即：蜂花粉分离蛋白的提取→蛋白质的酶解→层析分离，方法简单、有效。

3.原料来源广泛。本发明所选择的蜂花粉原料来源广泛，资源丰富，使本发明具有较强的实用性。

实施例1

将分离得到的蜂花粉蛋白配置成浓度为5％蜂花粉蛋白溶液，调节pH值为9.0，加入碱性蛋白酶(终浓度为5％)。37℃水解180分钟后，水解产物经3000Da的超滤膜超滤，Sephadex G-15凝胶层析分离后得到十个组分。测定各组分在0.5mg/mL时对ACE的抑制率，结果列于表1。得到的组分中，除组分1的抑制率为零外，其余各组分对ACE均具有抑制作用，其中组分6～8的抑制作用较强。

实施例2

将分离得到的蜂花粉蛋白配置成浓度为5％蜂花粉蛋白溶液，调节pH值为7.0，加入中性蛋白酶(终浓度为5％)。37℃水解210分钟后，水解产物经3000Da的超滤膜超滤，Sephadex G-15凝胶层析分离后得到十个组分，测定各组分对ACE的抑制率，结果列于表1。得到的组分中，除组分1的抑制率为零外，其余各组分对ACE均具有抑制作用，其中组分8的抑制作用最强。

将上述获得的各活性组分冷冻干燥，得到具有血管紧张素转移酶抑制活性蜂花粉肽，各活性组分可单独或不同比例混合制成降血压制品。

Claims (4)

1.一种用蜂花粉分离蛋白制备具有血管紧张素转移酶抑制活性的蜂花粉肽的方法，其特征在于：将蛋白质浓度为3～15％(W/W)的蜂花粉分离蛋白溶液，用蛋白酶水解，水解工艺条件为：pH值4～12、反应温度30～60℃、加酶量0.5～5％、反应时间60～240分钟，搅拌酶解。酶解结束后经2000Da～5000Da的超滤膜超滤，再经离子交换树脂脱盐、凝胶层析，分离出具有血管紧张素转移酶抑制活性的蜂花粉肽。

2.根据权利要求1所述的具有血管紧张素转移酶抑制活性蜂花粉肽的方法，其特征在于：所采用的蛋白酶包括瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶等。

3.根据权利要求1所述的制备具有血管紧张素转移酶抑制活性蜂花粉肽的方法，其特征在于：分离出的蜂花粉多肽经冷冻干燥，进一步制成各种制剂。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述蜂花粉可以是商用或非商用蜂花粉的任意品种。