CN101327220A - 三七皂苷r1在制备治疗肝损伤的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及三七皂苷R1在制备治疗肝损伤的药物中的应用，特别涉及三七皂苷R1用于治疗和/或预防肝损伤。

Description

三七皂苷R1在制备治疗肝损伤的药物中的应用
技术领域：
本发明涉及中药三七的有效成分三七皂苷R1的新的药物用途，特别涉及三七皂苷R1用于治疗和/或预防肝损伤。
背景技术：
中药三七为五加科植物三七(Araliaceae，三七)的干燥根，在中国、韩国、日本及其它亚洲国家广泛用于治疗微循环障碍相关疾病，如心血管疾病、脑血管疾病和肝功能障碍等。三七含有30多种不同类型的皂苷类化合物，其中人参皂苷Rg1(Rg1)，人参皂苷Rb1(Rb1)和三七皂苷R1(R1)较为常见。研究已经证实，三七中的皂苷类化合物(PNS)可以改善缺血-再灌注诱导的肝脏微循环障碍，抑制血小板凝集和血小板粘附分子表达，以及改善血管上皮功能。另有研究报道，三七中的皂苷类化合物可以抑制大鼠白细胞与肠系膜微静脉的粘附，脂多糖(LPS)诱导的嗜中性粒细胞粘附分子CD11b和CD18表达。R1可以抑制抑制蛋白κB(I-κB)降解，从而抑制脂多糖诱导的血管上皮细胞肿瘤坏死因子-α表达。R1是三七主要活性成份，R1的结构如下：
肝损伤是一种常见病，肝炎病毒、肝硬化，滥用药物，嗜酒，化学毒物接触是导致肝损伤的主要原因。
肝脏是人体的“生命塔”，人体的各种代谢和解毒、免疫功能都靠肝脏承担。任何影响肝细胞、肝内血流都会损伤肝组织。
病毒感染、肝硬化引起的肝脏损伤，主要通过人体的免疫应答造成肝细胞损伤，感染人体后可刺激机体产生一系列抗体和细胞免疫反应，免疫反应不足以清除病毒，病毒可持续存在，造成肝细胞损伤，进而引起肝硬化，损伤加剧。
药物肝损伤是因为：药物代谢产物形成氧自由基使脂质过氧化、药物代谢产生亲电子产物、药物代谢产生超氧化离子，导致肝细胞损伤。
酒精性肝损伤影响肝脏供血状况，增加肝脏负担，导致酒精性肝炎、脂肪肝，直至肝硬化。
化学性肝损伤因毒物破坏肝细胞，肝功呈能异常表现。
缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury)是指缺血组织或器官重获血流灌注或氧供后对组织和器官所产生的损伤作用，肝脏缺血再灌注损伤(hepaticischemia reperfusion injury，HIRI)可使肝代谢解毒能力降低、微循环阻力升高，严重者可导致肝功能衰竭，在肝移植则表现为移植物原发性无功能(primarynonfunction，PNF)，PNF是肝移植的主要死亡原因之一。
缺血-再灌注(I/R)在很多情况都会发生，例如发生创伤、血管收缩后返流、血管成形术(PTCA)、溶栓治疗、器官移植和复苏型低血容量性休克。缺血-再灌注可以导致微循环多处损伤，常伴有上皮细胞损伤、粒性白细胞粘附增强、大分子外流，氧自由基产生和肥大细胞脱颗粒作用，根据肝脏缺血再灌注的损伤机制可以采取诸多的预防和治疗方法，被动防御可在术中、术前和术后用药以及在保存液中加入药物或活性物质，抗氧自由基药物如别嘌呤、谷胱甘肽、Ca2+拮抗剂等已应用于临床，国内学者在保存液中合理加入中药制剂也收到不错的效果。
本发明经过实验发现三七皂甙R1可以改善肠缺血-再灌注诱导的肝脏微循环障碍，从而治疗和/或预防肝损伤，为此本发明提供一种中药药物制剂。
发明内容：
本发明提供一种三七皂甙R1新的治疗用途。所述新的治疗用途，是用三七皂甙R1治疗和/或预防肝损伤，特别是再灌注肝损伤。
为此，本发明提供一种药物新用途，即用三七皂甙R1制备一种治疗和/或预防肝损伤的药物。
本发明所述肝损伤选自病毒感染、肝硬化引起的肝脏损伤，药物肝损伤，酒精性肝损伤，化学性肝损伤，缺血再灌注引起的肝损伤。
本发明所述治疗和/或预防肝损伤是通过降低微静脉直径，红细胞流速和灌注的窦状隙数量，以及增加白细胞滚动和粘附实现的。
本发明所述三七皂甙R1，是中药三七中的一种成分，可以从市场上买到，(如：南京青泽医药科技开发有限公司，上海康九化工有限公司有生产)，也可以根据现有技术制备(如中国专利01136697.4从三七生粉提取分离三七皂甙R1、人参皂甙Re、三七素的方法)，符合药用标准即可，优选纯度＞50％，更优选纯度＞90％，最优选纯度＞98％。
本发明所述的药物，是用上述三七皂甙R1作为药物活性成分制备成的药物制剂组合物。
本发明的药物制剂组合物，根据需要可以含有药物可接受的载体，其中三七皂甙R1作为药物活性成分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。本发明的药物制剂组合物，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋，注射剂的每支等。
本发明的药物制剂组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。
本发明的药物制剂组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。
适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。
口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。
对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。
本发明的药物制剂组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明优选注射剂，所述注射剂，是溶液剂或冻干粉针剂。
本发明的药物制剂组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量。
本发明所述的治疗用途是通过以下实验证明的：
材料和方法
三七皂苷R1和实验用药
三七皂甙R1(简称R1，纯度＞98％)由天津天士力集团(天津，中国)提供。试验中使用的其它试药包括：罗丹明6G(纯度＞99.0％，批号：2350994，Fluka公司，瑞士)；FITC-大鼠抗-小鼠CD18单克隆抗体(批号：553293，BD生物科学系统，美国)；FITC-大鼠抗-小鼠CD11b单克隆抗体(批号：557396，BD生物科学系统，美国)；山羊抗小鼠E-选择蛋白(M-20)多克隆抗体(sc-6939，SantaCruz Biotechnology，Inc。美国)；山羊抗小鼠细胞间粘附分子-1(M-19)多克隆抗体(sc-1511，Santa Cruz Biotechnology，Inc。美国)；罗丹明结合家兔抗-山羊1gG-R(批号：B1006，Santa Cruz Biotechnology，Inc。美国)；Hoechst 33342(批号：6538，Santa Cruz Biotechnology，Inc。美国)；小鼠MCP-1flex set(批号：558342，BD生物科学系统，美国)；小鼠TNF flex set(批号：558299，BD生物科学系统，美国)；小鼠IL-6flexset(批号：558301，BD生物科学系统，美国)。
实验动物
C57/BL小鼠购自北京大学医学部实验动物中心，体重22-26g，年龄8-10周，实验动物证书号SCXK 2002-2001。实验动物饲养在温度24±1℃，湿度50±5％，12小时光暗循环周期环境中，试验前禁食12小时，可以自由饮水。遵循北京大学实验动物管理委员会指南处理所有实验动物。
活体显微镜检查
按照Yoshinori Horie所述方法，用20％乌拉坦(10ml/kg体重)将C57/BL小鼠麻醉。将套管插入左颈静脉，用直径为0.96mm的PE管灌注研究药物。剖腹后立即将小鼠以侧卧位放置在观察台上。将肝脏放置在可调节Plexiglas显微镜载物台上的温控(37℃)观察盒中，小心处理降低呼吸运动的影响。使用倒置生物显微镜(DM-IRB，Leica，德国)，通过3CCD彩色摄像机(JK-TU53H，3CCD Camera，日本东芝公司，日本)观察肝脏左侧叶。选择包括终末门微静脉和中央静脉的400μm×320μm而不含粘附粒性白细胞的区域进行观察。经a×20物镜观测肝脏表面微循环图像，使用DVD存储器(DVR-R25，Malata，中国)将肝脏微循环动力学保存在DVD光盘中。在整个观测过程中，使用37℃生理盐水滴至肝脏表面保持肝脏水分，肝脏表面的观察区域周围覆盖生理盐水浸湿的棉纱布。
缺血-再灌注操作步骤
结扎肠系膜上动脉(SMA)前10分钟，观察肝脏表面确保所有测量参数处于稳定状态。用由聚乙烯管(1.00mm)圈套结扎肠系膜上动脉15分钟。缺血后，轻轻释放结扎，进行再灌注。局部缺血(基线)前立即测量微静脉直径、红细胞流速、窦状隙再灌注和白细胞滚动和粘附，再灌注后半小时内每15分钟观察一次上述指标。
试验方案
缺血-再灌注前10分钟至观察结束，缺血-再灌注组小鼠经左颈静脉连续灌注溶媒生理盐水溶液。缺血-再灌注前10分钟至观察结束，R1+缺血-再灌注组小鼠连续灌注R1(10mg/kg/h)。模拟手术对照组小鼠按照与缺血-再灌注组相同的方式处理，但不结扎肠系膜上动脉。每组分别有6只小鼠(3只雄性，3只雌性)。
微循环参数测量
使用图像-Pro Plus 5.0软件重新播放DVD图像，测量终末门微静脉和中央静脉直径。结果以第15分钟或30分钟的测量数值与基础值的比值表示。
为了获得窦状隙灌注，重新播放DVD时，记录肝脏窦状隙数量，肝脏终末门微静脉和中央静脉RBC流动，表示成灌注的肝脏窦状隙/视野(250μm×300μm)。结果表示成第15分钟或30分钟测量数值与基础值的比值。
通过CCD将监控器调至高速摄像系统(FAST CAM-ultima APX，photon，日本)，以1000帧/秒的速度记录肝脏终末门微静脉和中央静脉中的红细胞流速，将高速保存图像以25帧/秒的速度重新播放。使用图像-Pro Plus 5.0软件测量红细胞流速。速度以μm/秒表示。结果表示成第15分钟或30分钟测量数值与基础值的比值。
为了评价白细胞滚动和粘附，经左颈静脉给予0.2ml荧光标记剂罗丹明6G(生理盐水中的浓度为0.5mg/ml)，有选择地将体内白细胞染色。使用倒置共聚焦激光扫描显微镜系统(BIO-RAD，Radiance 2100，Axiovert 200，CarlZeissShanghai Co，Ltd，德国)，20×荧光物镜，氩激光束照射(波长＝543nm)，记录肝脏终末门微静脉和中央静脉中的粒性白细胞滚动和粘附。以1帧/秒速度扫描，每个时间点共记录10个连续帧，10个连续帧扫描过程中出现在同一位置的粒性白细胞即为粘附的粒性白细胞是指。肝脏终末门微静脉和中央静脉中粘附的粒性白细胞以每200μm中粒性白细胞的数量表示，而肝脏窦状隙中粘附的粒性白细胞以每200μm2视野观测到的粒性白细胞数量表示。在肝脏终末门微静脉和中央静脉停留10秒以下的粒性白细胞为滚动粒性白细胞，以每200μm的数量表示。
肝脏上皮细胞粘附分子E-选择蛋白和细胞间粘附分子-1免疫荧光染色分析再灌注后30分钟后，灌注4％低聚甲醛将肝脏固定，将肝脏取出，用液氮冷冻，然后使用恒冷切片机将其切成6μm切片(LEICA CM1800，Leica Co.，德国)。在室温条件下，再次用4％低聚甲醛固定切片10分钟，最后用磷酸盐缓冲溶液冲洗。然后样品进行常规用免疫组织化学染色。山羊抗小鼠E-选择蛋白多克隆抗体或山羊小鼠细胞间粘附分子-1多克隆抗体抗稀释备用(稀释倍数1∶50)。加入第二抗体(罗丹明标记的家兔抗山羊IgG(稀释倍数1∶200))，在37℃培育30分钟，然后用磷酸盐缓冲溶液冲洗，在室温条件下用Hoechst 33342(2μg/ml)培育3分钟。磷酸盐缓冲溶液冲洗后，将样本密封，在共聚焦激光扫描显微镜的63×物镜下观察。测量荧光强度，罗丹明的激发波长为543nm，Hoechst(核染剂)的为405nm。评价肝脏微静脉的五个视野(ach200μm2)。使用图像Pro Plus软件评价E-选择蛋白或细胞间粘附分子-1的荧光强度，计算平均值，结果以荧光强度/200μm2表示。
外周嗜中性粒细胞表面粘附分子CD11b和CD18表达评价
再灌注30分钟后，经下腔静脉采集血样，加肝脏素(20unit/ml全血)抗凝。样本加1μgFITC-标记抗CD18或CD11b抗体，在室温黑暗处培育20分钟。加溶血素将RBCs溶解，用磷酸盐缓冲溶液洗涤样品两次。使用流式细胞计量术(FACSCalibur，B.D.Co，美国)测量每种条件下5000个嗜中性粒细胞表面CD11b或CD18的平均荧光强度。
外周血液肝脏酶鉴定
取再灌注30分钟和60分钟后的部分小鼠，自下腔静脉抽取血样，加肝脏素(20unit/ml全血)抗凝。离心分离血清(AllegraTM64R离心机，BeckmanCoultertm，德国)，转速为4000转/分钟，在4℃放置10分钟，然后贮藏在-20℃环境中。遵循生产厂家使用说明，用自动酶分析仪(7170A自动分析仪，Hitachi，日本)，分别使用Rate-A乳酸脱氢酶试剂盒、丙氨酸氨基转移酶试剂盒和天冬氨酸转氨酶试剂盒测量LDH、ALT和AST的活性。
外周血液肿瘤坏死因子-α、IL-6和MCP-1含量测量
再灌注第30分钟，自下腔静脉采集血样，加肝脏素(20unit/ml全血)抗凝。
离心分离血清(AllegraTM64R离心机，Beckman Coultertm，德国)，转速为4000转/分钟，在4℃放置10分钟，然后贮藏在-20℃环境条件下。使用流式细胞计量术，用BD Cytometric Bead Array试剂盒(BD生物科学系统，美国)测量肿瘤坏死因子-α、IL-6和MCP-1的浓度[35]。将50μl液滴加入50μl血浆或标准物质中，在室温黑暗处培育1小时。然后加入50μlPE标记检测抗体，在室温条件下培育2小时，形成一个夹心配合物。培育后，用1ml清洗缓冲液(BD生物科学系统，美国)将样品清洗干净。使用流式细胞计量术(FACS Calibur，B.D.Co.，美国)测量肿瘤坏死因子-α，IL-6和MCP-1的平均荧光强度，使用BD CytometricBead Array分析软件分析数据。
统计分析
数值以平均±S.E(N＝6)表示，使用SPSS10.0统计软件进行F-检验。P＜0.05认为有统计显著性。
结果
R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠的肝脏终末门微静脉和中央静脉直径的干预作用见图2。在整个观察期中，对照组小鼠的终末门微静脉和中央静脉的直径几乎保持不变。肠系膜上动脉缺血-再灌注后血管径发生时间依赖性降低，给予R1后肠系膜上动脉缺血-再灌注导致的血管径降低得到显著减弱。
图3显示R1对小鼠肠系膜上动脉缺血-再灌注后肝脏终末门微静脉和中央静脉红细胞流速的影响。显然，在整个观察期，对照组两种类型血管的红细胞流速没有出现显著变化。肠系膜上动脉缺血-再灌注后血管红细胞流速以时间依赖形式显著降低。缺血-再灌注组比较，R1处理减弱再灌注后两种类型血管第30分钟时肠系膜上动脉缺血-再灌注后红细胞流速降低，终末门微静脉较为显著(见图3A)。R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注后肝脏终末门微静脉和中央静脉区域再灌注窦状隙数量的干预作用如图4所示。对照组中终末门微静脉区域或中央静脉区域的再灌注窦状隙数量没有出现显著变化。肠系膜上动脉缺血-再灌注后的再灌注窦状隙数量出现时间依赖性降低，与对照组比较，中央静脉区域再灌注第15分钟和终末门微静脉区域再灌注30分钟出现统计显著性。R1处理后，缺血-再灌注后出现的中央静脉区域再灌注窦状隙数量降低显著减弱(见图4B)。
R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注后小鼠肝脏终末门微静脉和中央静脉中的滚动白细胞数量的干预作用见图5。尽管可以在整个观察期内可以观测到对照组出现少量滚动粒性白细胞，但是与对照组比较缺血-再灌注后终末门微静脉和中央静脉中滚动粒性白细胞的数量显著增加。R1处理可以降低缺血-再灌注诱导的滚动白细胞增加量，这种减弱作用对中央静脉(见图5B)有统计显著性。
图6示肠系膜上动脉缺血-再灌注30分钟后中央静脉区微循环的典型图像。可以观测到一些粒性白细胞粘附在中央静脉和窦状隙。图7显示R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注诱导的粒性白细胞粘附的干预作用。肠系膜上动脉缺血-再灌注极大地增加了肝脏终末门微静脉和中央静脉区的粒性白细胞粘附数量，R1处理可以降低缺血-再灌注后的增加数量，终末门微静脉出现显著降低(见图7A)。
本研究测量R1对肝脏终末门微静脉和中央静脉窦状隙白细胞粘附的干预作用。结果见图8。对于肝脏终末门微静脉和中央静脉，对照组终末门微静脉区域或中央静脉区域窦状隙中只能观测到少量粘附的粒性白细胞。观察到肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠两个区域窦状隙中的粘附粒性白细胞数量显著增加，R1处理进行再灌注15分钟后，可以显著抑制增加的数量(见图8，A和B)。
本研究评价了R1对再灌注后30分钟小鼠肝脏血管E-选择蛋白和细胞间粘附分子-1表达的影响，结果见图9。可以看出再灌注30分钟后E-选择蛋白表达出现显著增强，而对细胞间粘附分子-1表达没有任何影响。使用R1处理后，肠系膜上动脉缺血-再灌注后出现的E-选择蛋白表达增强完全消失。
再灌注30分钟后，采集血样，用于评价R1对小鼠外周嗜中性粒细胞粘附分子CD18和CD11b表达的干预作用。如图10所示，与对照比较，再灌注30分钟后，CD18和CD11b表达显著增强。R1处理显著降低缺血-再灌注诱导的CD18平均荧光强度的增加量。
总之，本研究表明，R1处理可以很好地降低肠系膜上动脉缺血-再灌注诱导的肝脏微循环障碍，包括降低微静脉直径，红细胞流速和灌注的窦状隙数量，以及增加白细胞滚动和粘附。R1对微循环障碍的改善作用是基于对缺血-再灌注诱导的肝脏损伤的保护作用。
附图说明：
附图
图1三七皂苷(R1)的化学结构
图2R1处理对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠肝脏微静脉直径的干预作用，检测时间为缺血(基础值)前第0分钟，再灌注后第15和30分钟。A，终末门微静脉直径。B，中央微静脉直径。横坐标代表在任意时间点直径数值与基础值的比值。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。
图3R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠肝脏微静脉红细胞流速的干预作用，检测时间点为缺血(基础值)前第0分钟，再灌注后第15和30分钟。A，终末门微静脉中的红细胞流速。B，中央静脉中的红细胞流速。横坐标代表任意时间点红细胞流速值与基础值的比值。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。
图4R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠灌注肝脏窦状隙的干预作用，检测时间点为缺血(基础值)前第0分钟，再灌注后第15分钟，30分钟。A，终末门微静脉区灌注的窦状隙。B，中央静脉区域灌注的窦状隙。横坐标代表任意时间点灌注的窦状隙与基础值的比值。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。
图5R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠肝脏微静脉白细胞滚动的干预作用，检测时间点为缺血(基础值)前第0分钟，再灌注后第15分钟，30分钟。A，终末门微静脉中的滚动粒性白细胞。B，中央静脉中的滚动粒性白细胞。横坐标代表每200μm中的滚动粒性白细胞数量。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。
图6肠系膜上动脉缺血-再灌注30分钟后，小鼠肝脏微静脉罗丹明-标记粒性白细胞的典型图像。观察中央静脉和肝脏窦状隙粒性白细胞的粘附数量。CV：中央静脉。S：窦状隙。箭头表示粘附的粒性白细胞。放大倍数：20×。
图7R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠肝脏微静脉白细胞粘附的干预作用，检测时间点为缺血(基础值)前第0分钟，再灌注后第15分钟，30分钟。A，终末门微静脉粘附的粒性白细胞。B，中央静脉粘附的粒性白细胞。横坐标代表每200μm粘附粒性白细胞的数量。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。
图8R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠肝脏窦状隙白细胞粘附的干预作用，检测时间点为缺血(基础值)前第0分钟，再灌注后第15分钟，30分钟。A，终末门微静脉区粘附的粒性白细胞。B，中央静脉区粘附的粒性白细胞。横坐标代表每200μm2视野粘附粒性白细胞的数量。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。
图9R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠肝脏血管E-选择蛋白和细胞间粘附分子-1表达的干预作用。再灌注30分钟后，对肝脏组织进行免疫荧光染色。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。
图10R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠t嗜中性粒细胞表面CD18和CD11b表达的干预作用。再灌注30分钟后，分离嗜中性粒细胞，进行流式细胞计量术检查。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。
图11R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠血清中LDH、ALT和AST浓度的干预作用。再灌注30分钟和60分钟后，分离血清进行酶测定。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。图12R1对肠系膜上动脉缺血-再灌注小鼠血清中的肿瘤坏死因子-α、IL-6和MCP-1浓度的干预作用。再灌注30分钟后，分离血清，进行流式细胞计量术检查。结果为6只实验动物的平均±SE值。与对照组比较aP＜0.05，与缺血-再灌注组比较cP＜0.05。
具体实施方式：
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1
片剂
【处方】三七皂苷R1100g    微晶纤维素50g    微粉硅胶3g硬脂酸镁1.5g
【制法】取原、辅料分别过100目筛；取三七皂苷、硫酸钙、微晶纤维素，混匀，用60％乙醇适量作为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入微粉硅胶及硬脂酸镁，混匀，压片，制成1000片，即得。
实施例2
【处方】三七皂苷R175g    硫酸钙112g    微晶纤维素37g微粉硅胶2.3g    硬脂酸镁1.1g
【制法】取原、辅料分别过100目筛；取三七皂苷、硫酸钙、微晶纤维素，混匀，用60％乙醇适量作为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量微粉硅胶及硬脂酸镁，混匀，压片，制成1000片，即得。
实施例3
【处方】三七皂苷R1133g    硫酸钙200g    微晶纤维素66g微粉硅胶4g    硬脂酸镁2g
【制法】取原、辅料分别过100目筛；取三七皂苷、硫酸钙、微晶纤维素，混匀，用60％乙醇适量作为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量微粉硅胶及硬脂酸镁，混匀，压片，制成1000片，即得。
实施例4
胶囊
取三七皂甙R150g，加入适量淀粉，硬脂酸镁等辅料，制粒，整粒，装入1号胶囊，即得。
实施例5
口服液
取三七皂甙R15g，加入适量蔗糖，防腐剂，加水到1000ml，分装成10ml一支，即得口服液。
实施例6
颗粒剂
取三七皂甙R150g，加入适量糊精、甜菊素，干式制粒，整粒，分装，即得。
实施例7
注射剂
三七皂甙R15g加水溶解，另氯化钠、对羟基苯甲酸乙酯加热水溶解，混匀，调pH值。注射用水稀释至1000ml，用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，即得。
实施例8
注射剂
三七皂甙R11g加水溶解，另氯化钠、对羟基苯甲酸乙酯加热水溶解，混匀，调pH值。注射用水稀释至1000ml，用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，即得。

Claims (10)

1、三七皂苷R1或其药物组合物在制备一种治疗和/或预防肝损伤的药物中的应用。
2、权利要求1的应用，所述肝损伤选自病毒感染、肝硬化引起的肝脏损伤，药物肝损伤，酒精性肝损伤，化学性肝损伤，缺血再灌注引起的肝损伤。
3、权利要求1的应用，所述肝损伤是缺血再灌注引起的肝损伤。
4、权利要求1的应用，所述治疗和/或预防肝损伤是通过降低微静脉直径，红细胞流速和灌注的窦状隙数量，以及增加白细胞滚动和粘附实现的。
5、权利要求1的应用，所述三七皂苷R1是从中药三七中提取获得的，纯度＞50％。
6、权利要求1的应用，所述三七皂苷R1是从中药三七中提取获得的，纯度＞90％。
7、权利要求1的应用，所述三七皂苷R1是从中药三七中提取获得的，纯度＞98％。
8、权利要求1的应用，所述药物组合物为任何可药用的制剂形式
9、权利要求1的应用，所述药物组合物为注射剂。
10、权利要求9的应用，所述注射剂，是溶液剂或冻干粉针剂。
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