CN101327207A - 一种药物组合物及其治疗冠心病的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药用组合物，包含重量比为20～24∶7～4∶1.5～0.5的羟基红花黄色素A、丹参素和阿魏酸。发明人通过实验发现传统冠心病药“冠心II号”抗心肌细胞凋亡的有效成分是丹参素、羟基红花黄色素A、阿魏酸三个成分(FTA)，而不是吸收进入人体的五个成分。冠心II号大剂量诱导的疗效是由吸收入体内的FTA引起的。因此，发明人用该三个活性成分(FTA)制备出新的治疗冠心病的抗心肌细胞凋亡的药物组合物，该药物用药剂量小，疗效更加稳定，生产成本低。

Description

一种药物组合物及其治疗冠心病的用途

技术领域

本发明涉及一种用于治疗冠心病的药物组合物。

背景技术

冠心II号是临床上治疗冠心病的经典名方，它由丹参、川芎、红花、赤芍和降香按2∶1∶1∶1∶1的重量比的生药组成，其中丹参和川芎作为君药，红花和赤芍作为臣药，具有行气活血化瘀的功效。已有大量的文献表明冠心II号可增加冠脉血流量、缓解心绞痛、改善s-t段、调节血脂、降低内皮素、降低血粘度均等有良好疗效。但长期以来人们并不清楚冠心II号这一中药复方的有效成分，即药效物质并不清楚，类似研究结果也未见报道。

发明内容

本发明的目的在于研究得到冠心II号的有效成分，并由此制备出一种包含冠心II号有效成分组成的药物组合物。该混合物相比冠心II号对冠心病的用药剂量小，疗效更加稳定，生产成本低。

发明人利用HPLC-MS-MS法发现冠心II号吸收入人体内的成分为阿魏酸、丹参素、红花黄色素、芍药苷、原儿茶醛/酸，其中原儿茶酸为原儿茶醛的代谢产物；在冠心II号药代动力学指引下，发现其中的阿魏酸(ferulic acid)、丹参素(tanshinol)、羟基红花黄色素A(hydroxylsafflor yellow A)的混合物(FTA)与冠心II号在增加心肌血流量、抗心肌缺血、抗心肌细胞凋亡与减少心梗面积等方面的疗效有高度的一致性。

实验结果表明：冠心II号低剂量(人1.5g/kg/天，大鼠5g/kg/天)一次给药，并不增加心肌血流量，对小鼠心肌凋亡和心肌梗塞也无效，但连续15天给药，在造模前灌胃给药(ig)，则与FTA具有同样抗心肌梗塞疗效。这表明在冠脉微血管失常和心肌细胞凋亡的靶向下，大剂量组冠心II号和FTA的药效一致，冠心II号大剂量诱导的疗效是由吸收入体内的FTA引起的。

本发明的技术方案为：一种用于冠心病治疗的药用组合物，包含重量比为20～24∶7～4∶1.5～0.5的羟基红花黄色素A、丹参素和阿魏酸，三种组分的化学结构式分别如下：

可以采用现有药物制剂领域中的常规方法，以上述配比的三种化合物作为有效成分，加上常规药物载体，制备成任何临床药学可接受形式的各种药用制剂，如包括静脉用药的多种剂型。

与现有的“冠心II号”相比，本发明仅包含三种有相互协同作用原有效成分，其中阿魏酸具有抗氧化、保护心肌、降低胆固醇、预防血栓和动脉粥样硬化、抑制平滑肌细胞增殖和保护心肌的作用；丹参素能扩张冠状动脉，减少胆固醇的合成；红花黄色素能降低心肌梗塞(MI)面积，增加冠脉血流量(CF)等作用。但实验研究表明，三种成分按在母方“冠心II号”中的含量，单独使用时均有效但不明显，而联合用药则有明显疗效。阿魏酸、丹参素、羟基红花黄色素A三成分的混合物(FTA)在心梗前给药，可通过减少心梗面积发挥心脏保护作用，其机理涉及抑制心肌细胞调亡和caspase-3活性。本发明由传统中药复方中的有效成分分析得到，对冠心病疗效肯定，且较母方“冠心II号”有如下优势：用药剂量很小、副作用少、原材料浪费小，生产成本低；便于进行质量控制、药物动力学研究及治疗药物监测等；疗效稳定、可重复性强；可避免中药材的农药、重金属等污染及其产地、气候等对品质的影响，易于被国际医药界接受。

具体实施方式

采用现有药物制剂领域中的常规方法，以羟基红花黄色素A、丹参素和阿魏酸三种化合物作为有效成分，加上常规药物载体，制备成任何临床药学可接受形式的各种药用制剂。

实施例1：制备FTA药物组合物的水制剂

将羟基红花黄色素A、丹参素和阿魏酸按重量比22∶5.54∶1的比例混合，加入蒸馏水溶解，得到最终总浓度为150mg/ml的水溶液。

实施例2：FTA的疗效学实验

210～240g SD大鼠被分成10组，每组7只：1)假手术组(大鼠没有结扎冠脉)；2)空白组(0.9％生理盐水组)；3)冠心II号组；4)合用五种单体成分(阿魏酸、丹参素、羟基红花黄色素A、芍药苷、原儿茶醛)组；5)FTA(阿魏酸、丹参素、羟基红花黄色素A)组；6)阿魏酸组；7)丹参素组；8)羟基红花黄色素A组；9)芍药苷组；10)原儿茶醛组。

3％戊巴比妥钠(1.5ml/kg体重)腹腔内注射麻醉，气管切开并插管，连接于小型动物呼吸机，调节呼吸频率为70次/分，潮气量8ml/min，吸呼比1∶2，开胸暴露心脏，用小圆针穿3/0号丝线，在冠状静脉走行处平左心耳间下缘1～2MM浅层心肌进行缝线，结扎造成冠状动脉阻塞，心电图ST段明显抬高和/或T波高耸作为冠状动脉结扎成功的标志。手术前30分钟给药或生理盐水灌胃。生理盐水灌胃剂量是1.5ml/100g体重，单体、混合给药的剂量为30g/kg体重，冠心II号中五种单体成分的剂量一致。

所有计数资料均采用均数士标准差表示，使用统计软件SPSS10.0进行统计分析，以one-way ANOVA方法进行总体比较，q检验做组间比较，以P＜0.05为有统计学显著性差异。

(1)心梗面积的测定和药物在改善心梗面积上的疗效观察

取大鼠心梗24小时后的心脏，将伊文思蓝染料1ml注射入主动脉根部，在正常灌注区域是蓝色，蓝色区域以外的地方就是风险区域。将左心室横向切片。缺血区与病变区分开后，用1％的三苯基氯化物溶液(TTC)孵化15分钟，去从病变非坏死区(红色)中区分出坏死区(白色)。这样，计算病变区Ar在左心室的百分比(Ar/LV)，以及坏死面积(An)在病变区Ar的百分比(An/Ar)。

实验结果显示：五种成分单独使用的时候，只有丹参素、羟基红花黄色素A、阿魏酸三个成分对心梗产生轻微的改善作用；合用吸收的五个成分、FTA和冠心II号在改善心梗面积上均有相同的效果。

(2)TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数

将心肌缺血区组织常规切片，放在二甲苯中脱腊，酒精中依次水化，蒸馏水放摇床上冲洗后放入37℃烤箱中15min。将蛋白酶K(20μg/ml)覆盖在组织上，放入37℃烤箱中30min。加入PBS液放摇床上冲洗，在封闭液(20％小牛血清+5％奶粉)中封闭2h，加入PBS液放摇床上冲洗，将配好的凋亡试剂(1号液∶2号液＝1∶10)覆盖在组织上(每张片至少15μL)，放入37℃烤箱中90min，PBS液放摇床上避光冲洗。用染色剂DAPI覆盖组织(每张片10μL左右)避光静置2min，用PBS液冲洗2min，加甘油后封片，在荧光显微镜下拍片观察。然后计算凋亡指数(Apoptosis Index，AI)，AI＝凋亡细胞数/细胞总数×100％。

实验结果显示：心肌细胞凋亡在假手术组是相当低的，但是在心梗模型中，心肌细胞凋亡是很明显的。而口服冠心II号、合用吸收的五个成分、FTA组的心肌细胞凋亡率只有31.31～38.83％。

(3)检测凋亡相关蛋白caspase3表达

用CHEMICON试剂盒用比色法测定凋亡相关蛋白caspase3活性。测定caspase-3的活性的原理是：检测从标记的底物DEVD-pNA上分裂出来的p-硝基苯胺色基。将心肌组织(约25mg)在冰上用剪刀剪碎，加入稀释好的1X溶解缓冲液400μl用电动匀浆机进行研磨，并上孵育10分钟。4℃下10000G离心5min后轻轻取出，避免振荡。上层清液用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度。用板式酶标仪在595nm下读取数据，带入蛋白质浓度标准曲线算出样本蛋白质浓度。根据公式计算出下一步实验所需组织液量和蒸馏水的量。在96孔板中按上一步得出的数据加入组织液，蒸馏水使总体积70ul，另外再分别加入5×assay buffer(20μl)、Caspase-3底物(10μl)，37℃烤箱中烤90min，再用板式酶标仪在405nm读取数据。

caspase-3活性在心梗模型给予生理盐水组中，活性明显很高。口服冠心II号、合用吸收的五个成分、FTA，则均同等程度的下调了其caspase-3的活性。

通过上述实验可以表明：冠心II号抗心肌细胞凋亡的主要成分是丹参素、羟基红花黄色素A、阿魏酸三个成分(即FTA)，而不是吸收进入人体的5个成分。通过直接的途径，这三个活性成分保护心脏的功能是通过增加心肌血流量和改善心肌细胞凋亡的方式实现的。因此，由该三个活性成分可以制备出新的治疗冠心病的抗心肌细胞凋亡的药物，且用药剂量小，成本低，药效更强。

Claims (4)

1.一种药用组合物，包含常规药用载体，其特征在于：由重量比为20～24∶7～4∶1.5～0.5的羟基红花黄色素A、丹参素和阿魏酸作为药物有效成分。

2.如权利要求1所述的药用组合物，其特征在于：羟基红花黄色素A、丹参素和阿魏酸重量比为22∶5.54∶1。

3.如权利要求1所述的药用组合物，其特征在于：该药用组合物是羟基红花黄色素A、丹参素和阿魏酸作为药物有效成分的水制剂。

4.如权利要求1～3所述之一的药用组合物作为治疗冠心病药物的应用。