CN101323604B - 新的PPARα/γ双激动剂及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一类新的化合物以及含有该类化合物或其可药用盐的药物组合物,并且提供了其制备方法。该类化合物具有过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)中PPARα/γ双激动剂的活性,可用于制备治疗包括人在内的动物的糖尿病、高血脂、高胆固醇、高血压、动脉粥样硬化、冠心病、肥胖症、代谢综合症和肿瘤等疾病的药物。
Description
技术领域
本发明涉及一类新的化合物,特别涉及具有过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)α/γ的双激动剂。
背景技术
过氧化物酶体增殖物激活受体(Peroxisome Proliferator Activated Receptors,PPARs)是一类由配体激活的核转录因子,属核受体超家族成员,PPARs广泛表达于各种组织中,在配体诱导下PPARs与Retinoid X受体(RXR)在胞内形成异二聚体PPAR-RXR复合物,并进行入核转移与PPAR响应元件(PPRE)(AGGTCAnAGGTCA)结合,调控下游基因的转录。PPARs存在3种亚型,即PPARα、PPARδ、PPARγ。现已证实PPAR是类脂、胆固醇代谢途径基因表达的主要调控因子之一[Trends in Endocrinology and Metabolism2006,17(7):284-290]。
PPARα经动物实验证实与体内脂代谢平衡有关,可调控编码脂质代谢、脂质运输有关功能蛋白的基因表达。PPARα与其配体结合后,能增加脂肪酸转运蛋白、脂酰辅酶A合成酶的表达,促进肝的脂肪酸摄取;影响脂肪酸和胆固醇在血浆中的转运;增加载脂蛋白A I、A II的转录而抑制载脂蛋白CIII的表达,从而增加血浆中高密度脂蛋白-胆固醇水平和脂蛋白脂酶活性,刺激低密度脂蛋白-胆固醇摄取,水解富含甘油三酯的极低密度脂蛋白。
PPARγ在控制脂肪的储存和释放,维持机体能量平衡,调节胰岛素抵抗及血糖的稳定,促进脂肪细胞基因表达,在脂肪细胞分化的全过程特别在脂肪细胞分化的早期,起正向调节作用。
PPARδ参与脂蛋白调节,并在胆固醇的反向运输中和脂肪酸的循环的代谢,并在细胞的早期分化中起作用。
人体中胆固醇代谢和脂代谢的平衡被打乱,则将导致多种包括动脉粥样硬化、肥胖和II型糖尿病等疾病。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)作为类固醇激素核受体,在调节胆固醇和脂肪酸的代谢过程中起关键作用,所以筛选PPARs的激动剂,以期得到防治高胆固醇、高血脂、动脉硬化、冠心病等多种疾病的药物。以此为靶点,现今已经成为药物研发的热点。
许多研究表明,新的PPARγ激动剂和PPARα/γ的双激动剂预防和治疗人和动物代谢综合症取得了很好的效果(WO00/08002,WO01/57001,US6054453,EP088317B1,WO97/25042,WO02/26729和US6353018)。因此,筛选新的具有PPARα和PPARγ激动活性的化合物对代谢异常疾病的治疗非常重要。这些代谢异常疾病包括糖尿病、高血压、肥胖、胰岛素抵抗、高甘油三酯血症、高血糖、高胆固醇、动脉粥样硬化、冠心病和其它心血管病等代谢综合症以及肿瘤等。
血管平滑肌细胞的增殖在动脉粥样硬化中起关键的作用,抑制平滑肌细胞的增殖可以降低发生动脉粥样硬化发生的几率和程度(Arterioscler ThrombVasc Biol19:1819-1824,1999)。
发明内容
经过大量研究,发明人惊奇地发现式(I)化合物对PPARα和PPARγ表现出很好的活性,为PPARα/γ双激动剂,因此完成本发明。
具体地,本发明涉及:
(1)下式(I)的化合物及其可药用盐或溶剂化物:
其中,R代表—CH3或—OH。
(2)一种制备项(1)任一化合物的方法,包括:培养产生所述化合物的微生物,之后对发酵液进行分离和纯化。
(3)根据项(2)的方法,其中的微生物为青霉(Penicilliumsp.)CGMCCNo.2038。
(4)一种药物组合物,含有项(1)任一化合物作为活性成份和可药用载体。
(5)项(1)任一化合物在制备治疗PPARs介导的疾病的药物中的用途。
(6)项(1)任一化合物在制备预防或治疗高血糖、高血脂、胰岛素抵抗、糖尿病、糖尿病并发症、动脉粥样硬化、炎症以及抗代谢综合症药物中的用途。
(7)项(1)任一化合物在制备预防或治疗动脉粥样硬化的药物中的用途。
本发明涉及的具有上述用途的化合物不仅是化合物本身,适当时也可以是其药学上可接受的盐(酸或碱加成盐)或其溶剂化物(例如水合物、醇合物等),下文中为简便起见,都简称为本发明的化合物。
上述药学可接受的加成盐包括化合物能够形成的治疗活性的非毒性碱加成盐形式。碱性的化合物通过用适当的酸处理碱的形式可转化成它们的药学可接受的碱加成盐。碱加成盐形式的例子是钠、钾、钙盐,以及与药学可接受的胺形成的盐,所述的胺是诸如氨、烷基胺、苯胺和氨基酸,诸如精氨酸和赖氨酸。
上述化合物和盐可以形成溶剂化物,例如水合物、醇合物等。还可以是前药或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。
还提供了制备上述化合物的方法,该方法包括:
1.提供能够通过发酵产生式(I)化合物的微生物,优选青霉(Penicilliumsp.)F01-1383。该菌种已于2007年5月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏编号为CGMCC No.2038。
菌种来源:产生菌株F01-1383从我国重庆市江津四面山土壤样品中分离得到。
菌种鉴定:在查氏琼脂(CA)上,25℃,7天:菌落直径15—17mm,稍厚或较薄,表面平坦,边缘于培养基内,不规则;质地绒状;分生孢子结构较多,深黄绿色,近于深暗黄绿色(Dark Dull Yellow-Green,R.P1.XXII)或灰橄榄色(Grayish Olive,R.P1.XLVI);菌丝体白色;无渗出液和可溶性色素;反面白色或无色。
在查氏酵母膏琼脂(CYA)上,25℃,7天:菌落直径20mm,稍厚,表面具有少量辐射状沟纹,边缘于培养基内,较规则;质地绒状;分生孢子结构大量,深黄绿色,近于灰橄榄色(Grayish Olive,R.P1.XLVI);菌丝体白色;有少量褐黄色渗出液;无可溶性色素;反面呈浅黄色。
在麦芽汁琼脂(WA)上,25℃,7天:菌落直径16—17mm,稍厚,表面具较多辐射状皱纹,有少量白色毛状气生菌丝于菌落中央,边缘于培养基表面,较规则;质地绒状;分生孢子结构大量,深黄绿色,近于灰橄榄色(Grayish Olive,R.P1.XLVI);无渗出液褐可溶性色素;反面呈黄褐色。
分生孢子梗发生于基质菌丝,孢梗茎(72-)100-180X3.5-4.0μm,壁光滑,帚状枝三轮生,偶尔双轮生,排列紧密;副枝每轮2个,偶见3个,14-22X3.5-4.0μm,壁光滑;梗基圆柱形或棒形,有些呈楔形,每轮(2-)4-6个,9-11X2.7-3.0(-3.6)μm,壁光滑;瓶梗安剖形,每轮4-6个,9-11X2.5-3.0μm,梗颈短;分生孢子球形、近球形,(3.0-)3.5-4.0μm,壁稍粗糙;分生孢子链较长,纠缠。
根据以上培养特征可以确定该菌种F01-1383为青霉(Penicillium sp.)。
2.选择性地在种子培养基上培养微生物。
3.提供一种发酵培养基,该培养基为本领域常用培养基,优选含有下列成份:葡萄糖,酵母粉,NaCl,CaCO3。
4.将微生物在发酵培养基中进行发酵。
5.选择性地对所得发酵液进行分离和纯化。
本发明化合物的制备方法不受上述顺序的限制,并且所述培养基成份可以在本领域技术人员可预见的范围内改变。
需要指出的是,本发明的化合物可以但不限于从微生物发酵产物中提取、分离得到。
另一方面,本发明还提供了一类药物组合物,其含有作为活性成分的上述式(I)任一化合物和可药用载体。药物组合物的制备方法为本领域常用方法。
本文所述的化合物或其药学上可接受的加成盐或水合物可以利用各种给药途径或方式给予患者。适合的给药途径包括但不限于吸入、透皮、口服、直肠、经粘膜、肠内和肠胃外给药,肠胃外给药包括肌内、皮下和静脉内注射。
本文所用的术语“给药”可涵盖所有直接与间接释放化合物到其预期作用部位的手段。
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐和/或水合物可以单独给药,与其他本发明化合物联合给药,和/或以与其他已知治疗剂联合的形式给药。
本发明的活性化合物可以本身形式给药的,或者以药物组合物形式给药,其中活性化合物是与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合的。按照本发明使用的药物组合物通常是按常规方式配制的,使用一种或多种生理学上可接受的载体,包含赋形剂和助剂,它们有利于将活性化合物加工成可以在药学上使用的制剂。适当的制剂取决于所选择的给药途径,可以按照本领域熟知的常识进行制造。
关于口服给药,化合物可以是这样配制的,将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体结合。这类载体使本发明化合物能够配制成片剂、丸剂、锭剂、胶囊剂、液体、凝胶、糖浆剂、浆液、悬液等,用于被所要治疗的患者口服。口服药物制剂可以这样得到,与固体赋形剂混合,可选地研磨所得混合物,加工颗粒的混合物,如果需要的话加入适合的助剂,得到片剂或锭剂芯。适合的赋形剂确切地是填充剂,例如糖,包括乳糖、蔗糖或甘露糖醇;纤维素制备物,例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要的话,可以加入崩解剂,例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐,例如藻酸钠。
可以口服的药物制剂包括推入配合的胶囊剂,由明胶制成,以及软的密封胶囊剂,由明胶和一种增塑剂制成,例如甘油。推入配合的胶囊剂可以含有活性成分与下列成分的混合物:填充剂,例如乳糖;粘合剂,例如淀粉;和/或润滑剂,例如滑石粉或硬脂酸镁或微粉硅胶;和可选的稳定剂。在软胶囊剂中,活性化合物可以是溶解或悬浮在适合的液体中的,例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外,可以加入稳定剂。所有口服给药制剂都应当是适合于这类给药的剂量。
关于颊给药,组合物可以采取片剂或糖锭剂的形式,按常规方式配制。
关于通过吸入给药,按照本发明使用的化合物适宜以气雾剂的形式从加压包装或雾化器中释放出来,其中利用适合的推进剂,例如二氯二氟甲烷、三氯氟代甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合的气体。在加压气雾剂的情况下,通过提供计量释放的阀门可以确定剂量单位。用在吸入器或吹入器内的明胶胶囊和药筒可以配制成含有化合物与适合的粉末基质的粉末混合物,例如乳糖或淀粉。
化合物可以配制用于肠胃外给药,通过注射,例如急推注射或连续输注。注射用制剂可以是单位剂型,例如在安瓿或多剂量容器内,其中加入防腐剂。组合物可以采取在油性或水性载体中的悬液、溶液或乳液的形式,并且可以含有配制用试剂,例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂,例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐,例如藻酸钠。
肠胃外给药用药物制剂包括水溶性活性化合物的水溶液。酌情可以制备活性化合物的油性注射悬液。适合的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油,例如芝麻油,或合成的脂肪酸酯,例如油酸乙酯或甘油三酯,或脂质体,水性注射悬液可以含有增加悬液粘性的物质,例如羧甲基纤维素钠葡聚糖。可选地,悬液还可以含有适合的稳定剂或增加化合物溶解度的试剂,以便制备高浓缩的溶液。
或者,活性成分可以是粉末形式,在使用前用适合的载体再生,例如无菌无热原的水。
化合物还可以配制成直肠组合物,例如栓剂或保留灌肠剂,例如含有常规的栓剂基质,例如可可脂或其他甘油酯。
除了前述制剂以外,化合物还可以配制成药库制剂。这类长效制剂可以通过植入或经皮释放(例如皮下或肌内)、肌内注射或透皮贴剂给药。因而,例如,化合物可以与适合的聚合或疏水性材料(例如在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂一起配制,或者配制成微溶性衍生物,例如微溶性盐。
药物组合物还可以包含适合的固体或凝胶相载体或赋形剂。这类载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物,例如聚乙二醇。
优选地,组合物是单位剂型,例如片剂或胶囊剂。
给药方式以及有效剂量的选择将尤其根据所治疗的疾病而异。给药方式和剂量的选择在本领域技术人员的能力范围内。
本发明化合物的单位剂型通常将含有0.1至99重量%活性物质,更通常为5至75重量%活性物质。举例来说,单位剂型可以含有1mg至1g化合物,更通常为10mg至500mg,例如在50mg与400mg之间,剂量通常为100mg至200mg。
每个剂量单位或每次口服给药优选地含有1至250mg(关于肠胃外给药,优选地含有0.1至25mg)的项1化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的化合物将按照有效提供所需治疗效果的量给药。提供所需治疗效果所必要的浓度将尤其根据疾病的明确性质、患者的年龄、体重和疾病的严重性而异。
给药剂量优选地将对患者是无毒的,不过在某些情况下所治疗疾病的严重性可能迫使给以导致一些毒性迹象的量的化合物。
通常,本发明化合物的给药量将在0.01mg/kg至100mg/kg体重的范围内,更优选为0.1mg/kg至10mg/kg体重,特别是1mg/kg至5mg/kg体重。
药学上可接受的本发明化合物正常地将按照每日剂量方案对受治疗者给药。关于成年患者,例如可以是式(I)化合物或其药学上可接受的盐的口服剂量在1mg与500mg之间,优选在1mg与250mg之间,或者静脉内、皮下或肌内剂量在0.1mg与100mg之间,优选在0.1mg与25mg之间,按照游离化合物计算,化合物每天分1至4次给药。因而,关于体重70kg的普通人,本发明化合物的典型每日剂量将在70mg至700mg的范围内。这样一种剂量例如可以每日分二至四次给药。
不过,给药剂量的大小和给药的频率最终将由治疗该患者的医师来决定和判断。
本发明的化合物或组合物还可以选择性地与已知的抗高血糖剂、抗高血脂剂、胰岛素抵抗改善剂、糖尿病治疗药、糖尿病并发症、抗动脉粥样硬化剂、抗炎症剂以及代谢综合症和PPAR介导的其他疾病的预防和治疗药物联合给药。当它与已知药物联合给药时,可以同时、分别或顺序给药。
附图说明
图1产生菌株F01-1383的菌落形态照片
图2产生菌株F01-1383的显微图片
图3化合物I的质谱图
图4化合物I的13C NMR图谱
图5化合物I的1H NMR图谱
图6化合物II的质谱图
图7化合物II的13C NMR图谱
图8化合物II的1H NMR图谱
具体实施方式
下面实施例进一步详细说明本发明,但它们并非理解成对本发明范围的任何限制。
仪器与试剂为本领域技术人员常用的仪器与试剂。除非特别说明,本发明中所说的%均为重量百分比。
材料:L02细胞、3T3-L1前脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞(购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所),lipofectamine2000,Superscript ∏ Reverse Transcriptase(购自Invitrogen公司),肝组织和脂肪组织总RNA(购自Clontech公司)、pG51uc(购自promega公司)。
仪器:
HPLC系统:美国Waters公司(515双泵,PDA检测器)
紫外光谱仪:Pharmacia公司Ultrospec2100Pro型
核磁共振仪:Varian公司inova500
质谱仪:Waters公司ZMD质谱仪
细胞板读板仪:Perkin Elmer公司Victor21420Multilabel Counter
实施例1化合物产生菌的培养
斜面培养基:PDA斜面培养基。
种子培养基:淀粉2%,葡萄糖1%,热榨黄豆饼粉0.2%,麦牙粉0.6%,酵母粉0.3%,NaCl0.2%,MgSO4.7H2O0.1%,CaCO30.2%pH7.0。
发酵培养基:淀粉1%,葡萄糖2%,热榨黄豆饼粉0.3%,麦芽粉0.8%,酵母粉0.4%,NaCl0.13%,CaCO30.15%,pH7.0。
由真菌F01-1383斜面,接种于种子培养基,27℃,220r/min,72hr培养后,接入内含120mL培养基的750mL三角瓶中,于220r/min条件下培养120hr。
实施例2化合物的分离及结构鉴定
发酵液5L,调pH至3.0-3.5,3000rpm离心15min,收集菌体,70%的丙酮浸泡两次(2.0小时/次),离心,收集上清液;浓缩除去丙酮,浓缩液调pH至3.0,加入乙酸乙酯萃取三次,合并萃取液;无水硫酸钠干燥,减压浓缩的粗品13.8g。
取粗品8.0g,用少量甲醇溶解后,使用硅胶柱(φ2.6×50cm)色谱进行进一步的分离纯化,层析柱的洗脱条件为100%的CHCl3至100%MeOH的阶段洗脱,收集合并活性组分,浓缩至约50ml,低温放置过夜,析出白色结晶,经检测为霉酚酸。母液浓干得淡黄色固体725mg。
取上述淡黄色固体725mg,使用ODS反相柱(PHENOMENEX ODSφ21.2×250mm)在制备型HPLC(购自Waters公司,pump:600,Detector:2487,Injector:7725i)上进行制备[流动相为70%CH3CN-30%水(含1‰冰醋酸),流速为16ml/min,检测波长为250nm],得到化合物I23.0mg和组份A16.0mg,保留时间分别为11,13分钟。组份A使用ODS反相柱(PHENOMENEX ODSφ10×250mm)在HPLC(购自Waters公司,pump:515,Detector:996,Injector:7725i)上进行二次制备[流动相为65%CH30H-35%水(含1‰冰醋酸),流速为4.0ml/min,检测波长为250nm],得到化合物II4.6mg,保留时间27分钟。
(1)化合物I:
分子式:C20H2606,MW=362.42。
ESI-MS(-),m/z361.2[M-H]-。
ESI-MS(+),m/z385.2[M+Na]+
UV(in MeOH)λmax:249.7,305.3nm
13C NMR(125MHz,CDCl3,ppm)
181.0(C-8′),173.8(C-3),164.8(C-6),154.7(C-4),146.5(C-7a),136.0(C-3′),124.0(C-2′),123.9(C-5),117.8(C-7),107.6(C-3a),70.8(C-1),61.5(C-9),40.6(C-7′),40.5(C-4′),34.4(C-6′),26.5(C-5′),23.6(C-1′),17.7(C-7′-CH3),16.1(C-3′-CH3),11.4(C-8)。
1H NMR(500MHz,CDCl3,ppm)
5.14(2H,s)(H-1),5.1(1H,t,7.0Hz)(H-2′),3.67(3H,s)(H-9),3.29(2H,d,7.0Hz)(H-1′),2.26(1H,m)(H-7′),2.05(3H,s)(H-8),1.88(2H,t,7.0Hz)(H-4′),1.67(3H,s)(H-3′-CH3),1.45(1H,m)(H-6′),1.31(2H,m)(H-5′),1.22(1H,m)(H-6′),0.98(3H,d,6.5Hz)(H-7′-CH3)。
化合物I结构式如下式(Ia):
(2)化合物II:
分子式:C21H28O5,MW=360.44
ESI-MS(+),m/z383.4[M+Na]+
UV(in MeOH)λmax:249.7,305.3nm
13C NMR(125MHz,CDCl3,ppm)
215.8(C-8′),174.1(C-3),164.8(C-6),156.5(C-4),146.6(C-7a),135.6(C-3′),124.4(C-2′),124.2(C-5),116.7(C-7),107.8(C-3a),70.6(C-1),61.4(C-9),47.9(C-7′),40.5(C-4′),33.3(C-6′),26.2(C-5′),23.6(C-1′),22.0(C-9′),16.4(C-7′-CH3),16.1(C-3′-CH3),11.3(C-8)。
1H NMR(500MHz,CDCl3,ppm)
5.16(2H,s)(H-1),5.14(1H,t,7.0Hz)(H-2′),3.70(3H,s)(H-9),3.30(2H,d,7.0Hz)(H-1′),2.47(1H,m)(H-7′),2.08(3H,s)(H-8),2.01(3H,s)(H-9′),1.91(2H,t,7.0Hz)(H-4′),1.71(3H,s)(H-3′-CH3),1.50(1H,m)(H-6′),1.29(2H,m)(H-5′),1.20(1H,m)(H-6′),0.96(3H,d,7.0Hz)(H-7′-CH3)。
化合物II结构式如下式(Ib):
实施例3化合物对PPARs的活性测定
(1)pBIND-PPARs-LBD表达质粒的构建
按照Superscript ∏ Reverse Transcriptase试剂盒说明书对肝总RNA进行反转录,再以cDNA为模板进行PCR,将PCR的产物进行胶回收,并连接到pGME-TVector,然后进行测序。将测序结果与Genebank上的目的序列进行比对。将序列正确的PPARα—LBD进行双酶切与pBIND Vector连接构成表达质粒pBIND-PPARs-LBD。
(2)PPAR的激动活性测定
人的正常肝细胞L02细胞用含10%胎牛血清、1×105U/L青霉素和100mg/L链霉素的PRMI1640培养基在37℃,5%CO2培养箱中培养。
将对数生长期的L02细胞以3×105个/mL细胞数接种细胞于96孔板,24h后,将培养液换成含10%胎牛血清的无双抗的PRMI1640培养基,用lipofectamine2000将重组质粒的报告质粒pG51uc和pGAL4-PPAR-LBD嵌合表达质粒共转染入细胞中。6h加入不同浓度的药物诱导,DMSO作为空白对照。给药24h后,Victor21420Multilabel Counter,利用Luciferase Assay System检测细胞中荧光素酶的活性。
化合物I和化合物II对PPARα/γ表现出很好的激动活性,对PPARs激动活性的EC50值(μM)见下表1:
表1化合物I和II对PPARα/γ激动活性的EC50值
化合物I | 化合物II | |
PPARα | 21.2 | 18.3 |
PPARγ | 26.6 | 20.8 |
实施例4化合物对血管平滑肌细胞增殖的体外抑制作用
将血管平滑肌细胞以5×104个/mL细胞数接种细胞于96孔板,4h后加入不同浓度的化合物I和化合物II,继续培养48h后,利用MTT法在Victor21420Multilabel Counter(PE公司)测定对血管平滑肌的增殖影响。
化合物I和化合物II对血管平滑肌的细胞增殖表现出较好的抑制活性,IC50值(μM)见下表2。
表2化合物I和II对血管平滑肌的细胞增殖抑制的IC50值
化合物I | 化合物II | |
IC50(μM) | 11.2 | 9.3 |
实施例5抗动脉粥样硬化作用体内结果
30只新西兰兔(购自北京科宇动物养殖中心)用1%的胆固醇的食物饲养12周后,分为三组,每组10只,一个空白对照组,两个给药组。将被检验化合物的悬浮或溶解于水中,在给药前剧烈摇匀,药物组按30mg/kg,对照组用相同体积的生理盐水。对给药组连续胃管给药12周。12周后杀死兔子,并迅速解剖将胸动脉和腹动脉处的动脉切割下来。称重并将动脉打开后进行组织化学和免疫组化的分析。
结果表明,与对照组相比,给药组能明显的抑制动脉粥样硬化的斑块面积和胆固醇和含量,见下表3。
表3在动脉粥样硬化斑块中的胆固醇含量和相对面积
*p<0.01数值=平均±标准偏差
Claims (6)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
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