CN101319244B - 谷胱甘肽冻干粉的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法，涉及用反胶束萃取法制备还原型谷胱甘肽(GSH)冻干粉的方法。本发明方法以面包干酵母为原料，先制备含GSH的提取液及P204反胶束溶液，后通过反胶束溶液对GSH提取液进行萃取，再用氯化钠溶液对萃取后的反胶束溶液进行反萃取，然后经过超滤、冷冻干燥制备出成品。本发明方法简单，制备条件温和，反萃取后的反胶束溶液可以再生利用，生产成本低；制备出的冻干粉中，GSH含量高达95.2％、回收率高达86.3％，并能制备出复合氨基酸浓缩液副产物。采用本发明制备出的GSH冻干粉，可广泛用作药物原材料、食品工业中的抗氧化保鲜剂和风味添加剂，还可用作饲料添加剂和面包酵母培养基等。
Description
技术领域
本发明属于谷胱甘肽制备技术领域，特别涉及用反胶束萃取法制备还原型谷胱甘肽冻干粉的方法。
技术背景
谷胱甘肽是一种非常重要的活性三肽，有还原型和氧化型两种形态，广泛存在于动物，植物和微生物中。主要生理功能是抗自由基损伤、解毒、促进细胞蛋白质合成、参与转甲基或丙氨基反应、维持肝细胞正常功能等。因此，谷胱甘肽广泛应用于医学领域，如治疗肝病、急慢性肾功能衰竭、心血管疾病、老年性眼病、糖尿病神经损害，肿瘤放射治疗后的肝保护以及肠道保护等；谷胱甘肽还广泛应用于食品工业，如面制品、奶制品、肉类、水果蔬菜及饮料保健品中用作抗氧化保鲜剂和风味添加剂。目前，国内谷胱甘肽的年需求量在60吨以上，几乎全部从国外进口。因此，实现谷胱甘肽的国产化，具有重要战略意义和经济价值。
现有制备还原型谷胱甘肽(GSH)的方法主要有：铜盐沉淀法、离子交换法、金属盐-离子耦合层析法、电渗析法、双水相结合温度诱导分离法。其中用到最多的是离子交换法，该方法以离子键将GSH交换到树脂上，再用洗脱剂洗脱。如公开号为CN1807447A的“谷胱甘肽纯化分离方法”专利，公开的是选择含-S-R基团或-S-S-R’基团的分离介质装填成层析柱，调节pH值为1.0～10.0的缓冲溶液平衡层析柱，调节pH值为1.0～10.0的谷胱甘肽抽提液上样，用同样的缓冲液冲洗后，再用碱或酸洗脱，可得到只含谷胱甘肽的洗脱液，结晶后制得GSH晶体。该方法的主要缺点是：①产生大量酸碱性较强的洗脱废液，必须净化后才能排放，这不但增加了生产成本，还增加了治理废液的工艺设备及场地，从而进一步增加了生产成本。②该方法的结晶过程往往损失较多产品而导致收率降低。③制备的产品为晶体，在使用时，需将GSH晶体配制成GSH溶液，因GSH晶体的不完全溶解而导致GSH晶体利用率降低。又如公开号为CN1850854A的“一种从谷胱甘肽发酵液中提取谷胱甘肽的方法”专利，公开的是采用谷胱甘肽发酵液离心得到酵母细胞，经调节pH值、沸水破壁方法，提取细胞中的谷胱甘肽，同时使蛋白质沉淀，再用阳离子交换技术去除小分子和有色物质，最终从发酵液中浓缩纯化谷胱甘肽，制得分子量为307.33、蛋白质含量为23％、提取收率为80.5的白色粉末状谷胱甘肽成品。该方法的主要缺点是产物中含有较多的蛋白质，产品质量不高；谷胱甘肽纯度不高；有较多的洗脱废液产生，增加了治理废液的成本。
其次是金属盐-离子耦合层析法，其原理是利用Cu2+、Co2+、Zn2+、Ni2+等过渡金属离子与蛋白质表面的组氨酸、色氨酸或半胱氨酸配位结合，由于蛋白质表面这些氨基酸的种类、数量、位置和空间构象不同，因而与金属螯合物的亲和力大小不同，从而可选择性地加以分离纯化。如《化学与生物工程》2007年11月第24卷第11期的“锌离子螯合亲和层析分离纯化谷胱甘肽的研究”一文，公开的是利用锌离子与GSH的巯基螯合从而达到分离目的，以谷胱甘肽的酵母抽提液为原料，用自制的以壳聚糖小球为栽体、Zn2+为配基的金属螯合亲和层析柱分离纯化谷胱甘肽(GSH)。上柱谷胱甘肽抽提液浓度为132.30mg/(100mL)，上柱pH值为7.0，用含0.5mol/L NH4Cl的pH值为4.2的0.02mol/L的磷酸盐缓冲溶液洗脱，然后经浓缩、冷冻干燥处理，即得到分离纯化的GSH，谷胱甘肽回收率为68.61％。此法易于操作，但获得的提取物中GSH纯度不高，冻干粉中GSH的含量仅为9.0％。
发明内容
本发明的目的是针对现有制备还原型谷胱甘肽(GSH)方法的不足之处，提供一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法。具有工艺简单，操作简便，制备条件温和等优点，在室温条件下即可进行萃取分离；并且该萃取剂无毒且可以回收再次利用，降低了生产成本。
本发明的原理：反胶束萃取技术是上世纪80年代初发展起来的生物物质分离、纯化技术。具有成本低、溶剂可反复利用、萃取效率高、条件温和不会引起生物活性物质变性，选择性高，操作简单可以连续生产等优点。目前，反胶束萃取技术在分离氨基酸、蛋白质等领域逐渐应用。GSH分子上有正电荷氨基，可与负电荷磷酸二辛酯(P204)形成静电相互作用，因此，能被萃取分离。由于P204的烃链短，直链仅有6个碳原子，以其制备的反胶束直径明显小于蛋白质等荷电大分子，因此，蛋白质等大分子不能进入P204反胶束，而与GSH分离；GSH的分子量虽仅为307Da左右，但是，由于其特殊的肽键结构，分子面积约为0.941平方纳米(nm2)显著大于分子量与GSH相近的氨基酸分子，因此，选择适当的超滤膜可将两者进行超滤分离。通过萃取、反萃取及超滤分离，可获得高纯度GSH。
本发明的目的是这样实现的：一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法，以面包干酵母为原料，先制备含GSH的提取液及P204反胶束溶液，后通过反胶束溶液对GSH提取液进行萃取，再用氯化钠溶液对萃取后的反胶束溶液进行反萃取，然后经过超滤、冷冻干燥制备出谷胱甘肽冻干粉成品。具体的方法步骤如下：
(1)GSH提取液的制备
以面包干酵母为原料，按照面包干酵母的重量∶蒸馏水的体积∶二甲苯的体积比为1∶2～3∶0.03～0.05的比例，先在面包干酵母中加入蒸馏水，搅拌混合均匀。再加入二甲苯，并搅拌混合均匀后，置于摇床上振荡5～8小时。然后再加入与混合液等体积的蒸馏水，再进行抽滤，弃滤渣，收集滤液。对滤液用稀盐酸调节pH值为1.0～3.0，然后，加入氯化钠固体，搅拌混合均匀，制备出氯化钠的摩尔浓度为0.05～0.2mol/L的还原型谷胱甘肽(GSH)提取液。
(2)反胶束溶液的制备
以磷酸二辛酯(P204)为萃取剂，以正辛醇为稀释剂，将P204加入正辛醇中，搅拌均匀后，配制出P204的摩尔浓度为0.1～0.2mol/L的P204溶液。然后按P204溶液的P204∶蒸馏水的摩尔比为1∶5～20的比例，在P204溶液中加入蒸馏水，搅拌0.5～1.5小时，就制备出P204反胶束溶液。
(3)萃取
在第(1)步和第(2)步完成后，按第(1)步制备出的GSH提取液∶第(2)步制备的P204反胶束溶液的体积比为1∶2～4的比例，先将GSH提取液和P204反胶束溶液置于萃取器中，然后进行搅拌萃取10～45min。再用离心机以7000～9000r/min的速度，对其进行离心分离5～15min后，静置分层，分别收集上层反胶束相和下层水相。然后再次在收集的水相中，加入2～4倍体积的第(2)步制备出的P204反胶束溶液，再次进行萃取和离心分离，再次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复萃取2～4次，最后合并各次收集的上层萃取有GSH的反胶束溶液。
(4)反萃取
第(3)步完成后，按第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液∶氯化钠的摩尔浓度为0.05～0.2mol/L的氯化钠溶液的体积比为1∶2～4的比例，先将萃取有GSH的反胶束溶液置于萃取器中，再加入氯化钠溶液，搅拌混合均匀。最后用氢氧化钠溶液调节其pH值为10.0～12.0，进行搅拌反萃取35～65min。再用离心机以7000～9000r/min的速度，对其进行离心分离5～15min，静置分层后，分别收集下层水相和上层反胶束相。然后，再次在收集的反胶束相中，再次加入2～4倍体积的氯化钠溶液，再次调节pH值，再次进行反萃取和离心分离，再次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复反萃取2～4次。最后，分别合并各次收集的反萃取有GSH的下层水相和反萃取后的上层反胶束相。
(5)制备GSH浓缩液
第(4)步完成后，将第(4)步最后收集的反萃取有GSH的下层水相，置于截留分子量为1000的超滤器中，在压力为0.1～0.25Mpa下，进行超滤。当超滤截留液体积降低至原体积0.1～0.2时，补充蒸馏水至原体积，再进行超滤，如此重复，直至超滤滤过液中无氨基酸反应为止。再分别收集超滤截留液和超滤滤过液。然后将收集的超滤截留液，置于真空浓缩器中，在温度为60～70℃、真空度为0.06～0.08Mpa的条件下，进行真空浓缩，就制备出GSH浓缩液。对收集的超滤滤过液，通过真空浓缩器，进行真空浓缩为复合氨基酸浓缩液，可用作食品、饲料等行业的调味添加剂。
(6)制备GSH冻干粉
在第(5)步完成后，将第(5)步制备出的GSH浓缩液，在-20～-15℃温度下，预冻1～2小时后，再置于冷冻干燥机中，在压力为30～50Pa、温度为-60～-50℃条件下，冷冻干燥20～30小时，就制备出白色的GSH冻干粉。
(7)再生萃取剂
在第(6)步完成后，在第(4)步最后收集的反胶束溶液中，加入无水硫酸钠干燥剂，加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的2～5％。混合均匀后，静置吸水20～30小时，再用离心机以4000～6000r/min的速度，离心分离10～20min，分别收集上层萃取剂清液和下层沉淀。对收集的上层萃取剂清液，可再次用于制备反胶束溶液。对收集的下层沉淀，在100～110℃下进行烘干，可再次用作吸附水分的干燥剂。
本发明采用以上技术方案后，主要有以下特点：
1.方法简单，条件温和。本发明方法对面包干酵母提取液进行反胶束萃取，再反萃取、浓缩、冷冻干燥即得到成品，制备方法简便，所需的劳动量少，且制备条件温和、时间短。因此，生产成本低且安全性好，便于工业化规模生产。
2.生产成本低。本发明方法所用设备较少，并且通过多次反萃取后的反胶束溶液可以再生利用，节约了生产原料，反萃取剂为蒸馏水，容易获得且废水处理简单，有效地进一步降低了生产成本。
3.产品中GSH含量较高，GSH有较高的回收率。采用本发明方法后，获得的冻干粉中GSH含量达到92.3～95.2％，GSH回收率达到86.3％。所得的产品为冻干粉，便于配制成使用所需的溶液，损失小且使用方便。
4.生产过程中制备的复合氨基酸浓缩液副产物，可用于食品、饲料等行业调味添加剂。
采用本发明方法制备出的GSH冻干粉可用作药物原材料、食品工业中的抗氧化保鲜剂和风味添加剂，还可用作饲料添加剂和面包酵母培养基等。
具体实施方式
下面结合具体的实施方式，进一步说明本发明。
实施例1
一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法的具体方法步骤如下：
(1)GSH提取液的制备
以面包干酵母为原料，按照面包干酵母的重量∶蒸馏水的体积∶二甲苯的体积比为1∶2∶0.03的比例，先在面包干酵母中加入蒸馏水，搅拌混合均匀。再加入二甲苯，并搅拌混合均匀后，置于摇床上振荡5小时。然后再加入与混合液等体积的蒸馏水，再进行抽滤，弃滤渣，收集滤液。对滤液用稀盐酸调节pH值为1.0，加入氯化钠固体，搅拌混合均匀，制备出氯化钠的摩尔浓度为0.05mol/L的还原型谷胱甘肽(GSH)提取液。
(2)反胶束溶液的制备
以磷酸二辛酯(P204)为萃取剂，以正辛醇为稀释剂，将P204加入正辛醇中，搅拌均匀后，配制出P204的摩尔浓度为0.1mol/L的P204溶液。然后按P204溶液的P204∶蒸馏水的摩尔比为1∶5的比例，在P204溶液中加入蒸馏水，搅拌0.5小时，就制备出P204反胶束溶液。
(3)萃取
在第(1)步和第(2)步完成后，按第(1)步制备出的GSH提取液∶第(2)步制备的P204反胶束溶液的体积比为1∶2的比例，先将GSH提取液和P204反胶束溶液置于萃取器中，进行搅拌萃取10min。再用离心机以7000r/min的速度，对其进行离心分离5min后，静置分层，分别收集上层反胶束相和下层水相。然后再次在收集的水相中，加入2倍体积的第(2)步制备出的P204反胶束溶液，再次进行萃取和离心分离，再次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复萃取2次，最后合并各次收集的上层萃取有GSH的反胶束溶液。
(4)反萃取
第(3)步完成后，按第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液∶氯化钠的摩尔浓度为0.05mol/L的氯化钠溶液的体积比为1∶2的比例，先将萃取有GSH的反胶束溶液置于萃取器中，再加入氯化钠溶液，搅拌混合均匀。后用氢氧化钠溶液调节其pH值为10.0，进行搅拌反萃取35min。再用离心机以7000r/min的速度，对其进行离心分离5min，静置分层后，分别收集下层水相和上层反胶束相。然后，再次在收集的反胶束相中，再次加入2倍体积的氯化钠溶液，再次调节pH值，再次进行反萃取和离心分离，再次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复反萃取2次。最后，分别合并各次收集的反萃取有GSH的下层水相和反萃取后的上层反胶束相。
(5)制备GSH浓缩液
第(4)步完成后，将第(4)步最后收集的反萃取有GSH的下层水相，置于截留分子量为1000的超滤器中，在压力为0.1Mpa下，进行超滤。当超滤截留液体积降低至原体积0.1时，补充蒸馏水至原体积，再进行超滤，如此重复，直至超滤滤过液中无氨基酸反应为止。再分别收集超滤截留液和超滤滤过液。然后将收集的超滤截留液，置于真空浓缩器中，在温度为60℃、真空度为0.06Mpa的条件下，进行真空浓缩，就制备出GSH浓缩液。对收集的超滤滤过液，通过真空浓缩器，进行真空浓缩为复合氨基酸浓缩液，可用作食品、饲料等行业的调味添加剂。
(6)制备GSH冻干粉
在第(5)步完成后，将第(5)步制备出的GSH浓缩液，在-20℃温度下，预冻1小时后，再置于冷冻干燥机中，在压力为30Pa、温度为-60℃条件下，冷冻干燥20小时，就制备出GSH的含量为92.3％、回收率为55.7％的白色冻干粉。
(7)再生萃取剂
在第(6)步完成后，在第(4)步收集的反胶束溶液中，加入无水硫酸钠干燥剂，加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的2％。混合均匀后，静置吸水20小时，再用离心机以4000r/min的速度，离心分离10min，分别收集上层萃取剂清液和下层沉淀。对收集的上层萃取剂清液，可再次用于制备反胶束。对收集的下层沉淀，在100℃下进行烘干，可再次用作吸附水分的干燥剂。
实施例2
一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法的具体方法步骤如下：
(1)GSH提取液的制备
同实施例1，其特征为：面包干酵母的重量∶蒸馏水的体积∶二甲苯的体积比为1∶3∶0.05，振荡8小时，pH值为3.0，制备出氯化钠的摩尔浓度为0.2mol/L的还原型谷胱甘肽提取液。
(2)反胶束溶液的制备
同实施例1，其特征为：配制出P204的摩尔浓度为0.2mol/L的P204溶液，P204溶液的P204∶蒸馏水的摩尔比为1∶20，搅拌1.5小时。
(3)萃取
同实施例1，其特征为：第(1)步制备出的GSH提取液∶第(2)步制备的P204反胶束溶液的体积比为1∶4，搅拌萃取45min，用9000r/min的速度离心分离15min，再次在收集的水相中加入4倍体积的第(2)步制备的P204反胶束溶液，如此重复萃取4次。
(4)反萃取
同实施例1，其特征为：第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液∶氯化钠的摩尔浓度为0.2mol/L的氯化钠溶液的体积比为1∶4，pH值为12.0，搅拌反萃取65min，用9000r/min的速度离心分离15min，再次在收集的反胶束相中加入4倍体积的氯化钠溶液，如此重复萃取4次。
(5)制备GSH浓缩液
同实施例1，其特征为：超滤的压力为0.25Mpa，当超滤截留液体积降低至原体积0.2时，补充蒸馏水至原体积，真空浓缩的温度为70℃、真空度为0.08Mpa。
(6)制备GSH冻干粉
同实施例1，其特征为；预冻的温度为-15℃、时间为2小时，冷冻干燥的压力为50Pa、温度为-50℃、时间为30小时，制备出GSH的含量为93.6％、回收率为63.2％的白色冻干粉。
(7)再生萃取剂
同实施例1，其特征为：加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的5％，静置吸水30小时，用速度为6000r/min离心分离20min，对收集的下层沉淀，在110℃下进行烘干。
实施例3
一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法的具体方法步骤如下：
(1)GSH提取液的制备
同实施例1，其特征为：面包干酵母的重量∶蒸馏水的体积∶二甲苯的体积为1∶1.5∶0.04，振荡6小时，调节pH值为2.0，制备出氯化钠的摩尔浓度为0.1mol/L的还原型谷胱甘肽提取液。
(2)反胶束溶液的制备
同实施例1，其特征为：配制出P204的摩尔浓度为0.16mol/L的P204溶液，P204溶液的P204∶蒸馏水的摩尔比为1∶10，搅拌1小时。
(3)萃取
同实施例1，其特征为：第(1)步制备出的GSH提取液∶第(2)步制备的P204反胶束溶液的体积比为1∶3，搅拌萃取30min，用8000r/min的速度离心分离10min，再次在收集的水相中加入3倍体积的P204反胶束溶液，如此重复萃取3次。
(4)反萃取
同实施例1，其特征为：第(3)步收集的萃取有GSH的反胶束溶液∶氯化钠的摩尔浓度为0.1mol/L的氯化钠溶液的体积比为1∶3，pH值为11.0，搅拌反萃取50min，用8000r/min的速度离心分离10min，再次在收集的反胶束相中加入3倍体积的氯化钠溶液，如此重复反萃取3次。
(5)制备GSH浓缩液
同实施例1，其特征为：超滤的压强为0.25Mpa，当超滤截留液体积降低至原体积0.2时，补充蒸馏水至原体积，真空浓缩发热温度为65℃、真空度为0.07Mpa。
(6)制备GSH冻干粉
同实施例1，其特征为：预冻的温度为-18℃、时间为1小时，冷冻干燥的压力为40Pa、温度为-57℃、时间为24小时，制备出GSH的含量为95.2％、回收率为86.3％的白色冻干粉。
(7)再生萃取剂
同实施例1，其特征为：加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的4％，静置吸水24小时，用速度为5000r/min离心分离15min，对收集的下层沉淀，在105℃下进行烘干。
Claims (3)
1.一种谷胱甘肽冻干粉的制备方法，其特征在于具体的方法步骤如下：
(1)GSH提取液的制备
以面包干酵母为原料，按照面包干酵母的重量∶蒸馏水的体积∶二甲苯的体积比为1∶2～3∶0.03～0.05的比例，先在面包干酵母中加入蒸馏水，搅拌混合均匀，再加入二甲苯，并搅拌混合均匀后，置于摇床上振荡5～8小时，然后再加入与混合液等体积的蒸馏水，再进行抽滤，弃滤渣，收集滤液，对滤液用稀盐酸调节pH值为1.0～3.0，然后加入氯化钠固体，搅拌混合均匀，制备出氯化钠的摩尔浓度为0.05～0.2mol/L的还原型谷胱甘肽提取液；
(2)反胶束溶液的制备
以磷酸二辛酯为萃取剂，以正辛醇为稀释剂制备反胶束溶液，将P204加入正辛醇中，搅拌均匀后，配制出P204的摩尔浓度为0.1～0.2mol/L的P204溶液，然后按P204溶液的P204∶蒸馏水的摩尔比为1∶5～20的比例，在P204溶液中加入蒸馏水，搅拌0.5～1.5小时；
(3)萃取
在第(1)步和第(2)步完成后，按第(1)步制备出的GSH提取液∶第(2)步制备的P204反胶束溶液的体积比为1∶2～4的比例，先将GSH提取液和P204反胶束溶液置于萃取器中，然后进行搅拌萃取10～45min，再用离心机以7000～9000r/min的速度，对其进行离心分离5～15min后，静置分层，分别收集上层反胶束相和下层水相，然后再次在收集的水相中，加入2～4倍体积的第(2)步制备出的P204反胶束溶液，再次进行萃取和离心分离，再次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复萃取2～4次，最后合并各次收集的上层萃取有GSH的反胶束溶液；
(4)反萃取
第(3)步完成后，按第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液∶氯化钠的摩尔浓度为0.05～0.2mol/L的氯化钠溶液的体积比为1∶2～4的比例，先将萃取有GSH的反胶束溶液置于萃取器中，再加入氯化钠溶液，搅拌混合均匀，最后用氢氧化钠溶液调节其pH值为10.0～12.0，进行搅拌反萃取35～65min，再用离心机以7000～9000r/min的速度，对其进行离心分离5～15min，静置分层后，分别收集下层水相和上层反胶束相，然后，再次在收集的反胶束相中，再次加入2～4倍体积的氯化钠溶液，再次调节pH值，再次进行反萃取和离心分离，再次分别收集下层水相和上层反胶束相，如此重复反萃取2～4次，最后，分别合并各次收集的反萃取有GSH的下层水相和反萃取后的上层反胶束相；
(5)制备GSH浓缩液
第(4)步完成后，将第(4)步最后收集的反萃取有GSH的下层水相，置于截留分子量为1000的超滤器中，在压力为0.1～0.25Mpa下，进行超滤，当超滤截留液体积降低至原体积0.1～0.2时，补充蒸馏水至原体积，再进行超滤，如此重复，直至超滤滤过液中无氨基酸反应为止，再分别收集超滤截留液和超滤滤过液，然后将收集的超滤截留液，置于真空浓缩器中，在温度为60～70℃、真空度为0.06～0.08Mpa的条件下，进行真空浓缩，对收集的超滤滤过液，通过真空浓缩器，进行真空浓缩为复合氨基酸浓缩液；
(6)制备GSH冻干粉
在第(5)步完成后，将第(5)步制备出的GSH浓缩液，在-20～-15℃温度下，预冻1～2小时后，再置于冷冻干燥机中，在压力为30～50Pa、温度为-60～-50℃条件下，冷冻干燥20～30小时，就制备出白色的GSH冻干粉；
(7)再生萃取剂
在第(6)步完成后，在第(4)步最后收集的反胶束溶液中，加入无水硫酸钠干燥剂，加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的2～5％，混合均匀后，静置吸水20～30小时，再用离心机以4000～6000r/min的速度，离心分离10～20min，分别收集上层萃取剂清液和下层沉淀，对收集的下层沉淀，在100～110℃下进行烘干。
2.按照权利要求1所述的谷胱甘肽冻干粉的制备方法，其特征在于具体的方法步骤如下：
第(1)步中，面包干酵母的重量∶蒸馏水的体积∶二甲苯的体积比为1∶2∶0.03，振荡5小时，pH值为1.0，制备出氯化钠的摩尔浓度为0.05mol/L的还原型谷胱甘肽提取液；
第(2)步中，配制出P204的摩尔浓度为0.1mol/L的P204溶液，P204溶液的P204∶蒸馏水的摩尔比为1∶5，搅拌0.5小时；
第(3)步中，第(1)步制备出的GSH提取液∶第(2)步制备的P204反胶束溶液的体积比为1∶2，搅拌萃取10min，用7000r/min的速度离心分离5min，再次在收集的水相中加入2倍体积的第(2)步制备的P204反胶束溶液，如此重复萃取2次；
第(4)步中，第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液∶氯化钠的摩尔浓度为0.05mol/L的氯化钠溶液的体积比为1∶2，pH值为10.0，搅拌反萃取35min，用7000r/min的速度离心分离5min，再次在收集的反胶束相中加入2倍体积的氯化钠溶液，如此重复萃取2次；
第(5)步中，超滤的压力为0.1Mpa，当超滤截留液体积降低至原体积0.1时，补充蒸馏水至原体积，真空浓缩的温度为60℃、真空度为0.06Mpa；
第(6)步中，预冻的温度为-15℃、时间为2小时，冷冻干燥的压力为50Pa、温度为-50℃、时间为30小时，制备出GSH的含量为93.6％、回收率为63.2％的白色冻干粉；
第(7)步中，加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的2％，静置吸水20小时，用速度为4000r/min离心分离10min，对收集的下层沉淀，在100℃下进行烘干。
3.按照权利要求1所述的谷胱甘肽冻干粉的制备方法，其特征在于具体的方法步骤如下：
第(1)步中，面包干酵母的重量∶蒸馏水的体积∶二甲苯的体积比为1∶3∶0.05，振荡8小时，pH值为3.0，制备出氯化钠的摩尔浓度为0.2mol/L的还原型谷胱甘肽提取液；
第(2)步中，配制出P204的摩尔浓度为0.2mol/L的P204溶液，P204溶液的P204∶蒸馏水的摩尔比为1∶20，搅拌1.5小时；
第(3)步中，第(1)步制备出的GSH提取液∶第(2)步制备的P204反胶束溶液的体积比为1∶4，搅拌萃取45min，用9000r/min的速度离心分离15min，再次在收集的水相中加入4倍体积的第(2)步制备的P204反胶束溶液，如此重复萃取4次；
第(4)步中，第(3)步最后收集的萃取有GSH的反胶束溶液∶氯化钠的摩尔浓度为0.2mol/L的氯化钠溶液的体积比为1∶4，pH值为12.0，搅拌反萃取65min，用9000r/min的速度离心分离15min，再次在收集的反胶束相中加入4倍体积的氯化钠溶液，如此重复萃取4次；
第(5)步中，超滤的压力为0.25Mpa，当超滤截留液体积降低至原体积0.2时，补充蒸馏水至原体积，真空浓缩的温度为70℃、真空度为0.08Mpa；
第(6)步中，预冻的温度为-15℃、时间为2小时，冷冻干燥的压力为50Pa、温度为-50℃、时间为30小时，制备出GSH的含量为93.6％、回收率为63.2％的白色冻干粉；
第(7)步中，加入的无水硫酸钠的质量为收集的反胶束溶液体积的5％，静置吸水30小时，用速度为6000r/min离心分离20min，对收集的下层沉淀，在110℃下进行烘干。
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