CN101302477A - 一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法,以葡萄糖酸钠生产中分离得来的菌株为出发菌株,经活化培养基培养后,取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象,经保温处理后进行平板涂布,经恒温培养和紫外线照射后以牛皮纸包扎再进行恒温培养,选取变色透明圈较大的菌落培养成成熟饱满的斜面孢子,经摇床筛选出高转化率的葡萄糖酸钠菌株。本发明所述的菌株在高峰期降糖速率达到2.5%/h,发酵罐生产中转化率达到117%以上,发酵周期14h以内,提取率95%以上,提高了初糖浓度,缩短了发酵周期,降低了残糖,降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物的培育方法。
背景技术
目前,葡萄糖酸钠的制备工艺是利用青酶或曲霉,采用通气搅拌深层发酵技术,发酵时间48-60小时,转化率为90%。该方法的缺点是发酵周期比较长,转化率不高。
发明内容
本发明的任务在于提供一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法,采用此方法培育出的菌株具有糖酸转化率高和产酸周期短等优点。
其技术解决方案是:
一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法,以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为100-120%的大罐中分离得来的菌株为出发菌株,经活化培养基培养后,取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象,经10-109倍数的稀释梯度,分别在60℃、70℃和80℃的温度下保温处理5分钟,然后进行菌种平板涂布,于40℃、40%的相对湿度下恒温培养6-10h,待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射1-3分钟,迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于40℃、40%的相对湿度下恒温培养3-4天,待长出的菌落中心有黑色孢子长出时,选取变色透明圈较大的菌落,将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上,在35-40℃、相对湿度40%的条件下,避光恒温培养5-6天,得到成熟饱满的斜面孢子。
将上述培养好的斜面孢子,选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选:在温度40℃,转速200r/min,湿度70-80%的相同条件下,进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选,每次筛选分别淘汰50%-60%,最终选出高转化率的葡萄糖酸钠的菌种。
本发明的有益效果是:本发明所述的菌株在高峰期降糖速率达到2.5%/h,发酵罐生产中转化率达到117%以上,发酵周期14h以内,提取率95%以上,提高了初糖浓度,缩短了发酵周期,降低了残糖,降低了生产成本。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面结合实施例来更加详细的描述本发明。然而这些实施例只是起到说明的作用,本发明并不局限于这些实施例。
实施例1:以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为100%的大罐中分离得来的菌株为出发菌株,经活化培养基培养后,取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象,经10-109倍数的稀释梯度,分别在60℃、70℃和80℃的温度下保温处理5分钟,然后进行菌种平板涂布,于40℃、40%的相对湿度下恒温培养6小时,待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射1分钟,迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于40℃、40%的相对湿度下恒温培养3天,待长出的菌落中心有黑色孢子长出时,选取变色透明圈较大的菌落,将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上,在35℃、相对湿度40%的条件下,避光恒温培养5天,得到成熟饱满的斜面孢子。
将上述培养好的斜面孢子,选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选:在温度40℃,转速200r/min,湿度70%的相同条件下,进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选,每次筛选分别淘汰50%,最终选出高转化率的葡萄糖酸钠的菌种。
经测试,在500L小试自动罐上采用38%的糖浓度,无机盐MgSO4·7H2O含量为0.25%,KH2PO4含量为0.18%,(NH4)2HPO4含量为0.14%,FeSO4·7H2O含量为0.1%,NH4NO3含量为0.1%,尿素含量为0.1%的发酵培养基中,控制发酵温度35℃,溶解氧10%,压力1Mpa,PH值6.0,葡萄糖酸钠菌种的发酵周期缩短为14小时,初糖提高到38%,且残糖降低为0.4%,产品转化率达到117%,并且从根本上改变了以往的随周期加长,钠离子浓度加大而降糖变缓的情况,不受钠离子浓度的影响,在工艺操作稳定的情况下保持降糖高峰直至结束。
实施例2:以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为110%的大罐中分离得来的菌株为出发菌株,经活化培养基培养后,取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象,经10-109倍数的稀释梯度,分别在60℃、70℃和80℃的温度下保温处理5分钟,然后进行菌种平板涂布,于40℃、40%的相对湿度下恒温培养8小时,待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射2分钟,迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于40℃、40%的相对湿度下恒温培养4天,待长出的菌落中心有黑色孢子长出时,选取变色透明圈较大的菌落,将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上,在38℃、相对湿度40%的条件下,避光恒温培养6天,得到成熟饱满的斜面孢子。
将上述培养好的斜面孢子,选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选:在温度40℃,转速200r/min,湿度75%的相同条件下,进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选,每次筛选分别淘汰55%,最终选出高转化率的葡萄糖酸钠的菌种。
经测试,在大生产100m3发酵罐上采用38%的糖浓度,无机盐MgSO4·7H2O含量为0.25%,KH2PO4含量为0.18%,(NH4)2HPO4含量为0.14%,FeSO4·7H2O含量为0.1%,NH4NO3含量为0.1%,尿素含量为0.1%的发酵培养基中,控制发酵温度45℃,溶解氧60%,压力2Mpa,PH值6.3,葡萄糖酸钠菌种的发酵周期缩短为13小时,初糖提高到39%,且残糖降低为0.3%,产品转化率达到116%,并且改变了以往的随周期加长,钠离子浓度加大而降糖变缓的情况,不受钠离子浓度的影响,在工艺操作稳定的情况下保持降糖高峰直至结束。
实施例3:以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为120%的大罐中分离得来的菌株为出发菌株,经活化培养基培养后,取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象,经10-109倍数的稀释梯度,分别在60℃、70℃和80℃的温度下保温处理5分钟,然后进行菌种平板涂布,于40℃、40%的相对湿度下恒温培养10小时,待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射3分钟,迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于40℃、40%的相对湿度下恒温培养5天,待长出的菌落中心有黑色孢子长出时,选取变色透明圈较大的菌落,将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上,在40℃、相对湿度40%的条件下,避光恒温培养6天,得到成熟饱满的斜面孢子。
将上述培养好的斜面孢子,选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选:在温度40℃,转速200r/min,湿度80%的相同条件下,进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选,每次筛选分别淘汰60%,最终选出高转化率的葡萄糖酸钠的菌种。
经测试,在大生产100m3发酵罐上采用38%的糖浓度,无机盐MgSO4·7H2O含量为0.25%,KH2PO4含量为0.18%,(NH4)2HPO4含量为0.14%,FeSO4·7H2O含量为0.1%,NH4NO3含量为0.1%,尿素含量为0.1%的发酵培养基中,控制发酵温度50℃,溶解氧90%,压力3Mpa,PH值6.5,葡萄糖酸钠菌种的发酵周期缩短为12.8小时,初糖提高到38%,且残糖降低为0.36%,产品转化率达到117.4%,并且改变了以往的随周期加长,钠离子浓度加大而降糖变缓的情况,不受钠离子浓度的影响,在工艺操作稳定的情况下保持降糖高峰直至结束。
Claims (1)
1、一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法,其特征在于以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为100-120%的大罐中分离得来的菌株为出发菌株,经活化培养基培养后,取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象,经10-109倍数的稀释梯度,分别在60℃、70℃和80℃的温度下保温处理5分钟,然后进行菌种平板涂布,于40℃、40%的相对湿度下恒温培养6-10h,待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射1-3分钟,迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于40℃、40%的相对湿度下恒温培养3-4天,待长出的菌落中心有黑色孢子长出时,选取变色透明圈较大的菌落,将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上,在35-40℃、相对湿度40%的条件下,避光恒温培养5-6天,得到成熟饱满的斜面孢子;将上述培养好的斜面孢子,选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选:在温度40℃,转速200r/min,湿度70-80%的相同条件下,进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选,每次筛选分别淘汰50%-60%,最终选出高转化率的葡萄糖酸钠菌株。
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CN102086149A (zh) * | 2009-12-04 | 2011-06-08 | 西王集团有限公司 | 一种葡萄糖酸钠提取的新方法 |
CN102517347A (zh) * | 2011-12-16 | 2012-06-27 | 青岛琅琊台集团股份有限公司 | 一种采用半连续发酵工艺制备葡萄糖酸钠的方法 |
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