CN101297827B - 治疗冠心病的药物及涂覆有该药物的冠状动脉涂层支架 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗冠心病的中药组合物，所述中药组合物由徐长卿、三七或其有效成分的提取物按一定重量配比制成。本发明还公开了一种涂覆有上述药物的冠状动脉涂层支架。经临床实践，本发明的药物及冠状动脉涂层支架对冠心病的治疗具有很好的效果。

Description

治疗冠心病的药物及涂覆有该药物的冠状动脉涂层支架

技术领域

本发明涉及一种治疗冠心病的药物及涂覆有该药物的冠状动脉涂层支架。

背景技术

冠状动脉心脏病(coronary artery disease，CAD)简称冠心病，是指因冠状动脉狭窄、供血不足而引起的心肌机能障碍和(或)器质性病变。目前，冠心病已经成为威胁中国城市和农村居民生命健康的“头号杀手”。并且老龄化和城市化进程的加快，体力活动减少和饮食结构不合理等问题日益严重，我国目前冠心病患者高达6000万人。而且随着物质生活水平的不断提高，其发病率也在不断递增，它不但是老年人的常见病，也正在渐渐逼近年轻人。

冠心病绝大多数由冠状动脉粥样硬化引起。冠状动脉粥样硬化占冠状动脉性心脏病的绝大多数(95％-99％)。既往认为动脉粥样硬化是一个进行性的线性发展过程，由于脂质的沉积、动脉内膜下的斑块逐渐增大突入管腔，造成管腔狭窄和组织缺血，最终导致急性心脑血管事件的发生。近年来研究发现急性冠脉综合征(ACS)多发生于冠状动脉轻、中度狭窄的患者，导致急性心血管病事件的主要原因是动脉粥样硬化斑块破裂和血栓形成，后者取决于斑块的易损性(vulnerablity)。动脉粥样硬化斑块从稳定变为易损的过程涉及到炎症、免疫、代谢、凝血等多个环节，其中炎症反应是引起斑块不稳定的关键因素。虽然目前在改善斑块易损性方面取得突破性进展，尤其是他汀类药物和噻氯吡啶类药物的临床应用，但仍有很多问题需要进一步深入研究。并且目前尚没有改善斑块易损性的理想药物。积极探讨治疗冠心病的药物，特别是改善斑块易损性的药物包括中西医结合防治策略仍有重大意义。

自1987年Sigwart等首次将金属支架置入冠状动脉以来，经历了金属裸支架和药物洗脱支架时代，后者有效降低了支架内再狭窄，已证实药物洗脱支架是目前治疗冠心病的有确切疗效的三大手段之一，在冠心病的治疗中越来越得到广泛的应用。但是2006年在西班牙巴塞罗那召开的世界心脏病学大会和欧洲心脏病学年会上，Gamenzind报告了第一代药物洗脱支架CYPHER和TAXUS安全性的汇总分析，该研究汇总了已发表或公布的随机对照研究，结果表明，在支架置入的3年内死亡和Q波心肌梗死发生率，在CYPHER支架组较裸支架对照组轻度但有意义的增加(6.3％比3.9％，P＝0.03)。2007年新英格兰医学杂志发表了Stone等对4项CYPHER和5项TAXUS与裸支架的随机对照研究，基于患者水平随访4年的汇总分析，结果表明4年支架血栓总发生率在CYPHER支架组与裸支架组无显著差别(1.2％比0.6％，P＝0.20)，TAXUS支架组与裸支架组亦无显著差异(1.3％比0.9％，P＝0.30)。然而支架置入1-4年内CYPHER支架组支架血栓的发生率明显高于裸支架对照组(0.6％比0％，P＝0.025)，TAXUS支架组血栓发生率也明显高于裸支架组(0.7％比0.2％，P＝0.028)，该汇总分析显示，尽管置入药物洗脱支架整体上安全而有效，但是在支架置入1-4年间极晚期血栓发生率在药物洗脱支架组显著增加。因此在药物洗脱支架时代，如何防治支架血栓尤其是晚期和极晚期支架血栓成为目前人们的研究热点。

发明内容

因此，对能够更好治疗冠心病，特别是改善斑块易损性的中药及其有效成分的组合物、以及能够防治支架血栓，尤其是晚期和极晚期支架血栓的冠状动脉涂层支架存在着巨大的临床需求。

发明人经临床研究表明，一些中药及其有效成分的组合物对冠心病，特别是改善斑块易损性方面显示卓越疗效，且能够减少西药的副作用。发明人根据多年临床经验，提出急性冠脉综合征“络风内动”假说，认为急性冠脉综合征发病急骤，临床表现变化多端，类似中医风证；病位在心络，病因为风寒内侵、饮食不当、情志失调和年老体虚等；病机属痰瘀湿浊郁蒸腐化，凝聚成毒，化热生风；或久病入络，脉络空虚，血虚生风，据此提出急性冠脉综合征“络风内动”假说。

风善行数变，故其发病迅速，而且常是飘忽不定，临床表现变化多端，《内经·风论》：“风者百病之长，至其变化，乃为他病也。无常方，然致有风气也。”尽管风易变生他病，没有固定的发病时间和部位，但毕竟“致有风气”，有因可查，并非不可捉摸，《素问·至真要大论》曰：“诸风掉眩，皆属于肝”。后世进一步认识到风证包括外风和内风，外风如风邪袭表、风中脏腑经络；内风除肝风内动外，尚有热极生风、血虚生风等。《素问·至真要大论》曰：“风胜则动”，肢体、头部属外观振摇，头晕目眩则为自觉摇动，皆属风象。依次取类比象，冠状动脉粥样硬化斑块突发裂纹或破裂伴随血栓形成，引发急性冠脉综合征，表现为突然发作、剧烈胸痛，亦属内风范畴。《素问·缪刺论》曰“邪客于足少阴之络，令人卒心痛”，指出邪客络脉可致心痛；《诸病源候论·久心痛候》云“其久心痛者，是心之别络，为风之冷热所乘痛也，故成疹不死，发作有时，经久不瘥也”指出心绞痛属于心络病变，因此发明人提出“络风”的概念。

冠心病属本虚标实，本虚者心肝脾肾等脏腑亏虚，心阳气虚无以温养、心阴血亏无以濡润，心络失养，不荣则痛；标实者寒凝、气滞、痰浊、血瘀等阻于心之络脉，不通则痛。尤其血瘀和痰浊属同源异物，因此常兼夹为患，因为痰乃津液之变，瘀乃血液凝滞，由于津血同源，所以痰瘀相关。痰浊、瘀血等有形病理产物阻于心络，络脉为病有两种形式：初病入络多是由络到经，再及脏腑，除外伤、手术为血瘀致患外，其余多食外邪入侵所致，如风邪中络或风痰入络；久病入络多是从脏腑影响经脉，后至络脉，而且多为血瘀、痰浊，常有形可见表现为疼痛，故《素问·痹论》：“病久入深，营卫之行涩，经络失疏，故不通”。痰浊、瘀血等有形病理产物阻于心络，形成动脉粥样硬化斑块。动脉粥样硬化的形成有三种比较公认的学说：脂质侵润学说、血栓形成学说和损伤反应学说。脂质侵润学说认为动脉粥样硬化的形成是血管壁对血浆中脂质侵入的一种反应，临床应用化痰除湿药可改善高脂血症患者的症状，推论形成动脉粥样硬化的脂质侵入可能与痰浊攀沿心络相关，瘀阻心络的观点与血栓形成学说更是不谋而合。至若损伤反应学说则认为，一些损伤因素如高胆固醇、高血压时血流剪切应力变化等并未引起内皮细胞形态发生变化，但可导致其通透性发生改变，血浆脂蛋白等成分更易进入动脉壁，促进痰浊入络的发生；严重的内皮损伤可导致内皮细胞剥脱，内皮下胶原等得以与血小板和其他血液成分接触，引起血小板聚集、形成血栓，导致瘀血内阻。

正虚邪实阻络日久，痰瘀湿浊郁蒸腐化，凝聚成毒，化热生风；或痰瘀阻滞心络，久病入络，脉络空虚，血虚生风，此热化之风或血虚之风均属“络风”。因此络风之根源在于痰瘀湿浊，痰瘀湿浊郁蒸腐化，凝致水气、热毒之邪，此痰瘀、湿浊、水气、热毒结聚形成“软斑块”，使斑块变为易损，临床导致急性冠脉综合症的发生。

本发明的目的在于提供一种治疗冠心病的中药组合物，以及提供一种可以防治支架血栓和支架内再狭窄的冠状动脉药物涂层支架。

本发明的中药组合物由重量组分为徐长卿10-40份、三七1-5份或其有效成分的提取物制成。

这是针对本发明人提出的急性冠脉综合征“络风内动”假说而设计的。在冠状动脉粥样硬化性心脏病的防治策略中，强调活血化瘀的同时，可能应该考虑使用“风药”。络风内动，当以活血通络、化瘀逐风。此热化之风或血虚之风均属“络风”，治疗当以通络逐风为主。因此以逐风通络、活血化瘀的徐长卿为君药，辅以散瘀止血，消肿定痛的三七为臣药。徐长卿是萝藦科植物徐长卿(Cynanchum paniculatum(Bge.)Kitag)的干燥根及根茎。味辛，性温；疏风解热，行气活血。对于喂饲胆固醇食物引起的家兔实验性高血脂症和实验性动脉粥样硬化模型，徐长卿有降低血清总胆固醇和β-脂蛋白的作用，并可减轻主动脉粥样硬化及小动脉脂类沉积，从而表明徐长卿对动脉粥样硬化有防治作用。常用量3-9g，内服，煎汤。徐长卿的有效成分主要为丹皮酚和多糖，丹皮酚为主要活性成分。三七是五加科植物三七(Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen)的根。味甘、微苦，性温；散瘀止血，消肿定痛。用于各种内、外出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。三七具有良好的止血功效、显著的造血功能；能加强和改善冠脉微循环；常用量3～9g。三七皂苷是三七主要有效活性成分。

优选地，所述中药组合物的剂型为任何一种药剂学上所说的剂型。

更优选地，所述中药组合物的剂型为滴丸。

本发明还提出了一种冠状动脉药物涂层支架，所述冠状动脉涂层支架上涂覆有上述的由徐长卿、三七制成的中药组合物。这种冠状动脉涂层支架可以防治支架血栓和支架内再狭窄。

本发明还提供另一种治疗冠心病的中药组合物。该中药组合物主要由重量组分为徐长卿10-40份、三七1-5份、地龙(或水蛭)1-20份或其有效成分的提取物制成。

地龙是参环毛蚓(Pheretima aspergillum)、缟蚯蚓(Allolobophoracaliginosa trapezoides)的新鲜或干燥体。味咸、性寒；清热，镇痉，利尿，解毒。常用量5-15g。热病惊狂、小儿惊风、咳喘、头痛目赤、咽喉肿痛、小便不通、风湿关节疼痛，半身不遂等症。外用涂丹毒、漆疮等症。蚯蚓纤溶酶(earthworm fibrinolytic enzymes，EFE，又称蚓激酶)是从蚯蚓中提取并纯化到的一类能溶解血纤维蛋白的酶类，大量实验证明，蚯蚓提取物具有强烈的直接溶解血栓和人纤维蛋白的活性。水蛭为水蛭科动物蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)、水蛭(Hirudonipponica Whitman)或柳叶蚂蟥(Whitmania acranulata Whitman)的干燥全体，具有破血、逐瘀、痛经，用于癥瘕痞块、血瘀经闭、跌扑损伤。作为常用的活血化瘀中药，水蛭在中药临床广泛用于脑血栓、冠心病、脑水肿等疾病的治疗，其有效成分主要是水蛭素(Hirudin)。水蛭素能阻止凝血酶对血小板的作用，抑制血小板受凝血酶的刺激而释放，从而延缓或阻止血液的凝固。研究表明，水蛭素是由65个氨基与3个二硫键组成的多肽，分子量约为7000，在干燥状态下稳定存在；室温下，在水中稳定存在六个月，80℃下加热15min不被破坏；提高溶液的pH值，其稳定性下降；20℃下，在0.1mol·L^-1的HCI或NaOH中可稳定15min。

优选地，所述中药组合物中还包括冰片0.1-1份(重量组分)。

冰片(borneol)是龙脑香科植物龙脑香(Dryobalanops aromaticaGaertn)的树脂加工品或其树干木屑经蒸馏冷却而得的结晶。味辛、苦，微寒；开窍醒神，清热止痛。用于闭证神昏。本品有开窍醒神之功效，性偏寒凉，为凉开之品，宜用治热病神昏、痰热内闭、暑热卒厥、小儿惊风等热闭，常与牛黄、麝香、黄连等配伍，如安宫牛黄丸。若与温里祛寒及性偏温热的开窍药配伍，也可以治疗寒闭。本品用治冠心病心绞痛，有一定疗效。入丸散，每次0.03-0.1g。不宜入煎剂。两药合用具有化瘀祛风、除湿平络之功效。

更优选地，所述中药组合物主要由重量组分为徐长卿20份、三七3份、地龙(或水蛭)10份、冰片0.3份或其有效成分的提取物制成。

所述中药组合物的剂型为任何一种药剂学上所说的剂型。

优选的，所述中药组合物的剂型为滴丸。

本发明还提供一种冠状动脉药物涂层支架，其中所述冠状动脉涂层支架上涂覆有上述包含有徐长卿、三七、地龙(或水蛭)、冰片的中药组合物，这种冠状动脉药物涂层支架可以防治支架血栓和支架内再狭窄。

具体实施方式

以下通过试验例进一步阐述本发明所述中药组合物的有益效果。

试验例1本发明的中药组合物对兔动脉粥样硬化模型炎症因子的影响。

炎症因子是冠心病发生、发展和维持的因素，越来越多的实验证据和流行病学资料表明，炎症反应与冠心病密切相关，炎症因子增加是造成冠状动脉壁粥样斑块形成、引起冠心病的始动和维持因素，炎症加重了斑块的不稳定性，因此积极干预冠心病患者炎症因子，改善斑块的稳定性，是冠心病治疗的关键。本实验通过建立兔动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)模型，观察心络衡口服液(简称心络衡)对兔血清hs-CRP、MMP-2、CD40L、PAPP-A等炎症因子的影响。

1材料与方法

1.1材料

健康新西兰家兔，雄性，体重(2.5±0.5)Kg，北京大学医学部实验动物科学部提供，许可证编号：(京)2007-0006。实验在北京军区总医院实验动物中心完成，室温19±3℃，相对湿度39±12％。心络衡(徐长卿，三七，地龙，冰片，北京军区总医院制剂中心生产)，复方丹参滴丸(天津天士力制药公司生产)，主要试剂：hs-CRP、MMP-2试剂盒(北京博大泰克生物公司)，CD40L、PAPP-A试剂盒(美国生物技术联合公司)。主要仪器：全自动生化检测仪(Beckman公司)，TGL-16G-A型低温高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2方法

1.2.1动物模型制备与分组处理

为熟悉实验操作步骤，优选最佳配比，发明人在预实验(A组(徐长卿20g，三七1g)、B组(徐长卿20g，三七10g)、C组(徐长卿20g，三七3g)的基础上选择最佳配比为徐长卿20g，三七3g。

将50只家兔分笼喂养，实验环境下用普通饲料适应性喂养1周后，按体重随机分为5组，每组10只，造模方法参照《药理实验方法学》(第二版)。A组(正常对照组)喂普通饲料，其它4组高脂饲料(1.5％胆固醇、5％猪油、10％蛋黄粉、83.5％基础饲料)喂养4周，B组(徐长卿20g，三七3g)、C组(徐长卿20g，三七3g，地龙10g)、D组(心络衡：徐长卿20g，三七3g，地龙10g，冰片0.3g)，E组(复方丹参滴丸对照组)，4周后A组继续给予普通饲料喂养，B、C、D组停喂高脂饲料，给予普通饲料喂养，并按20ml/日的剂量将上述中药(含生药3g/ml)灌胃，早、晚1次，给药剂量参照《药理实验方法学》(第二版)，按人和动物间体表面积折算的等效比值。E组给予复方丹参滴丸10粒融水20ml灌胃，早、晚各1次。4周后全部实验动物戊巴比妥腹腔注射麻醉，腹主动脉取血10ml留检后，空气栓塞处死。

1.2.2统计学处理

所有数据用SPSS12.0统计软件包进行处理，实验数据以均数±标准差(x±s)表示，计量资料采用t检验，计数资料用卡方检验。

2.结果

酶联免疫吸附试验法(ELISA法)检测各组治疗后血清hs-CRP、MMP-2、CD40L、PAPP-A等水平的变化。(见表1)

表1各组血清hs-CRP、MMP-2、CD40L、PAPP-A水平的改变(X±S)

注：经t检验，^△与A组相比P＜0.01；^△△与E组相比P＜0.05；^△△△与D组相比P＜0.05

3.讨论

近年来的研究表明炎症反应在冠心病的发生、发展中起主要作用，炎症反应是引起斑块不稳定的关键因素，因此降低循环中的炎症反应，有利于粥样斑块的稳定，降低急性冠状动脉事件的发生。虽然目前在对炎症因子的干预方面取得一定进展，尤其是他汀类药物的临床应用，但仍有很多问题需要进一步深入研究。因此积极探讨治疗冠心病的药物包括中医药的研发有重大意义。

本研究显示，治疗后B、C、D、E组与A组血浆hs-CRP、MMP-2、CD40L、PAPP-A相比，有显著差异(P＜0.01)，一方面说明动物造模成功，另一方面说明E组选用丹参滴丸作为对照组具有可比性，该实验设计合理；同时也提示动脉粥样硬化的发生与血浆hs-CRP、MMP-2、CD40L、PAPP-A水平的升高相关。B、C、D组与E组治疗后相比P＜0.05，B、C组与D组治疗后相比P＜0.05，说明心络衡中四味药物(徐长卿、三七、地龙、冰片)对所观察的炎症因子都有作用，并且有协同降低血浆hs-CRP、MMP-2、CD40L、PAPP-A的作用，四者相互作用，选药精当，针对性强。

大量前瞻性临床研究证实，hs-CRP是诊断和预测心血管事件发生、发展的有效指标，并可作为斑块不稳定性的评价指标。CRP能促进粘附分子的释放，后者是启动动脉粥样硬化的关键步骤，可导致白细胞粘附并穿越内皮细胞加速动脉粥样硬化；CRP可促进单核细胞释放组织因子，造成机体凝血-纤溶机制失衡，减少血管内皮细胞血栓调节蛋白和组织纤溶酶原的合成，驱动凝血纤溶途径和诱导血小板活性，促进血栓形成；纤维帽破裂，直接导致血栓形成；单核细胞、粒细胞含有CRP受体，CRP的大量产生可经其受体活化这些细胞，通过直接浸润、聚集或间接作用造成血管损伤。本研究结果显示，B、C、D各组对hs-CRP均有作用，且B、C组与D组治疗后相比P＜0.05，证实心络衡能够降低血清hs-CRP水平起到抗炎作用，减轻炎症反应，并可能通过以上途径延缓动脉粥样硬化的发展，并能起到稳定斑块、降低冠脉事件的作用。

金属基质蛋白酶(MMP)是含锌的酶家族，MMP-2是金属基质蛋白酶中的明胶酶A(MMP-2)，主要功能为降解细胞外基质成分，对基质重构有重要意义，被认为在斑块内基质降解、血管平滑肌细胞迁移等过程中起重要作用，斑块破裂与MMP-2密切相关。本研究证实，心络衡能降低实验动物血浆MMP-2水平(B、C组与D组治疗后相比P＜0.05)，说明本实验药物通过金属基质蛋白酶途径而起到稳定斑块，增加斑块的稳定性。

CD40L是三聚体的跨膜糖蛋白，分子质量为49,000，属于肿瘤坏死因子家族，CD40L可诱导免疫活性细胞的黏附作用，诱导T细胞免疫反应，诱导化学趋化因子的生成，诱发细胞外基质的降解，诱导促凝物质的产生等等。CD40L与CD40结合是淋巴细胞激活的重要条件。在动脉粥样硬化斑块内，CD40L可刺激细胞迁移和细胞因子的产生、激活；CD40L可诱导内皮细胞、平滑肌细胞产生白细胞介素(IL)-6、IL-8，诱导巨噬细胞产生肿瘤坏死因子(TNF)-α，从而加重细胞损伤并放大炎症反应；CD40L可刺激内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞产生间质胶原酶等影响斑块稳定性。因而，CD40L可能是冠状动脉粥样硬化斑块的促发因素。本研究证实，本发明的中药组合物能降低实验动物血浆CD40L水平(B、C组与D组治疗后相比P＜0.05)，提示其能从动脉粥样硬化形成的根源抑制粥样斑块的形成，因而起到“治未病”的作用。

妊娠相关蛋白A(PAPP-A)是一种α球蛋白，最初在妊娠期的妇女血清中发现，主要分布于多种组织尤其在巨噬细胞和成纤维细胞中。PAPP-A主要通过作用于胰岛素样生长因子轴(IGF Axis)而发挥生物学作用，胰岛素样生长因子(包括IGF-I、IGF-II)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)以及IGFBPs蛋白水解酶三者动态平衡构成了IGFAxis。IGF Axis失衡将通过IGF-I作用于平滑肌细胞使之增殖、迁移，促进粥样斑块处的细胞外基质合成，加重冠状动脉粥样硬化形成，并与冠脉斑块破裂密切相关。IGF-I可促进巨噬细胞趋化、低密度脂蛋白过度摄入及释放促炎因子，从而影响冠状动脉粥样斑块的稳定性。IGF还可以刺激内皮细胞迁移、增殖和毛细血管网形成，与冠脉损伤后的再狭窄形成有关。本研究证实，心络衡能降低实验动物血浆PAPP-A水平(B、C组与D组治疗后相比P＜0.05)，提示心络衡能够稳定斑块，降低急性心血管事件的发病率，并有预防冠脉损伤后的再狭窄的作用。

总之，本实验通过复制高脂家兔模型、评价心络衡对动脉粥样硬化炎症因子的影响，结果表明心络衡可有效降低兔血清hs-CRP、MMP-2、CD40L、PAPP-A等炎症因子水平，推测可明显减轻炎症、稳定斑块，因而具有较大的临床应用价值。

为方便进行实验，本实施例使用口服液进行灌胃，当然也可以制备为其它的剂型，如片剂、胶囊剂、滴丸等等。

试验例2心络衡滴丸的制备

实验条件：

冷却液种类：液体石蜡  滴距：10cm滴速：20-30d/min

冷却剂温度：10℃      滴头规格：25mg 药液温度：80℃

实验结果：

A：药物(徐长卿、三七、地龙的提取物，冰片(按不同比例))混合粉末(过80目筛)，

B：PEG4000，

将上述A和B按A∶B＝1∶1.8配比进行滴制。

试验例3本发明制备的中药组合物对将90例不稳定心绞痛患者的临床效果

发明人将90例不稳定心绞痛患者随机分为常规治疗组(30例)、心络衡滴丸治疗组(30例)和通心络组(30例)三组，分别在常规治疗的基础上加服心络衡滴丸和通心络胶囊，治疗2周。结果显示心络衡组患者心绞痛缓解的总有效率为93％，显著高于通心络组和常规组(P＜0.05，P＜0.01)，心电图的改善率在心络衡组、通心络组和常规组三组之间无显著性差异(P值均＞0.05)。心络衡组治疗后血浆总胆固醇水平明显降低(P＜0.05)，常规组和通心络组则无明显变化(P＞0.05)。各组治疗前血浆CRP、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、MCP(单核巨噬细胞)-1水平均显著高于正常对照组(P值均＜0.05)，常规组和通心络组在治疗前后上述炎症指标无显著性改变(P＞0.05，P＞0.05)，心络衡组治疗前后炎症介质水平则显著性降低(P值均＜0.05)。得出结论，心络衡滴丸在缓解不稳定心绞痛症状、降低血脂水平和降低炎症反应等方面优于通心络胶囊，心络衡滴丸有显著的抗炎症作用，并由此推论心络衡滴丸可能通过逆转动脉粥样硬化斑块中痰瘀、湿浊、水气、热毒等病理产物的郁蒸腐化，从而达到稳定斑块、治疗不稳定心绞痛的目的。

试验例4“心衡”支架对猪冠状动脉血管内皮化的影响

近年，药物洗脱支架(DES)因显著降低支架内再狭窄而备受关注，被誉为经皮冠状动脉介入治疗(PCI)领域的第三次革命。然而不论是雷帕霉素(SES)涂层支架，还是紫杉醇药物涂层支架(PES)在抑制新生内膜增殖的同时，也抑制了血管的内皮化，导致支架血栓尤其是晚期支架血栓(LAST)形成，引起人们对DES的关注。既往研究证实中药心络衡滴丸具有抑制炎症因子、抗血栓等作用，提取该药的有效部位作为支架涂层制备“心衡”支架，有望减少支架置入后的血栓形成，同时降低支架置入后的再狭窄发生率。本研究的主要目的是初步评估“心衡”支架植入后对猪冠状动脉血管内皮的影响，为研发中药涂层支架提供依据。

1材料与方法

1.1实验动物及分组

健康小型雄性猪16只，月龄6～8个月，体重35～45kg，有北京农业大学实验中心提供，按体重随机分为A组(“心衡”支架载药小剂量组：徐长卿20份、三七3份、水蛭10份)、B组(中剂量组：徐长卿60份、三七3份、水蛭10份)、C(大剂量组：徐长卿100份、三七3份、水蛭10份)、D组(裸支架组)，每组4只。实验动物由北京军区总医院动物饲养中心喂养，饲养环境为常温、半封闭猪圈，每周清洁两次。

1.2动物预处理

术前高脂饮食喂养3个月，术前3天所有实验动物服用拜阿司匹林100mg/d、硫酸氯吡格雷片(泰嘉)75mg/d。

1.3“心衡”支架的制备

支架系统由北京安泰科技股份有限公司协助制作，由徐长卿、三七、水蛭的有效成分的提取物制成，根据药理实验结果，按大、中、小剂量载入支架携带系统。采用超临界CO₂萃取法提取徐长卿中丹皮酚、乙醇提取法提取水蛭素，与三七皂苷三种有效成份混合，采用超声雾化等方法将中药组合物涂覆于不锈钢支架上，制成中药涂层支架。

1.4动物模型的建立

采用国际公认的小型猪冠状动脉过度扩张再狭窄模型，所有实验动物在盐酸氯氨酮0.3ml/kg(15mg/kg)皮下注射基础麻醉，60mg/L的戊巴比妥钠肌注强化。固定动物，常规消毒、铺巾，暴露右股动脉穿刺成功后，置入6F鞘管。静脉给予普通肝素(200IU/kg)，用6FJL3.5多功能造影导管，择性冠状动脉造影，根据目标血管直径选择支架尺寸(支架血管直径比为1.1-1.2∶1)，A组、B组、C组、D组将支架分别置入小型猪的病变血管。

1.5术后处理

术后拔出动脉鞘，结扎股动脉并缝合伤口，待动物苏醒后送回动物室，普通饲料喂养，肌注青霉素300万单位，每天2次，共2天，预防感染；继续服用拜阿司匹林100mg/d、硫酸氯吡格雷片(泰嘉)75mg/d，共4周。

1.6标本取材

术后28天，所有实验动物，肌注戊巴比妥钠麻醉并处死，取出心脏，用生理盐水灌注冠状动脉，待引流液清澈后，100ml/L中性甲醛溶液100mmHg加压灌注10min，分离支架和相邻远、近端各5mm血管段，用剪刀垂直于管腔，剪取支架血管段的近、中和远端3个部分作为病理组织标本，各段标本长度约2mm，用100ml/L中性甲醛溶液固定。另取支架血管段标本2mm，纵向剖开后戊二醛和娥酸双固定，以备扫描电镜检查。

1.7标本处理

带支架血管段标本塑料包埋后，切片机切片，每血管段标本切2片，每支架共6片，HE染色制备光镜标本。组织学切片的横截面积由计算机辅助数字(LEICA-Q550IW图像分析系统)形态测量进行分析，确定管腔面积、支架围绕面积、新生内膜面积。将支架围绕面积作为正常参照管腔面积；新生内膜面积为支架围绕面积减去管腔面积。扫描电镜检查(SEM)将支架血管段纵向剖开，戊二醛和娥酸双固定，乙腈真空干燥法脱水后扫描电镜检查，评价血管内皮化情况。

1.8统计分析

所有数据采用SPSS12.0统计软件进行分析，计数资料采用x±s表示，组间比较采用两样本t检验，P≤0.05为有统计学差异。

2.结果

2.1病理学结果(见表1、图1)

表1各组病理组织切片的变化(X±S，mm²)

注：经t检验，^△与D组相比P＞0.05，^△△与D组相比P＜0.05，^△△△与A组相比P＜0.05，^△△△△与B组相比P＜0.05

2.2扫描电镜检查结果(见图2)

“心衡”支架大剂量组内皮细胞覆盖完整，排列较规整、紧密，排列方向较裸支架组更接近血流方向，细胞间隙较裸支架组小，且内皮细胞形态、大小相对一致，较裸支架组接近正常内皮细胞，内皮细胞核较裸支架组细胞核圆隆、饱满、成熟；而低剂量组和中剂量组，细胞排列、内皮细胞形态、依次次之；各组均未见血小板黏附和血小板伸出伪足等血小板激活现象；裸支架组的新生内膜表面内皮细胞排列相对紊乱，大小、形态不一，细胞核欠饱满。

3.讨论

经皮冠状动脉介入治疗术(PCI)已成为冠心病常规治疗方法，这一治疗的主要局限就是支架内再狭窄(IRS)，新生内膜过度增生导致IRS中起了重要作用，所以目前的无论是雷帕霉素(SES)还是紫杉醇药物涂层支架(PES)能抑制细胞分裂周期，阻止细胞由G1期向S期的转化，使细胞处于静止期，抑制血管平滑肌细胞(VSMCS)迁移增生和新生内膜形成；但这些药物涂层支架的作用是非选择性的，在抑制血管内膜平滑肌细胞增生的同时，也抑制内皮细胞的修复愈合，延缓血管内皮化过程；血管内皮化过程延缓的结果使支架丝、粥样斑块破裂脂质以及内膜下胶原等组织持续暴露，易于激活血凝系统和血小板聚集，促进晚发血栓形成；一旦支架内发生血栓，即可引发主要心脏不良事件，导致急性心肌梗死甚至猝死。

本研究装载于支架系统的中药组合物包括丹皮酚、三七皂苷、水蛭素等成份，现代药理研究发现，丹皮酚可降血脂，阻止胆固醇在动脉壁上沉积，减少动脉粥样硬化，可呈浓度依赖性地抑制平滑肌细胞的增殖。三七皂苷可提高血管内皮中一氧化氮(NO)含量，同时降低内皮细胞培养液内皮素(ET)含量，从而产生舒张血管、改善受损的内皮细胞某些功能，能明显抑制胞外基质的合成，且呈时间浓度依赖性；可促使明胶酶(MMP-2)的mRNA表达和蛋白分泌明显减少；具有显著降低血小板表面活性、抑制血小板黏附和聚集、抗血栓形成、改善微循环等作用。水蛭素能阻止凝血酶对纤维蛋白原的作用，阻碍血液凝固；水蛭素能活化纤溶系统，促进血栓溶解；水蛭素对凝血酶的抑制作用相对独立，无需其他凝血因子或血浆成分参与；能降低LDL-C和血清过氧化脂质(LPO)水平，可有效的阻止血清和细胞膜脂质过氧化，抑止氧化修饰的低密度脂蛋白(OX-LDL)的形成，阻止AS病变的进展。

本研究结果显示，支架植入4周后支架内面积A、B、C组与D组相比P＞0.05，说明动物造模是成功的，不存在组别差异；新生内膜面积A、B、C组与D组相比P＜0.05，说明实验组大、中、小剂量均有促进血管内皮化的作用；而B、C组与A组相比P＜0.05，C组与B组相比P＜0.05，说明该支架涂层药物对促内皮化作用成剂量依赖性，以大剂量组效果最好。电镜结果显示裸支架组的新生内膜表面内皮细胞排列相对紊乱，大小、形态不一，细胞核欠饱满；高剂量组内皮细胞覆盖完整，排列较规整、紧密，内皮细胞形态、大小相对一致，细胞核圆隆、饱满、成熟，而低剂量组和中剂量组依次较差，也证实了与病理切片相同的结论。

总之，“心衡”支架可促进内皮细胞的增殖，加速内皮化，促进内皮结构的完整，提示该支架有较好的应用前景，为今后开发新型支架扩宽了思路。

Claims (5)

1.一种治疗冠心病的中药组合物，其特征在于由下列重量组分的原料药或其有效成分的提取物制成：

徐长卿10-40份，

三七1-5份，

地龙1-20份，

冰片0.1-1份。

2.根据权利要求1所述的治疗冠心病的中药组合物，其特征在于由下列重量组份的原料药或其有效成分的提取物制成：

徐长卿20份

三七3份

地龙10份

冰片0.3份。

3.根据权利要求1-2中任一所述的治疗冠心病的中药组合物，其特征在于所述中药组合物的剂型为任何一种药剂学上所说的剂型。

4.根据权利要求1-2中任一所述的治疗冠心病的中药组合物，其特征在于所述中药组合物的剂型为滴丸。

5.一种冠状动脉涂层支架，其特征在于所述冠状动脉涂层支架上涂覆有如权利要求1-2中任一所述的中药组合物。