CN101289656B - 一种南瓜花叶病毒长期保存方法 - Google Patents

一种南瓜花叶病毒长期保存方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101289656B
CN101289656B CN2008100647355A CN200810064735A CN101289656B CN 101289656 B CN101289656 B CN 101289656B CN 2008100647355 A CN2008100647355 A CN 2008100647355A CN 200810064735 A CN200810064735 A CN 200810064735A CN 101289656 B CN101289656 B CN 101289656B
Authority
CN
China
Prior art keywords
virus
leaf
preserved
mosaic virus
insect protected
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN2008100647355A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101289656A (zh
Inventor
张俊华
崔崇士
刘学敏
孙洪利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northeast Agricultural University
Original Assignee
Northeast Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northeast Agricultural University filed Critical Northeast Agricultural University
Priority to CN2008100647355A priority Critical patent/CN101289656B/zh
Publication of CN101289656A publication Critical patent/CN101289656A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101289656B publication Critical patent/CN101289656B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)

Abstract

本发明提供了一种南瓜花叶病毒长期保存方法。首先将待保存的毒源置于防虫温室内进行隔离活化繁殖，待发病后，取中位重病叶按1∶5的比例加入0.02M pH7.0磷酸缓冲液(PBS)于研钵中研磨，研成浆糊状，四层纱布过滤，去滤渣，滤液经4000rpm离心30min，去渣，上清液装入玻璃管，按病毒粗提液体积加入0.8％谷氨酰胺酸钠、2％葡萄糖和2％丙三醇，冷冻干燥后密封保存。本发明可避免盲目增加活化病毒的次数，减少人力物力的浪费，又可使原毒种保持其活性，减少变异和污染。

Description

一种南瓜花叶病毒长期保存方法
(一)技术领域
本发明涉及一种植物病毒的保存方法，具体涉及一种南瓜花叶病毒的长期保存方法。
(二)背景技术
由南瓜花叶病毒(SqMV)侵染引起的南瓜病毒病是南瓜生产中的主要病害，在进行诸如病害发病规律及防治研究中的首要条件是如何保存毒源的活性。作为一种植物病毒病害，其毒源是一种专性寄生物，其不象真菌和细菌能够利用培养基分离培养并利用斜面培养基保存。因为病毒只能在活体植物上保存，而且需要经常性转接到植物上，非常繁琐，而且活性降低。因而寻求如何进行南瓜花叶病毒(SqMV)长期保存的方法为南瓜花叶病毒的一系列研究奠定基础。
(三)发明内容
本发明的目的在于提供一种可避免盲目增加活化病毒的次数，减少人力物力的浪费，又可使原毒种保持其活性，减少变异和污染的南瓜花叶病毒长期保存方法。
本发明的目的是这样实现的：首先将待保存的毒源置于防虫温室内进行隔离活化繁殖，待发病后，取中位重病叶按1∶5的比例加入0.02M pH7.0磷酸缓冲液(PBS)于研钵中研磨，研成浆糊状，四层纱布过滤，去滤渣，滤液经4000rpm离心30min，去渣，上清液装入玻璃管，按病毒粗提液体积加入0.8％谷氨酰胺酸钠、2％葡萄糖和2％丙三醇，冷冻干燥后密封保存。
本发明还有这样一些技术特征：
1、所述的在防虫温室内进行隔离活化繁殖步骤为：实验用具和栽培土均经高压热力消毒，取高感SqMV的南瓜种子催芽后播种，待南瓜苗长到3-4片真叶时，称取5g保存的毒源叶片放入研钵中，同时加入25ml 0.02M pH7.0磷酸缓冲液(PBS)进行研磨，将叶片研磨成浆糊状，采用摩擦接种法接种后放入防虫温室(白天20℃，晚上10℃)中待其发病；
2、所述的0.02M pH7.0PBS缓冲液为磷酸缓冲液，按照(叶片∶缓冲液＝1∶5)比例加入缓冲液(1克毒源叶片加入5毫升的磷酸缓冲液)，利用研钵研磨，将叶片研成浆糊状即可。
本发明是一种研究南瓜病毒病主要毒源长期保存效果的方法，本发明提供了一种探索南瓜花叶病毒保持年限及最佳途径，可避免盲目增加活化病毒的次数，减少人力物力的浪费，又可使原毒种保持其活性，减少变异和污染。
本发明的实验效果为：
分别取加入保护剂在-26℃冰箱保存1年、2年、3年、4年的病毒粗提液及未加保护剂在-26℃冰箱保存1年、2年、3年、4年的病毒粗提液接种到南瓜感病品种中，根据植株的犯病率测定病毒的活性，结果加入保护剂在-26℃冰箱保存1年、2年、3年、4年的病毒粗提液接种到南瓜感病品种的发病率分别为100％、100％、100％、83.3％。未加保护剂在-26℃冰箱保存1年、2年、3年、4年的病毒粗提液接种到南瓜感病品种发病率分别为50％、25％、0％、0％。结果表明：按病毒粗提液体积加入0.8％谷氨酰胺酸钠、2％葡萄糖、2％丙三醇等保护剂，冷冻干燥后密封后放入-26℃保存这种方法保存4年病毒的感染率仍达到83.3％。而将病毒粗提液直接放入-26℃保存1年病毒的感染率只能达到50％，保存2年病毒的感染率仅为25％。
表1不同保存方法下的显症率
Figure S2008100647355D00021
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明：
本实施例中首先将待保存的毒源置于防虫温室内进行隔离活化繁殖，在防虫温室内进行隔离活化繁殖，具体步骤：实验用具和栽培土均经高压热力消毒，取高感SqMV的南瓜种子催芽后播种，待南瓜苗长到3-4片真叶时，称取5g保存的毒源叶片放入研钵中，同时加入25ml0.02M磷酸缓冲液(pH7.0)进行研磨，将叶片研磨成浆糊状。采用摩擦接种法接种后放入防虫温室(白天20℃，晚上10℃)中待其发病。
待发病后，取中位重病叶加入0.02M PBS缓冲液研磨，0.02M PBS缓冲液(pH7.0)为磷酸缓冲液，按照1∶5的比例加入缓冲液(1克毒源叶片加入5毫升的磷酸缓冲液)，利用研钵研磨，将叶片研成浆糊状即可。四层纱布过滤，去滤渣，滤液经4000rpm离心30min，去渣，上清液装入玻璃管，按病毒粗提液体积加入0.8％谷氨酰胺酸钠、2％葡萄糖和2％丙三醇，冷冻干燥后密封保存。

Claims (2)

1.一种南瓜花叶病毒长期保存方法，其特征在于：首先将待保存的毒源置于防虫温室内进行隔离活化繁殖，待发病后，取中位重病叶按每1g中位病叶加入5ml磷酸缓冲液的比例，加入0.02M pH 7.0磷酸缓冲液于研钵中研磨，研成浆糊状，四层纱布过滤，去滤渣，滤液经4000rpm离心30min，去渣，上清液装入玻璃管，按病毒粗提液体积加入0.8％谷氨酰胺酸钠、2％葡萄糖和2％丙三醇，冷冻干燥后密封保存。
2.根据权利要求1所述的一种南瓜花叶病毒长期保存方法，其特征在于：所述的在防虫温室内进行隔离活化繁殖步骤为：实验用具和栽培土均经高压热力消毒，取高感SqMV的南瓜种子催芽后播种，待南瓜苗长到3-4片真叶时，称取5g保存的毒源叶片放入研钵中，同时加入25ml 0.02M pH7.0磷酸缓冲液进行研磨，将叶片研磨成浆糊状，采用摩擦接种法接种后放入防虫温室中待其发病，防虫温室中白天20℃，晚上10℃。
CN2008100647355A 2008-06-13 2008-06-13 一种南瓜花叶病毒长期保存方法 Expired - Fee Related CN101289656B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2008100647355A CN101289656B (zh) 2008-06-13 2008-06-13 一种南瓜花叶病毒长期保存方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2008100647355A CN101289656B (zh) 2008-06-13 2008-06-13 一种南瓜花叶病毒长期保存方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101289656A CN101289656A (zh) 2008-10-22
CN101289656B true CN101289656B (zh) 2010-07-28

Family

ID=40034102

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008100647355A Expired - Fee Related CN101289656B (zh) 2008-06-13 2008-06-13 一种南瓜花叶病毒长期保存方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101289656B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105123175B (zh) * 2015-07-22 2018-01-09 四川省农业科学院作物研究所 一种玉米灰斑病的接种方法
CN105724078A (zh) * 2016-03-15 2016-07-06 云南农业大学 一种番茄斑萎病毒接种的方法
CN109666692B (zh) * 2018-11-29 2021-05-28 南京农业大学 一种发根农杆菌诱导的大豆发状根与大豆花叶病毒病害系统的方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN101289656A (zh) 2008-10-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103725637B (zh) 短小芽孢杆菌及其培养方法和应用
CN105838642B (zh) 一种防治花生病害的放线菌及其应用
CN101289656B (zh) 一种南瓜花叶病毒长期保存方法
CN105754864B (zh) 白及菌根真菌及其应用
CN102146350B (zh) 防治生姜青枯病的生防菌株3yw8
CN110305796A (zh) 一株不产黄曲霉毒素的黄曲霉菌paf-1及其用途
CN109762754A (zh) 贝莱斯芽孢杆菌、应用及抑制制剂的制备方法
CN105176885A (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其在降解有机磷农药中的应用
CN106479926B (zh) 戊唑醇农药降解菌和基于该菌的土壤生物修复菌剂及其应用
Devi et al. Evaluation of Trichoderma species against Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici for biological control of tomato wilt
CN103704022A (zh) 一种以五龄桑蚕为载体培养人工虫草的方法
FR2929489A1 (fr) Procede d'obtention de mycelium de tuber magnatum et mycelium obtenu par le procede
CN103060207B (zh) 一种利于杜鹃花属植物生长发育和菌根形成的菌液制备方法
Strullu et al. Axenic culture and encapsulation of the intraradical forms of Glomus spp.
CN109055265A (zh) 一种生防菌及其在农作物蔓枯病防治方面的应用
Senthil et al. Talc formulated fluorescent pseudomonads for sugarcane red rot suppression and enhanced yield under field conditions
CN110699305B (zh) 一种伯克氏菌及其该伯克氏菌的应用
CN110393152B (zh) 一种改良ms液体培养基及蛇足石杉无菌茎尖培养方法
CN105039173B (zh) 一种千层塔内生被孢霉菌及其应用
JP4936444B2 (ja) 白紋羽病の生物防除剤及び防除方法
CN107325973A (zh) 一株对榛椿象具有强致病力的白僵菌菌株及其应用
KR101905677B1 (ko) 천마의 생장촉진용 천연 액비
CN110551635B (zh) 一种蛇足石杉内生绿藻及其应用
CN115152798B (zh) 白囊耙齿菌pr2提取物的应用及组合物
Pandey et al. Studies on pathogenic behaviour and carpogenic germination of sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum causing stem rot of chickpea

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20100728

Termination date: 20110613