CN101250523B - 与黄瓜有毛基因Gl紧密连锁的分子标记 - Google Patents

Abstract

本发明涉及的是一种基因工程技术领域的与黄瓜有毛基因Gl紧密连锁的分子标记。它由上游引物(S-M4E3-F)和下游引物(S-M4E3-R)组成，并包括上游和下游引物PCR扩增得到的核苷酸序列，该核苷酸序列具有序列表中SEQ ID NO.1中716个核苷酸序列。它是由SRAP引物(ME4和EM3)PCR扩增得到的核苷酸序列，该核苷酸序列具有序列表中SEQ ID NO.4中738个核苷酸序列。本发明可用于黄瓜分子标记辅助育种，加速黄瓜品种育种进程。

Description

与黄瓜有毛基因Gl紧密连锁的分子标记

技术领域

本发明涉及的是一种基因工程技术领域的分子标记。特别是一种与黄瓜有毛基因Gl紧密连锁的分子标记。

背景技术

黄瓜(Cucumis sativus L.)是葫芦科(Cucurbitaceae)黄瓜属(Cucumis)一年蔓生的草本植物，原产温暖湿润的喜马拉雅山南麓的印度北部地区，传入我国栽培已有2000多年的历史，我国是黄瓜的次生起源中心。黄瓜作为世界十大重要的蔬菜作物之一，也是我国主栽蔬菜作物之一。黄瓜植株茎、叶、卷须、花萼、子房表面均覆有刚毛，多数子房表面有瘤状突起，瘤上有刺。黄瓜果实属于瓠果，由子房和花托共同发育而成，果实均有刺，但是有些品种果实上没有果瘤。通过组织学观察，黄瓜叶片上的刚毛和果实上的果刺形态结构一样，均为多细胞无腺体的表皮毛。

Robinson曾在1964年通过辐射诱变产生了黄瓜无毛类型突变体，该隐性突变基因命名为glabrous(gl)，该突变体表现为茎、叶、卷须、花萼、子房均没有表皮毛，果实表面也没有果刺和果瘤(cucumber gene list，2001)。山东农业大学的曹辰兴于1997年在华北类型黄瓜地方品种“大青把”(表现为植株有毛、有果刺和果瘤)自交后代群体中发现无毛类型的自然突变体，其表现为茎、叶、卷须、花梗、花萼、子房表面均光滑无刚毛，果实表面无刺无瘤(曹辰兴，郭红芸.黄瓜突变新类型-无毛黄瓜.中国蔬菜，1999，4：29)。用无毛类型突变体与有毛类型野生型杂交，正反交子一代均恢复有毛性状，表明植株毛的有无的性状为细胞核基因控制，通过F2和BC1群体的遗传分析，结果表明有毛(Gl)为显性，无毛(gl)为隐性，并且茎、叶、卷须等表面的表皮毛性状为一对核基因控制。用无毛黄瓜的花粉给普通有毛黄瓜的有刺无瘤(tutu)自交系授粉，子一代植株果实表面有刺有瘤，通过分离群体的遗传分析结果表明控制茎、叶、果实表皮毛性状的无毛基因对控制果瘤性状的果瘤基因存在隐性上位作用(曹辰兴等.黄瓜茎叶无毛性状与果实瘤刺性状的遗传关系.园艺学报，2001，28(6)：565-566.)，天津黄瓜研究所也在1999年发现了无毛黄瓜的自然突变体，其表现型与以前发现的突变体一致，遗传分析结果也是一对核基因控制的显性性状(马德华等.黄瓜无毛突变体的生理特性研究.园艺学报，2002，29(3)：282-284)。这些突变体为黄瓜叶片刚毛和果刺的形成机理研究提供了理想的材料。但是，目前国内外对于黄瓜无毛突变体仅限于遗传规律分析和生理特性的研究，对于黄瓜果刺形成的分子机制研究却从未有报道。

图位克隆(map-based cloning)，又称定位克隆(positional cloning)，图位克隆方法可以在基因产物未知的情况下，根据功能基因在基因组中的位置进行，在利用分离群体的遗传连锁分析或染色体异常将基因定位到染色体的一个具体位置的基础上，通过构建高密度的分子连锁图，找到与目的基因紧密连锁的分子标记，不断缩小候选区域进而克隆该基因。图位克隆方法的应用需要具备几个条件：具有高密度的分子图谱；具有大片段的基因组文库(BAC或YAC文库)及物理图谱；亲本间具有较高多态性的分离群体等。图位克隆技术主要包括以下几个步骤：1.寻找与目标基因紧密连锁的分子标记。常用的标记筛选方法主要有分离群体分组分析法(Bulked Segregant Analysis，BSA)和近等基因系法(Near-isogenic lines)。配制特殊的遗传群体是筛选与目标基因紧密连锁的分子标记的关键环节。2.筛选含有大插入片段的基因组文库。常用的文库有BAC(Bacterial artificial chromosome)文库、YAC(Yeast artificial chromosome)文库，用与目标基因连锁的分子标记筛选基因组文库，得到阳性克隆。3.目的基因区域的精细定位。用阳性克隆的末端作为探针筛选基因组文库，进行染色体步移，直到获得目标基因附近的大片段重叠群，通过整合已有的遗传图谱和寻找新的分子标记，提高目的基因区域的图谱密度。4.目的基因的分离。利用侧翼分子标记分析大群体，将目的基因定位在一个BAC克隆上，分离阳性克隆。5.目标基因的鉴定。阳性克隆中可能含有多个候选基因，找到候选基因后，通过分离群体的共分离分析或进行功能互补实验验证基因功能，其它方法如检查cDNA时空表达特点是否与表型一致、测定cDNA序列查询数据库、筛选突变体文库，找出DNA序列的变化和功能的关系都可以作为鉴定方法。但是黄瓜的基因组学研究较落后，至今没有在黄瓜上成功利用图位克隆方法克隆基因的例子，其最主要原因是不能有效获得与目标基因紧密连锁的分子标记。

利用分子标记进行基因定位，首先必须找到与该性状紧密连锁的分子标记。相关序列扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism，SRAP)标记是2001年由Li等提出的一种新型的基于PCR的分子标记(Li，G.and Quiros，C.F.Sequence-related amplified polymorphism(SRAP)，a new marker systembased on a simple PCR reaction：its application to mapping and gene taggingin Brassica.Theor.Appl.Genet.2001，103，455-461.)，该标记旨在通过独特的引物设计扩增基因组的开放阅读框(open reading frames，ORF)部分。它的引物设计思想建立在基因组研究的统计性规律(即：基因的外显子部分G/C含量较高，而内含子、启动子、基因间序列等部分A/T含量较高)基础上。它的正向引物长度为17个碱基，其中5’端前10个碱基为随机的填充性序列，第11-14为CCGG核心序列，最后面3个为随机的选择性碱基；反向引物一般18个碱基，5’端前11个也是填充性序列，紧接为AATT核心序列，最后也是3个选择性碱基。SRAP标记具有稳定性好、多态性高和广泛适用的优点，同时该标记的最大优点是较RAPD、AFLP等标记容易找到与目标基因紧密连锁的分子标记。所以找到与Gl基因紧密连锁的标记，可为下一步图位克隆这个基因打下坚实的基础。

果实是黄瓜经济性状最重要的部分，随着人们生活水平的提高，品质育种已提到重要位置。果实的品质分为感观品质、风味品质和营养品质，目前已鉴定的品质基因多为感观品质基因，如果瘤有无、果刺颜色、果刺多少、果皮颜色和果皮组织结构等等。欧美温室类型的黄瓜为无果瘤、少刺的果皮，称其为“水果”黄瓜，其市场价格为普通黄瓜的2-3倍。外观光滑的黄瓜污染少，清洗方便，食用卫生，是无公害蔬菜的理想品种。经检测表明：无瘤少刺黄瓜果肉农药残留量比有刺黄瓜低27％，果皮农药残留量低18％。黄瓜有毛基因Gl控制果刺的形成，它的研究将会加速品质育种进程，与有毛Gl连锁的分子标记也可以应用到黄瓜分子标记辅助育种的过程中。

由于黄瓜无毛基因gl对果瘤这个重要的品质基因有隐性上位作用，这表明有毛基因Gl是果瘤形成过程的必要基因。所以Gl基因的研究将有助于揭示黄瓜果瘤形成的分子机制，为黄瓜遗传和育种工作奠定基础。

发明内容

本发明目的是利用分子标记和BSA法，提供一个和与黄瓜有毛基因Gl紧密连锁的分子标记。在黄瓜有毛野生类型(GlGl)和无毛突变体(glgl)的F2代分离群体中筛选与有毛基因Gl紧密连锁的分子标记，为进一步分离和克隆Gl基因奠定基础。由于该基因决定黄瓜果刺的形成，所以该分子标记也可应用到黄瓜分子标记辅助育种工作中。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明由上游引物(S-M4E3-F)和下游引物(S-M4E3-R)组成，并包括上游和下游引物PCR扩增得到的核苷酸序列，该核苷酸序列具有序列表中SEQ IDNO.1中716个核苷酸序列。

本发明它是由SRAP引物(ME4和EM3)PCR扩增得到的核苷酸序列，该核苷酸序列具有序列表中SEQ ID NO.4中738个核苷酸序列。

本发明的分子标记是一个SCAR标记，名称为S-M4E3，来源与普通黄瓜，是由对应的SRAP标记ME4EM3转化而来的，具有序列表中SEQ ID No.1的716个碱基的DNA序列，对应的SRAP标记具有序列表中SEQ ID No.4的738个碱基的DNA序列。

由于黄瓜表皮毛(果刺)细胞开始分化的时间很早，所以在形态学上很难确定，而传统的育种方法是根据植物的形态来进行选择，耗费时间较长，本发明的SCAR标记在植物种子期间或子叶长出的早期阶段就可鉴定，即省时也准确，所以可用于黄瓜分子标记辅助育种，加速黄瓜品质育种进程。

附图说明

图1为SRAP标记分析黄瓜有毛池和无毛池的植株差异片段。P1为黄瓜有毛野生型亲本S06，P2为黄瓜无毛突变体gl。

图2为SCAR标记分析黄瓜S06×gl的F2分离群体部分植株。P1为黄瓜有毛野生型亲本S06，P2为黄瓜无毛突变体gl，F1为两亲本的杂交F1代。

具体实施方式

实施例1、与黄瓜有毛基因(Gl)紧密连锁的SRAP标记的获得

一、F2群体的亲本获得和群体的构建

普通黄瓜有毛(GlGl)野生类型的亲本S06由上海交通大学农业与生物学院黄瓜课题组提供，该自交系属于欧洲温室类型的黄瓜，其表现为全雌、有果刺、无果瘤，该自交系描述可见文献《自然科学进展》2005年发表的文献“黄瓜SRAP遗传连锁图的构建及始花节位的基因定位”(潘俊松，等.黄瓜SRAP遗传连锁图的构建及始花节位的基因定位.自然科学进展，2005，15，167-172)。黄瓜无毛突变体(glgl)由山东农业大学园艺科学与工程学院的曹辰兴馈赠，曹辰兴于1997年在华北类型黄瓜地方品种“大青把”(表现为植株有毛、有果刺和果瘤)自交后代群体中发现无毛类型的自然突变体，其表现为茎、叶、卷须、花梗、花萼、子房表面均光滑无刚毛，果实表面无刺无瘤(曹辰兴，郭红芸.黄瓜突变新类型-无毛黄瓜.中国蔬菜，1999，4：29)。

本发明利用这两个亲本配制了杂交组合，F1代自交产生F2代群体。在125株F2个体中，鉴定叶片有毛和无毛的表现型，并在结果期鉴定有无果刺的表型，看是否一致，利用卡方分析法计算分离比例。每株取一片嫩叶提取基因组DNA。

二、筛选与有毛性状连锁的分子标记

1、黄瓜基因组DNA的提取

用CTAB法提取亲本及F2代分离群体的叶片总DNA，2×CTAB缓冲液配方为：2％的CTAB，Tris·cl(PH＝8.0)100mmol/L，EDTA(PH＝8.0)20mmol/L，Nacl 1.4mol/L。方法为：取两片真叶展开时的叶片在液氮中快速研磨成粉末状，放于1.5ml的离心管中；加入预热的600μlCTAB提取缓冲液，60℃水浴0.5-1h；加入等体积氯仿异戊醇(24∶1，v/v)，混匀后12000r/min 4℃离心10min；将上清液转入新的离心管，加等体积异丙醇，轻轻混匀，冰浴0.5h以上，4℃，12000r/min 4℃离心10min；倒去上清液，用70％酒精冲洗沉淀两次，干燥后，加入TE缓冲液150μl溶解后，加入RNA酶(10μg/ml)除去RNA，37℃水浴30min后存于-20℃备用。用紫外分光光度计测定260nm和280nm的光吸收值，10D相当于50ng DNA计算DNA的含量，利用260nm和280nm的光吸收值的比值估计DNA的质量。在0.8％琼脂糖凝胶电泳，以50ng/μl的λDNA为标准，估计所得DNA的浓度。

2、有毛(Gl_)和无毛(glgl)黄瓜的基因池建立。

在F2分离群体中，用BSA法建立有毛(Gl_)和无毛(glgl)黄瓜的基因池。从分离群体中分别随机选取有毛的植株和无毛的植株个体各10株，每个基因池用10株植株的子叶混合提取DNA而成。

3、用SRAP标记筛选亲本和两个基因池之间多态的标记，从中获得与目标性状紧密连锁的分子标记。

利用16对SRAP正向引物和22对SRAP反向引物(共352个组合)对两个亲本及两个基因池进行筛选，引物由上海生工合成。PCR体系为：基因组DNA 30ng，引物0.5μmol/L，200μmol/L dNTPs，2mmol/L MgCl2，1×Taq缓冲液，0.6U TaqDNA聚合酶(上海Promega公司产品)，总反应体系为10μL。PCR扩增程序为：94℃ 3min；94℃ 20sec；37℃ 30s；72℃ 1min，8个循环；94℃ 20sec；48℃ 30s；72℃ 1min，35个循环；72℃5min。扩增产物加入10μl的上样缓冲液，混匀95℃变性5min，迅速置于冰上，冷却后取6μl上样，用4％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。电泳缓冲液为1×TBE，70W恒功率，电泳1.5-2h(或二甲苯氢指示剂距离凝胶底部约3/1处)。其中4％的丙烯酰胺凝胶为：4％丙烯酰胺和N’，N’-亚甲双丙烯酰胺(19∶1质量比)，410g/L尿素，1×TBE。上样缓冲液：98％去离子甲酰胺，10mmol/L EDTA(PH＝8.0)，0.025％二甲苯青FF，0.025％溴酚蓝。4％的测序凝胶(50ml)∶4％的丙烯酰胺凝胶50ml，10％的过硫酸铵400μl，TEMED为40μl。

电泳后进行银染。银染方法为：将带胶的玻璃板放入固定液(10％冰醋酸、1％无水乙醇)中，在摇床上轻轻摇动至指示剂颜色褪去；用超纯水洗1-3min；将冲洗后的胶板放入染色液中(2g/L硝酸银)摇动半小时；将染色后的胶板放入超纯水中漂洗5s后放入装有显影液(15g/L的NaOH，0.5％的甲醛溶液)的塑料盒中，轻轻摇动至条带清晰；放入自来水中冲洗3min；室温下干燥，干燥后拍照。

SRAP标记分析有毛和无毛基因池的差异片段结果如图1所示，其中ME4EM3这对引物在亲本和池之间表现出相同的多态性，即有毛亲本S06和有毛基因池有条带，而无毛亲本和无毛基因池没有条带，这个多态性片段长度大约为750bp。在125株F2群体分析中，将与有毛亲本S06的带型一致的有带个体计为1，将与无毛亲本gl带型一致的无带个体计为2，缺失数据计为0，通过Mapmaker3.0软件计算，结果为这个多态性位点和Gl基因之间的连锁距离为3.2cM。其中LOD≥3.0，采用Kosambi函数将重组率转化为遗传图距。

实施例2、与黄瓜Gl基因紧密连锁的SRAP标记转化为SCAR标记

SRAP标记的多态性片段的回收、克隆和测序

1、SRAP多态片段的回收

将多态性片段从聚丙烯酰胺凝胶上切下，置于离心管中，用枪头捣碎，加入超纯水冲洗三遍，然后加入10ul超纯水95℃水浴10min，快速离心取上清液，用SRAP引物ME4EM3进行PCR扩增，PCR反应体系为：目标条带DNA 5μl，引物0.5μmol/L，200μmol/L dNTPs，1×Taq Buffer，1.5mmol/L MgCl2，2U Taq DNA聚合酶(上海Promega公司产品)，总反应体系为40ul。目标条带PCR扩增程序为：94℃ 3min；35cycles，94℃ 30s；50℃ 30s；72℃ 1min；72℃ 5min。将PCR产物中加入goldview荧光染料，4℃下放置10min让染料了DNA结合，然后加入上样缓冲液(6×缓冲液：0.25％溴酚蓝，40％(w/v)蔗糖水溶液)4μl，混匀后通过1％琼脂糖凝胶电泳分离，在紫外灯下切下目标片段放入1.5ml的离心管中，用DNA回收试剂盒(上海生工UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒，产品号：Cat.No.SK1132)回收。

2、酶连反应

将回收片段用连接酶连接到pUCm-T载体(上海申能博彩公司)上，连接反应体系为：10 x Ligation Buffer加1.0μl，T-vector(35ng/μl)加1.5μl，Ligase(3U/μl)加1.0μl，回收DNA加6.5μl，总体积为10μl，在16℃下连接过夜，然后置于4℃备用

3、片段的克隆

用电击法将连有目标片段的T-vector转化进入E.coli DH5α感受态细胞(购于大连宝生物工程有限公司)，具体方法如下：吸取1ml SOB培养基置于灭菌的1.5ml的eppendorf管；取50μl感受态细胞，放入灭菌的100μl eppendorf管；取1μl连接产物加入盛装感受态细胞的eppendorf管，混匀；将加有连接产物的感受态细胞加入电击杯(规格为：2mm)，2500v电击转化；电击后将菌液洗到1ml SOB培养基中，37℃，250r/min培养1h。将菌液均匀涂布于LB固体培养基的平板上，该培养基含：氨苄100mg/ml，IPTG和x-gal。涂好的平板倒置于37℃培养箱培养过夜。用灭过菌的牙签将平板上的白斑菌落挑到2ml含氨苄(100mg/ml)的LB液体培养基中，37℃，250r/min培养2h后进行菌液PCR，剩余菌液继续在37℃，250rmp/min培养过夜。菌液PCR的反应体系为：M13引物0.1μmol/L，dNTPs 200μmol/L，1×Taq Buffer，2.0mmol/L MgCl2，0.5U TaqDNA聚合酶(上海Promega公司产品)，菌液1μl，总反应体系为10μl。菌液PCR的反应程序为：94℃ 2min；25cycles，94℃ 30s；50℃ 30s，72℃ 45s；72℃ 5min。反应产物用1.0％琼脂糖凝胶电泳分离，将扩增出预期大小片段的菌液送由上海生工进行测序。

SCAR标记的设计与分析

1、SCAR标记的设计

得到多态性片段的核苷酸序列，序列为所附序列表中的SEQ ID NO.4。根据引物设计原则(避免出现发夹结构和二聚体结构，GC含量40-60％，退火温度高于50℃)及ME4EM3多态位点片段两端的序列，应用引物设计软件Primer 3.0设计了一对20～23bp的引物S-M4E3。S-M4E3-F序列为所附序列表中的SEQ IDNO.2，S-M4E3-R序列为所附序列表中的SEQ ID NO.3。引物由上海生工合成。

2、SCAR标记的分析

用新的SCAR引物对两个亲本进行退火温度梯度筛选，在55℃-63℃下，两个亲本都可扩增出相同的条带，在64℃-66℃下，两个亲本之间表现为多态性，即有毛亲本S06有一条750bp左右的扩增条带，而无毛亲本在相同的位置没有扩增条带。进一步用F2群体125个单株进行PCR扩增，PCR体系：基因组DNA 30ng，S-M4E3引物0.2μmol/L，200μmol/L dNTPs，2mmol/L MgCl2，1×Taq缓冲液，0.5U TaqDNA聚合酶(上海Promega公司产品)，总反应体系为10μL。SCAR的扩增程序为：94℃ 3min；35cycles，94℃ 20s，65℃ 20s，72℃ 45s；72℃ 5min。1.5％琼脂糖凝胶电泳结果显示，引物S-M4E3扩增的片段来自原来SRAP标记的多态性片段，新的SCAR标记S-M4E3与和Gl基因之间的连锁距离也为3.2cM。因为S-M4E3标记是一个SCAR标记，所以在今后的分子标记辅助育种中，具有稳定和使用方便的优点，同时可以将此标记筛选黄瓜BAC文库，通过BAC末端测序得到连锁距离更近的分子标记服务与黄瓜有毛基因的图位克隆。

本发明涉及的序列及记号分别如下：

(1)SEQ ID NO.1的信息

<110>上海交通大学

<120>与黄瓜有毛基因(Gl)紧密连锁的分子标记

<160>4

<210>1

<211>716

<212>DNA

<213>黄瓜(Cucumis sativus L.)

<400>1

CGGACCACTC TGTAATGAGC CTCAGCTGGT CAGTCTGAAG AGCCATGACA TCAGTTGTTT    60

CCGAAGTCCG CTCGAAGTCG TCCTACTATC GCTTCGTCCT ACTATCGCTT CCTCGACCTG   120

GTTGTATGAT GTCGTCGGGG GACATGTTAA ACATATGGCT GGACATGGAA GGAATTTCCA   180

TATCATTGAG ATACACTTGT GCAAATTCCT CAAACCTAGG AGGAATGTTC GATGTCGGCA   240

AAGGTCTCTG CATGGGCTCC CGTTGCACGA TCTTTTCACG AATACATACG CCAACTCGTC   300

TTAATATGGG AAAGGCTTAT TTAACATACC CTTGGCTGTG ATTCTCAGCA ACAACGATGC   360

ACTTTATGAC GGGCAGCATT TCTGTGATTG CTTGGTATGC TTCAACGTCT TTATACTGCC   420

GTCAATGACT TCGCATGGAC ATTGCATCCC GACAACTTCA ACGCCATCAT TCGTAGAAGT   480

TGTGCCAGAT ACCCAGGTTT CAACGCCATC ATTCGTAGAA GTTGTGCCAG ATACGCAGGT   540

TTCAACGCCA TCATTCGTAG AAGTTGTGCC AGATACCCAA ATACCCAGGT CTTCCATCGT   600

TTCAAGGCCA TCATTCGTAG AAGTTGTGCC AGATACCCAG ATACCCAGGT CTTCCATCCA   660

CCCAATACTA ACTAAATGCG AATGCAGGAA TACTAAATCG ACACACATAG TCAATT       716

(2)SEQ ID NO.2的信息

<210>2

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>2

CGGACCACTCTGTAATGAGC                                                 20

(3)SEQ ID NO.3的信息

<210>3

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<400>3

AATTGACTATGTGTGTCGATTTA                                              23

(4)SEQ ID NO.4的信息

<210>4

<211>738

<212>DNA

<213>黄瓜(Cucumis sativus L.)

<400>4

TGAGTCCAAA CCGGACCACT CTGTAATGAG CCTCAGCTGG TCAGTCTGAA GAGCCATGAC    60

ATCAGTTGTT TCCGAAGTCC GCTCGAAGTC GTCCTACTAT CGCTTCGTCC TACTATCGCT   120

TCCTCGACCT GGTTGTATGA TGTCGTCGGG GGACATGTTA AACATATGGC TGGACATGGA   180

AGGAATTTCC ATATCATTGA GATACACTTG TGCAAATTCC TCAAACCTAG GAGGAATGTT   240

CGATGTCGGC AAAGGTCTCT GCATGGGCTC CCGTTGCACG ATCTTTTCAC GAATACATAC   300

GCCAACTCGT CTTAATATGG GAAAGGCTTA TTTAACATAC CCTTGGCTGT GATTCTCAGC   360

AACAACGATG CACTTTATGA CGGGCAGCAT TTCTGTGATT GCTTGGTATG CTTCAACGTC   420

TTTATACTGC CGTCAATGAC TTCGCATGGA CATTGCATCC CGACAACTTC AACGCCATCA   480

TTCGTAGAAG TTGTGCCAGA TACCCAGGTT TCAACGCCAT CATTCGTAGA AGTTGTGCCA   540

GATACGCAGG TTTCAACGCC ATCATTCGTA GAAGTTGTGC CAGATACCCA AATACCCAGG   600

TCTTCCATCG TTTCAAGGCC ATCATTCGTA GAAGTTGTGC CAGATACCCA GATACCCAGG    660

TCTTCCATCC ACCCAATACT AACTAAATGC GAATGCAGGA ATACTAAATC GACACACATA    720

GTCAATTCGT ACGCAGTC                                                  738

Claims (3)

1.一种与黄瓜有毛基因Gl紧密连锁的分子标记，其特征在于，该分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种与黄瓜有毛基因Gl紧密连锁的分子标记，其特征在于，该分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求1或2所述的与黄瓜有毛基因Gl紧密连锁的分子标记，其特征是，能够用于黄瓜分子标记辅助育种。

Images