CN101249063A

CN101249063A - 肝素钙/钠盐纳米口服制剂及其制备工艺

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Publication number: CN101249063A
Application number: CNA2008100601883A
Authority: CN
Inventors: 褚红女
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2008-03-14
Filing date: 2008-03-14
Publication date: 2008-08-27
Anticipated expiration: 2028-03-14
Also published as: CN101249063B

Abstract

本发明涉及一种肝素钙/钠盐纳米口服制剂及其制备方法，以及用于制备所述肝素钙纳米口服剂型的包封率高的肝素钙/钠盐纳米脂质体。所述肝素钙/钠盐纳米脂质体由如下方法制备得到：将壳聚糖溶解在1％－10％稀醋酸溶液中，壳聚糖用量为0.5～5g/100ml醋酸溶液，得到酸化的壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加1％－99％的肝素钙/钠水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物冷冻干燥，得到所述的肝素钙/钠盐纳米脂质体。本发明所述肝素钙/钠盐纳米口服制剂稳定性好、纳米包封率高达98％，体外释放率4小时高达25％；肠道吸收率好，在体内代谢时间长，半衰期随口服剂量的增加而延长，呈现零级动力学，而且组织浓度大于血药浓度，有缓慢释放的功能，家兔口服200mg后，体内血药浓度维持长达50小时以上，具有缓释作用。

Description

肝素钙/钠盐纳米口服制剂及其制备工艺

(一)技术领域

本发明涉及一种肝素钙/钠纳米口服制剂及其制备工艺及方法，以及制备所述肝素钙/钠纳米口服制剂所用的肝素钙/钠纳米脂质体。

(二)背景技术

肝素是常用的天然抗凝剂，在临床应用已经70多年，主要用于治疗高血压病、心血管病、中风、血栓形成、肾病综合症等多种疾病，应用极广，有20多种作用机制。最近研究发现肝素可以抑制恶性肿瘤增生和转移，使恶性肿瘤患者的5年生存率提高90％以上，肝素还有降血脂、退黄疸、预防肝硬化等多种作用。但是，肝素只有针剂，应用不便。

在长期的临床工作中发现，患者对针剂肝素的顺从性差，半衰期短，要反复皮下或静脉给药，不方便而痛苦，往往中途停药，导致严重脑血栓等意外事件发生而死亡。由此，口服剂的开发非常必要而且有意义。

在动物体内研究表明，纳米微粒能够通过消化道吸收，为制备肝素钙/钠口服剂提供基础。

由山东大学(联合中国药科大学)作者于2002年报道用超声波分散法制备低分子肝素纳米脂质体，所得脂质体平均粒径为89.6nm，包封率为36.1％(翟光喜等，低分子肝素纳米脂质体的制备以及大鼠口服吸收，中国药科大学学报2002.06.25；33(3)：200～202)；中国药科大学作者于2005年报道用逆相蒸发法制备低分子肝素纳米脂质体，所得脂质体平均粒径83.1纳米，包封率为23.6％，并按三元相图摸索微乳区，以螺旋振荡制备低分子肝素微乳制剂，微乳平均粒径52.8纳米(汪龙江等，低分子肝素微乳及其纳米脂质体作大鼠口服抗凝效果的比较，江苏药学与临床研究，2005.04.20；13(2)：4～6)。由于上述方法制得的低分子肝素纳米脂质体包封率均较低，无法达到《中国药典》规定的80％的标准，因此目前还未见有关低分子肝素钙/钠纳米口服剂型的文献报道，更物口服制剂投放市场。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种肝素钙/钠纳米口服剂型及其制备方法，以及用于制备所述肝素钙/钠纳米口服剂型的包封率高的肝素钙/钠纳米脂质体。

本发明采用的技术方案是：

肝素钙/钠盐纳米口服制剂，以肝素钙/钠盐纳米脂质体为主要原料制备，所述低分子肝素钙/钠盐纳米脂质体由如下方法制备得到：将壳聚糖溶解在0.1～20％浓度(w/w，优选为2％)的稀醋酸溶液中，壳聚糖用量为0.5～5g/100mL醋酸溶液(壳聚糖与溶液中的醋酸质量比优选为1∶1)，得到酸化的壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加浓度1～99％(w/w，优选为20％)的肝素钙/钠水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物冷冻干燥，得到所述的肝素钙/钠盐纳米脂质体。

本发明所述肝素钙/钠盐包括各种不同分子量的肝素钙/钠盐，以低分子肝素钙/钠盐纳米脂质体为例，其制备过程具体如下：将壳聚糖溶解在0.1～20％浓度(优选为2％，过稀产量太低，过浓要结硬块)的稀醋酸溶液中，壳聚糖用量为0.5～5g/100mL醋酸溶液(壳聚糖与溶液中的醋酸质量比优选为1∶1)，得到酸化的壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加0.1％-99.9％浓度(优选为20％，浓度太低，产量不高；浓度太高，原材料浪费)的低分子肝素钙/钠水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物冷冻干燥，得到所述的低分子肝素钙/钠盐纳米脂质体。制备得到所述低分子肝素钙纳米脂质体后，可按照本领域常规方法，直接将其包入肠溶衣或肠溶胶囊中，或者添加常规辅料后包入肠溶衣或肠溶胶囊中，得到相应制剂；或者添加相应辅料后或直接制成颗粒剂、丸剂、粉剂、膏剂、片剂等各种口服制剂。

所述低分子肝素钙/钠盐纳米口服制剂为下列剂型：胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、乳剂、糖浆等各种口服制剂。

优选的，所述低分子肝素钙/钠盐纳米口服制剂为胶囊剂，由所述低分子肝素钙纳米脂质体直接作为胶囊内容物灌入肠溶胶囊得到，胶囊内容物含肝素药量为12.5mg～200mg/粒。根据不同病情给药。

本发明还涉及所述的低分子肝素钙/钠盐纳米口服制剂的制备方法，所述低分子肝素钙/钠盐纳米口服制剂为低分子肝素钙/钠盐纳米胶囊剂，由如下方法制备得到：将壳聚糖溶解在2％浓度的稀醋酸溶液中，壳聚糖用量为2g/100mL醋酸溶液，得到酸化的壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加浓度为20％的低分子肝素钙/钠水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物冷冻干燥，得到低分子肝素钙纳米脂质体，将所述低分子肝素钙/钠盐纳米脂质体灌入肠溶胶囊，得到所述低分子肝素钙/钠盐纳米胶囊剂。

本发明还涉及用于制备所述低分子肝素钙/钠盐纳米口服制剂的低分子肝素钙/钠盐纳米脂质体，由如下方法制备得到：将壳聚糖溶解在2％浓度的稀醋酸溶液中，壳聚糖用量为2g/100mL醋酸溶液，得到酸化的壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加亚饱和的低分子肝素钙/钠水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物冷冻干燥，得到所述的低分子肝素钙/钠盐纳米脂质体。

本发明所述低分子肝素钙/钠盐纳米口服制剂的基础药学研究结果：纳米包封率高达98％(98.06±1.10％)，体外释放率4小时高达25％左右，室温下观察72小时稳定。这些特性表明产量高，性能稳定，有利于生产、运输和存储。

家兔口服200mg纳米胶囊后实验表明：肠道吸收效果良好，吸收率达39％以上，达峰时间1小时，呈现零级动力学，即半衰期随给药剂量增大而延长，组织浓度高于血药浓度，缓慢释放，组织起存储作用，有利于持续发挥药物的作用。而普通肝素针剂在人体的生物利用度是20％～30％。家兔口服200mg胶囊后，药物在动物体内代谢时间长，半衰期延长至28小时以上，作用时间长达50小时，而且出现代谢峰，这些意外发现表明，纳米肝素口服剂有缓释作用，与针剂比较有明显的优点：针剂在人体的半衰期约3小时，作用时间短，故病人需要反复用药，忍受皮肉之痛。口服剂型与针剂比较还有许多优点，即方便、经济、环保和人性化，属绿色药物范畴，值得大力开发。

本发明的有益效果主要体现在：所述低分子肝素钙/钠盐纳米口服制剂稳定性好、纳米包封率高达98％，体外释放率4小时高达25％；肠道吸收率好，在体内代谢时间长，作用时间长达50小时，具有缓释作用，经济、方便、环保，更人性化为人类健康服务。

(四)附图说明

图1为低分子肝素钙标准液(100mg/L)图谱；

图2为兔口服胶囊吸收图谱；

图3为兔静脉注射肝素针剂后2小时血浆图谱；

图4为兔口服200mg胶囊代谢图谱；

图5为兔口服28小时血浆图谱；

图6为志愿者口服胶囊50mg 3小时后血浆图谱(相当于3.05mg/L)；

图7为志愿者口服胶囊50mg 4小时后血浆图谱(相当于7.46mg/L)；

图8为志愿者口服胶囊50mg 5小时后血浆图谱；

图9为不同时间段血药浓度的紫外光谱扫描图谱对比；

图10为志愿者口服胶囊图谱。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：低分子肝素钙纳米脂质体制备

将壳聚糖1g溶解在0.1％浓度(w/w)的醋酸溶液50mL中，得到壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加浓度为1％(w/w)的低分子肝素钙(常州天普制药有限公司，批号H1999007)水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物冷冻干燥，得到低分子肝素钙纳米脂质体，其纳米包封率高达98％(97.94±1.33％)。

实施例2：低分子肝素钙纳米脂质体制备

将壳聚糖1g溶解在2％浓度的醋酸溶液50mL中，得到酸化的壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加浓度为20％的低分子肝素钙(常州天普制药有限公司，批号H1999007)水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物冷冻干燥，得到低分子肝素钙纳米脂质体，其纳米包封率高达98％(98.06±1.10％)。

实施例3：低分子肝素钙纳米胶囊剂制备

取按实施例1方法所得低分子肝素钙纳米脂质体平均分装入20颗胶肠溶胶囊，得到所述低分子肝素钙纳米胶囊剂，含药量为50mg/粒。

实施例4：低分子肝素钙纳米胶囊剂制备

取按实施例2方法所得低分子肝素钙纳米脂质体，平均分装10颗肠溶胶囊，得到所述低分子肝素钙纳米胶囊剂，含药量为100mg/粒。

低分子肝素钙纳米胶囊剂口服试验：

一、仪器与试剂

高效液相仪(Thermo公司)、C-18柱(3.98×150mm)、数据处理系统(Xcalibur)。流动相为甲醇∶(0.01M)醋酸铵体积比(9∶91)，甲醇为色谱纯，醋酸铵和丙酮为分析纯。

低分子肝素钙为常州天普制药有限公司，批号H19990077。

二、方法

1.HPLC法测定低分子肝素钙

精确称量一定量的低分子肝素钙配置成不同浓度的溶液作为标准液，紫外检测波长220nm，流速0.5ml/min，于40min内完成检测。计算采用外标法求低分子肝素钙含量。低分子肝素钙标准液(100mg/L)图谱见图1。不同时间段血药浓度的紫外光谱扫描图谱对比见图9。

2.兔血浆中药物含量测定

取按实施例3方法制得的胶囊喂兔子(4粒200mg)，并于0，4，7，28，50，60小时从兔耳静脉抽取2ml血，置含枸橼酸的试管离心(3000r×15min)，分离出血浆约1ml，加入等量的甲醇和丙酮混合液，充分混匀后放置15min再次离心，取上清液过滤进样。兔口服胶囊吸收图谱见图1，兔口服200mg胶囊代谢图谱见图4，兔口服28小时血浆图谱见图5。

同时，在另一只家兔的左兔静脉注射13.75mg即4000U的低分子肝素钙针剂为对照组，5分钟后从右侧兔耳朵静脉采集血2ml，动态测定血药浓度(兔静脉注射肝素针剂后2小时血浆图谱见图3)。

3.人血浆中药物含量测定(高效液相质谱仪法)

按实施例3方法制得的胶囊，志愿者口服(1粒50mg胶囊)，并于0，2，4，5，6，7小时从志愿者肘静脉抽取2ml血，置含枸橼酸的试管离心(3000r×15min)，分离出血浆约1ml，加入等量的甲醇和丙酮混合液，充分混匀后放置15min再次离心，取上清液过滤进样。

志愿者口服胶囊50mg 3小时后血浆图谱(相当于3.05mg/L)见图6，志愿者口服胶囊50mg 4小时后血浆图谱(相当于7.46mg/L)见图7，志愿者口服胶囊50mg 5小时后血浆图谱见图8；志愿者口服胶囊图谱见图10。

三、实验结果

兔口服试验结果显示：动物口服200mg胶囊后1小时即测到吸收峰，7～8小时出现吸收高峰。28小时还可以测到吸收峰，50小时测到代谢峰。APTT/PT持续到28小时后。

志愿者口服试验结果显示：口服后3小时开始吸收，6小时出现吸收高峰，7小时出现高峰后还测到代谢峰。APTT及PT均在正常范围内，试验过程无不适反应。

Claims

1、肝素钙/钠盐纳米口服制剂，以肝素钙/钠盐纳米脂质体为主要原料制备，所述低分子肝素钙/钠盐纳米脂质体由如下方法制备得到：将壳聚糖溶解在0.1～20％浓度的稀醋酸溶液中，壳聚糖用量为0.5～5g/100mL醋酸溶液，得到酸化的壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加浓度1～99％的肝素钙/钠水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物冷冻干燥，得到所述的肝素钙/钠盐纳米脂质体。

2、如权利要求1所述的肝素钙/钠盐纳米口服制剂，其特征在于所述肝素钙/钠盐为：低分子肝素钙/钠盐，或中分子肝素钙/钠盐，或未分级的肝素钙/钠盐。

3、如权利要求1所述的肝素钙/钠纳米口服制剂，其特征在于肝素钙/钠盐纳米口服制剂为下列剂型：胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、粉剂、乳剂、膏剂。

4、如权利要求1所述的肝素钙/钠盐纳米口服制剂，其特征在于肝素钙/钠盐纳米口服制剂为胶囊剂，由所述肝素钙/钠盐纳米脂质体灌入肠溶胶囊得到。

5、制备如权利要求1所述的肝素钙/钠盐纳米口服制剂的方法，其特征在于：所述肝素钙/钠盐纳米口服制剂为肝素钙/钠盐纳米胶囊剂，由如下方法制备得到：将壳聚糖溶解2％浓度的稀醋酸溶液中，壳聚糖用量为2g/100mL醋酸溶液，得到酸化的壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加20％的肝素钙/钠水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物液冷冻干燥，得到肝素钙/钠盐纳米脂质体，将所述肝素钙/钠盐纳米脂质体灌入肠溶胶囊，得到所述肝素钙/钠盐纳米胶囊剂。

6、一种低分子肝素钙/钠盐纳米脂质体，由如下方法制备得到：将壳聚糖溶解在2％浓度的稀醋酸溶液中，壳聚糖用量为2g/100mL醋酸溶液，得到酸化的壳聚糖溶液，过滤，取滤液，在磁力搅拌下往滤液中滴加浓度为20％浓度的低分子肝素钙/钠水溶液，直至出现乳白色沉淀，将所得到的混悬液离心，取沉淀物冷冻干燥，得到所述的肝素钙/钠盐纳米脂质体。