CN101225447A - 新城疫病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents
新城疫病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101225447A CN101225447A CNA2007101922783A CN200710192278A CN101225447A CN 101225447 A CN101225447 A CN 101225447A CN A2007101922783 A CNA2007101922783 A CN A2007101922783A CN 200710192278 A CN200710192278 A CN 200710192278A CN 101225447 A CN101225447 A CN 101225447A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rna
- newcastle disease
- disease virus
- reaction solution
- primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 title claims abstract description 17
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 210000003555 cloaca Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 5
- CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N SYBR Green I Chemical compound CN(C)CCCN(CCC)C1=CC(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=C2C=CC=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims abstract description 4
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 22
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 22
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 22
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 claims description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 8
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 238000011901 isothermal amplification Methods 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 5
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 5
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims description 4
- QCYOIFVBYZNUNW-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylazaniumyl)propanoate Chemical class CN(C)C(C)C(O)=O QCYOIFVBYZNUNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- MCHZKGNHFPNZDP-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethane-1,1,1-triol;hydrochloride Chemical compound Cl.NCC(O)(O)O MCHZKGNHFPNZDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 claims description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 3
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 claims description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 abstract description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 abstract 2
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 abstract 2
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 abstract 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 abstract 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 abstract 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 2
- 238000009361 aviculture Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测新城疫病毒的试剂盒及检测方法。本发明含有10×等温反应缓冲液、AMV 8U/μl、Rnasin 40U/μl、Bst DNA聚合酶8U/μl、10mM dNTP、100mM硫酸镁、20μM内引物1、20μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和5M甜菜碱的反应液A和反应液B：1000×的荧光染料SYBR GreenI。通过对组织样品中RNA、家禽咽喉及泄殖腔棉拭子样品中RNA提取、新城疫病毒的环介导等温扩增、扩增产物的显色检测，从而检测出新城疫病毒。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷。本发明具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，适于现场快速检测。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测新城疫病毒的试剂盒，并涉及一种使用该种试剂盒快速检测新城疫病毒的方法。
背景技术
新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的一种禽的急性、高度接触性传染病，对养禽业危害严重。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定通报传染病，我国亦将其定为一类动物传染病。
随着高度集约化养禽业的发展，ND的防治备受关注。ND的现场诊断主要依靠发病史、临床症状、病理变化和流行病学调查综合判定，这给广大兽医工作人员带来了超负荷的工作，耗时费力费钱。现场诊断工作中急需快速准确的筛检诊断方法，以利于现场疫情的确认。因此，ND疫情现场快速确认，对于采取果断有效的扑灭和防控措施十分关键。
在本发明之前，OIE规定区分NDV毒力的经典方法主要有鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)、静脉致病指数(IVPI)测定等方法。这些方法报告结果时间长，工作量大。而目前普遍采用的聚合酶链反应(PCR)技术需要专门的仪器，而且存在容易交叉污染和操作过程繁琐的缺点。荧光实时定量聚合酶链反应(real time PCR)技术虽然较好地解决了交叉污染的问题，并简化了操作过程，但需要更复杂的定量测定仪器，因此不适于现场快速检测，同时由于检测成本较高，也加大了推广应用的难度。
发明内容
本发明的目的就在于克服上述缺陷，研制一种新城疫病毒LAMP检测试剂盒及其检测方法。
本发明的技术方案是：
一种新城疫病毒LAMP检测试剂盒，包括以下成分：
(1)反应液A：
含有10×等温反应缓冲液、AMV 8U/μl、Rnas in 40U/μl、Bs t DNA聚合酶8U/μl、10mM dNTP、100mM硫酸镁、20μM内引物1、20μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和5M甜菜碱，其中：
10×等温反应缓冲液含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐/pH8.8、100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1％曲拉通X-100；
内引物1为：TCCTTAAGCCGGAGGATGTTGGTTTTGCAACAGCTGCACAGATAAC
内引物2为：ACTGACGGATTATCACAACTAGCTTTTGGTCATTAACAAACTGCTGCA
外引物1为：TTATYGGYRGTGTRGCTCT
外引物2为：TCRGTTAGGTAYARGTTGAG
(2)反应液B：1000×的荧光染料SYBR Green I。
本发明的另一技术方案是：
一种新城疫病毒LAMP检测试剂盒检测新城疫病毒的方法，其主要技术步骤包括：
(1)组织样品中RNA的提取
A.取脑、肝等组织0.5g，在液氮中研磨3-5min呈粉末，将粉末置于1.5ml离心管中，加入1ml Trizol液后，剧烈摇匀，室温放置5-10min；
B.加入200μl氯仿，剧烈摇匀，室温放置3-5min；
C.12,000×g离心15min；
D.吸取上清，加入糖元8-10μg混匀2min后加入异丙醇500μl，混匀，室温放置10min；
E.12,000×g离心10min，去上清，可见沉淀，用75％乙醇洗涤，缓慢混匀后静置2min；
F.7,500×g离心5min，完全去除乙醇，在超净台内用风吹5min后加入8μl ddH2O溶解，即为待检RNA，-20℃冰箱中保存备用；
(2)家禽咽喉、泄殖腔棉拭子样品中RNA的提取
取咽喉、泄殖腔棉拭子浸泡于300μl生理盐水中10min，12,000×g离心15min，取上清200μl，采用(1)中从组织样品中提取RNA的方法提取RNA；
(3)新城疫病毒的环介导等温扩增
在装有23μl反应液A的反应管中加入2μl待检RNA，于60-65℃恒温水浴箱中放置90min；
(4)扩增产物的显色检测
在上述反应管中加入1μl反应液B，直接用肉眼观察颜色变化，如颜色变为绿色，则说明样品中含有新城疫病毒；如果颜色为黄色，说明待检样品不合有新城疫病毒。
本发明与现有技术相比，其优点和积极效果表现在：本发明建立了新城疫病毒LAMP检测试剂盒及其检测方法，本试剂盒根据新城疫病毒的基因保守区的六个序列设计了两个特异性内引物和两个特异性外引物，该保守基因序列为新城疫病毒所共有。本发明采用LAMP技术，特异性强，且比PCR检测方法有更高的灵敏度，但不需昂贵的PCR仪，只需普通的金属浴或水浴箱即可，且结果不必用凝胶电泳方法来观察，使用荧光染料来观察即可，简单而快速。可用于新城疫病毒的检测，特别适合于基层现场应用。
环介导等温扩增(Loop-mediated Isothermal Amplification，LAMP)技术具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低等优点，其特点是对靶基因的6个部位设定4种引物，利用链置换反应在恒温下使靶基因高效扩增。由于其反应是多种引物共同启动，使得反应结果比PCR更特异，另外，由于实行的是等温扩增，反应在恒温水浴箱内便可完成，不仅节约仪器成本，而且操作方法更简单，适于现场快速检测。
本发明解决了现有技术中检测新城疫病毒的方法所需周期长、灵敏度较低、成本高、现场应用困难等缺陷，提供的新城疫病毒的检测试剂盒及其检测方法，对新城疫病毒进行LAMP检测，快速、准确性高、灵敏性好、现场应用方便，可广泛应用于兽医、食品、出入境检疫等领域。
具体实施方式
下列实例进一步说明本发明，但不应该当作对本发明的限制。
按下列配方制作新城疫病毒的环介导等温扩增检测试剂盒：
(1)LAMP反应液A：
含有10×等温反应缓冲液、AMV 8U/μl、Rnas in 40U/μl、Bs t DNA聚合酶8U/μl、10mM dNTP、100mM硫酸镁、20μM内引物1、20μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和5M甜菜碱，其中：
10×等温反应缓冲液含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐/pH8.8、100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1％曲拉通X-100；
内引物1为：TCCTTAAGCCGGAGGATGTTGGTTTTGCAACAGCTGCACAGATAAC
内引物2为：ACTGACGGATTATCACAACTAGCTTTTGGTCATTAACAAACTGCTGCA
外引物1为：TTATYGGYRGTGTRGCTCT
外引物2为：TCRGTTAGGTAYARGTTGAG
(2)反应液B：1000×的荧光染料SYBR Green I。
环介导等温扩增(LAMP)反应液A每管23uL的最佳组成为：
2.5μl 10×等温反应缓冲液、1.0μl AMV(8U/μl)、0.25μl Rnas in(40U/μl)、1.0μl Bst DNA聚合酶(8U/μl)、1.5μl 10mM dNTP、1.5μl 100mM硫酸镁、2.0μl20μM内引物1、2.0μl 20μM内引物2、0.5μl 10μM外引物1、0.5μl 10μM外引物2、5.0μl 5M甜菜碱和5.25μl DEPC处理水。
上述新城疫病毒LAMP检测试剂盒检测新城疫病毒的方法，包括：
(1)组织样品中RNA的提取
A.取脑、肝等组织0.5g，在液氮中研磨3-5min呈粉末，将粉末置于1.5ml离心管中，加入1ml Trizol液后，剧烈摇匀，室温放置5-10min；
B.加入200μl氯仿，剧烈摇匀，室温放置3-5min；
C.12,000×g离心15min；
D.吸取上清，加入糖元8-10μg混匀2min后加入异丙醇500μl，混匀，室温放置10min；
E.12,000×g离心10min，去上清，可见沉淀，用75％乙醇洗涤，缓慢混匀后静置2min；
F.7,500×g离心5min，完全去除乙醇，在超净台内用风吹5min后加入8μl ddH2O溶解，即为待检RNA，-20℃冰箱中保存备用。
(2)家禽咽喉、泄殖腔棉拭子样品中RNA的提取
取咽喉、泄殖腔棉拭子浸泡于300μl生理盐水中10min，12,000×g离心15min，取上清200μl，采用(1)中从组织样品中提取RNA的方法提取RNA。
(3)新城疫病毒的环介导等温扩增
在装有23μl反应液A的反应管中加入2μl待检RNA，于60-65℃恒温水浴箱中放置90min。
(4)显色检测
在上述反应管中加入1μl反应液B，直接用肉眼观察颜色变化，如颜色变为绿色，则说明样品中含有新城疫病毒；如果颜色为黄色，说明待检样品不含有新城疫病毒。
Claims (3)
1.一种新城疫病毒LAMP检测试剂盒，包括以下成分：
(1)反应液A：
含有10×等温反应缓冲液、AMV 8U/μl、Rnas in 40U/μl、Bs t DNA聚合酶8U/μl、10mM dNTP、100mM硫酸镁、20μM内引物1、20μM内引物2、10μM外引物1、10μM外引物2和5M甜菜碱，其中：
10×等温反应缓冲液含有200mM三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐/pH8.8、100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1％曲拉通X-100；
内引物1为：TCCTTAAGCCGGAGGATGTTGGTTTTGCAACAGCTGCACAGATAAC
内引物2为：ACTGACGGATTATCACAACTAGCTTTTGGTCATTAACAAACTGCTGCA
外引物1为：TTATYGGYRGTGTRGCTCT
外引物2为：TCRGTTAGGTAYARGTTGAG
(2)反应液B：1000×的荧光染料SYBR Green I。
2.根据权利要求1中所述的一种新城疫病毒LAMP检测试剂盒，其特征在于反应液A每管23μl的组成为：2.5μl 10×等温反应缓冲液、1.0μl AMV(8U/μl)、0.25μl Rnasin(40U/μl)、1.0μl Bst DNA聚合酶(8U/μl)、1.5μl 10mM dNTP、1.5μl 100mM硫酸镁、2.0μl 20μM内引物1、2.0μl 20μM内引物2、0.5μl 10μM外引物1、0.5μl 10μM外引物2、5.0μl 5M甜菜碱和5.25μl DEPC处理水。
3.根据权利要求1所述的一种新城疫病毒LAMP检测试剂盒检测新城疫病毒的方法，其步骤包括：
(1)组织样品中RNA的提取
A.取脑、肝等组织0.5g，在液氮中研磨3-5min呈粉末，将粉末置于1.5ml离心管中，加入1ml Trizol液后，剧烈摇匀，室温放置5-10min；
B.加入200μl氯仿，剧烈摇匀，室温放置3-5min；
C.12,000×g离心15min；
D.吸取上清，加入糖元8-10μg混匀2min后加入异丙醇500μl，混匀，室温放置10min；
E.12,000×g离心10min，去上清，可见沉淀，用75％乙醇洗涤，缓慢混匀后静置2min；
F.7,500×g离心5min，完全去除乙醇，在超净台内用风吹5min后加入8μl ddH2O溶解，即为待检RNA，-20℃冰箱中保存备用；
(2)家禽咽喉、泄殖腔棉拭子样品中RNA的提取
取咽喉、泄殖腔棉拭子浸泡于300μl生理盐水中10min，12,000×g离心15min，取上清200μl，采用(1)中从组织样品中提取RNA的方法提取RNA；
(3)新城疫病毒的环介导等温扩增
在装有23μl反应液A的反应管中加入2μl待检RNA，于60-65℃恒温水浴箱中放置90min；
(4)扩增产物的显色检测
在上述反应管中加入1μl反应液B，直接用肉眼观察颜色变化，如颜色变为绿色，则说明样品中含有新城疫病毒；如果颜色为黄色，说明待检样品不含有新城疫病毒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007101922783A CN101225447B (zh) | 2007-12-24 | 2007-12-24 | 新城疫病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007101922783A CN101225447B (zh) | 2007-12-24 | 2007-12-24 | 新城疫病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101225447A true CN101225447A (zh) | 2008-07-23 |
| CN101225447B CN101225447B (zh) | 2011-06-01 |
Family
ID=39857652
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2007101922783A Active CN101225447B (zh) | 2007-12-24 | 2007-12-24 | 新城疫病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101225447B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101413035B (zh) * | 2008-11-28 | 2011-05-11 | 中山大学 | 检测新城疫病毒的引物及其应用方法、试剂盒 |
| CN101591713B (zh) * | 2009-05-25 | 2011-11-02 | 扬州大学 | 小鹅瘟病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 |
| CN101586169B (zh) * | 2009-06-30 | 2012-02-08 | 中国兽医药品监察所 | 猪圆环病毒2型lamp检测试剂盒及其检测方法 |
| CN110578019A (zh) * | 2019-10-30 | 2019-12-17 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 二重荧光lamp区分新城疫强弱毒检测试剂盒及其引物组 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100402663C (zh) * | 2005-02-28 | 2008-07-16 | 中华人民共和国北京出入境检验检疫局 | 检测新城疫病毒的核苷酸序列、试剂盒及检验方法 |
-
2007
- 2007-12-24 CN CN2007101922783A patent/CN101225447B/zh active Active
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101413035B (zh) * | 2008-11-28 | 2011-05-11 | 中山大学 | 检测新城疫病毒的引物及其应用方法、试剂盒 |
| CN101591713B (zh) * | 2009-05-25 | 2011-11-02 | 扬州大学 | 小鹅瘟病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 |
| CN101586169B (zh) * | 2009-06-30 | 2012-02-08 | 中国兽医药品监察所 | 猪圆环病毒2型lamp检测试剂盒及其检测方法 |
| CN110578019A (zh) * | 2019-10-30 | 2019-12-17 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 二重荧光lamp区分新城疫强弱毒检测试剂盒及其引物组 |
| CN110578019B (zh) * | 2019-10-30 | 2023-04-28 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 二重荧光lamp区分新城疫强弱毒检测试剂盒及其引物组 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101225447B (zh) | 2011-06-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100378230C (zh) | H5、h7、h9亚型禽流感病毒的实时荧光定量pcr检测方法 | |
| Hanson et al. | Identification of forensically relevant body fluids using a panel of differentially expressed microRNAs | |
| CN102286633B (zh) | 基于环介导等温扩增技术的鸡传染性支气管炎病毒快速检测试剂盒 | |
| CN102002531B (zh) | 一种弓形虫检测试剂盒及其应用 | |
| CN101225447B (zh) | 新城疫病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN101376912B (zh) | 甲3型流感病毒的环介导等温扩增检测试剂盒及检测方法 | |
| CN110551851A (zh) | 一种用于扩增asfv的camp引物组及试剂盒和应用 | |
| CN101363063B (zh) | 三重荧光定量rt-pcr检测a、b和h5亚型流感病毒的引物、探针、试剂盒及方法 | |
| CN102952896B (zh) | 一种检测甲型流感病毒的环介导等温扩增通用试剂盒及其应用 | |
| CN101591713B (zh) | 小鹅瘟病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN101871004A (zh) | 成熟miRNA定量检测方法及试剂盒 | |
| CN105039324A (zh) | 一种检测中华鳖出血病病毒的特异性扩增引物及其检测试剂盒 | |
| CN103409563B (zh) | 虹鳟鱼传染性胰腺坏死病毒rt-lamp检测试剂盒 | |
| CN103667532A (zh) | 鳜鱼传染性脾肾坏死病毒lamp检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN101781677A (zh) | 检测白血病广谱标记物WT1基因mRNA表达的试剂盒 | |
| CN107312872A (zh) | 同时鉴别h5亚型禽流感病毒及其na亚型的多重pcr引物组、试剂盒和检测方法 | |
| CN102344972B (zh) | H6亚型禽流感病毒rt-lamp试剂盒 | |
| CN101215610A (zh) | H5亚型禽流感病毒环介导等温扩增检测的试剂盒及其应用 | |
| CN103409559B (zh) | 一种检测禽源谱系h3n2亚型犬流感病毒的rt-pcr试剂盒及其应用 | |
| CN108486279A (zh) | 一种基于荧光定量pcr技术检测鸽新城疫病毒的方法 | |
| CN105063238B (zh) | 一种检测葡萄卷叶伴随病毒2号的rpa引物及试剂盒 | |
| CN104278106B (zh) | 鸭坦布苏病毒和减蛋综合症病毒二重荧光定量rt-pcr检测试剂盒 | |
| CN106119354A (zh) | 猪人住肉孢子虫lamp检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN103773891B (zh) | 耐药基因TetK LAMP检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN107245521B (zh) | 用于简单异尖线虫/派氏异尖线虫lamp-lfd检测的引物和探针序列 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230427 Address after: F206, Building 2, No. 217 Kaifa West Road, Yangzhou High tech Industrial Development Zone, Yangzhou City, Jiangsu Province, 225000 Patentee after: YANGZHOU LIANGDE ANTIBODY BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Address before: 225009 Jiangsu Province, Yangzhou City Jiangyang Road No. 36 Patentee before: YANGZHOU University |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Ji Dejun Document name: Notification of Qualified Procedures |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Ji Dejun Document name: Notice of Termination of Patent Rights |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice |