CN101199560A - 一种银杏叶提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种银杏叶提取物及其制备方法。该提取物的液相可控成分含量达80％以上，其中黄酮醇苷含量大于74％，内酯含量大于6％；其制备方法是将市售普通银杏叶提取物经过脱酚酸、AB－8树脂及聚酰胺树脂、氧化铝分离纯化分别制得含黄酮90％及含内酯50％以上的两种组分，按6∶1的比例混合而成；精制后的提取物不仅可以制成固体口服制剂，减少服用量，更能按国家药品注册管理办法的最新要求制成注射液，用于心脑血管疾病的治疗，快速起效。

Description

一种银杏叶提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种银杏叶提取物，具体的说是以市售银杏叶提取物为原料精制而成，本发明还涉及该提取物的制备方法。

背景技术

心脑血管疾病是临床常见病、多发病，本病的特点是病程长，不易根治，并且死亡率高。目前，虽然西医治疗心脑血管疾病的药物较多，但由于副作用大或其他原因，临床使用受到了限制。银杏叶制剂在治疗心脑血管疾病方面一直很受医生及患者的欢迎，但由于有效成分含量低、服用量大、上市品种以口服剂型为主，疗效不确切等因素，临床一般作辅助治疗用药。目前国内外常用的银杏叶提取物制备方法有树脂吸附分离、CO2超临界萃取等方法，这些方法存在着含量提不高或者成本高或者无法规模放大等缺点。

本发明的目的是克服以往传统口服制剂的缺点，提供一种新的银杏叶提取物，有效成分含量达80％(W/W)以上。

发明内容

本发明提供一种银杏叶提取物及其制备方法。

本发明一种银杏叶提取物，该提取物的液相可控成分大于含量达80％，其中黄酮醇苷含量大于74％(W/W)，内酯含量大于6％(W/W)。

本发明一种银杏叶提取物，其制备过程如下：

A、取市售银杏叶提取物，用石油醚回流提取，提取残渣干燥，用乙酸乙酯回流提取，收集提取液和残渣A分别处理；

B、取上述乙酸乙酯回流液，减压回收乙酸乙酯，残渣加适量丙酮溶解，加等量热水混合均匀，静置，冷藏，析出内酯，过滤，内酯用甲醇溶解通过处理好的氧化铝柱，甲醇洗脱，回收甲醇至干，得精制内酯；

C、残渣A，用碳酸钠溶液溶解，慢慢通过AB-8树脂柱，先用蒸馏水洗涤，再用碳酸钠溶液洗涤，最后用碳酸钠溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸调节PH值至酸性，慢慢通过聚酰胺柱，先用蒸馏水洗涤，再用稀乙醇洗涤，最后用乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至干，得精制黄酮；

D、取上述精制黄酮与精制内酯混合均匀。

脱内酯物过AB-8树脂柱的溶剂及洗脱剂是0.1～0.5％(W/W)的碳酸钠溶液，洗脱液过聚酰胺柱前应用盐酸溶液调节PH值为1.0～3.0，乙醇溶液的浓度为80％(W/W)，精制黄酮的含量大于90％(W/W)，精制内酯的含量大于50％(W/W)。精制黄酮与精制内酯的混合重量比例为6∶1。

精制后的提取物不仅可以制成固体口服制剂如片剂、胶囊等，减少服用量，提高疗效，更能按国家药品注册管理办法的最新要求(液相可控成分80％(W/W)以上)制成注射液(包括冻干粉针)。用于心脑血管疾病的治疗，快速起效，用于心脑血管疾病的治疗，快速起效。

具体实施方式

下面通过实施例、动物实验例对本发明给予进一步详细说明。

实施例一：本发明银杏叶提取物及其片剂的制备

称取市售银杏叶提取物，其中黄酮醇苷含量24％(W/W)，内酯含量6％(W/W)1kg，用6倍量石油醚回流提取2次，弃去石油醚溶液，残渣低温真空干燥，用6倍量乙酸乙酯回流提取2次，收集提取液和残渣分别处理。

取上述乙酸乙酯回流液，减压回收乙酸乙酯，残渣加2倍量丙酮溶解，加等量热水混合均匀，静置，冷藏，析出内酯，过滤，内酯用甲醇溶解通过处理好的氧化铝柱，甲醇洗脱，回收甲醇至干，得精制内酯93g，经高效液相色谱法测定，内酯含量为51％(W/W)。

取(1)项下脱内酯物，用20倍量0.3％(W/W)碳酸钠溶液溶解，慢慢通过AB-8树脂柱，先用蒸馏水洗涤，再用0.1％(W/W)碳酸钠溶液洗涤，最后用0.3％(W/W)碳酸钠溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸调节PH值至2.0，慢慢通过聚酰胺柱，先用蒸馏水洗涤，再用15％(W/W)乙醇洗涤，最后用80％(W/W)乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至干，得精制黄酮122g，经高效液相色谱法测定，黄酮苷含量为93％(W/W)。

取上述精制黄酮与精制内酯，按6∶1的比例混合均匀，即得含量86％(黄酮79％(W/W)、内酯7％(W/W))的银杏叶提取物143g。

取银杏叶精制提取物，加辅料制成每片含40mg提取物的片子。

实施例二：银杏叶注射液的制备

处方

银杏叶精制提取物        8.8g

氯化钠                  90g

吐温80                  适量

注射用水                加至10000ml

取处方量银杏叶精制提取物，加处方量80％(W/W)的注射用水搅拌，加吐温80适量使溶解，加入氯化钠，搅拌溶解，加0.05％(W/W)活性炭保温20分钟，过滤，调ph值5～7，加水至足量，用0.2um微孔滤膜过滤，分装成100ml/瓶，105℃灭菌30分钟，即得。

实施例三：银杏叶冻干粉针的制备

处方：

银杏叶精制提取物        8.8g

羟丙基倍他环糊精        10g

注射用水                加至200ml

取处方量羟丙基倍他环糊精搅拌溶解于80％的注射用水中，加银杏叶精制提取物，搅拌溶解，加0.05％(W/W)活性炭保温20分钟，过滤，调ph值5～7，加水至足量，用0.2um微孔滤膜过滤，分装成2ml/瓶，冷冻干燥，即得。

动物实验例1：本发明银杏叶提取物的动物急性毒性试验：

银杏叶提取物经静脉一次给药未测出小鼠的LD₅₀，因此改做其最大给药量(MTD)试验。结果表明：20只小鼠给药后均无明显的毒性反应，两周内亦无死亡。因此，银杏叶提取物经静脉一次给药的小鼠最大给药量为700mg/kg，按临床成人每日用量88mg/60kg计算，则该药相当于临床成人用量的477.3倍。银杏叶提取物腹腔注射给药的最大给药量试验结果表明：20只小鼠按725mg/kg剂量腹腔注射给药后均无明显的毒性反应，一周内亦无死亡。该剂量为临床成人一日注射剂量的494.3倍。实验表明：银杏叶提取物对实验动物无明显毒性，提示该药临床应用是安全的。

动物实验例2：本发明银杏叶提取物的长期毒性试验：

银杏叶提取物注射给药大鼠长期毒性试验结果表明：该受试样品以22mg/kg、44mg/kg、88mg/kg三个剂量组连续给大鼠腹腔注射二个月及恢复期，各受试动物一般状况良好，外观、行为、排泄物等方面均未见异常变化。受试动物体重增长、摄食量及尿常规基本正常。血常规检查结果表明，银杏叶提取物注射给药二个月及恢复期与对照组比较，各项指标未见明显改变。血液生化指标检查结果表明，银杏叶提取物注射给药二个月雄性中剂量组及雌性中小剂量的T-CHO升高，与对照组比较差异显著(P＜0.05)；另除个别剂量组个别指标在正常范围内的有波动外，其余各项指标均在未见异常。脏器系数检查结果表明，银杏叶提取物注射给药二个月雄性大剂量组的肝脏系数增大，与对照组比较差异显著(P＜0.05)。其余给药二个月及恢复期各组与对照组相比较，脏器系数均无统计学差异(P＞0.05)。尸检及病理组织学检查结果表明，银杏叶提取物注射给药二个月及恢复期三个剂量组及对照组经肉眼观察，各主要脏器均未见异常。组织学检查表明，银杏叶提取物注射给药三个剂量组大鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器均未见明显病理改变。

银杏叶提取物注射给药Beagle犬长期毒性试验结果显示：该受试样品以18.33mg/kg、36.67mg/kg和73.33mg/kg三个剂量组连续给Beagle犬静脉注射2个月及恢复期，结果表明银杏叶提取物注射给药三个剂量组Beagle犬精神状态良好，行动正常。未见明显异常。各组动物大、小便、摄食量、体重变化基本正常，未见食欲减退、流涎和呕吐等现象，与对照组相比，无明显差异(P＞0.05)；心电图及血常规各项指标均正常；三次凝血时间及血液学检查结果表明，除银杏叶提取物注射给药二个月的雄性大剂量组APTT及雌性大剂量组PT延长、红细胞压积减少外，与对照组比较差异显著(P＜0.05)。三个剂量组其余各指标给药前、后对照组比较无明显差异(p＞0.05)，且均在生理范围之内。血液生化检查结果表明：银杏叶提取物注射给药63天AST、BUN等指标在正常生理范围内有波动，其余指标与生理盐水组比较无明显差异，各组各项指标均未见明显变化。尸检及病理组织学检查结果表明，银杏叶提取物注射给药组及对照组经肉眼观察，各主要脏器均未见异常。银杏叶提取物注射给药三个剂量组犬心、肝、脾、肺、肾等脏器均未见明显组织学病理改变。

以上结果表明，本发明银杏叶提取物临床应用是安全的。

动物实验3：本发明银杏叶提取物与功能主治有关的主要药效学试验(摘要)

1.受试药物

试验药：银杏叶注射溶液(银杏叶提取物原料配制)，由扬子江药业集团有限公司提供，批号：020126，实验时用0.9％(w/w)氯化钠配成所需浓度。

对照药：尼膜同输液，0.2mg(尼莫地平)/ml。德国拜耳公司生产，拜耳医药保健有限公司分装·中国北京，批号：CANAL2。

对照药：金纳多注射液，17.5mg/瓶，含总黄酮4.2mg。德国威玛舒培博士药厂，批号：BX20010117。

对照药：复方丹参注射液，2g/ml。华西医科大学制药厂，批号：990301。

2.受试动物

ICR小鼠，雌雄各半，体重18～22g；SD大鼠，雄性，体重250～350g；由南京中医药大学实验动物中心提供。实验动物合格证书：SYXK(苏)2002-0053。

杂种犬，体重7～11kg，雌雄兼用，由南京中医药大学实验动物中心收购于市郊，试验前在该中心驯养，经检疫及驱虫后用于实验。

3.试验内容及结果

1).对电凝法所致大脑中动脉阻断大鼠的保护作用：银杏叶提取物注射给药对大脑中动脉阻断所致的神经行为学评分具有改善作用；可明显降低脑梗塞率、脑含水量；降低MDA含量、提高SOD活性，而对NOS活性未见明显改变；病理组织学检查提示，银杏叶提取物注射给药对中动脉阻断所致损伤具有明显保护作用。

2).对插线法所致大脑中动脉缺血再灌注大鼠的保护作用：银杏叶提取物注射给药可提高缺血再灌注损伤大鼠的存活率；改善动物的神经行为学评分，明显降低动物的脑梗塞率、脑指数、脑含水量；组织病理学检查提示，对缺血再灌注所致的组织病理学损伤具有明显保护作用。

3).对急性实验性不完全脑缺血小鼠的保护作用：银杏叶提取物注射给药可延长急性脑缺血的小鼠存活时间。

4).对大鼠动静脉旁路血栓的影响：银杏叶提取物注射给药明显降低大鼠动静脉旁路血栓的湿重、干重。

5).对血瘀证大鼠血液流变学的影响：银杏叶提取物注射给药可以增加红细胞变形能力、降低血液粘度(低切、中切)，降低血瘀症大鼠的血小板聚集率，延长APTT，与模型组比较差异显著(P＜0.05)。

6).对麻醉犬血流动力学及对麻醉犬脑循环的影响：银杏叶提取物注射给药可降低总外周血管及脑血管阻力，减慢心率，增强心肌收缩力，延长心肌射血时间，在不增加总耗氧指数的前提下，使心搏出量、冠脉流量及脑血流量增加，从而保障心脏、脑等重要脏器充分供血供氧。

4.结论

银杏叶提取物注射给药能改善大鼠脑梗塞后的神经行为障碍、缩小梗塞面积；降低缺血大脑的肿胀程度；增加心脏搏出量、冠脉流量及脑血流量；抑制血栓形成及抑制血小板聚集；改善血瘀证大鼠的血液流变学。这些作用对临床改善脑部缺血缺氧和增加冠脉血流量、增加心脏搏出量是十分有利的。

Claims (6)

1.种银杏叶提取物，其特征在于该提取物的液相可控成分大于含量达80％，其中黄酮醇苷含量大于74％(W/W)，内酯含量大于6％(W/W)。

2.一种银杏叶提取物制备方法，其制备过程如下：

A、取市售银杏叶提取物，用石油醚回流提取，提取残渣干燥，用乙酸乙酯回流提取，收集提取液和残渣A分别处理；

B、取上述乙酸乙酯回流液，减压回收乙酸乙酯，残渣加适量丙酮溶解，加等量热水混合均匀，静置，冷藏，析出内酯，过滤，内酯用甲醇溶解通过处理好的氧化铝柱，甲醇洗脱，回收甲醇至干，得精制内酯；

C、残渣A，用碳酸钠溶液溶解，慢慢通过AB-8树脂柱，先用蒸馏水洗涤，再用碳酸钠溶液洗涤，最后用碳酸钠溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸调节PH值至酸性，慢慢通过聚酰胺柱，先用蒸馏水洗涤，再用稀乙醇洗涤，最后用乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至干，得精制黄酮；

D、取上述精制黄酮与精制内酯混合均匀。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于脱内酯物过AB-8树脂柱的溶剂及洗脱剂是0.1～0.5％(W/W)的碳酸钠溶液。

4.根据权利要求2项所述的制备方法，其特征在于洗脱液过聚酰胺柱前应用盐酸溶液调节PH值为1.0～3.0，乙醇溶液的浓度为80％(W/W)。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于精制黄酮的含量大于90％(W/W)，精制内酯的含量大于50％(W/W)。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于精制黄酮与精制内酯的混合重量比例为6∶1。