CN101193555A - 农药和驱避剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种农药或驱避剂，其含有通过除去汁液中的水从大蒜汁液中获得的液体浓缩物。

Description

农药和驱避剂
发明领域
本发明涉及用作杀虫剂、杀线虫剂和杀软体动物剂的材料的用途，尤其是对于上述目的的由大蒜所获得的浓缩物的用途。
申请人已知的相关技术
欧盟对农药活性成分的期望是削减2007年所允许存在的活性物质的大约66％。因此，目前需要新的更环保的农药。
Eric Block等已经在Journal of Agricultural and Food Chemistry(农业和食品化学期刊)，第5卷，第8期，第2192至2196(1)中报道了将大蒜油用作鸟类驱避剂。还报道了源自大蒜的制品显示昆虫驱避活性以及大蒜对蚊子和其它昆虫幼虫的毒性，参见E Block等，Angew Chem.Int.Ed.Engl.1992，31，1135-1178(2)；Kadota，Y.，由植物和草药提取物制得的昆虫驱避剂，JP 2003192516，2003(Chem.Abstr.(化学摘要)2003，139，48654)(3)；以及Bhuyan，M.；Saxena，B.N.；Rao，K.M.，Repellent Property of Oil Fractionof Garlic(大蒜的油馏分的驱避性能)，Allium Sativum Linn.Ind.J.Exp.Biol.1974，12，575-6(4)。在参考文献(1)中还另外提及的是由大蒜中获得的制品对小动物具有驱避活性，并且在产蛋母鸡上局部应用大蒜以减少北方禽螨(Northern Fowlmite)的侵袭。在International Journal of Pest Management，1993，39(4)，390-392(5)中还报道了来自大蒜的提取物蒜素的杀线虫活性。还公开了大蒜的杀软体动物性能，D.K.Singh和A.Singh.Allium sativum(大蒜)，一种有效的新的杀软体动物剂，Biological Agriculture and Horticulture(生物农业和园艺)，第9卷，第2(6)。S.Ankri和D.Mirelman在Microbesand Infection(微生物侵染)，1999，125-129(7)中报道了蒜素的抗微生物性能。
在期刊Medicinal and Aromatic Plant Sciences(药用和芳香植物科学)2003，25，PP.1024-1038，标题为“大蒜的杀虫性能”的一篇文章中，Singh等详细描述了制备大蒜提取物的多种常规方法，例如水提取、溶剂提取，并且还详细描述了利用蒸汽蒸馏以获得大蒜油。
在Indian J.Agric.Sciences 1980，50，PP.507-510中，标题为“可能的杀虫剂来源的大蒜提取物”文章中详细描述了利用蒸汽蒸馏从破碎的大蒜丁中所获得的大蒜油；利用来自大蒜的甲醇提取物；以及利用通过一块细棉布挤压破碎的大蒜所获得的水和醚提取物-作为杀虫剂来防治斜纹贪夜蛾(Spodoptera litura)、黄毒蛾(Euproctis sp.)和库蚊(Culex sp.)的用途。
在Ind.J.Nematology 1991，21，PP.14-18(Gupta等)中的文章摘要涉及大蒜的水提取物的用途，其具有杀线虫性能。该参考文献还涉及蒸馏出的大蒜的油馏分的用途，其对线虫幼虫有毒性。并且，该摘要还详细描述了大蒜丁粉末作为杀线虫剂的用途。
美国专利申请：US5,733,552专利详细描述了将稀释的大蒜汁在草地、灌木和树上作为驱避蚊子的药剂的用途。
欧洲专利申请：EP0945066A1涉及利用大蒜油的混合物或与精油相组合的提取物以获得改良的农药/杀真菌剂的用途。
由于需要从原汁中分离油，目前存在与制备大蒜油相关的问题。通常涉及到破碎大蒜并且将其加热至100℃以进行蒸汽蒸馏。随后在冷却下从水相分离大蒜油。
利用大蒜油还存在某些固有的问题，由于大蒜油在室温下是难于稀释的粘稠的液体，其需要利用与该液体易混合的载体溶剂来作为稀释剂。使用这类载体溶剂限制了将大蒜油用于有机农业中，并且与使用这类溶剂有关的是带来了其它涉及健康和安全方面的困难。
因此，有利的是与其如前所述从大蒜中分离油，倒不如将大蒜简单地破碎，直接使用由此产生的汁液。不幸的是，通过化学降解与微生物作用相结合，以这种方法分离的大蒜汁液易于分解。据推测大蒜汁液的硫组分被氧化成二氧化硫/硫，并且有机组分被氧化/水解成酮类或通过呼吸作用降解成二氧化碳。同样地，若使用经提取的大蒜汁液，其必须刚从大蒜中分离出，并且几乎是立即使用以确保其作为农药/生物杀灭剂的最大效力。待储存后，该材料作为驱避剂的活性水平会保持显著降低的。
因此，有利的是如果提供这样一种材料，其可以根据在对不同生物构成的驱避性及其农药的作用，与大蒜油/新鲜大蒜提取物相关的性能，但不需要涉及大蒜油分离的蒸汽蒸馏阶段。在本文中描述了这种材料以及制备这种材料的方法。
发明背景
如上所述，确信大蒜油和大蒜提取物的性能是源自烯丙基多硫化物的存在，该化合物是在破碎过程中，大蒜的细胞壁破裂后所产生的。在该过程中，通过称作蒜苷酶的一种酶将蒜碱转化为蒜素。随后，将蒜素分解以形成多硫化物，如图解1所示。
Figure S2006800206794D00021
图解1
确信烯丙基多硫化物赋予大蒜提取物和大蒜油其生物活性和驱避性能。确信的是大蒜的生物活性是由于烯丙基多硫化物作为酶抑制剂、金属多价螯合剂、作用于细胞膜上的溶剂、呼吸抑制剂以及作为常规的抗生素来起作用的。
发明概述
广义上来说，本发明提供一种含有通过除去汁液中的水分从大蒜汁液中获得的液体浓缩物的农药。根据其对不同生物构成的驱避性以及其农药的作用，本发明所公开的浓缩物具有与大蒜油/新鲜大蒜提取物相关的性能，但不需要涉及大蒜油分离的蒸汽蒸馏阶段，并且另外长时间储存是稳定的而不降低该材料的活性。该稳定性至少部分地是由于除去了所提取的汁液中的水分。本发明提供具有少量或无游离水分的浓缩物，所述水通常可以被活的有机体所利用以分解赋予其生物活性的大蒜汁液的组成部分。
优选地，在低于40℃下采用减压蒸馏除去水分。在这种方法中，在浓缩期间，大蒜提取物的组成部分的分解达到最小化。
优选地，浓缩物的白利度(Brix value)介于60和80之间。对于本发明所公开的浓缩物而言，除去水分以获得具有在该范围内的白利度的浓缩物，所述范围提供观察到的稳定性。
优选地，在该浓缩物中的总的多硫化物范围为2至4％w/w。
优选地，按照所存在的总的多硫化物重量计算，结构式为RSR、RS2R、RS3R和RS4R的二烯丙基硫化物的量为66％±10％(其中R＝烯丙基)。优选地，以所存在的总的多硫化物的重量％计，二烯丙基硫化物∶二烯丙基二硫化物∶二烯丙基三硫化物∶二烯丙基四硫化物以大约为4％-5％∶5％-8％∶31％-38％∶19％-22％的比例存在。含有这些组分并按照上述比例的浓缩物提供具有一致生物活性的农药，由于大蒜球茎的天然的可变性，所述活性可以以另外的方式获得。来自一定范围的原材料的浓缩物可以容易地相混合以获得该组合物。
优选地，通过反渗透提取水分。
在该方法中，提供这样一种方法，其中消耗最少量的能量来分离浓缩物。此外，当该浓缩物所受到的加热水平最小化时，该浓缩物具有作为农药最大的效果。
优选地，加入其它的多硫化物以增加多硫化物的量。该多硫化物的加入预期改善该混合物作为农药、作为驱避剂的性能，并且也期望在露天条件下施用时延长该混合物的保留时间。
优选地，将多硫化物以大蒜油的形式来加入。由于油中缺乏水，加入含有水的材料会使得浓缩物基质不稳定，从而降低材料的稳定性，因此对于浓缩目的而言，大蒜油尤其优选以多硫化物的形式来使用。
第二方面，本发明提供一种通过如下步骤从大蒜中获得液体浓缩物形式的农药的制备方法：
·破碎大蒜
·从所产生的液体中分离固体材料
·在液体中进行加热步骤以巴氏杀菌液体
·通过在大约40℃下减压蒸馏从液体中除去水分。
以这种方式分离并且浓缩大蒜汁液赋予该浓缩物具有作为农药的最大效力，并且还避免了与通常用于生产大蒜油的高温蒸馏相关的能量消耗。
更优选地是，在低于25℃并且在适当减压下从液体中除去水。以这种方式可以进一步优化所制备的材料作为农药的效力。
在其优选的方面，采用反渗透提取水。以这种方式提供消耗最少量的能量来分离浓缩物的方法。此外，由于该浓缩物所受到的加热水平达到最小化，该浓缩物具有作为农药的最大效果。
第三方面，本发明提供一种农药组合物，其特征在于该组合物包含用如前所述的液体大蒜浓缩物浸渍的基于木粉的颗粒。因此，本发明提供一种完全基于天然产生于大蒜的材料的农药，并且利用该农药的所留下的仅有残余物与种植韭葱或大蒜作物所留下的残余物相同。然而，发现利用该农药所留下的残余物显著低于种植韭葱或大蒜所观察到的残余物水平。此外，还发现以这种方式浸渍木粉颗粒剂有效地导致进一步干燥浓缩物，从而改善浓缩物保持其活性的时间。还改善了该材料的操作容易度及其在大田中的持久性。
作为杀虫剂而言，如前所述的以液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒形式的农药组合物是尤其有用的。在所公开的浓缩物或经浸渍的颗粒已经显示在控制甘蓝根蝇上是有效的，并且对蚊子幼虫和其它幼虫有毒性。确信的是上述结果证明这些材料在控制更为广泛的昆虫上是有效的，所述昆虫为已知害虫。
作为杀线虫剂而言，如前所述的以液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒形式的农药组合物是尤其有用的。已经发现所公开的大蒜浓缩物或经浸渍的颗粒在控制线虫上尤其有效。
作为鸟类驱避剂而言，如前所述的以液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒形式的农药组合物是尤其有用的。基于大蒜的产品先前已经显示了作为驱避剂对鸟类的效果。因此，合理地假定本发明所公开的液体浓缩物和/或浸渍浓缩物的颗粒也会显示该作用，但是还进一步具有除去浓缩物基质所赋予的稳定性的益处。
作为兔驱避剂而言，如前所述的以液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒形式的农药组合物是尤其有用的。本发明说明书中所包括的结果表明浸渍浓缩物的颗粒对兔子起到驱避剂的作用，因此合理地假定该浓缩物会显示相同的作用。
如前所述的以液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒形式的农药组合物可以用作昆虫驱避剂。
该农药组合物的特征在于其含有用液体大蒜油浸渍的基于木粉的颗粒。本文所公开的结果显示了用本说明书的大蒜浓缩物浸渍的颗粒的效果，因此合理地假定将大蒜油浸渍在基于木粉的颗粒上会显示相同的作用。通过将大蒜油浸渍在所述颗粒上会简化大蒜油的处理，并且还消除了用于分散大蒜油的溶剂的使用需求。
该农药组合物的特征在于其含有用从新鲜破碎的大蒜中提取的液体浸渍的基于木粉的颗粒。本文所公开的结果显示了用本说明书的大蒜浓缩物浸渍的颗粒的效果，因此合理地假定将从新鲜破碎的大蒜中提取的液体浸渍在基于木粉的颗粒上会显示相同的作用。此外，由于木粉会含有一定量的水分，因此将经提取的汁液浸渍在木粉上会提高稳定性以避免分解，并且采用本发明所公开的干燥步骤会除去更多的水分。
优选实施方式的描述
根据如下方法制备一种浓缩的大蒜汁液：
1)洗涤新鲜大蒜；
2)破碎大蒜；
3)进行挤压以从液体中分离固体；
4)过滤大蒜汁液(通常利用50微米的过滤器进行过滤)；
5)进行巴氏灭菌步骤，可以采用将汁液加热至90℃大约30秒，或更低的温度60℃下长至2分钟；
6)随后可以进行澄清步骤以除去液体中所有的悬浮物质；
7)随后通过减真空蒸馏除去水。
获得粘性褐色液体状的浓缩大蒜提取物。
在低于40℃的温度下减压蒸馏除去水，如此这样防止了大蒜浓缩物组分的分解，并且更优选的是将压力降至一定点下，从而可以在25℃下除去水。
重要的是注意所引用的现有技术均未详细说明通过简单地采用减压蒸馏从大蒜汁液中除去水的大蒜汁液浓缩物的形成。申请人已知的所有现有技术详细说明了利用水提取、标准的溶剂提取技术的标准提取技术从大蒜汁液中分离活性成分，或者利用蒸汽蒸馏获得大蒜油。
采用上述方法对所制得的浓缩物进行分析，获得如下范围的分析数据：
Dry matter(白利度)白利度：60-80
pH(10％.SoL)：4.0-5.0
酸度(meq/kg)：300-400
(相当于2.1-2.8％的柠檬酸一水化物)
可利用的碳水化合物为45-55％
1kg的浓缩物相当于大约7kg的新鲜大蒜
HPLC分析
确定存在于浓缩物中的二烯丙基多硫化物的相对比例的优选分析方法为HPLC。所使用的详细的HPLC方法和该方法所基于的文献如附录1所述。描述于附录1中的第三种方法(RBSULF3)是优选的HPLC分析方法，该方法相对于方法RBSULF1具有延长的平衡稳定时间。提供从大蒜油胶体(Garlic Oil Gold)标准样品所获得的色谱图(色谱图1)，其具有可识别的色谱主峰。色谱图2也是大蒜标准的色谱图。还显示了大蒜汁液浓缩物-商标为Garlic Product的样品色谱图(色谱图3)。
采用HPLC分析浓缩物显示所存在的总的多硫化物在2.4至3.6％w/w范围内。在上述多硫化物中，按照所存在的总的多硫化物重量计，结构式为RSR、RS2R、RS3R和RS4R(R＝式-CH2CHCH2的烯丙基)的二烯丙基硫化物以大约为4％-5％∶5％-8％∶31％-38％∶19％-22％的比例存在。采用HPLC测得这些所收集的多硫化物占存在于浓缩物中的所有有机硫的66％+/-10％。
因此，相对于采用简单破碎和加工新鲜的大蒜所产生的液体的材料中所存在的多硫化物和大蒜油中所存在的多硫化物而言，采用上述方法制得的浓缩物具有高度的化学相似性。
确信本文所描述的大蒜浓缩物的生物活性是由于二烯丙基-和甲基烯丙基-多硫化物的特定比例所带来的。
与用于分离大蒜油的方法相比，或与采用简单破碎新鲜大蒜获得汁液相比，以上述方法除去水所提供的大蒜浓缩物具有当延长储存时间时保持其稳定性的明显优点。确信的是采用上述方法制得的浓缩物会在如下所述的至少3年中保持活性，比非浓缩大蒜汁液可以保持更长时间。在典型的工业“温度滥用(temperature abuse)”条件下储存后，分析浓缩物样品的关键活性成分，得到如下结果：
    浓缩物储存时间     总的多硫化物浓度
    3年10个月     2.96(％w/w)
    3年2个月     2.74(％w/w)
    2年9个月     2.67(％w/w)
    1年4个月     3.61(％w/w)
上述分析结果证明了该产品的长期稳定性。
确信的是将提取的液体加热至60-90℃下短时间导致将大蒜提取物中的蒜素转化成多硫化物，该多硫化物具有本文所述二烯丙基多硫化物的特定比例的，已经发现该比例在如下所述的应用中特别有效。
制备用大蒜浓缩物浸渍的颗粒剂
本发明人已经开发出大蒜浓缩物的颗粒剂形式。该颗粒剂是先前描述的用粘合剂将大蒜浓缩物浸渍在木粉上的剂型，所述粘合剂也以下表1中所示的比例存在。除非另有说明，用大蒜浓缩物浸渍的木粉颗粒剂是如表1中所示的组合物的颗粒剂。
表1：显示用大蒜浓缩物浸渍的颗粒剂的组成
化学名称 CAS.No   化学描述 商品名 功能 含量(％)
羧甲基纤维 9004-32-4   高纯度的羧 Blonose 粘合剂 1.65％
素钠 甲基纤维素钠(食品级)
木粉 Lignin(9005-53-2)Cellulose(9004-34-6) 纤维素、木质素和木材多糖的结合体 Lignocel 载体 53.35％
大蒜油 800-78-0 大蒜浓缩物(食品级) 活性成分 45％
将羧甲基纤维素钠、木粉和大蒜油一并混合，从而将其团成直径介于1mm和2mm之间的近似球形的丸剂/粒剂。如此制得的颗粒是淡黄褐色并且具有非常强的大蒜/硫臭味。
随后在大约60℃下采用热气将颗粒干燥达2小时。随后对颗粒剂中所含有的浓缩物的HPLC分析显示：结构式为RSR、RS2R、RS3R和RS4R(R＝式-CH2CHCH2的烯丙基)的四种烯丙基硫化物相同的相对量与浓缩物分析相同。
颗粒剂的效果尤其取决于湿度，参见实施例5，该实施例涉及利用这类颗粒剂来控制甘蓝根蝇(并且包括证实该效果的结果)。
确信的是以这种方法由浓缩物形成颗粒剂进一步稳定了浓缩物中的活性成分。秘密地并且在非公开的许可下进行下述所有试验。
利用大蒜颗粒剂的兔子驱避试验
所进行的非公开试验表明用大蒜浓缩物浸渍的颗粒作为兔子驱避剂而言是有效的，参见实施例1。该试验有力证明了当胡萝卜远离大蒜时，大蒜颗粒/球在阻止兔子食用胡萝卜上也是有效的，参见实施例1。用于该试验的颗粒/球是用5％和/或20％的大蒜浸渍木粉制得的，其制备如前所述。
大蒜浓缩物的杀线虫活性
现已发现本发明的大蒜浓缩物作为杀线虫剂是有效的。如实施例2所示，最初的试管内结果确定了浓缩物对线虫的毒性，并且对大田试验应当使用的大蒜汁液浓缩物的稀释浓度提供了指示(在实施例2中以NEMguard来表示)。当将大蒜浓缩物用作液体制剂，在马铃薯作物上通过滴喂灌溉，以保护免受自由生活的和胞囊线虫的侵袭时，在如下两次施用大蒜汁液浓缩物下，观察到14％的作物总产量的增长。
现已发现，在水稀释度为0.05％v/v下，以NEMguard表示的大蒜浓缩物在24小时内杀死了几乎所有存在的线虫，在0.1％v/v溶液浓度下，在4小时达到完全杀灭，并且在0.25％v/v溶液浓度下，在1小时内达到完全杀灭。优选地，应当在植物浇灌期结束时将NEMguard与水相混合，以这种方法减少了产品远离主要靶标的洗脱。该处理应当理想地在作物生长周期期间每周进行。
相对于块根作物而言，应当施用杀线虫剂的临界期为条播后的4至5周。在该时间期间，杀线虫剂侵袭柔弱的新根尖，其引起根部的分叉和肿胀，结果损失品质和产量。自由生活的线虫的影响可以是所收获的全部作物变得不经济。
对于自由生活的线虫而言，NEMguard(大蒜浓缩物)的LD50确定为0.025％v/v，并且对自由生活的和胞囊线虫有杀线虫效果。该浓缩物已用于保护马铃薯、胡萝卜、欧洲防风草、草莓和甜瓜作物(n.b.PCN-马铃薯胞囊线虫)。
实施例3提供以NEMguard的大蒜浓缩物浸溃的颗粒的详细用途。涉及颗粒有效性的主要证据来自通过具有标准的颗粒剂施用器的条播机施用颗粒，如实施例3所述。
实施例3还涉及离体试验结果，参见3.2，其通过将用大蒜汁液浓缩物浸渍的颗粒剂(指ECOguard颗粒剂，实施例3的3.2部分)溶解在水中，随后将多种植物寄生线虫样品引入至上清液中。在2小时中，在颗粒剂与水为2.5w/v％的溶液浓度下，无一例外地杀死所有的线虫种类。
涉及NEMguard的实施例3的3.3部分涉及大蒜浓缩物的用途，并且通过采用离体试验，显示了大蒜浓缩物控制长针线虫(Longidorus elongates)以及其它线虫的效力。
实施例3的3.4和3.4.1部分显示了用大蒜浓缩物浸渍的木粉颗粒剂控制马铃薯胞囊线虫(PCN-Potato Cyst Nematode)的效力。
实施例3的3.5.1、3.5.2、3.5.3部分，实施例3A和实施例3B显示由于木粉浸渍颗粒剂控制胡萝卜线虫的效力，在胡萝卜作物中所观察到的木粉浸渍颗粒剂在减少分叉方面的效力。
实施例4进一步的结果表明由于该颗粒剂控制控制胡萝卜线虫的效力，用大蒜浓缩物浸渍的木粉颗粒剂在减少胡萝卜分叉方面的效力。
实施例4还显示了涉及将用大蒜浓缩物浸渍的木粉颗粒剂(NEMguard颗粒剂)和大蒜浓缩物/液体(CL AIL 0021)组合施用控制马铃薯胞囊线虫(PCN)的效力的结果。
实施例4的其它结果显示了用大蒜浓缩物浸渍的木粉颗粒剂(指ECOguard GR)和大蒜浓缩物(指ECOguard SR和CL AIL 0021)控制甜瓜上的根结线虫(Melioidogynae spp.)的效力。
实施例4A中的结果显示了浸渍大蒜的颗粒剂(指NEMguard)在栽培草莓大田中控制多种线虫种类即逸去长针线虫(Longidorus elongatus)、刻痕短体线虫(Pratylenchus crenatus)、不定矮化线虫(Tylenchorhynchusdubius)和厚皮副毛刺线虫(Paratrichodorus pachydermus)的效力。
甘蓝根蝇(Cabbage Root Fly)
利用以ECOguard颗粒剂的浓缩物的粒化形式表明当用于芜菁植物时，显著减少了甘蓝根蝇的损害，参见实施例5。
用1％的大蒜浓缩物溶液直接喷洒甘蓝根蝇卵显示了比不喷洒的卵对照样品的更低的卵孵化率。
家禽红蜘蛛(Poultrv Red Mite)
还发现将该大蒜浓缩物用作生物杀灭剂用于减少家禽红蜘蛛的侵染。与化合物例如氯氰菊酯(以商品名Barricade出售)相比，该浓缩物具有显著的优点，其在于能在鸟仍留在建筑物中的红蜘蛛侵染的建筑物中施用，但卵应在施用前转移。这是第一种申请人已知的植物性生物杀灭剂，其在推荐使用量下，该浓缩物用作接触性生物杀灭剂下，显示有效减少家禽红蜘蛛侵染。
当用于狭窄空间或略微污染环境中时，该浓缩物作为生物杀灭剂是尤其有效的。
在刺激使用研究中通常观察到超过85％的死亡率水平，并且类似的效果已经被报道并在秘密的大田试验中观察到：参见实施例6。
该浓缩物还起到驱避剂的作用并且显示抑制再度迁移。
常规的生物杀灭剂趋于具有单一的作用位点(乙酰胆碱酯酶抑制作用)，通过种群中的选择和突变作用，迅速地建立起对这些化合物的抗性。
确信的是本发明所公开的浓缩物(指Breck-a-sol用作控制剂防治家禽红蜘蛛)具有多位点作用，例如
·呼吸酶抑制作用
·膜分裂和去极化作用
·细胞溶质中的金属离子多价螯合(Metalion sequestration)和螯合
由于该产品如何起到生物杀灭剂的作用的生物化学的复杂性，从而降低了红蜘蛛对大蒜浓缩物建立抗性的可能性。
环境影响
近年来，随着越来越多地认识到环境问题而引起了促进更为环境友好性的农业措施，并且增加了带有有机标签的食品的生产。由于提供本文所公开的大蒜提取物用作农药或驱避剂是至为重要的一步，由于利用该提取物所形成的分解产品是完全天然的，相对于大蒜和韭葱已经长出后留在土壤中的相同材料而言，其具有相当低的水平。典型的大蒜和洋葱商品作物会比施用12kg/ha的Ecoguard颗粒剂向土壤多释放120-600倍的多硫化物，参见参考文献(1)。该断言的详细分析在附录2中提出，其中大蒜浓缩物指AIL 0021和CL AIL。
通过加入大蒜油加浓大蒜汁液浓缩物的浓度
包含在本发明大蒜汁液浓缩物中的多硫化物混合物类似于蒸馏的大蒜油的多硫化物混合物。因此根据本发明所制得的大蒜汁液浓缩物的多硫化物含量可以在随后通过加入大蒜油来加浓该产品。以这种方法加浓大蒜汁液浓缩物的多硫化物混合物获得具有提高多硫化物水平的材料，通式该大蒜汁液基质的性能保持稳定，最终所得的混合物具有长的储存期。以这种方式多硫化物的含量可以提高至超过7％w/w。所得混合物中的多硫化物水平的提高预期会提高该混合物作为农药、驱避剂的性能，并且还预期提高当将该混合物施用至露天条件下时该混合物的滞留时间。
本发明通过随后的权利要求加以限定。确信的是本发明所公开的农药对蚊子幼虫和其它的昆虫幼虫，以及线虫、蚜虫(半翅目)、藤本植物象鼻虫、多种甲虫(鞘翅目)、蛾和蝴蝶(鳞翅目)、软体动物、螨类和甘蓝根蝇具有尤其有效的毒性。该材料作为杀线虫剂特别有效。
关于其驱避性，该材料作为对昆虫、兔子和某些鸟类的驱避剂尤其有效。
实施例1利用大蒜III的兔子喂食驱避性试验
引言
在活兔组中的初步非公开试验证实了大蒜作为兔子喂食驱避剂的显著效果。更详细的试验分别在20只家兔中进行。在该试验中，随机选择兔子以采用5％或22％的大蒜汁液浓缩物浸渍的小粒。发现该用大蒜汁液浓缩物浸渍的小球导致了显著的驱避作用，尽管发现在两种大蒜浓度之间的效果无显著差异。
其它的非公开试验
进行进一步的非公开试验，该试验设计对小球寿命来测定大蒜驱避剂的寿命。该报告提供实验记录信息并且概括该试验结果。
材料和方法
该工作在20只所俘获的野生兔上进行。尽管通常成对关在栏中，在试验前和试验期间，每只兔子各自以3个一组保持在2米的室外栏中5天。在所有时间内，每只兔子自由地接触栏中市售的丸状兔子食物，以及自由生长的草，以及随意接触水。兔子主要是夜间喂食者，因此该试验在大约15:30和09:00之间进行。由于如此一来白昼时间短，因此相对于前面的试验而言，稍微延长暴露时间是不可避免的。
在开始实验之前，将来自新开包装的小球在干燥时进行预先称重，以确定刺激密度为12Kg的小球/公顷/碗所需的干燥小球的平均数。平均来说，其相当于5次对照小球(含有0％的大蒜)和6次试验小球(用5％大蒜汁液浓缩物浸渍)/碗。
在开始实验前6周，在户外的各盆中，让新开包装的对照和试验小球与‘露天’相接触。将标为23cm的塑料植物盆填入大约3cm深的砂砾，随后填入大约8cm的土壤(John Innes number 2，基于堆肥的土壤)。通过用大约200ml的蒸馏水进行灌溉来坚固土壤。让水流尽，将足够的小球(～2g)散布在土壤顶部以确保试验期间持续足够多的数量。随后将植物盆离开户外2个小时(即新鲜的小球＝0周)或离开2、4、5或6周，直至其用于实验的时间。风化16周包括暴露于阳光、雨(参见如下)和-12℃至20℃的温度范围下。
月份 单日实际的降雨量(mm)＞5mm  下雨天数
从9月12日 6.1  14.8  5.7  14.4  13
10月 16.4  9.5  11.7  15.6  20
11月 39.5  12.1  6.7  10.1  23
至12月27日 27.1  7.5  9.0  16
在开始试验前和非试验日期间，将切片的胡萝卜规则地置于兔子前以将差异最小化。采用双选择试验，将切片胡萝卜置于两个分开的碗中，一个采用对照小球，另一个采用试验小球；将200g的胡萝卜置于各个碗中。将碗置于不同的喂食点，其在栏中位于尽可能远的地方，以避免大蒜气味影响对照。为了避免地点影响，在实验的第二晚上将喂食点的点和碗进行交换。
在该测试中，总共进行了10周的实验，尽管这不包括在开始实验前6周的风化小球的时间。为避免习惯性作用，将每个兔子测试2个实验天，每两周一次。在所有20只兔子上测试5个小球寿命，即每个兔子测试5次。利用随机的拉丁方设计，将小球置于兔子上。兔子喂食实验开始于24/10/00，结束于28/12/00。
在实验日，将必需数量的晾干小球(至刺激率为12Kg ha-1)置于上釉陶碗中的湿润的滤纸上(用3ml蒸馏水湿润)。将涂有塑料的金属丝网置于碗中，以防治小球直接与胡萝卜相接触。这让小球的气味透进胡萝卜，并且活像小球相当地接近，但不与大田中兔子所消耗的植物接触。
结果
待减去兔子不能到达的胡萝卜‘残渣’，其从涂有塑料的格子落下后，计算两天后，在各喂食点所取食的总的食物的百分比。进行方差分析以研究对兔子的作用，测试浸渍大蒜汁液浓缩物的小球在所取食食物中的总的百分比的寿命周数(在两个喂食点)。
无证据表明，小球寿命在取食食物的总量上有作用(p＝0.479)。然而，发现在兔子之间所取食食物的量显著不同(d.f.＝16；p＜0.001)，尽管目前无证据在数周内表明取食食物的总量不同(d.f.＝16；p＝0.104)。
兔子之间对于浸渍大蒜汁液浓缩物的小球的个体差异如附图1所示。附图1显示了用大蒜浓缩物浸渍的小球和未用大蒜浓缩物浸渍的小球的喂食点之间所取食胡萝卜的对比。还注意的是，只有当小球是新鲜时，由于对照的存在，其比浸渍大蒜汁液的小球具有更相容的喂食反应。
为了分析大蒜效果，从对照点的百分比减去在大蒜小球点所取食的胡萝卜的百分比，获得由于大蒜汁液浓缩物所引起的所取食的胡萝卜的减少百分比。在小球的不同寿命所取食的胡萝卜的减少百分比平均值如下表所示。
小球寿命(周) 0 2 4 5 6
就大蒜与对照碗相比，所取食的胡萝卜的减少平均值 22.6％ 4.9％ 0.7％ 3.6％ 1.5％
ANOVA显示强有利的证据(p＝0.007)表明，平均来说，当小球是新鲜时，兔子从具有大蒜小球的喂食点所取食的胡萝卜少于当小球是老化时所取食的胡萝卜。没有证据(p＝0.5)表明风化2周或更长时间的小球是有效的。在95％的置信区间，当使用使用新鲜的小球时所取食的胡萝卜减少范围为10至36％。
注意的是，无证据表明先前的测试场合中，发现兔子所经受的小球寿命的遗留作用。
因此，可以看出，新鲜的小球在兔子的偏爱上是有作用的，尽管无证据表明风化2周或更长时间的小球有效。
结果和建议
强有力的证据表明当其以新鲜小球出现时，大蒜在阻止大多数的兔子取食胡萝卜是有效的，也可以采用没有大蒜气味的胡萝卜。然而，目前没有证据表明一旦在秋天和冬天时期小球被风化，该反应会持续2周或更长时间。
基于用新鲜小球的确定的和显著的结果，推荐进行类似的实验性测试，但在更高百分比的大蒜量/小球下，其可以抵抗由风化作用引起的表面损坏，从而延长该反应的寿命。特别地，小球中的大蒜汁液浓度百分比可以升至11％或22％。若该小球同样地暴露于露天中，将小球的密度从12Kg ha-1增加至20Kg ha-1或更高(最大密度为150Kg ha-1)未必可以获得增加的寿命。
实施例2利用大蒜汁液浓缩物(NEMguard)控制PCN(马铃薯胞囊线虫-苍白球异皮线虫(Globodera pallida))
NEMguard是一种用作强效杀线虫剂的大蒜汁液浓缩物。
对NEMguard制剂的一系列研究工作明确地证实了其对自由活动的和胞囊线虫的杀线虫作用。
液体剂型的NEMguard特别地通过滴流供给灌入来进行传送，并且在马铃薯作物上起作用产生非常显著的效果，增加14％的总产量归因于施用两次NEMguard。该非公开试验是在具有重要的马铃薯胞囊线虫(PCN)种群的大田中进行的。
实验室工作使得发明人能进一步研究大田记录(field protocol)。产品使用量的记录如下所示。
1.0溶液的使用浓度
已经显示了稀释为0.05％v/v的大蒜汁液浓缩物(NEMguard)的溶液取得在24小时几乎完全杀灭的作用。0.1％v/v的溶液浓度可以在4小时达到完全杀灭。0.25％v/v的溶液浓度可以在1小时达到完全杀灭。因此，使用该浓缩物应当就效率和成本之间的平衡在这三种稀释度中有计划地进行操作。
选择1(定时(timed))
若设想在最终的灌溉顺序将该浓缩物加至1000升的体积，则需要加入如下比例的体积。
@在1000升中的0.05％v/v＝0.5升NEMguard
@在1000升中的0.1％v/v＝1.0升NEMguard
@在1000升中的0.25％v/v＝2.5升NEMguard
最终1000升的理想渗滤时间应当达成最大保持在所期望含有迁移PCN的土壤体积中。毫无疑问地，在最后顺序的加入减少产品从最初目标流出。设想土壤为大田容量或接近大田容量(field capacity)，则会显示出减少排出，从而能将输送量得以保持足够长的时间。
优选在泵排出前，将NEMguard与最后的1000升水相混合。若不能如此，则应当在几分钟内将NEMguard加入管道工程以增加适当混合的机会。
选择2(全面(general))
如果我们设想在1-2小时将大蒜汁液浓缩物(NEMguard)加至～9000升的整个灌溉输送系统，则需要考虑加入如下体积：
@在9000升中的0.05％v/v＝4.5升
@在9000升中的0.1％v/v＝9.0升
@在9000升中的0.25％v/v＝22.5升
考虑两种输送方式，以其效果所给出的证据，定时和全面所确定的单次利用体积介于2.51和22.51之间。
考虑到用NEMguard杀死线虫的速度，总的方法应当为峰值剂量的最大值，同时经济上使得地面的水体积最小化。这种改变显著提高了总量/公项，从而使得制得更多的产品成为可能。
2.0结论
NEMguard对自由生活的线虫的LD50独立地确定为～0.025％v/v。对于在该值上的实质的产品输送浓度，这清楚地给出了相当大的范围，同时相比其它杀线虫剂而言仍然是经济的。
用NEMguard杀灭的迅速性有利于相对高的溶液浓度的“爆发(bursts)”，这通过在灌溉的最终加入可以设法达到。
该方法还允许几次重复施用，例如在6周的每周间隔下。
以单一的高用量在整个灌溉期间选择性施用产品。
如果系统的管理和基本结构允许，应当考虑多次爆发的方法。
3.0图示说明
设想在1-2小时中输送9000升。1000升花费花费6.6分钟泵送(1小时速度)
1将7000-8000升普通水泵入作物中；
2将2.5-5升的NEMguard加至最后1000升中，这需要约53分钟(剩余6.6分钟)；
3泵出；
4若加入NEMguard花费2分钟，则最后的脉冲(last pulse)是稀释在约660升中，这对分布产品应当是合适的；
5在任一的3-6周进行周重复，这取决于所使用的溶液浓度和所选择的速度/公顷。
实施例3大蒜浓缩物和用该浓缩物浸溃的颗粒剂控制线虫的效果
3.0概述
在马铃薯和根菜作物中的非公开大田试验确定了损害在商业上显著水平的减少，其中施用所提及的制剂NEMguard以控制线虫。
当与产品例如涕灭威(Temik)的效果相比，证据的主要部分源自使用以条播施用的颗粒剂产品。采用经农药安全指示(Pesticide Safety Directive)所允许的独立有机体，或在他们自己国家(南朝鲜)认可的类似有机体进行有限数量的试验。这些报告的结论支持其所声称的NEMguard具有杀线虫性能。
以颗粒剂“NEMguard”形式的最佳剂型显示良好地适宜作为涕灭威(Temik)和甲氨叉威(Vydate)在根菜类蔬菜中的替代品。
在实验室和大田实验下具有高度的一致性。
3.1序言
在发明人研究大蒜产品用于作物保护时期，该制剂作为杀线虫剂的潜在性变得日益清晰。实验室的初筛和在欧洲和韩国的马铃薯、防风草、胡萝卜和甜瓜作物中的重复的非公开大田试验相结合所提供的证据表明，大蒜产品(NEMguard)中的化学品可以杀死线虫。大田中的植物显示出对颗粒剂和液体的地面下施用有反应，其健壮性和总产量显著提高，这似乎与杀线虫作用有关。
在根菜例如胡萝卜实例中，清楚明确的证据表明通过在条播中单独施用NEMguard，可以显著地减少由自由生活的线虫所引起的品质问题例如根分叉和矮化。
利用长针线虫(Longidorus elongates)和马铃薯金线虫(Globoderarhostochiensis)的实验室对照实验和实验室对照生物测定还提供证据表明NEMguard是一种相比涕灭威(Temik)而言强有效的杀线虫剂。
欧洲对农药活性成分的期望是削减整个2007年所允许存在的活性物质的大约66％。杀线虫剂产品例如涕灭威(Aldicarb)已经在该强审查之下。该减少已经许可其在被认可的作物中用至2007年。
因此，目前对于具有杀线虫/杀线虫(nematistatic)活性的环境良好性产品取代高毒性产品例如涕灭威、甲氨叉威和溴甲烷有着巨大的机会。
3.2方法介绍
在1998年进行了用大蒜控制线虫的初步生测工作。该工作涉及将用大蒜汁液浓缩物配制的实验性ECOguard颗粒剂溶解在水中，随后将多种植物寄生线虫品种试样引入上清液中。无一例外地，于2小时中，在颗粒剂对水的溶液浓度为2.5％w/v下，杀死了所有品种。
在苍白球异皮线虫(PCN)和逸去长针线虫(root fanging)实例中，用浓度为1.25％w/v的溶液在4小时中达到该水平的致死率。在长针线虫属(Longidorus spp.)实例中，用浓度为0.25％w/v的溶液在24小时中产生有效的致死率。
自上述初步的筛选实验以来，通过将非公开大田试验和进一步的实验室研究相结合，本发明人保持对线虫学的调查和研究计划。
来自使用该制剂的实验室和大田规模的数据清楚地证实了在经济的使用量下的杀线虫性能。尤其重要的情形是其中将颗粒剂施用于根菜类作物例如胡萝卜和防风草以保护它们免受自由生活和胞囊线虫的损害。
3.3结果
表3.3.1实验室效果，死亡百分比(SCRI 1998)。用大蒜汁液浓缩物(NEMguard)的第一次实验
线虫品种/产品比例 接触2小时 接触4小时 接触6小时  接触24小时
毛刺线虫
2.5％ 100 100 100  100
1.25％ 0 100 100  100
0.25％ 0 4  14
对照小球 0 0 0  0
金线虫
2.5％ 100 100 100  100
1.25 98 100 100  100
0.25％ 7 13 18  72
对照小球 0 0 0  0
长针线虫
2.5 100 100 100 100
1.25 77 100 100 100
0.25 3 4 34 58
对照小球 0 0 0 0
上述数据清楚地显示以NEMguard制剂的对线虫的毒性材料。
该结果证实，当将大蒜汁液浓缩物用于实验室生测时，其相对于溶液浓度的杀灭比率。附图2是显示实验室生测大蒜汁液浓缩物控制逸去长针线虫的图解表示。死亡率是根据在不同稀释液下的接触时间(1-24小时)来分组的。
该数据表明在24小时下的LD50为大约0.025％。
3.4颗粒剂对自由生活的线虫的影响
在马铃薯作物上的非公开大田试验提供证据表明以增加的施用量对PCN的影响。当将NEMguard施用于根菜类作物时，通过缘于线虫取食的量的差异和根部畸形类型可以评价该产品的影响。
UK根菜工业非常严重地依赖涕灭威(Temik)作为减少根部损害并提高胡萝卜和防风草作物产量的药剂。在2003年，本发明人开始进行非公开大田试验以评价NEMguard取代涕灭威(Temik)在这些蔬菜作物中的可能性。
当确定根菜作物时，将涕灭威(Temik)随同种子一起施用至相同的犁沟中，并对新长出的胚根提供保护。线虫侵袭柔弱的新的根尖，其导致根部分叉和矮化，结果损失品质和产量。自由生活的线虫的影响会使得整个作物的收获变得不经济。
3.4.1在Hainford(诺里奇(Norwich))的防风草作物
在Hainford(诺里奇(Norwich))的非公开试验中，本发明人用含有以反映商业上最佳实践的比例的涕灭威(Temik)安排了8次重复，6个随机处理区域。所含有的NEMguard以4种比例：5、10、15和20 kg/ha，并且所有这些比例参考未处理对照。所有的施用通过具有标准颗粒剂施用器的市售种子条播机来进行。测试线虫聚居并且被认为经证实施用涕灭威(Temik)而处于损害危险的点。
在成熟的中间阶段评价作物并且确定分叉和有尖端的根的比例。
各处理之间出现了根尖的显著差异，附图3进行了说明，其显示了在Hainford(诺里奇(Norwich))的防风草作物中的根部分叉。
箱体(附图3)表示内四等分范围，其包含50％的数值。根须是通过重复从箱体延伸至最高和最低值的线状物，其包括逸出部分。穿过箱体的线表示中间值。各处理显著不同。
处理
1＝对照
2＝Temik(涕灭威)
3＝NEMguard5kg/ha
4＝NEMguard10kg/ha
5＝NEMguard15kg/ha
6＝NEMguard20kg/ha
对照(处理1)比分别为5-20kg/ha的所有NEMguard处理(3-6)具有显著更多的分叉和有尖端的根。在10-20kg/ha下的NEMguard处理显著优于Temik。在该试验部分也提供证据表明提高的NEMguard施用量增加植物竖立性(Plant stand)(附图4)。
附图4与处理相关的植物竖立性
该条表示各重复的数值范围。Temik和所有的NEMguard施用表现出相比对照而言提高了植物的竖立性。20kg/ha用量的NEMguard几乎与对照完全不同。
综合考虑，在根部分叉和植物竖立数上的数据充分地证实了在保护作物免于植物损失和根部损害方面，NEMguard与Temik同样有效。
3.5.1胡萝卜试验，Posketts农场，约克郡(Yorkshire)
在胡萝卜上进行上述对防风草的试验。该非公开试验比较了20kg/ha用量的NEMguard相比Temik的效果，所述Temik以反映商业上最佳实践的比例来施用。所有处理参考未处理对照。基于从土壤样品中所测得的线虫数量来选择位点。
该试验进行3次重复，所有的处理通过常规的安装条播机的拖拉机来施用。
表3.5.1 NEMguard对根部分叉和矮化的影响。概括性试验结果，Posketts农场，约克郡(Yorkshire)
4次重复，随机的地块
1对照
2Temik(涕灭威)
3标准的ECOguard20kg/ha
在各重复中有尖端的和矮化根的百分比
 对照 涕灭威 EG(标准)
地块1  3.2 3.0 4.8
地块2  11.1 4.4 2.8
地块3  16.8 7.7 7.8
地块4  8.6 9.0 4.5
平均值/重复  9.92 6.02 4.97
所取样的根总数/处理
    441     505     421
对上述数据的统计分析未显示各处理间显著的差异。该数据具有某些清楚的趋势，即具有约50％的对照比其它处理有更多的尖端和矮化的胡萝卜。检测大量的根/处理进一步确定了该效果的可靠性。
附图5给出了根据地块之一所看到的症状的说明示意图。
该试验提供充分的证据表明NEMguard制剂将根部分叉和矮化显著降低至至少在同样的试验中用Temik所记录的程度。
3.5.2进一步的试验结果涉及预防由线虫引起的胡萝卜的根部出现尖端
基于寻找Temik的取代品的压力，进行了一组非公开试验以比较和对照Temik、Vydate、Nemathorin和Nemguard的效果。在胡萝卜上的试验分布在Norfolk(诺福克)、Yorkshire(约克郡)和Nottinghamshire(诺丁汉郡)三个地点，并且包括条播施用以20kg/ha的NEMguard。各场所的根部分叉百分比的一览表如下表3.5.1所示。
基于土壤样品中自由生活的线虫种群来特别地选择所有的地点。
表3.5.2在3个地点的胡萝卜作物的根部分叉百分比的相对差异
 产品 用量/ha  试验1，Notts 试验2，Norfolk 试验3，Yorks 各试验的平均值
 未处理对照  14.3 17.2 14.1 15.2
 Temik 8.45  6.3 6.0* 13.7 8.6
 Vydate 13.75  9.3 10.4 11.0 10.2
 Vydate 20.0  9.2 8.4 15.2 10.9
 Vydate 25.0  7.5 6.6* 14.9 9.6
 Vyate 55.0  9.0 9.4 9.1 9.2
 Nemathorin 17.8  14.3 8.7 10.6 12.2
 NEMguard 20.0  11.2 4.7* 12.8 9.6
*显著地优于对照
在Norfolk地点产生显著的处理效果，其中NEMguard是最有效的处理，其减少了73％的根部分叉。相比之下，Temik减少了65％的根部分叉。总的来说，通过所有三个试验地点，NEMguard、Temik和vydate(以所有用量)展示出完全相似的控制水平。
3.5.3用NEMguard控制胡萝卜胞囊线虫的试验
本发明人进行了一组非公开的盆栽试验，该试验采用种植于大田土壤中的胡萝卜和历来受到产量和品质损失影响的生产作物，所述损失归因于胡萝卜胞囊线虫胡萝卜异皮线虫(Heterodera carotae)。
当评价这些实验时，证据表明由胡萝卜胞囊线虫导致的在症状上的处理和剂量影响。以表现出优于任何其它处理的相当于30kg/ha的用量来施用NEMguard。
非公开的大田规模研究从如下的盆栽试验开始，其中将10、20、30和40kg/ha四种用量的NEMguard与未处理对照相比较。
独立地评价该试验，该试验产生了明确的处理和用量效果的经济重要性。在试验中，所有的NEMguard施用提高了可销售的产量。以20kg/ha施用NEMguard产生了最大的收益，其提高了12.6吨/ha的总产量。
大田试验中的NEMguard效果如下表所示。用10-30kg/ha的ECOguard也提高了可销售根的数量。
设想如下在胡萝卜中使用ECOguard提供实质上的经济收益：
在秋天平均收获100吨/ha。
平均的销售价格每公斤为0.78Dkr。
大约1.000.000胡萝卜/公顷，其具有最佳重量100克/胡萝卜。
表A：利用ECOguard在Lammefiorden胡萝卜中的经济利益。
处理 可销售的胡萝卜(吨/ha) 特级产量(吨/ha) 总重量(吨/ha) 特级产量(吨/ha) 总的特级产量(吨/ha)
0kg 69,4 - 75,0
10kg 73,4 4,0 76,6 1,6 5,6
20kg 76,2 6,8 87,6 12,6 19,4
30kg 78,5 9,1 86,3 11,3 20,4
40kg 73,1 3,7 79,8 4,8 8,5
上述表A中的数据清楚地说明了在20kg/ha的NEMguard下所看见的最佳效果的用量反应。
实施例3A
利用胡萝卜胞囊线虫的非公开试验
目的：该试验的目的是观察对胡萝卜胞囊线虫的可能的用量反应，以便确定在大田试验使用的最佳用量。
作物：胡萝卜F1 CR 501，用福美双(Thiram)涂覆。
开始试验日期：2004年1月15日
评价试验日期：2004年4月7日和2004年5月11日。
试验区：10行的盆/处理。无重复。
植物：10粒种子/盆
处理：未处理
10kg/ha＝14颗粒剂/盆＝50mg/pot
20kg/ha＝28颗粒剂/盆＝100mg/pot
40kg/ha＝56颗粒剂/盆＝200mg/pot
80kg/ha＝112颗粒剂/盆＝400mg/pot
在每盆中用大约0.5-1cm的土壤覆盖种子和颗粒剂。
结果：
在一开始的4月的第一次评价中，在不同处理之间根部外表出现巨大差异。未处理的胡萝卜比用10-80kg/ha处理的胡萝卜有更少的白色根。在用量上没有明显的差异。胡萝卜非常小，因此决定在最终的评价前再等待一个月。
由于仅仅只有10盆/处理，因此在该筛选试验中不能进行统计分析。因此该结果仅仅显示在大田中可以预期的趋势。
表1：各处理中所划分的结果。
处理(kg/ha) 0 10 20 40 80
胞囊的平均数 14,4 12,7 9,1 6,6 8,3
最长叶片的平均长度 11,28 11,00 12,67 12,78 11,83
平均健壮度 2,33 2,11 2,89 3,33 3,11
健壮度：
1：差
2：
3：
4：最佳植物
胞囊的数量：
胞囊的数量是粗略计算每个胡萝卜上的数量。估计所有植物/盆的胞囊的平均数。
胞囊的数量看起来随着大蒜浓缩物用量的增加而减少。随着增加用量，易于增加最长叶片的长度和植物的健壮度。由于相比之前的用量来说，叶片的长度和健壮度降低，但同时看起来胞囊的数量增加，因此80kg/ha的用量会有植物毒性。
表2：各等级中所划分的胞囊的平均数和最长根的长度
健壮等级 1 2 3 4
胞囊的平均数 16,00 10,7 8,8 9,1
最长根的平均长度 10,8 11,2 11,8 13,08
从表2可以看出，从最差的等级1至最好的等级4该胞囊的数量显著减少。从各等级中最长叶片的平均长度增加。
表2的数字证实了在植物间所观察到的可见差异。
表3：在各健壮等级的盆百分比(9盆/处理)
处理(kg/ha) 0 10 20 40 80
等级1 22％ 11,1％ 11％ 0％ 11％
等级2 30,3％ 66％ 11％ 22％ 11％
等级3 31,3％ 22％ 55,5％ 22％ 33,3％
等级4 11％ 0％ 22％ 55,5％ 44,4％
从表3可以看出，随着用量从10至40kg/ha，多数优良的有生命力的植物从等级2移至等级4。在10kg/ha下，无植物为等级4。在40kg/ha下，无植物为等级1，但是超过半数的植物为等级4。因此，存在着随着ECOguard用量的增加出现更多健壮植物的趋势。可以看出80kg/ha并不优于40kg/ha。
结论：
·观察到用量反应。
·随着施用10-40kg/ha减少了胡萝卜胞囊线虫的数量。
·随着施用10-40kg/ha增加了健壮度和最长叶片的长度。
·随着施用20-40kg/ha发现高健壮度等级(3-4)中的最多盆数。
·对胡萝卜胞囊线虫的最佳用量优选20-40kg/ha。
实施例3B显示浸渍大蒜浓缩物的颗粒剂控制胡萝卜胞囊线虫的进一步 的结果
背景：
在Sealand的Lammefjorden，由于其土壤富有营养并且对于胡萝卜而言具有理想的化学结构，因此已经种植胡萝卜许多年。不幸地是，在试验点多年的胡萝卜种植将胞囊线虫的害虫压力增加至在许多土壤中不能进行胡萝卜种植的程度。
目的：
该试验的目的是调查是否能降低/减少后期的胡萝卜免于胞囊线虫的侵袭。
试验方案：
在非公开试验中，将1公顷受线虫侵袭的土壤分成6行，并且条播胡萝卜种子和ECOguard颗粒剂。两个未处理行。跟踪并测定6个试验区/行的胡萝卜(大约80-100株胡萝卜/试验区)。
处理： 0kg/ha 10kg/ha 20kg/ha 30kg/ha 40kg/ha 0kg/ha
在2004年5月12日条播并处理胡萝卜。在2004年9月25日评价该试验。
对四行1米的范围进行跟踪、分类、计数和称重。在未处理和20-30kg的ECOguard/ha之间可以看见生长差异。
结果：
表2：好和坏的胡萝卜数量。
数量 好的胡萝卜号 好的胡萝卜增加％ 坏的胡萝卜号 总的胡萝卜号
0kg  48,67  37,83  86,50
10kg  59,33  +15,7  38,33  97,67
20kg  48,17  -1,0  27,00  75,17
30kg  58,00  +19,2  26,00  84,00
40kg  51,17  +5,1  34,33  85,50
施用10至30kg/ha的ECOguard增加了好的胡萝卜数量。在行中，用20 kg/ha处理具有大约与未处理胡萝卜相同数量的胡萝卜。对于胡萝卜数量的减少未作解释。
10和30kg/ha的ECOguard获得16-20％更多的可销售的胡萝卜。减少了坏胡萝卜的数量。所增加的胡萝卜总量平均为11株胡萝卜/1米行。
目前存在一个趋势是对于施用40kg/ha的ECOguard胡萝卜相应地出现植物毒性。从上表和下表可以看出40kg/ha不能改善胡萝卜的品质。
附图4显示了由胞囊线虫所引起的变形类型，即具有压扁尖端的小胡萝卜，裂开和变形的胡萝卜。
表1：好和坏的胡萝卜重量
处理  好的胡萝卜重量(g) 坏的胡萝卜重量(g)  总重量(g) 增加的重量％
0kg  4494,08 1964,17  6458,25 -
10kg  5391,00 1950,83  7341,83 +13,7
20kg  4922,33 1545,50  6467,83 +0,15
30kg  5583,33 1529,83  7113,17 +10,1
40kg  4921,17 1820,17  6741,33 +4,4
由10至30kg/ha，增加好的胡萝卜的重量。总重量增加10-13.5％。20kg/ha再一次地不符合该趋势。
表2：平均的根数量/试验区、平均根重、平均根重增加百分比和可销售的胡萝卜百分比。
处理 平均的根数量/试验区 平均根重(g) 平均根重增加％ 可销售的胡萝卜％
0kg 86 75,0 69,4
10kg 94 76,6 +2,1 73,4
20kg 76 87,6 +16,7 76,2
30kg 84 86,3 +15,0 78,5
40kg 89 79,8 +6,5 73,1
可以看出，在10kg/ha下，根的平均数量/试验区最高。在20kg/ha下，胡萝卜数量最低。或许条播机没有正确播种种子。在0、10、20、30和40kg/ha之间无显著差异。随着10-30kg/ha，根的平均重量增加。该增加介于15-17％根重之间。
随着10-30kg/ha的ECOguard，可销售根的数量增加。
表3：在Lammefjorden胡萝卜中使用ECOguard的经济利益
处理 可销售的胡萝卜(吨/ha) 额外的产量(吨/ha) 总重量(吨/ha) 额外的产量(吨/ha) 总的额外的产量(吨/ha) 总的毛利润Dkr/ha
0kg 69,4 - 75,0
10kg 73,4 4,0 76,6 1,6 5,6 4.370,00
20kg 76,2 6,8 87,6 12,6 19,4 15.130,00
30kg 78,5 9,1 86,3 11,3 20,4 15.910,00
40kg 73,1 3,7 79,8 4,8 8,5 6.630,00
秋天平均的收成为100吨/ha。
每公斤平均的销售价格为0,78Dkr。
大约1.000.000株胡萝卜/公顷具有100克/胡萝卜的最佳重量。
结论：
清楚的趋势是减少了胞囊线虫对胡萝卜的侵袭。
用30kg ECOguard/ha增加了17％的可销售胡萝卜的数量，平均根重从75克增加至86克。最佳的胡萝卜重达100克。
在条播时仅处理1次胡萝卜-在生长季节，利用颗粒剂或液体形式的大蒜浓缩物，最佳的用量为2-3次处理。例如在条播时以颗粒剂形式，在生长季节以液体形式。
实施例4
7.3 ECOguard作为杀线虫剂
7.3.1胡萝卜试验
对在Posketts的非公开胡萝卜试验(参见实施例3)的数据进行分析，清楚地显示了在条播时施用NEMguard颗粒剂减少了根部分叉。效果的等级在附图6中示意性说明，其中显示了各处理控制分叉的比例。
处理1为对照，处理2为Temik(涕灭威)，处理3和4为施用20kg/Ha的NEMguard颗粒剂。2次NEMguard施用统计上几乎完全不同于对照，并且非常类似于在Hainford所看到的对防风草的数据图(参见实施例3)。无论如何，在两种作物中，NEMguard和Temik显示出产生同样的效果水平。
7.3.2在Needham Field，Yaxley的PCN
如下的报告显示，当将NEMguard颗粒剂和CLAIL 0021液体(大蒜浓缩物)组合使用时，其总产量增加；在最终的作物生产周期，将大田进行再取样以测定残留的PCN卵/克。将结果与最初的卵/克的数据相比较，并且如表7.3.2所示。
表7.3.2在Needham Field，Yaxley的PCN数量
地区/处理 最初的卵/克 最终的卵/克 Fp/Ip比例
 1颗粒剂+液体 (15)  0  0
 2仅30kg的颗粒剂 16  5  0.3
 3仅30kg的颗粒剂 18  1  0.05
 4颗粒剂+液体 35  46  1.31
上表7.3.2的数据表明高度抑制了PCN的繁殖。
所观察到的最重要的数据是在地区4中，其中出现了商业上非常重要的PCN群体，其是在收获初期发现的。再取样数据还证实了高PCN群体存在于该地区，但是由于马铃薯作物看起来最小，因此群体的增加比例实质上与最初所发现的比例相同。由于在马铃薯作物中使用杀线虫剂，非常显著的结果是主要抑制了PCN的繁殖，并且理想地保持接近于作物开始的群体的卵/克。
在杀线虫效果的证据下，1.31的Fp/Ip比例通常会得到农药安全管理局(Pesticides Safety Directorate(PSD))的认可。
7.3.3在Sun Melons(韩国)的根结线虫控制
在非公开试验中，评价NEMguard(用大蒜浓缩物浸渍的颗粒剂)和CLAIL 0021液体(大蒜浓缩物)作为杀线虫剂对根结线虫的效果。
最终的报告显示，所有的ECOguard制剂在统计上等量于克百威(Carbofuran)，发现各处理与对照之间存在显著差异。
总的来说，该报告显示“与克百威(Carbofuran)相比，处理30天后，Eco-guard GR和SR显示83.5-94.9％的控制效果，以及87.9-97.1％的控制效果(60天后)，而无植物毒性。因此，该产品可以用作东方甜瓜上的根结线虫Meloidogynae spp.的杀线虫剂”。
对数据的再评价表明，由于在一开始的各处理重复中的最初的线虫数量分布不规则，相比克百威的效果会低于上述效果，但是尽管实质上如此，1.25％的溶液浓度具有克百威的77％的效果。
即使在解释结果中容许一定程度的谨慎，但在韩国的数据有力地证明了CLAIL 0021制剂作为杀线虫剂对种类的蔓延分布和主要经济重要性起作用。
实施例4A在用于栽培草莓的大田中，NEMguard控制土壤生活的线虫的效果。
在非公开大田试验中，如下的结果证实了在受到一定量的不同种类线虫侵袭的大田中，所述的大田用于栽培草莓，大蒜浓缩物控制线虫的效果。若未控制这类侵袭，则会导致不得不抛弃这些草莓作物。
在挪威，长针线虫Longidorus elongatus(逸去长针线虫)是一种草莓的严重根部寄生虫，其损害阈值为3-5-ind./250g土壤。由于逸去长针线虫，优良的田地被抛弃，并且在严重的情形下，损失2农事年。
于2005年，在挪威南部的Marnardal，在受到逸去长针线虫(Longidoruselongatus)、刻痕短体线虫(Pratylenchus crenatus)、不定矮化线虫(Tylenchorhynchus dubius)和厚皮副毛刺线虫(Paratrichodoruspachydermus)侵袭的大田中研究NEMguard处理在第一年草莓(cv.Polka)中对生长参数的作用。对草莓控制的显著差异(S)以P≤0,05来注释，所记录的趋势(t)范围为0,10≥P＞0,05；非显著差异(NS)以P＞0,10来注释；2个样品测试。
处理 生长等级 叶片的数量 纤匐枝的数量 冠的数量
NEMguard8g/m2 S S t NS
NEMguard16g/m2 S NS NS NS
NEMguard32g/m2 S S NS NS
NEMguard是涉及用大蒜汁液浓缩物浸渍的颗粒剂。
实施例5将ECOguard颗粒剂用于控制挪威的甘蓝根蝇损害的大田试验的效果数据概述
1.0序言
在广泛计划的非公开大田试验中，其包括在5种芜菁作物中进行。该大田试验设计基于多重施用ECOguard液体(大蒜汁液浓缩物)或颗粒剂(用大蒜汁液浓缩物浸渍的木粉颗粒剂)，5种芜菁试验中的4种参照作为标准的乐果(Dimethoate)。
申请人对所进行的所有芜菁试验的原始数据进行分析显示，在5个试验中的2组(Romedal和Toten)中，在甘蓝根蝇损害上的显著的处理差异。在Toten，甘蓝根蝇损害的减少引起提高28％的可销售产量。
总的说来，乐果和ECOguard显示出降低相同水平的甘蓝根蝇损害，尽管这在Toten是唯一有意义的。
比较两个试验(Toten和Ga-Fa)，其具有相同水平的甘蓝根蝇损害(RDI分别控制57.33和68.69)，但是在处理施用期间大不相同的降雨清楚地显示了降雨影响的效果。看来大雨并持续的降雨除去了任何有效的作用。
2.0结果
在下表中总结整个效果。
表1四个新地点的组合的根部损害指数(RDI)
处理 Mid-Troms  SorOst  Ga-Fa  Toten*  平均值 变化％
对照 38.29  24.33  68.69  54.67  46.49 -
乐果 40.60  24.92  65.78  44.33  43.90 -5.8
 ECOguard 36.29  24.33  71.67  42.24  43.63 -6.5
*对照和3次施用ECOguard颗粒剂的显著差异。
表2 各地点的平均可销售产量，kg/样品(cat 1+2，Norwegian notation(挪威的表示法)，1＝未损害，2＝轻微损害)
Mid-Troms  SorOst  Ga-Fa  Toten
处理 平均值 变化％
对照 5.29  19.87  7.78  11.05 10.99 --
乐果 5.84  22.16  7.27  11.95 11.95 +8
ECOguard 5.81  23.62  6.81  15.35 12.89 +15
上表1和2中的数据表明平均减少了与乐果和ECOguard相关的甘蓝根蝇损害。在Toten，显著降低了甘蓝根蝇的损害。
在四个地点，ECOguard产生了可销售材料的最佳收益，大约双倍于使用乐果的收益。
在各处理农学影响上的相应数据与减少甘蓝根蝇损害提高可销售的产量相一致。在ECOguard情形下，总的可销售产量的平均增加15％，在Toten记录的最大值为28％，这与在该地点相应地显著减少甘蓝根蝇损害相一致。
关于在Ga-Fa和Toten降雨的效果比较，具有最佳的甘蓝根蝇侵袭的两个试验显示在Ga-Fa的效果损失几乎无疑归因于在第一次施用后无降雨，与第二次和第三次施用相关的非常大的降雨。
在Ga-Fa，覆盖第二次和第三次处理的14天的降雨记录为95.2mm。与之相反的是，在Toten，覆盖第二次和第三次处理的相同时期的降雨记录为17.5mm，主要下小雨为主。
记录两个地点的实际降雨如下表3所示。
表3比较Toten和Ga-Fa的降雨
Toten第一次处理为2004年6月30日
GaFa第一次处理为2004年6月11日
各试验每隔一星期施用3次ECOguard颗粒剂。
 Ga-Fa  降雨  Toten  降雨
 6月8日  0.0  6月27日  0.1
 9  3.2  28  5.1
 10  1.2  29  1.2
 11第一次施用  0.0  30第一次施用  0.0
 12  0.0  7月1日  1.7
 13  0.0  2  19.4
 14  0.0  3  -0.1
 15  0.0  4  0.0
 16  0.0  5  8.3
 17第二次施用  0.0  6第二次施用  2.0
 18  0.0  7  -0.1
 19  9.2  8  0.0
 20  13.8  9  -0.1
 21  3.8  10  0.1
 22  6.8  11  0.1
 23第三次施用  2.4  12第三次施用  0.1
 24  28.8  13  1.0
 25  16.2  14  0.0
 26  4.0  15  0.0
 27  0.0  16  0.0
 28  0.0  17  -0.1
 29  10.0  18  15.1
 30  0.0  19  0.7
 20  -0.1
 6月8日-30日总的降雨  99.4mm  6月27日-7月20日  55.4mm
 第二次施用至最终时期的降雨  95.2mm  第二次施用至最终时期的降雨  17.5mm
 第一次施用前4天的降雨  4.2mm  6.3mm
在第一次处理前各地点的降雨量非常相似，4.2和6.3mm。然而在第一次施用后，在各地点的降雨变得完全不同。在第二次施用后的10天来进行比较。在Ga-Fa，在第一次施用后连续8天无降雨，其还包括第二次施用的2天。随后，出现8天连续的降雨，其中的第三次施用在该降雨期间进行。在该8天中所记录的降雨量为85mm。
在Ga-Fa的第一次施用经受了8天完全干燥的条件，随后第二次和的三次施用分别经受了8天和4天连续的大雨，由于这表示本发明人确信的对效果造成负面影响的极端条件，因此可以期望来自ECOguard的任何效果。事实上，经受1次或其它这种极端的各处理完全放弃了对甘蓝根蝇的任何影响。数据对此进行反映。
相反，在Toten地点，比Ga-Fa经受远远更为稳定的条件。在施用后两天，第一次施用经受大雨事件(19.4mm)，其可能对效果有负面影响，但在产率高峰的中间进行的第二次和第三次施用经受11天连续稳定的条件，其仅有非常小的降雨(在单日最大降雨量为1mm)。该条件被认为是达到最大效果最为理想的条件。本发明人预先由显示上述情形的实验室研究提交了数据。因此，期望在Toten的第二和第三次施用是有效的。
在Toten对甘蓝根蝇损害的统计学分析显示，乐果和ECOguard显著地降低了损害(P＝0.004)，这导致就农学意义上而言，由ECOguard处理增加了可销售的材料。
RDI、乐果和ECOguard显著地优于对照，但彼此间无显著差异。
Trt 1＝对照
Trt 2＝乐果
Trt 3＝ECOguard
trt＝1减去：
水平trt    平均值的差异    差异的SE      T-值     经调整的P-值
2          -0.3100         0.1223        -2.535   0.0302
3          -0.3900         0.1223        -3.190   0.0041
2.1        Romedal
用芜菁的第5个试验地点收获早于表1和表2所介绍的四个其它地点。
该地点经受一般轻微的害虫压力，但包括喷雾施用的一组其它ECOguard处理。
当由GLIM ANOVA进行分析时，来自该试验的数据在处理中产生显著差异，所有的ECOguard处理具有比对照更低的甘蓝根蝇损害。
这一点如下所示。
在C7上进行的Kruskal-Wallis试验。
Trt     N      中间值      平均等级    z
1       75     0.00E+00    218.4       2.72
2       75     0.00E+00    175.4       -1.13
3       75     0.00E+00    182.8       -0.47
4       75     0.00E+00    175.4       -1.13
5       75     0.00E+00    188.1       0.01
总计    375
H＝23.38 DF＝4 P＝0.000(各结调节)
所有的ECOguard处理具有比对照(trt 1)显著更低的甘蓝根蝇损害(P＝0.000)。处理5为ECOguard颗粒剂并且显示出减少14％的总损害。
显示根部损害指数的数据对对照给出的数值为11.6，对ECOguard颗粒剂给出的数值为4.9(PSD计算)。
尽管在Romedal的侵袭水平低，其RDI值为11.6，在Toten产生更高水平的侵袭，其RDI值为54.67，(高于在2004年来自英国大田试验的对照所记录的任何值)，然而这两个地点显示了对甘蓝根蝇损害的显著减少。
在Romedal和Toten的一个常见特征是与施用第二次和第三次处理相关的通常稳定的条件。在Toten和Romedal的降雨数据如表4所示。
表4 Toten和Romedal的降雨比较
Toten 降雨 Romedal 降雨
6月30日第一次施用 0.0 第一次施用 1.7
7月1日 1.7 30.2
2 19.4 0.2
 3  -0.1 0.0
 4  0.0 4.2
 5  8.3 4.5
 6  2.0 0.0
 7第二次施用  -0.1 第二次施用 0.0
 8  0.0 0.0
 9  -0.1 0.0
 10  0.1 0.0
 11  0.1 0.2
 12  0.1 2.0
 13  1.0 0.0
 14第三次施用  0.0 第三次施用 0.0
 15  0.0 0.0
 16  0.0 0.0
 17  -0.1 17.9
 18  15.1 0.7
 19  0.7 0.0
 20  -0.1 0.0
 21  0.0 第四次施用 0.0
 22  0.3 0.7
 23  -0.3 0.0
 24  33.2 3.3
在Toten和Romedal，相应于检查第一次的甘蓝根蝇卵，在同一天开始进行处理。随后每周在两个地点进行处理，在Romedal的处理比在Toten的处理多一次。因此在两个地点的第一次、第二次和第三次处理是同步的并且经受非常类似的降雨方式和强度，在两个地点的处理2和处理3相关的周期是非常微弱的。
如表3所论述的，与Ga-Fa的降雨方式和强度相比，其在第二次和第三次施用期间降雨是非常大的并长时间的。在Toten和Romedal的效果证据表现出非常接近稳定的条件和小雨，第二次和第三次施用相应于产率高峰。
3.0结论
在挪威的芜菁上的非公开大田试验表明ECOguard颗粒剂显著降低甘蓝根蝇的损害；这与挑战强度无关。在11.9-54.67的控制范围中，在用RDI值设置的数据中看出显著的差异。
该试验不是以阶乘加入产品为特征的，但其可以从降雨数据中清楚地推断出，当大部分时候出现小雨时，显著的效果主要是源于在害虫压力高峰施用第二次和第三次处理。
若限制误解试验数据，并且在适宜的环境条件下，用正合时宜的施用可以获得共同证实有用水平的产品有效性，该结论未与从UK的非公开试验所获得的数据不相符合。
可销售材料的最大增加收益为28％，其与被认为是商业重要的在Toten的ECOguard颗粒剂施用相关。在UK，这类增加收益等同于约11.2吨的材料，其价格在约200英镑/吨，这表示增加收益约2240英镑/公顷。
该颗粒剂的效果尤其依赖于相对于甘蓝根蝇产卵的湿度和施用时间。
相对于在生测点布置新产卵的时间，这些试验认为是与将水施用至颗粒剂同步的。
在总的两种土壤类型中，用10枚卵/测定，重复10次的如下处理：
1.对照(水+卵)
2.颗粒剂+卵
3.颗粒剂+卵+在卵1天后加入水
4.颗粒剂+卵+在卵30分钟后加入水
5.颗粒剂+水+1天后加入卵
6.颗粒剂+水+30分钟后加入卵
获得如下的结果：
孵出卵的百分比
表1
土壤类型 Treat.1 Treat.2 Treat.3  Treat.4  Treat.5  Treat.6
自然 95 81 80  12  59  4
堆肥 96 76 39  15  68  18
平均 95.5 78.5 59.5  18.5  63.5  11
(Treat.＝处理)
获得如下结果：
孵出卵的百分比
上述结果提供清楚的证据表明对于提高效果而言将水施用至颗粒剂是不可缺少的。可能最接近类似于常规的大田情形的处理3显示卵和颗粒剂存在于植物上，随后出现降雨，卵孵化降低38％。若在放置卵后立刻湿润颗粒剂，则可以大大地提高效果水平(降低80％)(处理4)。该效果归因于待孵出后，新的甘蓝根蝇卵在短时间内保持可渗透性，并且在该时间下ECOguard的活性更易于进入到卵中。从上述数据还暗示出相对于害虫压力会对效果有主要影响的施用ECOguard颗粒剂的时间(对比处理5和6)。待卵孵出后几天施用产品很可能比在卵孵出时施用产品更低效。
实施例6利用大蒜浓缩物控制家禽红蜘蛛的用途
大蒜浓缩物指3％v/v(1.5％v的大蒜汁液浓缩物和1.5％的助剂油(菜籽油))的Breck-a-sol，其以189ml/m2的用量施用。
附图7显示说明Breck-a-sol(Bsol)控制家禽红蜘蛛的效果的结果，显示了相比对照和使用Barricade的红蜘蛛的死亡百分比
参考控制干燥细胞(正控制)
水(水份控制)
氯氰菊酯(1％v/vBarricade(Bcade)，其以189ml/m2施用)
Breck-a-Sol和Barricade彼此之间的结果未出现显著差异。
利用来自不同棚屋的螨和不同批次的大蒜汁液浓缩物，将该数据模式重复5种其它的实验。
还研究了污染(灰尘)对效果的影响。该工作表明在‘适度’水平污染下的有用的产品效果，仅仅在非常高水平的灰尘污染下损失大蒜浓缩物的效果。
在附图8中显示了当将Breck-a-sol或Barricade(氯氰菊酯)作为生物杀灭剂施用时，比较在不同污染水平下的家禽红蜘蛛的死亡％的一系列数据。施用Barricade的结果通过关键性的BC来显示，Dry Con＝干燥控制，Water＝施用水，并且残存结果涉及施用Breck-a-sol。
以增加负载物应用于污染以反应在家禽棚舍表面所发现的污染水平。
0.1(等于～20g灰尘/m2)
0.2(等于～40g灰尘/m2)
0.4(等于～80g灰尘/m2)
0.8(等于～160g灰尘/m2)
结果显示当污染为～80g灰尘/m2时，大蒜汁液浓缩物(Breck-a-Sol(Bsol))提供有用水平的效果，其与将Barricade施用于～40gm2的污染所观察到的效果无显著差异。
附录1
HPLC分析
不同大蒜油样品的色谱图数据
1.样品：
与两种其它产品-大蒜油(工业标准)和大蒜汁液浓缩物一起分析大蒜油(金标准(gold standard))。
2.制备样品：
将两种样品用100％MeCN以1∶10进行稀释(在450μl MeCN中有50μl样品)。待稀释后，大蒜汁液浓缩物产生部分白色沉淀。在HPLC分析前利用0.2μm的Target溶剂过滤器加以除去。
3.HPLC分析：
利用具有二极管阵列检测、Phenomenex C18(2)Luna柱(250×4.6mm，5μm)和‘Securityguard’C18预置柱的Agilent HP1100 HPLC系统来进行该分析。自动采样器的温度为4℃，并且柱温为37℃，切断压力为280Bar。在240nm下采集数据(介于200-600nm之间采集总的数据)。发现对于1∶10的稀释样品而言，注入体积最优接近于5μl。
评价三种方法。
i.基于文献方法的一种方法(参见如下)-依照以下改变后-Luna柱和平均梯度(isocratic gradient)为70％的MeCN(97％的MeCN与3％的THF)以及30％超纯的水。方法时间＝40分钟。(RBSULF1)
ii.第二种方法-基本如上所述，但在平均步骤前采用预梯度步骤。(RBSULF2)
 时间 ％A(超纯的水) ％B(97％的MeCN/3％THF)
 0 70 30
 10 30 70
 35 30 70
 40 70 30
 50 70 30
iii.第三种方法(RBSULF 3)基于RBSULF1，但具有延长的平衡时间，即方法时间＝50分钟。
方法参考：
Lawson，L.D.，Wang，Z-Y.J.，Hughes，B.G.(1991).Identification andHPLC quantification of the sulfides and dialk(en)yl thiosulfinates incommercial garlic products(对市售大蒜产品中的硫化物和二烷(烯)基硫代亚磺酸酯进行鉴定和HPLC量化).Planta Medica 57：363-370
结果：所有的色谱图在240nm处
A.分离
RBSULF3大蒜标准(5μl 1∶10)
大蒜样品的原始数据
注入2.5μl的大蒜油金标准(1∶10稀释油)-用作保留时间和峰形参考材料
参见附图9(色谱图1)
峰ID
(对色谱图的峰进行如下测定)
1＝甲基烯丙基硫化物                CH3-SCH2-CH＝CH2
   二甲基二硫化物                  CH3-S-S-CH3
2＝甲基烯丙基二硫化物              CH3-S-S-CH2-CH＝CH2
3＝二烯丙基硫化物                  CH2＝CH-CH2-S-CH2-CH＝CH2
4＝二甲基三硫化物                  CH3-S-S-S-CH3
5＝二烯丙基二硫化物                CH2＝CH-CH2-S-S-CH2-CH＝CH2
6＝甲基烯丙基三硫化物              CH3-S-S-S-CH2-CH＝CH2
7＝二甲基四硫化物                  CH3-S-S-S-S-CH3
8＝反式-1-丙烯基二硫化物           CH2＝CH-CH2-S-S-H
9＝二烯丙基三硫化物                CH2＝CH-CH2-S-S-S-CH2-CH＝CH2
10＝甲基烯丙基四硫化物             CH3-S-S-S-S-CH2-CH＝CH2
11＝二甲基五硫化物                 CH3-S-S-S-S-S-CH3
12＝反式-1-丙烯基三硫化物(推定的)  CH2＝CH-CH2-S-S-S-H
13＝二烯丙基四硫化物               CH2＝CH-CH2-S-S-S-S-CH2-CH＝CH2
14＝甲基烯丙基五硫化物             CH3-S-S-S-S-S-CH2-CH＝CH2
15＝二甲基六硫化物                 CH3-S-S-S-S-S-S-CH3
16＝二烯丙基五硫化物      CH2＝CH-CH2-S-S-S-S-S-CH2-CH＝CH2
17＝甲基烯丙基六硫化物    CH3-S-S-S-S-S-S-CH2-CH＝CH2
18＝二甲基七硫化物        CH3-S-S-S-S-S-S-S-CH3
19＝二烯丙基六硫化物      CH2＝CH-CH2-S-S-S-S-S-S-CH2-CH＝CH2
参见附图10(色谱图2-标准大蒜)
参见附图11(色谱图3-大蒜汁液浓缩物)
峰数是暂定的，基于纵切面图的ID示于参考文件中-在标准中存在几种其它的化合物，以及大蒜汁液浓缩物可以涉及的化合物。
样品：表2a.大量成批的大蒜浓缩物的产品数据的概括表
(各化合物以μg的二-烯丙基硫化物当量g-1产品来表示)
批次
 峰号 9381 0091 1131 0391 0301
浓液体 浓液体 浓液体 浓液体 浓液体
 1 82 66 76 55 82
 2 11331 136 153 104 93
 3 87 66 109 104 104
 4 579 579 546 409 442
 5 841 791 1103 1026 1037
 6 846 797 824 693 917
 7 T T 136 115 153
 8 T T 82 55 115
 9 4241 3886 4181 4460 3450
 10 360 448 415 289 464
 11 T T T T T
 12 T T T T T
 13 1916 2233 1971 1643 1676
 14 38 55 44 44 22
 15 71 87 87 87 49
 16 502 731 546 415 480
 17 131 11991 104 87 115
 18 142 262 158 109 164
 19 71 120 71 44 71
 总计 10038 10448 10606 9739 9434
 总量％
 DAS(3) 0.9 0.6 1.0 1.1 1.1
 DADS(5) 8.4 7.6 10.4 10.5 11.0
 DATS(9) 42.2 37.2 39.4 45.8 36.6
3+5+9   51.5     45.4     50.8     57.4     48.7
附录2大蒜浓缩物在环境中的结果和行为
ECOguard颗粒剂含有与55％的木纤维和纤维素粘合剂相混合的45％的大蒜汁液浓缩物(AIL 0021)。就工业品而言，大蒜汁液浓缩物(AIL 0021)中的最大组分为碳水化合物。确信在最终的产物中AIL 0021含有高达50重量％的碳水化合物。因此该组合物产生出总组成为77.5％w/w的可生物降解和可溶性碳水化合物和纤维素的混合物的颗粒剂。
大蒜汁液浓缩物中的有机硫分子组分主要为具有二硫桥结的分子，例如二烯丙基二硫化物和二烯丙基三硫化物，确信其范围为3.5％w/w。这些是在任何破碎大蒜中所发现的天然产生的化合物。
参见试验部分，大蒜汁液浓缩物的生物效果并不归因于分子组中的任何特殊分子。该所述的生物效果归因于该产品的整体作用。讨论大蒜的常规化学性质，重点在于辨别和量化所存在的部分有机硫分子，其作为在制备期间确定和证实产品一致性的方法。
本发明人相信由大蒜汁液浓缩物(AIL 0021)和分散和过滤整个新鲜的大蒜鳞茎制得的ECOguard颗粒剂的残余物主要是可生物降解的碳水化合物、源自木纤维和粘合剂载体基质的纤维素的混合物，该残余物掺又来自大约3.5％w/w的有机硫化合物的有机硫残余物。
确信如下论证适合如下参考：
水(降解作用和沉降作用/水分配)
土壤(降解作用和迁移性)
空气
大蒜汁液浓缩物(AIL 0021)的次要组分例如有机硫代谢物是具有二硫桥结分子为特征的，其是化学不稳定性的，易于作为electophiles起作用，挑出亲核功能的基团例如-NH2；-SH；-OH；＞C＝O。与这些功能基团的反应打破了二硫化物桥结，该反应在含水反应环境下产生含有功能基团例如-R-S-OH的水合硫，其中R表示一半的二硫桥结。
更具体地，表示大蒜汁液浓缩物(CL AIL 0021)特性的HPLC分析工作显示四种主要的分子种类为：二烯丙基硫化物；二烯丙基二硫化物；二烯丙基三硫化物和二烯丙基四硫化物。这与在1992年，据Block报道在室温下蒜素分解成二烯丙基单、二和三硫化物一致。
此外，大蒜和洋葱的有机硫化学品高度相似。在1992年，Block报道口在1940年代，在巴塞尔(Basel)，由Stoll和Seebeck进行的开拓性研究表明大蒜(蒜素)的Cavallito′s抗菌素的稳定前体是(+)-S-2-丙烯基-L-半胱氨酸-S-氧化物(蒜碱)。在完整的细胞中，蒜碱和相关的S-烷(烯)基-L-半胱氨酸-S-氧化物(芳香和香味前体)位于细胞质中，C-S裂解酶蒜苷酶位于液泡中。细胞破裂导致释放蒜苷酶和随后的S-氧化物的α和β消除，最终提供挥发性和有气味的低分子重量的有机硫化合物例如蒜素，其容易平衡二烯丙基-二硫化物和其它的链烯桥结的硫”。
在葱属植物中产生4种亚砜
1 S-2-丙烯基-半胱氨酸S-氧化物
2 S-(E)-1-丙烯基-半胱氨酸S-氧化物
3 S-甲基-半胱氨酸S-氧化物
4 S-丙基-L-半胱氨酸S-氧化物
洋葱含有2、3和4。大蒜含有1、2和3。
因此，在洋葱和大蒜之间的有机硫化学品有着高度相同性。在洋葱情形下，与在大蒜中占优势的二烯丙基多硫化物对照的是，洋葱蒜苷酶在前体上的作用产生二丙基多硫化物。
发明人认为二烯丙基硫化物是大蒜汁液浓缩物(CL AIL 0021产品)中的主要有机硫分子；这与文献和详细的分析结果相符合。由5个生产批次所计算的在CL AIL 0021中的二烯丙基二硫化物(DADS)的平均浓度为12mg/g。因此这提供典型的ECOguard颗粒剂中的DADS理论浓度为0.54％。
ECOguard颗粒剂中的DADS实际浓度为0.54％，DASn浓度为3.46％。因此，施用12kg/ha的ECOguard颗粒剂，最大施用65g的二烯丙基二硫化物/ha和415g/ha DASn。Block在1992年报道，大蒜、洋葱和其它葱属植物含有1-5％干重的非蛋白质硫氨基酸次级代谢物。假定大蒜作物可以产生20吨/ha鲜重并且其25％为干物质，则典型的商业大蒜作物将产生介于50-250kg的非蛋白质硫，也就是说比施用ECOguard大蒜颗粒剂多100-500倍。
在简单的测定重量的分析中，单一的ECOguard施用将比从经济作物中释放到环境中的有机硫少100-500倍，若抛弃作物让其腐烂的话。
假定在UK种植有大面积的洋葱，并且具有相当的产量/公顷，则洋葱可能是比大蒜更为重要的sulphenic酸和多硫化物的来源。
英国洋葱生产者联合会(British Onion Producers Association(BOPA))认为收获时损失的洋葱大约为12％的总产量，在40吨/ha大约损失4.8吨，这由直径小于50mm的洋葱从收获网露下来组成。这些废料将留在大田中并直至腐烂。在这样的情形下，将实质地将有机硫分子释放进环境中。根据Block在1992年所记录的，该数字可以多达5％的干物质或60kg/ha。在2000年，在UK大约种植了9000公顷的洋葱，估计留在大田中的总的废料为40000吨或大约500吨有机硫化合物。
此外，BOPA估计通过包装机和处理机产生额外的50,000吨洋葱废料/年，即产生高达625吨额外的有机硫化合物，它们中的大部分将进行的处理是填埋、在大田边以废料来制造肥料或再次焚烧产生释放类似量的有机硫化合物。
在各个实例中，采用自然处理在环境中分解该化合物，例如微生物降解、光分解和采用电解(electrophylic)功能基团的键裂。采用相同的方法可以分解ECOguard颗粒剂中的大蒜残余物。因此，本发明人推断相比涉及大蒜、洋葱和其它葱属作物的自然农业和食品加工实践来说，以推荐量并采用推荐方法将ECOguard颗粒剂施用至土壤向土壤表面释放显著更少的有机硫分子，并且由于从上述标准实践中在环境上无引人注意的效果，则无需更详细地研究环境问题的命运。相同的论证也适用于大蒜汁液浓缩物的直接使用。

Claims (18)

1.一种农药或驱避剂，其包含通过除去汁液中的水从大蒜汁液中获得的液体浓缩物。
2.根据权利要求1的农药或驱避剂，其中在温度为40℃下采用减压蒸馏除去水分。
3.根据权利要求1或2的农药或驱避剂，其中所述浓缩物的白利度值介于60和80之间。
4.根据上述权利要求任一所述的农药或驱避剂，其中浓缩物中的总的多硫化物范围为2至4％w/w。
5.根据上述权利要求任一所述的农药或驱避剂，其中按照所存在的总的多硫化物重量计，结构式为RSR、RS2R、RS3R和RS4R的二烯丙基硫化物的量为66％±10％(其中R＝烯丙基)。
6.根据上述权利要求任一所述的农药或驱避剂，其中以所存在的总的多硫化物的重量％计，二烯丙基硫化物∶二烯丙基二硫化物∶二烯丙基三硫化物∶二烯丙基四硫化物以大约为4％-5％∶5％-8％∶31％-38％∶19％-22％的比例存在。
7.根据上述权利要求任一所述的农药或驱避剂，其中通过反渗透提取水分。
8.根据上述权利要求任一所述的农药或驱避剂，其中加入其它的多硫化物以增加多硫化物的量。
9.根据权利要求8的农药或驱避剂，其中以大蒜油的形式加入多硫化物。
10.一种通过如下步骤从大蒜中获得液体浓缩物形式的农药或驱避剂的制备方法：
·破碎大蒜
·从所产生的液体中分离固体材料
·在液体中进行加热步骤以巴氏杀菌液体
·通过在大约40℃下减压蒸馏从液体中除去水分。
11.根据权利要求10的制备方法，其中在低于25℃并且在适当减压下从液体中除去水分。
12.根据权利要求10或11的制备方法，其特征在于通过反渗透提取水分。
13.一种农药组合物，其特征在于其包含用权利要求1至9任一所述的农药或驱避剂浸渍的基于木粉的颗粒剂。
14.将含有以权利要求1至9或权利要求13的液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒剂的农药组合物用作杀虫剂的用途。
15.将含有以权利要求1至9或权利要求13的液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒剂的农药组合物用作杀线虫剂的用途。
16.将含有以权利要求1至9或权利要求13的液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒剂的驱避组合物用作鸟类驱避剂的用途。
17.将含有以权利要求1至9或权利要求13的液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒剂的驱避组合物用作兔子驱避剂的用途。
18.将含有以权利要求1至9或权利要求13的液体浓缩物或浸渍浓缩物的颗粒剂的驱避组合物用作昆虫驱避剂的用途。
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