CN101190942A - 具有溶血栓活性的化合物、其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了具有溶血栓活性的通式化合物，本发明还公开了该通式化合物的制备方法以及它们作为抗血栓剂的应用。本发明通式化合物结构如下所示：H－R1－AA1－Arg－Pro－Ala－Lys－OH或H－AA1－Arg－Pro－Ala－Lys－R2－OH；其中，R1选自色氨酰基、苯丙氨酰基或1，3，4－三氢异喹啉－3－S－甲酰基；R2选自色氨酸残基、苯丙氨酸残基或1，3，4－三氢异喹啉－3－S－羧酸－2－基；AA1选自丙氨酸残基、甘氨酸残基或谷氨酰氨残基。动物模型试验证实，本发明通式化合物具有良好的溶血栓活性。
Description
技术领域
本发明涉及化合物，尤其涉及具有溶血栓活性的化合物、其制备方法以及它们作为溶血栓剂的应用，属于生物医药领域。
背景技术
血管栓塞性疾病，例如心肌梗塞和脑卒中，是心脑血管疾病中死亡率最高的疾病。寻找安全有效的溶血栓药物，是心脑血管疾病治疗药物研究的热点之一。发明人以纤维蛋白降解产物P6A(ARPAK)为先导结构，通过结构修饰得到了一系列具有明确血管活性的寡肽(彭师奇，赵明，王超，唐朝枢，王银叶，心血管活性多肽以及它们的合成和在医学中的应用，发明专利证书第57116号，中华人民共和国知识产权局，2001年7月28日)；发明人通过小鼠体内P6A及类似物的代谢研究，确定了它们的代谢产物以及作为溶血栓剂的应用前景(彭师奇，赵明，王超，徐友宣，吴艳芬，P6A的代谢产物及其在医学中的应用，发明专利申请号第01136780.6号，中华人民共和国知识产权局)；发明人将咔啉羧酸引入ARPAK、GRPAK和QRPAK的N端和C端制备拟肽，使制得的拟肽包含了原多肽序列的溶栓活性，包含了咔啉羧酸的抗血小板聚集活性，以及具有紫外可检测性(Yanfen Wu，Ming Zhao，ChaoWang and Shiqi Peng*，Synthesis and Thrombolytic Activity of Pseudopeptides Relatedto Fibrinogen Fragment，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12，2331-2333，2002)。所述紫外可检测性使这类拟肽的药代动力学研究变得简捷。考察杂环的结构，发明人认识到了图1描述的巧妙关联。这种结构关联的合理推广是，将四氢异喹啉羧酸、色氨酸和苯丙氨酸分别引入ARPAK、GRPAK和QRPAK的N端和C端制备修饰肽。
发明内容
本发明的目的之一是将ARPAK、GRPAK和QRPAK三种溶血栓小肽进行修饰，使其溶血栓活性更好并具有检测方便的优点。
本发明的目的之一是通过以下技术方案来实现的：
具有溶血栓活性的化合物，为下述通式(I)或通式(II)所示：
H-R1-AA1-Arg-Pro-Ala-Lys-OH通式(I)；
H-AA1-Arg-Pro-Ala-Lys-R2-OH通式(II)。
其中，R1选自色氨酰基、苯丙氨酰基或1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰基；R2选自色氨酸残基、苯丙氨酸残基或1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸-2-基；AA1选自丙氨酸残基(Ala)、甘氨酸残基(Gly)或谷氨酰氨残基(Gln)。
本发明的目的之二是提供一种制备上述具有溶血栓活性的通式(I)和通式(II)化合物的方法。
本发明的目的之二是通过以下技术方案来实现的：
一种制备上述具有溶血栓活性的通式(I)或通式(II)化合物的方法，包括：
通过液相法逐步接肽，制备以下6种C端游离或N端游离的短肽：
(1)Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH，
(2)Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH，
(3)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH，
(4)H-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，
(5)H-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，
(6)H-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl；将四氢异喹啉羧酸、色氨酸和苯丙氨酸与上述C端游离或N端游离的6种短肽分别进行C端或N端偶联，制备保护的偶联肽；将所制备保护的偶联肽脱Boc之后氢解，得到目标化合物。动物模型试验证实，本发明通式化合物(I)或(II)具有良好的溶血栓活性。
附图说明
图1啉环和四氢异喹啉环、吲哚环及苯环的结构关联性。
图2本发明化合物的合成路线图。
在1A-C和2A-C中，AA＝Ala、Gly、Gln；在1a，1’a，1”a，1b，1’b和1”b中AA＝Ala，R＝Phe；在2a，2’a，2”a，2b，2’b和2”b中AA＝Gly，R＝Phe；在3a，3’a，3”a，3b，3’b和3”b中AA＝Gln，R＝Phe；在4a，4’a，4”a，4b，4’b和4”b中AA＝Ala，R＝Trp；在5a，5’a，5”a，5b，5’b和5”b AA＝Gly，R＝Trp；在6a，6’a，6”a，6b，6’b和6”b中AA＝Gln，R＝Trp；在7a，7’a，7”a，7b，7’b和7”b中AA＝Ala，R＝异喹啉酰基；在8a，8’a，8”a，8b，8’b和8”b中AA＝Gly，R＝异喹啉酰基；在9a，9’a，9”a，9b，9’b和9”b中AA＝Gln，R＝＝异喹啉酰基。
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
本发明中所出现的术语或缩略语的说明：
THF 四氢呋喃
DCC 二环己基酰亚胺
DCU 二环己基脲
OBzl 苄氧基
Boc 叔丁氧羰基
HOBt N-羟基苯并三唑
TLC 薄层层析
DMF 二甲基甲酰胺
具体实施方式
实施例1制备Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl
将473mg(2.5mmol)Boc-Ala-OH溶于10ml无水四氢呋喃(THF)，冰浴下往里加10ml 338mg(2.5mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)和619mg(3mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液。将936mg(2.3mmol)HCl·Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混合，然后与上面的活泼酯溶液混合。反应混合物室温搅拌24h，TLC(CHCl3∶MeOH＝30∶1)显示HCl·Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得1.204g(97％)标题化合物，为无色固体。Mp 88～90℃，ESI-MS(m/e)543[M+H]+。
实施例2制备HCl·Ala-Lys(Z)-OBzl
将1.354g(2.5mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl与15ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)混合、室温搅拌3h、TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到的标题化合物，ESI-MS(m/e)443[M+H]+。
实施例3制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将538mg(2.5mmol)Boc-Pro-OH溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml 338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液。将1.099g(2.3mmol)HCl·Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混合，然后与上面的活泼酯溶液混合。反应混合物室温搅拌24h，TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示HCl·Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得2.847g(98％)标题化合物。为无色固体。Mp82～83.4℃，
ESI-MS(m/e)640[M+H]+。
实施例4制备HCl·Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将1.596g(2.5mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl与15ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合、室温搅拌3h、TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到的标题化合物，ESI-MS(m/e)640[M+H]+。
实施例5制备Boc-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将798mg(2.5mmol)Boc-Arg(NO2)-OH溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml 338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液。将1.322g(2.3mmol)HCl·Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混合，再与上面的活泼酯溶液混合。反应混合物室温搅拌24h，TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示HCl·Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得1.642g(85％)标题化合物。为无色固体。Mp 83～85℃，
ESI-MS(m/e)842[M+H]+。
实施例6制备HCl·Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将2.099g(2.5mmol)Boc-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl与15ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合、室温搅拌3h、TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示Boc-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到的标题化合物，ESI-MS(m/e)742[M+H]+。
实施例7制备Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将473mg(2.5mmol)Boc-Ala-OH溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液。将1.785g(2.3mmol)HCl·Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混合，然后与上面的活泼酯溶液混合。反应混合物室温反应24h，TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示HCl·Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得1.802g(86％)标题化合物。为无色固体。Mp 87～89℃，ESI-MS(m/e)912[M+H]+。
实施例8制备HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将2.277g(2.5mmol)Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl与15ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合、室温搅拌3h、TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到的标题化合物。ESI-MS(m/e)812[M+H]+。
实施例9制备Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH
将2.277g(2.5mmol)Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶解在10ml甲醇中，0℃下加入1.5mol/l的NaOH水溶液，调节pH值到11，搅拌反应0.5hr，TLC检测反应结束。加饱和KHSO4调节pH值到6～7，滤除析出的盐，滤液减压蒸馏除去全部甲醇，残留水溶液继续用KHSO4调节pH值到2，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯层合并，用饱和NaCl萃洗三次，无水NaSO4干燥3小时，过滤，滤液减压浓缩除去乙酸乙酯，得到1.973g(96％)目标化合物。ESI-MS(m/e)822[M+H]+。
实施例10制备Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将438mg(2.5mmol)Boc-Gly-OH溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml 338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液。将1.785g(2.3mmol)HCl·Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混合，再与上面的活泼酯溶液混合。反应混合物室温搅拌24h，TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示HCl·Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得1.857g(90％)标题化合物。为无色固体。Mp 85～87℃，ESI-MS(m/e)898[M+H]+。
实施例11制备HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将2.242g(2.5mmol)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl与15ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合、室温搅拌3h、TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到的标题化合物，ESI-MS(m/e)798[M+H]+。
实施例12制备Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH
将2.242g(2.5mmol)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl 1溶解在10ml甲醇中，0℃下加入1.5mol/l的NaOH水溶液，调节pH值到11，搅拌反应0.5hr，TLC检测反应结束。加饱和KHSO4调节pH值到6～7，滤除析出的盐，滤液减压蒸馏除去全部甲醇，残留水溶液继续用KHSO4调节pH值到2，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯层合并，用饱和NaCl萃洗三次，无水NaSO4干燥3小时，过滤，滤液减压浓缩除去乙酸乙酯，得到1.957g(97％)目标化合物。ESI-MS(m/e)808[M+H]+。
实施例13制备Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将615mg(2.5mmol)Boc-Gln-OH溶于10ml无水THF，冰浴下往里加10ml 338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液。将1.785g(2.3mmol)HCl·Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl和232mg(2.3mmol)N-甲基吗啉先与6ml无水THF混合，再与上面的活泼酯溶液混合。反应混合物室温搅拌24h，TLC(CHCl3∶MeOH＝10∶1)显示HCl·Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37℃减压浓缩，得1.936g(80％)标题化合物。为无色固体。Mp 91～92℃，ESI-MS(m/e)969[M+H]+。
实施例14制备HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将2.420g(2.5mmol)Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl与15ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合、室温搅拌3h、TLC(CHCl3∶MeOH＝20∶1)显示Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到的标题化合物用于下步反应。ESI-MS(m/e)869[M+H]+。
实施例15制备Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH
将2.420g(2.5mmol)Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶解在10ml甲醇中，0℃下加入1.5mol/l的NaOH水溶液，调节pH值到11，搅拌反应0.5hr，TLC检测反应结束。加饱和KHSO4调节pH值到6～7，滤除析出的盐，滤液减压蒸馏除去全部甲醇，残留水溶液继续用KHSO4调节pH值到2，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯层合并，用饱和NaCl萃洗三次，无水NaSO4干燥3小时，过滤，滤液减压浓缩除去乙酸乙酯，得到2.088g(95％)目标化合物。ESI-MS(m/e)879[M+H]+。
实施例16制备Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl
将821mg(1.0mmol)Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶解在3ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入393mg(1.35mmol)HCl·Phe-OBzl溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到920mg(87％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1059[M+H]+。
实施例17制备H-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入423mg(0.40mmol)Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到360mg(94％)标题化合物，ESI-MS(m/e)959[M+H]+。
实施例18制备H-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Phe-OH(1a)
将398mg(0.4mmol)HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得181mg(66％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)689[M+H]+。
实施例19制备Boc-Phe-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将317mg(1.2mmol)Boc-Phe-OH溶于3ml无水THF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt、268mg(1.3mmol)DCC和10ml无水THF的溶液，混合物冰浴下搅拌30min。往里加入847mg(1.0mmol)HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于3ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到868mg(82％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1059[M+H]+。
实施例20制备H-Phe-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入400mg(0.40mmol)Boc-Phe-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到372mg(97％)标题化合物，ESI-MS(m/e)959[M+H]+。
实施例21制备H-Phe-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(1b)
将398mg(0.4mmol)HCl·Phe-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Phe-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得128mg(47％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)689[M+H]+。
实施例22制备Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl
将821mg(1.0mmol)Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶解在3ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入446mg(1.35mmol)HCl·Trp-OBzl溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到991mg(89％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1115[M+H]+。
实施例23制备H-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入446mg(0.40mmol)Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到390mg(96％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1015[M+H]+。
实施例24制备H-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Trp-OH(2a)
将420mg(0.4mmol)HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得204mg(70％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)728[M+H]+。[α]D 20＝-22°(c＝1.4，H2O)。
实施例25制备Boc-Trp-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将364mg(1.2mmol)Boc-Trp-OH溶于3ml无水THF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt、268mg(1.3mmol)DCC和10ml无水THF的溶液，混合物冰浴下搅拌30min。往里加入847mg(1.0mmol)HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于3ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到937mg(84％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1115[M+H]+。
实施例26制备H-Trp-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入446mg(0.40mmol)Boc-Trp-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Trp-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到386mg(95％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1015[M+H]+。
实施例27制备H-Trp-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(2b)
将420mg(0.4mmol)HCl·Trp-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Trp-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得198mg(68％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)728[M+H]+。
实施例28制备1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸
往4.0g(24.2mmol)L-苯丙氨酸中先逐滴加入21.6ml甲醛，再逐滴加入36ml35％浓盐酸。得到的混悬液油浴加热至80-90℃搅拌2两个小时苯丙氨酸完全溶解，反应2.5小时后，开始有白色沉淀生成，反应7小时，TLC(CHCl3/CH3OH＝5/1，RF＝0.56)板显示原料消失，抽滤得无色固体4.2g，将所得无色固体加入到85.6ml80％乙醇中油浴加热至80℃9小时，无色固体溶解，冷却至室温，慢慢滴加1ml(1.376g氢氧化钾溶于1ml蒸馏水)氢氧化钾溶液，有无色沉淀析出，过滤得4.02g(94％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)178[M+H]+。
实施例29制备N-Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸
冰浴下把2.49g(62.15mmol)氢氧化钠解于62ml水，先将10.0g(56.5mmol)1，2，3，4，-四氢-异喹啉-3-羧酸悬浮其中，再往里加40ml四氢呋喃与14.8g(67.8mmol)(Boc)2O的溶液。反应混合物搅拌48h、溶液变澄清、TLC(乙酸乙酯/石油醚：1∶3)显示1，2，3，4，-四氢-异喹啉-3-羧酸消失。停反应、减压浓缩、残留物用乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5％KHSO4水溶液洗、饱和NaCl洗水溶液洗和水洗。分离的有机层用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、残留物与100ml乙酸乙酯/石油醚(1/10)混合溶液搅拌24h，得12.50g(80％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)278[M+H]+。
实施例30制备1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯
往280mg(0.86mmol)Cs2CO3与1ml水的溶液中加304mg(1.71mmol)1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-S-羧酸与4ml无水乙醇的溶液。反应混合物室温搅拌40min后减压浓缩，生成无色固体。将该无色固体与5ml无水DMF制成溶液，往该溶液中加入0.2ml(1.75mmol)溴苄。反应混合物于50℃搅拌16h。滤除生成的CsBr沉淀，滤液依次用饱和NaCO3水溶液洗(30ml×3)、饱和NaCl水溶液洗(30ml×3)、5％KHSO4水溶液洗(30ml×3)。分离的有机层用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩得367mg(80％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)268[M+H]+。
实施例31制备N-[Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯
将821mg(1.0mmol)Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶解在3ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入413mg(1.35mmol)1，3，4-三氢-β-咔啉-3-S-羧酸苄酯溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到888mg(80％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1111[M+H]+。
实施例32制备N-[H-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入444mg(0.40mmol)N-[Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-[Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到388mg(96％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1011[M+H]+。
实施例33制备N-(H-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys)-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸(3a)
将404mg(0.4mmol)N-[H-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-[H-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得222mg(75％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)740[M+H]+。[α]D 20＝-26°(c＝1.08，H2O).
实施例34制备N-(Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将360mg(1.3mmol)N-Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸溶解在10ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入810mg(1.0mmol)HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到887mg(83％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1070[M+H]+。
实施例35制备N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入428mg(0.40mmol)N-(Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-(Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到364mg(94％)标题化合物，ESI-MS(m/e)970[M+H]+。
实施例36制备N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(3b)
将388mg(0.4mmol)N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得236mg(80％)标题化合物，为无色固体。
ESI-MS(m/z)740[M+H]+。[α]D 20＝-38°(c＝1.5，H2O).
实施例37制备Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl
将807mg(1.0mmol)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶解在3ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入393mg(1.35mmol)HCl·Phe-OBzl溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到798mg(89％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)988[M+H]+。
实施例38制备H-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入383mg(0.40mmol)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到341mg(96％)标题化合物，ESI-MS(m/e)888[M+H]+。
实施例39制备H-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-Phe-OH(4a)
将369mg(0.4mmol)HCl·Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得189mg(70％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)675[M+H]+。
实施例40制备Boc-Phe-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将317mg(1.2mmol)Boc-Phe-OH溶于3ml无水THF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt、268mg(1.3mmol)DCC和10ml无水THF的溶液，混合物冰浴下搅拌30min。往里加入834mg(1.0mmol)HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于3ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到888mg(90％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)988[M+H]+。
实施例41制备H-Phe-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入400mg(0.40mmol)Boc-Phe-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到348mg(98％)标题化合物，ESI-MS(m/e)888[M+H]+。
实施例42制备H-Phe-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(4b)
将355mg(0.4mmol)HCl·Phe-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Phe-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得167mg(62％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)675[M+H]+。[α]D 20＝-24°
实施例43制备Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl
将808mg(1.0mmol)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶解在3ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入446mg(1.35mmol)HCl·Trp-OBzl溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到1013mg(92％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1101[M+H]+。
实施例44制备H-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入444mg(0.40mmol)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到380mg(95％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1001[M+H]+。
实施例45制备H-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-Trp-OH(5a)
将415mg(0.4mmol)HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得214mg(75％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)714[M+H]+。[α]D 20＝-22°(c＝1.4，H2O)。
实施例46制备Boc-Trp-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将364mg(1.2mmol)Boc-Trp-OH溶于3ml无水THF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt、268mg(1.3mmol)DCC和10ml无水THF的溶液，混合物冰浴下搅拌30min。往里加入834mg(1.0mmol)HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于3ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到947mg(86％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1101[M+H]+。
实施例47制备H-Trp-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入440mg(0.40mmol)Boc-Trp-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Trp-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到384mg(96％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1001[M+H]+。
实施例48制备H-Trp-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(5b)
将415mg(0.4mmol)HCl·Trp-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Trp-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得200mg(70％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)714[M+H]+。[α]D 20＝-24°(c＝1.6，H2O)。
实施例49制备N-[Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯
将807mg(1.0mmol)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶解在3ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入413mg(1.35mmol)1，3，4-三氢-β-咔啉-3-S-羧酸苄酯溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到932mg(85％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1097[M+H]+。
实施例50制备N-[H-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入438mg(0.40mmol)N-[Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-[Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到387mg(97％)标题化合物，ESI-MS(m/e)997[M+H]+。
实施例51制备N-(H-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys)-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸(6a)
将398mg(0.4mmol)N-[H-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-[H-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得227mg(78％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)726[M+H]+。[α]D 20＝-16°(c＝1.6，H2O).
实施例52制备N-(Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将360mg(1.3mmol)N-Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸溶解在10ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入834mg(1.0mmol)HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到897mg(85％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1056[M+H]+。
实施例53制备N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入422mg(0.40mmol)N-(Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-[Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰]-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到367mg(96％)标题化合物，ESI-MS(m/e)956[M+H]+。
实施例54制备N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(6b)
将382mg(0.4mmol)N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-[1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰]-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得238mg(82％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)726[M+H]+。[α]D 20＝-24°(c＝1.5，H2O).
实施例55制备Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl
将878mg(1.0mmol)Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶解在3ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入393mg(1.35mmol)HCl·Phe-OBzl溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到948mg(85％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1116[M+H]+。
实施例56制备H-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入446mg(0.40mmol)Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到374mg(92％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1016[M+H]+。
实施例57制备H-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Phe-OH(7a)
将406mg(0.4mmol)HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得206mg(69％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)746[M+H]+。[α]D 20＝
实施例58制备Boc-Phe-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将317mg(1.2mmol)Boc-Phe-OH溶于3ml无水THF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt、268mg(1.3mmol)DCC和10ml无水THF的溶液，混合物冰浴下搅拌30min。往里加入868mg(1.0mmol)HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于3ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到915mg(82％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1116[M+H]+。
实施例59制备H-Phe-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入446mg(0.40mmol)Boc-Phe-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Phe-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到390mg(96％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1016[M--H]+。
实施例60制备H-Phe-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(7b)
将420mg(0.4mmol)HCl·Phe-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Phe-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得140mg(47％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)746[M+H]+。[α]D 20＝
实施例61制备Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl
将878mg(1.0mmol)Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶解在3ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入446mg(1.35mmol)HCl·Trp-OBzl溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到1055mg(90％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1172[M+H]+。
实施例62制备H-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入468mg(0.40mmol)Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到407mg(95％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1072[M--H]+。
实施例63制备H-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Trp-OH(8a)
将428mg(0.4mmol)HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-Trp-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得236mg(75％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)785[M+H]+。[α]D 20＝-50°(c＝1.4，H2O)。
实施例64制备Boc-Trp-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将364mg(1.2mmol)Boc-Trp-OH溶于3ml无水THF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt、268mg(1.3mmol)DCC和10ml无水THF的溶液，混合物冰浴下搅拌30min。往里加入868mg(1.0mmol)HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于3ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到1008mg(86％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1172[M+H]+。
实施例65制备H-Trp-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入468mg(0.40mmol)Boc-Trp-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Trp-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到1028mg(96％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1072[M+H]+。
实施例66制备H-Trp-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(8b)
将428mg(0.4mmol)HCl·Trp-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Trp-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得198mg(68％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)728[M+H]+。[α]D 20＝-52°
实施例67制备N-[Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯
将878mg(1.0mmol)Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶解在3ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入413mg(1.35mmol)1，3，4-三氢-β-咔啉-3-S-羧酸苄酯溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到1248mg(81％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1168[M+H]+。
实施例68制备N-[H-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入467mg(0.40mmol)N-[Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-[Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到414mg(97％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1068[M-H]+。
实施例69制备N-(H-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys)-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸(9a)
将427mg(0.4mmol)N-[H-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-[H-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)]-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸苄酯消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得245mg(77％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)797[M+H]+。[α]D 20＝-64°(c＝1.08，H2O).
实施例70制备N-(Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将360mg(1.3mmol)N-Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸溶解在10ml无水DMF中，冰浴下加入151mg(1.2mmol)HOBt和268mg(1.3mmol)DCC和20ml无水THF的溶液。反应混合物冰浴下搅拌30min、往里加入904mg(1.0mmol)HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于5ml无水DMF并用N-甲基吗啉调pH8.5的溶液。反应混合物0℃搅拌2h、室温搅拌20h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示HCl·Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应、滤除DCU、减压浓缩、残留物用氯仿溶解、再滤去残留的DCU。氯仿层依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗涤和水洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩、残留物用乙酸乙酯研磨，得到957mg(85％)目标化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)1127[M+H]+。
实施例71制备N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
冰浴下将10ml无水氯化氢/乙酸乙酯溶液(6N)搅拌10min，分4次加入450mg(0.40mmol)N-(Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。室温搅拌3h、TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/I/0.2)显示N-(Boc-1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-(Lys(Z)-OBzl消失。反应液减压浓缩至干，残留物与无水乙醚混合再压浓缩至干。该操作重复5次。最后的残留物用无水乙醚研磨，得到394mg(96％)标题化合物，ESI-MS(m/e)1027[M+H]+。
实施例72制备N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(9b)
将410mg(0.4mmol)N-(1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰)-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl溶于9ml乙醇与6ml水的混合液后加入300mgPd/C(5％)，反应瓶减压排气并通入氢气。该操作重复5次。反应混合物通氢气并室温搅拌24h，TLC(氯仿/甲醇/冰醋酸，5/1/0.2)显示N-[1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰]-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。残余物用C18柱纯化(2.5％乙腈/1％HAc/H2O)，得264mg(83％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)797[M+H]+。[α]D 20＝-32°(c＝1.5，H2O).
试验例1本发明化合物溶血栓活性测定试验
1)大鼠手术与器械
SD大鼠(雄性，220～230g)按1200mg·kg-1剂量腹腔注射乌拉坦溶液进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，将远心端的手术线于皮毛用止血钳夹紧，在远心端插管，松开动脉夹，放出约1ml动脉血，装在1ml子弹头中。往垂直固定的玻璃管(长15mm，内径2.5mm，外径5.0mm，管底用胶塞密封)中注入0.1ml大鼠动脉血液，往管内迅速插入一支不锈钢质料的血栓固定螺栓。该血栓固定螺旋用直径为0.2mm的不锈钢丝绕成，螺旋部分长12mm，含15个螺圈，螺圈的直径为1.0mm，托柄与螺旋相连，长7.0mm，呈问号型。血液凝固15min后，打开玻璃管底部的胶塞，用镊子固定血栓固定螺旋的托柄，从玻璃管中小心地取出被血栓包裹的血栓固定螺旋。精确称重。
2)大鼠颈动静脉旁路插管
旁路插管由3段构成，中段为聚乙烯胶管，长60.0mm，内径3.5mm；两端为相同的聚乙烯管，管长100.0mm，内径1.0mm，外径2.0mm该管的一端拉成尖管(用于插入大鼠颈动脉或静脉)，外径为1.0mm，另一端的外部套一段长7.0mm，外径为3.5mm的聚乙烯管(加粗，用于插入中段的聚乙烯胶管内)3段管的内壁均硅烷化。将血栓包裹的血栓固定螺旋放入中段聚乙烯胶管内，胶管的两端分别与两根聚乙烯的加粗端相套。用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU·kg-1)，备用。
继续分离麻醉大鼠的气管，并做气管插管。分离大鼠的左颈外静脉，近心端和远心端分别穿入手术线，在暴露的左颈外静脉上小心地剪一斜口，将上面制备好的旁路管道的尖管由斜口插入左颈外静脉开口的近心端，同时远离旁路管中段(含精确称重的血栓固定螺旋)内血栓固定螺旋的托柄。用注射器通过另一端的尖管推入准确量的肝素生理盐水(50IU·kg-1)，此时注射器不要撤离聚乙烯管，用止血钳夹住注射器与聚乙烯管之间的软管。在右颈总动脉的近心端用动脉夹止血，在离动脉夹不远处将右颈总动脉小心地剪一斜口。从聚乙烯管的尖部拔出注射器，将聚乙烯管的尖部插入动脉斜口的近心端。旁路管道的两端都用4号手术缝线与动静脉固定。
3)给药
用头皮针将生理盐水(剂量为3ml·kg-1)、尿激酶的生理盐水溶液(剂量为20000IU/kg)或本发明18种化合物(1a-9a，1b-9b)的生理盐水溶液(剂量为10μmol/kg)通过旁路管的中段(含精确称重的血栓固定螺旋)刺入远离血栓固定螺旋的近静脉处，打开动脉夹，使血流通过旁路管道从动脉流向静脉，此即大鼠动静脉旁路溶栓模型，缓慢将注射器中的液体注入到血液中，使生理盐水(空白对照)，尿激酶(阳性对照)或线性肽(治疗剂)通过血液循环，按静脉-心脏-动脉的顺序作用到血栓上。从开始注射时计时，1h后从旁路管道中取出血栓固定螺旋，精确称重。求每只大鼠旁路管道中血栓固定螺旋给药前后的质量差，统计各组的血栓质量差值(X±SD)，并做t检验。
4)结果
血栓质量差值列入表1。表1的数据说明，在10μmol/kg剂量下本发明18种化合物(1a-9a，1b-9b)均具有优秀的溶血栓活性。在10μmol/kg剂量下除1a、1b、2b、8a、8b和9b6个化合物的活性比20000IU/kg剂量UK的活性弱外，其余12个化合物的活性均与UK相当。可见，本发明的化合物是优秀的溶血栓剂。
表1.本发明化合物(1a-9a，1b-9b)的溶血栓活性试验结果
| 化合物 | 血栓减重(X±SD mg) | 化合物 | 血栓减重(X±SD mg) |
| NS | 18.60±2.10 | 5a | 28.07±5.40a，c |
| UK | 29.71±4.53a | 5b | 28.63±5.11a，c |
| 1a | 25.79±3.30a | 6a | 28.62±2.61a，c |
| 1b | 22.98±4.39a | 6b | 28.11±4.27a，c |
| 2a | 28.02±4.21a，c | 7a | 26.93±2.96a，c |
| 2b | 25.16±3.92a | 7b | 26.20±5.39a，c |
| 3a | 26.05±3.64a，c | 8a | 24.22±4.50b |
| 3b | 26.84±3.94a，c | 8b | 22.48±3.38b |
| 4a | 28.54±4.08a，c | 9a | 27.52±3.69a，c |
| 4b | 27.70±6.09a，c | 9b | 25.19±3.76a |
n＝10，1a，b-9a，b的剂量为10μmol/kg，UK的剂量为20000IU/kg；a)与NS比，P＜0.001；b)与NS比，P＜0.01；c)与UK比，P＞0.05。
Claims (3)
1.通式(I)或通式(II)所示的化合物：
H-R1-AA1-Arg-Pro-Ala-Lys-OH通式(I)；H-AA1-Arg-Pro-Ala-Lys-R2-OH通式(II)；
其中，R1选自色氨酰基、苯丙氨酰基或1，3，4-三氢异喹啉-3-S-甲酰基；R2选自色氨酸残基、苯丙氨酸残基或1，3，4-三氢异喹啉-3-S-羧酸-2-基；AA1选自丙氨酸残基、甘氨酸残基或谷氨酰氨残基。
2.制备权利要求1化合物的方法，包括：
通过液相法逐步接肽，制备以下6种短肽：
(1)Boc-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH，
(2)Boc-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH，
(3)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH，
(4)H-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，
(5)H-Ala-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，
(6)H-Gln-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl；
将四氢异喹啉羧酸、色氨酸或苯丙氨酸与上述C端游离或N端游离的6种短肽分别进行C端或N端偶联，制备保护的偶联肽；将所制备保护的偶联肽脱叔丁氧羰基之后氢解，即得。
3.权利要求1的化合物在制备抗血栓药物中的用途。
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