CN101180069B - 用于癌症治疗的草药组合物 - Google Patents

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Abstract

草药组合物，其包含莪术(Curcumae kwangsiensis)、石斛(HerbaDendrobii nobile Lindl.)、法半夏(Rhizoma Pinelliae preparatum)、白附子(Rhizoma Typhonii)和其它任选的草药。所述组合物可以被加工成一定的形式，用于施用至癌症患者以改善他们的健康。

Description

用于癌症治疗的草药组合物
技术领域
本发明涉及用于癌症治疗的组合物。具体地，本发明涉及由从业于传统中医通常可用的草药制备的组合物，还涉及使用所述草药组合物治疗或改善癌症症状的方法。
背景技术
肿瘤细胞通过血液和淋巴系统的入侵和次发性传播也称为转移，这是恶性病的标志和对癌症治疗的最大挑战。肿瘤转移需要两个重要的过程，即血管发生和肿瘤细胞入侵基膜(BM)和胞外基质(ECM)。为了逃入可在其中建立转移的血管外组织内，不同器官的毛细血管床截留的循环肿瘤细胞必需入侵内皮细胞衬里并降解其下面的基膜(BM)(Liotta L.A.等(1983)Tumor invasion and the extracellular matrix，Lab.Invest.，49：639-649)。
BM和ECM的主要组分为糖胺聚糖，主要是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)。基础的HSPG结构包括蛋白质核心和与所述蛋白质核心共价连接的几条线性硫酸乙酰肝素(HS)链。几种细胞酶(例如胶原酶IV、纤溶酶原激活物、组织蛋白酶B、弹性蛋白酶)被认为参与BM的降解(Liotta L.A.等(1983)Tumor invasion and the extracellular matrix，Lab.Invest.，49：639-649)。在这些酶中，内-β-D-葡糖醛酸糖苷酶(乙酰肝素酶)可在特定的链内位点切割HS，即在GlcUA和GlcNAc位点之间(Vlodavsky I.等(1992)Expression of heparanase by platelets and circulating cells of theimmune system：Possible involvement in diapedesis and extravasation，Invasion & Metastasis，12：112-127；Nakajima M.等(1988)Heparanase andtumor metastasis J.Cell.Biochem.，36：157-167；Vlodavsky I.等(1983)Lymphoma cell mediated degradation of sulphated proteoglycans in thesubendothelial extracellular matrix：Relationship to tumor cell metastasis，Cancer Res.，43：2704-2711；Vlodavsky I.等(1988)Involvement ofheparanase in tumor metastasis and angiogenesis，Is.J.Med.，24：464-470)。发现降解SH的乙酰肝素酶的表达与小鼠淋巴瘤(Vlodavsky I.等(1983)Lymphoma cell mediated degradation of sulphated proteoglycans in thesubendothelial extracellular matrix：Relationship to tumor cell metastasis，Cancer Res.，43：2704-2711)、纤维肉瘤和黑素瘤细胞(Nakajima M.等(1988)Heparanase and tumor metastasis，J.Cell.Biochem.，36：157-167)的转移潜能有关。对于人乳腺癌细胞、膀胱癌细胞和前列腺癌细胞也是如此(见美国专利6,190,875号)。此外，在携带转移性肿瘤的动物以及癌症患者的血清(Nakajima M.等(1988)Heparanase and tumor metastasis，J.Cell. Biochem.，36：157-167)和尿(美国专利6,190,875号)中以及肿瘤活组织检查(Vlodavsky I.等(1988)Involvement of heparanase in tumor metastasisand angiogenesis，Is.J.Med.，24：464-470)中发现了升高的水平的乙酰肝素酶。乙酰肝素酶还与T细胞介导的迟发型超敏反应、实验性自身免疫性脑脊髓炎和佐剂性关节炎有关，这暗示乙酰肝素酶在与炎症和自身免疫疾病有关的细胞血细胞渗出和外渗中起作用。
因此，乙酰肝素酶抑制剂可用于治疗人和其它哺乳动物对象中的各种癌症。筛选作为癌症治疗药物的物质对于医学界仍然是严重的挑战，而其中对乙酰肝素酶的抑制效果是有价值的生物标志。
发明内容
本发明提供了对乙酰肝素酶具有抑制作用的新组合物，该组合物由通常用于传统中医的草药制成。本发明的组合物适合治疗或改善涉及升高的乙酰肝素酶活性的病症，例如各种癌症患者中的肿瘤细胞转移。
一方面，本发明提供了草药组合物，其包括有效量的莪术(RhizomaCurcumae Kwangsiensis)、石斛(Herba Dendrobium candidum)、法半夏(Rhizoma Pinelliae preparatum)和白附子(Rhizoma Typhonii)。该组合物还可以包括有效量的山豆根(Radix Sophora tonkinensis)、紫草根(RadixArnebia euchroma)、枸杞子(Frutus lycium barbarum)、黄芪(Radix Astagalusmembranaceus)、白花蛇舌草(Herba Oldenlandia diffusa)、黄精(Rhizomapolygonati)和甘草(Radix Glycyrrhizae)。根据从事草药医学、尤其是传统中医领域中的技术人员已知的程序加工该草药混合物组合物。所述经加工的组合物可以采用任何合适的形式，例如茶样饮料(煎剂)、丸剂、胶囊、液体醇提取物、干提取物等。
另一方面，本发明提供了组合物，其包括有效量的莪术、石斛、法半夏和白附子各自的提取物。该提取物混合物还可以包括有效量的山豆根、紫草根、枸杞子、黄芪、白花蛇舌草、黄精和甘草各自的提取物。在这方面，独立地制备各草药成分的提取物，然后以预定比率与其它草药的提取物混合。
尽管本发明所用的每种个体草药是常用的并且对传统中医从业者是已知的，但就申请人所知，具有本发明中公开的特定成分的组合物是未知的，对其抗癌效果所知更少。本发明的另一方面是组合物的某些成分可以彼此互补发挥其医学作用，从而在它们之间产生协同作用。例如，在莪术和山豆根之间、法半夏和山豆根之间以及莪术和法半夏之间获得了抑制乙酰肝素酶的协同作用。
通过下列实施例能够更好地理解本发明，在此声明所述实施例用于举例说明，不应理解为用于限制本发明。
附图说明
图1显示本发明组合物成分之间的乙酰肝素酶抑制的协同效果。
具体实施方式
本发明所用的所有草药均可购得。在确定各草药的真实性后，可以使用常规方法将本发明的组合物加工成适合施用至人类对象的形式。那些常规方法是本领域技术人员已知的，记述于书本中的，并且是草药医学从业者常用的。通过举例而非限制的方式，合适的施用形式可以是酊剂、煎剂或干提取物。还可以将提取物加工成丸剂、片剂、胶囊或注射剂。
通过将草药悬浮在醇溶液(如红酒或酒精饮料(liquor))中来制备酊剂。在悬浮一段时间后，所述液体(醇溶液)可以每天施用两次或三次，每次一茶匙。煎剂是最普通的草药制剂形式。通常在陶罐中制备它，但现在也可以在玻璃、搪瓷或不锈钢容器中制备它。应该在适量的水中将所述草药浸泡一段时间，然后迅速煮沸并慢熬，直到水量减半。
提取物是草药精华成分的浓缩制剂。通常，通过将草药悬浮在适当选择的溶剂中以从草药中提取精华成分，所述溶剂通常为水、乙醇/水混合物、甲醇、丁醇、异丁醇、丙酮、己烷、石油醚或其它有机溶剂。通过浸渍、渗滤、再渗滤、逆流萃取、涡旋萃取、或通过二氧化碳超临界(温度/压力)萃取，可进一步促进提取过程。在过滤以除去草药残渣后，可以进一步蒸发提取溶液，从而浓缩以获得软提取物(流浸膏)和/或通过喷雾干燥、真空烘箱干燥、流化床干燥或冻干最终获得干提取物(干浸膏)。可以进一步将该软提取物或干提取物在适当的液体中溶解成所需的浓度，用于施用或加工成如丸剂、胶囊、注射剂等形式。
作为本发明的具体实施方案，由各草药成分制备富富多糖的提取物。下面详述提取过程。
将10克草药切碎，用5倍体积的水连续煮沸2次，每次30分钟。用滤纸过滤可溶性部分(～50ml)，滤液为草药的总提取物。通过下列方案制备富含多糖和非富含多糖的提取物：将50毫升(～50ml)所述总提取物加到3倍体积的100％乙醇中。将混合物在4℃温育过夜，在3,000Xg和4℃下离心10分钟。将上清液过滤，经过滤的上清液为非富含多糖的提取物，而小球为富含多糖的提取物。通过旋转式蒸发器Rotavapor(Brinkmann，Westbury，NY)浓缩全部三种提取物，并用冻干机干燥成粉末形式。通过将粉末溶于适合乙酰肝素酶活性测定的量的水中获得适当浓度的各提取物。
然后测定所述富含多糖的提取物抑制乙酰肝素酶的能力。为了测定提取物的抗乙酰肝素酶活性，进行了乙酰肝素酶活性测定以测定存在提取物时乙酰肝素酶的活性。可将所述乙酰肝素酶的活性与对照比较，例如通过相同的活性测定法但不存在提取物时测定的相同乙酰肝素酶的活性。通常，任何合适的乙酰肝素酶活性测定法都可测定提取物对乙酰肝素酶的抑制作用。有许多已知测定方案可用于测定乙酰肝素酶活性。尽管这些测定法不是本发明的一部分，但仍提供了下列信息以供简单参考。
典型的乙酰肝素酶催化活性测定法包括(体外或代谢地)放射标记底物并分析由于乙酰肝素酶的催化活性而降解的产物(Vlodavsky I.等，(1992)Expression of heparanase by platelets and circulating cells of theimmune system：Possible involvement in diapedesis and extravasation，Invasion & Metastasis，12：112-127；Bartlett M.R.Underwood P.A.等，(1995)Comparative analysis of the ability of leukocytes，endothelial cellsand platelets to degrade the subendothelial basement membrane：evidence forcytokine dependence and detection of a novel sulfatase，Immunol.Cell Biol.，73：113-124)。
作为寻找用于癌症治疗的有效的草药制剂的努力的一部分，研究了传统中医中所用的大量草药的抗乙酰肝素酶效果。对于每种草药，根据前述工艺制备了三类制剂，即总提取物(TE)、富含多糖的提取物(PER)、非富含多糖的提取物(NPER)。表1总结了对150种草药的研究数据。
表1.150种草药对乙酰肝素酶的作用
说明：
1.TE：总提取物；PER：富含多糖的提取物；NPER：非富含多糖的提取物
2.“-”：1-25％抑制，“+”：26-50％抑制，“++”：51-75％抑制，“+++”：76-100％抑制，“-*”：活化
除了上述对个体草药的研究外，还研究了在组合使用时两种个体草药之间的协同效果。如图1所示，本发明组合物的成分在对乙酰肝素酶的抑制作用方面显示出协同效果。例如，莪术与山豆根单独作用时对乙酰肝素酶抑制的总和为约32.5％，而当它们组合使用时为44.5％。对于法半夏和山豆根，为21％对38.5％。对于莪术与法半夏，为28.5％对40.5％。协同作用是显著的。在图1中，中文拼音表示各草药的中文名。
作为本发明的具体实施方案，同时提供了抗癌草药组合物作为实例。该组合物包含下列成分：莪术、石斛、法半夏、白附子、山豆根、紫草根、枸杞子、黄芪、白花蛇舌草、黄精和甘草。
其中，莪术、石斛、法半夏、白附子是主要成分，且必须包括在所述组合物中，而其余所列草药是任选的，可以从所述组合物中删去一种或多种。在组合物中使用有效量的各草药。所述术语“有效量”指草药成分的量有助于使得整个组合物能够提供所需效果。本领域技术人员能够确定各草药的有效量。提供下列剂量范围(用于单剂量)以供容易的参考或指导。所述范围外的剂量也可以是有效的，并能提供满意的结果。
莪术：5-50克，优选约15克；
石斛：5-50克，优选约10克；
法半夏：5-20克，优选约10克；
白附子：5-20克，优选约10克；
山豆根：5-20克，优选约10克；
紫草根：5-30克，优选约10克；
枸杞子：10-30克，优选约10克；
黄芪：10-30克，优选约15克；
白花蛇舌草：20-40克，优选约30克；
黄精：20-50克，优选约30克；
甘草：5-20克，优选约5克；
如上所述，通过常规或本领域技术人员已知的方法，将草药组合物进一步加工成适合人消费的形式之一，作为治疗或防止癌症的方法。所述组合物的草药成分可以在进一步加工前混合。或者，首先单独加工各成分，然后按照特定的相对量混合所得的经加工的成分，例如各草药的总提取物或富含多糖的提取物。例如，如果将由5-50克莪术制备的总提取物量用于所述组合物，则应使用由5-20克法半夏制备的总提取物量，以保持它们的相对量符合上述范围。
本发明的另一个具体实施方案通过其成分的相对量限定。其包含莪术、石斛、法半夏、白附子，其中莪术与石斛之间的重量比为0.1至10；莪术与法半夏之间的重量比为0.25至10；莪术与白附子之间的重量比为0.25至10。优选地，上述比率分别为0.5-5、1.0-5.0和1.0-5.0。更优选地，上述比率分别为1.5、1.5和1.5。重量比在加工草药前确定。
上述组合物还可以任选地包括一种或多种选白下列草药：山豆根、紫草根、枸杞子、黄芪、白花蛇舌草、黄精和甘草。当一种或多种任选的草药存在于所述组合物中时，莪术与所述任选草药的重量比分别为0.25-10、0.16-10、0.16-5.0、0.16-5.0、0.125-2.5、0.1-2.5和0.25-10。优选地，所述比率分别为0.5-5、0.3-5、0.3-2.5、0.3-2.5、0.25-1、0.2-1和0.5-5。更优选地，所述比率分别为1.5、1.5、1.5、1、0.5、0.5和3。重量比在加工草药前确定。
尽管在应用至本发明优选实施方案时已经描述并指出了其基本新颖特征，但应理解的是，在不脱离本发明精神的情况下，在所示包装和方法的形式和细节方面，本领域技术人员可以进行各种删节、替换和改变。例如，很明显的意图是以基本上相同的方式发挥基本相同的功能以获得相同结果的那些要素和/或方法步骤的所有组合都在本发明的范围内。
本发明不限于上述实施方案，这些实施方案仅作为实施例出现，但可以在所附的专利权利要求书所限定的保护范围内以各种方式进行修改。

Claims (2)

1.组合物，其成份组成为：
(a)莪术总提取物；
(b)石斛总提取物；
(c)法半夏总提取物；
(d)白附子总提取物；
(e)山豆根总提取物；
(f)紫草根总提取物；
(g)枸杞子总提取物；
(h)黄芪总提取物；
(i)白花蛇舌草总提取物；
(j)黄精总提取物；
(k)甘草总提取物；
上述各成份在制备总提取物前的含量重量比例为：莪术与石斛之间的重量比为0.1-10；莪术与法半夏之间的重量比为0.25-10；莪术与白附子之间的重量比为0.25-10；莪术与山豆根之间的重量比为0.25-10；莪术与紫草根之间的重量比为0.16-10；莪术与枸杞子之间的重量比为0.16-5；莪术与黄芪之间的重量比为0.16-5；莪术与白花蛇舌草之间的重量比为0.125-2.5，莪术与黄精之间的重量比为0.1-2.5；莪术与甘草之间的重量比为0.25-10；上述各成份总提取物的制备是将提取前的，各草药成份按上述重量比例选取后切碎，用5倍体积的水连续煮沸两次，每次30分钟，再通过滤纸过滤可溶性部分，滤液即为各成份的总提取物；上述各成份的总提取物均具有抑制乙酰肝素酶活性的功效，用于治疗人和其他哺乳动物对象中的癌症。
2.一种权利要求1所述的组合物，其特征在于，该组合物用于作为改善癌症患者健康的丸剂、片剂、胶囊或注射剂类型的药物。
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