CN101180028A - 金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸用于治疗痤疮的用途 - Google Patents

金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸用于治疗痤疮的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN101180028A
CN101180028A CNA2006800175175A CN200680017517A CN101180028A CN 101180028 A CN101180028 A CN 101180028A CN A2006800175175 A CNA2006800175175 A CN A2006800175175A CN 200680017517 A CN200680017517 A CN 200680017517A CN 101180028 A CN101180028 A CN 101180028A
Authority
CN
China
Prior art keywords
acne
mice
adamantyl
methoxydi
lecithin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2006800175175A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101180028B (zh
Inventor
C·皮萨诺
L·韦希
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Original Assignee
Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA filed Critical Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Publication of CN101180028A publication Critical patent/CN101180028A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101180028B publication Critical patent/CN101180028B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/36—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明描述了属于非典型类维生素A类别的物质用于局部治疗痤疮的用途。尤其是展示了含有经调配在凝胶中的金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸的局部用药学或化妆品组合物对于此皮肤疾病的动物模型的作用。

Description

金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸用于治疗痤疮的用途
发明领域
在此描述的发明涉及属于非典型类维生素A(atypicalretinoids)类别的物质用于局部治疗痤疮的用途。
发明背景
痤疮是一种常发生在青春期的多功能的疾病，其有时候会自然痊愈，但更常要花一段长时间且需要使用化学物质诸如过氧化苯甲酰、类维生素A、抗生素和抗雄激素剂予以特异性地局部或全身治疗。令人遗憾的是，某些这类产品可能产生副作用诸如皮肤发红、干燥和过敏反应。再者，治疗痤疮和其他皮肤病的一项基本问题在于要穿透表皮层，表皮层代表着对药物进入的天然生理屏障。为了确实获得局部药理学作用，通过施用经调配在用作为载体的软膏、乳膏或凝胶内的活性成分进行局部应用。
卵磷脂-一种天然来源的磷脂-在某些化妆品或药学制剂中用作为主要成分或作为乳化剂。除了结构上的功能外，其功能可为将活性成分载送到皮肤内。事实上，卵磷脂(磷脂酰胆碱)与细胞膜的脂质成分之间的化学类似性提示，基于卵磷脂的载体可为身体充分耐受且同时又可增强药理学作用(Scartazzini和Luisi，1988J.Physiol.Chem.91，823-833)。
术语“痤疮”(来自希蜡语akni：皮疹)描述在青春期出现的毛囊病损，其与皮脂溢和粉刺形成相关联。它是极常见的疾病，于可变程度上，影响约90％青少年，但其中只有10％需要医学干预且后者中只有1％造成难以解决的临床问题。
痤疮为毛囊皮脂腺器的慢性炎症，其呈现为多种方式，作为粉刺、脓疱、结节、囊肿和疤痕。在外观、过程，发病年龄和部位方面存在许多临床变化形式。最常见的形式为少年痤疮，其在青春期出现且自发地在约25岁消退，尽管其可能在以后出现，在30岁后复发和消退(Kraning等人，1979J.Invest.Dermatol.73，395-401)。
发病通常在发育年龄期间，典型皮损为：粉刺、丘疹、结节和囊肿。粉刺为因皮脂肿胀的毛囊，常称为“白头”(毛囊孔被封闭时)和“黑头”(毛囊孔开放时)；它们较常分布于鼻子上及其周围，前额，耳朵及其附近，以及下巴上。丘疹为粉刺的炎性并发症且显现为多种不同大小的发红凸起区域。它们会持续数天而后消失无痕迹。脓疱为黄色的病损，形状为半球形且充满脓，覆盖在丘疹顶部上。它们会持续2至3天，朝外排出并形成结痂。结节为大的固体形成结构，常有压痛、系由炎性浸润所产生。囊肿为充满脓的大凸起区域，碰触非常疼痛，其保持不变达数周，且不同于其他痤疮病损，它可容易地转变成疤痕，这些是痤疮所造成的不美观且有时候会毁损面容的永久性后果。
痤疮的发病机理中涉及的主要致病因素为：(1)皮脂过度分泌；2)毛囊角化过度；3)毛囊中的细菌定殖；4)炎性过程的起始。痤疮患者比对照者分泌更多的皮脂且此因素似乎与痤疮的严重性相关联。皮脂腺的发育和分泌活性受到睾丸、卵巢和肾上腺产生的雄激素性激素的控制。
睾酮会影响皮脂腺的增殖活性，皮脂腺具有对这些激素有高亲和性的受体且还具有酶5-α-还原酶，该酶能够将睾酮转化为其生物活性部分-二氢睾酮。所述激素因子参与女性经前期的周期性痤疮突发。
毛囊过度角化是发生痤疮病损的基础事件且部分系由增加的表皮增殖及部分系由角质细胞延迟脱落所致。其结果为毛囊壁增厚，堵塞皮脂排出，随即皮脂淤积而形成粉刺。在这些条件下，一种厌氧性细菌-痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium Acmes)易于发展和增殖(Strauss等人，1974J.Invest.Dermatol.62，321-325；Harris等人，1983J.Am.Acad.Dermatol，8，200-203)，产生具有刺激性和粉刺产生能力的游离脂肪酸，刺激免疫应答。最后，由于生物活性物质从毛囊皮脂腺导管通到真皮而导致炎症。可用的治疗可分成角质溶解性治疗和抑菌性治疗，其分别涉及细胞重建和抗菌作用。
治疗策略取决于病症的严重性。对于中等或中度形式的痤疮，优选局部用的药物。最常见的乳膏为基于过氧化苯甲酰的那些，其可使着药点干燥并阻断感染。
现今有三种局部治疗可用于痤疮。它们基于不同的作用机制；类维生素A；粉刺分解剂，其可减缓脱皮过程以减少粉刺和微小粉刺的数目；抗生素，其具有杀菌活性，经由直接杀死粉刺丙酸杆菌形式而产生作用，也对粉刺产生具有轻微的间接作用；联合疗法，使用类维生素A和局部抗生素两者，用于同时有粉刺性病损和炎性病损的患有严重形式痤疮的患者。
对于不是特别严重的痤疮现象，蕾婷A(Retin-A)，也称为维甲酸(tretinoin)，是一种直接应用于皮肤的抗粉刺剂。其呈洗液或乳膏形式，作用为角质溶解，亦即其可恢复正常的角蛋白形成过程及防止粉刺(黑头)的形成。
皮肤病学领域对于新疗法的研究一直在进展。现今可用到的最新一代疗法如下：
1.他札罗汀，一种合成产物，其可与维生素A受体特异性地相互作用。除了对痤疮，其也可有效地治疗牛皮癣。
2.壬二酸在欧洲研究中产生了替代性结果且其特征在于广谱的双重作用(抗微生物作用和角质化作用)；其事实上也用于皮肤色素沉着过度的病例中(Graupe等人，1996，Cutis 57，20-35)；和
3.阿达帕林，一种具有类维生素A活性的萘甲酸衍生物。这是一种具有角质化作用的细胞分化调节剂，有效且刺激性小于视黄酸。其以商品名达芙文(Differin_)上市，用于对其中粉刺、丘疹和脓疱为主的寻常痤疮的局部治疗。
国际专利申请WO03/011808描述了新一类定义为非典型视黄酸的化合物，其据称具有抗肿瘤用途。该申请中描述的化合物包括金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸(ST1898)。
发明描述
本发明的主要目的涉及以下发现，即金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸在用为痤疮的参照的动物模型中具有抗痤疮活性。
这种粉刺化解活性不能预见，因为在属于相同化学类别的物质(丙烯酸的金刚烷基二苯基系衍生物)上缺乏明确的结构参照。
本发明的主要目的因而为金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸在制备局部使用以治疗痤疮的药学或化妆品组合物中的用途。
此化合物的结构式如下：
Figure S2006800175175D00041
此化合物的化学合成记载于国际专利申请WO 03/011808中(特别参见实施例20)。
本发明的另一目的为用于痤疮局部治疗的药学或化妆品组合物，其含有金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸作为活性成分，连同其他赋形剂和/或药学上可接受的载体。
术语“药学上可接受”意指为药典(欧洲、英国或美国)所认可用于动物应用，尤其是人类应用。
这些赋形剂的实例为：葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、酰胺、硬脂酸盐类、单硬脂酸酯类、棕榈酸酯类、甘油，水、乙醇、脂质、磷脂、缓冲剂诸如磷酸二氢钠或铵盐、它们的混合物等等。
赋形剂或载体的其他实例记载于E.Martin的“Remington′sPharmaceutical Sciences”  。
本发明的组合物可调配成为乳膏、软膏、凝胶、泡沫、喷雾溶液或持续释放性贴片的形式。本发明的组合物优选呈凝胶形式。
更优选，本发明的组合物为卵磷脂凝胶，诸如Epikuron 200TM，其为经纯化的大豆卵磷脂，亦即通过柱色谱法从大豆种子纯化的供制药工业所用的蜡状磷脂酰胆碱(纯度大于92％)。
在本发明组合物中的活性成分含量可以根据本专利申请中所报道的实施例及后续临床试验而容易地计算出。本发明的组合物优选含有0.1毫克活性成分/100毫克卵磷脂凝胶。
本发明将以下面的实施例予以示范说明，但这些实施例对本发明范围不具限制性。
附图说明
图1显示用ST1898(制剂1)局部治疗对犀鼠(rhino mice)皮肤的作用。该治疗对于小囊/假粉刺的数目、尺寸和角质含量的减少以及对皮脂腺的形态(变得更萎缩，图中箭头所示)都有显著的作用。与未经处理的小鼠(A)相比，表皮的增生(B)也特别清楚。再者，经处理的犀鼠的皮肤表现出在毛囊的退化期中的缺陷，包括到生命第6周毛发的完全丧失和发生所谓的小囊/假粉刺(图1中的C)，其代表在组织学上类似于“滞留型”痤疮病损的开放粉刺的模型。犀鼠的皮肤还具有皮脂腺萎缩(图1中的箭头)和在真皮深部中存在囊肿(图1中的星号，仅部分可见，因图像只显示出皮肤的最浅表部分)的特征。
实施例
实施例1.有机凝胶的制备和表征
使用下列物质于随后的制备中：卵磷脂、大豆种子提取物(Epikuron 200TM)，棕榈酸异丙酯、抗坏血酸、钼酸铵、碘晶体、磷酸四甲铵、脱色碳和磷酸二氢钠。此外，还用到氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇、二甲亚砜(DMSO)及氨水溶液(30％)。
参比用脂质POPC(1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱)获自Avanti Polar Lipids(Canada)且不经进一步纯化即使用。
活性成分金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸(ST1898)由Sigma-Tau(Pomezia，Rome)合成及纯化。
凝胶制备法
卵磷脂溶液如下制备：将卵磷脂经由在40-50℃磁搅拌数分钟或数小时而溶解在棕榈酸异丙酯(IPP)中，时间取决于卵磷脂的重量百分比。每一溶剂-卵磷脂体系在添加少量水后产生凝胶，水量通常表示为w0，根据方程式1指示水与卵磷脂之间的摩尔比：
Figure S2006800175175D00061
方程式1
当水完全分散在有机相中时即形成凝胶，该现象通常取决于卵磷脂浓度、磁搅拌及所用溶剂的性质。在本研究所用条件下，卵磷脂/IPP溶液的凝胶化以从数秒钟至数分钟的时间间隔发生。
实施例2.ST1898组合物-制剂1的制备
调配在凝胶相中的ST1898的制备
将所需量的ST1898和Epikuron 200卵磷脂溶解在IPP中(ST1898：0.1％，卵磷脂：47％，IPP：52.9％)，将该溶液置于60-70℃温度下磁搅拌持续完全溶解所需时间(2-12小时，取决于卵磷脂浓度)。
所有成分，包括溶剂IPP，都是以称重方式计量。出于实用理由(药物的完全溶解)，可先制备卵磷脂/IPP溶液，再用此有机相溶解药物。只有在此步骤后，才加入胶凝所需量的水。鉴于类维生素A的光敏感性，用铝箔覆盖使容器避光。在溶液不立即变均匀的情况中，可予温和照射。使用Hamilton微型注射器添加的水的体积根据方程式2计算出：
Figure S2006800175175D00062
方程式2
其中VH20表示要加入的水的体积(毫升)，mEP200为Epikuron200卵磷脂的量(克)且w0为期望的水对卵磷脂的摩尔比(参见方程式1)。
实施例3.分析程序
紫外-可见光分析
使用紫外-可见光分光光度法定量表征溶于溶剂DMSO中的和掺入卵磷脂/IPP凝胶相中的类维生素A ST1898，其中使用二极管阵列分光光度计(Agilent HP8452A)，分辨率2nm，采用1cm石英吸光匣。鉴于材料的高粘度，将含有类维生素A ST1898的有机凝胶转移到吸光匣需要升高温度(约60℃)，接着予以冷却以进行分析。
HPLC分析
对于溶解在DMSO中及掺入到凝胶相中的类维生素A ST1898所作的HPLC分析采用HPLC HP1050仪器(Agilent)进行，其装设紫外-可见光二极管阵列检测器及HP ChemStation软件。药物定量分析程序包括在反相Nucleosyl C18柱(3微米粒子尺寸，125×4毫米)上进行等度洗脱(甲醇/水，体积比80/20，含0.2％TFA)，流速为1.5毫升/分钟，注射体积等于5微升(在这些条件下，记录到约140巴的稳定压力)。通过分光光度测定法使用吸光度(330nm)进行检测。典型条件为注射5微升ST1898的DMSO溶液。所观察到的保留时间等于约8分钟。
对掺入到卵磷脂/IPP凝胶相中的药物ST1898的分析需要用氯仿预先稀释以减低基质的粘度，使其可被注射到色谱柱中。在最大溶解度测定阶段中，在采取要分析的样品之前，使用离心处理。洗脱条件类似于上面所报道的条件，不过洗脱剂流速根据卵磷脂浓度予以优化(如：1.5毫升/分钟)。
典型条件用以注射在氯仿中适当稀释的在Epikuron 200卵磷脂42％w/w(约800mM)在I PP中的有机凝胶(w0＝3)中的ST18980.2％w/w。经由HPLC以荧光分光光度法检测而进行定量测定
该分析采用HPLC设备(System Gold，Beckham)进行，其装设有荧光检测器(λex＝330nm，λem＝475nm)，在反相Lichrosher 100 C18柱(5微米粒子尺寸，125×4毫米)上进行等度洗脱(甲醇/水，体积比80/20，含0.2％TFA)；流速为1.0毫升/分钟；注射体积等于10微升。典型条件包括注射10微升ST1898的THF溶液。所观测到的保留时间等于约16.5分钟。
实施例4.ST1898(制剂1)对于犀鼠表皮假粉刺的粉刺消解作用研究中所用的动物模型
犀鼠(hrrhhrrh)是一种无毛等位基因小鼠且为非炎性痤疮的实验动物模型。在该动物中，在首次覆毛后，退化期中的错误导致在4周龄时过早的且不可逆的脱毛。毛囊不能自我重建。取而代之的是，原毛囊单位的下部发展成为角质产生性囊肿，其随著动物年龄增长变成永久地位于深层真皮内并扩大。同时，原始的毛管(原毛囊单元的上部)会转变成为安瓿形腔或囊。这些囊都填充着角质细胞和皮脂且因角质物质的产生和蓄积而进行性变大。在组织学上，它们类似典型的滞留型痤疮性病损或粉刺。不过，它们是肉眼看不到的且不能在手指之间挤出。如同在人类痤疮中，随着囊的形成与扩大，皮脂腺渐进性缩小。最后，犀鼠的皮肤会因为弹性纤维的缺乏而出现松垂和赘余。所以，成年犀鼠的皮肤的特征在于源自原始毛囊单位的漏斗状区的囊。这些在组织学上类似于滞留型痤疮病损，即微型粉刺。所以，在过去30年内，在体内方案中使用犀鼠，旨在测试新药物(经由局部施用，较小程度地全身性施用)治疗痤疮的粉刺消解活性。
多种抗痤疮药，特别是局部施用的类维生素A，对于犀鼠皮肤的粉刺消解效用系最初在70年代报道，使用定性式组织学方法显示出：1)在带有完全发育的皮脂腺的短、窄、非过度增生的毛囊管中，部分小囊/粉刺的转变现象；2)部分小囊的完全退化，留下长段的正常外观的表皮；3)表皮厚度的增加；4)对深部真皮囊肿没有影响。这些改变在以类维生素A(如，全反式视黄酸或阿达帕林)局部处理一周后开始出现且在3周后达到最大。
目前，在局部粉刺消解剂的筛选中用于评估和衡量其粉刺消解活性的最广泛使用的技术为对从在三周治疗期结束时获得的皮肤活检取得的犀鼠皮肤切片进行定量组织学图像分析。有数种显微测量指标可用来计算下列参数：每厘米角质层长度的表皮小囊(粉刺)总数，粉刺轮廓(此可得到粉刺形态学方面的衡量，亦即安瓿形相对于窄形)，以及表皮厚度。
根据导致本发明的研究，将由Charles River Italy S.p.A.供给的5-6周龄、体重18-22克(在实验开始时)的雄性犀鼠(RHJ/LeJ)(批号No.2004256，在28/07/2004出生)及雌性犀鼠(批号No.2004257，8只在11/08/2004出生而7只在21/07/2004出生)圈养在makrolon笼子(26.7×20.7×14厘米大小)内；每一笼子一只鼠；笼子上具有带过滤器的塑胶盖及在一层无菌锯屑上的栅格。
食物和水都是自由取用。在整个研究持续期间每一只鼠的每日饮食包括饲料(GLP-4RF21，由Mucedola公司所供应)。动物的食物和饮水的分析鉴定证明保存在Sigma-Tau处。
动物在12小时光照/黑暗周期(7.00-19.00照光)中饲养。
动物房参数设定如下：温度22±2℃，相对湿度等于55±15％，空气过滤器每15-20小时更换。
监测环境条件且将数据保存在动物饲养档案中。
形成两组，每组6只动物。
在Sigma-Tau实验室中使用动物的授权得自卫生部。动物的管理和使用都是按照European Directives No.86/609及ItalianRegulatory system(Legislative Decree No.116，Art.6，1992年1月27日)。有关动物处理的研究的每一部分都经Sigma-Tau的兽医学部所批准。
随机化
动物饲养员将小鼠从盒子随机地转移到笼子内。然后将每一笼子用一卡片标记以识别处理类型(所用物质、剂量、施用途径及动物识别号码)。
处理
对动物经由在3周期间(于Sigma-Tau实验室)每周连续5天每天一次使用50微升体积的微型吸管将试验化合物局部施用到背部45秒而予以处理。所应用的产物为：在载体中的ST1898 0.1％(制剂1：Epikuron200卵磷脂，46.9％w/w(约800mM)在棕榈酸异丙酯中的有机凝胶，w0＝3)，和未处理的动物。
记录类型与频率
每天在处理之前和之后，精确地观察动物，特别注意其行为及局部和总体征象，核验及记录任何死亡事件。此外，在每次使用试验化合物和用载体处理之前对所有动物称重。
组织活检
自处理结束三天后，经由颈脱位法杀死每一小鼠，且从动物背部去除毛发。对处理区域用6毫米打孔器取活检，固定在10％缓冲福尔马林中且包埋于石蜡中(在Sigma-Tau实验室固定并通过70％乙醇，在BMC Laboratory，IDI埋置于石蜡中)。从每一活检取得3个切片，各3微米厚且相隔150微米，并用苏木素-伊红染料予以染色。
组织学检查与图像分析
使用KS300.3显微镜(Zeiss，Jena，Germany)，以20x放大倍数，进行形态学分析及下列参数的定量显微镜评估：
每单位长度(厘米)角质层的小囊/假粉刺的数目；
小囊/假粉刺的最大直径(D)；
小囊/假粉刺的孔径(d)；
毛囊间表皮的面积(S)及相同区域中表皮基底层的长度(L)。
将粉刺的轮廓表示为r＝d/D且将表皮的厚度表示为S/L(微米)。数据评估
所得数据的统计学分析，更精确地说，得自每一不同动物组的数据之间的比较，使用对非配对数据的非参数性Mann-Whitney检验而进行。
使用此调配凝胶(制剂1-ST18980.1％于卵磷脂/IPP 47/53(重量/重量)中；w0＝3)进行体内试验，可证明该物质对犀鼠局部处理之后的强效粉刺消解活性。
结果：ST1898(制剂1)和阿达帕林对犀鼠表皮小囊/假粉刺的抗粉刺作用
从文献已知类维生素A诱导粉刺消解和表皮增厚的能力，所述作用是由于犀鼠皮肤中表皮细胞的过度增殖(或增生)(Kligman L.H.和Kligman A.M..1979J.Invest.Dermatol.73，354-8；Mezick等人，1984J.Am.Acad.Dermatol.11，902-4；Ashton等人，1984 J.Invest.  Dermatol.82，632-5)。
此研究计划中使用的体内模型为犀鼠(hrrhhrrh)，其为无毛小鼠等位基因型(hrhrhrhr)且代表非炎性痤疮的实验动物模型。此模型用于评估经局部施用及全身性施用的抗痤疮化合物的治疗效力(特别是粉刺消解效力)已有20年以上。犀鼠表现出多种皮肤变化，包括毛囊退化期中的缺陷，包括到生命第六周毛发完全丧失及发生所谓的小囊/假粉刺(图1中的C)，其代表在组织学上类似于“滞留型”痤疮病损的开放粉刺的模型。犀鼠的皮肤还具有皮脂腺萎缩(图1中箭头)及在真皮深部存在囊肿(图1中星号，只有部分可看到，因该图像只显示出皮肤最浅表的部分)的特征。
经局部应用的ST1898(制剂1)对治疗痤疮具有药理学上有用的特征，其具有粉刺消解作用及抗炎作用且可导致粉刺数目的减少。ST1898因而可充当在痤疮病理学中大大改变的角质化和炎症的细胞分化过程的调节剂(图1)。
如从图1可见，使用ST1898(制剂))局部处理犀鼠的皮肤对于小囊/假粉刺的数目、尺寸和角质含量的减少(表1)，及对皮脂腺的形态(变得更萎缩)(图中箭头)都有非常显著的影向。与未处理小鼠(A)相比表皮的增生也特别清楚(B)。
表1.对雄性和雌性犀鼠皮肤图像的表皮参数的分析
    处理   数目 粉刺a(厘米 粉刺轮廓(r＝   厚度(微米
    未处理     6     2 7.8±     0.6 5±     23.5±
    ST18980.1％     6     **7.5±     **1.01±     **82.7±
数据皆为平均值±SD
*p＜0.05及**p＜0.01相对于未处理组(Mann-Whitney)
a每单位长度(表示为厘米)角质层的粉刺数目
与药物在局部治疗痤疮后的粉刺消解作用直接相关联的参数为r(表1)(Mezick等人，1984 J.Am.Acad.Dermatol.11，902-4；Bouclier等人，1991 Skin Pharmacol.4，65-73)：若r等于或大于1，则试验化合物具有由典型痤疮病损数目减少所证实的粉刺消解效用。
与由未处理小鼠组所代表的对照相比，可以看出此参数值被ST1898(制剂1)所改变，其产生从封闭性粉刺到开放粉刺的变化，r值等于1，展示出强力的粉刺消解效用。此外，于该组织图中可以看到描述表皮厚度的参数在用ST1898处理后增加。
实施例5.ST1898组合物-制剂2的制备-在凝胶相中的ST1898制剂的制备
制剂：ST1898 0.1和0.05％在载体中。
载体：卡波姆980，丙二醇、泊洛沙姆、依地酸二钠、羟基苯甲酸甲酯、苯氧基乙醇、氢氧化钠及纯净水。
阴性对照：无处理
使用阿达帕林(达芙文凝胶_)作为参比化合物(0.1％)。实施例6.ST1898(制剂2)对犀鼠表皮假粉刺的粉刺消解作用
在Sigma-Tau实验室中使用动物的授权系由Italian HealthAuthority取得。动物的护理和饲养按照European Directivesno.86/609及Italian DL 116，1992年1月27日。此研究中有关动物护理的所有部分都已经Sigma-Tau兽医人员批准。
动物供应及饲养
将小鼠(Charles River Italy S.p.A.，供给Jacks on Laboratory)圈养在makrolon笼子(26.7×20.7×14厘米)内(1只小鼠/笼)，该笼子具有钢制栅格盖及经粉碎和灭菌的无尘床垫穗轴锯屑床架。动物圈养在光照-黑暗周期下，保持温度和湿度恒定。动物房的参数估计如下：22±2℃温度，55±15％相对湿度，约15-20次过滤空气更换/小时及12小时人工光照的昼夜节律周期(7a.m.，7p.m.)。监测环境条件；数据保存在动物饲养档案中。
饮食和水供给
饮用水自由取用。于整个研究过程中对每只小鼠每日供应完全小丸食物(GLP 4RF21，Mucedola)。动物食物和饮水的分析鉴定证明保存在Sigma-Tau处。
研究设计-小鼠处理
将30只(RHJ/LeJ)犀鼠(Jackson Laboratory)(15只雄性，15只雌性)(6-8周龄)分成6只小鼠/组。两组用ST1898(制剂2)(0.1％和0.05％，在载体中)处理，一组用作为参比化合物的阿达帕林(达芙文_凝胶)(0.1％)处理，一组用载体(与达芙文_凝胶配方相同：卡波姆980、丙二醇、泊洛沙姆、依地酸二钠、羟基苯甲酸甲酯、苯氧基乙醇、氢氧化钠和纯净水)处理。
一组未经处理(对照组)。将药物(50微升)以带无菌手套的手指局部地涂在背部皮肤上(按摩30-45秒)，每天一次，连续5天/周(星期六和星期日除外)，连续3周。最后施用后三天，经由颈脱位法将小鼠处死。在死亡后立即从所有处死动物采取两份皮肤打孔活检(6毫米)。将该活检用福尔马林固定(10％缓冲福尔马林溶液)且用石蜡包埋。
死后检验
使用定量式组织学图像分析评定每厘米角质层长度的表皮小囊(粉刺)总数、粉刺轮廓及表皮厚度。从一份活检，以150微米间隔取得3个3微米厚的皮肤切片且用苏木素-伊红予以染色。将第二份活检保存起来供记录用。
对经染色的皮肤切片的电脑辅助形态学分析使用Zeiss KS300.3系统(参数n.1，3和4)实施。对于角质层总长度测量，使用测微设备。测量下列显微参数：
1)每一开放表皮小囊/粉刺上的最大直径或半深度直径(D)及表面孔的直径(d)，
2)三个切片的长度，取为角质层的总长度，
3)三个切片中表皮小囊/粉刺的总数，
4)在毛囊间区域中，表皮的表面积(S)及相应基底层的长度(L)。
从这些数据，计算每一组动物的下列平均值(+/-SD)：
1)小囊/(粉刺)的数目/角质层长度(厘米)；
2)粉刺轮廓，计算成r＝d/D
3)表皮厚度，计算成S/L，单位微米
试验物的施用
在背部皮肤上的局部施用(按摩30-45秒)系使用带手套手指涂抹50微升而实施。连续3周中连续5天/周(星期六和星期天除外)每日进行所述处理一次。
数据分析
统计学分析使用双尾Student′s“t”检验实施，以比较得自不同动物组的数据。
当达到p值(P)＜＝0.05时即视为有显著差异。
于需要时使用其它统计学方法。
结果
在处理期间，记录小鼠体重以控制小鼠的健康状态。没有发现体重有明显变异(表2)。
对用ST1898(制剂2)处理的犀鼠及对照犀鼠的分析结果示于表2和图1-8中。最相关的发现总结于下文。
组织学分析
得自5组犀鼠的组织学标本的分析显示
a)与未处理皮肤相比，载体处理对于小囊(粉刺)数目和形态以及表皮形态和厚度都没有影响。在所有标本中都观察到许多填充着角质化细胞的扩大粉刺。皮脂腺表现出明显地萎缩。未处理小鼠及经载体处理小鼠的稀疏毛囊间表皮包含单一层的基底细胞，二至三层的棘细胞及一层包含角质透明蛋白颗粒的粒细胞。角质层呈现为厚且构造疏松，具有特征性的“篮波(basketwave)”外观。
b)用ST1898处理过的小鼠皮肤中的粉刺数目有大幅减少。在用ST1898处理过的小鼠与用阿达帕林处理过的小鼠之间，此效应似乎相差无几。在所有经活性化合物处理过的动物中，大部分的毛囊都变成细窄毛发管道，没有显示出有角质物质的蓄积。此外，有特别扩大的皮脂腺连接到毛囊管。
c)在ST1898处理小鼠和阿达帕林处理小鼠中有毛囊间表皮增生现象。具体而言，毛囊间表皮包含单一层的基底细胞，3-6层的棘细胞及3-5层的含有许多大角质透明蛋白颗粒的粒细胞。角质层更为紧密，特别是在其下部中。值得注意的是，与ST1898处理小鼠相比，在阿达帕林处理小鼠的皮肤中表皮增生现象更显著。此外，在所有经活性化合物处理的动物中都观察到轻微的真皮淋巴细胞浸润现象。形态学分析
粉刺数目。在未处理小鼠与载体处理小鼠中，每厘米角质层的粉刺数目相差无几。
与未处理及载体处理对照相比，该值在经ST18980.1％和0.05％处理的小鼠中呈现出高度的减低(p值＜0.005)。在0.1％ST1898处理小鼠中，相对于0.05％ST1898处理的小鼠，粉刺数目明显地更低(p值＜0.005)。ST1898 0.1％与阿达帕林0.1％显示出相当的效用(p值＝0.288626)。
粉刺轮廓。粉刺轮廓分析显示出，相对于未处理及载体处理对照小鼠，在经0.1％ST1898-、0.05％ST1898-和阿达帕林-处理的小鼠中r值高度显著且彼此相当的增加(p值＜0.0005)。未处理及载体处理这两组显示出相近的值。
表皮厚度。相对于两个组的对照小鼠，在经ST18980.1％-，ST18980.05％-及阿达帕林-处理的小鼠中，表皮厚度显著增加(p值＜0.0005)。未处理和载体处理小鼠显示出相近的值。ST18980.05％处理小鼠中的表皮厚度高于用0.1％ST1898处理的小鼠(p值＜0.05)或用阿达帕林处理的小鼠(p值＜0.005)。阿达帕林处理的小鼠在与用0.1％ST1898处理的小鼠相比时，显示出显著更厚的表皮(p值＜0.05)。
结论
对用类维生素A ST1898连续3周(每天一次，5天/周)局部处理的犀鼠的分析显示出，在所用两种浓度(0.1％和0.0 5％)下ST1898都显示出粉刺消解活性和抗粉刺产生活性，如经由(i)与未处理或载体处理的小鼠相比高度减少的粉刺数目，和(ii)细窄粉刺的大幅增加(增加的r值)所评定的。
以相同浓度(0.1％)施用时，ST1898发挥出类似于参比化合物阿达帕林所引发的对粉刺数目和轮廓的作用。
ST1898的作用是剂量-相关的，在减少粉刺数目及诱导表皮增生方面，0.05％ST1898不如0.1％ST1898有效。
此外，与参比化合物处理相比，在ST18980.1％局部处理后，表皮增生显著减低，显示出使用ST1898超越现有局部用类维生素A的可能优势。
表2使用ST1898(制剂2)或阿达帕林根据方案qd×5/w×3w处理的犀鼠的体重和致死率
处理 n     起始体重克±SE     最终体重克±SE 体重减轻最大值(％)
    对照(无处理)     *5     20.7±1.3     22.8±1.2     0
    载体     *5     21.5±0.9     22.9±1.3     1
    ST1898  0.1％     6     20.9±0.4     21.9±0.5     1
    ST1898  0.05％     6     20.9±1.0     2 2.2±1.1     0
    阿达帕林0.1％(达芙文凝胶_) *5 21.3±1.1 2 1.2±1.3 4
在最后一次处理后三天将小鼠处死。用于ST1898(制剂2)的载体与达芙文凝胶的相同(卡波姆980、丙二醇、泊洛沙姆，依地酸二钠、羟基苯甲酸甲酯、苯氧基乙醇、氢氧化钠和纯净水)。
*一只小鼠因低体重而在开始处理之前就排除出研究。
经ST1898(制剂2)处理的小鼠和对照小鼠的皮肤的形态测定分析(结果表示为平均值±SD)
表3.1
处理 粉刺(n/厘米 )   P值相对于未处理组   P值相对于载体组
    未处理     57.35±4.96     0.982154
    载体     57.27±5.74     0.982154
    ST1898  0.1％     31.35±5.37     1.68×10-5***     2.89×10-5***
    ST1898  0.05％     42.42±4.5     0.00056**     0.00098**
    阿达帕林0.1％     28.31±2.92     3.41×10-6***     8.12×10-5***
P值0.1％ST1898相对于0.05％ST1898＝0.003182**
P值0.1％ST1898相对于阿达帕林＝0.288626
P值0.05％ST1898相对于阿达帕林＝0.000213***
表3.2
处理 粉刺轮廓(r＝d/D)   P值相对于未处理组   P值相对于载体组
    未处理     0.6 2±0.05     0.918704
    载体     0.61±0.05     0.918704
    ST1898  0.1％     1.27±0.07     2.85×10-8***     2.99×10-8
    ST1898  0.05％     1.26±0.13     3.24×10-6***     3.29×10-6***
    阿达帕林0.1％     1.24±0.11     3.22×10-6***     3.23×10-6***
P值0.1％ST1898相对于0.05％ST1898＝0.794536
P值0.1％ST1898相对于阿达帕林＝0.517798
P值0.05％ST1898相对于阿达帕林＝0.792654
表3.3
处理 表皮厚度(微米)   P值相对于未处理组   P值相对于载体组
    未处理     20.90±2.91     0.857119
    载体     20.56±2.86     0.857119
    ST1898  0.1％     42.52±2.17     1.89×10-7***     1.50×10-7***
    ST1898  0.05％     37.45±3.97     2.94×10-5***     2.0×10-5***
    阿达帕林0.1％     57.33±9.99     5.09×10-5***     4.72×10-5***
P值0.1％ST1898相对于0.05％ST1898＝0.020697*
P值0.1％ST1898相对于阿达帕林＝0.006037*
P值0.05％ST1898相对于阿达帕林＝0.001479**
*＝p＜0.05；**＝p＜0.005；***＝p＜0.0005

Claims (8)

1.金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸用于制备局部使用以治疗痤疮的药学或化妆品组合物的用途。
2.根据权利要求1的用途，其中该药学组合物呈凝胶形式。
3.根据前述权利要求之一的用途，含有卵磷脂。
4.根据前述权利要求之一的用途，每100毫克凝胶含有0.1毫克金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸。
5.局部使用以治疗痤疮的药学或化妆品组合物，其含有金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸作为活性成分，以及其它赋形剂和/或药学上可接受的载体。
6.根据权利要求5的组合物，呈凝胶形式。
7.根据权利要求5或6的组合物，含有卵磷脂作为载体或赋形剂。
8.根据权利要求5-7的组合物，每100毫克凝胶含有0.1毫克金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸。
CN2006800175175A 2005-05-20 2006-05-05 金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸用于治疗痤疮的用途 Expired - Fee Related CN101180028B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT000248A ITRM20050248A1 (it) 2005-05-20 2005-05-20 Uso acido adamantil metossidifenil propenoico per il trattamento di patologie cutanee.
ITRM2005A000248 2005-05-20
PCT/EP2006/062088 WO2006122883A1 (en) 2005-05-20 2006-05-05 Use of adamantyl methoxydi phenyl propenoic acid for the treatment of acne

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101180028A true CN101180028A (zh) 2008-05-14
CN101180028B CN101180028B (zh) 2010-12-08

Family

ID=36646157

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2006800175175A Expired - Fee Related CN101180028B (zh) 2005-05-20 2006-05-05 金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸用于治疗痤疮的用途

Country Status (14)

Country Link
US (1) US7635719B2 (zh)
EP (1) EP1890671B1 (zh)
JP (1) JP5072833B2 (zh)
KR (1) KR101307910B1 (zh)
CN (1) CN101180028B (zh)
AR (1) AR054361A1 (zh)
AU (1) AU2006248981B2 (zh)
BR (1) BRPI0611289A2 (zh)
CA (1) CA2606567A1 (zh)
HK (1) HK1117737A1 (zh)
IT (1) ITRM20050248A1 (zh)
MX (1) MX2007014222A (zh)
TW (1) TWI365753B (zh)
WO (1) WO2006122883A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102224127A (zh) * 2008-12-24 2011-10-19 希格马托制药工业公司 赋予细胞毒性和/或抗血管生成特性的新类视黄醇衍生物
CN110114338A (zh) * 2016-09-29 2019-08-09 比奥吉公司 具有抗肿瘤活性的类视色素衍生物

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5109383B2 (ja) * 2007-01-31 2012-12-26 大正製薬株式会社 アダパレン含有外用剤組成物
JP2009137874A (ja) * 2007-12-05 2009-06-25 Authele:Kk ビタミンＣ（Ａｓｃｏｒｂｉｃａｃｉｄ）を含有するレシチンゲルおよびその製造方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6071923A (en) * 1994-09-16 2000-06-06 Bar-Ilan University Retinoyloxy aryl-substituted alkylene butyrates useful for the treatment of cancer and other proliferative diseases
FR2752734B1 (fr) * 1996-09-02 1998-11-06 Cird Galderma Utilisation de retinoides pour la preparation d'un medicament destine a traiter les affections liees a une surexpression de vegf
US5994330A (en) * 1998-11-09 1999-11-30 El Khoury; Georges F. Topical application of muscarinic agents such as neostigmine for treatment of acne and other inflammatory conditions
ITRM20010464A1 (it) * 2001-07-31 2003-01-31 Sigma Tau Ind Farmaceuti Derivati retinoidi ad attivita' antiangiogenica, antitumorale e pro-apoptotica.
MXPA04008684A (es) * 2002-03-12 2004-12-06 Galderma Res & Dev Uso de adapaleno para tratamiento de trastornos dermatologicos.

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102224127A (zh) * 2008-12-24 2011-10-19 希格马托制药工业公司 赋予细胞毒性和/或抗血管生成特性的新类视黄醇衍生物
CN110114338A (zh) * 2016-09-29 2019-08-09 比奥吉公司 具有抗肿瘤活性的类视色素衍生物

Also Published As

Publication number Publication date
EP1890671A1 (en) 2008-02-27
JP2008540603A (ja) 2008-11-20
WO2006122883A1 (en) 2006-11-23
AU2006248981A1 (en) 2006-11-23
KR101307910B1 (ko) 2013-09-16
TW200716192A (en) 2007-05-01
US20080153916A1 (en) 2008-06-26
TWI365753B (en) 2012-06-11
EP1890671B1 (en) 2014-03-05
US7635719B2 (en) 2009-12-22
WO2006122883A9 (en) 2012-10-04
HK1117737A1 (en) 2009-01-23
MX2007014222A (es) 2008-02-07
BRPI0611289A2 (pt) 2010-08-31
CA2606567A1 (en) 2006-11-23
AR054361A1 (es) 2007-06-20
KR20080016573A (ko) 2008-02-21
CN101180028B (zh) 2010-12-08
JP5072833B2 (ja) 2012-11-14
AU2006248981B2 (en) 2011-06-02
ITRM20050248A1 (it) 2006-11-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI245633B (en) A composition for external application of skin
JP2009532509A (ja) 美容活性成分の送達に有用なゲル
CN109498478A (zh) 一种富勒烯外用组合物
CN103948518A (zh) 含有己脒定和维a类化合物的用于改善皮肤的组合物
CN100490791C (zh) 治疗与新血管生成相关疾病的组合物及方法
CN101180028B (zh) 金刚烷基甲氧基二苯基丙烯酸用于治疗痤疮的用途
JP5891651B2 (ja) 角層細胞分化正常化用皮膚外用剤
Scott et al. Safety assessment of panthenol, pantothenic acid, and derivatives as used in cosmetics
US20150119427A1 (en) Waterborne topical compositions for the delivery of azelaic acid for treatment of skin conditions such as acne vulgaris, rosacea, seborrheic dermatitis
CN112137911A (zh) 含有n-酰基二肽衍生物和乙醇酸的局部用组合物
CN102038954B (zh) 一种适于制备维a酸水溶性制剂的水溶基质
EP4408541A1 (en) Brightening compositions and methods of use
AU2011270724B2 (en) Combination therapy with cryosurgery and low dosage strength imiquimod to treat actinic keratosis
GB2572322A (en) A hair treatment composition
Jackson et al. Commissioned Paper: Topical Dosage Form Development and Evaluation
Xu et al. An Ionic Liquid Nanoparticles for Dermal Targeted Delivery and Effective Anti-wrinkle Treatment
JP2013209334A (ja) 表皮肥厚促進剤
JP5937465B2 (ja) コラーゲン産生促進剤、線維芽細胞増殖促進剤、しわ改善剤および皮膚外用剤
EP4045030A1 (en) Compositions and methods of treating acne and photoaging
JP5451558B2 (ja) 美容活性成分の送達に有用なゲル
CN116747213A (zh) 大黄素在抑制皮脂腺合成与分泌中的应用
WO2019175364A1 (en) A treatment composition
RU2624238C2 (ru) Лечение себореи
CN118593468A (zh) 岩藻黄素在制备防脱发药物中的应用
JP2016505577A (ja) ハトムギふすま抽出物およびその使用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1117737

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1117737

Country of ref document: HK

C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20101208

Termination date: 20140505