CN101167767B - 乌腺金丝桃提取物及其在制备治疗心脏病的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

乌腺金丝桃提取物及其在制备治疗心脏病的药物中的应用，它涉及了一种提取物及其在制备治疗心脏病的药物中的应用。本发明解决了现有治疗心脏病的西医药物存在严重副作用的问题和乌腺金丝桃没有用于心脏病治疗报道。本发明的乌腺金丝桃提取物是从乌腺金丝桃中提取出来的，提取是按如下步骤进行的：一、回流；二、浓缩、上样、洗脱、干燥；即得到乌腺金丝桃提取物。以乌腺金丝桃提取物作为治疗心脏病的药物中的活性成分。本发明的提取物具有明显抑制心律失常，量效关系明显，无毒副作用的优点。

Description

乌腺金丝桃提取物及其在制备治疗心脏病的药物中的应用
技术领域
本发明涉及一种提取物及其在制备治疗心脏病的药物中的应用。
背景技术
现代医学的心律失常属于祖国医学的“心悸、怔忡”范畴，是心血管疾病的常见病多发病之一。心律失常可使血液循环状态失常，当发生心律失常时，心房和心室收缩程序改变，能使心排血量下降30％左右，引起病人心虚、胸闷、无力等症状，使本身心脏病加重。心律失常严重时可致窦性停博、窦房阻滞和心动过缓，出现心动过速综合症。心律失常还可导致瘁死，临床统计发现发生瘁死最多的原因是心律失常，其中以室性心动过速、室颤及传导阻滞引起瘁死的发生率最高。所以针对心律失常的治疗长期以来一直是医学界集中关注并致力研究解决的热门课题。目前用于治疗心律失常的主要是西医药物，具有起效快的优点，但是众所周知的西医药物具有明显的副作用，甚至会损害其它脏器；目前用于治疗心脏病的西医药物主要存在引起房室传导阻滞的副作用，抑制心脏的自律性、传导性以及心脏的收缩功能，有诱发心动过速或室颤、心动过缓、心绞痛加重、心肌梗死的可能。
乌腺金丝桃是金丝桃科金丝桃属多年生草本植物，大多生长于草原区山地、林缘、灌丛、草甸草原。在中药大辞典(1977年7月第1版、2003年5月第12次印刷)中金丝桃(乌腺金丝桃)具有清热解毒，祛风湿，消肿的作用。目前尚未有用乌腺金丝桃及其提取物用于制备治疗心脏病的药物的报道。
发明内容
本发明是为了解决现有治疗心脏病的西医药物存在严重副作用的问题和乌腺金丝桃没有用于制备治疗心脏病药物的报道，而提供一种乌腺金丝桃提取物及其在制备治疗心脏病的药物中的应用。
本发明的乌腺金丝桃提取物是从乌腺金丝桃中提取出来的，提取是按如下步骤进行的：一、取乌腺金丝桃阴干品粉碎成粗粉，采用乙醇纯提去除杂质，滤出的提取液；二、将提取液在低于80℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.10～1.40的清膏，上样于大孔树脂柱上，按清膏与树脂的质量比为1∶4～8的比例上样，再以质量浓度为30％～90％、体积为大孔树脂柱体积2～5倍的乙醇洗脱，收集洗脱液以低于60℃的条件下减压干燥至水分含量小于5％，然后粉碎成细粉；即得到乌腺金丝桃提取物。
本发明所述提取的步骤一中乙醇纯提采用常规方法。
本发明所述提取的步骤二中清膏的相对密度是指在60℃的条件下清膏相对于水的密度。
本发明中所述提取的步骤一中的粗粉指能全部通过药典标准二号筛，并含有能通过药典标准四号筛不超过40％的粉末。
本发明中所述提取的步骤二中的细粉指能全部通过药典标准五号筛，并含有能通过药典标准六号筛不少于95％的粉末。
本发明的乌腺金丝桃提取物，通过动物实验说明：(1)具有抗缺氧、明显保护缺血大鼠心肌组织SOD活性，脂质过氧化物MDA的生成，具有明显的抗脂质过氧化物作用；(2)对CaCl2诱发小鼠心律失常有明显的对抗作用，与模型组相比使小鼠恢复窦性心律的比例并耐受较大剂量CaCl2的快速注射的保护率提高30％～40％；(3)对氯仿诱发小鼠心律失常有明显抑制作用；(4)有增加心肌收缩力的作用，可改善心肌舒张功能，减慢心率并使心率趋向稳定规整的作用，除空白组外，各给药组均可使心率减慢，并在实验中观察到给药后心电图形更加稳定规整，现象明显、重现性好。
本发明的乌腺金丝桃提取物，急性毒性预实验中未能测出0％、100％致死的剂量数值，未观察到毒性反应，遂进行实验动物最大耐受量实验，小鼠单次灌胃给予最大浓度、最大容积的供试品半流体状溶液，给药后连续观察14天，小鼠的一般状况未见异常、体重增长未受抑制、无死亡例、未观察到毒性反应，测得小鼠对本发明乌腺金丝桃提取物最大耐受量为37.6g/kg。
本发明乌腺金丝桃提取物，以4g/kg的剂量对大鼠三个月连续给药的长期毒性实验中，一般状况及生理指标未见异常，未观察到毒性反应及副作用发生。
所以，本发明的提取物对缺血性心脏病具有抗缺氧及心肌功能保护作用；并有增加心肌收缩力、改善心肌舒张功能的作用；特别对快速型心律失常可使心率减慢、稳定规整，窦性恢复率提高；量效关系明显，无毒副作用。
本发明的乌腺金丝桃提取物可以与具有活血化瘀、调补气血功用的川芎、丹参、桃仁、红花、益母草、牛膝、黄芪、党参、人参、甘草等中药配伍应用。
本发明的乌腺金丝桃提取物，可以采用常规方法制成胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、丸剂或散剂。
本发明将乌腺金丝桃提取物从乌腺金丝桃中提取出来，提取物在药物安全有效的基础上，使质量可控，增加药物的稳定性，减少服用量。
本发明以乌腺金丝桃提取物作为治疗心脏病的药物中的活性成分。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式的乌腺金丝桃提取物是从乌腺金丝桃中提取出来的，提取是按如下步骤进行的：一、取乌腺金丝桃阴干品粉碎成粗粉，采用乙醇纯提去除杂质，滤出的提取液；二、将提取液在低于80℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.10～1.40的清膏，上样于大孔树脂柱上，按清膏与树脂的质量比为1∶4～8的比例上样，再以质量浓度为30％～90％、体积为大孔树脂柱体积2～5倍的乙醇洗脱，收集洗脱液以低于60℃的条件下减压干燥至水分含量小于5％，然后粉碎成细粉；即得到乌腺金丝桃提取物。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：所述提取的步骤二中将提取液在60～75℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.20～1.30的清膏。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：所述提取的步骤二中将提取液在70℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.25的清膏。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一、二或三的不同点是：所述提取的步骤二中清膏的相对密度是指在60℃的条件下清膏相对于水的密度。其它步骤及参数与具体实施方式一、二或三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：所述提取的步骤一中的粗粉指能全部通过药典标准二号筛，并含有能通过药典标准四号并有增加心肌收缩力、改善心肌舒张功能的作用；特别对快速型心律失常可使心率减慢、稳定规整，窦性恢复率提高；量效关系明显，无毒副作用。
本发明的乌腺金丝桃提取物可以与具有活血化瘀、调补气血功用的川芎、丹参、桃仁、红花、益母草、牛膝、黄芪、党参、人参、甘草等中药配伍应用。
本发明的乌腺金丝桃提取物，可以采用常规方法制成胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、丸剂或散剂。
本发明将乌腺金丝桃提取物从乌腺金丝桃中提取出来，提取物在药物安全有效的基础上，使质量可控，增加药物的稳定性，减少服用量。
本发明以乌腺金丝桃提取物作为治疗心脏病的药物中的活性成分。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式的乌腺金丝桃提取物是从乌腺金丝桃中提取出来的，提取是按如下步骤进行的：一、取乌腺金丝桃阴干品粉碎成粗粉，采用乙醇纯提去除杂质，滤出的提取液；二、将提取液在低于80℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.10～1.40的清膏，上样于大孔树脂柱上，按清膏与树脂的质量比为1∶4～8的比例上样，再以质量浓度为30％～90％、体积为大孔树脂柱体积2～5倍的乙醇洗脱，收集洗脱液以低于60℃的条件下减压干燥至水分含量小于5％，然后粉碎成细粉；即得到乌腺金丝桃提取物。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：所述提取的步骤二中将提取液在60～75℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.20～1.30的清膏。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：所述提取的步骤二中将提取液在70℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.25的清膏。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一、二或三的不同点是：所述提取的步骤二中清膏的相对密度是指在60℃的条件下清膏相对于水的密度。其它步骤及参数与具体实施方式一、二或三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：所述提取的步骤一中的粗粉指能全部通过药典标准二号筛，并含有能通过药典标准四号洗脱，收集洗脱液以50℃的条件下减压干燥至水分含量小于5％，然后粉碎成细粉；即得到乌腺金丝桃提取物。
本实施方式中所述提取的步骤二中清膏的相对密度是指在60℃的条件下清膏相对于水的密度。
本实施方式中所述提取的步骤一中的粗粉指能全部通过药典标准二号筛，并含有能通过药典标准四号筛不超过40％的粉末。
本实施方式中所述提取的步骤二中的细粉指能全部通过药典标准五号筛，并含有能通过药典标准六号筛不少于95％的粉末。
将本实施方式的提取物进行如下动物实验：
1、对异丙肾上腺素致小鼠心肌缺血的影响
1.1对异丙肾上腺素所致心肌缺血小鼠常压耐缺氧生存时间的影响
昆明种小鼠60只，随机分为6组：①正常对照组；②模型组；③阳性对照组：普萘洛尔30mg/kg；④低剂量组：0.1g/kg；⑤中剂量组：0.2g/kg；⑥；高剂量组：0.4g/kg。各组小鼠灌胃预防给药7天，自预防给药第6天给药后30分钟，模型组和受试组动物连续2天接受皮下注射异丙肾上腺素，每次剂量20mg/kg，每天1次，正常对照组皮下注射等容积生理盐水，造模导致小鼠出现急性心肌缺血。末次给药15min后将小鼠放入容积为200ml的密闭广口瓶中，瓶塞密封瓶口，瓶内放有25g钠石灰，以呼吸停止为指标，观察并记录小鼠存活时间，结果如表1所示。
表1 对小鼠生存时间的影响(
Figure G2007101445534D00051
n＝10)
分组 剂量 生存时间min
正常组 22.69±3.53<sup>※※</sup>
模型组 13.78±2.55
普萘洛尔组 30mg/kg 19.17±1.21<sup>※※</sup>
高剂量组 0.4g/kg 17.91±3.99<sup>※※</sup>
中剂量组 0.2g/kg 16.17±3.38<sup>※</sup>
低剂量组 0.1g/kg 13.20±2.77
与模型组相比※※P＜0.01；※与模型组相比P＜005
表1说明本实施方式的提取物明显延长了异丙肾上腺素合并密闭所致常压缺氧状态下的小鼠存活时间，有抗缺氧作用。
1.2对异丙肾上腺素所致心肌缺血小鼠血清中CK和LDH的影响
异丙肾上腺素致小鼠心肌缺血模型小鼠分组同上。各组小鼠分别按照同上给药剂量灌胃预防给药，每天1次，连续7天。第5天开始，除正常对照组外，各组小鼠皮下注射异丙肾上腺素20mg/kg(正常对照组皮下注射等容积生理盐水)，连续3天。末次给药后2小时，小鼠眼球采血处死，离心分离血清测定磷酸肌酸酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。迅速开胸摘取心脏，心肌组织在4℃下匀浆，离心提取，测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及过氧化脂质丙二醛(MDA)含量，结果如表2、表3所示。
表2 对异丙肾上腺素所致心肌缺血小鼠血清中CK和LDH的影响(n＝10)
分组 剂量 CK(U/L) LDH(U/L)
正常组 28.76±4.33<sup>※</sup> 319.24±82.50<sup>※</sup>
模型组 33.93±3.71 614.53±170.39
普萘洛尔组 30mg/kg 27.10±5.01<sup>※※</sup> 463.41±64.69<sup>※※</sup>
高剂量组 0.4g/kg 29.61±4.49<sup>※</sup> 472.35±73.84<sup>※</sup>
中剂量组 0.2g/kg 30.09±2.47 520.51±94.91
低剂量组 0.1g/kg 32.62±4.65 577.37±113.91
与模型组相比※※P＜0.01；※与模型组相比P＜005
表3 对异丙肾上腺素所致心肌缺血小鼠心肌组织SOD活性和MDA含量的影响(
Figure G2007101445534D00062
n＝10)
分组 剂量 SOD(U/mg protein) MDA(μmol/g protein)
正常组 81.25±15.35<sup>※※</sup> 2.23±0.16<sup>※※</sup>
模型组 57.03±13.21 3.65±0.79
普萘洛尔组 30mg/kg 74.28±10.78<sup>※</sup> 2.64±0.47<sup>※※</sup>
高剂量组 0.4g/kg 70.58±6.05<sup>※</sup> 2.79±0.60<sup>※※</sup>
中剂量组 0.2g/kg 60.01±11.12 3.36±0.63
低剂量组 0.1g/kg 52.80±10.42 3.41±0.76
与模型组相比※※P＜0.01；※与模型组相比P＜005
表2说明，对异丙肾上腺素所致心肌缺血小鼠血清CK和LDA升高有明显降低作用，说明本实施方式的提取物对急性心肌缺血有保护作用。表3说明，本实施方式的提取物能保护异丙肾上腺素所致心肌缺血小鼠心肌组织SOD活性，对心肌组织MDA的升高有明显有降低作用，心肌缺血时伴有氧自由基生成，后者可转变成羟自由基引起心肌细胞膜脂质过氧化，破坏膜功能而加剧心肌缺血，SOD是降解脂质过氧化物特异性酶，心肌缺血时SOD活性降低，所以本实施方式的提取物能明显保护缺血大鼠心肌组织SOD活性，减少脂质过氧化物MDA的生成，具有明显的抗脂质过氧化物作用。
2、对大鼠离体心脏左心室功能的影响
方法：Wistar大鼠32只，随机分为4组，分别为空白组、乌腺金丝桃提取物40mg/ml、20mg/ml、10mg/ml组。应用Langendorff系统进行大鼠离体心脏灌注，用Medlab生物信号采集处理系统测定生理参数：左室收缩压(LVSP)、左室内压上升速率最大值(+dP/dt)max、左室舒张期末压(LVEDP)、左室内压下降速率最大值(-dP/dt)max和心率(HR)的变化情况，实验结果如表4所示。
表4 乌腺金丝桃对大鼠LVSP、LVEDP、(±dp/dt)max及心率的影响(
Figure G2007101445534D00071
n＝8)
Figure G2007101445534D00081
※：P＜0.05
从表4可以看出空白组给药前后各项指标无显著性变化。高剂量组给药后10分钟使左室收缩压(LVSP)、左室舒张期末压(LVEDP)值升高、心率数值(HR)下降，与给药前相比有显著差异。中剂量组给药后5分钟即能显著升高左室收缩压(LVSP)、左室内压上升和下降速率最大值(±dp/dt)max，并使心率下降与给药前相比有显著差异。低剂量组只在给药后10分钟心率显著下降，其他数值未见显著差异。LVSP主要反映心肌的收缩能力，而LVEDP则间接反映心室的舒张顺应性，(±dP/dt)max分别反映收缩期和舒张期心肌的收缩功能的敏捷性。从表4看出，本实施方式的提取物对LVSP、(+dP/dt)max有显著增高作用，且作用时间长，对(-dP/dt)max有显著降低作用，表明本实施方式的提取物有增加心肌收缩力的作用，同时使敏捷性提高，可改善心肌舒张功能，减慢心率并使心率趋向稳定规整的作用。除空白组外，各给药组均可使心率减慢，并在实验中观察到给药后心电图形更加稳定规整，现象明显、重现性好，所以本实施方式的提取物具有抗快速型心律失常作用。
3、对氯化钙致小鼠心律失常的保护作用
昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只：①对照组；②阳性对照组：维拉帕米65mg/kg；③低剂量组：0.1g/kg；④中剂量组：0.2g/kg；⑤高剂量组：0.4g/kg。各组小鼠灌胃预防给药7天，对照组给予同体积生理盐水，末次给药1小时后，将小鼠用20％乌拉坦腹腔注射麻醉(20mg·kg-1)，仰卧位固定，记录标准II导联心电图，3.5％氯化钙(120mg·kg-1)3s内匀速尾静脉推注，监测心电图变化，记录30min，观察小鼠心律失常出现时间、持续时间和第一次心律失常出现后20秒内心律恢复情况，统计室颤率和死亡率，结果如表5和表6所示。
表5 心律失常出现及持续时间(秒)(
Figure G2007101445534D00082
n＝10)
分组 剂量 心律失常出现时间(秒) 心律失常持续时间(秒)
正常组 1.28±0.67 21.67±5.24
维拉帕米组 65mg/kg 2.39±0.68<sup>※※</sup> 16.83±4.68<sup>※</sup>
高剂量组 0.4g/kg 2.27±1.28<sup>※</sup> 16.87±3.06<sup>※</sup>
中剂量组 0.2g/kg 1.58±0.55 18.28±5.76
低剂量组 0.1g/kg 1.47±0.59 22.65±4.82
与模型组相比※※P＜0.01；※与模型组相比P＜005
表6 恢复窦性心律及追加注射后保护率
Figure G2007101445534D00091
表5和表6说明，本实施方式的提取物减少了心律失常后动物死亡数并使大多数动物心律失常后转为窦性心律，表明其对CaCl2诱发小鼠心律失常有明显的对抗作用。使多数小鼠恢复窦性心律并耐受较大剂量CaCl2的快速注射，对心律失常小鼠有明显的保护作用。
4、对氯仿诱发小鼠心律失常的影响
昆明种小鼠60只，随机分为5组：①对照组；②阳性对照组：维拉帕米65mg/kg；③低剂量组：0.1g/kg；④中剂量组：0.2g/kg；⑤高剂量组：0.4g/kg。各组小鼠灌胃预防给药7天，对照组给予同体积生理盐水，末次给药1小时后，将小鼠逐一放入置有3～4ml氯仿棉球的倒置烧杯内(以后每换1只小鼠加入1ml氯仿)，至呼吸停止，立即取出剖开胸腔，肉眼检查心脏活动节律，计算心室纤颤发生率，结果如表7所示。
表7 对氯仿诱发小鼠心律失常的影响
组别 剂量 动物数 室颤数 室颤发生率/％
对照组 12 10 83.3
维拉帕米组 65mg/kg 12 4 33.3
高剂量组 0.4g/kg 12 5 41.6
中剂量组 0.2g/kg 12 7 58.3
低剂量组 0.1g/kg 12 7 58.3
表7说明本实施方式的提取物明显抑制氯仿诱发的小鼠心律失常。

Claims (10)

1.乌腺金丝桃提取物，其特征在于乌腺金丝桃提取物是从乌腺金丝桃中提取出来的，提取是按如下步骤进行的：一、取乌腺金丝桃阴干品粉碎成粗粉，采用乙醇纯提去除杂质，滤出的提取液；二、将提取液在低于80℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.10～1.40的清膏，上样于大孔树脂柱上，按清膏与树脂的质量比为1∶4～8的比例上样，再以质量浓度为30％～90％、体积为大孔树脂柱体积2～5倍的乙醇洗脱，收集洗脱液以低于60℃的条件下减压干燥至水分含量小于5％，然后粉碎成细粉；即得到乌腺金丝桃提取物。
2.根据权利要求1所述的乌腺金丝桃提取物，其特征在于所述提取的步骤二中将提取液在60～75℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.20～1.30的清膏。
3.根据权利要求1所述的乌腺金丝桃提取物，其特征在于所述提取的步骤二中将提取液在70℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.25的清膏。
4.根据权利要求1、2或3所述的乌腺金丝桃提取物，其特征在于所述提取的步骤二中清膏的相对密度是指在60℃的条件下清膏相对于水的密度。
5.根据权利要求1所述的乌腺金丝桃提取物，其特征在于所述提取的步骤二中按清膏与树脂的质量比为1∶6的比例上样。
6.根据权利要求1所述的乌腺金丝桃提取物，其特征在于所述提取的步骤二中以质量浓度为55％～75％、体积为大孔树脂柱体积3～4倍的乙醇洗脱。
7.根据权利要求1所述的乌腺金丝桃提取物，其特征在于所述提取的步骤二中以质量浓度为65％、体积为大孔树脂柱体积3.5倍的乙醇洗脱。
8.根据权利要求1所述的乌腺金丝桃提取物，其特征在于所述提取的步骤二中收集洗脱液以30～55℃的条件下减压干燥至水分含量为4.5％。
9.根据权利要求1所述的乌腺金丝桃提取物，其特征在于所述提取的步骤二中收集洗脱液以低于50℃的条件下减压干燥至水分含量为4％。
10.乌腺金丝桃提取物在制备治疗心脏病的药物中的应用，其特征在于乌腺金丝桃提取物作为治疗心脏病的药物中的活性成分。
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