CN101166732B - 氰基吡啶衍生物及其作为药物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明可以提供一种用于癌症的治疗药物，其包含选自由下列各项组成的组的物质作为活性成分：新的氰基吡啶衍生物，其药用盐，水合物，水加合物和溶剂合物。
Description
技术领域
本发明涉及新的氰基吡啶衍生物及包含其作为活性成分的药剂。
背景技术
蛋白激酶被认为是和GPCR(G蛋白偶联受体)一样重要的药物靶标。蛋白激酶的异常激活与许多与细胞过度生长相关的疾病相关。其实例包括炎性和增殖性疾病，即所谓过度生长疾病，如肿瘤，类风湿性关节炎，心脏疾病，神经功能性疾病，银屑病，哮喘，血管发生和在术后狭窄或再狭窄中的血管内平滑肌生长。据说蛋白激酶的异常直接和间接涉及400种人类疾病，因此一旦可以控制蛋白激酶的活性，认为各种疾病可以得到有效治疗。但是，仅存在几种化合物作为药品市售(非专利参考文献1)。
已经阐明了蛋白质磷酸化反应对于导致癌症，遗传疾病等的细胞的有丝分裂进程是非常重要的，其中称为有丝分裂蛋白激酶的一系列丝氨酸/苏氨酸激酶发挥作用。有丝分裂蛋白激酶在特定的时机和位点对各种蛋白的底物进行磷酸化，由此进行精确的有丝分裂。然而，一旦其控制失效，在M期的各种事件如染色体分离中发生异常，导致细胞根本性特征改变。那些有丝分裂蛋白激酶的其中一种是极光激酶(aurora kinase)。极光激酶是高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，其在细胞周期的M期中表达，并且因此被认为是M期进程中的一种重要的酶。其在从酵母到人类中都是高度保守的。存在人类极光1-3的同源物：极光2激酶和极光1激酶广泛存在于各种细胞中，但是极光3激酶位于睾丸中。编码极光2激酶的基因存在于染色体20的长臂上，并且该区域涉及许多癌症。激酶家族在M期中的重要性已经通过使用酵母，果蝇和Caenorhabditis elegans进行的极光2激酶同源基因的功能抑制实验得到揭示(非专利参考文献2和非专利参考文献3)。
此外，已经阐述了极光2激酶在许多癌症中过表达的事实(非专利参考文献4，非专利参考文献5，非专利参考文献6，非专利参考文献7，非专利参考文献8，非专利参考文献9和非专利参考文献10)并且极光2激酶在正常细胞中的实验性过表达导致了显示恶性转化迹象的细胞(非专利参考文献11)。
此外，有文献记载用反义寡核苷酸治疗人增生性细胞系抑制了极光2激酶的表达，因此抑制了细胞的生长(专利参考文献1)。认为此提示了异常细胞生长可以被极光2激酶活性的抑制所抑制，这对于治疗许多与异常细胞生长，如癌症相关的疾病是有用的。
已经在专利参考文献等中报道了一些抑制极光2激酶的低分子量化合物。例如，可以提及专利参考文献2，专利参考文献3，专利参考文献4，专利参考文献5，专利参考文献6，专利参考文献7，非专利参考文献12，非专利参考文献13和非专利参考文献14。
此外，有许多报道涉及极光1激酶参与癌症。例如，可以提及非专利参考文献15，非专利参考文献16，非专利参考文献17。在细胞周期的M期中，将复制的染色体相等地分为两个子细胞。在M期中，微管(微管蛋白聚合产物)形成纺锤体，其在染色体的物理迁移中起着关键作用。因此，微管蛋白聚合和解聚作用在染色体迁移和进一步的细胞分裂中起着重要作用。已知在临床上作为抗肿瘤药物广泛使用的紫杉醇，长春新碱等是作用在微管蛋白上并且抑制其解聚和聚合的药剂(见非专利参考文献18和19)。认为它们因此引起在细胞周期中的M期停滞(见非专利参考文献20)，并且显示抗肿瘤活性。
专利参考文献1：JP-A-2002-95479
专利参考文献2：WO2001-21595
专利参考文献3：WO2002-22601
专利参考文献4：WO2002-66461
专利参考文献5：WO2003-55491
专利参考文献6：WO2005-013996
专利参考文献7：US-A-2005-0256102
非专利参考文献1：Irena Melnikova等，Nature Reviews/Drug Discovery，卷3，页993-994，2004
非专利参考文献2：David M.Glover等，Cell，卷81，页95-105，1995
非专利参考文献3：Daniela Berdnik等，Current Biology，卷12，页640-647，2002
非专利参考文献4：Hongyi Zhou等，Nature Genetics，卷20，页189-193，1998
非专利参考文献5：Takuji Tanaka等，Cancer Research，卷59，页2041-2044，1999
非专利参考文献6：C.Sakakura等，British Journal of Cancer，卷84，页824-831，2001
非专利参考文献7：Subrata Sen等，Journal of the National Cancer Institute，卷94，页1320-1329，2002
非专利参考文献8：Donghui Li等，Clinical Cancer Research，卷9，页991-997，2003
非专利参考文献9：Yung-Ming Jeng等，Clinical Cancer Research，卷10，页2065-2071，2004
非专利参考文献10：Sangeeta Rojanala等，Molecular Cancer Therapeutics，卷3，No.4，页451-457，2004
非专利参考文献11：James R.Bischoff等，EMBO Journal，卷17，页3052-3065，1998
非专利参考文献12：Elizabeth A.Harrington等，Nature Medicine，卷10，No.3，页262-267，2004
非专利参考文献13：Nicolas Keen等，Nature Reviews Cancer，卷4，页927-936，2004
非专利参考文献14：Daniele Faucelli等，J.Med.Chem，卷48，页3080-3084，2005
非专利参考文献15：Adams等，Chromsoma，卷110，No.2，页65-74，2001
非专利参考文献16：W.Fischle等，Nature，卷438，页1116-1122，2005
非专利参考文献17：T.Hirota等，Nature，卷438页1176-1180，2005
非专利参考文献18：Manfredi J.J.；Parness J.；Horwitz S.B.J.Cell Biol.1982，94，688-696.
非专利参考文献19：Durko I.；Juhasz A.Neurochem.Res.1990，15，1135-1139.
非专利参考文献20：Schiff P.B.；Fant J.；Horwitz S.B.Nature 1979，227(5698)，665-667.
发明公开内容
本发明待解决的问题
本发明的目的是提供用于癌症的治疗药物，其具有极光激酶抑制作用和/或微管蛋白聚合抑制作用。
解决所述问题的方式
本发明人已经进行了集中研究，尝试解决前述问题并发现由下列式(I)表示的氰基吡啶衍生物，药用盐，水合物和溶剂合物显示了极光激酶抑制作用和/或微管蛋白聚合抑制作用，并具有强烈的抗癌作用。已经基于上述发现完成了本发明。
因此，本发明提供下列各项。
(1)由式(I)表示的氰基吡啶衍生物
其中R1，R1’，R3，R3’和R5每个是氢原子，卤素原子或烷基，R2是氢原子，羟基，烷基，烷氧基，羟基烷基，烷硫基，氨基甲酰基，烷酰基氨基或胺，
R2’是氢原子或烷基，或R2和R2’一起形成5-到7-元环状化合物，
Y是N-RA或S，
RA是氢原子或烷基，
A是芳基或杂芳基，
Rx是-T-R4，
T是价键或C1-4亚烷基链，且
R4是-R，卤素原子，-OR或-NR2，其中R是氢原子，烷基，芳基，杂芳基或杂环，或RX和R5一起形成5-到7-元环状化合物，或其药用盐，水合物，水加合物或溶剂合物。
(2)前述(1)的氰基吡啶衍生物，其中，在上面提及的式(I)中，T是价键，R4是烷基，芳基，杂芳基或杂环，且A是芳基或杂芳基，或其药用盐，水合物，水加合物或溶剂合物。
(3)前述(1)或(2)的氰基吡啶衍生物，其中，在上述提及的式(I)中，R4是烷基，苯基，吡啶基，哌啶基或噻吩基，且A是苯基，吡啶基或嘧啶基，或其药用盐，水合物，水加合物或溶剂合物。
(4)用于癌症的一种预防和/或治疗剂，其包含前述(1)-(3)的氰基吡啶衍生物，或其药用盐，水合物，水加合物或溶剂合物。
(5)由下式(III)表示的氰基吡啶衍生物
其中L是卤素原子，且R2，R2’，R5和RX如上定义，或其药用盐，水合物，水加合物或溶剂合物。
(6)前述(5)的氰基吡啶衍生物，其选自由下列各项组成的组：化合物，或其药用盐，水合物，水加合物或溶剂合物：
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈(nicotinonitrile)，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-苯基烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(4-甲氧基苯基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(吡啶-3-基)烟腈，
6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-氯烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(三氟甲基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)4，4’-联吡啶-3-腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(3，4，5-三甲氧基苯基)烟腈，
2-氯-4-(3-甲氧基苯基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-4-(2-甲氧基苯基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
4-(1，3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(2-噻吩基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(3-甲基-2-噻吩基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(5-甲基-2-噻吩基)烟腈，
2-氯-4-(4-异丙氧基苯基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈，
2-氯-6-(5-异丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈
2-氯-4-乙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈，
2-氯-5-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-4-环丙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(3-吗啉-4-基丙基)烟腈，
2-1-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)6，7-二氢-5H-环戊(c)吡啶-4-腈，
2-氯-4-甲基-6-(5-(甲硫基)-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
叔丁基4-(2-氯-3-氰基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-1-羧酸酯，
2-氯-6-(5-乙氧基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈，
2-氯-4-(4-异丁基苯基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-4-异丙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲硫基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-4-甲基-6-(1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，和
4-(1-乙酰基哌啶-4-基)-2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈。
(7)一种极光激酶和/或微管蛋白聚合的抑制剂，包含前述(1)-(3)任一项的氰基吡啶衍生物，或其药用盐，水合物，水加合物或溶剂合物作为活性成分。
发明效果
本发明可以提供用于癌症的治疗药物，其包含这样的物质作为活性成分，所述物质选自由下列各项组成的组：由上述提及的式(I)表示的氰基吡啶衍生物，药用盐，水合物，水加合物和溶剂合物。
实施本发明的最佳方式
在下面详细阐述本发明。
在下面定义由本发明的上述提及的式(I)表示的每个取代基。
R1，R1’，R3，R3’或R5的“卤素原子”的实例包括氟原子。
R1，R1’，R3，R3’或R5的“烷基”的实例包括C1-6烷基(例如，甲基，乙基，丙基，异丙基，环丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，已基等)，和C1-3烷基(例如，甲基，乙基，丙基，异丙基)是特别优选的。
R2或R2’的“烷基”的实例包括类似于前述R1的烷基的那些。
R2的“烷硫基”的实例包括这样的烷硫基，其中所述烷基部分类似于前述R1的“烷基”，如甲硫基，乙硫基，丙硫基，异丙硫基，环丙硫基，丁硫基等。
R2的“烷氧基”的实例包括甲氧基，乙氧基，异丙氧基等。
R2的“羟基烷基”的实例包括羟基甲基，羟基乙基等。
R2的“氨基甲酰基”的实例包括甲基氨基甲酰基，乙基氨基甲酰基等。
R2的“烷酰基氨基”的实例包括乙酰基氨基，新戊酰氨基等。
R2的“胺”的实例包括二甲基胺，二乙基胺等。
由R2和R2’组合形成的“5-7元环状化合物”的实例包括苯，吡啶，嘧啶，吲哚，吡咯烷，哌啶，吗啉，高哌啶，四氢噻吩等。
RA的“烷基”的实例包括类似于前述R1的“烷基”的那些。
R1，R1’，R2，R2’，R3，R3’或RA的烷基任选地由适合的取代基取代。“取代基”的实例包括卤素原子(例如，氟原子，氯原子，溴原子，碘原子)，C1-6烷基(甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，己基)，卤烷基(氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，2-氟乙基，2，2-二氟乙基，2，2，2-三氟乙基等)，氰基，硝基，羟基，C1-6烷氧基(甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，叔丁氧基等)，巯基，C1-6烷硫基(甲硫基，乙硫基，正丙硫基，异丙硫基，正丁硫基等)，氨基，C1-6烷基氨基(甲基氨基，乙基氨基，正丙基氨基，异丙基氨基，正丁基氨基，二甲基氨基，二乙基氨基，正甲基-正乙基氨基等)等。
A的“芳基”的实例包括苯基，1-萘基，2-萘基等，优选苯基。
A的“杂芳基”的实例包括5-或6元杂芳基，其除了碳原子之外，包含一种或两种选自氮原子，硫原子和氧原子的1-4个杂原子(例如，噻吩基，呋喃基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噻唑基，噁唑基，三唑基，苯并噻吩基，吲哚基，喹唑啉基，N-氧代吡啶基等)。
A的芳基和杂芳基任选地被适合的取代基取代。“取代基”的实例包括卤素原子(例如，氟，氯，溴，碘)，C1-6烷基(甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，己基)，卤烷基(氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，2-氟乙基，2，2-二氟乙基，2，2，2-三氟乙基等)，氰基，硝基，羟基，C1-6烷氧基(甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，叔丁氧基等)，巯基，C1-6烷硫基(甲硫基，乙硫基，正丙硫基，异丙硫基，正丁硫基等)，氨基，C1-6烷基氨基(甲基氨基，乙基氨基，正丙基氨基，异丙基氨基，正丁基氨基，二甲基氨基，二乙基氨基，正甲基-正乙基氨基等)，C2-6烷酰基氨基(乙酰基氨基，丙酰氨基等)，C1-6链烷磺酰基氨基(甲烷磺酰基氨基，乙烷磺酰基氨基等)，5-到7-元环状化合物(例如，哌啶，哌嗪，吡咯烷，吗啉，硫代吗啉等)，羧基(甲基羧基，乙基羧基等)，氨基甲酰基(甲基氨基甲酰基，乙基氨基甲酰基等)，烷基羰基(甲基羰基，乙基羰基)等。这些取代基任选地被上述提及的取代基进一步取代。
T的“C1-4亚烷基链”是来自具有1-4个碳原子的直链或支链饱和烃的二价基团。具体实例包括亚甲基，亚乙基，亚丙基等。
R4的“卤素原子”的实例包括类似于前述R1的“卤素原子”的那些。
R的“烷基”的实例包括类似于前述R1的“烷基”的那些，优选甲基，三氟甲基等。
R的“ 芳基”的实例包括类似于前述A的芳基的那些，优选苯基。
R的“杂芳基”的实例包括类似于前述A的“杂芳基”的那些，优选吡啶等。
R的“杂环”的实例包括5-至7-元杂环，其除了碳原子之外，包含一种或两种选自氮原子，硫原子和氧原子的1-3个杂原子(例如，哌啶，哌嗪，吡咯烷，吗啉，硫代吗啉等)。
R的烷基，芳基，杂芳基和杂环任选地被适合的取代基取代。“取代基”的实例包括卤素原子(例如，氟，氯，溴，碘)，C1-6烷基(甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，己基)，卤烷基(氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，2-氟乙基，2，2-二氟乙基，2，2，2-三氟乙基等)，氰基，硝基，羟基，C1-6烷氧基(甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，叔丁氧基等)，巯基，C1-6烷硫基(甲硫基，乙硫基，正丙硫基，异丙硫基，正丁硫基等)，氨基，C1-6烷基氨基(甲基氨基，乙基氨基，正丙基氨基，异丙基氨基，正丁基氨基，二甲基氨基，二乙基氨基，正甲基-正乙基氨基等)，C2-6烷酰基氨基(乙酰基氨基，丙酰氨基等)，C1-6链烷磺酰基氨基(甲烷磺酰基氨基，乙烷磺酰基氨基等)，5-到7-元环状化合物(例如，哌啶，哌嗪，吡咯烷，吗啉，硫代吗啉等)，羧基(甲基羧基，乙基羧基等)，氨基甲酰基(甲基氨基甲酰基，乙基氨基甲酰基等)，烷基羰基(甲基羰基，乙基羰基)等。这些取代基任选地被上述提及的取代基进一步取代。
在式(I)中，Y优选地是NH或S，并且特别优选地是NH。
式(I)的化合物的药用盐的实例包括与无机酸或有机酸的酸加成盐。
式(I)的化合物的药用盐可以表示为水加合物，水合物或溶剂合物，并且这样的水加合物，水合物和溶剂合物也包括在本发明中。
式(I)的化合物的旋光形式也包括在本发明中。
包括在式(I)中的本发明的化合物可以通过下列方法进行合成。
在下面的反应路线中，每个符号如上定义，除非另外指出。
作为按照本发明的式(I)的化合物的生产原材料，使用式(II)的2，6-二卤代-3-氰基吡啶衍生物。可以通过已知方法生产起始化合物。((1)J.Org.Chem.，卷25，p560(2)JP-A-49-62477(3)Bioorg Med Chem Lett，11(2001)p475(4)J.Org.Chem.，44(1979)p2693)。或者，所述化合物可以通过下述步骤容易地进行合成：使相应的β-酮酸酯与2-氰基乙酰胺在DBU(二氮杂双环[5，4，0]十一碳烯)存在的情况下反应，并与苯基膦酰二氯一起加热处理所述沉淀物。在反应1中，式(II)的化合物和3-氨基吡唑衍生物在碱存在下在适合的溶剂中在室温或在加热下反应以产生式(III)的化合物。当碱不存在时，通过升高反应温度热进行反应，由此得到化合物(III)。
不会特别限制上述提及的碱，只要其可以加速反应，并且可以使用叔胺，金属醇盐如叔丁醇钾等，二氮杂双环[5，4，0]十一碳烯，脒，胍，金属氢化物如氢化钠等，金属氟化物如氟化钾等，固体携带金属氟化物等。具体地，优选叔胺(三乙胺，Hunig’s碱)。
可以加入的碱的量通常相对于该化合物是0.1-30当量，优选地1-10当量。
尽管只要其不抑制反应，不对用于反应的溶剂进行限制，优选的是四氢呋喃(在下文称为THF)，二甲亚砜(在下文称为DMSO)，1，4-二噁烷，N，N-二甲基甲酰胺(在下文称为DMF)等。
该反应的反应温度通常是20℃到200℃，优选80℃到150℃。
尽管反应时间根据温度或溶剂种类不同，其通常是30分钟到8小时。
类似的反应用其中式(III)的化合物的吡唑的氮被通用保护基保护的化合物进行，由此可以获得相应的被保护的式(III)的化合物，其可以在后来进行去保护也得到式(III)的化合物。
在上述反应完成后，按照常规方法可以从反应混合物中获得每个反应的目标产物。例如，反应混合物是浓缩的，或当固体存在时，如果适合通过过滤去除固体，并且当将所述溶液加入碱性或中性水中以容许结晶，由此可以获得目标产物。当目标产物没有结晶时，可以通过下列步骤获得目标产物：用不可与水混溶的有机溶剂(例如，乙酸乙酯，氯仿)洗涤，分离包含目标产物的有机层，通过无水硫酸镁等干燥所述层并蒸发所述溶剂。
如果需要，可以通过常规方法进一步纯化获得的目标化合物，例如，再结晶，再沉淀，用溶剂洗涤，色谱法等。
在反应2中，式(III)的化合物和胺衍生物或硫醇衍生物在碱存在情况下，在适合的溶剂中在加热下反应以得到式(I)的化合物。当所述碱是不存在时，通过升高反应温度来热进行反应，由此可以获得化合物(I)。
不会特别限制上述提及的碱，只要其可以加速反应，并且可以使用叔胺，金属醇盐如叔丁醇钾等，二氮杂双环[5，4，0]十一碳烯，脒，胍，金属氢化物如氢化钠等，碳酸氢钠等。具体地，优选碳酸氢钠。
加入的碱的量通常相对于该化合物是0.1-30当量，优选地1-10当量。
尽管只要其不抑制反应，不对用于反应的溶剂进行限制，优选的是THF，DMSO，1，4-二噁烷，DMF等。
该反应的反应温度通常是60℃到200℃，优选80℃到150℃。
尽管反应时间根据温度或溶剂种类不同，其通常是1小时到100小时。
类似的反应用其中式(III)的化合物的吡唑的氮被通用保护基保护的化合物进行，由此可以获得相应的被保护的式(I)的化合物，其可以在后来进行去保护也得到式(I)的化合物。
在上述反应完成后，按照常规方法可以从反应混合物中获得每个反应的目标产物。例如，反应混合物是浓缩的，或当固体存在时，如果适合通过过滤去除固体，并且当将所述溶液加入水中以容许结晶，由此可以获得目标产物。当目标产物没有结晶时，可以通过下列步骤获得目标产物：用不可与水混溶的有机溶剂(例如，乙酸乙酯，氯仿)洗涤，分离包含目标产物的有机层，通过无水硫酸镁等干燥所述层并蒸发所述溶剂。
如果适合可以以任何纯度通过应用已知的分离和纯化方法获得用这种方式产生的本发明的式(I)的氰基吡啶衍生物，例如浓缩，提取，色谱法，再沉淀，再结晶等。
可以通过已知方法从氰基吡啶衍生物产生式(I)的氰基吡啶衍生物的盐，水合物和溶剂合物。
通过上述提及的方法获得的式(I)的化合物，或其药用盐，水合物，水加合物或溶剂合物具有强烈的极光激酶抑制作用和/或微管蛋白聚合抑制作用，以及抗癌作用，并且用于癌症的预防和/或治疗药物。
本发明的化合物，其光学异构体，或其药用盐是低毒的并且可以安全使用。其剂量可以按照患者的状况，如年龄，一般状况，体重等适合地确定，并且当同时施用药剂时，根据条件如其种类，施用频率等，或理想效果的性质等适合地确定。一般而言，活性成分的每日剂量是0.5-300mg/kg体重，通常是1-30mg/kg体重，其可以每天以一份或多份进行施用。
当将本发明的化合物用作药剂时，包含上述活性成分和一种或多种用于制剂的添加剂的药物组合物优选地进行配制和施用。
适合用于施用的药物组合物的实例包括片剂，胶囊，散剂，溶液，酏剂等，并且适合于肠胃外施用的药物组合物的实例包括无菌液体药物组合物如溶液，混悬液等。
不对用于制备药物组合物的制剂的添加剂的种类进行特别限制，可以按照药物组合物的各种形式选择用于制备制剂的适合的添加剂。用于制剂的添加剂可以是固体或液体，并且例如可以使用固体载体，液体载体等。固体载体的实例包括通用的明胶型胶囊。此外，例如可以在与一种或多种用于制剂的添加剂的情况下或在不使用用于制剂的添加剂的情况下对活性成分进行压片，或可以将其制备为散剂和胶囊。这样的胶囊，片剂和粉末可以通常包含以相对于制剂的总重量的5-95wt％，优选地5-90wt％的比例包含活性成分，并且施用剂型优选地包含5-500mg，优选地25-250mg，的活性成分。作为液体载体，可以使用水或动物或植物油如石油，花生油，大豆油，矿物油，芝麻油或合成的油等。
通常，此外，优选盐水，右旋糖或相关的蔗糖溶液和乙二醇如乙二醇，丙二醇，聚乙二醇等作为液体载体。具体而言，可以使用盐水制备注射剂以包含一般地0.5-20重量％，优选地1-10重量％的活性成分。
【实施例】
在下面，通过参考实施例和药理学实验实施例更详细地解释本发明，不将其理解为限制性的。
使用四甲基硅烷(TMS)作为内标，将1H-NMR的化学位移表示为以ppm表示的相对delta(δ)值。对于偶合常数，明显的多重性使用以hertz(Hz)表示的s(单重峰)，d(双重峰)，t(三重峰)，m(多重峰)，dd(双多重峰)，brs(宽单重峰)等显示。使用由Merck生产的硅胶进行薄层色谱法并使用由Fuji Silysia Chemical生产的硅胶进行柱色谱法。
此外，通过无水硫酸钠或无水硫酸镁干燥提取中的有机溶液，除非另外特别指出。
(参考例1)2，6-二氯-4-苯基烟腈的合成
向3-氧代-3-苯基-丙酸乙酯(18g:94mmol)和2-氰基乙酰胺(7.9g:94mmol)在2-丙醇中的混悬液中加入二氮杂双环[5，4，0]十一碳烯(在下文称为DBU，14mL)，将所述混合物在回流下加热22小时，容许冷却到室温。加入1N-盐酸溶液(140mL)，并过滤不溶物质以得到固体(9.4g)。将此溶解在苯基膦酰二氯(150mL)中，并将所述混合物在182℃加热4.5小时。容许反应混合物冷却到室温，并将其倾入冷水中(700mL)。不可溶的物质通过过滤收集，干燥，并溶解于氯仿∶乙醇溶液(1L，1∶1)。该溶液用活性碳处理，并浓缩，将获得的残余物从乙醇中结晶以得到2，6-二氯-4-苯基烟腈(10.7g，产率：28％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：7.79(s，1H)，7.73-7.68(m，2H)，7.60-7.55(m，3H)
(参考例2)2’，6’-二氯-3，4’-联吡啶-3’-腈的合成
向3-氧代-3-吡啶-3-基-丙酸乙酯(10,5g，54mmol)和2-氰基乙酰胺(6g，65mmol)在乙醇中的溶液加入DBU(9mL，60mmol)，并在回流下加热所述混合物12小时。不可溶的物质通过过滤收集以得到固体(5,8g)。在180℃，将4.65g的这些溶解在苯基膦酰二氯中，并处理所述混合物3小时。容许所述反应混合物冷却到室温，并倾入冷水中(600mL)。用1N氢氧化钠溶液中和该混合物，并将不可溶的物质通过过滤收集。用乙酸乙酯提取滤液，并将提取物进行浓缩以干燥。合并获得的固体和上述不可溶的物质，并将其溶解在甲醇中。所述溶液用活性碳处理，并将其进行浓缩以得到2’，6’-二氯-3，4’-联吡啶-3’-腈(2,44g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：8,86(s，1H)，8.77(d-样，1H)，8,14(d，1H)，8,07(s，1H)，7,62(t-样，1H)
(参考例3)2，6-二氯-4-(2-噻吩基)烟腈的合成
向3-氧代-3-(2-噻吩基)丙酸乙酯(87g，390mmol)和2-氰基乙酰胺(34g，410mmol)在乙醇中的溶液中缓慢加入氢氧化钾(22g)，同时在加热下进行搅拌。在回流下加热所述混合物达72小时，并容许冷却到室温，将不可溶的物质通过过滤收集以得到固体(43g)。将该固体缓慢加入苯基膦酰二氯，并将所述混合物在180℃处理5小时。容许所述混合物冷却到室温，并倾入冷水中。将不可溶的物质通过过滤收集，用饱和的碳酸氢钠水溶液彻底洗涤，干燥，并溶解于氯仿。所述溶液用活性碳处理，并浓缩，将所述残余物从2-丙醇:乙酸乙酯混合物中结晶以得到2，6-二氯-4-(2-噻吩基)烟腈(8.6g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：8.1-8.0(m，3H)，7,33(t，1H)(参考例4)2，6-二氯-4-环丙基-烟腈的合成
向3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯(99g，635mmol)和2-氰基乙酰胺(54g，635mmol)在2-丙醇中的溶液中加入DBU(95mL)，并在回流下加热所述混合物达58小时，容许冷却到室温，并将其倾入1N盐酸(1L)中。将得到的不可溶性物质通过过滤收集(固体A)。将3.48g的这些加入苯基膦酰二氯，并将所述混合物在130℃处理10小时。将不可溶的物质通过过滤收集并用乙醇洗涤以得到2，6-二氯-4-环丙基-烟腈(1.4g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：7.30(s，1H)，2.2-2.1(m，1H)，1.32-1.26，1.14-1.10(每个m，每个2H)
(参考例5)2，6-二氯-4-(3-(吗啉-4-基)丙基)烟腈的合成
将在参考例4中获得的固体A(11g)用苯基膦酰二氯(150mL)在180℃处理22小时，所述混合物容许冷却到室温，并倾入冷水中。通过过滤收集粘土质不可溶性物质，并通过硅胶柱色谱法进行纯化以得到固体(2，6-二氯-4-(3-氯丙基)烟腈)(8g)。将1g的这些溶解于二氯甲烷，并将所述溶液与吗啉(0.4mL)在三乙胺(在下文称为TEA，1.22mL)存在下进行反应。将反应混合物通过硅胶柱色谱法进行纯化以得到白色晶体形式的2，6-二氯-4-(3-(吗啉-4-基)丙基)烟腈(740mg)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：6.82(s，1H)3.7-3.6(m，10H)，2.76(dd，2H)，2.1-2.0(m，2H)
(参考例6)叔丁基4-(2，6-二氯-3-氰基吡啶-4-基)哌啶-1-羧酸酯的合成
向叔丁基4-(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)哌啶-1-羧酸酯(104g，349mmol)和2-氰基乙酰胺(29.3g，349mmol)在乙醇(600mL)中的溶液中加入氢氧化钾(23g，349mmol)，并在回流下加热所述混合物达27hr。将不可溶的物质通过过滤收集以得到固体(48.7g)。将6.5g的这些加入苯基膦酰二氯(65mL)，将所述混合物在140℃处理达21hr，并容许冷却到室温。将乙酸乙酯(450ml)加入其中。将在该方法中得到的不可溶性物质通过过滤收集以得到包含粗制2，6-二氯-(4-哌啶-4-基)烟腈的固体(3.27g)。将该固体溶解于二氯甲烷(80ml)，并在冰冷下加入TEA(4.8mL)和二碳酸二叔丁酯(3.7g)，将所述混合物在室温下搅拌9小时。将乙酸乙酯加入所述反应混合物，用水洗涤有机层，并将其进行浓缩。将所述残余物通过硅胶柱色谱法进行纯化以得到叔丁基4-(2，6-二氯-3-氰基吡啶-4-基)哌啶-1-羧酸酯(2.3g)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)：7.25(s，1H)，3.15-3.05(m，1H)，2.85(t，2H)，1.91-1.86(m，2H)，1.67-1.56(m，4H)，1.47(s，9H)
(参考例7)2-((6-甲基吡啶-3-基)氧基)乙胺二盐酸盐的合成
在冰冷下，向叔丁基N-(2-羟基乙基)氨基甲酸酯(49.9g，310mmol)和4-二甲基氨基吡啶(42g，340mmol)在二氯甲烷(500mL)中的溶液中缓慢加入甲苯磺酰氯(59g，310mmol)。混合物容许冷却到室温，搅拌15hr，用水和饱和盐水洗涤，并将其浓缩以得到2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯(98g)。将66g(209mmol)的这些溶解于DMF(500mL)，并加入5-羟基-2-甲基吡啶(22.8g，209mmol)和碳酸铯(102g，314mmol)，将混合物在100℃搅拌2小时。容许所述反应混合物冷却到室温，倾入冷水中，并用乙酸乙酯提取三次。有机层用饱和盐水洗涤，并浓缩以得到晶体(35g)。所述晶体用叔丁基-甲基醚洗涤以得到白色晶体形式的叔丁基(2-((6-甲基吡啶-3-基)氧基)乙基)氨基甲酸酯(24.5g)。在室温，将晶体用2N-HCl/二噁烷溶液(140ml)处理，获得的不可溶性物质通过过滤收集以得到2-((6-甲基吡啶-3-基)氧基)乙胺二盐酸(17.6g)的目标化合物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：8.49(d，1H)，8.42(br-s，2H)，8.05(dd，1H)，7.78(d，1H)，4.40(t，2H)3.23-3.13(m，2H)
(参考例8)3-(2-氨基乙氧基)苯并腈盐酸盐的合成
使用在参考例7中合成的2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯(4g，12.7mmol)和取代参考例7中的5-羟基-2-甲基吡啶的3-氰基苯酚，获得3-(2-氨基乙氧基)苯并腈盐酸盐(0.75g)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：8.23(br-s，3H)，7.54-7.42(m，3H)，7.34-7.30(m，1H)，4.24(t，2H)，3.19(t，2H)
IR(纯的)：2905，2225，1595cm-1
[原材料合成例1]2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈
将2，6-二氯-4-甲基烟腈(38.2g，204mmol)，3-氨基-5-甲基吡唑(23.8g，245mmol)，碘化钾(34g)和TEA(34ml)溶解于DMF(400ml)，并将所述混合物在100℃搅拌8hr。
在搅拌后，将反应混合物加入冷水(3L)，并容许加温到室温。使用Buechner漏斗通过过滤收集不可溶的物质以得到固体(98g)。将该固体溶解于DMF(500ml)，并缓慢加入aq.0.5N-NaOH(1L)。所述残余物用KIRIYAMA漏斗过滤并用甲醇(300ml)洗涤过滤的产物。过滤的产物是38g。通过在加热下将该过滤的产物悬浮在乙酸乙酯(400ml)-甲醇(80ml)的混合溶剂中3小时来洗涤并通过过滤收集以得到需要的产物2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈(在下文称为化合物A，15.3g，产率：31％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.08(1H，s)，10.25(1H，s)，7.15(1H，br-s)，6.04(1H，br-s)，2.40(3H，s)，2.26(3H，s).
m/z＝248(M+H)
[原材料合成例2]2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-苯基烟腈
使用2，6-二氯-4-苯基烟腈并以和原材料合成例1相同的方式，获得2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-苯基烟腈(在下文称为化合物B)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.13(1H，s)，10.59(1H，s)，7.70-7.40(5H，m)，6.05(1H，br-s)，2.20(3H，s).
[原材料合成例3]2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(4-甲氧基苯基)烟腈
使用2，6-二氯-4-(4-甲氧基苯基)烟腈并以与原材料合成例1相同的方式，获得2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(4-甲氧基苯基)烟腈(在下文称为化合物C)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.12(1H，s)，10.41(1H，s)，7.55(2H，d)，7.11(2H，d)，6.10(1H，br-s)，3.84(3H，s)，2.22(3H，s).
[原材料合成例4]2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(吡啶-3-基)烟腈
使用2，6-二氯-4-(吡啶-3-基)-3-烟腈并以与原材料合成例1相同的方式，获得2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(吡啶-3-基)烟腈(在下文称为化合物D)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.12(1H，s)，10.56(1H，s)，8.76(1H，d)，8.71(1H，d)，8.10-7.90(1H，m)，7.70-7.40(1H，m)，6.13(1H，br-s)，2.33(3H，s).
[原材料合成例5]2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-烟腈
使用2，6-二氯烟腈并以与原材料合成例1相同的方式，获得2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-烟腈(在下文称为化合物E)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.12(1H，s)，10.40(1H，s)，7.97(1H，d)，7.28(1H，br-s)，6.11(1H，br-s)2.22(3H，s).
[原材料合成例6]2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(三氟甲基)烟腈
使用2，6-二氯-4-(三氟甲基)烟腈并以与原材料合成例1相同的方式，获得2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(三氟甲基)烟腈(在下文称为化合物F)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.31(1H，s)，11.04(1H，s)，7.22(1H，br-s)，6.46(1H，br-s)，2.36(3H，s).
原材料合成化合物1-6显示在下面的表中。
【表1】
此外，以相同的方式合成下列原材料化合物。
原材料合成例7：2-氯-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基-4，4’-联吡啶-3-腈
原材料合成例8：2-氯-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)-4-(3，4，5-三甲氧基苯基)烟腈
原材料合成例9：2-氯-4-(3-甲氧基苯基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例10：2-氯-4-(2-甲氧基苯基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例11：4-(1，3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例12：2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(2-噻吩基)烟腈
原材料合成例13：2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(3-甲基-2-噻吩基)烟腈
原材料合成例14：2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(5-甲基-2-噻吩基)烟腈
原材料合成例15：2-氯-4-(4-异丙氧基苯基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例16：2-氯-6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈
原材料合成例17：2-氯-6-(5-异丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈
原材料合成例18：2-氯-4-乙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例19：2-氯-6-(5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈
原材料合成例20：2-氯-5-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例21：2-氯-5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例22：2-氯-4-环丙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例23：2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(3-(吗啉-4-基)丙基)烟腈
原材料合成例24：2-1-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-6，7-二氢-5H-环戊(c)吡啶-4-腈
原材料合成例25：2-氯-4-甲基-6-(5-(甲硫基)-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例26：2-氯-6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例27：叔丁基4-(2-氯-3-氰基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-4-基哌啶-1-羧酸酯
原材料合成例28：2-氯-6-(5-乙氧基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈
原材料合成例29：2-氯-4-(4-异丁基苯基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例30：2-氯-4-异丙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例31：2-氯-6-(5-甲硫基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例32：2-氯-4-甲基-6-(1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成例33：4-(1-乙酰基哌啶-4-基)-2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
原材料合成实例7-33显示在下面的表中。
表2
表3
表4
表5
表6
[实施例1]
化合物B(300mg，972μmol)，2-苯氧基乙胺(254μl)和碳酸氢钠(817mg)加入DMSO(10ml)，将所述混合物在100℃搅拌达27hr。搅拌后，将反应混合物加入冷水，用乙酸乙酯提取混合物。用饱和的盐水洗涤有机层，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中洗涤以得到目标化合物：2-(2-苯氧基乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-苯基烟腈(130mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.87(1H，br-s)，9.69(1H，br-s)，7.50(5H，m)，7.28(2H，t)，6.97-6.93(4H.m)，6.38(1H，br-s)，6.25(1H，br-s)，4.18(2H，t)，3.82(2H，q)，2.06(3H，s).
[实施例2]
将化合物A(400mg，1，63mmol)，2-苯氧基乙胺(638μl)和碳酸氢钠(1.37g)加入DMSO(12ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27hr。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-苯氧基乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈(66mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.84(1H，br-s)，9.48(1H，br-s)，7.27(2H，t)，6.95-6.90(3H，m)，6.79(1H，br-s)，6.31-6.15(2H，m)，4.12(2H，t)，3.75(2H，q)，2.19(3H，s)，2.04(3H，s).
m/z＝349(M+H)
[实施例3]
将化合物F(300mg，1.00mmol)，2-苯氧基乙基胺(261μl)和碳酸氢钠(837mg)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27hr。搅拌后，将反应系统加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。将有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-苯氧基乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-三氟甲基烟腈(80mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.04(1H，br-s)，10.23(1H，br-s)，7.38(1H，br-s)，7.27(2H，t)，6.98-6.91(3H，m)，6.52-6.35(2H，m)，4.15(2H，t)，3.80(2H，q)，2.06(3H，s).
[实施例4]
将化合物C(300mg，885μmol)，2-苯氧基乙胺(290μl)和碳酸氢钠(743mg)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27hr。
搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-苯氧基乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(4-甲氧基苯基)烟腈(87mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.87(1H，br-s)，9.63(1H，br-s)，7.45(2H，d)，7.26(2H，t)，7.06(2H，d)，6.98-6.91(3H，m)，6.88(1H，br-s)，6.41(1H，br-s)，6.25(1H，br-s)，4.17(2H，t)，3.82(5H，m)，2.05(3H，s).
[实施例5]
化合物A(300mg，1.22mmol)，2-(4-甲氧基苯氧基)乙胺盐酸盐(489mg)和碳酸氢钠(1.37g)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将反应混合物逐滴加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(4-甲氧基苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈盐酸盐(98mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：10.06(1H，br-s)，7.03(1H，br-s)，6.88-6.81(4H，m)，6.28(1H，s)，6.23(1H，s)，4.07(2H，t)，3.75(2H，q)，3.68(3H，s)，2.23(3H，s)，2.13(3H，s).
[实施例6]
将化合物D(150mg，483μmol)，2-苯氧基乙胺(127μl)和碳酸氢钠(400mg)加入DMSO(3ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将反应混合物逐滴加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。将有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-苯氧基乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(吡啶-3-基)烟腈(82mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.06(1H，br-s)，10.22(1H，br-s)，8.72-8.69(2H，m)，7.98(1H，dd)，7.65(1H，dd)，7.29-7.23(2H，m)，6.96-6.90(3H，m)，6.16(1H，br-s)，4.23(2H，t)，3.67(2H，t)，2.22(3H，s).
m/z＝412(M+H)
[实施例7]
将化合物A(400mg，1.63mmol)，2-(吡啶-2-基氧基)乙胺(674μl)和碳酸氢钠(1.37g)加入DMSO(12ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(吡啶-2-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈二盐酸盐(68mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：10.33(1H，br-s)，8.15(1H，d)，7.72(1H，dd)，7.21(1H，br-s)，6.98(1H，dd)，6.83(1H，d)，6.31(1H，s)，6.23(1H，s)，4.45(2H，t)，3.78(2H，t)，2.24(3H，s)，2.18(3H，s).
[实施例8]
将化合物A(400mg，1.63mmol)，2-(2-甲氧基苯氧基)乙胺盐酸盐(1.10g)和碳酸氢钠(1.37g)加入DMSO(12ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-(2-甲氧基苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈(89mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.83(1H，br-s)，10.06(1H，br-s)，6.98-6.82(4H，m)，6.72(1H，br-s)，6.25(1H，br-s)，6.19(1H，br-s)，4.11(2H，t)，3.76(5H，m)，2.19(3H，s)，2.05(3H，s).m/z＝379(M+H)
[实施例9]
将化合物A(1.53g，6.25mmol)，2-(3-氟苯氧基)乙胺盐酸盐(1.79g)和碳酸氢钠(5.25g)加入DMSO(30ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将反应混合物逐滴加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，并将所述残余物通过硅胶柱色谱法进行纯化。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(3-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈盐酸盐(308mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.90(1H，s)，7.28(1H，dd)，6.98(1H，br-s)，6.83-6.72(3H，m)，6.25(1H，s)，6.24(1H，s)，4.15(2H，t)，3.76(2H，t)，2.22(3H，s)，2.11(3H，s).m/z＝367(M+H)
[实施例10]
将化合物A(200mg，813μmol)，2-(4-氟苯氧基)乙胺盐酸盐(466mg)和碳酸氢钠(683mg)加入DMSO(6ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-(4-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈(38mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.84(1H，s)，9.47(1H，s)，7.09(1H，t)，6.98-6.94(2H，m)，6.78(1H，br-s)，6.32-6.10(2H，m)，4.10(2H，t)，3.74(2H，q)，2.19(3H，s)，2.06(3H，s).
[实施例11]
将化合物A(400mg，1.63mmol)，2-(吡啶-4-基氧基)乙胺(540μl)和碳酸氢钠(1.32g)加入DMSO(12ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-(吡啶-4-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈(23mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.85(1H，br-s)，9.48(1H，br-s)，8.36(2H，d)，6.97(2H，d)，6.84(1H，br-s)，6.26-6.45(2H，m)，4.22(2H，t)，3.76(2H，q)，2.19(3H，s)，2.05(3H，s).
[实施例12]
将化合物A(13g，53mmol)，2-(吡啶-3-基氧基)乙胺(11g，80mmol)和碳酸氢钠(45g)加入DMSO(130ml)，将所述混合物在130℃搅拌20小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并过滤不可溶性物质(20g)。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈二盐酸盐(15.5g)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.94(1H，br-s)，8.66(1H，d)，8.47(1H，d)，8.11(1H，dd)，7.88(1H，dd)，7.02(1H，br-s)，6.26(1H，s)，6.21(1H，s)，4.40(2H，t)，3.82(2H，br-s)，2.22(3H，s)，2.15(3H，s).
m/z＝350(M+H)
[实施例13]
将化合物A(300mg，1.22mmol)，2-(2-氟苯氧基)乙胺盐酸盐(700mg)和碳酸氢钠(1.02g)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(2-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈盐酸盐(126mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：10.10(1H，br-s)，7.22-7.10(2H，m)，7.08(1H，t)，7.06(1H，br-s)，6.92(1H，dd)，6.27(1H，s)，6.24(1H，s)，4.21(2H，t)，3.80(2H，t)，2.23(3H，s)，2.13(3H，s).
[实施例14]
将化合物E(400mg，1.72mmol)，2-苯氧基乙胺(674μl)和碳酸氢钠(1.44g)加入DMSO(12ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-苯氧基乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈(85mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.86(1H，s)，9.59(1H，br-s)，7.50(1H，d)，7.27(2H，t)，6.96-6.90(3H，m)，6.90(1H，br-s)，6.31(1H，br-s)，6.24(1H，br-s)，4.13(2H，t)，3.76(2H，q)，2.04(3H，s).
[实施例15]
将化合物E(400mg，1.72mmol)，2-(3-氟苯氧基)乙胺盐酸盐(984mg)和碳酸氢钠(1.44g)加入DMSO(12ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将反应混合物逐滴加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-(3-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈(123mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.87(1H，s)，9.59(1H，s)，7.50(1H，d)，7.27(1H，dd)，6.91(1H，br-s)，6.86-6.72(3H，m)，6.32(1H，br-s)，6.22(1H，br-s)，4.16(2H，t)，3.75(2H，q)，2.06(3H，s).
[实施例16]
将化合物A(300mg，1.22mmol)，2-(3-氯-4-氟苯氧基)乙胺盐酸盐(824mg)和碳酸氢钠(1.02g)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-(3-氯-4-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈(26mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.80(1H，br-s)，9.47(1H，br-s)，7.18(1H，dd)，7.30(1H，t)，6.96(1H，dd)，6.94(1H，br-s)，6.25(1H，br-s)，6.19(1H，br-s)，4.14(2H，t)，3.73(2H，q)，2.19(3H，s)，2.07(3H，s).
m/z＝401(M+H)
[实施例17]
将化合物E(400mg，1.72mmol)，2-(吡啶-3-基氧基)乙胺(711μl)和碳酸氢钠(1.44g)加入DMSO(12ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈(52mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.87(1H，s)，9.59(1H，s)，8.30(1H，d)，8.16(1H，d)，7.50(1H，d)，7.40(1H，dd)，7.30(1H，dd)，6.93(1H，br-s)，6.32(1H，br-s)，6.22(1H，br-s)，4.22(2H，t)3.77(2H，q)2.04(3H，s).
[实施例18]
将化合物D(202mg，650μmol)，2-(3-氟苯氧基)乙胺盐酸盐(357mg)和碳酸氢钠(540mg)加入DMSO(3ml)，将所述混合物在130℃搅拌24小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，并将所述残余物通过硅胶柱色谱法进行纯化(90mg)。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(3-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(吡啶-3-基)烟腈二盐酸盐(22mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：10.49(1H，br-s)，9.03(1H，s)，8.93(1H，d)，8.52(1H，d)，8.03(1H，dd)，7.50-7.20(3H，m)，6.90-6.60(3H，m)，6.45(1H，s)，6.34(1H，s)，4.18(2H，t)，3.81(2H，t-like)，2.11(3H，s).
[实施例19]
将化合物E(400mg，1.72mmol)，2-(2-氟苯氧基)乙胺盐酸盐(787mg)和碳酸氢钠(1.49g)加入DMSO(12ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(2-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈盐酸盐(51mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.96(1H，br-s)，7.57(1H，d)，7.22-7.14(2H，m)，7.12-7.00(2H，m)，6.96-6.90(1H，m)，6.30(1H，d)，6.27(1H，s)，4.21(2H，t)，3.79(2H，t)，2.10(3H，s).
[实施例20]
将化合物A(300mg，1.22mmol)，2-(3，5-二氟苯氧基)乙胺盐酸盐(767mg)和碳酸氢钠(1.02g)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物，有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(3，5-二氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈盐酸盐(56mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.94(1H，br-s)，6.98(1H，br-s)，6.79-6.70(3H，m)，6.24(2H，s)，4.18(2H，t)3.76(2H，t)，2.22(3H，s)，2.13(3H，s).
[实施例21]
将化合物A(300mg，1.22mmol)，2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙胺盐酸盐(549mg)和碳酸氢钠(1.02g)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈(88mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.85(1H，s)，9.47(1H，s)，8.15(1H，d)，7.29(1H，dd)，7.13(1H，d)，6.80(1H，br-s)，6.25(1H，br-s)，6.19(1H，br-s)，4.16(2H，t)，3.74(2H，q)，2.38(3H，s)，2.19(3H，s)，2.05(3H，s).m/z＝364(M+H)
[实施例22]
将化合物A(300mg，1.22mmol)，2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙胺盐酸盐(547mg)和碳酸氢钠(1.02g)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈二盐酸盐(87mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：10.01(1H，br-s)，8.30(1H，d)，8.15(1H，d)，7.79(1H，dd)，7.10(1H，br-s)，6.24(1H，s)，6.21(1H，s)，4.41(2H，t)，3.83(2H，br-s)，2.53(3H，s)，2.22(3H，s)，2.17(3H，s).
m/z＝364(M+H)
[实施例23]
将化合物A(300mg，1.22mmol)，2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙胺盐酸盐(584mg)和碳酸氢钠(1.02g)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将反应混合物逐滴加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈二盐酸盐(30mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.78(1H，br-s)，8.01(1H，d)，7.61(1H，d)，6.99(1H，br-s)，6.23(1H，br-s)，6.15(1H，s)，4.37(2H，t)，3.79(2H，br-s)，2.59(3H，s)，2.50(3H，s)，2.20(3H，s)，2.15(3H，s).
[实施例24]
将化合物A(200mg，813μmol)，2-(2-氯苯氧基)乙胺(280μl)和碳酸氢钠(683mg)加入DMSO(6ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(2-氯苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈盐酸盐(18mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.97(1H，br-s)，7.41(1H，d)，7.25(1H，t)，7.16(1H，d)，7.00(1H，br-s)，6.94(1H，t)，6.24(2H，br-s)，4.21(2H，t)，3.80(2H，br-s)，2.22(3H，s)，2.09(3H，s).
[实施例25]
将化合物E(200mg，858μmol)，2-(2-氯苯氧基)乙胺(295μl)和碳酸氢钠(721mg)加入DMSO(6ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(2-氯苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈盐酸盐(50mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：10.04(1H，br-s)，7.58(1H，d)，7.41(1H，d)，7.26(1H，t)，7.17(1H，d)，7.08(1H，br-s)，6.95(1H，t)，6.30(1H，d)，6.27(1H，br-s)，4.22(2H，t)，3.81(2H，br-s)，2.08(3H，s).
[实施例26]
将化合物C(200mg，589mmol)，2-(2-氯苯氧基)乙胺(202μl)和碳酸氢钠(495mg)加入DMSO(6ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(2-氯苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(4-甲氧基苯基)烟腈盐酸盐(12mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.74(1H，br-s)，7.44(2H，d)，7.43(1H，d)，7.27(1H，t)，7.19(1H，d)，7.07(2H，d)，6.95(1H，t)，6.90(1H，br-s)，6.41(1H，br-s)，6.24(1H，br-s)，4.25(2H，t)，3.85(3H，s)，3.84(2H，br-s)，2.07(3H，s).
[实施例27]
化合物E(300mg，1.29mmol)，2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙胺盐酸盐(577mg)和碳酸氢钠(1.08g)加入DMSO(10ml)，将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈二盐酸盐(79mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.92(1H，s)，8.52(1H，d)，8.11(1H，dd)，7.78(1H，d)，7.56(1H，d)，7.06(1H，br-s)，6.34(1H，d)，6.21(1H，s)，4.38(2H，t)，3.81(2H，br-s)，2.64(3H，s)，2.14(3H，s).
[实施例28]
将化合物E(300mg，1.29mmol)，2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙胺盐酸盐(577mg)和碳酸氢钠(1.08g)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物：2-(2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈二盐酸盐(34mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.96(1H，br-s)，8.28(1H，d)，8.14(1H，d)，7.79(1H，dd)，7.56(1H，d)，7.12(1H，br-s)，6.32(1H，d)，6.21(1H，s)，4.42(2H，t)，3.84(2H，br-s)，2.54(3H，s)，2.16(3H，s).
[实施例29]
将化合物E(250mg，1.07mmol)，2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙胺盐酸盐(512mg)和碳酸氢钠(901mg)加入DMSO(10ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应混合物加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤。将其转化为盐酸盐以得到目标化合物2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈二盐酸盐(20mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.78(1H，br-s)，8.12(1H，d)，8.00(1H，d)，7.63(1H，d)，7.10(1H，br-s)，6.29(1H，d)，6.14(1H，s)，4.43(2H，t)，3.93(2H，br-s)，2.61(3H，s)，2.53(3H，s)，2.23(3H，s).
[实施例30]
将化合物E(272mg，1.17mmol)，2-(4-三氟甲氧基苯氧基)乙胺盐酸盐(450mg)和碳酸氢钠(983mg)加入DMSO(8ml)，并将所述混合物在100℃搅拌达27小时。搅拌后，将所述反应系统加入冷水，并用乙酸乙酯提取所述混合物。有机层用饱和盐水进行洗涤，并浓缩，将所述残余物通过悬浮在乙酸乙酯中进行洗涤以得到目标化合物：2-(2-(4-(三氟甲氧基)苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈(38mg)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：9.87(1H，br-s)，7.55(1H，d)，7.26(1H，d)，7.05(1H，br-s)，7.04(2H，d)，6.30(1H，d)，6.25(1H，br-s)，4.17(2H，t)，3.77(2H，br-s)，2.06(3H，s).
各个实施例化合物1-30的结构式显示在下面的表中。
表7
表8
以相同的方式合成下面所述的化合物。
实施例31：2-((2-((2-((二甲基氨基)甲基)吡啶-3-基)氧基)乙基)氨基)-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例32：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例33：2-(2-(6-(4-乙酰基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例34：6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例35：6-(5-异丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例36：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例37：4-乙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例38：4-乙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例39：2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-4-乙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例40：2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-异丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈
实施例41：2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(3-吗啉-4-基丙基)烟腈
实施例42：2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈
实施例43：6-(-5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例44：6-(-5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)-5-甲基-2-(2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例45：4-甲基-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例46：4-环丙基-2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例47：2-(2-(2-乙基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-4-甲基-6-(5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例48：2-(2-(2-乙基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例49：4-甲基-2-(2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-(甲硫基)-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例50：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-((吡啶-3-基氧基)丙基氨基)烟腈
实施例51：6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例52：4-环丙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例53：6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例54：1-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-3-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6，7-二氢5H-环戊[c]吡啶-4-腈
实施例55：4-甲基2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-(甲硫基)-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例56：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(1-甲基-2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例57：5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例58：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-((2-苯氧基乙基)氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例59：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-((2-甲基-1-((吡啶-3-基氧基)甲基)丙基)氨基)烟腈
实施例60：2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-(甲硫基)-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例61：6-(5-乙氧基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例62：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(嘧啶--基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例63：N-(3-(2-((3-氰基-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)氨基)乙氧基)吡啶-2-基)乙酰胺
实施例64：2-(2-(2-氨基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例65：6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例66：6’-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2’-((2-苯氧基乙基)硫代)-3，4’-联吡啶-3’-腈
实施例67：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(3-噻吩基氧基)乙硫基)烟腈
实施例68：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(噻吩基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例69：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙硫基)烟腈
实施例70：N-(3-(2-((3-氰基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)氨基)乙氧基)吡啶-2-基)环丙烷羧酰胺
实施例71：N-(3-(2-(3-氰基-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)氨基乙氧基)吡啶-2-基)苯甲酰胺
实施例72：叔丁基4-(3-氰基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-((2-苯氧基乙基)硫代)吡啶-4-基)哌啶-1-羧酸酯
实施例73：N-(3-(2-((3-氰基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)氨基)乙氧基)吡啶-2-基)乙酰胺
实施例74：N-(3-(2-((3-氰基-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)氨基)乙氧基)吡啶-2-基)环丙烷羧酰胺
实施例75：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-((2-苯氧基乙基)硫代)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例76：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-((3-氧代-2，3-二氢-1H-异吲哚-5-基)基)乙基氨基)烟腈
实施例77：6-(4，6-二氢-1H-噻吩并[3，4，c]吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-((2-((2-甲基吡啶-3-基)氧基)乙基)氨基)烟腈
实施例78：6-(5-(二甲基氨基)-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-((2-(6-甲基吡啶-3-基)氧基乙基)氨基)烟腈
实施例79：4-(1-乙酰基哌啶-4-基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例80：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙硫基)烟腈
实施例81：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(嘧啶--基氧基)乙硫基)烟腈
实施例82：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙硫基)烟腈
实施例83：6-(5-羟基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例84：6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-4-甲基烟腈
实施例85：6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例86：5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例87：2-(2-(6-乙基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例88：2-(2-(3-氰基苯氧基)乙基氨基)-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例89：2-(2-(3-硝基苯氧基)乙基氨基)-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例90：2-(2-(6-溴吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例91：2-(2-(2-甲氧基苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例92：2-((1S)-1-甲基-2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例93：4-甲基-2-((1S)-1-甲基-2-((6-甲基吡啶-3-基)氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例94：2-((1S)-1-甲基-2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例95：2-(2-(2-氨基吡啶-3-基氧基乙基)氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例96：2-(1-甲基-2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例97：2-(2-(2-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例98：2-(2-(2，6-二甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例99：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)--4-哌啶-4-基烟腈
实施例100：3-((5-氰基-4-甲基-6-(2-(2--甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)吡啶-2-基)氨基-正丙基-1H-吡唑e-5-羧酰胺
实施例101：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(6-吗啉-4-基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-烟腈
实施例102：4-甲基-2-(2-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例103：2-(2-(3-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例104：2-(2-(4-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例105：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(3-吗啉-4-基苯氧基)乙基氨基)烟腈
实施例106：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(3-吗啉-4-基苯氧基)乙基氨基)烟腈
实施例107：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(4-吗啉-4-基苯氧基)乙基氨基)烟腈
实施例108：2-(2-(2-氟苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例109：2-(2-(2-甲基苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例110：2-(2-(4-(二甲基氨基)苯氧基)乙基氨基)-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例111：2-(2-(4-(二甲基氨基)苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例112：2-(2-(4-甲基苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例113：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氧基)乙基氨基)-烟腈
实施例114：4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氧基)乙基氨基)烟腈
实施例115：4-(1-(正甲基甘氨酰基)哌啶-4-基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-((2-苯氧基乙基)氨基)烟腈
实施例116：4-(1-(N，N-二甲基-β-丙氨酰基)哌啶-4-基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-苯氧基乙基氨基)烟腈
实施例117：2-2-(3-氰基苯氧基)乙基氨基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基烟腈
实施例118：乙基3-(2-((3-氰基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基吡啶-2-基)氨基)乙氧基)苯甲酸酯
实施例119：甲基4-(2-(3-氰基-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)氨基)乙氧基)苯甲酸酯
实施例120：4-(2-(3-氰基-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)氨基乙氧基)苯甲酸
实施例121：4-(1-(氮杂环丁烷-3-基羰基)哌啶-4-基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-苯氧基乙基氨基)烟腈
实施例122：4-(1-(2-羟基乙基)哌啶-4-基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-苯氧基乙基氨基)烟腈
实施例123：4-(2-(3-氰基-4-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)氨基乙氧基)-N，N-二甲基苯甲酰胺
实施例124：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-哌啶-4-基-2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例125：4-(1-(N，N-二甲基-β-丙氨酰)哌啶-4-基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例126：4-(1-(正甲基甘氨酰)哌啶-4-基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例127：6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-4-(2-噻吩基)烟腈
实施例128：6-(5-(羟基甲基)-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基-2-(2-(6-甲基吡啶-3-基氧基)乙基氨基)烟腈
实施例129：4-甲基-2-(2-(6-甲基-1-氧基-吡啶-3-基氧基)乙基氨基)-6-(5-(羟基甲基)-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈
实施例化合物的结构式和分析数据显示在下面。
【表9】
【表10】
【表11】
【表12】
【表13】
【表14】
【表15】
【表16】
【表17】
【表18】
【表19】
【表20】
【表21】
【表22】
药理学实验实施例1：极光2激酶活性抑制作用
(1)极光2激酶的制备
从HeLa细胞(ATCC No.CCL-2)中通过常规方法提取总的RNA，并通过逆转录酶反应合成cDNA。使用cDNA作为模板，进行PCR反应。进行PCR反应的引物序列是SEQ ID NO：1(5’-GGA ATT CCA TAT GGA CCGATC TAA AGA AAA CTG-3’)和SEQ ID NO：2(5’-GGG GGG CTC GAGAGA CTG TTT GCT AGC TGA TTC-3’)。
通过PCR反应获得的序列与在前面引用的文献(The EMBO Journal卷17 No.11 p3052-3065 1998)中报道的编码极光2激酶的基因的序列相同。
将编码极光2激酶的扩增基因引入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET32a(由Novagen生产)中以得到重组子。可以按照Sambrook等，“MoleculeCloning-Experiment Manual，second ed.(1989 Cold Spring HarborLaboratory press)”，和Ausubel等，“Current Protocols in Molecular Biology，(1999 John Wiley和Sons Inc.)”获得所述重组子。
随后，将所述重组子引入蛋白质过表达大肠杆菌BL21R菌株(Novagen)以得到用于过表达极光2激酶的大肠杆菌菌株。
在包含氨苄青霉素(50ug/ml)的LB培养基中培养过表达极光2激酶的大肠杆菌菌株。在37℃摇动培养1小时后，诱导极光2激酶的表达，将培养温度设定在25℃，加入IPTG(SIGMA)到最终浓度为0.1mM，并在25℃进行摇动培养24小时。随后，培养基在7000rpm离心10分钟并收集菌体。
将收集的菌体悬浮在36ml的裂解缓冲液[50mM Tris pH 6.8，150mMNaCl，20mM β-甘油磷酸，0.3mM Na3V04，50mM NaF，2mM PMSF(苯基甲基磺酰氟)，1片蛋白酶抑制剂混合物(Boehringer Mannheim)]中并通过超声波进行破裂。此外，为了离解在蛋白质之间的非特异性结合，加入4ml的10％NP-40(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.)。
接着，将在缓冲液中的重组极光2激酶吸收在Ni-NTA琼脂糖珠(QIAGEN)上，并且将携带重组极光2激酶的珠用50ml的K缓冲液(1MKCl/1xTNT)，G缓冲液(30％甘油，0.5M KCl/1xTNT)洗涤以得到极光2激酶。
(2)极光2激酶测定
将包含所述化合物的酶反应缓冲液(200mM Tris-HCl(pH 7.0)，100mM MgCl2)(1.5μl)，50mM二硫苏糖醇(1.5μl)，1mM肽底物[LRRASLG](1.5μl)，水(2.5μl)和DMSO溶液(1.5μl)加入每个孔中。
将用酶稀释缓冲液[50mM Tris-HCl(pH6.8)，200mM NaCl，50％甘油，1mg/ml BSA]稀释的极光2激酶(1mg/ml)(1.5μl)加入除“空白”孔之外的所有的孔中。将不含极光2激酶的酶稀释缓冲液(1.5μl)加入所述“空白”孔。向“全体(total)”孔中加入不包含化合物的DMSO溶液(1.5μl)。
接着，将包含1.2μCi[(γ-32P)ATP(Muromachi Yakuhin，比活度＞3500Ci/mmol)]的28μM ATP溶液(5ul)加入所有的测试孔中，随后在室温温育60分钟。将反应混合物(5μl)点在磷酸纤维素(Wattman，p81)滤器上从而容许将磷酸化的32P-标记的肽吸附在滤器上。将滤器用0.75％磷酸溶液洗涤4次，去除未反应的产物并使用BAS5000(FUJI FILM)计数反应的32P。
将“空白”(不含酶)的计数设置为0％，将“全体”(不含化合物)的计数设置为100％。使用这些对照值，测定酶抑制活性的Ki值。
(3)评价结果
按照上述提及的(2)极光2激酶测定法的操作步骤评估化合物。结果，证实本发明的式(I)的化合物抑制了极光2激酶活性。
所述结果揭示了本发明的实施例的化合物显示了强烈的极光2激酶活性抑制作用。
【表23】
药理学实验实施例2：极光1激酶活性抑制作用
(1)极光1激酶测定
将包含所述化合物的酶反应缓冲液(200mM Tris-HCl(pH7.0)，100mM MgCl2)(1.5μl)，50mM二硫苏糖醇(5μl)，1mM肽底物[LRRWSLG](1.5μl)，水(4.83μl)和DMSO溶液(1.5μl)加入每个孔中。
将0.6mg/ml酶溶液(UPSTATE)(0.17μl)加入除“空白”孔之外的所有的孔中。将不含极光2激酶的水(0.17μl)加入所述“空白”孔。向“全体”孔中加入不包含化合物的DMSO溶液(1.5μl)。
接着，将包含1.2μCi[(γ-32P)ATP(Muromachi Yakuhin，比活度＞3500Ci/mmol)]的24μM ATP溶液(5ul)加入所有的测试孔中，随后在室温温育60分钟。将反应混合物(5μl)点在磷酸纤维素(Wattman，p81)滤器上从而容许将磷酸化的32P-标记的肽吸附在滤器上。将滤器用0.75％磷酸溶液洗涤4次，去除未反应的产物并使用BAS5000(FUJI FILM)计数反应的32P。
将“空白”(不含酶)的计数设置为0％，将“全体”(不含化合物)的计数设置为100％。使用这些对照值，测定酶抑制活性的Ki值。
(3)评价结果
按照上述提及的(1)极光1激酶测定法的操作步骤评估化合物。结果，证实本发明的式(I)的化合物抑制了极光1激酶活性。
下列化合物显示0.1μM或更低的Ki。实施例2，实施例12，实施例13，实施例21，实施例25，实施例27，实施例28，实施例34，实施例35.
药理学实验实施例3：微管蛋白聚合抑制作用
(1)微管蛋白聚合测定
将微管蛋白聚合反应混合物(50μL)(80mM Pipes pH＝6.9，0.5mMMgCl2，1mM EGTA，1mM GTP，3.3mg/ml猪脑微管蛋白：细胞骨架，10μM化合物)在96孔平底板中在冰冷下进行制备。将其置于平板阅读器(IWAKI小平板阅读器，EZS-ABS)中，温度控制在37℃，由此，起始温度依赖型微管蛋白聚合反应。因为当微管蛋白聚合进行时，反应混合物的浊度增加，因此每隔一分钟测量在405nm的吸光度进行30分钟以监测聚合反应。在30分钟的测量中，取三次浊度的每分钟的最大差异(一般是在反应起始后立即出现的那些)，计算三次值的平均值，将其作为最大聚合速率。抑制百分比(％)＝(C-T)/C×100，其中T是包含所述化合物的反应混合物的最大聚合速率，且C是不包含所述化合物的反应混合物的最大聚合速率。
(2)评价结果
按照上述操作方法评价化合物，结果证实了本发明的式(I)的化合物具有被抑制的微管蛋白聚合。与前面对极光激酶抑制活性的评价结果结合，阐明了本发明的实施例的化合物显示对极光激酶和微管蛋白聚合的双重抑制活性。
【表24】
药理学实验实施例4：癌细胞生长抑制作用
使用包含10％胎牛血清的RPMI1640培养基(由SIGMA生产)，将人前列腺癌细胞系PC-3，人胰腺癌细胞系PK-8，和人乳腺癌细胞系MDA-MB-453在37℃在5％CO2下进行培养。使用包含10％胎牛血清的的DMEM/F-12培养基(由SIGMA生产)，将人结肠癌细胞系HCT-116，人结肠癌细胞系SW620，人卵巢癌细胞系SKOV-3，人前列腺癌细胞系DU-145和人胰腺癌细胞系PANC-1在37℃在5％CO2下进行培养。将这些细胞接种在96孔板中，并培养一天。向其中加入用培养基稀释的化合物直到终浓度为0.00064-20μM(最终DMSO浓度，0.4％)。在进一步培养3天后，将WST-8(0.16mg/mL)加入培养基并将所述培养基培养2小时。从在450nm的吸光度中减去在650nm的吸光度。通过化合物加入组的吸光度相对于无化合物加入组的吸光度的减少率来表示生长抑制活性，并且从剂量-反应曲线测定IC50值，所述剂量反应曲线是对通过改变化合物的浓度获得的吸光度的减少率与化合物的浓度作图所获得的。将所述值显示在表中。
本发明的实施例12，21，22和23显示在较宽范围内的良好的癌细胞生长抑制作用。
【表25】
细胞增值抑制活性值IC50[nM]
(在表中＜6.4显示IC50值少于6.4nM)
工业应用性
根据本发明，可以提供包含这样的物质作为活性成分的用于癌症的治疗药物，所述物质选自由下列各项组成的组：新的氰基吡啶衍生物，药用盐，水合物，水加合物和溶剂合物。
本申请基于在日本提交的专利申请号2005-131498，将其全部内容并入本文作为参考。
Claims (6)
1.一种由式(I)表示的氰基吡啶衍生物，或其药用盐，
其中R1，R1’，R3，R3’和R5每个是氢原子或C1-6烷基，
R2是氢原子，羟基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，羟基-C1-6烷基或C1-6烷硫基，
R2’是氢原子或C1-6烷基，
Y是N-RA，
RA是氢原子或C1-6烷基，
A是苯基或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基任选地被取代基取代，所述取代基选自卤素原子、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、羟基、C1-6烷氧基和C1-6烷硫基，
Rx是-T-R4，
T是价键或C1-4亚烷基链，且
R4是-R，卤素原子，-OR或-NR2，其中R是氢原子，C1-6烷基，苯基，或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基任选地被取代基取代，所述取代基选自卤素原子、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、羟基、C1-6烷氧基和C1-6烷硫基，所述杂芳基是5-或6元杂芳基，其除了碳原子之外，包含一种或两种选自氮原子，硫原子和氧原子的1-4个杂原子。
2.权利要求1的氰基吡啶衍生物或其药用盐，其中，在上述提及的式(I)中，R1，R1’，R3，R3’和R5每个是氢原子，R2是C1-6烷基，R2’是氢原子，A是任选地被选自卤素原子和C1-6烷基的取代基取代的苯基，或任选地被选自卤素原子和C1-6烷基的取代基取代的吡啶基，并且Rx是氢原子或C1-6烷基。
3.一种癌症的预防和/或治疗剂，其包含权利要求1或2的氰基吡啶衍生物，或其药用盐。
4.由下列式(III)表示的氰基吡啶衍生物，
其中L是卤素原子，且R2，R2’，R5和RX如权利要求1中定义。
5.氰基吡啶衍生物，其选自由下列化合物组成的组：
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-苯基烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(4-甲氧基苯基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(吡啶-3-基)烟腈，
6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-氯烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(三氟甲基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4，4’-联吡啶-3-腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(3，4，5-三甲氧基苯基)烟腈，
2-氯-4-(3-甲氧基苯基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-4-(2-甲氧基苯基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(2-噻吩基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(3-甲基-2-噻吩基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-(5-甲基-2-噻吩基)烟腈，
2-氯-4-(4-异丙氧基苯基)-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈，
2-氯-6-(5-异丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈，
2-氯-4-乙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈，
2-氯-5-甲基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-4-环丙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-4-甲基-6-(5-(甲硫基)-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-乙氧基-1H-吡唑-3-基氨基)-4-甲基烟腈，
2-氯-4-(4-异丁基苯基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-4-异丙基-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，
2-氯-6-(5-甲硫基-1H-吡唑-3-基氨基)烟腈，和
2-氯-4-甲基-6-(1H-吡唑-3-基氨基)烟腈。
6.一种极光激酶和/或微管蛋白聚合的抑制剂，其包含权利要求1或2的氰基吡啶衍生物、或其药用盐作为活性成分。
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Granted publication date: 20130417 Termination date: 20170428 |