CN101161644B - 一种邻羟硝唑化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种邻羟硝唑化合物，其化学名称为：3-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-羟基)-1，2-丙二醇。该邻羟硝唑化合物的抗菌、抗寄生虫作用与奥硝唑疗效相当，且毒性更小、临床使用更安全；此外，该邻羟硝唑化合物还具有良好的溶解性，在常温、中性条件下水溶性好，尤其方便注射剂等剂型药物的配制，有利于质量控制，并且在临床应用时可使人体具有更好的舒适感等。本发明还公开了上述邻羟硝唑化合物的制备方法和应用。

Description

一种邻羟硝唑化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药制剂及应用技术领域，特别涉及一种硝唑类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

硝唑类化合物主要是指甲硝唑、替硝唑、塞克硝唑、奥硝唑等硝基咪唑类化合物及其衍生物等。该类化合物通常具有良好的抗厌氧菌和抗寄生虫等作用，是良好的杀菌剂。其抗厌氧菌谱广，对脆弱拟杆菌、真杆菌、产气荚膜梭菌高度敏感，对无芽胞革兰阳性杆菌敏感性较差。对于寄生虫如毛滴虫、阿米巴虫以及贾第氏鞭毛虫等具有很好的杀灭作用。

奥硝唑是一种继甲硝唑、替硝唑之后研制成功的第三代新型硝基咪唑类衍生物，具有良好的抗厌氧菌和抗滴虫作用；相对于甲硝唑、替硝唑等，其不良反应较少。但是在临床服药期间仍会表现出轻度胃部不适、口中异味、胃痛、头痛及困倦，极为罕见还会出现眩晕、颤抖、四肢麻木、痉挛、皮疹和精神错乱等症状。而且奥硝唑化合物的水溶性也较差，对药物的溶解、吸收等也有一定影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种不仅药效好，而且水溶性好、毒性小的邻羟硝唑化合物。

本发明的另一个目的是提供一种上述邻羟硝唑化合物的制备方法。

本发明的又一个目的是提供上述邻羟硝唑化合物在制备抗厌氧菌和抗寄生虫的药物中的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种邻羟硝唑化合物，具有下述通式I表示的结构式：

通式I；

其化学名称为：3-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-羟基)-1，2-丙二醇。

上述邻羟硝唑化合物可通过下述方法制备：

在醇类溶剂中加入1-(3-氯-2-羟基丙基)-2-甲基-5硝基咪唑(即具有下述通式II的奥硝唑化合物)，再加入质量百分比浓度为5～50％的碱溶液，室温搅拌反应30h～60h；反应完毕，蒸出溶剂和水；再用乙酸乙酯或甲酸甲酯萃取，浓缩萃取液，结晶，过滤，将沉淀烘干得到类白色固体，即为本发明所述的邻羟硝唑化合物。

通式II

其中的醇类溶剂可优选自甲醇、乙醇、丙醇。

碱溶液可优选自为氢氧化钠溶液、碳酸氢钠溶液、氨水、三乙胺、二乙胺。

上述邻羟硝唑化合物在制备抗厌氧菌和抗寄生虫的药物中的应用，所述的药物中，含有至少2个治疗有效量的上述邻羟硝唑；各治疗有效量可以为2mg～40mg/kg体重。

上述邻羟硝唑化合物在制备抗厌氧菌和抗寄生虫的药物中的应用，所述的药物中，含有2～50个治疗有效量的上述邻羟硝唑。

上述邻羟硝唑化合物在制备抗厌氧菌和抗寄生虫的药物中的应用，可以将药物制成药剂学上可能的各种口服或非口服制剂。在制备过程中可根据各剂型的需要加入适当的药用辅料。如口服制剂包括片剂(分散片、口腔崩解片等)、胶囊、颗粒剂等，可选择加入适当药用辅料如羟丙基纤维素、微晶纤维素、预胶化淀粉、羟丙甲基纤维素、淀粉钠、二氧化硅、硬脂酸钠、滑石粉、淀粉、乳糖、氢氧化铝、聚乙烯吡咯烷酮等，经搅拌、混合、制粒等各剂型的常用制备方法，即可制得各种口服制剂。此外，加入适当辅料，根据相应剂型的常用制备方法也可制成注射剂、栓剂等非口服制剂。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明邻羟硝唑化合物用于抗厌氧菌和抗寄生虫治疗，主要具有下述优点：

(1)、抗菌、抗寄生虫作用与现有技术中的奥硝唑疗效相当。

(2)、急性毒性试验表明其毒性更小，临床使用更为安全。

(3)、本发明邻羟硝唑化合物具有良好的溶解性，在常温、中性条件下水溶性好，尤其方便注射剂等剂型药物的配制，有利于质量控制，并且在临床应用时可使人体具有更好的舒适感等。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。

但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。

实施例1

本实施例为通过下述方法制备2-甲基-5-硝基咪唑-1-(2，3-二羟基丙基)：

在100ml甲醇中加入1-(3-氯-2-羟基丙基)-2-甲基-5硝基咪唑即奥硝唑化合物10g，加入质量百分比浓度为10％的氢氧化钠溶液30ml，室温搅拌反应约40h；反应完毕，蒸出溶剂和水；再用乙酸乙酯萃取，浓缩乙酸乙酯萃取液，结晶，过滤，烘干得到类白色固体8.3g，即得。

实施例2

本实施例为通过下述方法制备2-甲基-5-硝基咪唑-1-(2，3-二羟基丙基)：

在100ml丙醇中加入1-(3-氯-2-羟基丙基)-2-甲基-5硝基咪唑即奥硝唑化合物10g，加入质量百分比浓度为50％的碳酸氢钠溶液30ml，室温搅拌反应约48h；反应完毕，蒸出溶剂和水；再用甲酸甲酯萃取，浓缩甲酸甲酯萃取液，结晶，过滤，烘干得到类白色固体8.8g，即得。

实施例3

本实施例为邻羟硝唑注射液的制备：

取注射用水适量，加入由实施例1制得的邻羟硝唑250g，搅拌溶解，再加0.1M盐酸调节PH至中性(PH5～6)，加注射用水至1000ml，搅匀，滤过，分装于中性玻璃容器中，用流通蒸汽100℃灭菌45分钟；分别分装为体积20ml/瓶、50ml/瓶、100ml/瓶的药用玻璃瓶中，即得不同规格的邻羟硝唑注射液。

实施例4

本实施例为注射用邻羟硝唑的制备：

在无菌操作室内称取由实施例1制得的邻羟硝唑250g，甘露醇10g，置于适当无菌容器中，加无菌注射用水适量，搅拌溶解，加无菌注射用水至1000ml，搅匀，滤过，滤液检查合格后，分装于5ml安瓿中，低温冷冻干燥约48小时，即得各种规格的注射用邻羟硝唑。

实施例5

本实施例为邻羟硝唑胶囊的制备：

取实施例2制得的邻羟硝唑250g、药用淀粉120g、滑石粉20g；将邻羟硝唑和淀粉研细混匀，过80目筛；加入滑石粉混匀；装入1号胶囊，即得邻羟硝唑胶囊。

实施例6

本实施例为邻羟硝唑片剂的制备：

取实施例2制得的邻羟硝唑250g、微晶纤维素120g、3％羟丙基纤维素70ml、羧甲淀粉钠16g、硬脂酸镁3g；将邻羟硝唑、微晶纤维素混匀，加入3％羟丙基纤维素，混合制粒，干燥、过筛，加入羧甲淀粉钠和硬脂酸镁，压片，制得1000片邻羟硝唑片。

实施例7

本实施例为邻羟硝唑阴道栓的制备：

取实施例2制得的邻羟硝唑250g、基质S-40 500g；将基质S-40在水浴上熔化，邻羟硝唑研细，加入上述熔化的基质中研磨均匀，保温灌模，制得1000枚邻羟硝唑栓剂。

实施例8

本实施例为体外邻羟硝唑抗厌氧菌试验：

发明人采用美国国立实验室标准化委员会(National Committee forClinical Laboratory Standards，NCCLS，现更名为临床和实验室标准协会：Clinical and laboratory Standards Institute，CLSI)推荐的厌氧菌药物敏感试验(Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobes)琼脂稀释法(Agar Dilution Method)测定实验药物的抗菌活性，用最小抑菌浓度(minimuminhibitory concentration，MIC)表示。

实验细菌选用27株临床常见厌氧菌实验菌株，包括11株厌氧病原菌模式株及参考株，15株近期临床分离的厌氧病原菌和质控菌株1株，根据上述NCCLS规定的条件和方法配制成实验菌液。分别定量称取实验药(邻羟硝唑：按照上述实施例1方法制备，批号20070906)和对照药(奥硝唑：湖南九典制药有限公司生产，批号070802)各25.6mg，加入无菌D.H2O，配制药物贮存液，使终浓度为2560ug/ml，置4℃保存。选用BHI-S琼脂(英国OXID)作为实验琼脂培养基。分别取药物浓度呈对倍递减的系列药物实验溶液放入90mm的无菌平皿中，然后倾注温度为45～55℃的BHA-S琼脂，混匀并冷却后使用。含药琼脂平皿的药物浓度分别为：256μg/ml、128g/ml、64μg/ml、32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、0.25μg/ml、0.125μg/ml、0.0625μg/ml、0.031μg/ml。用多点接种仪分别取细菌浓度为1.5×10⁸cell/ml的实验菌液，点种于不同浓度的系列含药琼脂平皿表面，每种菌的点种量为5ul，然后放置于37℃厌氧培养箱内(80％N₂+10％CO₂+10％H₂)，培养48h后读取MIC结果。

具体试验结果见表1、表2。

表1对11株模式株(或参考菌株)和质控菌株的MIC(μg/ml)

实验菌	邻羟硝唑	奥硝唑
			脆弱拟杆菌VPI393TMP4500多形拟杆菌CDC1041-A※※牙龈卟啉单胞菌ATCC33277※※不解糖卟啉单胞菌ATCC9337※※中间普雷沃菌ATCC25261※※变黑普雷沃菌ATCC33563※※产黑色素普雷沃菌ATCC13040具核梭杆菌ATCC10953衣氏放线菌ATCC12102内氏放线菌ATCC12104脆弱拟杆菌ATCC25285※	110.60.050.1250.1250.50.20.564641	0.510.50.0620.1250.1250.0620.250.564640.5

表2对15株临床分离菌株和质控菌株的MIC(μg/ml)

实验菌	邻羟硝唑	奥硝唑
			脆弱拟杆菌V3-1V2-2V1-1V28-4V28-114470※※牙龈卟啉单胞菌P39-2-2P2-2-1Y8P3-1※※中间普雷沃菌Pi 8-3-1Pi 18-2-2※※变黑普雷沃菌WCD-1※※产黑色素普雷沃菌P41-3-3具核梭杆菌Pr16-4※脆弱拟杆菌ATCC25285	0.50.4240.25410.250.03140.410.0620.510.251	0.50.540.2540.50.250.03140.510.0620.510.1250.5

试验结果表明，邻羟硝唑和奥硝唑对革兰阴性无芽胞厌氧菌均有较强的抗菌活性，邻羟硝唑的抗菌作用与奥硝唑相似。

实施例9

本实施例为体外抗毛滴虫试验：

阴道毛滴虫5株，由临床滴虫性阴道炎患者的阴道分秘物中分离获得，经鉴定后，选用肝浸出液培养基浓集虫体使每管毛滴虫数量为3-6万个/ml。分别取实验药(邻羟硝唑：按照上述实施例1方法制备，批号20070906)和对照药(奥硝唑：湖南九典制药有限公司生产，批号070802)，用培养基溶解稀释成0.8g/ml、1.0g/ml、1.2g/ml和1.4g/ml四种浓度后加入培养管，每管5ml。每株毛滴虫分别加入上述4种浓度的培养管中，每种浓度2管，另设2管空白对照。培养管经48h培养.用滴管由培养管底部吸取培养液滴于载玻片上镜检，发现虫体者判断为阳性，并作相对定量计数，在每个高倍镜视野内虫体数多于100个用“++++”表示，51-100个用“+++”表示，21-50个用“++”表示，1-20个用“+”表示；未发现虫体者，将培养物作不加药物的正常传代，培养48h，再观察仍未发现虫体者判断为阴性，用“-”表示。

试验结果如表3所示。

表3体外抗阴道毛滴虫活性试验

化合物	阴道毛滴虫MIC(μg/ml)
		奥硝唑	1.2

化合物	阴道毛滴虫MIC(μg/ml)
		邻羟硝唑	1.0

本试验结果显示，奥硝唑在浓度为1.2μg/ml时，邻羟硝唑在浓度为1.0μg/ml时，对虫体有较明显的抑制作用，虫体运动变慢，虫数减少，部分虫体内含大量颗粒、变圆(正常虫体多呈梨型)，或结构模糊，不活动。结果证实邻羟硝唑体外抗毛滴虫作用较强，与奥硝唑相当。

实施例10

本实施例为邻羟硝唑注射液急性毒性试验研究

试验动物为60只昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g(由成都中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(川)-11号)。

配液方法：

奥硝唑配液方法：称取1g奥硝唑原料药(湖南九典制药有限公司生产，批号070802)，加2ml生理盐水后加入事先稀释成20％的盐酸溶液约0.8ml，振摇，即成黄色澄清溶液，定容至5ml(PH约为3～5)。

邻羟硝唑配液方法：称取1g邻羟硝唑(按照上述实施例1方法制备，批号20070906)加2ml生理盐水后，振摇，即成淡黄色溶液，定容至5ml(PH约为7)。均采用沸水浴30min灭菌。

具体试验方法：

每只小鼠均按10ml/kg的给药体积给药。邻羟硝唑注射液组按0.91的剂量组间比例设置4个组，分别按6000mg/kg、5440mg/kg、4950mg/kg、4500mg/kg的剂量尾静脉给药；奥硝唑注射液按0.83的剂量组间比例设置5个组，分别按1200mg/kg、1131.7mg/kg、1067.5mg/kg、1007.1mg/kg、950mg/kg的剂量尾静脉给药。观察小鼠尾静脉注射邻羟硝唑液、奥硝唑后14天内出现的中毒症状，死亡时间、体重变化、进食情况等。对死亡小鼠立即解剖，肉眼观察记录主要损伤的器官及病理变化情况，用Bliss法计算LD₅₀值.用Bliss法计算LD₅₀值，结果见表4：

表4两种注射液急性毒性试验LD₅₀比较

药物	动物数(只/组)	LD<sub>50</sub>
			邻羟硝唑	30	5104.63mg/kg
奥硝唑	30	1072.55mg/kg

试验结果表明：根据药物的LD₅₀可以判断药物的急性毒性，值越大说明毒性越低。邻羟硝唑毒性明显低于奥硝唑。

实施例11

本实施例为邻羟硝唑的溶解性观察：

按照上述实施例3实验准备阶段的配液方法操作，观察邻羟硝唑和奥硝唑的溶解情况：

邻羟硝唑能很好的溶于生理盐水之中，说明其水溶性较好。

而奥硝唑在加热时才能部分溶于生理盐水中，温度降低时就析出乳白色晶体；需要先加生理盐水再滴加盐酸后奥硝唑才能完全溶解。

奥硝唑溶液按下述方法配制可较好溶解：称取1g药粉，加2ml生理盐水后加入事先稀释成20％的盐酸溶液约0.8ml，振摇，既成黄色澄清溶液，定容至5ml(PH值约3～5)。

结果表明，邻羟硝唑比奥硝唑具有更好的溶解性；它能在PH值接近7的中性条件以及常温下很好的溶解，而奥硝唑的溶解条件需要偏酸性，PH值约3～5才能较好溶解，且溶解温度偏高。因此，尤其在制备注射剂时，邻羟硝唑比奥硝唑具有明显的优势。

Claims (3)

1.一种邻羟硝唑化合物的制备方法，该邻羟硝唑化合物具有下述通式I表示的结构式：

通式I

其特征在于：

在醇类溶剂中加入1-(3-氯-2-羟基丙基)-2-甲基-5硝基咪唑，再加入质量百分比浓度为5～50％的碱溶液，室温搅拌反应30h～60h；反应完毕，蒸出溶剂和水；再用乙酸乙酯或甲酸甲酯萃取，浓缩萃取液，结晶，过滤，将沉淀烘干得到类白色固体，即为邻羟硝唑化合物。

2.根据权利要求1所述的邻羟硝唑化合物的制备方法，其特征在于：所述的醇类溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇。

3.根据权利要求1或2所述的邻羟硝唑化合物的制备方法，其特征在于：所述的碱溶液选自氢氧化钠溶液、碳酸氢钠溶液、氨水。