CN101160144A - 具有层粘连蛋白涂层的可植入的医学制品和使用方法 - Google Patents

具有层粘连蛋白涂层的可植入的医学制品和使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101160144A
CN101160144A CNA2006800124440A CN200680012444A CN101160144A CN 101160144 A CN101160144 A CN 101160144A CN A2006800124440 A CNA2006800124440 A CN A2006800124440A CN 200680012444 A CN200680012444 A CN 200680012444A CN 101160144 A CN101160144 A CN 101160144A
Authority
CN
China
Prior art keywords
medical articles
implantable medical
coating
laminin
kallinin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2006800124440A
Other languages
English (en)
Inventor
S·K·威廉姆斯
D·E·巴布科克
J·A·钦恩
D·L·克拉珀
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Surmodics Inc
Original Assignee
Surmodics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Surmodics Inc filed Critical Surmodics Inc
Publication of CN101160144A publication Critical patent/CN101160144A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/28—Materials for coating prostheses
    • A61L27/34—Macromolecular materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L29/00—Materials for catheters, medical tubing, cannulae, or endoscopes or for coating catheters
    • A61L29/08—Materials for coatings
    • A61L29/085—Macromolecular materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
    • A61L31/08—Materials for coatings
    • A61L31/10—Macromolecular materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/25—Peptides having up to 20 amino acids in a defined sequence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A61L2300/254—Enzymes, proenzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
    • A61L2300/606—Coatings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Prostheses (AREA)

Abstract

披露了用于可植入的医学制品的表面的含有层粘连蛋白的涂层。所述涂层能促进与涂敷表面相关的血管形成，并具有最低纤维化的反应。

Description

具有层粘连蛋白涂层的可植入的医学制品和使用方法
对相关申请的交叉引用
本非临时申请要求申请流水号为60/655,576的临时申请的优先权，该临时申请的申请日为2005年2月23日，名称为支持不同细胞活性的管状结构的表面修饰：为了促进新血管形成的聚合物表面修饰。
发明领域
本发明涉及促进与可植入的医学制品相关的血管化反应的方法。在某些方面，所述可植入的医学制品具有含有层粘连蛋白的涂层。在其他方面，本发明涉及具有稳定去核的多孔部分的可植入的医学制品。
发明背景
直到最近，可植入的医学制品技术的发展的主要焦点一直是改变所述制品的结构特征，以便改善它在体内的功能。不过，越来越明显的是，植入的器械在植入部位的功能通过改善所述器械在组织反应中的相容性可以得到很大提升，所述反应是因为植入而发生的。理想的是，改善了的相容性使得所述植入器械的表面可以模拟通过损伤而暴露的天然组织，并且提供作为愈合过程结果的形成正常组织的环境。
尽管是惰性的和无毒的，但与所述器械相关的植入的生物材料，如各种塑料和金属，通常会引起异物反应，如发炎，纤维化，感染和血栓形成。如果反应过度，这些反应中的某些可能导致所述器械在体内失效。在植入之后不久，通常会出现适当的细胞炎性反应，其中，白细胞，激活的巨噬细胞和异物巨细胞被募集到植入器械的表面。尽管所述炎性反应是常见的，并且通常是愈合过程的一种要素，但它通常伴随着在植入器械的表面上形成明显的纤维基质。过度纤维化和纤维基质胶囊化通常是不理想的，因为这种胶囊化可能使植入器械与周围的组织隔离，从而妨碍所述移植物的血管化。
通常被视为微血管的新血管的形成同样是组织愈合过程的一部分。血管生成反应被称为由现有血管形成新血管。血管发生反应表示从单细胞新形成新血管。新血管的形成是一个复杂过程，对它的了解不多，不过，似乎涉及内皮细胞向血管形成部位的募集。
促进与植入表面相关的血管生成反应和新血管形成被认为能改善移植物在周围组织环境中的同化。通过改变移植物特性改善血管生成反应，可以通过改善新血管形成使植入物长期起作用，这使得能够将合适的养分和废物交换到周围组织中。改善了的血管生成反应能够以其他方式发挥效用。例如，对于血管移植物来说，通过移植物间隙的血管渗透的加强(新血管形成)可以改善血管的开放性。增强的血管渗透可以提供用于腔内皮化的自体内皮细胞来源，从而形成不形成血栓的血液/组织界面。
可以客观评估导致增强了的血管生成反应的生物相容性的改善。例如，可以通过在植入之后一定时间用显微镜测定与移植物表面相关的微血管密度对血管生成反应进行定量。除了测定新微血管生长程度之外，可以进行组织学分析，以便确定所形成的与移植物表面相关的微血管类型。在这点上，血管生长和血管复杂性可能是愈合过程的重要因素，并且可以在对该器械的表面进行修饰和植入一段时间之后评估。
另外，生物相容性的改善还可以通过观察由所述器械引起的受控制的炎性，和最低纤维化反应衡量。生物相容性的改善还可以通过证实所述反应与观察到的其他类型的表面修饰的反应不同，或反应强度更小而进行衡量。
基于上述原因，业已实现了对器械的修饰，修饰方式模拟体内受损组织的自然愈合，并且将植入的制品整合在正常组织中，它能够极大地改善植入器械的功能和功能寿命。所述修饰理想的可导致最低的或无纤维化的胶囊化，并且导致与移植物表面相关的微血管发育的增强。具有各种天然和合成材料的塑料或金属可植入的医学制品表面的修饰是本领域公知的改善可植入的器械的生物相容性的途径。
改善可植入的医学制品的生物相容性的一种方法包括对移植物进行修饰，以便促进内皮细胞从相邻组织的迁移。所述修饰被认为能改善与所述器械表面相关的新血管的形成。提供具有改善的生物相容性的表面的努力涉及将细胞外基质(ECM)蛋白沉积在可植入的塑料器械表面上。所述蛋白的稳定形成是理想的，因为它可以促进新血管的形成和持久性。
业已证实用活性基团修饰ECM蛋白是改善涂层稳定性的方法。例如，用光反应性基团衍生化并且固定在聚亚安酯(PU)和膨胀的聚四氟乙烯(ePTFE)血管移植物上的纤连蛋白(FN)和胶原IV可以增强内皮细胞与移植物表面的体外结合和生长。
另外，尽管用某些细胞外基质蛋白对器械表面进行修饰可以促进内皮细胞结合，但这种结合可能与促进血管发生的涂层表面的能力无关。另外，所述涂层器械还可能促进相当的炎性和纤维化反应。
概述
本发明总体上涉及可植入的医学制品，它具有能促进所述制品的体内功能的涂层。本发明还涉及将所述涂层的医学制品用于对象体内的方法。具体地讲，本发明的涂层可以通过促进与涂敷表面相关的血管形成而改善所述制品的功能。
在与本发明的一个方面相关的实验研究中，业已发现将层粘连蛋白多肽固定在医学移植物表面上能显著增强与所述制品的涂敷表面相关的血管生长的形成。具体地讲，证实了包括层粘连蛋白-5的涂层能导致与涂敷表面相关的血管形成，正如遍布具有层粘连蛋白-5涂层的多孔ePTFE基质的微血管的形成所证实的。特别是，所述微血管的形成不伴有所述制品表面上的厚的无血管的纤维囊的形成，并存在受控制的炎性反应。
基于上述发现的其他研究发现了层粘连蛋白，如层粘连蛋白-1或层粘连蛋白-5，和其他粘着因子，如胶原的组合也能促进良好的细胞附着和与用所述材料包衣的的表面相关的增强了的新血管生长。
在与可植入的医学制品组合使用时，本发明的涂层能促进伤口愈合反应，这种反应更接近身体的自然伤口愈合反应。表现为观察到的受控制的炎性反应，最低纤维化反应，以及形成与植入器械的涂敷表面相关的微血管的致密网络。
这一发现提供了对制备和使用可植入的医学制品的重大改进。使用所述移植物的层粘连蛋白-型涂层出现的明显的血管形成，与最低纤维化的和受控制的炎性反应的组合，建立了改善植入制品功能的参数，特别是长时间使用时的参数。本发明的涂层提供了相对现有技术的粘着因子涂层的改进，因为在其他涂层中的上述反应(即，新血管生长，最低炎性和纤维化反应)的组合是以前无法实现的。
一方面，本发明提供了导致与可植入的医学制品表面相关的血管形成的方法。该方法还可以在需要降低与医学制品植入相关的纤维化反应时使用。该方法包括将具有涂层的医学制品植入到对象体内的步骤。一方面，所述涂层包括层粘连蛋白-5、它的活性部分或它的结合成分，其使用量足以导致与植入的医学制品表面相关的血管形成。该方法的另一个步骤涉及将所述医学制品保持在对象体内，保持时间足以导致与植入的医学制品表面相关的血管形成。
在某些方面，该方法是使用包括层粘连蛋白-5、它的活性部分或它的结合成分的涂层实施的，其中，所述涂层是通过以下方法形成的，该方法包括沉积涂层组合物的步骤，该组合物包括层粘连蛋白-5、它的活性部分或它的结合成分，浓度为1μm/mL或以上。
其他研究发现，层粘连蛋白和其他粘着因子的组合还可以导致与有涂层的制品表面相关的显著的血管形成，并且减弱纤维化反应。因此，本发明还提供了包括将具有涂层的医学制品植入到对象体内的步骤，所述涂层包括第一成分，包括层粘连蛋白、它的活性部分或它的结合成分，和第二成分，包括粘着因子、它的活性部分或它的结合成分。
一种优选的涂层包括层粘连蛋白-5、它的活性部分或它的结合成分，和胶原、它的活性部分或它的结合成分。在某些方面，层粘连蛋白-5的活性部分是层粘连蛋白-5的α3(α3)链，所述(α3)链的LG3模块，或LG3模块的活性肽结构域(如PPFLMLLKGSTR和NSFMALYLSKGR)。
另一种优选的涂层包括层粘连蛋白-1，或它的活性部分，或它的结合成分和胶原，或它的活性部分，或它的结合成分。优选的胶原选自胶原I和胶原IV。
一般，将有涂层的制品保持在对象体内，保持时间足以导致与涂敷表面相关的血管形成。例如，在植入四周之后，与移植物涂层表面相关的微血管密度超过100个脉管/cm2。另外，在该时期之后，观察到纤维囊的形成被最小化。本发明的涂层特别适用于长期可植入的器械，如在体内放置一个月或更长时间的器械。
在某些场合下，植入步骤是通过将医学制品输送到对象体内的血管内位置实施的。例如，通过血管输送的制品可以是特定形式的移植物，支架，支架-移植物组合，内植入物，和分流器。
优选的是，所述可植入的医学制品包括多孔部分。例如，所述多孔部分可以包括大小足以允许血管在层粘连蛋白-型涂层的促进下向内生长或穿过生长的孔。在本发明的某些方面，所述多孔部分可以用天然或合成材料制成，包括制成纺织和/或无纺纤维结构的聚合材料。在某些方面，所述多孔结构包括ePTFE。
正如通过筒形血管内移植物作为例子进行说明的，所述层粘连蛋白-型涂层可以促进新血管从移植物的无腔表面向有腔表面的生长，而不会在移植物的任何表面上形成厚的细胞纤维化囊。在这点上，层粘连蛋白-型涂层能促进组织样结构的形成，包括多孔移植物部分，它是高度血管化的，并且能够交换生物学成分，如养分和废物，将移植物全面有效地整合在周围组织中。
在本发明的某些方面，包括层粘连蛋白-5的涂层是通过以下方法在可植入的医学制品的表面形成的，该方法包括以下步骤(a)让可植入的医学制品的表面与富含层粘连蛋白-5的细胞渗出物接触。层粘连蛋白-5与其他多肽辅助因子一起可以沉积在所述制品表面，以便形成所述涂层。例如，作为在具有多孔部分的制品上提供含有层粘连蛋白涂层的一种方法，可以使组合物，如细胞渗出物流过所述制品迫使层粘连蛋白，和其他成分进入所述制品的多孔部分，以便使层粘连蛋白沉积在多孔部分的表面上。该方法可以包括以下步骤(a)提供具有多孔部分的制品(b)在加压条件下，使包括层粘连蛋白的组合物流过多孔部分，其中，层粘连蛋白沉积在多孔部分上。层粘连蛋白在表面上的沉积可以通过吸附进行。
利用本发明的涂层促进与血管内移植物的涂敷部分相关的血管形成，本发明还提供了包括多孔部分的血管内装置的透皮内皮化的方法。该方法可以包括将包括层粘连蛋白-型涂层的制品保持在对象体内的步骤，保持时间足以导致微血管生长进入可植入器械的多孔部分，并且足以通过所述微血管为所述器械的腔表面提供内皮细胞。
业已发现，通过将包括层粘连蛋白、它的活性部分或它的结合成分的多肽与一种或多种其他粘着因子、它的活性部分或它的结合成分，以及一种或多种其他涂层成分组合可以形成强化涂层。所述一种或多种其他成分可以包括聚合物成分，第一活性基团，和第二活性基团。第一活性基团使得所述聚合成分可以交联，或使所述聚合成分与所述制品表面结合，而第二活性基团使得层粘连蛋白和粘着因子结合。优选的是，所述聚合成分包括侧挂的第一活性基团和侧挂的第二活性基团。
在某些方面，第一活性基团包括光反应性基团。第二活性基团分别与层粘连蛋白和粘着因子起反应，例如，第二活性基团可以是胺反应性基团，可以分别将层粘连蛋白的携带胺的残基和粘着因子结合在所述聚合物上。
所述涂层提供了形成具有两种或两种以上多肽-型成分的涂层的独特优点(如层粘连蛋白和其他粘着因子)。所述涂层容易形成，并且不需要对层粘连蛋白和其他粘着因子进行化学修饰。例如，在形成所述涂层的方法中，作为涂层工艺的一个步骤，可以将所述聚合物成分沉积在所述制品表面上，并且进行处理，以便形成聚合物底层，其中，所述第一活性基团将所述聚合物共价结合在所述制品表面上，和/或第一活性基团与所述聚合物共价交联，以便在所述制品表面上形成涂层。随后的步骤可能涉及将含有层粘连蛋白和粘着因子的组合物沉积在所述聚合物层上，其中，所述层粘连蛋白和粘着因子能够通过第二活性基团分别结合在所述聚合物成分上。在这点上，加工步骤被最小化。这改进了与涂层方法相关的效率并且降低了成本。另外，层粘连蛋白和其他粘着因子稳定存在于所述器械表面上。
因此，另一方面，本发明还提供了具有涂层的可植入的医学制品，所述涂层能够导致与所述制品表面相关的血管形成。所述涂层包括层粘连蛋白、它的活性部分或它的结合成分，和粘着因子、它的活性部分或它的结合成分，所述涂层还包括聚合物成分，起反应以使聚合物成分发生交联的第一基团，起反应以分别将层粘连蛋白和粘着因子结合在所述聚合物成分上的第二基团。
一方面，所述涂层包括层粘连蛋白-5，或它的活性部分，和胶原，优选胶原I，或它的活性部分，其中，所述层粘连蛋白-5和胶原通过第二基团分别结合在所述聚合成分上，并且所述聚合物成分通过第一基团交联。另一方面，所述涂层包括层粘连蛋白-1和胶原I。
在使用聚合物成分制备层粘连蛋白-型涂层时，发现聚合物基层本身在与具有多孔部分的可植入的制品组合使用时有利于提供独特的优点。例如，业已发现，由使用包括侧挂的第一活性基团和侧挂的第二活性基团的聚合物提供的聚合物基层，使得所述多孔部分在可植入的制品的加工和使用期间保持为稳定去核的状态。去核是除去某些多孔材料，如ePTFE的间隙中滞留的气泡的过程。业已证实，除了增强ePTFE周围和内部的血管发育之外，去核的ePTFE移植物还可以减少以前与未处理过的ePTFE相关的纤维囊(Boswell，CA.and Williams，S.K.，et al.J.Biomater.Sci Polymer Edn.，10：319-329)。不过，在随后的处理或操作期间，ePTFE可能很容易再次成核，这可能降低植入物效力。
因此，另一方面，本发明提供了具有涂层的包含稳定去核的多孔部分的可植入的医学制品，所述涂层含有合成聚合物。所述包括稳定去核的多孔部分的可植入的医学制品可以通过以下方法生产，该方法包括以下步骤：(a)对多孔部分进行去核；和(b)在所述多孔部分的表面上形成包括合成聚合物的层。所述稳定去核的医学制品可以植入对象体内，该制品只具有包括合成聚合物的层，或可以将一种或多种其他因子结合在包括所述合成聚合物的层上。例如，任何层粘连蛋白-型组合物都可以与本文所披露的合成聚合物结合。
在某些优选方面，所述聚合物是包括活性基团，如光反应性基团的合成聚合物。所述合成聚合物还优选是亲水的。典型的合成聚合物是乙烯基聚合物，如丙烯酰胺聚合物。
附图的简要说明
图1a是Western印迹分析，表示层粘连蛋白-5的β3链的鉴定，它是在HCM流之后从ePTFE中收集的蛋白中鉴定的，表明层粘连蛋白-5沉积在ePTFE的表面上。
图1b是Western印迹分析，检测胶原I，胶原IV，纤连蛋白，层粘连蛋白-1，和层粘连蛋白-5在ePTFE上的HCM沉积蛋白中的存在。在HCM沉积的蛋白中观察到了纤连蛋白，层粘连蛋白-1和层粘连蛋白-5。
图1c是在层粘连蛋白-5消耗柱之前和之后层粘连蛋白-5的三种链(α3，β3，和γ2链)的存在的Western印迹分析。
图2a是每个HPF(高功率场)的HMVEC数量的图，所述HPF粘附于未修饰过的ePTFE或用HCM，层粘连蛋白-5耗尽的HCM，纯的层粘连蛋白-5，或DCS-PBS涂敷的ePTFE，并且与图2b-2f相应。
图2b-2f是未修饰过的，或用HCM，层粘连蛋白-5耗尽的HCM，纯的层粘连蛋白-5，或DCS-PBS涂敷过的ePTFE管的腔表面的电子显微照片。用HMVEC浸泡未修饰过的或涂敷过的ePTFE管，以便测定粘着。图2b-2f相应于曲线2a的结果。
图3a是来自小鼠皮下组织的ePTFE植入物的皮下血管化的图，所述移植物是未修饰过的或用HCM，层粘连蛋白-5耗尽的HCM，纯的层粘连蛋白-5，或DCS-PBS涂敷，正如通过每平方毫米上的血管数量衡量的，并且相应于图3b-3f。
图3b-3f是与来自小鼠皮下组织的ePTFE植入物的横截面相关的GS-1阳性血管的光学显微照片，所述移植物是未修饰过的或用HCM，层粘连蛋白-5耗尽的HCM，纯的层粘连蛋白-5，或DCS-PBS涂敷，并且相应于曲线3a的结果。
图4是来自小鼠皮下组织的ePTFE植入物的炎性反应图，所述移植物是未修饰过的或用HCM，层粘连蛋白-5耗尽的HCM，纯的层粘连蛋白-5，或DCS-PBS涂敷，正如通过与每平方毫米植入物相关的F4/80阳性细胞(激活的巨噬细胞和单核细胞)的数量衡量的。
图5a-5e是苏木精和曙红-染色的组织横截面的光学显微照片，所述截面含有来自小鼠皮下组织的ePTFE植入物，所述移植物是未修饰过的或用HCM，层粘连蛋白-5耗尽的HCM，纯的层粘连蛋白-5，或DCS-PBS涂敷。
图6是所述试剂与五种二元蛋白涂层组合的结果的柱状图。
图7是所述试剂本身和与一种二元涂层组合的结果的柱状图。
详细说明
下面披露的本发明的实施方案并非穷举性质的，或者是将本发明局限于以下详细说明所披露的确切形式，相反，选择并且披露这些实施方案，是为了使本领域的其他技术人员能够了解本发明的原理和实践。
这里提到的全部出版物和专利通过引用合并与此，其中的任何内容都不应当被理解为承认本发明人没有资格在任何出版物和/或专利之前，包括其中所引用的任何出版物和/或专利。
一方面，本发明基于添加层粘连蛋白-型涂层能够增强与有涂敷的植入物表面相关的血管形成能力相关的发现。具体地讲，将含有层粘连蛋白-5的条件细胞培养基用于将分泌的蛋白沉积在生物反应器系统中的ePTFE表面上(参见实施例1)。用修饰的ePTFE基质试验血管反应(包括血管发生和新血管形成)，细胞粘着，炎性反应，和纤维囊形成(参见实施例2-4)。
使用抗胶原I，胶原IV，纤连蛋白，层粘连蛋白-1，和层粘连蛋白-5的抗体的免疫印迹，发现鉴定了纤连蛋白和层粘连蛋白-1，此外还有层粘连蛋白-5是从条件培养基表面沉积到ePTFE上的蛋白。同时这一类细胞表现出良好的内皮细胞的细胞粘着，和ePTFE的血管化，并且还观察到了植入物的纤维包裹。选择性地消耗层粘连蛋白-5，并且用层粘连蛋白-5-耗尽的条件培养基对ePTFE进行涂敷表现出内皮细胞的细胞粘着和ePTFE的血管化的显著减少，并且适当减轻了炎性反应。
根据上述发现，将纯化的层粘连蛋白-5沉积在ePTFE上。具有纯化的层粘连蛋白的涂层表现出良好的内皮细胞粘着(不过，比使用来自所述条件培养基的涂层观察到的所述细胞粘着少)，具有纯化的层粘连蛋白-5涂层的ePTFE的新血管形成与来自所述条件培养基的涂层相比令人吃惊地得到增强。另外，纯化的层粘连蛋白-5涂敷的ePTFE表现出最低组织囊厚度和适度的炎性反应。
根据上述发现，制备了这样的涂层，以便研究层粘连蛋白本身，或与其他粘着因子组合之后对细胞粘着和产生与涂敷表面相关的新血管反应的发生的作用。另外，还用结合成分制备了涂层，以便改善含有多肽型粘着因子的涂层的形成。将包括第一和第二活性基团的聚合成分用于改善涂层工艺和涂层性质。在形成涂层的过程中，发现这种聚合物-型涂层成分有利于形成具有稳定去核的多孔部分的可植入的医学制品。
发现特别优选的涂层包括层粘连蛋白和胶原的组合。典型的组合包括层粘连蛋白-5和胶原I，以及层粘连蛋白-1和胶原I。
本发明的涂层，器械，和方法可用于促进与所述制品的涂敷表面相关的血管形成。在某些方面，所述血管形成的发生与多孔表面相关。新血管的形成表现为血管生成(由先前存在的血管发育成新血管)或新血管化(在植入物的多孔部分内形成血管)反应。在很多方面，可以通过新血管使它有神经分布，如果条件适合所述新血管在涂敷表面附近形成，如通过本发明的层粘连蛋白-型涂层促进的，所述可植入的医学制品具有复杂的几何形状。血管形成使得所述植入物能够与植入物周围的组织一致性地起作用，因为血管化的植入物更接近于天然组织。
根据本发明，层粘连蛋白-型涂层能导致与本文披露的可植入的医学制品涂层相关的血管形成。可植入的医学制品可以是导入哺乳动物体内用于预防或治疗医学症状的制品。
可植入的医学制品包括，但不局限于血管植入物和移植物，植入物，手术器械；合成假体，包括支架，内置假体，支架-移植物，和血管内支架组合的血管假体；小直径移植物，腹主动脉瘤移植物；创伤敷料和创伤管理器械；止血带；纱布和疝气塞子；贴片，包括子宫出血贴片，房间隔缺损(ASD)贴片，卵圆孔未闭(PFO)贴片，室间隔缺损(VSD)贴片，心包贴片，心外膜贴片，和其他通用心脏贴片；ASD，PFO，和VSD闭锁装置；经皮闭锁装置，二尖瓣修复装置；心瓣，静脉瓣，大动脉过滤器；静脉过滤器；左心耳过滤器；瓣环成形术器械，导管；神经血管瘤(neuroanuerysm)贴片；中心静脉通路导管，血管通路导管，脓肿引流术导管，药物灌输导管，肠胃外喂饲导管，静脉内导管(例如，用抗血栓形成剂处理的)，休克治疗导管，血压和支架移植物导管；吻合器械和吻合闭锁装置；动脉瘤排出器械；生物传感器包括葡萄糖传感器；生育控制装置；美容植入物，包括乳房植入物，嘴唇植入物；下巴和面颊植入物；心脏传感器；感染控制装置；薄膜；组织支架；组织相关的材料，包括小肠粘膜下层(SIS)基质；分流通路，包括脑脊髓液(CSF)分流通路，青光眼排泄分流通路；牙科装置和牙科移植物；耳装置，如耳引流管，鼓膜切开术通风管；眼科器械；装置的套管和套管部分，包括引流管套管，植入的药物灌注管套管，导管套管，缝合套管，脊柱和神经装置；神经再生导管；神经导管；神经贴片；整形装置，如整形关节移植物，骨骼修复/增大装置，软骨修复装置；泌尿装置和尿道装置，如泌尿植入物，膀胱装置，包括膀胱吊索，肾装置和血液透析装置，结肠瘘袋结合装置；胆汁引流制品。
具有能导致与涂敷表面相关的血管形成的含有层粘连蛋白的涂层的医学制品还可以通过组装具有两个或两个以上″部分″(例如，可以放在一起，以便构成所述制品的多件医学制品)的制品制备，其中，至少一个部分具有涂层。所述医学制品的所有或一个部分可以具有含有层粘连蛋白的涂层。在这点上，本发明还涉及具有含层粘连蛋白的涂层的医学制品的各个部分(例如，不是完全组装的制品)。
所述可植入的医学制品可以用任何合适的材料制成。制备医学制品的材料的一般类型可以包括天然聚合物，合成聚合物，金属和陶瓷。上述一般类型材料的任意组合可用于生产所述可植入的医学制品。
可用在所述可植入的医学制品上的金属包括铂，金，或钨，以及其他金属，如铼，钯，铑，钌，钛，镍，和上述金属的合金，如不锈钢，钛/镍，镍钛诺合金，钴铬合金，非铁合金，和铂/铱合金。一种典型的合金是MP35。可植入的金属制品的表面可以进行处理，以便有利于形成含有层粘连蛋白的涂层。例如，包括金属的可植入的医学制品可以包括一个或多个基层，如ParyleneTM层，或含硅烷的层，如羟基-或氯-硅烷。
所述可植入的医学制品可以用合成聚合物，包括通过加成或缩合聚合作用产生的低聚物，均聚物，和共聚物制成。合适的加成聚合物的例子包括，但不局限于，丙烯酸树脂，如由丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸羟乙酯，丙烯酸羟乙酯，丙烯酸，甲基丙烯酸，甘油丙烯酸酯，甲基丙烯酸缩水甘油酯，甲基丙烯酰胺，和丙烯酰胺；乙烯基，如乙烯，丙烯，氯乙烯，醋酸乙烯酯，乙烯基吡咯烷酮，和偏二氟乙烯聚合而成的树脂。缩合聚合物的例子包括，但不局限于尼龙，如聚已内酰胺，聚十二烷基内酰胺，聚己二酰已二胺，和聚环已烷十二烷二胺，还包括聚亚安酯，聚碳酸酯，聚酰胺，聚砜，聚(对苯二甲酸亚乙酯)，聚乳酸，聚乙醇酸，葡聚糖，硫酸葡聚糖，聚二甲基硅氧烷，和聚醚酮。
在本发明的一方面，所述医学制品包括卤代聚合物，如氯代和/或氟代聚合物。例如，所述含有层粘连蛋白的涂层可以在可植入的医学制品的表面上形成，它包括全卤代聚合物，如全氟代聚合物。
可以用作基质材料的全卤代聚合物的例子包括全氟代烷氧基(PFA)聚合物，如TeflonTM和NeoflonTM；聚三氟氯乙烯(PCTFE)；氟代乙烯聚合物(FEP)，如四氟乙烯和六氟丙烯的聚合物；聚(四氟乙烯)(PTFE)；和ePTFE。
其他含氟聚合物为本领域所公知并且披露于各种文献中，如W.Woebcken，Saechtling International Plastics Handbook for theTechnologist，Engineer and User，3rd Ed.，(Hanser Publishers，1995)pp.234-240。
在本发明的某些方面，所述可植入的医学制品包括多孔部分和在所述多孔部分表面上形成的含有层粘连蛋白的涂层。所述多孔部分可以用类似或不同生物材料的一种或组合制成。所述多孔部分的孔的物理尺寸优选允许在多孔结构内形成血管。例如，合适的平均孔度可以为2μm或以上，优选在大约4μm-大约150μm范围内。
在很多情况下，所述可植入的医学制品的多孔部分包括纤维，或具有纤维状质量。如果所述多孔部分包括纤维，它可以具有任何合适的直径，从纳米直径的纤维到毫米直径的纤维。不同大小纤维的组合还可存在于所述多孔部分。所述多孔部分可以用纺织或无纺材料或它们的组合制成。
所述多孔表面可以用纺织物制成，它包括机织材料，针织材料，和编织材料。典型的纺织物材料是机织材料，它可以使用本领域公知的任何编织图案生产。
所述多孔表面可以是移植物，鞘，外罩，贴片，套管，包套，和封罩等的表面。所述制品的类型可以作为医学制品本身，或者与医学制品的其他部分组合。
所述多孔部分可选择性地包括刚性材料，以便改善它的物理特性。例如，刚性材料可以改善移植物的强度，从而改善它的效能。
在本发明的一个典型方面，所述含有层粘连蛋白的涂层是在多孔PTFE基质上形成的。PTFE的使用是可植入的医学制品领域所公知的。PTFE管通常被用作血管移植物，用于取代或修复血管。ePTFE管具有微观孔结构，由通过很多细小的原纤维连接的的小的节组成。所述小纤维跨越的节表面之间的空间(即孔)被定义为节间距(IND)。具有大的IND的移植物能增强组织向内生长和细胞内皮化，因为所述移植物本身有更多的孔。ePTFE血管移植物的多孔性可以通过控制所述管的微观孔结构的IND控制。
可以将单层或多层ePTFE移植物用作新血管化涂层的基质。可用作可植入的假体的多层ePTFE管状结构的例子可以参见美国专利号4,816,338；4,478,898和5,001,276。
所述含有层粘连蛋白的涂层还可以在其他多孔移植物上形成，如包括丝绒质地的外观的移植物，具有纺织物或平滑的内部。用纺织物制品制成的移植物为本领域所公知，并且业已在多个文献中披露，例如，美国专利号4,047,252；美国专利号5,178,630；美国专利号5,282,848；和美国专利号5,800,514。
具有多孔部分的制品还包括支架-移植物组合。
作为另一个例子，可以包括含有层粘连蛋白的涂层的另一制品是水排泄装置，又被称作泄液线或青光眼分流通路。上述装置被用于解除眼睛内部过高的压力(眼内压；IOP)，通常与患有青光眼的对象相关。将泄液线放置在眼睛侧面的组织中，并且通过小管与眼睛正面部分的内侧部分连接。所述管可以从眼睛内部排泄多余的流体，从而降低IOP。
水排泄装置包括多孔部分，如ePTFE，可以提供本文所述的含有层粘连蛋白的涂层。所述含有层粘连蛋白的涂层可以增加ePTFE内的血管形成，并且减少通常与未涂敷装置相关的纤维囊形成。
所述可植入的医学制品还可以是药物洗脱或药物释放性的。尽管层粘连蛋白和任何其他可选择的多肽成分一般与所述制品表面结合，所述制品还能够从所述制品的一部分释放药物。所述制品的药物洗脱或药物释放部分可以位于所述制品的包括层粘连蛋白-型涂层的相同部分，或者可以在所述制品的不同部分。
在某些情况下，亲水性药物，如没有与所述器械表面结合的其他多肽可以存在于包括层粘连蛋白的所述涂层中。在上述情况下，所述亲水性药物可以从所述涂层中释放，而层粘连蛋白保持与所述表面结合。
在其他情况下，所述制品包括具有药物的涂层，其中，所述药物可以从所述涂层中洗脱或释放。在优选方面，该涂层是聚合物层。例如，所述可以洗脱或释放药物的涂层可以包括聚合物，层粘连蛋白与所述聚合物共价结合。例如，药物可存在于包括聚合物的涂层中，并且可以从它里面释放。所述聚合物具有能够将层粘连蛋白共价结合在该聚合物上的基团。所述药物还可存在于包括疏水性聚合物的涂层中。例如，所述药物可存在于包括聚(烷基(甲基)丙烯酸酯)，如聚丁基丙烯酸甲酯(pBMA)的涂层中。所述层还可以包括其他聚合物，如聚(乙烯基乙酸乙烯酯)(pEVA)；参见美国专利号6,214,901。可以使用其他药物洗脱聚合物层(如披露于以下文献中的聚合物层：美国专利号6,669,980聚(苯乙烯-异丁烯-苯乙烯)；以及美国专利公开号2005/0220843和2005/0244459)。
一般，在可植入的医学制品的表面上形成的含有层粘连蛋白的涂层包括层粘连蛋白，或它的活性部分。所述层粘连蛋白家族包括多结构域糖蛋白，它天然存在于基底层中。层粘连蛋白是三种不同链的杂合三聚体。在羧基末端结合成卷曲螺旋结构的α，β，和γ链，以便形成通过二硫键稳定化的杂合三聚体分子。每一个层粘连蛋白链是由不同基因编码的多结构域蛋白。业已披露了每一条链的若干种同种型。不同的α，β，和γ链同种型组合形成了不同的杂合三聚体层粘连蛋白同种型。
在本发明的一个方面，所述可植入的医学制品上的涂层包括层粘连蛋白-5或它的活性部分。层粘连蛋白-5由γ2链与α3和β3链(层粘连蛋白α3 β3γ2)组成。最初它是以460kD分子形式合成的，在被分泌到ECM中后，该分子发生特异性蛋白酶剪切形成更小的形式。其大小的缩小是α3和γ2亚基分别从190-200加工成160kD和从155加工到105kD造成的。层粘连蛋白-5是锚丝的整体部分，它将内皮细胞连接在基底膜上。
所述涂层可以包括层粘连蛋白-5的活性部分，它可以是层粘连蛋白-5的一个或多个链，所述链的一部分，或它们的组合，其中，所述活性部分能够导致与移植物的涂敷表面相关的血管形成。在某些方面，层粘连蛋白α3链，或它的一部分包含在可植入的医学制品上的涂层中。层粘连蛋白α3链的一部分具有球状结构，并且被称作G结构域，它本身由五个串联的重复单元，被称作LG重复单元组成。G结构域中的模块之一被称作LG3模块，业已被证实能复制关键的Ln-5活性，包括细胞粘着，延展，和迁移(Shang，M.，et al.(2001)J.Biol.Chem.276：33045-33053。人LG3模块的序列能够从NCBI(NationalCenter for Biotechnology Information)获得，编号为A55347。
一方面，所述涂层包括具有层粘连蛋白α3链的LG3序列的多肽。
所述G结构域中的其他更短的肽也可用于本发明的涂层中，如肽序列PPFLMLLKGSTR和NSFMALYLSKGR。
使用一部分层粘连蛋白-5的优点是，可以在所述表面上提供更高密度的层粘连蛋白-5活性。另外，需要更少的多肽提供与医学制品上的涂层相关的理想的血管反应。
层粘连蛋白-5可以从各种细胞系中获得，包括HaCaT(自发永生化的人角化细胞；Boukamp，P.，et al.(1988)J.Cell Biol 106：761-771)，和HT-1080(人纤维肉瘤；ATCC，CCL-121)。抗层粘连蛋白-5的多克隆抗体可以通过商业渠道获得，例如，Abeam(#ab14509；Cambridge，MA)；抗层粘连蛋白-5链的单克隆抗体可以通过商业渠道获得，例如，Chemicon(小鼠抗-层粘连蛋白-5γ2子链MAb；Temecula，CA)和Transduction Laboratories(小鼠抗-层粘连蛋白-5β3子链MAb；Lexington，KY)，或可以根据层粘连蛋白-5序列制备(例如，兔抗-层粘连蛋白-5a3子链多克隆(RB-71)，如，由Bethyl Laboratories，Inc.(Montgomery，TX)制备的抗所述肽CKANDITDEVLDGLNPIQTD(参见实施例))。
可以获得人层粘连蛋白-5α3，β3，和γ2链的完整的核酸和蛋白序列。给出的这些该信息和技术是本领域技术人员可以获得的，理想的层粘连蛋白-5部分可以使用诸如免疫纯化，重组蛋白产品，或通过肽合成的技术获得。
具有层粘连蛋白-5活性的涂层还可以通过提供包括能专一性地结合层粘连蛋白-5，或它的一部分的成分，本文称之作″结合部件″的涂层制备。抗层粘连蛋白-5和它的部分的抗体可以通过商业渠道获得，并且在本文中披露。所述涂层可以通过用抗层粘连蛋白-5的抗体取代所述涂层中的层粘连蛋白-5，或用抗层粘连蛋白-5的抗体补充所述涂层制备。
层粘连蛋白-5，它的一部分，或它的结合成分可以涂在可植入的医学制品的表面上，涂层量足以导致与涂敷表面相关的血管形成。在某些方面，层粘连蛋白-5，或它的一部分被涂在所述表面上，其中，所述层粘连蛋白-5在所述涂层组合物中的浓度大约为1μm/mL或以上。
在本发明的另一方面，层粘连蛋白-5，或它的一部分是作为主要多肽存在于所述涂层中的。就是说，层粘连蛋白-5，或它的一部分的使用量超过涂层中多肽总数量的50％。
可以在所述涂层中选择性地添加一种或多种其他粘着因子成分。包括层粘连蛋白-5或它的活性部分的涂层还可以包括参与细胞粘着的另一种因子。例如，所述涂层可以包括层粘连蛋白-5和选自能够与蛋白的整联蛋白家族成员结合的一组因子的其他成分：在一个方面，所述其他成分选自下列一组：胶原，层粘连蛋白-1，玻连蛋白，触觉蛋白，腱生蛋白，凝血栓蛋白，和ICAM，蛋白聚糖，弹性蛋白，透明质酸，及其活性部分。在某些方面，可以包括纤连蛋白或纤维蛋白原。
在某些方面，所述涂层包括层粘连蛋白-5，或它的活性部分，和胶原，或它的活性部分的组合。例如，所述涂层可以包括层粘连蛋白-5和选自胶原I和胶原IV的胶原的组合。一种典型的组合包括层粘连蛋白-5和胶原I的组合。在一种实施模式中，层粘连蛋白-5，或它的活性结构域在所述涂层中的存在量占所述涂层中多肽总量的50-99％，而胶原I在所述涂层中的存在量占所述涂层中所存在的多肽总量的1-49％。
在本发明的另一方面，所述涂层包括层粘连蛋白，如层粘连蛋白-1，或它的活性结构域，与参与细胞粘着的其他因子组合。例如，所述涂层可以包括层粘连蛋白-1，或它的活性结构域，和选自能够结合本文所披露的蛋白的整联蛋白家族成员的因子的其他成分。例如，所述涂层可以包括层粘连蛋白-1和选自胶原，层粘连蛋白-5，玻连蛋白，触觉蛋白，腱生蛋白，凝血栓蛋白，和ICAM(细胞间粘附分子)，及其活性部分的因子的组合。
在某些方面，所述涂层可以包括层粘连蛋白和特定结合成分或抗参与粘着的细胞表面抗原的抗体的组合。例如，所述涂层可以包括层粘连蛋白和抗CD34的抗体，或CD34的结合成分，如MadCAM或L-选择蛋白。抗-CD34单克隆抗体可以结合来自人外周血液的内皮祖细胞。所述祖细胞能够分化成内皮细胞(Asahara et al.(1997)Science 275：964-967)。生产针对CD34的单克隆抗体的杂交瘤可以从美国模式组织保藏所(Rockville，Md.)获得。
所述层粘连蛋白-型涂层能够以一种或多种方式形成。在某些方面，层粘连蛋白，如层粘连蛋白-5或层粘连蛋白-1，或它的活性结构域，以及任何其他成分是通过沉积固定的，并且吸附在所述医学制品表面上。一般，多肽成分的吸附被认为是通过一部分多肽和所述基质表面之间的非共价疏水性相互作用导致的。为了吸附多肽，所述可植入的医学制品一般具有疏水性表面。所述疏水性表面可以通过器械材料本身提供，如卤化热塑塑料，如ePTFE，或可以对所述器械表面进行修饰，以便提供疏水性表面。
可以使用任何合适方法通过吸附将一种或多种多肽成分固定在所述表面上。如果固定一种以上成分，该方法可以通过两种成分同时固定的方式进行。例如，可以制备层粘连蛋白和胶原的混合物，并且沉积在所述制品表面。成分的浓度，涂敷时间，涂敷温度，涂层pH，溶液离子强度，任何其他制剂(如洗涤剂)在涂层溶液中的存在，可以根据本领域已知的参数选择，以便在所述制品表面上提供合适的层粘连蛋白-型涂层。
为了说明通过粘着实现的使层粘连蛋白固定的模式，披露了ePTFE移植物的涂层。通过用醇处理除去ePTFE间隙中的空气，以便提供具有较小表面张力的去核的移植物。例如，去核可以通过连续的浸泡完成，开始使用高醇浓度溶液(如100％)并且将醇浓度降低直到进入去离子水溶液。另外，去核可以通过以下方式进行，开始使用水溶液，然后换成醇溶液。然后在涂层工艺之前将移植物放入PBS(例如，不含阳离子的磷酸盐缓冲盐水)。
对于所述涂层方法来说，将包括层粘连蛋白的涂层组合物放在与ePTFE表面接触的地方。在某些实施方式中，例如，对于管状ePTFE基质来说，所述层粘连蛋白组合物可以通过管状部分泵送预定的时间。在一种实施方式中，让所述涂层组合物与所述基质接触大约1小时-大约12小时。
层粘连蛋白在所述组合物中的存在量能够提供会导致与涂敷表面相关的血管形成的涂层。例如，层粘连蛋白-5在所述组合物中的使用浓度为大约1μg/mL或以上。
所述组合物可以包括层粘连蛋白，如纯的形式的层粘连蛋白-5，或从富含层粘连蛋白的组合物中获得的层粘连蛋白。
可以通过使用去污剂，如SDS除掉沉积的蛋白，然后通过免疫印迹进行蛋白定量来测定沉积在所述基质上的层粘连蛋白的数量。
在本发明的某些方面，通过涂层成分将所述涂层组合物的一种或多种成分固定在器械表面上。在某些方面，所述涂层成分可用于改善所述涂层的成分(例如，层粘连蛋白和其他可选择的成分)在所述器械表面上的稳定性。
一般，可以通过一种或两种不同的配制，或两种配制的组合固定所述涂层的多肽成分(层粘连蛋白或层粘连蛋白和其他多肽因子的组合)。在某些方面，所述涂层成分可以是连接部分。作为改善所述涂层的成分结合的手段，通过所述连接部分将所述多肽成分结合在另一种成分上。在这种设计中，所述成分与另一种成分交联，以便在所述制品表面上形成联接的分子网络。例如，多种层粘连蛋白分子可以通过所述连接部分交联，以便形成层粘连蛋白分子的涂层。其他成分，如第二成分，例如，选自胶原，层粘连蛋白-1，玻连蛋白，触觉蛋白，腱生蛋白，凝血栓蛋白，ICAM，它们的活性结构域可以与所述层粘连蛋白交联。
沉积在器械表面上的成分的交联可以通过让所述涂层组合物的多肽成分与连接部分起反应而完成，其中，所述器械表面一般不会与所述连接部分发生反应。例如，其中，所述连接部分是可以通过热或光能激活的基团，并且，所得到的激活了的基团可以与所述涂层组合物的成分起反应，而不是与所述器械表面起反应，所述连接部分与一部分涂层成分(例如，层粘连蛋白)起反应，以便形成由共价结合的多肽构成的网络。与所述涂层组合物接触的表面一般不会与所述连接部分起反应，它在某些方面是疏水性的，并且是可抽取氢的较差的来源。例如，所述表面是含氟聚合物表面，如ePTFE。
在本发明的某些方面，所述连接部分包括光反应性基团。广义地讲，光反应性基团是能够对专门施加的在外部光能作出反应的基团，进行活性物质的生成，导致与目标的共价结合。光反应性基团是分子中的原子团，它在储存条件下保持它们的共价键不变，不过，在被激活时，与其他分子形成共价键。所述光反应性基团能产生活性物质，如自由基，氮宾，亚碳化物，以及在吸收外部电磁或动能(热能)时酮的激发状态。可以选择光反应性基团，以便对电磁波频谱的各个部分作出反应，并且，优选对光谱的紫外线，可见光，或红外部分作出反应的光反应性基团。光反应性基团，包括本文所披露的基团为本领域所公知。本发明涉及将任何合适的光反应性基团用于形成本文所披露的本发明的涂层。
光反应性基团可以产生活性物质，如自由基，特别是氮宾，亚碳化物，和在吸收电磁能时激活的酮的激发状态。可以选择光反应性基团以便对电磁波频谱的各个部分作出反应。通常使用对所述光谱的紫外和可见光部分作出反应的基团。
可以使用光反应性芳基酮，如乙酰苯，二苯甲酮，蒽醌，蒽酮，和蒽酮-样杂环(例如，蒽酮的杂环类似物，如在10号位置上具有氮，氧或硫的蒽酮)，或它们的取代过的(例如，环取代过的)衍生物。芳基酮的例子包括蒽酮的杂环衍生物，包括吖啶酮，氧杂蒽酮，和噻吨酮，以及它们的环取代过的衍生物。某些光反应性基团包括噻吨酮，以及它的衍生物，它的激发能量大于约360nm。
这些类型的光反应性基团，如芳基酮，很容易发生本文所披露的激活/失活/再激活循环。二苯甲酮是特别优选的潜伏的活性部分，因为它能够发生光化激发，最初形成激发单重态，它发生系统间杂交，形成三重态。通过萃取氢原子(例如，从支撑表面上萃取)，可以将激发三重态插入碳-氢键，从而形成自由基对。自由基对随后的崩溃导致形成新的碳-碳键。如果活性键(例如，碳-氢)不能用于结合，紫外线诱导的二苯甲酮的激发是可逆转的，并且所述分子在取消所述能源后恢复到基态能水平。光可激活的芳基酮，如二苯甲酮和乙酰苯是特别重要的，因为这些基团在水中可以发生多种反应，并因此提供增高的涂层效率。
所述叠氮构成了另一种类型的光反应性基团，并且包括arylazides(C6R5N3)，如苯基叠氮和4-氟-3-硝基苯叠氮；酰基叠氮(-CO-N3)，如苯甲酰叠氮和对-甲基苯甲酰叠氮；叠氮甲酸酯(-O-CO-N3)，如乙基叠氮甲酸酯和苯基叠氮甲酸酯；磺酰叠氮(-SO2-N3)，如苯磺酰叠氮；和磷酸叠氮[(RO)2PON3]，如二苯基磷酸叠氮和二乙基磷酸叠氮。
重氮化合物构成了另一种类型的光反应性基团，并且包括重氮烷(-CHN2)，如重氮甲烷和二苯基重氮甲烷；重氮酮(-CO-CHN2)，如重氮乙酰苯和1-三氟甲基-1-重氮基-2-戊酮；重氮基乙酸酯(-O-CO-CHN2)，如叔-丁基重氮基乙酸酯和苯基重氮基乙酸酯；和β-酮-α-重氮基乙酰乙酸酯(-CO-CN2CO-O-)，如叔-丁基α重氮基乙酰乙酸酯。
其他光反应性基团包括偶氮甲烷(-CHN2)，如3-三氟甲基-3-苯基偶氮甲烷；和烯酮(CH＝C＝O，如烯酮和二苯基烯酮。
参见实施方案，其中，所述涂层包括多肽成分的交联层，所述涂层可以通过提供包括光反应性基团(即，光-层粘连蛋白)的层粘连蛋白形成。在这些方面，光-层粘连蛋白可以被激活，以便与所述涂层组合物中的其他成分，包括其他光-层粘连蛋白交联。
另外，所述涂层可以通过让所述涂层组合物的成分与作为光可活化的交联剂的连接部分结合形成。所述光可活化的交联剂可以是非离子或离子型的。所述光可活化的交联剂可以包括至少两个潜伏光反应性基团，在它们接触合适的光化能源时可以变成光化学活性的。
例如，所述层粘连蛋白涂层可以使用具有结构式XR1R2R3R4的非离子光可活化的交联剂形成，其中，X是化学主链，而R1，R2，R3，和R4是包括潜伏光反应性基团的自由基。例如，典型的非离子交联剂披露于美国专利号5,414,075和5,637,460中(Swan et al.，″RestrainedMultifunctional Reagent for Surface Modification″)。
还可将离子光可活化的交联剂用于形成所述层粘连蛋白涂层。某些离子光可活化的交联剂是具有以下结构式的化合物：X1-Y-X2，其中，Y是包括至少一个酸基，碱基，或酸基或碱基的盐的自由基。X1和X2分别是包括潜伏光反应性基团的自由基。例如，结构式1的化合物可以具有自由基Y，它包括磺酸或磺酸盐基团；X1和X2可以包括光反应性基团，如芳基酮。所述化合物包括4，5-二(4-苯甲酰苯基亚甲基氧)苯-1，3-二磺酸或盐；2，5-二(4-苯甲酰苯基亚甲基氧)苯-1，4-二磺酸或盐；2，5-二(4-苯甲酰亚甲基氧)苯-1-磺酸或盐；N，N-二[2-(4-苯甲酰苄氧基)乙基]-2-氨基乙磺酸或盐等。参见美国专利号6,278,018。例如，所述盐的抗衡离子可以是铵或碱金属盐，如钠，钾或锂。
作为改善所述涂层的多肽成分结合的优选方式，所述多肽(包括层粘连蛋白)成分可以使用一种或多种其他涂层成分固定在所述器械表面上。所述一种或多种其他成分可以包括聚合物成分，第一活性基团，和第二活性基团。
在某些实施方式中，第一活性基团可以使聚合物成分交联形成涂层。例如，第一活性基团可以被激活，以与其他聚合物成分起反应并且与它结合，形成聚合物成分的网络，在可植入的医学制品的表面形成一个层。所述聚合物成分的交联的网络可以在第一活性基团和所述制品表面少有或没有活性的时候形成。在某些场合下，第一活性基团是从聚合物成分上侧挂的。优选的是，第一活性基团包括本文所披露的光-活性基团。
另外，在可植入的医学制品的表面上形成的聚合物成分的网络层是通过聚合成分与本文所披露的交联剂，如包括光反应性基团的交联剂结合形成的。
在某些场合下，所述聚合成分通过使第一活性基团，如光反应性基团与所述制品表面起反应结合在所述制品表面上。在这种情况下，所述聚合成分共价结合在所述制品表面上。
第二活性基团可以结合层粘连蛋白，在某些场合下，结合其他粘着因子。第二活性基团可以分别与层粘连蛋白和粘着因子起反应。例如，第二活性基团可以是胺反应性基团，如N-氧琥珀酰亚胺(oxysuccinimide)(NOS)基团。其他胺反应性基团包括，醛，异硫氰酸盐，溴乙酰基，氯乙酰基，碘乙酰基，酸酐，异氰酸盐和马来酰亚胺基团。
第二活性基团可以是从聚合物成分侧挂的。优选的是，所述聚合成分包括侧挂的第一活性基团和侧挂的第二活性基团。具有侧挂的第一和第二活性基团的聚合成分的使用，提供了独特的加工和功能优点。例如，具有所述侧挂的基团的聚合成分可以沉积在所述制品表面，并且进行处理以便激活第一活性基团形成涂层。然后，可以将层粘连蛋白沉积在所述表面上，以便与第二活性基团起反应，将层粘连蛋白有效固定在所述表面上。
当层粘连蛋白和其他粘着因子的组合，如层粘连蛋白-5和胶原的组合固定在所述表面上时，这种结构是特别有利的。在沉积之前，所述多肽成分(包括层粘连蛋白)能够以预期的比例或浓度组合，然后沉积在具有有活性的第二基团的聚合成分上。每一种多肽成分可以分别与第二活性基团起反应，将所述多肽结合在所述聚合物成分上。在这点上，加工步骤被最小化。这些措施改善了与所述涂层方法相关的效率，并且降低了成本。
在一个优选方面，所述聚合物(涂层成分)包括亲水性聚合物。用于形成含有层粘连蛋白的涂层的亲水性聚合物可以是合成聚合物，天然聚合物，或天然聚合物的衍生物。典型的天然亲水性聚合物包括羧甲基纤维素，羟甲基纤维素，所述聚合物的衍生物，以及类似的天然亲水性聚合物及其衍生物。
在另一个优选方面，所述聚合物是亲水的和合成的。合成的亲水聚合物可以用任何合适的单体制备，包括丙烯酸单体，乙烯单体，乙醚单体，或上述单体中的任何一种或多种的组合。例如，丙烯酸单体包括，甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸羟乙酯，丙烯酸羟乙酯，甲基丙烯酸，丙烯酸，丙烯酸甘油酯，甘油甲基丙烯酸酯，丙烯酰胺，甲基丙烯酰胺，以及上述任何物质的衍生物和/或混合物。乙烯单体包括，例如，乙酸乙烯酯，乙烯吡咯烷酮，乙烯醇，和它们中任意一种的衍生物。醚单体包括，例如，环氧乙烷，环氧丙烷，环氧丁烷，和它们中间任意一个的衍生物。可以用所述单体形成的聚合物的例子包括聚(丙烯酰胺)，聚(甲基丙烯酰胺)，聚(乙烯吡咯烷酮)，聚(丙烯酸)，聚(乙二醇)，聚(乙烯醇)，和聚(HEMA)。亲水共聚物的例子包括，例如，甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物和乙烯吡咯烷酮/(甲基)丙烯酰胺共聚物。可以使用均聚物和/或共聚物的混合物。
在典型实施方式中，所述亲水性聚合物是(甲基)丙烯酰胺共聚物，如由(甲基)丙烯酰胺和(甲基)丙烯酰胺衍生物形成的共聚物。
聚合物-型涂层成分的使用，在可植入的医学制品上制备涂层时提供了独特的加工，功能和经济优点。例如，在形成所述涂层的方法中，作为涂层工艺的一个步骤，所述聚合物涂层成分可以沉积在所述制品表面上，并且进行处理，以便形成聚合物基层，其中，所述第一活性基团被激活，以便将所述聚合物共价结合在所述制品表面上，和/或第一活性基团将所述聚合物共价交联在所述聚合物上，以便形成涂层。随后的步骤可能涉及将包括一种或多种多肽成分的组合物(层粘连蛋白或层粘连蛋白和其他多肽因子的组合)沉积在所述聚合物层上，其中，所述第一和第二成分通过第二活性基团结合在所述聚合物上。
在使用聚合物涂层成分制备所述涂层的过程中，发现在沉积层粘连蛋白之前用所述聚合成分形成涂层，导致了额外的加工和功能优点。
在给ePTFE移植物提供涂层的过程中，实施了对ePTFE的孔进行去核的步骤，就是说从所述孔中除去气泡的过程。一般，去核可以通过首先用醇-型溶液处理ePTFE然后转移到主要为水的溶液，如PBS的溶液中实现。这种方法总的来说是有利的，因为它增加了移植物植入之后体液和组织成分可以接触的表面积，导致了在ePTFE周围和内部的较少的纤维囊形成和增强了的血管发育(Boswell，CA. andWilliams，S.K.，et al.J.Biomater.Sci Polymer Edn.，10：319-329)。
不过，ePTFE可以方便地再加核(可以将气泡重新导入所述多孔部分)，在随后的加工或处理过程中置换所述水溶液。一般，ePTFE移植物的再加核能够以所述材料外观改变的形式出现。可以将其他技术用于确定相对去核或再加核。再加核可能降低植入效果。
发现在涂层过程中提供聚合物材料基层的步骤之后，ePTFE移植物能够保持″稳定去核″。在稳定去核的多孔部分(如稳定去核的ePTFE移植物)，难于将气泡重新导入所述多孔部分。就是说，水溶液不容易被小的滤气袋置换。
具有稳定去核的多孔部分的可植入的医学制品可以提供独特的加工和功能优点。例如，具有稳定去核的多孔部分的可植入的医学制品可以经受处理步骤，否则会对所述制品的多孔部分再加核。在这点上，用于保持多孔制品的去核状态的加工步骤，如特殊保存或处理步骤可能是不需要的。
随后可以用需要的组合物涂敷具有稳定去核的多孔部分的可植入的医学制品。该组合物可以是本文所披露的任何含有层粘连蛋白的组合物。另外，可以将任何其他类型的分子涂敷在本文所披露的稳定去核的部分上。
下面将结合以下非限定实施例对本发明作进一步说明。
试验和分析
Western印迹分析
在条件培养基在生物反应器系统中流动的四个时间点将层粘连蛋白-5沉积在ePTFE上，并且对之前和之后在抗体BM165(Universityof Arizona；Dr.Stuart K.Williams)免疫亲和柱上流过的条件培养基样品通过Western印迹分析进行评估。收集沉积在ePTFE上的蛋白，包括轻轻搅拌ePTFE样品，同时在37℃下将它们在500μL的Laemmli SDS样品缓冲液和10％2-β-巯基乙醇中浸泡24小时。使用Centricon YM 30(Centricon Centrifugal Filter Devices，MilliporeCo.，Bedford，MA)，按照生产商的指南浓缩条件培养基样品。使用Micro BCA试剂盒(Pierce，Rockford，IL)测定蛋白浓度。
使用来自生物反应器修饰的20μl每一种蛋白样品或等于20g条件培养基样品的蛋白的体积进行7％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。然后将凝胶转移到聚偏二氟乙烯薄膜(PVDF)上，Immobilon-P(Millipore Corp.，Bedford，MA)。用丽春红S对印迹进行染色，并在必要时切成独立的条进行分析
用特殊抗体检测蛋白；(1)兔抗-胶原I多克隆抗体(COL1.1；abcam，UK)1：7500，2)小鼠抗-胶原IV单克隆抗体(目录#MAB1910；Chemicon，Temecula，CA)1：10,000，3)小鼠抗-纤连蛋白单克隆抗体(克隆FN-15；Sigma，St.Louis，MO)1：10,000，4)兔抗-层粘连蛋白-1多克隆(产品#L-9393；Sigma，St.Louis，MO)1：7500，5)小鼠抗-层粘连蛋白-5β3子链单克隆抗体(克隆17；Transduction Laboratories，Lexington，KY)1：1500，6)小鼠抗-层粘连蛋白-5γ2子链单克隆抗体(目录#MAB19562；Chemicon，Temecula，CA)1：5000，7)兔抗-层粘连蛋白-5α3子链多克隆抗体(RB-71，由Bethyl Laboratories，Inc.定制的抗肽序列CKANDITDEVLDGLNPIQTD的抗体，最初是由Champliaud et al.鉴定的(Champliaud，M.F.et al.Human amnion contains a novel lamininvariant，laminin 7，which like laminin 6，covalently associateswith laminin 5 to promote stable epithelial-stromal attachment.J Cell Biol 132，1189-1198(1996)，1：5000，并且使用SuperSignalTM底物按照生产商的说明观察(Pierce，Rockford，IL)。使用与辣根过氧物酶缀合的两种二级抗体，大鼠抗-小鼠IgG(克隆LO-MG1-2；Serotec，Raleigh，NC)1：5000，和山羊抗-兔IgG(产品#A9169；Sigma，St.Louis，MO)1：5000。蛋白标准物由人胶原I，胶原IV，纤连蛋白，EHS层粘连蛋白-1(都是从Becton Dickinson购买的，San Jose，CA)，和纯化的层粘连蛋白-5。
粘着在ePTFE上的细胞
制备了人类微血管内皮细胞(HMVECs)的融合单层，进行粘着研究，包括在37℃下用溶解在Dulbeccos修饰的Eagle培养基(DMEM)中的5mM乙二胺四乙酸(EDTA)处理20分钟。将悬浮细胞收集到无血清培养基(M199)中，该培养基含有0.1％牛血清白蛋白(BSA)，2mM L-谷氨酰胺，和5mM HEPES缓冲液。按照以前披露的方法以2×105细胞/cm2的密度接种细胞，该方法由Williams，S.K et al.进行了微小的改变(Williams，S.K.，Schneider，T.，Kapelan，B.&Jarrell，B.E.Formation of a Functional Endothelium on Vascular Grafts.J Electron Microsc Tech 19，439-451(1991))。简单地讲，将细胞加压接种在每一个ePTFE管的腔表面上，并且让它附着1小时，同时在37℃和5％CO2下在培养箱中转动。在该培养时间之后，收集ePTFE样品，并且放入福尔马林固定剂中。
与ePTFE黏附的HMVEC的定量
以DNA嵌入剂，双苯酰亚胺(BBI)标记粘附细胞，它能在紫外线下发出荧光。使用落射荧光显微镜在10倍物镜下使用UV滤光镜观察每一个样品。随机挑选五个视场，将图像捕获到基于计算机的计量形态学系统中(Metamorph Imaging Systems Software；UniversalImaging Corporation，West Chester，PA)，并且根据它计算细胞密度。
扫描电子显微术
通过脱水，临界点干燥，和使用金目标喷射涂层制备用于扫描电子显微术评估的样品。评估所述样品，并且使用JEOL 820扫描电子显微镜(JEOL USA，Peabody，MA)获得光学显微照片。
植入物研究设计
所有动物研究是使用得到University of Arizona IACUC批准的方法，按照实验动物看护和使用的国家卫生指导研究所的要求(#85-23Rev.1985)进行的。研究局限于小鼠的皮下组织。按照以前由Salzmann，D.L et al.披露的方法实施手术(Salzmann，D.L.，Kleinert，L.B.，Berman，S.S.& Williams，S.K.The effects ofporosity on endothelialization of ePTFE implanted insubcutaneous and adipose tissue.J.Biomed Mater Res 34，463-476(1997))。
纤维包裹评估
在植入物周围形成的组织囊的评估是用第一个系列的植入物(HCM系列)进行的。从来自每一个苏木精和曙红(H&E)染色的切片的聚合物的腔或非腔边缘拍摄五张随机图像，使用20倍物镜和索尼夜视镜照相机。根据它们相对ePTFE圆片的位置(腔或非腔)以及胶囊组织类型(纤维或细胞囊)对所述图像进行分类。使用基于计算机的计量形态学系统(Metamorph Imaging Systems Software；Universal ImagingCorporation，West Chester，PA)，对每一个图像进行三次包膜厚度测量，每个样品一共进行十五次测量(每个样品五个图像，每个图像测量三次)，测量值表达为平均厚度μm±s.e.m。
血管密度
使用用西非单豆素-1(GS-1)(生物素化的凝集素-GS-1；1：250；Vector Laboratories，Burlingame，Ca)染色的切片评估血管密度，在40倍水浸物镜下观察。统计每一个高倍视野(HPF)(HPF＝54×54μm2)血管的横截面和纵剖面数量。阳性血管的指标为1)阳性GS-1反应，2)可以识别的腔，3)位于指定的HPF区内。所述HPF是在组织-聚合物界面上沿植入物圆片的整个外部轮廓随机挑选的，分别在组织中挑选10个场并且在ePTFE中挑选10个场。血管密度表达为每一组的平均血管数量/mm2±s.e.m。
发炎
炎性反应是使用用F4/80染色的切片评估的，在40倍水浸物镜下观察。使用54×54μm2高倍视野，在组织-聚合物界面上，沿植入物圆片的整个外部曲线在组织中随机挑选10个视野。统计HPF中F4/80阳性染色细胞。每一种植入物的炎性反应表达为F4/80阳性细胞平均数量/mm2±s.e.m。
组织学和免疫组织化学
对固定的组织样品进行脱水，包埋在石蜡中，切成6μm的切片，并且加工以便进行组织学和免疫细胞化学评估。通过苏木精和曙红染色测定一般组织学结构。使用凝集素，GS-1鉴定脉管结构。通过免疫细胞化学评估所述样品中激活的巨噬细胞的存在，使用抗F4/80160kD糖蛋白抗原的抗体(生物素-单克隆抗体，1：100 Serotec，Inc.，Raleigh，NC)。将过氧化物酶缀合的抗生蛋白链菌素试剂盒(DakoInc.，Carpinteria，Ca)用于检测与两次评估的结合，并且让样品与3，3′二氨基联苯胺(DAB)底物起反应以便观察。在免疫细胞化学技术之后将甲基绿染色用于确定背景核。
实施例1
体外细胞培养
将HaCaT和II-4细胞系(Dr.Norbert Fusenig(German CancerResearch Center)维持在培养基中(Dulbecco′s修饰的Eagle′s培养基，具有高葡萄糖，10％牛胎儿血清，2mM L-谷氨酰胺，和5mM HEPES缓冲液)。用pH7.4的无双-阳离子磷酸缓冲的盐水(DCF-PBS)漂洗融合度为70％的细胞，并且放入无血清培养基中培养48小时，然后收集条件培养基。收集到的条件培养基以750g的速度离心5分钟，以便除去碎片，然后实施涂敷方法。
人类微血管内皮细胞(HMVEC)是从Williams等以前披露的人类吸脂中分离的(Williams，S.K.，Wang，T.F.，Castrillo，R.& Jarrell，B.E.Liposuction-derived human fat used for vascular graftsodding contains endothelial cells and not mesothelial cellsas the major cell type.J Vase Surg 19，916-923(1994))。将细胞维持在培养基中(培养基199，10％牛胎儿血清，60μg/ml粗制内皮细胞生长因子(ECGS)，2mM L-谷氨酰胺，和5mM HEPES缓冲液)并且在第2代和第5代之间使用。
从条件培养基中纯化/除去层粘连蛋白-5
层粘连蛋白-5纯化是按照Champliaud等的方法进行的(Champliaud，M.F.et al.Human amnion contains a novel lamininvariant，laminin 7，which like laminin 6，covalently associateswith laminin 5 to promote stable epithelial-stromal attachment.J Cell Biol 132，1189-1198(1996))，进行了微小的改动。简单地讲，与该方法的差异包括层粘连蛋白-5的来源；层粘连蛋白-5是从HaCaT细胞的细胞培养上清液中获得的，而不是从人羊膜中获得。另外，使用了免疫亲和层析，使用与靶定层粘连蛋白-5的α3链的单克隆抗-层粘连蛋白抗体，BM 165络合的Sepharose柱。
从条件培养基中除去层粘连蛋白-5(以便制备HaCaT条件培养基-Ln5)是在粘着实验的同一天进行的。Sepharose珠与单克隆抗-层粘连蛋白α3链抗体，BM165络合，使用300μl缀合的珠制备柱。让条件培养基一共通过所述柱两次。在两次通过之间使用1M乙酸，并且用Dulbecco′s不含阳离子的磷酸盐缓冲盐水(DCF-PBS)漂洗，以便除去酸来再生所述珠。收集过柱前和过柱后样品，以便进行western印迹分析，并且证实除去了层粘连蛋白-5。
表面修饰
在用条件培养基制备ePTFE的修饰时(4mm直径的管状植入材料，IMPRA，Inc.，Tempe，AZ)，使用连续的乙醇浸泡除去材料间隙的空气，开始使用100％的乙醇，然后以10％的增量逐渐降低直到进入去离子水，时间间隔为20分钟。该过程被称作去核，并且导致了空气的排出和具有较小表面张力的移植物的产生。在去核之后，将ePTFE放入DCF-PBS中1小时，然后进行生物反应器过程。
对于所述涂层过程来说，将具有远端带帽的管状ePTFE放入生物反应器中，参见美国临时申请US 60/655,576，申请日为2/23/2005。通过管状ePTFE以15ml/min的速度泵送大约55ml的HaCaT条件培养基(HCM)，泵送时间为1，3，6，或12小时。将1小时流动方案用于HCM和HCM减去层粘连蛋白-5组(HCM-Ln5)。还评估了DCF-PBS和纯化的层粘连蛋白-5修饰。在去核之后，将DCF-PBS组浸泡在DCF-PBS中过夜，并且对纯的层粘连蛋白-5组(1μg/cm2)进行涂敷，保持在4℃的DCF-PBS/层粘连蛋白-5溶液中过夜，然后进行细胞附着研究。另外，用EDTA处理样品，以便确定将层粘连蛋白-5沉积在ePTFE上的过程中是否需要钙。将样品放入4mM EDTA浴中，后修饰24小时，进行柔和搅拌，然后收集蛋白。
Western印迹分析
在图1(a)中，层粘连蛋白-5的β3链是在HCM流动后从ePTFE中收集到的蛋白中鉴定的，证实了层粘连蛋白-5沉积在ePTFE表面上。通过流动时间(1，3，6，或12小时)对泳道进行分类。在图1(b)中，在通过HCM沉积到ePTFE上的蛋白中鉴定到了多种细胞外基质蛋白。蛋白标准物由胶原I(CI)，胶原IV(CIV)，纤连蛋白(FN)，层粘连蛋白1(LnI)和HaCaT细胞裂解液(Ln5)组成。FN，LnI，和Ln5(β3链)出现在HCM沉积的蛋白中。在图1(c)中，层粘连蛋白-5被成功地从HCM中去掉。层粘连蛋白-5的三条链α3，β3，和γ2中的每一个都鉴定到了。剩余了最低数量的α3和β3链，而γ2被完全去掉。
粘着在ePTFE上的细胞
制备人微血管内皮细胞(HMVECs)的融合单层，用于粘着研究，包括用溶解在DMEM中的5mM EDTA在37℃下处理20分钟。将悬浮细胞收集到无血清培养基(M 199)中，该培养基包括0.1％BSA，2mM L-谷氨酰胺，和5mM HEPES缓冲液。按照以前公开的方法以2×105细胞/cm2的密度接种所述细胞，由Williams，S.K等进行了微小的改进(Williams，S.K.，Schneider，T.，Kapelan，B.&Jarrell，B.E.Formation of a Functional Endothelium on vascular grafts.JElectron Microsc Tech 19，439-451(1991))。简单地讲，将细胞加压接种到每一个ePTFE管的腔表面上，并且让它粘着1小时，同时在37℃和5％CO2下在培养箱中旋转。在该培养时间之后，收集ePTFE样品，并且放入福尔马林固定剂中。
粘着在ePTFE上的HMVEC的定量
图2a所示出的柱状图表示粘着在修饰的ePTFE上的HMVEC的定量结果。图中的数值表示为每个HPF的平均细胞数量。HCM和纯的层粘连蛋白-5修饰导致了相对非-修饰的ePTFE的粘着增强。图2b-2f是用人微血管内皮细胞(HMVEC)接种的ePTFE管的腔表面的扫描电子显微照片。EPTFE修饰包括非-修饰的HaCaT条件培养基(HCM)，HCM减去层粘连蛋白-5，纯的层粘连蛋白-5，和DCF-PBS修饰的ePTFE。线条等于100μm。HMVEC在DCF-PBS和非-修饰的样品上呈圆形，而在条件培养基和层粘连蛋白-5修饰的表面上铺展。扫描电子显微照片从视觉上体现了图2a中的柱状图所示出的结果。
扫描电子显微术
在图3a所示出的柱状图中，示出了与植入小鼠皮下组织的修饰的和非-修饰的ePTFE相关的血管生成和新血管反应的定量结果。数值表示为每mm2的平均血管数量。HCM-Ln5，和DCF-PBS组表现出血管发生评估的活性，证实了HCM组的新血管形成。图3b-3f是与来自小鼠皮下组织的ePTFE植入物的横截面相关的GS-1阳性血管的光学显微照片，所述移植物是未修饰过的或用HCM，层粘连蛋白-5耗尽的HCM，纯的层粘连蛋白-5，或DCS-PBS涂敷过的，并且相应于图3所示结果。
植入物研究设计
对每一种方法来说，在手术之前通过腹膜内注射400mg/kg阿佛丁对动物进行麻醉。将ePTFE圆片(用4mm活组织检查打孔器打出的4mm直径的管状植入材料制备的打孔圆片)植入右侧和左侧后臀部皮下组织，按随机顺序植入，每只动物总共植入两个样品(n＝4/组)。在植入五周之后取出样品，并且放入HistochoiceTM固定剂中(Amresco，Solon，OH)。样品由HaCaT条件培养基(HCM)修饰的ePTFE，HCM减去层粘连蛋白-5，层粘连蛋白-5，DCF-PBS或去核的，和非-修饰的ePTFE组成，它们以随机的顺序植入，每只动物总共植入四个样品(n＝4/组)。在修饰之后，皮下植入ePTFE圆片，一共植入十五只雄性129-SVJ小鼠体内。
纤维包裹评估
在植入物周围形成的组织囊的评估是对第一个系列的植入物(HCM系列)进行的。在来自每一个H&E染色的切片的聚合物的腔或非腔边缘拍摄五张随机的图像，使用20倍物镜和索尼夜视镜照相机。使用基于计算机的计量形态学系统，根据它们相对ePTFE圆片的位置(腔或非腔)以及囊组织类型(纤维或细胞囊)对这些图像进行分类。层粘连蛋白5产生了可测量的非腔，腔和细胞效应。
表1
    皮下
    表面     厚度(微米)     细胞％
    HCM     无腔     58.6±5     6
    有腔     106±9     44
    HCM-层粘连蛋白     无腔     58.7±5     12
    有腔     89±10     34
    层粘连蛋白-5     无腔     46±4     0
    有腔     50±7     6
    DCF-PBS     无腔     45±3     0
    有腔     82±19     28
    未修饰的     无腔     61±6     0
    有腔     81±15     24
炎性反应
图4是F4/80阳性细胞(激活的巨噬细胞和单核细胞)与修饰的和非-修饰的ePTFE相关的炎性反应的图。F4/80阳性细胞与植入小鼠皮下组织的ePTFE相关。有关数值表示为每平方毫米的平均细胞数量。没有观察到在修饰的层粘连蛋白-5的存在和炎性细胞反应程度方面之间的方式。
组织学和免疫组织化学
图5a-5b是苏木精和曙红染色的包括来自小鼠皮下组织的ePTFE植入物的组织横截面的光学显微照片，所述移植物是未修饰过的或用HCM，层粘连蛋白-5耗尽的HCM，纯的层粘连蛋白-5，或DCS-PBS涂敷过的。线条等于25μm。可以观察到与HCM修饰的样品相关的增强了的细胞反应，其中，层粘连蛋白-5修饰的样品具有在它周围形成的薄的，相对无细胞的囊。
实施例2
二元蛋白涂层方法
将含有胺-活性和光-活性基团的杂合双功能聚丙烯酰胺试剂(HBPR，按照US 5,858,653的实施例9披露的方法制备)用于细胞外基质蛋白固定在ePTFE血管移植物上(4mm直线，CR.Bard，ImpraCorporation，Tempe，AZ)。基质蛋白是从以下来源获得的：牛胶原-I(Kensey Nash)，人胶原-IV(BD Biosciences)，人纤连蛋白(BDBiosciences)，小鼠层粘连蛋白-I(BD Biosciences)，和人层粘连蛋白-V(University of Arizona)。在移植物和试剂的所有操作期间使用了无菌技术。将植入物切成3.2cm长度。用外科缝合线将luer内螺纹管接头配件(Small Parts，Inc.)固定在移植物的每一端。通过在异丙醇(IPA)中浸泡20分钟对移植物进行去核(从移植物的间隙中除去滞留的空气)，然后将移植物放入脱气的Dulbecco′s无阳离子磷酸盐缓冲盐水(DCF-PBS)，pH7.4中。将移植物从DCF-PBS中取出，使多余的PBS滴完，并且将所述移植物放入HBPR溶液(10mg/ml，溶解在50％IPA/水)中。30分钟之后，将移植物从HBPR溶液中取出，干燥(大约1.5小时)，并且用水银弧光地灯(在320-340nm波长下发光强烈)照射3分钟。再次按以前披露的方法对移植物进行去核。将来自含有两种不同蛋白的单一溶液的基质蛋白涂在移植物上，所述蛋白溶解在0.1M碳酸盐/碳酸氢盐(CBC)缓冲液，pH9.0(参见表1)中。对移植物的远端进行封堵，并且使用注射器和4-通道凸模滑动活塞(Cole-Parmer)迫使12ml蛋白溶液通过所述移植物。让HBPR-修饰的移植物与所述蛋白在4℃下反应过夜。然后用DCF-PBS简单地漂洗所述移植物，并且评估蛋白含量和生物活性(体外细胞粘着)。
表2
二元蛋白涂层溶液 涂层浓度(μg/ml)
胶原I/纤连蛋白 10/25
胶原I/层粘连蛋白V 10/2.5
胶原I/层粘连蛋白I 10/20
胶原IV/层粘连蛋白I 5/20
层粘连蛋白I/纤连蛋白 20/25
免疫荧光染色方法
为了证实所述蛋白在涂层中的存在，采用了免疫荧光染色方法。使用了以下抗体：兔抗-胶原-I(Rockland，Inc.)，小鼠抗-人胶原-IV(Chemicon)，兔抗-小鼠层粘连蛋白-I(Sigma)，小鼠抗-人层粘连蛋白-V(Transduction Laboratories)，兔抗-人纤连蛋白(Sigma)，山羊抗-兔Texas Red(Rockland，Inc.)，抗-小鼠AlexaFluor 350(Molecular Probes)，和山羊抗-小鼠Cy3(JacksonLaboratories)。切割移植物样品，并且放入12×75mm塑料试管。然后用溶解在tris-缓冲盐水(TBS)中的2ml 1.5％(w/v)BSA封闭样品，所述缓冲液含有0.05％Tween-20，封闭是在定轨摇床上在室温下进行20分钟。然后，样品与0.4ml一级抗体在DCF-PBS中，在室温下，在定轨摇床上培养1小时。然后，所有移植物用2ml DCF-PBS洗涤3次，每次15分钟，同时在定轨摇床上摇晃。样品与0.4ml二级抗体(荧光缀合物)在DCF-PBS中，在室温下在定轨摇床上培养1小时。然后再次按上述方法用DCF-PBS洗涤样品。用荧光显微镜，使用20倍物镜对有腔移植物进行成像。所有数字图像参数(对比度，亮度等)都相对HBPR对照统一化。
免疫荧光染色结果
用HBPR试剂进行免疫荧光染色，证实了胶原-I和层粘连蛋白-I是在涂敷到移植物上的二元蛋白检测到的。在其他染色试验中，检测了胶原-I和层粘连蛋白-V。观察到了其他二元蛋白涂层的类似结果(表3)。
表3
    HBPR/蛋白涂层     荧光存在度
    单蛋白涂层     COL IV     +
    COL I     +
    LM I     +
    FN     -
    LM V     +
    双蛋白涂层     LM I/FN     +
    +
    COL IV/LM I     +
    +
    COL I/FN     +
    +
    COL I/LM I     +
    +
    COL I/LM V     +
    +
细胞粘着分析
试验了移植物的急性细胞粘着，以便评估每一种蛋白涂层的生物活性。分离牛大动脉内皮细胞(BAECs)并且以1×106细胞/ml的密度重新悬浮在培养基中(10代或以下)。将活塞连接在试验移植物的近端，使远端开放。用注射器将0.75ml的充分混合的细胞悬浮液立即输入所述活塞，直到在远端看见有效的液体弯月面。封闭所述活塞，并且在所述远端加盖。然后将移植物放入培养箱在37℃和5％CO2中培养30分钟。将移植物从培养箱中取出，并且将luer配件从所述近端和远端切除。用剪刀进行纵向切割，以便打开所述移植物。用镊子固定移植物末端，在DCF-PBS中洗涤所述移植物大约5秒。移植物在4℃下，在用去离子水配制的8％多聚甲醛固定过夜。然后用4′，6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI，Sigma-Aldrich，Milwaukee，WI)对移植物进行染色，并且用荧光显微镜获取图像。用20倍物镜获得每一个移植物的八个视野。确定细胞数量并且加以平均。
细胞粘着结果
与仅有HBPR相比(图6)，五种二元蛋白涂层中的四种将细胞粘着增强了5-11倍。HBPR LMI/FN不能增强细胞粘着(图7)。
实施例3
大鼠植入物
体内研究评估了与用试剂和蛋白涂层涂敷的ePTFE圆片相关的伤口愈合和炎症。ePTFE圆片(直径4mm，(4mm直线，CR.Bard，Impra Corporation，Tempe，AZ.A光反应性共聚物(HBPR)是按照US 5,858,653的实施例9所述方法制备的。评估了以下样品：未涂敷的ePTFE，HBPR本身，HBPR胶原-I，HBPR层粘连蛋白-I，HBPR层粘连蛋白-V，HBPR胶原-I/层粘连蛋白-I，和HBPR胶原-I/层粘连蛋白-V，光胶原I和光层粘连蛋白1。所述层粘连蛋白和胶原样品是从实施例2所述来源获得的。光胶原1和光层粘连蛋白1是通过US5,744,515的实施例1所述方法制备的。所不同的是胶原1或层粘连蛋白1是取代过的，是为了本实施例而专门制备的。HBPR和蛋白样品的涂敷方法如实施例2所述，所不同的是胶原I/层粘连蛋白V的例子是以10/5.0μg/ml的浓度制备的。在4周结束时，对动物进行麻醉，并且切除所述圆片，并且放入Histochoice固定剂。在收获材料之后用大剂量(100mg/kg)的戊巴比妥对动物实施安乐死。对圆片进行切片，放在载玻片上，并且用H&E染色，并且用GS-1进行免疫组织化学染色。对ePTFE圆片进行外殖和加工用于组织学分析。分析ePTFE移植物材料的每一个圆片的移植物周围血管发生和新血管形成。
能最有效地支持多孔材料(在这里它是ePTFE)的新血管形成的处理是HBPR胶原-I/层粘连蛋白-I-V和光层粘连蛋白1。光胶原1和HBPR胶原-I能支持表面血管发生，但是不支持充分的新血管形成。未涂敷的ePTFE表现出最低血管发生和最低新血管形成。HBPR层粘连蛋白-V表现出的新血管形成超过了对照，但是小于光层粘连蛋白1。
实施例4
评估了HBPR/蛋白-修饰的(HBPR COLI/LM5等)冠状支架(3×8mm)在新西兰白兔的髂动脉中的愈合反应。将所述支架卷曲在气囊导管(3×15mm)上，并且用环氧乙烷消毒。然后将所述支架，在一个髂动脉中的试验支架和在相对的动脉中的裸金属支架对照展开在新西兰白兔体内。所述支架是在7，28和90天移出的，并且通过光学和扫描电子显微术评估。将移出的支架纵向切成1/2长度，并且进行处理以便进行组织学分析。在支架的一半上进行常规组织病理学检查，使用到支架/血管界面的近端和远端血管的石蜡切片以及来自中间支架/血管部位的塑料包埋的切片。进行合适的苏木精和曙红(H&E)，Masson′s三色和弹性Van Gieson或等同物的染色。特别强调内皮化，新内膜厚度，炎症，腔狭窄百分比，内膜纤维蛋白含量。为了证实内皮化和血栓形成程度，每一个支架的其余1/2进行处理，以便进行扫描电子显微术分析。

Claims (28)

1.导致与可植入的医学制品的表面涂层相关的血管形成的方法，包括以下步骤：
·将所述医学制品植入到对象体内，所述涂层包括层粘连蛋白-5、它的活性部分或它的结合成分；和
·将所述医学制品保持在对象体内，保持时间足以导致与涂敷表面相关的血管形成。
2.如权利要求1的方法，其中，所述植入步骤包括将所述医学制品输送到对象的血管内位置。
3.如权利要求1的方法，其中，所述维持步骤导致了在可植入的医学制品上形成了厚度小于100mm的无细胞纤维囊。
4.如权利要求1的方法，其中，所述维持步骤导致了在所述可植入的医学制品上形成厚度小于75mm的无细胞纤维囊。
5.导致与可植入的医学制品的表面涂层相关的血管形成的方法，包括以下步骤：
·将所述医学制品植入到对象体内，所述涂层包括
○层粘连蛋白、它的活性部分或它的结合成分，和
○胶原、它的活性部分或它的结合成分，
将所述医学制品保持在对象体内，保持时间足以导致与涂敷表面相关的血管形成.
6.具有涂层的可植入的医学制品，包括
·第一成分，包括层粘连蛋白、它的活性部分或它的结合成分，和
·第二成分，包括粘着因子、它的活性部分或它的结合成分，
其中，所述涂层还包括聚合物成分，起反应以形成包括所述聚合物成分的层的第一基团，起反应以将第一和第二成分结合在聚合物成分上的第二基团。
7.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第一成分包括分子量小于500kDa的层粘连蛋白。
8.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第一成分包括层粘连蛋白-5。
9.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第一成分包括层粘连蛋白-5的α3链。
10.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第一成分包括层粘连蛋白-5的α3链的LG3序列。
11.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第一成分包括选自下列一组的层粘连蛋白多肽序列：PPFLMLLKGSTR，LAIKNDNLVYVY，DVISLYNFKHIY，TLFLAHGRLVFM，LVFMFNVGHKKL和NSFMALYLSKGR。
12.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第一成分包括蛋白酶-修饰的层粘连蛋白-5。
13.如权利要求12的可植入的医学制品，其中，所述第一成分包括金属蛋白酶-修饰的层粘连蛋白-5。
14.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第一成分包括层粘连蛋白-1。
15.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第二成分包括胶原、它的活性部分或它的结合成分。
16.如权利要求15的可植入的医学制品，其中，所述第二成分包括胶原I、它的活性部分或它的结合成分。
17.如权利要求6的可植入的医学制品，包括多孔部分。
18.如权利要求17的可植入的医学制品，其中，所述多孔部分与移植物，鞘或护套结合。
19.如权利要求17的可植入的医学制品，其中，所述多孔部分包括合成疏水性聚合材料。
20.如权利要求19的可植入的医学制品，其中，所述多孔部分包括ePTFE。
21.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述聚合成分包括合成聚合物。
22.如权利要求21的可植入的医学制品，其中，所述合成聚合物是丙烯酰胺聚合物。
23.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第一基团包括光反应性基团。
24.如权利要求6的可植入的医学制品，其中，所述第二基团包括胺反应性基团。
25.可植入的医学制品，包括稳定去核的多孔部分。
26.如权利要求25的可植入的医学制品，其中，所述多孔部分包括包含合成聚合物的涂层。
27.如权利要求26的可植入的医学制品，其中，所述合成聚合物包括侧挂光反应性基团。
28.制备包括稳定去核的多孔部分的可植入的医学制品的方法，包括以下步骤：
·使所述多孔部分去核；和
·在所述多孔部分的表面上形成涂层，所述涂层包括合成聚合物。
CNA2006800124440A 2005-02-23 2006-02-23 具有层粘连蛋白涂层的可植入的医学制品和使用方法 Pending CN101160144A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US65557605P 2005-02-23 2005-02-23
US60/655,576 2005-02-23

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101160144A true CN101160144A (zh) 2008-04-09

Family

ID=36782284

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2006800124440A Pending CN101160144A (zh) 2005-02-23 2006-02-23 具有层粘连蛋白涂层的可植入的医学制品和使用方法

Country Status (6)

Country Link
US (2) US20060210603A1 (zh)
EP (1) EP1853328A2 (zh)
JP (1) JP2008531125A (zh)
CN (1) CN101160144A (zh)
CA (1) CA2598696A1 (zh)
WO (1) WO2006091675A2 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103037911A (zh) * 2010-04-08 2013-04-10 矽瑞奥科技公司 具有微孔表面层的植入式医学装置及降低针对所述装置的异物反应的方法
CN106714855A (zh) * 2014-06-17 2017-05-24 莱顿学术医院 原位组织工程
CN112891631B (zh) * 2021-01-29 2021-12-03 江南大学 一种植物源导管及其在修复神经损伤中的应用

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR0010055A (pt) 1999-04-26 2002-04-09 Gmp Vision Solutions Inc Dispositivo de derivação e uso do mesmo
US7220276B1 (en) * 2000-03-06 2007-05-22 Surmodics, Inc. Endovascular graft coatings
US7867186B2 (en) 2002-04-08 2011-01-11 Glaukos Corporation Devices and methods for treatment of ocular disorders
US6638239B1 (en) 2000-04-14 2003-10-28 Glaukos Corporation Apparatus and method for treating glaucoma
US7431710B2 (en) 2002-04-08 2008-10-07 Glaukos Corporation Ocular implants with anchors and methods thereof
CA2683224C (en) 2001-04-07 2014-12-02 Glaukos Corporation System and methods thereof for treatment of ocular disorders
US7331984B2 (en) 2001-08-28 2008-02-19 Glaukos Corporation Glaucoma stent for treating glaucoma and methods of use
US7981908B2 (en) * 2005-05-11 2011-07-19 Vecta, Ltd. Compositions and methods for inhibiting gastric acid secretion
JP4981888B2 (ja) * 2006-04-07 2012-07-25 ノヴァリックス リミテッド 静脈ナビゲーション装置
EP2037839A2 (en) * 2006-07-07 2009-03-25 SurModics, Inc. Implantable medical articles having pro-healing coatings
CA2668954C (en) 2006-11-10 2020-09-08 Glaukos Corporation Uveoscleral shunt and methods for implanting same
EP2104467A4 (en) * 2006-12-29 2012-06-20 Univ Ohio State Res Found SYSTEMS FOR IMPROVING MATERIAL EXCHANGE WITH AN IMPLANT
WO2008094706A2 (en) 2007-02-01 2008-08-07 Cook Incorporated Closure device and method of closing a bodily opening
US8617205B2 (en) 2007-02-01 2013-12-31 Cook Medical Technologies Llc Closure device
EP2022511A1 (en) * 2007-08-06 2009-02-11 Corlife GbR Bioactive coating for an implantable device or bioprosthesis
US20090117166A1 (en) * 2007-08-15 2009-05-07 David Myung Sequential coupling of biomolecule layers to polymers
US8025495B2 (en) * 2007-08-27 2011-09-27 Cook Medical Technologies Llc Apparatus and method for making a spider occlusion device
US8734483B2 (en) * 2007-08-27 2014-05-27 Cook Medical Technologies Llc Spider PFO closure device
US8308752B2 (en) * 2007-08-27 2012-11-13 Cook Medical Technologies Llc Barrel occlusion device
US20090062838A1 (en) * 2007-08-27 2009-03-05 Cook Incorporated Spider device with occlusive barrier
DE102010023837A1 (de) * 2010-06-07 2011-12-08 Eberhard-Karls-Universität Tübingen Universitätsklinikum Isolierung von mesenchymalen Stammzellen
WO2012051489A2 (en) 2010-10-15 2012-04-19 Cook Medical Technologies Llc Occlusion device for blocking fluid flow through bodily passages
US9861814B2 (en) * 2010-12-23 2018-01-09 Medtronic, Inc. Medical electrical lead having biological surface and methods of making and using same
US10940167B2 (en) 2012-02-10 2021-03-09 Cvdevices, Llc Methods and uses of biological tissues for various stent and other medical applications
US9173775B2 (en) 2012-03-26 2015-11-03 Glaukos Corporation System for delivering multiple ocular implants
AU2014214700B2 (en) 2013-02-11 2018-01-18 Cook Medical Technologies Llc Expandable support frame and medical device
US9592151B2 (en) 2013-03-15 2017-03-14 Glaukos Corporation Systems and methods for delivering an ocular implant to the suprachoroidal space within an eye
US10517759B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Glaukos Corporation Glaucoma stent and methods thereof for glaucoma treatment
US11571112B2 (en) 2014-01-07 2023-02-07 The General Hospital Corporation Method and apparatus for recording microscopic images from within a living person or organism using an implantable device
US20150342875A1 (en) 2014-05-29 2015-12-03 Dose Medical Corporation Implants with controlled drug delivery features and methods of using same
US10507101B2 (en) 2014-10-13 2019-12-17 W. L. Gore & Associates, Inc. Valved conduit
US11925578B2 (en) 2015-09-02 2024-03-12 Glaukos Corporation Drug delivery implants with bi-directional delivery capacity
US11351058B2 (en) 2017-03-17 2022-06-07 W. L. Gore & Associates, Inc. Glaucoma treatment systems and methods
US11116625B2 (en) 2017-09-28 2021-09-14 Glaukos Corporation Apparatus and method for controlling placement of intraocular implants
US11678983B2 (en) 2018-12-12 2023-06-20 W. L. Gore & Associates, Inc. Implantable component with socket

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4973493A (en) * 1982-09-29 1990-11-27 Bio-Metric Systems, Inc. Method of improving the biocompatibility of solid surfaces
US5512329A (en) * 1982-09-29 1996-04-30 Bsi Corporation Substrate surface preparation
US4979959A (en) * 1986-10-17 1990-12-25 Bio-Metric Systems, Inc. Biocompatible coating for solid surfaces
US5263992A (en) * 1986-10-17 1993-11-23 Bio-Metric Systems, Inc. Biocompatible device with covalently bonded biocompatible agent
US5211657A (en) * 1988-11-07 1993-05-18 The United States Government As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Laminin a chain deduced amino acid sequence, expression vectors and active synthetic peptides
LU87396A1 (fr) * 1988-11-22 1990-06-12 Oreal Nouvelles metaphenylenediamines trialcoxy-substituees,leur procede de preparation,et leur utilisation en tant que coupleurs pour la teinture d'oxydation des fibres keratiniques et en particulier des cheveux humains
US5266328A (en) * 1990-08-27 1993-11-30 Regents Of The University Of Minnesota Laminin a chain polypeptides from the carboxy terminal globular domain
EP0531547B1 (en) * 1991-03-29 1999-06-02 Vascular Graft Research Center Co., Ltd. Composite artificial blood vessel
US5278018A (en) * 1991-05-22 1994-01-11 Xerox Corporation Magnetic toner compositions containing charge enhancing additive particles
US5500013A (en) * 1991-10-04 1996-03-19 Scimed Life Systems, Inc. Biodegradable drug delivery vascular stent
US5414075A (en) * 1992-11-06 1995-05-09 Bsi Corporation Restrained multifunctional reagent for surface modification
DE69527141T2 (de) * 1994-04-29 2002-11-07 Scimed Life Systems Inc Stent mit kollagen
US5665114A (en) * 1994-08-12 1997-09-09 Meadox Medicals, Inc. Tubular expanded polytetrafluoroethylene implantable prostheses
AU720963B2 (en) * 1995-05-26 2000-06-15 Surmodics, Inc. Method and implantable article for promoting endothelialization
AU726819B2 (en) * 1996-03-29 2000-11-23 Desmos, Inc. Cellular attachment to laminin 5-coated trans-epithelial appliances
US6121027A (en) * 1997-08-15 2000-09-19 Surmodics, Inc. Polybifunctional reagent having a polymeric backbone and photoreactive moieties and bioactive groups
US5858653A (en) * 1997-09-30 1999-01-12 Surmodics, Inc. Reagent and method for attaching target molecules to a surface
US6241691B1 (en) * 1997-12-05 2001-06-05 Micrus Corporation Coated superelastic stent
US6221425B1 (en) * 1998-01-30 2001-04-24 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Lubricious hydrophilic coating for an intracorporeal medical device
ES2323662T3 (es) * 1998-06-05 2009-07-22 Organogenesis Inc. Protesis de injerto vascular producidas por bioingenieria.
WO2000066731A2 (en) * 1999-04-30 2000-11-09 Biostatum, Inc. Recombinant laminin 5
US6703363B1 (en) * 1999-04-30 2004-03-09 Biostratum, Inc. Recombinant laminin 5
EP1088564A1 (en) * 1999-09-30 2001-04-04 Orbus Medical Technologies, Inc. Intraluminal device, coating for such device, as well as a method for preparing the intraluminal device
AU2399502A (en) * 2000-11-14 2002-05-27 R Labs Bvi Nv Cross-linked hyaluronic acid-laminin gels and use thereof in cell culture and medical implants
US7332330B2 (en) * 2001-09-11 2008-02-19 Renamed Biologics, Inc. Device for maintaining vascularization near an implant
JP3829193B2 (ja) * 2001-09-25 2006-10-04 独立行政法人科学技術振興機構 基底膜標品又は人工組織
US20030077312A1 (en) * 2001-10-22 2003-04-24 Ascher Schmulewicz Coated intraluminal stents and reduction of restenosis using same
CA2476653C (en) * 2002-02-21 2009-01-27 Encelle, Inc. Cross-linked bioactive hydrogel matrices
JP2004024616A (ja) * 2002-06-26 2004-01-29 Jsr Corp 再狭窄の少ないステント

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103037911A (zh) * 2010-04-08 2013-04-10 矽瑞奥科技公司 具有微孔表面层的植入式医学装置及降低针对所述装置的异物反应的方法
CN103037911B (zh) * 2010-04-08 2015-07-15 矽瑞奥科技公司 具有微孔表面层的植入式医学装置及降低针对所述装置的异物反应的方法
CN106714855A (zh) * 2014-06-17 2017-05-24 莱顿学术医院 原位组织工程
CN112891631B (zh) * 2021-01-29 2021-12-03 江南大学 一种植物源导管及其在修复神经损伤中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CA2598696A1 (en) 2006-08-31
WO2006091675A2 (en) 2006-08-31
WO2006091675A3 (en) 2007-06-14
EP1853328A2 (en) 2007-11-14
US20060210603A1 (en) 2006-09-21
JP2008531125A (ja) 2008-08-14
US20110244014A1 (en) 2011-10-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101160144A (zh) 具有层粘连蛋白涂层的可植入的医学制品和使用方法
McKenna et al. Mechanical property characterization of electrospun recombinant human tropoelastin for vascular graft biomaterials
Wu et al. Coculture of endothelial and smooth muscle cells on a collagen membrane in the development of a small-diameter vascular graft
EP2999494B1 (en) Anti-thrombogenic grafts
US8017396B2 (en) Cellulose based heart valve prosthesis
US20080063627A1 (en) Tissue graft materials containing biocompatible agent and methods of making and using same
US20110151564A1 (en) Method for proliferation of cells on polyelectrolyte multilayer films and use thereof, particularly for the preparation of cellular biomaterials
CN107617126A (zh) 一种多孔材料的表面修饰方法及应用
JP2005532094A (ja) 人工角膜
JP2007532187A (ja) 生物活性物質のためのコーティング組成物
Yang et al. Polyzwitterion-crosslinked hybrid tissue with antithrombogenicity, endothelialization, anticalcification properties
JP2003531685A (ja) 脱細胞化脈管補綴物
Li et al. Manufacture and property research of heparin grafted electrospinning PCU artificial vascular scaffolds
CN108601863A (zh) 用于优化的患者特异性组织工程化血管移植物的系统和方法
Shan et al. Application of heparin/collagen‐redv selective active interface on ePTFE films to enhance endothelialization and anticoagulation
CN113304327B (zh) 一种抗凝血的密网支架及其制备方法
Li et al. Evaluation of 1‐mm‐diameter endothelialized dense collagen tubes in vascular microsurgery
WO2020020089A1 (zh) 一种特异性抗体的用途、一种植入医疗器械及其制备方法
CN100364620C (zh) 人造血管胶原蛋白预凝涂层
WO2018023840A1 (zh) 一种人造血管及其制备方法
West-Livingston et al. Antibody-conjugated electrospun vascular scaffolds to enhance in situ endothelialization
WO2012121507A2 (ko) 혈관내피 전구세포를 선택적으로 포획할 수 있는 스텐트 및 이의 제조 방법
WO2017158148A1 (en) Polymers and uses thereof in manufacturing of 'living' heart valves
Cui et al. In situ endothelialization promoted by SEMA4D and CXCL12 for titanium-based biomaterials
WO2020020090A1 (zh) 一种特异性抗体的用途、一种植入医疗器械及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20080409