CN101158665B - 前列地尔乳剂的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种前列地尔乳剂的测定方法，用于测定前列地尔乳剂中的有效成分前列地尔及杂质前列腺素A₁的含量。本发明先用含醇的有机混合溶剂进行破乳，再用高效液相色谱法测定前列地尔和前列腺素A₁的含量。该方法操作简便易行、破乳完全、能有效控制产品质量，与现有技术相比，本方法更经济、快捷、准确，易于操作，既可用于前列地尔乳剂的质量检测，也可用于生产过程中的中间体检测。

Description

前列地尔乳剂的测定方法

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体地说是一种前列地尔乳剂的测定方法，用于测定前列地尔乳剂中的有效成分前列地尔及杂质前列腺素A₁的含量。

背景技术

前列地尔，又称前列腺素E₁(PGE₁)，英文名：Alprostadi(Prostaglandin E₁)，其化学名称为：11a，15(S)-双羟基-9-羰基-13-反前列烯酸。分子式：C₂₀H₃₄O₅，其结构式为：

前列地尔具有广泛的药理活性：能舒张血管，改善末梢循环；抑制血小板聚集，防止血栓素A₂形成；保护血小板，抑制动脉粥样硬化斑块的形成、能扩张外周和冠脉血管及免疫复合物的作用；保护缺血性心肌，缩小梗塞面积；保护消化道黏膜细胞；抑制胃肠道分泌及刺激肠和子宫平滑肌；舒张海绵体平滑肌，加速阴茎动脉血流等。可以治疗①急性心肌梗塞、血栓性疾病，如血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化症、雷诺氏综合征、视网膜闭塞症等；冠心病、克山病引起的心绞痛、心力衰竭。②阴茎海绵体注射本品适用于治疗神经性、血管性、心因性或混合性勃起功能障碍。阴茎海绵体注射本品适用于辅助其他方法诊断勃起功能障碍等。

前列地尔乳剂是将PGE₁溶解于大豆油中，在磷脂类乳化剂作用下，在高压均质机中乳化而成，市售的产品有前列地尔注射液(商品名：凯时，北京泰德制药有限公司生产)。如加入冻干支持剂，冷冻干燥，则可制成前列地尔冻干乳剂，使用时只需按需要量加水，水合振荡后复原为前列地尔乳剂，参见中国专利CN1195990A、CN1562041A。

控制前列地尔(PGE₁)及其有关物质前列腺素A₁(PGA₁)的含量是前列地尔乳剂质量标准的重要组成部分。在现有的分析技术和仪器设备条件下，能够准确检测上述物质已不是大问题，如高书文等采用紫外分光光度法测定注射用前列腺素E₁的含量(中国药品标准，2005，1(6)：11-12)，中国药典2005版采用高效液相色谱法测定注射用前列地尔中PGE₁的含量和PGA₁的限度。但对于前列地尔乳剂而言，其有效成分PGE₁的含量较低，仅为5μg/ml或5μg/支，且由于在制备过程中加入了较多的植物油及乳化剂，特别是前列地尔冻干乳剂，还加入了冻干支持剂，因此破乳困难，对测定干扰较大，在进行含量测定时必须对样品进行前处理。由此可见，进行前列地尔乳剂PGE₁和PGA₁含量测定的关键就在于解决破乳的问题。

在国家食品药品监督管理局公布的前列地尔注射液的国家药品标准WS₁-(X-041)2002Z中，破乳的方法是采用四氢呋喃和磷酸溶液，再通过固相萃取来富集乳剂中的PGE₁。由于PGE₁在酸性条件下不稳定，且固相萃取过程复杂、繁琐，数据重现性差，测量误差较大，在50℃减压蒸干溶剂也易破坏PGE₁，使其转化成PGA₁，造成样品的真实含量偏低而PGA₁含量偏大。在该标准中，PGA₁的含量规定为不得过3.0μg/ml。国家药品审评中心专家认为，按每支标示量5.0μg/ml理解，限度为60.0％，但通常杂质的限度不是这样计算的。一般按标准记载，供试样品量为2.5μg/ml，PGA₁对照品为2.0μg/ml，按目前标准限度3.0μg/ml计算，PGA₁相当于120％，样品全转化为PGA₁都合格，因此该方法和限度无法控制产品质量(国家药品审评中心2005年10月21日发布的电子刊物，网址：http://www.cde.org.cn/page/framelimit.cbs？ResName＝dzkw)。此外，固相萃取成本高，检验周期长，不利于生产过程控制(中间体检测)。

中国专利CN1823786A采用冷冻干燥法破乳，过程复杂，时间太长，需20-50小时，能耗较大，成本较高，用于样品的含量测定很困难，可操作性不强，也不能对生产过程进行控制。且一般检测单位没有冷冻干燥设备，不能采用此法测定，实用性不强。

因此，目前急需研究开发一种操作简便、破乳完全、能有效控制产品质量的前列地尔乳剂的测定方法。

发明内容

本发明的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种操作简便易行、破乳完全、能有效控制产品质量的前列地尔乳剂的测定方法。

本发明通过以下技术方案予以实施：前列地尔乳剂先用含醇的有机混合溶剂进行破乳，再用高效液相色谱测定样品中PGE₁和PGA₁的含量。

本发明所述含醇有机混合溶剂(破乳剂)，为两种有机溶剂的混合物。第一种为醇类，可以为单一的醇，也可以是一种以上醇的混合物，优选乙醇、异丙醇。第二种为烷烃、卤代烷烃或四氢呋喃。烷烃选自正己烷、庚烷、辛烷，卤代烷烃选自二氯甲烷、三氯甲烷。第一种和第二种有机溶剂的体积比为1∶0.1-1∶1。更优选的是异丙醇和正己烷按1∶0.3～0.5的体积比的混合物。

如样品为前列地尔冻干乳剂，则先加水溶解使复乳，再用有机混合溶剂破乳。

由于前列地尔乳剂中有效成分PGE₁的含量较低，采用柱后衍生可大大提高检测灵敏度，便于准确测定PGE₁和PGA₁的含量。在本发明的高效液相色谱测定中，采用十八烷基键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液(pH4.9)-乙腈(60∶40)为流动相；柱后反应液为氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管：反应管温度60℃；检测波长为278nm。按外标法以峰面积计算样品中PGE₁和PGA₁的含量。

具体技术方案如下：

供试品溶液的制备

前列地尔乳剂：精密量取前列地尔乳剂，置量瓶中，加含醇有机混合溶剂，振荡、超声处理后，加有机混合溶剂中相应的醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

前列地尔冻干乳剂：取前列地尔冻干乳剂，精密称定，置量瓶中，加水溶解使复乳，加含醇有机混合溶剂，振荡、超声处理后，加有机混合溶剂中相应的醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

对照品溶液的制备

前列地尔对照品溶液的制备取前列地尔对照品，精密称定，置量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，制成每1ml含前列地尔0.1mg的溶液，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，加破乳所用醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

前列腺素A₁对照品溶液的制备取前列腺素A₁对照品(以五氧化二磷为干燥剂，室温减压干燥1小时)精密称定，置棕色量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，制成每1ml含前列腺素A₁0.05mg的溶液，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，加破乳所用醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录VD)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合胶为填充剂，以0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.9)-乙腈(60∶40)为流动相；柱后反应液为1.0mol/L氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管；反应管温度60℃；检测波长为278nm。前列地尔峰与前列腺素A1峰的分离度应符合要求。

前列腺素A1含量测定精密量取前列腺素A1对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算。

前列地尔含量测定取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

本发明采用常用的有机溶剂的混合液体进行破乳，然后再用高效液相色谱进行检测，方法简单，操作简便易行，破乳完全。经方法学验证，本测定方法回收率高，重现性好。在测定过程中，PGE₁不易转化为PGA₁，试验结果表明，采用本方法测定的样品，PGA₁的含量很低，低于10％，说明本方法克服了现有技术的缺陷，能真实反映样品中PGE₁和PGA₁的含量，有效控制产品的质量。

与现有技术相比，本方法更经济、快捷、准确，易于操作，既可用于用于前列地尔乳剂的质量检测，也可对生产过程中的中间体进行检测，便于生产过程的控制。

附图说明

图1：前列地尔对照品HPLC图谱

图2：前列腺素A₁对照品HPLC图谱

图3：色谱条件及系统适用性试验HPLC图谱

图4：实施例120060301批按本发明的方法测定的HPLC图谱

图5：实施例120060301批按WS₁-(X-041)2002Z测定的HPLC图谱

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述，但不以任何形式限制本发明。

实施例1前列地尔冻干乳剂PGE1和PGA1含量测定

1、仪器、药品及试剂：

Agilent HP1100液相色谱仪，Pickering公司PCX5200柱后衍生器。前列地尔冻干乳剂：参照中国专利CN1195990A制备；前列地尔对照品，台湾永光化学工业股份有限公司提供，含量为99.5％；前列腺素A1对照品为USP对照品。乙腈、异丙醇、正己烷为B&J的色谱纯；磷酸二氢钾、氢氧化钾、无水乙醇为分析醇，重庆东方红试剂厂生产。

2、色谱条件及系统适用性试验

色谱柱为Agilent XBD-C18(250×4.0mm，5μm)色谱柱，以0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.9)(取磷酸二氢钾2.72g，加水使溶解，制成1000ml，摇匀，即得)-乙腈(60∶40)为流动相；柱后反应液为1.0mol/L氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管(V＝2.0ml)：反应管温度60℃；检测波长为278nm。前列地尔与前列腺素A1分离度为5.6，理论板数以前列地尔峰计算为5200。

3、溶液的制备

(1)供试品溶液的制备取本品适量(约相当于前列地尔10μg)，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解使复乳，加1ml破乳剂(异丙醇∶正己烷＝1∶0.5)，振荡2分钟，超声处理2分钟，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

(2)前列地尔对照品溶液的制备取前列地尔对照品约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，加异丙醇稀释刻度，摇匀，作为对照品溶液(前列地尔浓度约为1.0μg/ml)。

(3)前列腺素A1对照品溶液的制备取前列腺素A1对照品(以五氧化二磷为干燥剂，室温减压干燥1小时)约2.5mg，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇溶解，并稀释至刻度，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(前列腺素A1浓度为0.5μg/ml)。

4、测定

(1)前列腺素A1含量测定精密量取前列腺素A1对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算。

(2)前列地尔含量测定取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

5、结果

表1前列地尔注射液中PGE1和PGA1含量测定结果

从以上结果可以看出，同一产品，采用本发明的方法测定，PGA₁的含量很低，而按WS₁-(X-041)2002Z测定则PGA₁的含量较高，相应的PGE₁的含量下降。说明本发明的测定方法能不会导致PGE₁转化为PGA₁，真实地反应了样品中PGE₁和PGA₁的含量。

实施例2前列地尔注射液PGE₁和PGA₁含量测定

供试品溶液的制备：精密量取本品适量(约相当于前列地尔10μg)，置10ml量瓶中，加1ml破乳剂(异丙醇∶正己烷＝1∶0.3)，振荡2分钟，超声处理2分钟，加异丙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

其余同实施例1。

测定结果：PGE₁的含量为110.2％，PGA₁的含量为5.8％。

实施例3前列地尔冻干乳剂PGE₁和PGA₁含量测定

破乳剂为乙醇∶正己烷＝1∶0.1，其余同实施例1。

测定结果：PGE₁的含量为105.6％，PGA₁的含量为2.1％。

实施例4前列地尔冻干乳剂PGE₁和PGA₁含量测定

破乳剂为异丙醇∶三氯甲烷＝1∶1，其余同实施例1。

测定结果：PGE₁的含量为104.3％，PGA₁的含量为2.0％。

实施例5前列地尔注射液PGE₁和PGA₁含量测定

破乳剂为异丙醇∶正庚烷＝1∶0.3，其余同实施例2。

测定结果：PGE₁的含量为109.8％，PGA₁的含量为5.9％。

实施例6前列地尔注射液PGE1和PGA1含量测定

破乳剂为甲醇异丙醇混合溶液(甲醇∶异丙醇＝0.2∶1)∶正己烷＝1∶0.8，其余同实施例2。

测定结果：PGE₁的含量为110.5％，PGA₁的含量为5.2％。

实施例7前列地尔注射液PGE1和PGA1含量测定

破乳剂为乙醇∶四氢呋喃＝1∶0.5，其余同实施例2。

测定结果：PGE₁的含量为108.5％，PGA₁的含量为6.0％。

Claims (4)

1.一种前列地尔乳剂的测定方法，其特征在于先用含醇的有机混合溶剂破乳，再用高效液相色谱法测定前列地尔和前列腺素A₁的含量，其中所述的含醇有机混合溶剂为两种有机溶剂的混合物，选自异丙醇-正己烷(1∶0.3～0.5)、乙醇-正己烷(1∶0.1)、异丙醇-三氯甲烷(1∶1)、异丙醇-正庚烷(1∶0.3)、甲醇-异丙醇-正己烷((甲醇∶异丙醇＝0.2∶1)∶正己烷＝1∶0.8)、乙醇-四氢呋喃(1∶0.5)，以上比例均为体积比。

2.按照权利要求1的测定方法，其特征在于破乳的方法为精密量取前列地尔乳剂，置量瓶中，加含醇有机混合溶剂，振荡、超声处理后，加有机混合溶剂中相应的醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

3.按照权利要求1的测定方法，其特征在于破乳的方法为取前列地尔冻干乳剂，精密称定，置量瓶中，加水溶解使复乳，加含醇有机混合溶剂，振荡、超声处理后，加有机混合溶剂中相应的醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

4.按照权利要求1的测定方法，其特征在于所述的高效液相色谱法采用十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.9)-乙腈(60∶40)为流动相；柱后反应液为1.0mol/L氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管：反应管温度60℃；检测波长为278nm；按外标法以峰面积计算样品中前列地尔和前列腺素A₁的含量。

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