CN106840799B - 一种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定方法,主要步骤包括:取干乳剂加水复乳,加入异丙醇、正已烷、破乳剂涡旋混合破乳,静置分层,取上清液备用;下层加入异丙醇‑正已烷萃取,涡旋混合后静置分层,取上清液备用;下层加正已烷萃取,涡旋混合后静置分层,取上清液备用。合并上清液,减压浓缩至干,得残留物作为供试品,对供试品溶液进行吸光度值测定后,计算获得干乳剂样品中甲氧基苯胺值。本发明适用于各种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定,可有效避免干乳剂中的辅料成分对测定的干扰,同时可避免由于干乳剂中油脂类物质含量极低,油脂类物质不易萃取等导致甲氧基苯胺值检测精密度差的问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种甲氧基苯胺值的测定方法,特别涉及一种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定方法。
背景技术
目前甲氧基苯胺值检测一般参照中国药典委员会《脂肪乳注射液(C14-24)质量标准》(征求意见稿2015年7月8日),但此方法一般用来测定脂肪乳中甲氧基苯胺值,不适用于干乳剂中的甲氧基苯胺值测定。存在如下缺点和不足:
干乳剂中油脂类物质含量极低,约为脂肪乳的1/7,未破乳状态下用溶剂直接溶解样品不能将油脂类物质萃取完全,检测所得甲氧基苯胺值比实际值低。且由于干乳剂中存在大量乳糖等辅料成分,在供试品溶液加入醋酸检测吸光值A0时,易产生浑浊,导致A0值比实际值高,从而导致甲氧基苯胺值偏低,有时甚至出现负值。
同时由于干乳剂中油脂类物质含量极低,在1.2g样品的条件下,用1cm比色皿在350nm检测出的吸光值差(A1-A2-A0)基本在0.02以下(一般吸光值差在0.1左右时,才能保证有较好的样品平行性),从而在检测样品平行时偏差很大。若通过提高样品量的方法使吸光值差提高到0.1左右,则需要干乳剂重量在6g左右(按每支干乳剂250mg计算,需要干乳剂24支),样品量巨大,样品处理非常困难,成本较高,不利于环境保护,检测结果易产生误差。
发明内容
本发明的目的在于提供一种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定方法,适用于各种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定,可有效避免干乳剂中的辅料成分对测定的干扰(容易造成甲氧基苯胺值为负),同时可避免由于干乳剂中油脂类物质含量极低,油脂类物质不易萃取等导致甲氧基苯胺值检测精密度差的问题。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定方法,包括如下步骤:
(1)取干乳剂样品加水复乳,加入异丙醇、正已烷、破乳剂涡旋混合破乳,静置分层,取上层清液备用,记为上清液I,剩余的下层记为下层I;
(2)向下层I加入异丙醇-正已烷混合液或异丙醇-异辛烷混合液萃取,涡旋混合后静置分层,取上层清液备用,记为上清液II,剩余的下层记为下层II;
(3)向下层II加正已烷或异辛烷萃取,涡旋混合后静置分层,取上层清液备用,记为上清液III;
(4)合并上清液I、上清液II及上清液III于浓缩瓶中,减压浓缩至干,用异丙醇-异辛烷混合液溶解残留物,加入无水Na2SO4除水后放入冰箱冷藏处理,取出离心,取上清液作为供试品溶液;
(5)对供试品溶液进行吸光度值测定后,计算获得干乳剂样品中甲氧基苯胺值。
作为优选,步骤(1)中,干乳剂样品:水:异丙醇:正已烷:破乳剂用量比为1.2g:9~11mL:5.8~6.5mL:13~17mL:2.2~2.8g。
作为优选,所述破乳剂为氯化钾、氯化钠、氯化钡、氯化镁中的一种或几种。
作为优选,所述异丙醇-正已烷混合液中异丙醇:正已烷的体积比为1.5:8.5~3:7之间。
作为优选,所述异丙醇-异辛烷混合液中异丙醇:异辛烷的体积比为2:8。作为优选,步骤(4)中,冰箱冷藏处理20min以上。
作为优选,步骤(5)对供试品溶液进行吸光度值测定的具体方法为:
精密量取供试品溶液3mL于10mL比色管中,精密添加冰醋酸0.6mL,密塞,摇匀,转移至比色皿中,以异丙醇-异辛烷混合液为空白对照,在350nm的波长处测定吸光度记为A0;
另精密量取供试品溶液、异丙醇-异辛烷混合液各3mL,分别置于两支10mL比色管中,各精密加0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液0.6mL,密塞,在3s内摇匀,立即准确计时,于23℃±3℃避光放置9min,转移至比色皿中,然后以异丙醇-异辛烷混合液为空白对照,在350nm的波长处分别测定,准确读取10min时的吸光度值,分别记为A1、A2。
作为优选,所用比色皿光程长度为5cm。
作为优选,甲氧基苯胺值计算公式为:甲氧基苯胺值=10×1.2×(A1-A2-A0)÷(5×m×B);
式中:m为称取的干乳剂重量(g);B为干乳剂中油类物质的含量系数;5为所用比色皿光程长度;10为样品稀释倍数;1.2为添加冰醋酸或0.25%4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液后的溶液稀释因子。
作为优选,所述干乳剂为前列地尔干乳剂、丹参酮冻干乳剂、盐酸布比卡因冻干乳剂。
本发明的有益效果是:适用于各种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定,可有效避免干乳剂中的辅料成分对测定的干扰(容易造成甲氧基苯胺值为负),同时可避免由于干乳剂中油脂类物质含量极低,油脂类物质不易萃取等导致甲氧基苯胺值检测精密度差的问题。
具体实施方式
下面通过具体实施例,对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中,若非特指,所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法,如无特别说明,均为本领域的常规方法。
总实施方案:
一种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定方法,
(1)取干乳剂样品加水复乳,加入异丙醇、正已烷、破乳剂涡旋混合破乳,静置分层,取上层清液备用,记为上清液I,剩余的下层记为下层I;干乳剂样品:水:异丙醇:正已烷:破乳剂用量比为1.2g:9~11mL:5.8~6.5mL:13~17mL:2.2~2.8g。所述破乳剂为氯化钾、氯化钠、氯化钡、氯化镁中的一种或几种。
(2)向下层I加入异丙醇-正已烷混合液(异丙醇:正已烷的体积比为1.5:8.5~3:7之间)或异丙醇-异辛烷混合液(异丙醇:异辛烷的体积比为2:8)萃取,涡旋混合后静置分层,取上层清液备用,记为上清液II,剩余的下层记为下层II;
(3)向下层II加正已烷或异辛烷萃取,涡旋混合后静置分层,取上层清液备用,记为上清液III;
(4)合并上清液I、上清液II及上清液III于浓缩瓶中,减压浓缩至干,用异丙醇-异辛烷混合液(体积比为2:8)溶解残留物,加入无水Na2SO4除水后放入冰箱冷藏处理20min以上,取出离心,取上清液作为供试品溶液;
(5)对供试品溶液进行吸光度值测定后,计算获得干乳剂样品中甲氧基苯胺值。
供试品溶液进行吸光度值测定的具体方法为:
精密量取供试品溶液3mL于10mL比色管中,精密添加冰醋酸0.6mL,密塞,摇匀,转移至比色皿(光程长度为5cm的微量比色皿)中,照紫外—可见分光光度法(中国药典2015版四部通则0401)测定,以异丙醇-异辛烷(2:8)混合液为空白对照,在350nm的波长处测定吸光度记为A0;
另精密量取供试品溶液、异丙醇-异辛烷(2:8)混合液各3mL,分别置于两支10mL比色管中,各精密加0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液0.6mL,密塞,在3s内摇匀,立即准确计时,于23℃±3℃避光放置9min,转移至比色皿(光程长度为5cm的微量比色皿)中,然后以异丙醇-异辛烷(2:8)混合液为空白对照,在350nm的波长处分别测定,准确读取10min时的吸光度值,分别记为A1、A2。
甲氧基苯胺值计算公式为:甲氧基苯胺值=10×1.2×(A1-A2-A0)÷(5×m×B);
式中:m为称取的干乳剂重量(g);B为干乳剂中油类物质的含量系数;5为所用比色皿光程长度;10为样品稀释倍数;1.2为添加冰醋酸或0.25%4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液后的溶液稀释因子。
本发明适用于各种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定,如前列地尔干乳剂、丹参酮冻干乳剂、盐酸布比卡因冻干乳剂等,以及主要成分含脂肪酸甘油酯类及脂肪酸类等其它干乳剂及冻干脂质体。
具体方案:
1.破乳:精密称取干乳剂1.2000g于50ml比色管中,加入10ml水涡旋混合使其复乳,复乳完全后,加入5.8ml异丙醇和15ml正已烷,再加入氯化钾2.5g,最后涡旋混合2min,静置30min以上分层,取上清液备用,记为上清液I。
2.异丙醇-正已烷(2:8)萃取:取出上清液I后,向比色管中加入15ml异丙醇-正已烷(2:8)涡旋混合70s,静置15min以上分层,取上清液备用,记为上清液II。
3.正已烷萃取:取出上清液II后,向比色管中加入正已烷15ml涡旋混合70s,静置15min以上分层,取上清液备用,记为上清液III。
4.供试品溶液制备:合并上清液I、II、III于250ml浓缩瓶中,于60℃减压浓缩至干,向浓缩瓶中精确加入10ml异丙醇-异辛烷(2:8),摇匀使残留物溶解。将溶液倒入装有3.0g无水Na2SO4的15ml离心管中,涡旋1min除水后,将离心管置于冰箱中冷藏20min以上。取出离心管,8000rpm离心10min,取上清液作为供试样品溶液。
5.供试品测定:精密量取供试品溶液3ml于10ml比色管中,精密添加冰醋酸0.6ml,密塞,摇匀,转移至比色皿(光程长度为5cm的微量比色皿)中,以异丙醇-异辛烷(2:8)为空白,在350nm的波长处测定吸光度(A0);另精密量取供试品溶液与异丙醇-异辛烷(2:8)各3ml,分别置两支10ml比色管中,各精密加0.25%4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液(临用新制)0.6ml,密塞,在3s内摇匀,立即准确计时,于23℃±3℃避光放置约9min,转移至比色皿(光程长度为5cm的微量比色皿)中,以异丙醇-异辛烷混合液为空白对照,在350nm的波长处分别测定,准确读取10min时的吸光度A1、A2。
甲氧基苯胺值按下式计算:
甲氧基苯胺值=10×1.2×(A1-A2-A0)÷(5×m×B);式中:m为称取的干乳剂重量(g);B为干乳剂中油类物质的含量系数;5为所用比色皿光程长度;10为样品稀释倍数;1.2为添加冰醋酸或0.25%4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液后的溶液稀释因子。
实施例1
准确称取相同批号注射用前列地尔干乳剂1.2000g于50ml比色管中,加入10ml水涡旋混合使其复乳,复乳完全后,加入5.8ml异丙醇和15ml正已烷,再加入氯化钾2.5g,最后涡旋混合2min,静置30min以上分层,取上清液备用,记为上清液I。
取出上清液I后,向比色管中加入15ml异丙醇-正已烷(2:8)涡旋混合70s,静置15min以上分层,取上清液备用,记为上清液II。
取出上清液II后,向比色管中加入正已烷15ml涡旋混合70s,静置15min以上分层,取上清液备用,记为上清液III。
合并上清液I、II、III于250ml浓缩瓶中,于60℃减压浓缩至干,向浓缩瓶中精确加入10ml异丙醇-异辛烷(2:8),摇匀使残留物溶解。将溶液倒入装有3.0g无水Na2SO4的离心管中,涡旋1min除水后,将离心管置于冰箱中冷藏20min以上。取出离心管,8000rpm离心10min,取上清液作为供试样品溶液。
精密量取供试品溶液3ml于10ml比色管中,精密添加冰醋酸0.6ml,密塞,摇匀,转移至比色皿中,以异丙醇-异辛烷(2:8)为空白,在350nm的波长处测定吸光度(A0);另精密量取供试品溶液与异丙醇-异辛烷(2:8)各3ml,分别置两支10ml比色管中,各精密加0.25%4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液(临用新制)0.6ml,密塞,在3s内摇匀,立即准确计时,于23℃±3℃避光放置约9min,转移至比色皿中,以异丙醇-异辛烷混合液(2:8)为空白对照,在350nm的波长处分别测定,准确读取10min时的吸光度A1、A2。
甲氧基苯胺值按下式计算:
甲氧基苯胺值=10×1.2×(A1-A2-A0)÷(5×m×B)
式中:m为称取的干乳剂重量(g);
B为干乳剂中油类物质的含量系数;
5为所用比色皿光程长度;
10为样品稀释倍数;
1.2为添加冰醋酸或0.25%4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液后的溶液稀释因子。
同时测定6份样品甲氧基苯胺值分别见表1:
表1
实施例2
实施例2与实施例1不同之处在于将破乳剂氯化钾更换为氯化钠,其它操作步骤与实施例1相同。具体数据见表2
表2
实施例3
实施例3与实施例1不同之处在于将萃取溶剂正已烷更换为异辛烷,其它操作步骤参数与实施例1相同。具体数据见表3
表3
实施例4-6
实施例4-6与实施例1不同之处在于将破乳时异丙醇5.8ml,正已烷15ml分别更换为异丙醇5.8ml,正已烷13ml;异丙醇6.2ml,正已烷15ml;异丙醇6.5ml,正已烷17ml。其它操作步骤参数与实施例1相同。具体数据见表4。
表4
实施例7-8
实施例7-8与实施例1不同之处在于添加异丙醇-正已烷混合液萃取时,异丙醇-正已烷的比例分别为1.5:8.5,3:7。其它操作步骤参数与实施例1相同。具体数据见表5。
表5
实施例9
实施例9与实施例1不同之处为在实验所称量的干乳剂中加入了1ml制备好的大豆油溶液,以测定大豆油的回收率(与纯大豆油溶液的A1-A2-A0值作比较),来验证实验的准确性,其它操作步骤参数与实例1相同。
大豆油溶液的制备(对照组):将注射用大豆油在电炉上加热20min,冷却后称量1.4000g大豆油,用正已烷溶解并定容至20ml。
大豆油(对照组)回收率计算:
式中:SD(样品+对照组)为添加了大豆油溶液干乳剂的(A1-A2-A0)值;
S(样品组)为干乳剂的(A1-A2-A0)值;
D为DZ(对照)测试溶液的(A1-A2-A0)值;
msd为添加大豆油使用液组干乳剂重量(样品+对照组);
ms为未添加大豆油组干乳剂重量(样品组)。
实施例9实验数据见表6
表6
实施例10-13
实施例10-13所用干乳剂与实施例1相同(仅生产批号不同),称样量、复乳用水量、氯化钾用量、正已烷用量、异丙醇用量与实施例1有所不同,其操作步骤与实施例1相同。实施例10-13各项目具体用量见表7。
表7
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案,并非对本发明作任何形式上的限制,在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
Claims (6)
1.一种干乳剂中甲氧基苯胺值的测定方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)取干乳剂样品加水复乳,加入异丙醇、正已烷、破乳剂涡旋混合破乳,静置分层,取上层清液备用,记为上清液I,剩余的下层记为下层I;其中,干乳剂样品:水:异丙醇:正已烷:破乳剂用量比为1.2g:9~11mL:5.8~6.5mL:13~17mL:2.2~2.8g;
(2)向下层I 加入异丙醇-正已烷混合液或异丙醇-异辛烷混合液萃取,涡旋混合后静置分层,取上层清液备用,记为上清液II,剩余的下层记为下层II;
(3)向下层II 加正已烷或异辛烷萃取,涡旋混合后静置分层,取上层清液备用,记为上清液III;
(4)合并上清液I、上清液II 及上清液III 于浓缩瓶中,减压浓缩至干,用异丙醇-异辛烷混合液溶解残留物,加入无水Na2SO4 除水后放入冰箱冷藏处理20min以上,取出离心,取上清液作为供试品溶液;
(5)对供试品溶液进行吸光度值测定后,计算获得干乳剂样品中甲氧基苯胺值;
其中,所述异丙醇-正已烷混合液中异丙醇:正已烷的体积比为1.5:8.5~3:7之间;所述异丙醇-异辛烷混合液中异丙醇:异辛烷的体积比为2:8。
2.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,所述破乳剂为氯化钾、氯化钠、氯化钡、氯化镁中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,步骤(5)对供试品溶液进行吸光度值测定的具体方法为:精密量取供试品溶液3mL 于10mL 比色管中,精密添加冰醋酸 0.6mL,密塞,摇匀,转移至比色皿中,以异丙醇-异辛烷混合液为空白对照,在350nm 的波长处测定吸光度记为A0;另精密量取供试品溶液、异丙醇-异辛烷混合液各3mL,分别置于两支10mL比色管中,各精密加0.25% 的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液0.6mL,密塞,在3s 内摇匀,立即准确计时,于23℃±3℃避光放置9min,转移至比色皿中,然后以异丙醇-异辛烷混合液为空白对照,在350nm 的波长处分别测定,准确读取10 min 时的吸光度值,分别记为 A1、A2。
4.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,所用比色皿光程长度为5cm。
5.根据权利要求3所述的测定方法,其特征在于,甲氧基苯胺值计算公式为:甲氧基苯胺值=10×1.2×(A1-A2-A0)÷(5×m×B);式中:m 为称取的干乳剂重量g;B 为干乳剂中油类物质的含量系数;5为所用比色皿光程长度;10 为样品稀释倍数;1.2 为添加冰醋酸或0.25% 4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液后的溶液稀释因子。
6.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,所述干乳剂为前列地尔干乳剂、丹参酮冻干乳剂、盐酸布比卡因冻干乳剂。
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