CN101156847B - 紫蓝素作为胰岛素增敏剂的用途 - Google Patents

Abstract

本发明将公开紫蓝素作为胰岛素增敏剂的用途及其制剂。具体地说，本发明所述紫蓝素的用途是在制备能改善肝病变的胰岛素增敏剂中的应用，及在制备能改善肾病变的胰岛素增敏剂中的应用；本发明所述紫蓝素作为胰岛素增敏剂的制剂是以紫蓝素为有效成分制备的能改善肝病变的胰岛素增敏剂，及以紫蓝素为有效成分制备的能改善肾病变的胰岛素增敏剂。

Description

紫蓝素作为胰岛素增敏剂的用途

(一)技术领域：

本发明涉及紫蓝素的新的用途，具体地说是紫蓝素在制备胰岛素增敏剂中的应用；本发明还涉及以紫蓝素为有效成分的制剂。

(二)背景技术：

近20年来，科学研究发现II型糖尿病、高血压、肥胖、非酒精性脂肪肝、心脑血管血栓性疾病属于代谢综合征，其共同基础为胰岛素抵抗。代谢综合征又称为胰岛素抵抗综合征。

随着环境和生活方式的变化，代谢综合征发病率高，增长趋势迅猛。如II型糖尿病，目前发病率比4年前增加30％，全球现有2.46亿患者，我国有4000万，预计2025年全球将达3.8亿，我国达到1亿；又如肥胖症，欧美60％的成人超重，我国超过20％，部分发达地区已达到50％；非酒精性脂肪肝在欧美的发病率超过20％，我国超过10％。代谢综合征的严重后果是心脑血管血栓性疾病，该疾病高居全球死亡原因的首位，全球因该病死亡的人数已达每年2500万。代谢综合征具有发病率、致残率和死亡率高，而其知晓率、就医率及控制率低的特点，已成为社会的沉重负担，严重影响人们的健康和生活质量。

代谢综合征目前缺乏长期有效、副作用少的治疗方法，根据代谢综合征的理论，其治疗策略应针对胰岛素抵抗，以防治动脉粥样硬化为中心；改善胰岛素敏感性，理论上是防治代谢综合征的关键。有关专家指出，胰岛素增敏剂将在II型糖尿病、高血压、非酒精性脂肪肝的治疗中发挥重要作用。目前，胰岛素增敏剂品种很少，以噻唑二烷酮类药物为首选，但这些药物中，有约25％原发性失效及导致肝损害、浮肿、增加体重、骨折、心衰等副作用；又由于这些药物上市不久，其疗效及安全性还有待进一步验证。因此，迫切需要新的胰岛素增敏剂，不损害乃至改善肝肾病变的胰岛素增敏剂尤为重要。

紫蓝素是一种具有杂环、多酚、氨基酸结构的化合物，分子式C₁₈H₁₇N₃₀₈，分子量403.1，结构式如下：

紫蓝素可从爵床科草本植物红丝线(Peristrophe baphica(Spreng.)Bremek)制备。本申请人申请的专利号为ZL03117188.5，名称为《紫蓝素化合物、其制备方法及其用途》的中国发明专利，公开了紫蓝素在制备防治乙型肝炎、糖尿病、抗指质过氧化药物或保健品中的应用，或作为着色剂的应用，但紫蓝素的胰岛素增敏作用，尤其是能同时改善肝肾病变的胰岛素增敏作用未见报道。

(三)发明内容：

本发明的一个目的是提供紫蓝素作为胰岛素增敏剂的用途。

本发明的另一个目的是提供以紫蓝素为有效成分制备的制剂。

本发明所述的紫蓝素，可通过现有的或其它可行的方法进行制备，优选采用本申请人在前申请的专利号为ZL03117188.5，名称为《紫蓝素化合物、其制备方法及其用途》的中国发明专利中所公开的制备方法。

本发明所述的紫蓝素作为胰岛素增敏剂的用途，具体地说，是紫蓝素在制备可改善肝病变的胰岛素增敏剂中的应用；是在制备可改善肾病变的胰岛素增敏剂中的应用；是在制备可同时改善肝、肾病变的胰岛素增敏剂中的应用。

本发明还包括以紫蓝素为有效成分，以常规的制剂工艺，单独使用或与其它药物配合使用制备成的能改善肝病变，或肾病变，或同时改善肝、肾病变的胰岛素增敏剂。

还可以将紫蓝素作为有效成分，以常规的制剂工艺，单独使用或与其它药物配合使用制备成在临床上可以使用的各种不同剂型的药物或保健品，如片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂等药学上可接受的剂型。

经申请人反复研究发现，本发明所述紫蓝素具有增加胰岛素敏感性，改善肝病变和肾病变，缓解肝脏脂肪变性的作用；在以紫蓝素作为胰岛素增敏剂使用时，推荐患者的口服剂量为每日60毫克紫蓝素，最好分2次服用，以2个月为一个疗程。

(四)具体实施方式：

实施例1：紫蓝素的制备

取山蓝属植物山蓝(Peristrophe baphia(Spreng.)Bremek.[Peristrophe roxbueghiana(schult)Bremek])鲜枝叶2kg，置于10L旋转蒸发器的圆底烧瓶中，快速冲入已沸腾3分钟(脱除溶解氧)的沸水8L，置于86℃水浴中。转动烧瓶使温度均匀，沸水直接与处于室温(22℃)下的山蓝物料接触，使物料在2分钟内升温到80℃。混合物料在86℃保温90分钟，倾出提取液，取出料渣；料渣加水5L，煮沸提取10分钟，过滤。合并上述2份提取液，得13.2L提取液(T001)；

将上述提取液(T001)加甲酸调节酸碱度至pH5.0，上Amberlite XAD-16大孔吸附树脂柱(1000g)，以纯净水10L洗涤，然后用35％乙醇洗脱，收集深紫红色洗脱液(T002)；

将上述洗脱液(T002)真空蒸发除去乙醇，加甲酸调节酸碱度至pH3.0，离心分离沉淀，得紫蓝素粗品(T003)。

将上述紫蓝素粗品(T003)悬浮于1L纯净水中，滴加氨水溶解，调节酸碱度至pH6.5，加2Mol/L氯化镁溶液200ml，重上Amberlite XAD-16大孔吸附树脂柱(经80％乙醇再生)，以0.2Mol/L氯化镁溶液5L洗涤，再以3L纯净水洗涤，然后以8％乙醇水溶液洗脱，收集深紫红色洗脱液(T004)；

将上述深紫红色洗脱液(T004)真空蒸发除去乙醇，浓缩，得浓缩液(T005)；

将浓缩液(T005)加甲酸调节酸碱度至pH3.0，析出胶状沉淀，再将其离心分离，得粗胶状物(T006)；

将上述粗胶状物(T006)悬浮于1L纯净水中，滴加氨水溶解，调节酸碱度至pH6.5，加2Mol/L氯化镁溶液200ml，重上Amberlite XAD-16大孔吸附树脂柱(经80％乙醇再生)，以0.2Mol/L氯化镁溶液5L洗涤，再以0.1％甲酸水5L洗涤，再以纯净水水5L洗涤，然后以35％乙醇水溶液洗脱，收集深红色洗脱液(T007)；

将上述深红色洗脱液(T007)真空蒸发除去乙醇，浓缩，得浓缩液(T008)；

将浓缩液(T008)加甲酸调节酸碱度至pH3.0，析出胶状沉淀，再将其离心分离，得粗冻胶状物(T009)；

将粗冻胶状物(T009)用0.1％稀氨水500ml溶解，离心取上清液，滴加88％甲酸酸化，再酸沉处理一次，得精冻胶状物(T010)；

将精冻胶状物加丙酮分散，以丙酮300ml洗涤，干燥，得到紫蓝素1.9g，纯度为91％。

实施例2：制备以紫蓝素为有效成分的胰岛素增敏剂

 称取5克以实施例1所述方法制备的紫蓝素，不添加任何辅料，装瓶即可。

实施例3：制备以紫蓝素为有效成分的紫蓝素胶囊

紫蓝素胶囊包括：囊心物和囊壳。其囊心物按重量百分比含有：13％的紫蓝素和87％淀粉。将淀粉干燥，过七号筛，称取20克备用；取3克紫蓝素与20克干淀粉混合均匀，过七号筛两次，分装入胶囊，共制100粒，每粒含30mg紫蓝素。

实施例4：以药效实验资料说明紫蓝素的作为胰岛素增敏剂的用途

1选用材料

1.1动物

瘦素受体缺陷自发糖尿病纯合子(db/db)小鼠及杂合子(db/+)小鼠，6～8周龄，雌雄各半，由国家遗传工程小鼠资源库提供，许可证号：SCXK(苏)-2005-0002。

1.2仪器及试剂

紫蓝素：由广西植物研究所提供，批号：20060919；

文迪雅(马来酸罗格列酮片)：葛兰素史克(天津)有限公司，4mg/片，批号：06060121；

葡萄糖：国药集团化学试剂有限公司，批号：F20060118；

CMC(羧甲基纤维素钠)：中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20020306；

全血血糖测定仪：GLUCOCARD^TMG Meter GT-1080(Arkray，Inc，Kyoto，Japan)；

血糖测定试纸条：G sensor GLUCOCARDTM，批号：6C5B01，6F5B01；

饲料：SPF级实验鼠颗粒饲料，江苏省协同医药生物工程责任有限公司，苏A饲生字20021009。

1.3紫蓝素的配制

CMC溶液的配制：称取CMC，加双蒸水配成2％的溶液，高温灭菌，冷冻保存备用；

紫蓝素母液的配制：称取360mg紫蓝素，用5％碳酸氢钠溶液1.0ml搅拌，加双蒸水至90ml，配成40mg/10ml溶液，0.22μm微孔滤膜过滤灭菌，冷冻避光保存备用，所得溶液称为溶液A；

紫蓝素高剂量的配制：取10ml溶液A，加无菌双蒸水至20ml，混合均匀后，加入无菌2％CMC溶液20ml，即得到10mg/10ml的供试验药液，冷冻避光保存备用；

紫蓝素低剂量的配制：取4ml溶液A，加无菌双蒸水至20ml，混合均匀后，加入无菌2％CMC溶液20ml，即得到4mg/10ml的供试验药液，冷冻避光保存备用；

马来酸罗格列酮的配制：用75％的酒精擦拭罗格列酮片铝塑泡罩，紫外光下照30min，于超净工作台中取8粒，无菌研磨，加入40ml无菌2％CMC及40ml双蒸水，配制成药物混悬液80ml。

1.4实验分组及给药方式

空白对照组：按10ml/kg体重灌胃1％CMC溶液。

模型对照组：按10ml/kg体重灌胃1％CMC溶液。

罗格列酮组：按10ml/kg体重灌胃马来酸罗格列酮片，剂量为4mg/kg。

高剂量组：按10ml/kg体重灌胃紫蓝素中剂量供试验药液，剂量为10mg/kg。

低剂量组：按10ml/kg体重灌胃紫蓝素低剂量供试验药液，剂量为4mg/kg。

1.5统计方法：

数理统计用t检验。

2实验方法：

选取6-8周龄db/+小鼠10只，作为空白对照组；

db/db纯合子小鼠，选出高血糖的小鼠30只，雌雄各半，随机分成3组，每组均为10只；

饲养环境为22±2℃，12小时昼夜交替。实验前测定空腹血糖及进行糖耐量实验，然后每组每天灌胃给予各相应药物一次，连续给药。给药六周后测空腹血糖及进行糖耐量实验。最后一次给药后，小鼠眼球后静脉丛取血，离心取血清，测定果糖胺及胰岛素；同时取小鼠的肾脏、肝脏、肠系膜脂肪及背侧褐色脂肪组织，称重并计算脏器系数及胰岛素敏感指数，用10％福尔马林固定，常规取材，脱水，石腊包埋。切片经HE染色光学显微镜观察肾脏、肝脏病变，其中肾脏及肝脏用于病理组织学分析。病理组织学评分标准为：

肾脏病变包括(1)肾小球系膜基质增生程度；(2)肾小管细胞有无变性，有无糖原沉积；(3)间质及肾盂有无炎症、纤维组织增生：(4)肾内小血管有无增厚及空泡变。根据病变由轻到重的程度分别记分为1分(轻度)，2分(中度)，3分(重度)，4分(极重度)，无明显病变为0分，累加所得分数，并计算出每组每只动物的均分(X±SD)，分值越低提示糖尿病肾病变程度越轻，药物治疗效果越好。

肝脏病变：(1)有无肝细胞变性、坏死；(2)有无中央静脉及肝窦扩张、瘀血；(3)肝内或门管区有无结缔组织增生及炎细胞浸润。根据病变由轻到重的程度分别记分为1分，2分，3分，4分，累加所得分数，并计算出每组每只动物的均分(X±SD)。

3实验结果：

3.1对小鼠血糖的影响

实验结果表明：在给药期间，模型对照组血糖值明显高于杂合子组，并且有显著性差异(P＜0.01)，罗格列酮组在给药第一周后血糖开始降低，随着时间的延长强度增强。紫蓝素高剂量组给药后血糖值也降低(表2)。

3.2紫蓝素的小鼠葡萄糖耐受实验

实验结果表明：给药前db/db小鼠的葡萄糖耐受与杂合子比较有显著不同，但db/db小鼠间无明显的差异。给药六周后，小鼠间的葡萄糖耐受有明显的变化；罗格列酮组小鼠血糖高峰明显降低；紫蓝素给药组对血糖高峰浓度没有影响，但给药1小时后血糖的下降速度加快，并且有显著性差异，实验结果见表1，表2。

表1紫蓝素对小鼠糖耐量(给药前)实验(mmol/L，n＝10，X±SD)

注：与杂合子比较^##P＜0.01

表2紫蓝素对小鼠糖耐量(给药后)实验(mmol/L，n＝10，X±SD)

注：与杂合子比较^##P＜0.01与模型对照组比较^*P＜0.05 ^**P＜0.01

3.3紫蓝素对小鼠血清胰岛素和果糖胺的影响

果糖胺(Fru)是表示血中总蛋白糖化率的指标，反映过去2周的平均血糖值。实验结果表明：模型对照组发病小鼠胰岛素浓度与未发病的杂合子组相比有很大程度的增加，形成高胰岛素血症，胰岛素敏感指数(ISI)有很大程度的降低。罗格列酮可明显降低小鼠血清中的胰岛素，同时提高胰岛素的敏感指数，有显著性差异(P＜0.01)。紫蓝素高剂量组也显著降低胰岛素的浓度，提高胰岛素的敏感指数，降低果糖胺的含量。实验结果见表3。

表3紫蓝素对小鼠血清胰岛素的影响(n＝10，X±SD)

注：与杂合子比较^##P＜0.01与模型对照组比较^*P＜0.05 ^**P＜0.01

3.4 紫蓝素对小鼠肝、肾病理组织学的影响

表4紫蓝素对小鼠肾脏组织学的影响(n＝10，X±SD)

注：与杂合子比较^##P＜0.01 与模型对照组比较^*P＜0.05 ^**P＜0.01

表5 紫蓝素对小鼠肝脏组织学的影响(n＝10，X±SD)

注：与杂合子比较^##P＜0.01 与模型对照组比较^*P＜0.05 ^**P＜0.01

实验结果表明：db/db小鼠糖尿病肾病模型对照组的组织病理学表现为：肾小球系膜区增宽，基质增多，HE染色时呈深伊红染；肾小管、肾间质无明显病变；肝细胞胞浆内出现大量脂滴空泡。而紫蓝素应用后能减轻糖尿病肾病的病变程度，以紫蓝素高剂量组效果最好，有显著性差别；紫蓝素能显著减轻肝脂变的程度，其中以紫蓝素高剂量组最好。罗格列酮与模型对照无显著差异。

4结论

由上述实验数据表明，紫蓝素对db/db小鼠的血糖有降低作用，可以改善糖尿病的高胰岛素血症、高血糖、胰岛素抵抗、糖化血红蛋白及果糖胺升高等血液学指标；通过病理组织学分析表明，紫蓝素对肾及肝的病理学有改善作用，罗格列酮未见对肝的病理学有改善作用。

Claims (2)

1.紫蓝素在制备能改善肝病变的胰岛素增敏剂中的应用。

2.紫蓝素在制备能改善肾病变的胰岛素增敏剂中的应用。