CN101151252A

CN101151252A - 嘧啶酮（pyrimidinone）衍生物的聚合物及其作为人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂的用途

Info

Publication number: CN101151252A
Application number: CNA2006800098569A
Authority: CN
Inventors: H·芬奇; C·爱德华兹; N·C·雷; E·A·奥坎诺; M·F·菲茨杰拉尔德
Original assignee: Argenta Discovery Ltd
Current assignee: Argenta Discovery Ltd
Priority date: 2005-02-03
Filing date: 2006-02-03
Publication date: 2008-03-26
Also published as: AU2006210730A1; AU2006210730B2; CA2595801A1; WO2006082412A2; JP2008528670A; GB0502258D0; ZA200707009B; DE602006014367D1; ATE468328T1; US20090111795A1; EP1856059B1; EP1856059A2; WO2006082412A3

Abstract

一种式(I)：M－L－M的化合物，其中L为连接物，每个M独立地为式(II)的基团，该化合物可用于例如呼吸系统疾病的治疗。

Description

嘧啶酮（pyrimidinone）衍生物的聚合物及其作为人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂的用途

技术领域

本发明涉及杂环化合物以及它们在治疗中的用途。

背景技术

人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶是一种存在于嗜中性粒细胞的嗜天青颗粒中的32kDa的丝氨酸蛋白酶。它在许多胞外基质蛋白的降解中都起作用，所述胞外基质蛋白包括纤连蛋白、层粘连蛋白、蛋白聚糖、III型和IV型胶原以及弹性蛋白(Bieth，G.In Regulation of Matrix accumulation，Mecham，R.P.(Eds)，Academic Press，NY，USA 1986，217-306)。在很长时间以来都认为HNE通过组织结构性蛋白的降解而在受损组织的修复和清理的稳态中起重要作用。它还通过降解细菌体而参与对细菌侵染的防御。除了对基质组织起作用之外，HNE还参与IL-8基因的上调并诱导IL-8从肺上皮细胞的释放。在用烟草烟气暴露诱导的慢性阻塞性肺疾病动物模型中，HNE的小分子抑制剂和蛋白抑制剂都可以抑制炎性应答和肺气肿的发展(Wright，J.L.et al.Am.J.Respir.Crit，Care Med，2002，166，954-960；Churg，A.et al.Am.J.Respir.Cr3.Care Med.2003，168，199-207)。因此，在以嗜中性粒细胞内渗为特征的慢性呼吸系统疾病中，HNE可能在基质破坏和炎性应答增强方面都起作用。实际上，相信HNE在一些肺疾病中起作用，所述肺疾病包括慢性阻塞性肺疾病(COPD)、囊性纤维化病(CF)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺气肿、肺炎、重症哮喘、结节病、支气管扩张症和肺纤维化。它还与一些涉及组织重塑的心血管疾病相关，例如与心力衰竭和急性心肌梗死之后缺血性组织损伤的产生相关。HNE的水平升高还与炎性肠病中炎症的严重程度相关(Silberer H et al，Clin Lab.2005；51(3-4)：117-26)，还可能在溃疡性结肠炎患者的受损粘膜的修复过程中起作用。

COPD是一个概括性术语，该术语包括三种不同的都会造成气流受限的病理状态：慢性支气管炎、肺气肿和小气道疾病。通常在COPD患者中，这三种疾病都会以不同的程度存在，而且它们可能都是由嗜中性粒细胞介导的炎症引起的，COPD患者的支气管肺泡渗液(BAL)中嗜中性粒细胞数目增加的观察结果可以支持上述结论(Thompson，A.B.；Daughton，D.；et al.Am.Rev.Respir.Dis.1989，140，1527-1537)。长期以来认为COPD的主要致病决定因素是蛋白酶-抗蛋白酶平衡(这也被称为“弹性蛋白酶：抗弹性蛋白酶假说”)，其中HNE和内源性抗蛋白酶的失衡会导致COPD的各种炎性病症，所述内源性抗蛋白酶例如α1-抗胰蛋白酶(α₁-AT)、分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)和前弹力素(pre-elafin)。具有蛋白酶抑制剂α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)的遗传缺陷的个体会发生随时间逐渐严重的肺气肿(Laurrell，C.B.；Erikkson，S Scand.J.Clin.Invest.1963 15，132-140)。因此，HNE过剩是具有破坏性的，会导致弹性丧失的肺部形态破坏和肺气道的肺泡依附的破坏(肺气肿)，同时伴有微血管透性增加和粘液分泌过多(慢性支气管炎)。

多聚体配体由通过合适支架相集合的多个结合结构域组成。因此，各个结合结构域被连接形成单个分子，从而增加了多聚体同时与多个活性位点结合的可能性，就可产生高亲和力的相互作用(Handl，H.L.et al.Expert Opin.Ther.Targets 2004，8，565-586；Han，Y.F.et al.，Bioorg.Med.Chem.Letts.1999，7，2569-2575)。也可以将多个具有相对高解离速率(off-rate)的结合相互作用组合起来，以获得对于多聚配体而言总体上较低的解离速率。因此，可以预计由合适的连接物和配体组成的分子在作用效力和/或时间方面比单体配体更具优势。虽然即使在吸入给药后还是有相当比例的药物会进入胃肠道，但是多聚化合物在口服时似乎不能被生物利用(按照里宾斯基五规则预计)，这就使得它可能在靶向肺的吸入给药途径中具有优势。因此预计这样的化合物可在吸入给药后减少全身对药物的暴露，从而在毒性情况方面相对于口服给药疗法有所改善。

式(II)的单体作为人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的抑制剂，在WO2004/024700、WO2004/024701、GB2392910、WO2005/082863和WO2005/082864中有所描述。

发明内容

本发明的第一方面为式(I)或式(IV)的化合物，或者它们可药用的盐、溶剂合物或N-氧化物：

(M)-(L)-(M) (I)

[(M)-(L)]_t-G (IV)

其中

每个M独立地为HNE的抑制剂；而且

每个L独立地为连接基团；

t为2至20；而且

G为芳基、杂芳基、烷基、环烷基、氮、树枝状聚合物(dendrimer)，或者为式(V)至(VII)任一项所示的基团：

其中

Ar为芳基或杂芳基；以及

u为2至20；

M为式(II)的基团

其中

A为芳基或杂芳基；

D为氧或硫；

R¹、R²和R³每一个独立地为氢、卤素、硝基、氰基、烷基、羟基或烷氧基，其中烷基和烷氧基可以进一步被一至三个相同或不同的自由基取代，所述自由基选自卤素、羟基和烷氧基；

R⁴为三氟甲基羰基、烷基羰基、烷氧基羰基、烯氧基羰基、羟基羰基、氨基羰基、芳基羰基、杂芳基羰基、杂环烷基羰基、杂芳基、杂环烷基或氰基，其中烷基羰基、烷氧基羰基和氨基羰基可以进一步被一至三个相同或不同的自由基取代，所述自由基选自环烷基、羟基、烷氧基、烷氧基羰基、羟基羰基、氨基羰基、氰基、氨基、杂芳基，杂环烷基和三(烷基)甲硅烷基，而且，其中杂芳基羰基、杂环烷基羰基、杂芳基和杂环烷基可以进一步被烷基取代；

或者

R⁴代表式(VIII)的基团；

其中

R^4A、R^4B、R^4G、R^4H、R^4I和R^4J独立地为氢或烷基，或者R^4H和R^4I可以与它们所连接的氮原子连接起来形成环；

R^4F为孤电子对或R^4F为烷基，而且它所连接的氮原子为季氮原子并带有一个正电荷；

R^4C、R^4D和R^4E为烷基，或者R^4C、R^4D或R^4E中的任何两个与它们所连接的氮原子连接起来形成环，该环任选地含有另一个选自氧或氮的杂原子；

v1为1-3；

v2为1-6

R⁵为烷基，它可以进一步被一至三个相同或不同的自由基取代，所述自由基选自卤素、羟基、烷氧基、烯氧基、烷硫基(alkylthio)、氨基、羟基羰基、烷氧基羰基和自由基-O-(烷基)-O-(烷基)；或者R⁵为氨基；

R⁶为卤素、硝基、氰基、烷基、羟基或烷氧基，其中烷基和烷氧基可以进一步被一至三个相同或不同的自由基取代，所述自由基选自卤素、羟基和烷氧基；而且

Y¹、Y²、Y³、Y⁴和Y⁵每一个独立地为C或N，条件是它们所在的环上含有的氮原子不超过两个

L为式(III)的连接物基团，

-L^a-R⁷-L^b-W-L^b-R⁷-L^a-...(III)

其中；

L^a为一个键或基团-C(O)-；

L^b为一个键或基团-C(O)-；

R⁷为亚烷基或环亚烷基基团；

W为一个键或选自下述二价自由基

-(O-R^8A)_m1-O-

-N(R^9A)-(O-R^8A)_m1-R^8A-N(R^9A)-

-N(R^9A)-R^8B-N(R^9B)(R^9C)-R^8B-N(R^9A)-

-N(R^9A)-R^8B-N(R^10B)C(＝NR^10A)(NR^10C)-R^8B-N(R^9A)-

-N(R^9A)-R^8B-N(R^9A)-

其中；

m1为1-4；

R^8A为亚烷基或环亚烷基基团；

R^8B为亚烷基或环亚烷基基团或式A²的基团；

R^9A为氢或烷基；

R^9B或R^9C中的一个为孤电子对，另一个为为氢或烷基；或者R^9B和R^9C均为烷基，此时它们所连的氮为季氮原子并带有一个正电荷。此外R^9B和R^9C可以与它们所连接的氮原子连接起来形成环；

R^10A为氢或烷基；

R^10B和R^10C独立地为氢或烷基，或者R^10B和R^10C可以连接起来形成环；

m2为1-3；

A¹选自基团-N(R^9A)-R⁸-N(R^9B)(R^9C)-R⁸-N(R^9A)-、-N(R^9A)-R⁸-N(R^10B)C(＝NR^10A)(NR^10C)-R⁸-N(R^9A)-；

A²为选自下式(...)的基团

其中Ar¹、Ar²独立地为芳基或杂芳基基团。

当本发明的化合物具有两个基团M时可被描述为二聚体。然而还可以用连接物L再携带一个或多个基团M。

应当理解的是，任何本发明的化合物都可以前药的形式应用。

本发明的化合物可用于治疗或预防与HNE有关的疾病，例如慢性阻塞性肺疾病(COPD)、慢性支气管炎、肺纤维化、肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺气肿、吸烟诱发的气肿、重症哮喘、结节病、支气管扩张、囊性纤维化病、炎性肠病；溃疡性结肠炎和克隆病。

本发明的另一方面为药物组合物，包含本发明的化合物和可药用的载体或赋形剂。

本发明的另一方面为本发明的化合物用于制备治疗或预防与HNE有关的疾病或病症的药物的用途。因此，本发明的化合物可用于治疗方法，以治疗患有上述疾病或病症的患者。

具体实施方式

“烷基羰基”意为-CO-烷基基团，其中烷基基团如本文所述。示例性的酰基基团包括-COCH₃和-COCH(CH₃)₂。

“酰基氨基”意为-NR-酰基基团，其中R和酰基如本文所述。示例性的酰基氨基基团包括-NHCOCH₃和-N(CH₃)COCH₃。

“烯氧基”意为-O-烯基基团，其中烯基如下文所述。示例性的基团包括-O-烯丙基(-OCH₂CH＝CH₂)。

“烯氧基羰基”意为-COO-烯基基团，其中烯基如下文所述。示例性的基团包括-C(O)O-烯丙基。

“烷氧基(alkoxy)”和“烷基氧基(alkyloxy)”意为-O-烷基基团，其中烷基如下文所述。示例性的烷氧基基团包括甲氧基(-OCH₃)和乙氧基(-OC₂H₅)。

“烷氧基羰基”意为-COO-烷基基团，其中烷基如下文定义。示例性的烷氧基羰基基团包括甲氧基羰基和乙氧基羰基。

“烷基”或“低级烷基”，在作为基团或基团的一部分时，指的是链上带有1至12个(优选为1至6个)碳原子的直链或支链的饱和烃基团。示例性的烷基基团包括甲基、乙基、1-丙基和2-丙基。

“烯基”，在作为基团或基团的一部分时，指的是链上带有1至12个(优选为1至6个)碳原子、并且具有一个碳-碳双键的直链或支链的烃基团。示例性的烯基基团包括乙烯基、1-丙烯基和2-丙烯基。

“烷基氨基”意为-NH-烷基基团，其中烷基如上文定义。示例性的烷基氨基基团包括甲基氨基和乙基氨基。

“亚烷基”意为-烷基-基团，其中烷基如前文定义.示例性的亚烷基基团包括-CH₂-、-(CH₂)₂-和-C(CH₃)HCH₂-。

“亚烯基”意为-烯基-基团，其中烯基如前文定义。示例性的亚烯基基团包括-CH＝CH-、-CH＝CHCH₂-和-CH₂CH＝CH-。

“烷硫基”意为-S-烷基基团，其中烷基如上文定义.示例性的烷硫基基团包括甲硫基和乙硫基。

“氨基”意为-NR¹R²基团，其中R¹和R²可独立地为氢原子、烷基、芳基、芳基烷基、烯基、炔基、杂芳基或杂环烷基基团(即氨基基团可为伯胺、仲胺或叔胺)。示例性的氨基基团包括-NH₂、NHCH₃、-NHPh、-N(CH₃)₂等。

“氨基羰基”意为-CO-NRR基团，其中R如本文所述。示例性的氨基羰基基团包括-CONH₂、-CONHCH₃和-CONH-苯基。

“氨基烷基”意为烷基-NH₂基团，其中烷基如前文所述。示例性的氨基烷基基团包括-CH₂NH₂。

“铵”意为季氮基团-N⁺R¹R²R³，其中R¹、R²和R³为烷基、芳基、烯基、芳基烷基、杂芳基、杂环烷基，并且该氮原子带有一个正电形式的电荷。

“芳基”，在作为基团或基团的一部分时，指的是被任选取代的、具有6至14个(优选地6至10个)碳原子的、单环或多环的芳香碳环部分，例如苯基或萘基。芳基基团可以被一个或多个取代基团取代。

“芳基烷基”意为芳基-烷基-基团，其中芳基和烷基部分为如前文所述。示例性的芳基烷基基团包括苯甲基、苯乙基和萘甲基(naphthlenemethyl)。

“芳基烷氧基”意为芳基-烷氧基-基团，其中芳基和烷氧基部分为如前文所述。优选的芳基烷氧基基团含有C_1-4烷基部分。示例性的芳基烷基基团包括苯甲氧基。

“芳基羰基”意为与羰基基团-(C＝O)相连的芳香环。示例性的基团包括苯甲酰基(-C(O)Ph)。

“芳基氧基”意为-O-芳基基团，其中芳基如上文所述.示例性的芳基氧基基团包括苯氧基。

“环胺(Cyclic amine)”意为任选取代的三元至八元的环烷基单环体系，其中环上的一个碳原子被氮代替，并且所述单环体系可以任选地含有选自O、S或NR(其中R如本文所述)的其它杂原子。示例性的环胺包括吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪和N-甲基哌嗪。环胺基团可以被一个或多个取代基团取代。

“环烷基”意为任选取代的具有3至12个(优选地3至8个，更优选地3至6个)碳原子的饱和单环或双环环形体系。示例性的环烷基单环包括环丙基、环戊基、环己基和环庚基。环烷基基团可以被一个或多个取代基团取代。

“环亚烷基”意为二价自由基形式的、任选取代的具有3至12个(优选地3至8个，更优选地3至6个)碳原子的饱和单环或双环环形体系。示例性的环亚烷基基团包括环己烷-1，4-二基。

“环烷基烷基”意为环烷基-烷基-基团，其中环烷基和烷基部分如前文所述。示例性的单环环烷基烷基基团包括环丙基甲基、环戊基甲基、环己基甲基和环庚基甲基。“树枝状聚合物(dendrimer)”意为多官能团核心基团，每一个官能团位点与分支基团相连接。每一个分支位点可与另一个分支分子相连接，并且这一过程可重复多次。

“卤”或“卤素”意为氟、氯、溴或碘。

“卤烷氧基”意为其中烷基被一个或多个卤素原子所取代的-O-烷基基团。示例性的卤烷基基团包括三氟甲氧基和二氟甲氧基.

“卤烷基”意为被一个或多个卤素原子所取代的烷基基团。示例性的卤烷基基团包括三氟甲基。

“杂芳基”，作为基团或基团的一部分时指的是任选取代的单芳香环或多芳香环的有机部分，它含有5至14个环原子，优选地含有5至10个环原子，其中一个或多个环原子为碳以外的元素，例如氮、氧或硫。这类基团的实例包括苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、吲嗪基、异噁唑基、异喹啉基、异噻唑基、噁唑基、噁二唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四唑基、1、3、4-噻二唑基、噻唑基、噻吩基和三唑基基团。杂芳基基团可以被一个或多个取代基团取代。杂芳基基团可通过任何可用的碳原子或氮原子与本发明的化合物的其余部分连接。

“杂芳基羰基”意为与羰基基团-C(O)-相连的杂芳基基团。示例性的基团为吡啶-2-羰基、噻吩-2-羰基。

“杂芳基氧基”意为杂芳基氧基-基团，其中的杂芳基如前文所述。示例性的杂芳基氧基基团包括吡啶氧基。

“杂环烷基”意为：(i)任选取代的具有4至8个环原子的环烷基基团，其中含有选自O、S或NR的一个或多个杂原子；(ii)含有4至8个环原子的环烷基基团，其中含有CONR和CONRCO(这类基团的实例包括琥珀酰亚胺基(succinimidyl)和2-氧代吡咯烷基(2-oxopyrrolidinyl))。杂环烷基基团可以被一个或多个取代基团取代。杂芳基基团可通过任何可用的碳原子或氮原子与本发明的化合物的其余部分连接。

“杂环烷基烷基”意为杂环烷基-烷基-基团，其中杂环烷基和烷基部分为如前文所述。

“羟基羰基”意为基团-COOH。

“可药用的盐”意为生理学或毒理学上可接受的盐，包括合适的可药用的碱加成盐和可药用的酸加成盐。例如，(i)当本发明的化合物含有一个或多个酸性基团例如羧基基团时，可形成的可药用的碱加成盐包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铵盐，或者与有机胺例如二乙胺、N-甲基-葡萄糖胺、二乙醇胺或氨基酸(例如赖氨酸)等形成的盐；(ii)当本发明的化合物含有碱性基团例如氨基基团时，可形成的可药用的酸加成盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐(methanesulphonate)等。“可药用的盐”的含义还包括季铵盐。在这种情况下，可接受的盐可为氯化物、溴化物、碘化物、甲磺酸盐(mesylate)、甲苯磺酸盐、琥珀酸盐等。

应该理解的是，在本文中提及本发明的化合物时，其含义也包括了可药用的盐。

“前药”指这样一种化合物，它可以在体内通过代谢方式(例如通过水解、还原或氧化)转化为本发明的化合物。例如，含有羟基基团的本发明的化合物的酯前药可以在体内通过水解转化为母体分子。含有羟基基团的本发明的化合物的合适的酯为例如：乙酸酯、柠檬酸酯、乳酸酯、酒石酸酯、丙二酸酯、草酸酯、水杨酸酯、丙酸酯、琥珀酸酯、延胡索酸酯、马来酸酯、亚甲基-双-β-羟基萘甲酸酯、龙胆酸酯、羟乙基磺酸酯、二对甲苯酰酒石酸酯、甲磺酸酯、乙磺酸酯、苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯、萘二磺酸酯、环己基氨基磺酸酯和奎尼酸酯。作为另一个实例，含有羧基基团的本发明的化合物的酯前药可以在体内通过水解转化为母体分子。这类酯前药的实例描述于F.J.Leinweber，Drug Metab.Res.，1987，18，379。

应该理解的是，在本文中提及本发明的化合物时，其含义也包括了前药形式。

“饱和的”意指该化合物和/或基团不含有任何碳-碳双键或碳-碳叁键。

上文所述的环形基团，即芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基，可以被一个或多个取代基团所取代。合适的任选的取代基团包括酰基(例如-COCH₃)、烷氧基(例如-OCH₃)、烷氧基羰基(例如-COOCH₃)、烷基氨基(例如-NHCH₃)、烷基亚磺酰基(例如-SOCH₃)、烷基磺酰基(例如-SO₂CH₃)、烷硫基(例如-SCH₃)、-NH₂、氨基酰基(例如-CON(CH₃)₂)、氨基烷基(例如-CH₂NH₂)、芳基烷基(例如-CH₂Ph或-CH₂-CH₂-Ph)、氰基、二烷基氨基(例如-N(CH₃)₂)、卤素、卤烷氧基(例如-OCF₃或-OCHF₂)、卤烷基(例如-CF₃)、烷基(例如-CH₃或-CH₂CH₃)、-OH、-CHO、-NO₂、芳基(任选地被烷氧基、卤烷氧基、卤素、烷基或卤烷基所取代)、杂芳基(任选地被烷氧基、卤烷氧基、卤素、烷基或卤烷基所取代)、杂环烷基、氨基酰基(例如-CONH₂、-CONHCH₃)、氨基磺酰基(例如-SO₂NH₂、-SO₂NHCH₃)、酰基氨基(例如-NHCOCH₃)、磺酰基氨基(例如-NHSO₂CH₃)、杂芳基烷基、环胺(例如吗啉)、芳基氧基、杂芳基氧基、芳基烷氧基(例如苯甲氧基)和杂芳基烷氧基。

亚烷基或亚烯基基团任选地可被取代。合适的任选取代基团包括烷氧基(例如-OCH₃)、烷基氨基(例如-NHCH₃)、烷基亚磺酰基(例如-SOCH₃)、烷基磺酰基(例如-SO₂CH₃)、烷硫基(例如-SCH₃)、-NH₂、氨基烷基(例如-CH₂NH₂)、芳基烷基(例如-CH₂Ph或-CH₂-CH₂-Ph)、氰基、二烷基氨基(例如-N(CH₃)₂)、卤素、卤烷氧基(例如-OCF₃或-OCHF₂)、卤烷基(例如-CF₃)、烷基(例如-CH₃或-CH₂CH₃)、-OH、-CHO和-NO₂。

本发明的化合物可能以一种或多种几何异构、光学异构、对映异构、非对映异构和互变异构的形式存在，包括但不限于顺式和反式形式、E-和Z-形式、R-、S-和内消旋形式、酮和烯醇形式等。除非另外指明，否则提及一种具体的化合物时，其含义包括了所有的异构体形式，包括其消旋体形式及其他混合物。需要时可以采用已知的方法(例如色谱技术和重结晶技术)从这样的混合物中分离某种异构体。需要时可以采用已知的方法(例如不对称合成)制备某种异构体。

某些化合物和取代基的组合是优选的。某些优选形式在从属权利要求中给出。

在一个优选的实施方案中，每一个M为相同或不同的本文式(II)中定义的基团。式(II)中，箭头表示M与连接物L连接的位点。优选地，L为本文式(III)中定义的基团。

在一个优选的实施方案中，化合物为式(I)的化合物。

在一个优选的实施方案中，A为苯环。

在一个优选的实施方案中，D为氧原子。

在另一个优选的实施方案中，基团M在立体化学上具有如下所示的(R)构型；

在一个优选的实施方案中，R⁶为卤烷基基团。

在一个优选的实施方案中，Y¹-Y⁵为碳原子。

在一个优选的实施方案中，L^a为一个键。

在又一个优选的实施方案中，W为自由基-N(R^9A)-R^8B-N(R^9B)(R^9C)-R^8B-N(R^9A)-。

在另一个优选的实施方案中，W为自由基-N(R^9A)-R^8B-N(R^10B)C(＝NR^10A)(NR^10C)-R^8B-N(R^9A)-。

在又另一个优选的实施方案中，R⁵为烷基基团。

在又另一个优选的实施方案中，R⁵为甲基基团。

在一个实施方案中，R⁴为烷氧基羰基。

在又一个实施方案中，R⁴为烷氧基羰基，其中所述烷氧基基团被羟基基团取代。

在又一个实施方案中，R⁴为烷氧基羰基，其中所述烷氧基基团被氨基基团取代。

在又一个实施方案中，R⁴为烷氧基羰基，其中所述烷氧基基团被铵基团取代。

G可为式(V)至(VII)任一个的基团或为树枝状聚合物。式(V)至(VII)的基团的实例包括但不限于：苯氧基苯基、二苯基、二吡啶基、乙二胺基、丙二胺基等。应当理解的是，可能的连接位点的数目由所存在基团的价位决定，因此例如，二苯基可具有最多10个可能的连接物(每一个苯环上5个)，乙二胺基可具有最多4个可能的连接物(每一个末端氨基上2个)。适用于本发明的树枝状聚合物的一个实例如下所示：

优选的本发明的化合物包括：

本发明化合物的治疗性应用可适用于已知至少部分由人类嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的作用介导的任何疾病。例如，本发明化合物可能在下列疾病的治疗中有效：慢性阻塞性肺疾病(COPD)、囊性纤维化病(CF)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺气肿、肺炎和肺纤维化。

本发明还考虑了包括本发明的化合物作为活性成分的药物制剂。本发明的化合物可以与其他化合物组合以用于肺部炎性疾病的预防和治疗。因此，本发明还考虑到了用于预防和治疗肺部炎性疾病的药物组合物，所述组合物包括治疗有效量的本发明的化合物和一种或多种其它治疗剂。

可与本发明的化合物组合以用于组合治疗的合适治疗剂包括：(1)皮质类固醇，例如氟替卡松、西洛司特或布地奈德；(2)β2-肾上腺素受体激动剂，例如沙美特罗或福莫特罗(formeterol)；(3)白细胞三烯调质，例如孟鲁司特或普伦司特；(4)毒蕈碱-3(M3)受体拮抗剂，例如噻托溴胺；(5)在一个分子中同时具有M3受体拮抗活性和β2-肾上腺素受体激动活性的支气管扩张剂；(6)磷酸二酯酶-IV(PDE-IV)抑制剂，例如罗氟司特或西洛司特；(7)镇咳药，例如可待因或右旋吗吩烷(dextramorphan)；(8)非类固醇类抗炎药剂(NSAID)，例如，布洛芬或酮洛芬；(9)激酶抑制剂，例如p38 MAP激酶抑制剂、IKK2抑制剂；以及(10)细胞因子和趋化因子例如IL-8、MCP-1、TNFα和IL-1β的受体拮抗剂。

一种活性成分和另一种活性成分的重量比可根据每种成分的有效剂量而变化。通常应使用每种成分的有效剂量。

本发明的化合物的预防性剂量或治疗性剂量的范围显然应根据待治疗病症的严重性和具体化合物及给药途径而变化。这还要根据各个患者的年龄、体重和反应而变化。通常，哺乳动物的每日剂量的范围应在约0.001mg至约100mg/kg体重、优选地0.01mg至约50mg/kg、最优选地0.1至10mg/kg内，每日内可以单次给药或多次给药。另一方面，在某些情况下可能必须使用上述范围之外的剂量。

本发明的另一方面提供药物组合物，所述药物组合物包括本发明的化合物和可药用的载体。药物组合物中的术语“组合物”意在涵盖包括活性成分和制成载体的惰性成分(可药用的赋形剂)的产品，还涵盖由任何两种或多种成分直接或间接组合、复合或聚集而得到的任何产品，或者由一种或多种成分解离而得到的任何产品，或者通过一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用而得到的任何产品。因此，本发明的药物组合物涵盖了通过将本发明的化合物、其它活性成分和可药用的赋形剂掺合而得到的任何组合物。

本发明的药物组合物包括作为活性成分的本发明的化合物或其可药用的盐，还可含有可药用的载体和任选的其它治疗性成分。术语“可药用的盐”指的是用可药用的无毒性的碱或酸制备的盐，所述的碱或酸包括无机碱或无机酸和有机碱和有机酸。

可以使用任何合适的给药途径来为哺乳动物特别是人提供有效剂量的本发明的化合物。在治疗用途中，活性化合物可以以任何方便、适当或有效的途径给予。合适的给药途径是本领域技术员人已知的，包括口服、静脉内、直肠、肠胃外、局部、眼部、鼻部、含服和肺部途径。通过吸入的送递是优选的。

适用于吸入给药的组合物是已知的，可包括已知可在该组合物中使用的载体和/或稀释剂。组合物可含有0.01-99重量％的活性化合物。优选地，单位剂量包括1μg至10mg的活性化合物。

最合适的剂量水平可以通过本领域技术人员已知的任何合适方法确定。然而应当理解的是，对于任何具体患者的具体量可根据多种因素变化，所述因素包括所用的具体化合物的活性，患者的年龄、体重、饮食、总体健康状况和性别，给药时间，给药途径，排泄速度，任何其它药物的使用和待治疗疾病的严重程度。

对于吸入送递，活性化合物优选地为微颗粒形式。这些微颗粒可以通过包括喷雾干燥、冷冻干燥和微粉化在内的多种技术制备。

例如，本发明的组合物可被制备为悬液用于从喷雾器送递，或者制备为液体喷射剂中的气溶胶而用于例如加压定量吸入器(PMDI)中。适用于PMDI的喷射剂为本领域技术人员已知，包括CFC-12、HFA-134a、HFA-227、HCFC-22(CCI2F2)和HFA-152(CH4F2和异丁烷)。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明的组合物为干粉形式，用于使用干粉吸入器中(DPI)的送递。很多类型的DPI都是已知的。

用于给药送递的微颗粒可以用促进送递和释放的赋形剂配制。例如，在干粉制剂中，微颗粒可以用能促进药物从DPI流向肺的大载体颗粒配制。合适的载体颗粒是已知的，包括乳糖颗粒；它们可具有大于90μm的总气体动力学中位数直径。

对于基于气溶胶的制剂，一种优选的组合物为：

本发明的化合物 24mg/罐

卵磷脂，NF Liq.Conc. 1.2mg/罐

三氯氟甲烷，NF 4.025g/罐

二氯二氟甲烷，NF 12.15g/罐。

本发明的化合物可以与其他药剂组合使用，所述其它药剂可用于治疗/预防/抑制或缓解本发明化合物适用的疾病或病症。因此，这类其它药剂可以通过通常使用的途径和量与本发明的化合物同时给药或序贯给药。当本发明的化合物与一种或多种其它药剂同时使用时，优选同时含有本发明的化合物和这类其它药剂的药物组合物。因此，本发明的药物组合物包括那些除含有本发明的化合物之外还含有一种或多种其它活性成分的药物组合物。

本发明的药剂可通过吸入方式给药。可以使用例如气压驱动喷射原子化器或超声原子化器来产生气溶胶，优选地使用喷射剂驱动定量气溶胶或使用微粉化活性化合物形式的不含喷射剂的给药，例如，吸入式胶囊或其它“干粉”送递系统。

可根据所用的吸入器体系，如前所述地给予活性化合物。除了活性化合物之外，给药形式中还可含有赋形剂，例如，喷射剂(例如对于定量气溶胶可使用氟利昂)、表面活性物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、香味剂、填充剂(例如对于粉末吸入剂可使用乳糖)，或者如果合适时还含有其它活性化合物。

出于吸入的目的，可以使用很多种系统来产生具有最合适颗粒大小的气溶胶并使用对患者合适的吸入技术来给药。除了使用接合管(adaptor)(间隔器(spacer)，扩张器(expander))和梨形容器(例如Nebulator、Volumatic)和发射喷射器物的自动装置(Autohaler)之外，对于定量气溶胶特别是对于粉末吸入器的情况，可以使用很多种技术方案(例如Diskhaler、Rotadisk、Turbohaler或例如EP-A-0505321所述的吸入器)。

按照下述反应路线和实施例中的工艺方法，使用合适的原料(在随后的具体实施例中还有示例性的说明)，可以制备本发明的化合物。此外，通过实施本说明书公开内容中叙述的工艺方法，本领域普通技术人员可以容易地制备本发明要求保护的其它本发明化合物。但是，实施例中说明的化合物不应被理解为本发明仅考虑了这一类化合物。实施例中还说明了制备本发明的化合物的技术细节。本领域技术人员可以容易地理解，使用下述制备工艺方法中条件和过程的变化方案也可以制备出上述化合物。

本发明的化合物可以以如上所述的它们的可药用盐的形式被分离出来。通过用合适的酸例如乙酸或盐酸中和，并将所得的游离酸提取至有机溶剂中再进行蒸发，就可以生成所分离盐的相应游离酸形式。通过将用上述方式分离出的游离酸形式溶于有机溶剂中然后加入合适的碱，再进行蒸发、沉淀或结晶，就可以将该游离酸形式进一步转化成另一种可药用的盐。

可能必须要保护在制备本发明的化合物中所使用的中间产物的活性官能团(例如羟基、氨基、硫基或羧基)，以避免这些活性官能团不必要地参与到生成本发明化合物的反应中。可以使用例如T.W.Greene and P.G.M.Wutsin“Protective groups in organic chemistry”John Wiley and Sons，1999中所述的常规的保护性基团。

下述的反应路线说明了本发明的化合物特别是实施例中的化合物是如何制备的。应当理解的是，下文所述的工艺细节仅仅是出于说明本发明的目的，并不应理解为限制。应用本领域技术人员已知相似或类似的试剂和/或反应条件的工艺方法也可以用于获得本发明的化合物。

反应路线1

可以通过多种标准化学方法使单体加合在一起。例如，在存在适当的碱例如金属氢化物和任选地存在溶剂的情况下，使用合适的αω-双官能化烷可实现烷基化。合适的离去基团包括卤素和磺酸盐。类似地，可以在类似的条件下通过使用双酸卤化物进行双酰基化使单体加合在一起，反应路线1。

另一种方法学如反应路线2所示，包括附加一个带有第二官能团的间隔基团，这使得可以在随后附加一个双接头(bidenetate)连接物基团。使用溶于合适的惰性溶剂例如DMF或THF中的碱例如NaH，使用合适取代的ω-卤化酸(以酯的形式保护)、ω-卤化醛(以缩醛的形式保护)或αω-二卤代烷对单体进行烷基化，然后再进行必要的脱保护，可以得到中间产物，该中间产物可以与合适的双接头种类反应而生成本发明的化合物，反应路线2。

反应路线2

反应路线3

式(II)的单体可以根据WO2004024700、WO2004024701、GB2392910、WO200508263和WO2005082864中所述的方法以外消旋化合物的形式制备。可以通过手性HPLC将单体分成它们的对映异构体形式。

或者，可以通过使(羧酸形式的)单体与合适的手性碱例如去甲麻黄碱形成非对映体盐，然后再进行分次重结晶的方法，来分离单体，反应路线3。

反应路线4

反应路线4中说明了另一种制备式(II)的化合物的方法。

反应路线5

在有些情况下，可以用合适的条件将式(II)化合物的R⁴的相应酯水解为母体酸，然后再使用标准酯结合条件将其互转化为其它酯类。另外，可以使用本领域技术人员熟知的标准方法将上述酸转化为酰胺和其它本发明的化合物，反应路线5。

反应路线6

在连接物基团中含有胍部分的式(II)的化合物可以通过反应路线6中给出的方法来制备。

作为季铵盐形式的化合物通常具有反荷离子，该反荷离子来源于季铵化作用中使用的烷基化试剂，所述季铵化作用即为叔胺与碘甲烷反应生成碘化季铵的作用。上述反荷离子可以与另一种反荷离子按照Bach Nielsen，Frydenvang，Liljeforts，Buur & Larsen，Eur.J.Pharm.Sci，24(2005)85-93中所述的方法进行交换。含有另一种反荷离子的化合物预计具有不同

总体实验细节：

除非特别指明，否则所有实验均在惰性氮气气氛下进行。

当产物使用二氧化硅柱色谱法纯化时，“二氧化硅”指的是用于色谱的、0.035至0.070mm(220目至440目)的硅胶(例如Fluka silica gel 60)，施加最高达10p.s.i的氮气压力以加速柱的洗脱。所有的溶剂和市售试剂都是直接使用的。

制备性HPLC的条件：

HPLC系统1：

C18反相柱(100×22.5mm i.d，Genesis柱，颗粒大小7μm)，用含A和B的溶液进行梯度洗脱，A：水+0.1％TFA；B：乙腈+0.1％TFA，流速为5ml/min，洗脱液中B的梯度每分钟增加1％。在230nm处进行紫外检测。

HPLC系统2：

苯己基柱(250×21.20mm Luna柱，颗粒大小10μm)，用含A和B的混合溶液进行无梯度洗脱，A：水+0.1％TFA；B：乙腈+0.1％TFA，流速为20ml/min，在254nm处进行紫外检测。

HPLC系统3：

C18反相柱(100×22.5mm i.d，Genesis柱，颗粒大小7μm)，用含A和B的溶液进行梯度洗脱，A：水+0.1％甲酸；B：乙腈+0.1％甲酸，流速为5ml/min，洗脱液中B的梯度每分钟增加1％。在230nm处进行紫外检测。

HPLC系统4：

C18反相柱(100×22.5mm i.d，Genesis柱，颗粒大小7μm)，用含A和B的溶液进行梯度洗脱，A：水+0.1％甲酸；B：MeOH+0.1％甲酸，流速为5ml/min，洗脱液中B的梯度每分钟增加1％。在230nm处进行紫外检测。

HPLC系统5：

苯己基柱(250×21.20mm Luna柱，颗粒大小10μm)，用含A和B的混合溶液进行无梯度洗脱，A：水+0.1％TFA；B：MeOH+0.1％TFA，流速为20ml/min，在254nm处进行紫外检测。

在HPLC纯化后，合并含有产物的级分并冷冻干燥，以获得白色或米白色固体的产物。在有些情况下，当化合物含有碱性中心时，会以TFA盐或甲酸盐的形式获得产物。

LC/MS系统

使用的液相色谱质谱(LC/MS)系统：

LC-MS方法1

带有C18反相柱(100×3.0mm Higgins Clipeus柱，颗粒大小为5μm)的Micromass Platform LCT，用含A和B的溶液进行梯度洗脱，A：水+0.1％甲酸；B：乙腈+0.1％甲酸，梯度如下：

梯度时间流速ml/min ％A ％B

0.00 1.0 95 5

1.00 1.0 95 5

15.00 1.0 5 95

20.00 1.0 5 95

22.00 1.0 95 5

25.00 1.0 95 5

检测——MS，ELS，UV(100μl的分离样品用带有串联UV检测器的MS检测)

MS离子化方法——电喷雾离子化(正离子)

LC-MS方法2

带有C18反相柱(30×4.6mm Phenomenex Luna柱，颗粒大小为3μm)的Micromass Platform LCT，用含A和B的溶液进行梯度洗脱，A：水+0.1％甲酸；B：乙腈+0.1％甲酸，梯度如下：

梯度时间流速ml/min ％A ％B

0.00 2.0 95 5

0.50 2.0 95 5

4.50 2.0 5 95

5.50 2.0 5 95

6.00 2.0 95 5

MS离子化方法——电喷雾离子化(正离子和负离子)

LC-MS方法3

带有C18反相柱(30×4.6mm Phenomenex Luna柱，颗粒大小为3μm)的Waters Micromass ZQ，用含A和B的溶液进行梯度洗脱，A：水+0.1％甲酸；B：乙腈+0.1％甲酸，梯度如下：

梯度时间流速ml/min ％A ％B

0.00 2.0 95 5

0.50 2.0 95 5

4.50 2.0 5 95

5.50 2.0 5 95

6.00 2.0 95 5

MS离子化方法——电喷雾离子化(正离子和负离子)

LC-MS方法4

带有C18反相柱(30×4.6mm Phenomenex Luna柱，颗粒大小为3μm)的Waters Micromass ZMD，用含A和B的溶液进行梯度洗脱，A：水+0.1％甲酸；B：乙腈+0.1％甲酸，梯度如下：

梯度时间流速ml/min ％A ％B

0.00 2.0 95 5

0.50 2.0 95 5

4.50 2.0 5 95

5.50 2.0 5 95

6.00 2.0 95 5

MS离子化方法——电喷雾离子化(正离子和负离子)

NMR波谱

在Varian Unity Inova 400MHz波谱仪或Bruker Avance DRX 400MHz波谱仪上进行NMR。

实验部分中使用的缩写：

DCM＝二氯甲烷

THF＝四氢呋喃

DMF＝N，N-二甲基甲酰胺

DIPEA＝二异丙基乙胺

RT＝室温

HATU＝O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐

TFA＝三氟乙酸

Boc＝叔丁氧基羰基

Rt＝保留时间

EDC＝1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

DCE＝1，1-二氯乙烷

IPA＝异丙醇

IMS＝工业用甲基化酒精

EtOAc＝乙酸乙酯

MPLC＝中压液相层析

DMAP＝4-N，N-二甲基氨基吡啶

中间产物1

中间产物1是根据WO2004/024700制备的。

中间产物2

将聚磷酸(350g)悬浮于THF(1.9l)中并机械搅拌，同时加入3-(三氟甲基)苯脲(129g)、4-氰基苯甲醛(100g)和乙酰乙酸苄酯(121.3g)。将所得的混合物加热回流过夜。减压蒸发所得的粗溶剂，并将残留物分配于水和EtOAc中。分别用水、K₂CO₃水溶液、水、盐水洗涤有机相，并将其干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残留物用乙醚研磨，得到黄色固体状的中间产物2。

产率：216.6g(70％)

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝8.38(1H，d)，7.84(2H，m)，7.80-7.55(6H m)，7.30(3H，m)，7.15(2H，m)，5.13(1H，d)，5.06(1H，d)，5.39(1H，d)，2.08(3H，s).

中间产物3

将中间产物2(215g，0.54mol)悬浮于EtOAc(1.5l)中并加入IMS(500ml)。将混合物浸没于温水浴中(约40℃)轻微加热直至形成均一的混合物，然后在氮气下用Pd(OH)₂-碳(20g，20％w/w，50％水分)处理。密封烧瓶并抽出气体，再将混合物在氢气气氛下搅拌，同时用温水浴保温。在约4-6小时后，抽出烧瓶中的气体并将混合物用‘hyflo’过滤。将滤液真空蒸发，将残留物用乙醚处理得到固体形式的中间产物3，直接用于下一步。

中间产物4

将中间产物3(156.2g)悬浮于IPA(1500ml)并用L-(-)-去甲麻黄碱处理。混合物会变得均一并析出固体。在搅拌约6小时后过滤固体并用IPA洗涤，将固体在滤器上尽量吸干。取下固体块并溶于最少量的热IPA(约2.5l)中，搅拌过夜使其冷却。将混合物过滤并用IPA洗涤，干燥后得到白色固体。将固体分配于EtOAc和2M HCl中直至所有固体溶解。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发，得到无色泡沫状的中间产物4(61.7g)。

产率：61.7g(29％)

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ＝12.48(1H，br s)，8.32(1H，d)，7.88(2H，m)，7.79-7.54(6H，m)，5.36(1H，d)，4.03(2H，q)，2.05(3H，s)，1.18(3H，t).

中间产物5

将中间产物4(47.6g)悬浮于甲苯中，并用乙二酰氯(18g，12.5ml)处理。搅拌混合物并用DMF(20滴)处理。将所得的混合物在室温下搅拌直至不再释放出气体并且混合物达到均一(约1h)。将溶液冷却后用二异丙基乙胺(20ml)处理，再用EtOH(20ml)和二异丙基乙胺(20ml)的混合物处理。在室温下搅拌约30min后，将溶液用EtOAc稀释并用2M HCl、水、K₂CO₃水溶液、水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发，得到棕色泡沫。在硅胶上进行色谱分析，用溶于DCM的0-20％EtOAc作为洗脱液进行洗脱，得到淡黄色泡沫状的中间产物5。

产率：40.3g(79％)

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝7.72-7.39(8H，m)，5.95(1H，d)，5.58(1H，d)，4.15(2H，q)，2.10(3H，s)，1.21(3H，t).

中间产物6

根据WO2004/024700的方法，从中间产物1制备中间产物6。

中间产物7

将中间产物5(1.69g，3.94mmol)溶于DMF(35ml)中，将溶液在氩气下冷却至-10℃。加入氢化钠(60％，分散于矿物油中)(394mg，9.85mmol)，将反应物搅拌10分钟后加入溴乙酸。继续搅拌1.5h，然后用饱和NH₄Cl(10ml)终止反应。将混合物用1M HCl(100ml)稀释并用EtOAc(3×75ml)萃取。合并萃取的有机相，用水(100ml)和盐水(50ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残留物置于乙腈(20ml)中并装入Isolute NH₂熔管(25g)中。将熔管用乙腈(250ml)冲洗，然后用溶于乙腈(350ml)的2％的浓HCl水溶液洗脱产物。合并含有产物的级分，该体积有所减少。将残留物分配于EtOAc(150ml)和1M HCl水溶液(75ml)中。分离有机层，用水(70ml)和盐水(50ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。得到浅灰色膏状泡沫状的产物。

产率：1.63g(85％)

LC-MS(方法2)：Rt 3.67min，m/z 488[MH⁺]

中间产物8

将Boc-哌嗪(0.5g，2.69mmol)、1，2-二溴乙烷(253mg，1.34mmol)和NaHCO₃(564mg，6.72mmol)溶于乙腈(20ml)中，并在90℃加热17小时。在冷却至室温后，除去溶剂并将残留物溶于EtOAc(80ml)中。将该有机溶液用水(50ml)和盐水(20ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发，得到白色固体形式的中间产物8。

产率：426mg(80％)

LC-MS(方法2)：Rt 0.34/2.05min，m/z 399[MH⁺]

中间产物9

根据Mills，O.S.；Mooney，N.J.；Robinson，P.M.；Watt，C.I.F.；Box，B.G.J.Chem.Soc，Perkin Trans.2：(1995)4，697-706的方法制备。

中间产物10

将中间产物1(2.00g，4.66mmol)溶于无水DMF(40ml)中，将溶液冷却至0℃。加入氢化钠(60％，分散于矿物油中)(280mg，7.00mmol)，搅拌反应混合物直至泡腾现象停止。加入1，3-二溴丙烷(2.5ml)并再在0℃继续搅拌1h，然后加入1M HCl(60ml)和乙醚(60ml)。分离有机相并将水溶液用乙醚(2×50ml)进一步萃取。合并有机萃取物并用水(50ml)和盐水(30ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残留物用硅胶MPLC纯化，用溶于戊烷的20％EtOAc洗脱。

产率：1.05g(41％)

LC-MS(方法3)：Rt 4.12min，m/z 550/552[MH⁺]

中间产物11

中间产物11的制备方式与中间产物5的制备方式类似。将产物用硅胶纯化，用DCM洗脱。

产率：65％

LC-MS(方法3)：Rt 4.10min，m/z 550/552[MH⁺]

中间产物12

将咪唑(12mg，0.182mmol)溶于无水THF(10ml)中，并加入氢化钠(60％，分散于矿物油中)(7mg，0.175mmol)。搅拌反应混合物直至泡腾现象停止，加入中间产物10(200mg，0.364mmol)。将反应混合物在80℃加热40h，然后使其冷却并蒸发溶剂。加入EtOAc(40ml)和水(40ml)并分离有机层。将水溶液用EtOAc(2×50ml)进一步萃取，合并有机萃取物，并用水(50ml)和盐水(30ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残留物用Isolute Si(II)熔管(10g)纯化，用溶于戊烷的0-20％EtOAc洗脱。

产率：70mg(36％)

LC-MS(方法2)：Rt 2.68min，m/z 538[MH⁺]

中间产物13

将中间产物11(150mg，0.27mmol)溶于乙腈(10ml)，并加入咪唑(111mg，1.636mmol)和K₂CO₃(226mg，1.636mmol)。将反应物在70℃加热7h，然后冷却并蒸发溶剂。将残留物溶于EtOAc(100ml)，并用水(50ml)和盐水(40ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将产物用Isolute Si(II)熔管(20g)进行色谱纯化，用溶于EtOAc的0-20％MeOH洗脱。

LC-MS(方法2)：Rt 2.68min，m/z 538[MH⁺]

中间产物14

使用中间产物1和1，8-二溴辛烷，按照与中间产物10的合成相似的工艺方法制备中间产物14。

产率：45％

LC-MS(方法3)：Rt 470/4.79min，m/z 620/622[MH]⁺

中间产物15

中间产物15的制备方式与中间产物5的制备方式相似，并用IsoluteSi(II)熔管纯化，用溶于环己烷的0-25％EtOAc洗脱。

产率：57％

LC-MS(方法2)：Rt 4.89min，m/z 620/622[MH⁺]

中间产物16

将中间产物3(7.0g，15.4mmol)溶于DCM(75ml)。加入EDC(5.02g，26.2mmol)和DMAP(2.34g，19.2mmol)，将溶液搅拌5min，然后加入2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙醇(3.19g，21.9mmol)。将混合物在室温放置24h，然后用1M Na₂CO₃水溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。所得的油状物用溶于DCM的0-10％EtOAc作为洗脱液用硅胶色谱纯化，得到淡黄色粘稠油状的中间产物16。

产率：7.49g(81％)

LC-MS(方法2)：Rt 3.82min，m/z 530[MH⁺]

中间产物17

将中间产物16(2.00g，3.78mmol)溶于DMF(50ml)，将溶液在氮气下冷却至0℃。分次加入氢化钠(60％，分散于矿物油中)(378mg，9.45mmol)并将反应物搅拌15min。将温度降低至-10℃并加入溴乙酸(526mg，3.78mmol)。搅拌反应物并使其在2小时间恢复至室温，然后加入饱和NH₄Cl水溶液终止反应。将产物用EtOAc(3×)萃取，合并有机萃取物并用水和盐水洗涤，最后用Na₂SO₄干燥。蒸发后得到棕色油状物，将其上样至Isolute NH₂熔管(25g)中。将熔管用乙腈冲洗，然后用溶于乙腈(350ml)的2％的浓HCl水溶液洗脱产物。除去溶剂并将残留物重新溶于MeOH(100ml)中.加入浓HCl(3ml)，30min后除去溶剂。将残留物用溶于MeOH(100ml)的1M NaOH(30ml)处理，然后加入1M HCl使溶液酸化。将产物用EtOAc(3×)萃取，合并有机物并用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并蒸发。使用HPLC系统2纯化残留物，获得白色固体形式的中间产物17。

产率：450mg(24％)

LC-MS(方法2)：Rt 3.16min，m/z 504[MH]⁺

中间产物18

使用中间产物16和0.5当量的1，12-二溴十二烷，通过与中间产物10的合成所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物18。

LC-MS(方法2)：Rt 5.56min，m/z 1057[MH-2xTHP]⁺

中间产物19

作为中间产物18的合成中的副产物而得到中间产物19。

LC-MS(方法2)：Rt 5.43min.

中间产物20

使用中间产物16和1，8-二溴辛烷，通过与中间产物10的合成所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物20。产物用Isolute Si(II)熔管纯化，用溶于环己烷的20％EtOAc洗脱，然后再用HPLC系统4纯化。

产率：17％

LC-MS(方法2)：Rt 4.92min，m/z 720/722[MH⁺]

中间产物21

使用中间产物16和1，3-二溴丙烷，通过与中间产物10的合成所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物21。产物用Isolute Si(II)熔管纯化，用溶于环己烷的20％EtOAc洗脱。

产率：65％

LC-MS(方法2)：Rt 4.40min，m/z 650[MH⁺]

中间产物22

将中间产物8(129mg，0.32mmol)溶于DCM(1ml)中并用TFA(1ml)处理30min。蒸发挥发物并将残留物溶于乙腈(15ml)。加入NaHCO₃(485mg，5.77mmol)和中间产物21(420mg，0.65mmol)，然后将反应混合物在80℃加热24h。蒸发溶剂并将残留物用DCM处理，过滤混合物。除去溶剂后将产物用Isolute Si(II)熔管(2g)纯化，用溶于DCM的0-10％MeOH洗脱。

产率：15％

LC-MS(方法2)：Rt 2.84min，m/z 1337[MH⁺]

中间产物23

将中间产物20(110mg，0.153mmol)和NaHCO₃(40mg，0.478mmol)的混合物溶于乙腈(5ml)，并向该混合物加入溶于THF(77μl，0.153mmol)的2M乙胺。将反应混合物在80℃加热24h。除去溶剂并将产物用IsoluteSi(II)熔管(2g)纯化，用溶于EtOAc的0-1％NH₃作为洗脱液洗脱。

产率：66mg(65％)

LC-MS(方法2)：Rt 3.79min，1324m/z[MH⁺]

中间产物24

使用中间产物1和1.2当量的4-(溴甲基)苯甲酸甲酯，通过与中间产物10的合成所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物24。

产率：80％

LC-MS(方法2)：Rt 4.29min，m/z 578[MH]⁺

中间产物25

将中间产物24(320mg，0.55mmol)溶于THF(15ml)中，并加入1MNaOH(5ml)。加入MeOH(1ml)以促进溶解，并将反应物在室温搅拌2h。用1M HCl使反应混合物酸化并用EtOAc萃取。分离有机相并用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将产物用HPLC系统1纯化，得到白色泡沫状的产物。

产率：128mg(41％)

LC-MS(方法2)：Rt 3.86min，m/z 564[MH]⁺

中间产物26

使用中间产物1和1.2当量的3-(溴甲基)苯甲酸甲酯，通过与中间产物10的合成所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物26。

产率：83％

LC-MS(方法2)：Rt 4.28min，m/z 578[MH]⁺

中间产物27

使用中间产物26，通过与制备中间产物25相似的方法，制备中间产物27。

产率：29％

LC-MS(方法2)：Rt 3.92min，m/z 564[MH]⁺

中间产物28

使用中间产物5和1当量的N-(3-溴丙基)邻苯二甲酰亚胺，通过与制备中间产物10所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物28。

产率：69％

LC-MS(方法4)：Rt 4.19min，m/z 617[MH]⁺

中间产物29

将中间产物28(882mg，1.43mmol)溶于IMS(45ml)中，加入溶于THF(8.6ml，17.2mmol)的2M甲胺。将溶液在50℃搅拌24h，蒸发挥发物。将残留物溶于MeOH中并上样至Isolute SCX-2熔管。再用MeOH冲洗后，用溶于MeOH的2M NH₃洗脱产物。蒸发后得到油膏状泡沫形式的所需产物。

产率：422mg(61％)

LC-MS(方法3)：Rt 2.46min，m/z 487[MH]⁺

中间产物30

使用中间产物5和1当量的N-(5-溴戊基)邻苯二甲酰亚胺，通过与制备中间产物10所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物30。

产率：39％

LC-MS(方法3)：Rt 4.28min，m/z 645[MH]⁺

中间产物31

使用中间产物30，通过与制备中间产物29所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物31。

产率：74％

LC-MS(方法3)：Rt 2.50min，m/z 515[MH]⁺

中间产物32

将中间产物29(372mg，0.77mmol)溶于DCM(15ml)中，加入1，1’-硫代羰基二羟基吡啶(1，1’-thiocarbonyldipyridone)(89mg，0.38mmol)。将溶液置于室温48h。除去溶剂并将残留物用Isolute Si(II)熔管(10g)进行色谱分析，用溶于戊烷的50-80％EtOAc洗脱。得到无色胶状的所需产物。

产率：263mg(68％)

LC-MS(方法2)：Rt 4.66min，m/z 1015[MH]⁺

中间产物33

使用中间产物31，通过与制备中间产物32所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物33。

产率：63％

LC-MS(方法3)：Rt 4.63min，m/z 1071[MH]⁺

中间产物34

根据Bartoli，S.；Jensen，K.B.；Kilburn，J.D.J.Org.Chem.：(2003)68，9416-9422的方法制备。

中间产物35

将中间产物34(181mg，0.41mmol)溶于含20％TFA的DCM(20ml)中，将溶液置于室温下3h。加入甲苯并蒸发溶剂，将残留物重新溶于DMF(20ml)中。加入中间产物7(400mg，0.821mmol)和DIPEA(1ml)，再加入HATU(343mg，0.903mmol)。将溶液置于室温，直至LC-MS显示反应完全(30min)，蒸发溶剂。将残留物溶于EtOAc(150ml)，并用饱和NaHCO₃水溶液(100ml)、水(50ml)和盐水(50ml)洗涤有机溶液。用Na₂SO₄干燥后除去溶剂得到残留物，将残留物用Isolute Si(II)熔管(10g)进行色谱分析，用溶于戊烷的60％EtOAc、100％EtOAc和溶于EtOAc的10％MeOH依次进行洗脱。

产率：279mg(57％)

LC-MS(方法3)：Rt 4.30min，m/z 1180[MH]⁺

中间产物36

使用中间产物4和烯丙醇，通过与制备中间产物5所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物36。

产率：57％

LC-MS(方法3)：Rt 3.65min，m/z 442[MH⁺]

中间产物37

使用中间产物36，通过与制备中间产物7所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物37。

产率：84％

LC-MS(方法2)：Rt 3.77min，m/z 500[MH⁺]

中间产物38

将中间产物37(1.14g，2.28mmol)、N-甲基-2，2’-二氨基乙胺(133mg，1.14mmol)和DIPEA(2ml)溶于DMF(60ml)中。加入HATU(953mg，2.51mmol)并将溶液置于室温，直至LC-MS显示反应完全(30min)。蒸发DMF并将残留物溶于EtOAc(200ml)。用NaHCO₃水溶液(100ml)、水(50ml)和盐水(50ml)洗涤有机溶液。用Na₂SO₄干燥后除去溶剂得到棕色油状物，将该油状物用Isolute Si(II)熔管(25g)进行色谱纯化，用溶于EtOAc的0-7％MeOH洗脱。

产率：800mg(65％)

LC-MS(方法3)：Rt 3.05min，m/z 1080[MH⁺]

中间产物39

将中间产物38(800mg，0.74mmol)溶于THF(8ml)中，加入吗啉(648mg，7.45mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(30mg，0.026mmol)。将混合物在RT搅拌。3小时后，用EtOAc稀释混合物，将溶液用10％HCl水溶液和盐水洗涤。用Na₂SO₄干燥后蒸发溶剂得到固体，将该固体加入乙醚研磨。获得的二酸为黄色固体。

产率：742mg(100％)

LC-MS(方法3)：Rt 2.70min，m/z 1000[MH⁺]

中间产物40

使用中间产物5和1，5-二溴戊烷，通过与合成中间产物10所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物40。

产率：58％

LC-MS(方法4)：Rt 4.63min，m/z 578/580[MH⁺]

中间产物41

使用中间产物4和1当量的N-甲基哌嗪，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物41。将产物用SCX色谱纯化。

产率：93％

LC-MS(方法4)：Rt 2.10min，m/z 484[MH⁺]

中间产物42

使用中间产物4和1当量的N-Boc哌嗪，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物42。该产物不经过色谱纯化直接使用。

产率：88％

LC-MS(方法4)：Rt 3.56min，m/z 568[M^-]

中间产物43

使用中间产物41，通过与制备中间产物7所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物43。

产率：29％

LC-MS(方法4)：Rt 2.22min，m/z 542[MH⁺]

中间产物44

使用中间产物42，通过与制备中间产物7所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物44。

产率：93％

LC-MS(方法4)：Rt 3.61min，m/z 628[MH⁺]

中间产物45

使用中间产物4和0.5当量的N-甲基-2，2’-二氨基乙胺，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物45。将产物用SCX色谱纯化。

产率：64％

LC-MS(方法4)：Rt 3.18min，m/z 1336[MH⁺]

中间产物46

将中间产物3(7.5g，18.7mmol)溶于DCM(75ml)，加入EDC(5.38g，28.1mmol)和DMAP(2.51g，20.6mmol)。向该混合物中加入2-苯甲氧基乙醇(3.32ml，23.4mmol)，在室温下搅拌反应物过夜。用1M Na₂CO₃水溶液和盐水洗涤有机物。合并水层并用DCM萃取，然后合并有机层并用1M HCl水溶液和盐水洗涤。将有机层用MgSO₄干燥后除去溶剂得到泡沫。用硅胶柱色谱进行纯化，用溶于DCM的10％EtOAc洗脱产物。主要级分(7.59g)是所需产物与2-苯甲氧基乙醇的1∶1混合物，同时还获得了0.26g的纯产物。将7.59g的部分蒸馏除去乙醇(135℃，约15mmHg)。重复一次纯化过程，得到5.2g含有10％2-苯甲氧基乙醇的产物。

产率：55％

LC-MS(方法3)：Rt 3.82min，m/z 536[MH⁺]

中间产物47

使用中间产物46，通过与制备中间产物7所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物47。

LC-MS(方法3)：Rt 3.75min，m/z 594[MH⁺]

中间产物48

使用中间产物47和N-甲基-2，2’-二氨基乙胺，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物48。

LC-MS(方法2)：Rt 3.44min，m/z 1268[MH⁺]

中间产物49

使用中间产物6和1.1当量的N-Boc-戊-1，5’-二胺，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物49。产物不进行色谱纯化直接使用。

产率：64％

LC-MS(方法3)：Rt 3.85min，m/z 672[MH⁺]

中间产物50

将中间产物49(100mg，0.149mmol)溶于DCM(10ml)中并用TFA(3ml)处理。2小时后蒸发挥发物，产物不进行进一步纯化直接使用。

产率：100％

LC-MS(方法2)：Rt 2.61min，m/z 572[MH⁺]

中间产物51

将哌嗪(144mg，1.68mmol)、3-(Boc-氨基)丙基溴(800mg，3.36mmol)和NaHCO₃(722mg，8.4mmol)置于乙腈(20ml)中，在90℃搅拌18h。除去溶剂后加入水(30ml)和EtOAc(60ml)，然后分离各层。干燥(MgSO₄)有机层并将其蒸发。

产率：588mg(88％)

LC-MS(方法2)：Rt 0.35/1.84min，401m/z[MH⁺]

中间产物52

将N-Boc哌嗪(2.0g，10.75mmol)、戊二醛(50％水溶液，1.08ml，5.37mmol)和三乙氧基硼氢化钠(3.68g，17.2mmol)溶于DCE(30ml)中，氮气下室温搅拌3h。用饱和NaHCO₃水溶液终止反应，将反应混合物用EtOAc萃取，干燥(MgSO₄)并蒸发，得到无色油状物，该油状物在放置时凝固。

产率：2.00g(42％)

LC-MS(方法3)：Rt 0.26/1.5min，441m/z[MH⁺]

中间产物53

将4，4’-二苯基二羧酸(2.0g，8.3mmol)、N-Boc-哌嗪(3.38g，18.2mmol)、HATU(6.55g，18.2mmol)和DIPEA(9.4ml，55mmol)悬浮于DMF(30ml)中，室温搅拌30min。将混合物分为三份，将每一份置于100℃下用微波照射5min，然后再重新合并样品，用乙醚稀释并过滤。将固体用乙醚洗涤并吸干，得到米白色粉末。

产率：3.04g(63％)

LC-MS(方法2)：Rt 3.79min，579m/z[MH⁺]

使用二酸和N-Boc-哌嗪，通过与合成中间产物53所使用的方法相似的工艺方法，制备下列化合物：

^*1H-NMR(400MHz，MeOD)：δ＝7.47(1H，d)；7.11(1H，d)；3.32-3.60(16h，br s)；1.41(18H，s)

中间产物59

将中间产物51(550mg，1.375mmol)置于含有1.25M HCl的MeOH(10ml)中在室温下搅拌1小时，然后蒸发。

产率：370mg(99％)

LC-MS(方法2)：Rt 0.25min，201m/z[MH⁺]

中间产物60

将中间产物52(1.0g，2.27mmol)溶于DCM(4ml)中，加入TFA(4ml)。将混合物在室温下搅拌30min。除去溶剂，将残留物溶于1∶1的DCM/MeOH中，并上样至SCX-2熔管。在用1∶1的DCM/MeOH洗涤后用MeOH洗涤，然后用溶于MeOH的2M NH₃洗脱产物。最后除去溶剂。

产率：676mg(100％(含溶剂))

LC-MS(方法2)：Rt 0.26min，241m/z[MH⁺]

通过与合成中间产物60所使用的方法相似的工艺方法，制备下列化合物：

中间产物67

使用中间产物1和6当量的2-(2-溴乙基)-1，3-二氧戊烷，通过与制备中间产物10所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物67。在除去DMF后，将产物直接在天然氧化铝上用溶于DCM的0-5％EtOH进行纯化。

产率：77％

LC-MS(方法2)：Rt 4.03min，530m/z[MH⁺]

中间产物68

将中间产物67的溶液(3.4g，6.43mmol)溶于THF(20ml)，加入1MHCl(50ml)，将反应物在80℃搅拌过夜。除去溶剂后加入DCM(50ml)和水(30ml)。分离各相并用盐水洗涤，用MgSO₄干燥。将粗物质用溶于DCM的0-2％MeOH进行色谱纯化。

产率：2.38g(76％)

LC-MS(方法3)：Rt 3.20/3.67min，486m/z[MH⁺]

中间产物69

使用中间产物5，通过与制备中间产物10所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物69。通过加入环己烷、倒出液体、再重复上述步骤，从而对产物进行纯化。

产率：5.18g(70％)

LC-MS(方法3)：Rt 3.78min，530m/z[MH⁺]

中间产物70

使用中间产物69，通过中间产物68的合成中所述的方法，制备中间产物70。

产率：1.82g(38％)

LC-MS(方法3)：Rt 3.67min，486m/z[MH⁺]

中间产物71

使用中间产物4和N，N-二甲基乙醇胺，通过与合成中间产物5所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物71。将粗物质用溶于DCM的0％和10％MeOH进行色谱纯化。通过将得到的物质上样至PE-AX熔管并用乙腈洗涤再蒸发溶剂，从而进行了进一步纯化。

产率：311mg(44％)

LC-MS(方法2)：Rt 2.38/2.47min，473m/z[MH⁺]

中间产物72

使用中间产物4和正丁醇，通过与合成中间产物5所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物72。

产率：54％

LC-MS(方法2)：Rt 4.14min，458/915m/z[MH⁺]

中间产物73

使用中间产物72，通过与合成中间产物7所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物73，但是产物不经过使用NH₂熔管的纯化而直接使用。

产率：49％

LC-MS(方法3)：Rt 3.77min，514m/z[M-H⁺]

中间产物74

将中间产物38(450mg，0.417mmol)溶于乙腈(10ml)，加入NaHCO₃(105mg，1.25mmol)和碘甲烷(1ml)。将溶液在室温下搅拌3.7h，过滤并蒸发。

产率：496mg(97％)

LC-MS(方法4)：Rt 3.28min，1094m/z[MH⁺]

中间产物75

使用中间产物74，根据中间产物39的制备中所述的方法，制备中间产物75。

产率：98％

LC-MS(方法4)：Rt 2.80min，1015m/z[MH⁺]

中间产物76

中间产物76的制备方法与制备中间产物2所用的方法类似。将产物使用溶于DCM的0-10％EtOAc进行柱色谱纯化。

产率：34％

LC-MS(方法1)：Rt 10.62min，430m/z[MH⁺]

中间产物77

使用中间产物76，通过与合成中间产物7所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物77，但是产物不经过纯化而直接使用。

产率：55％

LC-MS(方法3)：Rt 3.27min，489m/z[MH⁺]

中间产物78

将中间产物4(2.00g，4.98mmol)、苄基溴(600μl，4.98mmol)和K₂CO₃(1.38g，1.00mmol)溶于DMF(50ml)中，室温搅拌6.5h。加入饱和NH₄Cl水溶液(50ml)后分离有机层。蒸发溶剂后得到稻草色玻璃状物质。

产率：2.43g(99％)

LC-MS(方法2)：Rt 4.09min，492m/z[MH⁺]

中间产物79

使用中间产物78，通过与合成中间产物7所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物79。

产率：29％

LC-MS(方法2)：Rt 3.99min，550m/z[MH⁺]

中间产物80

将4-氰基苯甲醛(3.24g，24.75mmol)和4-硝基苯磺酰胺(5.00g，24.75mmol)置于DCM(100ml)中搅拌，同时加入BF₃乙醚配合物。然后将反应物再搅拌4小时，随后过滤固体并用乙醚洗涤。

产率：4.40g，56％

中间产物81

将中间产物80(2.90g，9.21mmol)悬浮于THF(60ml)中并加入三乙胺(3.8ml，27.6mmol)，然后加入乙酰乙酸乙酯(1.32g，10.13mmol)。将反应物在室温搅拌1.5h。过滤混合物并蒸发溶剂。将残留物溶于最少量的EtOAc中并在快速搅拌的条件下加入乙醚(150ml)。15min后滤出白色固体，用乙醚洗涤并干燥。

产率：2.88g(70％)

LC-MS(方法2)：Rt 3.47min，m/z 444[M-H⁺]

中间产物82

将中间产物81(1.189g，2.67mmol)、乙二醇(446μl，8.01mmol)和4-甲苯磺酸(51mg，0.27mmol)置于甲苯中，在Dean-Stark条件下(向装置中施加轻微真空)加热回流。6小时后，使反应混合物冷却并通过蒸发除去甲苯。将残留物分配于DCM(200ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(150ml)中。分离有机层，用盐水(50ml)洗涤，用Na₂SO₄干燥并蒸发。将所得的油膏状固体与乙醚一起研磨，得到白色固体形式的产物。

产率：665mg(51％)

LC-MS(方法2)：Rt 3.49和3.57min，m/z 488[M-H]非对映体混合物。

中间产物83

在-78℃向溶于干(dry)DCM(3ml)的氨基甲酸烯丙酯(allylcarbamate，100mg，1.0mmol)和4-氰基苯甲醛(131mg，1.0mmol)的溶液中加入BF₃乙醚配合物(246μl，2.0mmol)，使混合物回暖至室温并搅拌20min。在-35℃将该溶液滴加至搅拌着的(-)-金鸡尼丁(29mg，0.1mmol)和乙酰乙酸乙酯(127μl，1.0mmol)的干DCM(3ml)悬液中(该悬液已预先搅拌了5分钟)。将反应混合物在-35℃搅拌17小时，然后将反应混合物用二氧化硅垫过滤，用EtOAc洗涤并蒸发。将粗产物用溶于环己烷的10-25％EtOAc进行色谱纯化，得到中间产物83。

产率：98mg(28％)

LC-MS(方法3)：Rt 3.12min，367m/z[M+Na⁺]

中间产物84

使用中间产物83，通过与合成中间产物82所使用的方法相似的工艺方法，制备中间产物84。将产物与乙醚一起研磨而得到中间产物84，该产物不经过进一步纯化而直接使用。

产率：845mg(76％)

LC-MS(方法3)：Rt 3.24min，411m/z[MNa⁺]

中间产物85

方法A：从中间产物82制备

将辛硫醇(597mg，4.090mmol)溶于DMF(10ml)中，并加入氢化钠(60％，分散于矿物油中)。室温下搅拌反应物，15min后加入中间产物82(500mg，1.022mmol)。将溶液搅拌3h，然后用2当量的乙酸处理。将混合物直接上样至Isolute SCX-2熔管(20g)中。在用MeOH冲洗后，用溶于MeOH的2M NH₃洗脱产物。合并并蒸发含有UV活性物质的级分。

产率：343mg(100％)

方法B：从中间产物84制备

将烧瓶用Pd(PPh3)4(8mg，0.0072mmol)和1，3-二甲基巴比妥酸(56mg，0.361mmol)填充，并加入溶于干DCM(2ml)的中间产物84(140mg，0.361mmol)的溶液。将反应混合物在氩气下搅拌1h，然后用二氧化硅垫过滤并蒸发。将粗产物上样至用MeOH预处理过的SCX-2熔管中，用MeOH冲洗并用溶于MeOH的2N NH₃洗脱。蒸发后得到中间产物85。

产率：57mg(52％)

LC-MS(方法2)：Rt 0.34min，305m/z[MH⁺]

中间产物86

将中间产物85(303mg，0.81mmol)溶于DCM(6ml)中，并向溶液中加入3-(三氟甲基)苯基异氰酸酯(111μl，0.806mmol)，将反应混合物搅拌1小时。蒸发溶剂得到产物，产物不经过进一步纯化直接使用。

产率：430mg(95％)

LC-MS(方法2)：Rt 4.27min，560[MH+]；582m/z[MNa+]

中间产物87

方法A

将中间产物1(195mg，0.349mmol)溶于IMS(2ml)中，加入浓HCl水溶液(100μl)。将溶液用微波在120℃加热10min，蒸发溶剂并将残留物分配于DCM(10ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)中。分离有机层并蒸发。将残留物用Isolute SCX-2熔管(10g)进行色谱纯化，用溶于戊烷的0-30％乙酸乙酯洗脱。得到无色胶状的产物。

产率：43mg(25％)

LC-MS(方法3)：Rt 4.32min，m/z 498[MH⁺]

方法B

使用中间产物1和2当量的5-溴-1-戊烯，通过与中间产物10的合成中所使用方法相似的工艺方法，制备中间产物87。

产率：65％

LC-MS(方法3)：Rt 4.32min，m/z 498[MH⁺]

实例1

使用中间产物1和0.5当量的1，2-二溴十二烷，通过与制备中间产物10中所使用方法相似的工艺方法，制备实例1。用HPLC系统1纯化产物。

产率：104mg(30％)

LC-MS(方法1)：Rt 17.53，m/z 1025.12[MH]⁺

实例2

使用中间产物1和0.5当量的1，9-二溴壬烷，通过与制备中间产物10中所使用方法相似的工艺方法，制备实例2。用HPLC系统1纯化产物。

产率：22％

LC-MS(方法1)：Rt 16.50min，m/z 983.09[MH⁺]

实例3

使用中间产物1和0.5当量的1，8-二溴辛烷，通过与制备中间产物10中所使用方法相似的工艺方法，制备实例3。用HPLC系统1纯化产物。

产率：6％

LC-MS(方法1)：Rt 16.24min，m/z 968.92[MH⁺]

实例4

使用中间产物1和0.5当量的癸二酰氯，通过与制备中间产物10中所使用方法相似的工艺方法，只是其中使用THF作为反应溶剂，制备实例4。用硅胶MPLC纯化产物，用溶于戊烷的25％EtOAc洗脱。

产率：94mg(32％)

LC-MS(方法1)：Rt 16.42min，m/z 1025.10[MH⁺]

实例5

使用中间产物1和0.5当量的壬二酰氯，通过与制备中间产物10中所使用方法相似的工艺方法，只是其中使用THF作为反应溶剂，制备实例5。用Isolute Si(II)柱纯化产物，用溶于环己烷的0-15％EtOAc洗脱，然后再用HPLC(系统1)纯化。

产率：44％

LC-MS(方法1)：Rt 16.10min，m/z 1010.91[MH⁺]

实例6

使用中间产物1和0.5当量的十二烷二酰二氯(dodecanedioyldichloride)，通过与制备中间产物10中所使用方法相似的工艺方法，只是其中使用THF作为反应溶剂，制备实例6。用HPLC系统1纯化该化合物。

产率：50％

LC-MS(方法1)：Rt 16.93min，m/z 1053.06[MH⁺]

实例7

使用中间产物1和0.5当量的中间产物9，通过与制备中间产物10中所使用方法相似的工艺方法，制备实例7。将该化合物用HPLC系统1纯化两次。然后再用Isolute Si(II)熔管(10g)纯化，用溶于戊烷的0-30％EtOAc洗脱。

产率：30mg(4％)

LC-MS(方法1)：Rt 15.15min，m/z 1017.08[MH⁺]

实例8

使用中间产物6和0.5当量的哌嗪，通过与合成中间产物38中所使用方法相似的工艺方法，制备实例8。使用HPLC系统1实现纯化。

产率：19％

LC-MS(方法1)：Rt 13.64min，m/z 1025.10[MH⁺]

实例9

用中间产物7和类似的方式制备实例9，并用HPLC系统3纯化。

产率：48％

LC-MS(方法1)：Rt 13.40min，m/z 1025.22[MH⁺]

实例10

使用中间产物6和0.5当量的N-甲基-2，2’-二氨基乙胺，通过与合成中间产物38中所使用方法相似的工艺方法，制备实例10。使用HPLC系统1实现纯化。

产率：11％

LC-MS(方法1)：Rt 10.44min，m/z 1056.17[MH⁺]

实例11

用中间产物7和类似的方式制备实例11，并用HPLC系统3纯化。

产率：50％

LC-MS(方法1)：Rt 10.10min，m/z 1056.21[MH⁺]

实例12

使用中间产物6和0.5当量的3，3’-二氨基-N-甲基二丙胺，通过与合成中间产物38中所使用方法相似的工艺方法，制备实例12。使用HPLC系统1实现纯化。

产率：6％

LC-MS(方法1)：Rt 10.38min，m/z 1084.30[MH⁺]

实例13

将中间产物8(61mg，0.154mmol)溶于含25％TFA的DCM(15ml)中，使溶液置于室温下1.5h。蒸发溶剂并将残留物重新溶于DMF(5ml)中。加入中间产物6(150mg，0.308mmol)和DIPEA(161μl，0.924mmol)，再加入HATU(176mg，0.462mmol)。将溶液置于室温17h后蒸发溶剂。将残留物溶于EtOAc(60ml)中，用NaHCO₃水溶液(30ml)、水(30ml)和盐水(20ml)洗涤有机溶液。用Na₂SO₄干燥后，除去溶剂得到残留物，将残留物用HPLC系统1纯化。

产率：21％

LC-MS(方法1)：Rt 10.35min，m/z 1136.97[MH⁺]

实例14

用中间产物7和类似的方式制备实例14，并用HPLC系统3纯化。

产率：32％

LC-MS(方法1)：Rt 10.14min，m/z 1137.29[MH⁺]

实例15

用中间产物6和类似的方式制备实例15。产物用HPLC系统1纯化，再用HPLC系统5纯化。

产率：5％

LC-MS(方法1)：Rt 13.42min，m/z 1298.26[MH⁺]

实例16

将中间产物10(98mg，0.178mmol)、1，5-二溴戊烷(8mg，0.080mmol)和NaHCO₃(60mg，0.712mmol)溶于乙腈(5ml)中，并将其在80℃加热17h。冷却至室温后，除去溶剂并用HPLC系统1纯化混合物。

产率：22mg(22％)

LC-MS(方法1)：Rt 9.28min，m/z 1041.13[MH⁺]

实例17

将中间产物8(72mg，0.181mmol)溶于含25％TFA的DCM(30ml)中，将溶液置于室温下1小时。蒸发溶剂，将残留物重新溶于乙腈(10ml)。加入中间产物10(200mg，0.364mmol)和NaHCO₃(276mg，3.286mmol)，将混合物在80℃加热17h。冷却至室温后蒸发溶剂，将残留物用HPLC系统1纯化。

产率：65mg(29％)

LC-MS(方法1)：Rt 8.91min，m/z 1137.32[MH⁺]

实例18

用中间产物11和类似的方式制备实例18。用HPLC系统1纯化产物。

产率：8％

LC-MS(方法1)：Rt 8.69min，m/z 1137.44[MH⁺]

实例19

将中间产物14(33mg，0.0532mmol)和NaHCO₃(13mg，0,160mmol)溶于乙腈(2ml)中，并向该混合物中加入含2M乙胺的THF(53μl，0.106mmol)。将反应混合物在80℃加热41h。除去溶剂，并将残留物用HPLC系统1纯化。

产率：14mg(21％)

LC-MS(方法1)：Rt 12.89min，1124.30m/z[MH⁺]

实例20

将中间产物15(248mg，0.40mmol)溶于乙腈(15ml)，并向该溶液加入NaHCO₃(101mg，1.2mmol)和含有2M乙胺的THF(400μl，0.8mmol)。将混合物在80℃加热17h并蒸发挥发物。将残留物重新溶于乙腈(15ml)，继续加热24h。过滤并浓缩混合物。使用HPLC系统3实现纯化。

产率：23％

LC-MS(方法1)：Rt 12.09min，m/z 1124.30[MH⁺]

实例21

将中间产物10(70mg，0.130mmol)和中间产物12(72mg，0.130mmol)溶于乙腈(5ml)，将溶液在80℃加热40h。蒸发溶剂后得到残留物，该残留物用HPLC系统1纯化。

产率：49mg(34％)

LC-MS(方法1)：Rt 11.03min，1007.06m/z[M⁺]

实例22

用中间产物13和中间产物11以及类似的方式制备实例22，并用HPLC系统3纯化。

产率：8％

LC-MS(方法1)：Rt 10.85min，m/z 1007.22[MH⁺]

实例23

将实例10(38mg，0.035mmol)和碘甲烷(1ml)溶于乙腈(5ml)。加入NaHCO₃(18mg，0.214mmol)并将混合物在80℃加热25h。再加入一部分碘甲烷(1ml)，继续加热17h，然后使反应混合物冷却，并蒸发溶剂和多余的碘甲烷。将残留物用HPLC系统1纯化。

产率：11mg(26％)

LC-MS(方法1)：Rt 10.40min，1070.07m/z[M⁺]

实例24

用实例11以及类似的方式制备实例24，并用HPLC系统3纯化。

产率：67％

LC-MS(方法1)：Rt 10.15min，m/z 1070.26[M⁺]

实例25

将中间产物18(100mg，0.095mmol)溶于乙腈(3ml)，加入1M HCl水溶液，直至混合物变得混浊。向溶液中滴加乙腈直至溶液变得澄清。1小时后，用EtOAc萃取产物，溶液用盐水洗涤并用Na₂SO₄干燥。蒸发后得到的残留物用HPLC系统4纯化。

产率：6.5mg(6％)

LC-MS(方法1)：Rt 14.97min，m/z 1057.30[MH⁺]

实例26

使用中间产物8和中间产物17，通过与合成实例13所使用的方法相似的方法，制备实例26。使用HPLC系统4纯化产物。

产率：17％

LC-MS(方法1)：Rt 9.34min，m/z 1169.24[MH⁺]

实例27

使用中间产物17和N-甲基-2，2′-二氨基乙胺，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的方法，制备实例27。使用HPLC系统4纯化产物。

产率：14％

LC-MS(方法1)：Rt 9.42min，m/z 1088.18[MH⁺]

实例28

将中间产物19(40mg，0.058mmol)溶于乙腈(4ml)，加入1M HCl水溶液(～2ml)直至混合物变得混浊。向溶液中滴加乙腈直至溶液变得澄清。1小时后加入乙醚。分离有机层，用水和盐水洗涤，并用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂并将残留物重新溶于乙腈(4ml)。加入NaHCO₃(15mg，0.17mmol)和含有2M乙胺的THF(58ml，0.12mmol)，将混合物在80℃加热24h。在过滤后，除去溶剂，然后用HPLC系统3纯化产物。

产率：10mg(27％)

LC-MS(方法1)：Rt 12.20min，m/z 1268.41[MH⁺]

实例29

使用中间产物23，通过与合成实例28所使用的方法相同的方法，制备实例29。使用HPLC系统3纯化产物。

产率：69％

LC-MS(方法1)：Rt 10.70min，m/z 1156.38[MH⁺]

实例30

使用中间产物22，通过与合成实例25所使用的方法相同的方法，制备实例30。使用HPLC系统3纯化产物。

产率：36％

LC-MS(方法1)：Rt 8.10min，m/z 1169.38[MH⁺]

实例31

使用中间产物25和N-甲基-2，2′-二氨基乙胺，通过与合成中间产物38所使用的方法相同的方法，制备实例31。使用HPLC系统1纯化产物。

产率：61％

LC-MS(方法1)：Rt 10.76min，m/z 1208.18[MH⁺]

实例32

使用中间产物27和N-甲基-2，2′-二氨基乙胺，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的方法，制备实例32。使用HPLC系统1纯化产物。

产率：53％

LC-MS(方法1)：Rt 10.93min，m/z 1208.20[MH⁺]

实例33

将中间产物32(263mg，0.27mmol)溶于IMS(10ml)中，加入碘甲烷(379ml，2.67mmol)。将溶液放置24h后蒸发挥发物。将残留物溶于含2M NH₃的EtOH(10ml)，并放在密封管中在50℃加热50h。除去溶剂后将产物用HPLC系统3纯化。

产率：24mg(9％)

LC-MS(方法1)：Rt 10.84min，m/z 998.19[MH⁺]

实例34

使用中间产物33，通过与合成实例33所使用的方法相似的方法，制备实例34。使用HPLC系统1纯化产物。

产率：44％

LC-MS(方法1)：Rt 11.28min，m/z 1054.26[MH⁺]

实例35

将中间产物35(150mg，0.127mmol)溶于MeOH(10ml)中，加入K₂CO₃(235mg，1.71mmol)的水溶液(4ml)。将混合物在室温搅拌30min，然后用EtOAc(60ml)和水(50ml)稀释。分离有机层并用盐水洗涤。用Na₂SO₄干燥后蒸发溶剂，将残留物用HPLC系统3纯化。

产率：50mg(36％)

LC-MS(方法1)：Rt 10.20min，m/z 1084.23[MH⁺]

实例36

将中间产物39(150mg，0.15mmol)溶于DCM(4ml)中，加入羟乙基三甲基碘化胺(173mg，0.75mmol)、EDC(86mg，0.45mmol)和DMAP(55mg，0.45mmol)。将混合物在室温下搅拌7h，加入水(4ml)。分离水层并蒸发。使用HPLC系统3实现纯化。

产率：35mg(16％)

LC-MS(方法1)：Rt 6.78min，m/z 585.80[M²⁺]/2

实例37

将中间产物39(150mg，0.15mmol)溶于DCM(4ml)中，加入N，N-二甲基乙醇胺(67mg，0.75mmol)、EDC(86mg，0.45mmol)和DMAP(55mg，0.45mmol)。将混合物在室温下搅拌50h，加入水(4ml)。在振荡后分离有机层并蒸发。使用HPLC系统3实现纯化。

产率：36mg(21％)

LC-MS(方法1)：Rt 6.84min，m/z 1142.37[MH⁺]

实例38

将中间产物39(150mg，0.15mmol)溶于DCM(4ml)中，加入1，3-二-Boc-2-(2-羟乙基)-胍(227mg，0.75mmol)、EDC(86mg，0.45mmol)和DMAP(55mg，0.45mmol)。将混合物在室温下搅拌18小时，然后用DCM(8ml)稀释溶液并用水(4ml)洗涤。加入TFA(2ml)并将溶液在室温放置5小时，然后用饱和NaHCO₃水溶液(5ml)洗涤并蒸发。将残留物以及任何不溶于DCM或水的残留物都溶于20％的乙腈水溶液，用HPLC系统3纯化。

产率：45mg(26％)

LC-MS(方法1)：Rt 6.74min，m/z 585.87[MH₂ ²⁺]/2

实例39

使用中间产物43和N-甲基-2，2′-二氨基乙胺，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的方法，制备实例39。使用HPLC系统3纯化产物。

产率：37％

LC-MS(方法1)：Rt 5.72min，m/z 1164.17[MH⁺]

实例40

将中间产物45(191mg，0.143mmol)溶于DCM(15ml)中，加入TFA(5ml)。将反应物在室温放置1.5小时，然后蒸发挥发物。使用HPLC系统3纯化产物。

产率：67mg(41％)

LC-MS(方法1)：Rt 5.64min，m/z 1136.14[MH⁺]

实例41

将中间产物45(191mg，0.143mmol)溶于DCM(20ml)中，加入碘甲烷(5ml)。将溶液在室温放置48h。蒸发挥发物并将残留物溶于含25％TFA的DCM(20ml)中。1小时后蒸发，得到的残留物用HPLC系统3纯化。

产率：35mg(19％)

LC-MS(方法1)：Rt 5.65min，m/z 1150.15[M⁺]

实例42

使用中间产物7和0.25当量的G₀PAMAM树枝状聚合物，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的方法，制备实例42。使用HPLC系统3纯化产物。

产率：19％

LC-MS(方法1)：Rt 12.32min，m/z 2394.49[MH⁺]

实例43

将中间产物50(168mg，0.295mmol)、苯三酰三氯(benzenetricarbonyltrichloride)(13mg，0.05mmol)和DIPEA(0.2ml)溶于DCM(10ml)中，将混合物在室温搅拌40min。再加入一定量的苯三酰三氯(5mg，0.019mmol)，将反应物再搅拌48h。蒸发溶剂后残留物会部分固化。使用HPLC系统2分离产物。

产率：90mg(49％)

LC-MS(方法1)：Rt 14.45min，m/z 1871.31[MH⁺]

实例44

将中间产物48(150mg，0.118mmol)溶于EtOAc(15ml)中，加入乙酸(2滴)，然后加入一匙Pd(OH)₂-碳。将反应混合物在氢气气氛下搅拌17h。再加入一匙催化剂，继续搅拌5h。过滤混合物并蒸发溶剂。将产物用HPLC系统2纯化。

产率：32mg(25％)

LC-MS(方法1)：Rt 9.77min，m/z 1066.22[MH⁺]

实例45

使用中间产物40和含2M甲胺的THF，通过与合成实例19所使用的方法相似的方法，制备实例45。使用HPLC系统3纯化产物。

产率：22％

LC-MS(方法1)：Rt 11.08min，m/z 1026.16[MH⁺]

实例46

将实例45(50mg，0.049mmol)溶于DCM(5ml)中，并使用碘甲烷(1.5ml)处理。将溶液放置24h。蒸发挥发物并用HPLC系统3纯化产物。

产率：24mg(42％)

LC-MS(方法1)：Rt 11.27min，m/z 1040.27[M⁺]

实例47

使用中间产物6和中间产物59，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的方法，制备实例47。使用溶于DCM的0-5％EtOH，对产物进行柱色谱纯化，将所得的物质蒸发并用制备型HPLC系统3进一步纯化。

产率：23％

LC-MS(方法1)：Rt 9.64min，1139.22m/z[MH⁺]

实例48

使用中间产物6和中间产物60，通过与合成中间产物38所使用的方法相似的方法，制备实例48。

产率：51％

LC-MS(方法1)：Rt 8.61min，1179.37m/z[MH⁺]

实例49

将中间产物68(200mg，0.412nrimol)溶于DCE(8ml)，向溶液中加入哌嗪(17mg，0.206mmol)、粉末状分子筛和三乙氧基硼氢化钠(98mg，0.464mmol)。将反应混合物搅拌过夜，然后用DCM稀释并过滤，然后除去溶剂。将粗物质用制备型HPLC系统3纯化。

产率：35mg(17％)

LC-MS(方法1)：Rt 10.69min，1025.30m/z[MH⁺]

使用中间产物67和0.5当量的胺或二胺(分别为中间产物60至66、高哌嗪(homopiperazine)、N-(2-氨基乙基)-N-甲基乙二胺和乙胺)，通过与实例49类似的方法，制备下列化合物。

*基于一半粗混合物的纯化计算产率

实例60

将中间产物70(200mg，0.412mmol)溶于THF(4ml)中，在氮气下向该溶液加入1，5-双(甲氨基)-3-氧杂戊烷(22mg，0.166mmol)和PS-三乙氧基硼氢化物(358mg，0.8mmol)。将反应混合物振荡过夜，然后过滤并除去溶剂将粗物质用HPLC系统3纯化。

产率：45mg(25％)

LC-MS(方法1)：Rt 8.94min，1071.28m/z[MH⁺]

使用中间产物70和0.5当量的二胺，通过与实例60相类似的方法，制备下列化合物：

实例64

将中间产物11(250mg，0.455mmol)溶于THF(3ml)中，向该溶液中加入NaHCO₃(115mg，1.37mmol)和含2M甲胺的THF(250μl，0.455mmol)。将反应混合物在80℃加热5h。再加入一定量甲胺(500μl)并加热过夜。蒸发挥发物并加入THF(3ml)和NaHCO₃(115mg)。继续80℃加热18h。蒸发后得到粗物质，使用HPLC系统3纯化。

产率：55mg(35％)

LC-MS(方法1)：Rt 10.73min，970.18m/z[MH⁺]

实例65

使用实例64，通过与合成实例46所用的方法相似的工艺方法，制备实例65。使用HPLC系统3纯化粗物质。

产率：69％

LC-MS(方法1)：Rt 10.73min，985.08m/z[M⁺]

实例66

使用中间产物71和0.5当量的1，9-二溴十二烷，通过与制备中间产物10所用的方法相似的工艺方法，制备实例66。使用HPLC系统3纯化产物。

产率：25％

LC-MS(方法1)：Rt 9.04min，1111.39m/z[MH⁺]

实例67

将实例66(43mg，0.039mmol)溶于DCM(5ml)中，并加入碘甲烷(1ml)。将溶液搅拌17小时，然后除去溶剂并将粗物质用HPLC系统3纯化。

LC-MS(方法1)：Rt 9.22min，570.80m/z[M²⁺]/2

实例68

使用中间产物72和0.5当量的N-甲基-2，2’-二氨基乙胺，通过与合成中间产物38所用的方法相似的工艺方法，制备实例68。

产率：42％

LC-MS(方法1)：Rt 11.36min，1112.28m/z[MH⁺]

实例69

使用中间产物75和二甲基氨基乙醇，通过与合成实例36所用的方法相似的工艺方法，制备实例69。将产物用Isolute Si(II)熔管(10g)进行色谱纯化，依次使用下列洗脱液：EtOAc；将含2M NH₃的MeOH按5％的量溶于EtOAc；100％的含有2M NH₃的MeOH；以及含5％浓HCl(37％的水溶液)的MeOH。将分离的产物溶于乙腈和水中，过滤并蒸发滤液，然后使用HPLC系统3进行纯化。

产率：52mg(9％)

LC-MS(方法1)：Rt 6.57min，1156.26m/z[M⁺]

实例70

将中间产物11(100mg，0.182mmol)溶于乙腈(3ml)中，并加入NaHCO₃(76mg，0.91mmol)和吡咯烷(45μl，0.545mmol)。将反应物搅拌18小时后过滤并蒸发。将残留物重新溶于DCM中并用水洗涤，除去溶剂后得到单取代的吡咯烷。将该物质溶于乙腈(3ml)中，然后加入中间产物11(100mg，0.182mmol)，接着加入NaHCO₃(31mg，0.364mmol)，将混合物在室温搅拌30小时，再在40℃搅拌6小时。再加入一定量的中间产物11(145mg，0.264mmol)，并将反应物在80℃加热30h。过滤粗物质并蒸发，然后用HPLC系统3进行纯化。

产率：103mg(52％)

LC-MS(方法1)：Rt 10.83min，1010.09m/z[M⁺]

实例71

使用中间产物11和哌啶，通过与合成实例70中所使用的方法相似的工艺方法，只是其中在工艺方法的第二步时是将反应物在80℃加热48h，从而制备实例71。

产率：34％

LC-MS(方法1)：Rt 10.91min，1024.22m/z[M⁺]

实例72

使用中间产物77和0.5当量的N-甲基-2，2’-二氨基乙胺，根据与合成中间产物38所述的方法相似的工艺方法，制备实例72。

产率：39％

LC-MS(方法1)：Rt 9.82min，1058.19m/z[MH⁺]

实例73

将实例72(25mg，0.024mmol)溶于乙腈(3ml)中，加入碘甲烷(1ml)并将反应物在80℃搅拌过夜。除去溶剂后用HPLC系统3纯化粗物质。

产率：5mg(20％)

LC-MS(方法1)：Rt 9.77min，1072[M⁺]

实例74

使用中间产物79和0.5当量的N-甲基-2，2’-二氨基乙胺，根据与合成中间产物38所述方法相似的工艺方法，制备实例74。用HPLC系统3实现纯化。

产率：29％

LC-MS(方法1)：Rt 11.25min，1180.10[MH⁺]

实例75

将实例74(49mg，0.0415mmol)溶于乙腈(5ml)中，加入NaHCO₃(7mg，0.083mmol)和碘甲烷(3滴)。将混合物在室温搅拌4小时，然后再加入一定量的碘甲烷(3滴)，将混合物搅拌17h。过滤粗产物并蒸发，再使用HPLC系统3进行纯化。

产率：27mg(54％)

LC-MS(方法1)：Rt 11.20min，1194.23m/z[M⁺]

实例76

将氧化银(I)(9.67mg，0.042mmol)悬浮于去离子水(2ml)中，并不停搅拌，向搅拌悬液中加入琥珀酸(4.9mg，0.042mmol)。将混合物在室温放置3小时，并偶尔加热。将混浊溶液用实例24(100mg，0.083mmol)进行处理，所得的混合物在室温下搅拌16h。然后将混合物离心(15℃，13000r.p.m.)1小时，移去上清液并冷冻干燥，得到浅褐色固体形式的半琥珀酸盐。

产率：64mg(64％)

LC-MS(方法1)：Rt 10.25min，1070.11m/z[M+]

熔点：138-143℃

弹性蛋白酶抑制分析

测试了多种本发明化合物对于HNE的抑制活性。

荧光肽底物

在96孔板上以100μl的总分析体积进行分析。酶(人类白细胞弹性蛋白酶，Sigma E8140)的终浓度为0.00036单位/孔。使用终浓度为100μM的肽底物(MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-ValAMC，Calbiochem#324745)。分析缓冲液(0.05M Tris.HCl，pH7.5，0.1M NaCl；0.1M CaCl₂；0.0005％brij-35)中的DMSO的终浓度为1％。

通过加入酶开始酶反应。在室温下进行酶反应，30分钟后加入50μl大豆胰蛋白酶抑制剂(Sigma T-9003)以终止反应，该大豆胰蛋白酶的终浓度为50μg/孔。在FLEXstation仪器(Molecular Devices)上使用380nm的激发光和460nm的发射光滤光片读出荧光读数。通过从范围在1000nM至0.051nM的10个浓度的浓度系列来测定化合物的效力。结果为两个独立实验的平均值，每一实验重复进行两次。

结果显示，所测试的化合物对于HNE的IC₅₀值在1-1000nM的范围内。

使用荧光标记弹性蛋白

在96孔板上以100μl的总分析体积进行分析。酶(人类白细胞弹性蛋白酶，Sigma E8140)的终浓度为0.002单位/孔。使用从牛的颈韧带提取的带荧光标记的终浓度为15μg/ml的可溶性弹性蛋白酶(Molecular Probes，E-12056)。分析缓冲液(0.1M Tris-HCl，pH8.0，含0.2mM叠氮化钠)中的DMSO的终浓度为2.5％。

通过加入酶开始酶反应。在室温下进行酶反应，并在120分钟后读数。在FLEXstation仪器(Molecular Devices)上使用485nm的激发光和530nm的发射光滤光片读出荧光读数。通过从范围在25000nM至1nM的10个浓度的浓度系列来测定化合物的效力。结果为两个独立实验的平均值，每一实验重复进行两次。

弹性蛋白酶选择性分析

通过测试化合物对于以下6种蛋白酶的作用来测定对弹性蛋白酶抑制的选择性：纤溶酶、凝血酶、组织蛋白酶G、蛋白酶3、胰蛋白酶和糜蛋白酶(均购自Sigma，目录号分别为P1867、T1063、C4428、P0615、T6424、C8949)。在96孔板上以100μl的总分析体积进行分析。对于所有的蛋白酶使用通用底物：带荧光标记的酪蛋白(Molecular Probes，E-6639)，使用终浓度分别为20μg/ml(组织蛋白酶G和糜蛋白酶)、10μg/ml(纤溶酶和凝血酶)或5μg/ml(蛋白酶3和胰蛋白酶)。底物的终浓度接近底物各自的K_m测定值。分析缓冲液(0.05M Tris.HCl，pH7.5，0.1M NaCl；0.1M CaCl₂；0.0005％brij-35)中的DMSO的终浓度为5％。通过加入酶开始酶反应。酶反应在室温下进行60分钟。在FLEXstation仪器(Molecular Devices)上使用589nm的激发光和617nm的发射光滤光片读出荧光读数。通过从范围在500μM至0.2μM的8个浓度的浓度系列来测定化合物的效力。结果为两个独立实验的平均值，每一实验重复进行两次。

结果显示，所测试的化合物对于各种蛋白酶的选择性为1倍至300倍以上。

膜结合弹性蛋白酶

从健康的人类志愿者处采集血液。通过聚蔗糖上的密度离心分离PMN，低渗裂解红细胞后使用多聚甲醛/戊二醛固定细胞，并通过离心洗涤。

将化合物配制在含有的HBSS中，并与细胞一起在37℃孵育5分钟。向每孔中加入发荧光的AAPV底物(Calbiochem，#324745)，使每孔中的终体积为100μl，在37℃下反应30分钟后使用Spectramax Gemini仪器以380nm的激发光和460nm的发射光对该板进行读数。

结果发现，在该分析中检测的本发明化合物具有的IC₅₀值小于100nM，优选地小于20nM。

细胞内弹性蛋白酶(与裂解细胞的弹性蛋白酶相对照)

如前所述地分离PMN。将PMN加入至96孔聚丙烯板中，每孔加入DMSO或化合物以使得终体积为150μl。将板在37℃孵育30分钟。通过离心洗涤细胞，并用含有0.04％triton的HBSS裂解细胞。沉淀细胞碎片并将含有化合物或DMSO的上清液转移至干净的板中。向所有孔中加入发荧光的AAPV底物，在37℃下反应30分钟后使用Spectramax Gemini仪器以380nm的激发光和460nm的发射光对该板进行读数。

嗜中性粒细胞释放的弹性蛋白酶的活性分析(人类、小鼠、豚鼠)

从豚鼠体内得到释放的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶

使用LPS气溶胶处理豚鼠。使动物静置4小时后处死动物，灌洗其肺部以收获PMN。将肺泡支气管灌洗液(BAL)在400g离心10分钟，然后将细胞重悬于HBSS中。向细胞悬液中加入10μM的细胞松弛素B(cytocholasin B)，在37℃孵育5分钟，然后加入1μM的fMLP，再孵育5分钟。将细胞在400g离心10分钟。将“富含弹性蛋白酶的上清液”转移至干净的管中。

从小鼠体内得到释放的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶

将小鼠麻醉并用LPS气溶胶i.n处理。使动物静置4小时后处死动物，灌洗其肺部以收获PMN。将肺泡支气管灌洗液(BAL)在400g离心10分钟，然后将细胞重悬于1ml HBSS中。向细胞悬液中加入10μM的细胞松弛素B，在37℃孵育5分钟，然后加入1μM的fMLP，再孵育5分钟。将细胞在400g离心10分钟。将“富含弹性蛋白酶的上清液”转移至干净的管中。

从人类体内得到释放的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶

如前所述地分离人类PMN。向细胞悬液中加入10μM的细胞松弛素B，在37℃孵育5分钟，然后加入1μM的fMLP，再孵育5分钟。将细胞在400g离心10分钟。将“富含弹性蛋白酶的上清液”转移至干净的管中。

向干净的96孔板中加入化合物，然后与“富含弹性蛋白酶”的上清液在37℃共孵育5分钟。向所有孔中加入发荧光的AAPV底物，在37℃下反应30分钟后使用Spectramax Gemini仪器以380nm的激发光和460nm的发射光进行读数。为进行比较，还对活性相当的人类弹性蛋白酶对照无进行了同样的试验。

HNE诱导的大鼠肺出血

将人类嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)滴注至大鼠肺部可引起急性肺损伤。这种损伤的程度可以通过测量肺出血来进行评估。从Harlan UK Ltd.获得雄性Sprague Dawley大鼠(175-220g)，完全圈养(full barrier-bred)并确认没有感染特异性微生物。对动物进行称重并随机分为各处理组(每组7至12只动物)。

所使用的载体为1％DMSO/盐水。将抑制剂溶于1％DMSO中再加入0.9％的盐。

在各次研究中用动物来确定通过各种途径局部送递至肺的弹性蛋白酶抑制剂的效力。用吸入型麻醉剂异氟烷(4％)麻醉大鼠，然后在给予人类嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)之前的30分钟至6小时时给予抑制剂或载体；或者通过hypnorm∶hypnovel∶水(1.5∶1∶2，2.7ml/kg)进行最终麻醉，然后在HNE给药前至少30分钟以内预先给予抑制剂或载体，可以使用PennCentury微喷雾器经口入路进行气管内给药或者通过将液体滴入鼻孔而鼻内给药。动物以0.5ml/kg的剂量接受载体或化合物。

对于在给药后使其恢复的动物，应通过hypnorm∶hypnovel∶水(1.5∶1∶2，2.7ml/kg)进行最终麻醉。当充分麻醉后，使用Penn Century微喷雾器经口入路向气管滴注100μl体积的HNE(600单位/ml)或无菌盐水。将动物置于温箱中保暖，并给予所需的满剂量麻醉剂以保证持续麻醉，直至实验结束。

在HNE攻击一小时后处死动物(0.5ml至1ml戊巴比妥钠)。暴露气管并在两气管环之间切一小口以插入导管(10号，O.D.2-10mm，Portex Ltd.)，导管向肺的方向插入气管约2cm。这样就可以用棉结扎线将导管固定到位。然后用肝素化(10单位/ml)的磷酸缓冲盐溶液(PBS)灌洗肺部(BAL)3次，每次4ml。将所得的BALF置于冰上直至离心。

将BALF在冷却至4℃至10℃的离心机中以1000r.p.m.离心10分钟。弃去上清液并将细胞片状沉淀重悬于1ml的0.1％CETAB/PBS中以裂解细胞。将细胞裂解物冷冻起来，直至对血含量进行分光光度分析。将大鼠全血溶于0.1％CETAB/PBS中作为标准。

在解冻后，向96孔平底板中每孔加入100μl的每种裂解细胞悬液。所有的样本平行测定两次，并以含有100μl的0.1％CETAB/PBS的孔作为空白。使用spectramax 250(Molecular devices)在415nm处测定每孔中内容物的OD值。

通过测量不同浓度的血液溶于0.1％CETAB/PBS后(30、10、7、3、1、0.3、0.1μl/ml)的OD(415nm处)，绘制标准曲线。

通过与标准曲线的比较来计算每一实验样本中的血量。然后如下所述分析数据：

1)计算两个平行样本的平均OD值

2)从所有其它样本的测量值中减去空白值

3)分析数据以评估正态分布。

结果显示化合物具有所需的HNE抑制活性。

Claims

1.式(I)的化合物，或其可药用的盐、溶剂合物或N-氧化物，

M-L-M(I)

其中L为连接物，并且每一个M独立地为式(II)的基团：

其中A为芳基或杂芳基；

D为氧或硫；

Y¹、Y²、Y³、Y⁴和Y⁵每一个独立地为CH、CR³、CR⁶或N，条件是它们中的其中一个为CR³，一个为CR⁶并且它们中最多只有两个为N；

R¹、R²和R³每一个独立地为氢、卤素、硝基、氰基、C₁-C₆烷基、羟基或C₁-C₆烷氧基，其中每一个烷基和烷氧基任选地被一至三个独立地选自卤素、羟基和C₁-C₄烷氧基的自由基所取代；

R⁴为三氟甲基羰基、C₁-C₆烷基羰基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烯氧基羰基、羟基羰基、氨基羰基、单C₁-C₄烷基氨基羰基或双C₁-C₄烷基氨基羰基、C₆-C₁₀芳基氨基羰基、芳基羰基、杂芳基羰基、杂环基羰基、杂芳基、杂环基或氰基；其中每一个烷基羰基、烷氧基羰基和烷基氨基羰基都任选地被一至三个自由基取代，所述自由基独立地选自C₃-C₈环烷基、羟基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄烷氧基羰基、羟基羰基、氨基羰基、单C₁-C₄烷基氨基羰基和双C₁-C₄烷基氨基羰基、C₁-C₄-烷基羰基氨基、(C₁-C₄烷基羰基)-C₁-C₄烷基氨基、氰基、氨基、单C₁-C₄烷基氨基和双C₁-C₄-烷基氨基、杂芳基、杂环基和三(C₁-C₆烷基)甲硅烷基；而且，其中杂芳基羰基、杂环基羰基、杂芳基和杂环基可以进一步被C₁-C₄-烷基取代；

或者R⁴代表式(VIII)的基团

其中

R^4F为孤电子对或者R^4F为烷基，而且它所连接的氮原子为季氮原子并带有一个正电荷；

R^4C、R^4D和R^4E为烷基，或R^4C、R^4D或R^4E中的任何两个与它们所连接的氮原子连接起来形成环，该环任选地含有另一个选自氧和氮的杂原子；

v1为1-3；以及

v2为1-6，

R⁵为C₁-C₄烷基或氨基，并且烷基任选地被一至三个独立地选自下列的自由基所取代：卤素、羟基，C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烯氧基、C₁-C₆烷硫基、氨基、单C₁-C₆烷基氨基和双C₁-C₆烷基氨基、芳基氨基、羟基羰基、C₁-C₆烷氧基羰基和自由基-O-(C₁-C₄烷基)-O-(C₁-C₄烷基)；以及R⁶为卤素、硝基、氰基、C₁-C₆-烷基、羟基或C₁-C₆烷氧基，其中烷基和烷氧基任选地被一至三个独立地选自卤素、羟基和C₁-C₄烷氧基的自由基所取代。

2.根据权利要求1的化合物，其中A为苯基。

3.根据权利要求1或权利要求2的化合物，其中R¹为氢。

4.根据前述权利要求任一项的化合物，其中R²为甲基或-CN。

5.根据前述权利要求任一项的化合物，其中R³为氢。

6.根据前述权利要求任一项的化合物，其中R⁴为-C(O)OCH₂CH₃或-C(O)OCH₂CH₂OH。

7.根据前述权利要求任一项的化合物，其中R⁵为甲基。

8.根据前述权利要求任一项的化合物，其中R⁶为三氟甲基。

9.根据前述权利要求任一项的化合物，其中Y¹、Y²、Y³、Y⁴和Y⁵全都不为N。

10.根据前述权利要求任一项的化合物，其中D为氧。

11.根据前述权利要求任一项的化合物，所述化合物为式(IV)的化合物：

(M-L)_t-G (IV)

其中t为2至20；并且

G为芳基、杂芳基、烷基、环烷基、氮、树枝状聚合物或者式(V)至(VII)

任一项所示的基团：

Ar-Ar

(V) (VI) (VII)

其中

Ar为芳基或杂芳基；并且

u为2至20。

12.根据权利要求11的化合物，其中G为苯氧基苯基、二苯基、二吡啶基、乙二胺基、丙二胺基或树枝状聚合物。

13.根据前述权利要求任一项的化合物，其中L为式(III)的基团

-L^a-R⁷-L^b-W-L^b-R⁷-L^a- (III)

其中

L^a为一个键或-C(O)-；

L^b为一个键或-C(O)-；

R⁷为亚烷基或环亚烷基；

W为一个键、N(R^9B)(R^9G)或选自下列的二价自由基：

-(O-R^8A)_m1-O-

-N(R^9A)-(O-R^8A)_m1-R^8A-N(R^9A)-

-N(R^9A)-R^8B-N(R^9B)(R^9C)-R^8B-N(R^9A)-

-N(R^9A)-R^8b-N(R^10B)C(＝NR^10A)(NR^10C)-R^8B-N(R^9A)-

-N(R^9A)-R^8B-N(R^9A)-

其中

m1为1-4；

R^8A为亚烷基或环亚烷基；

R^8B为亚烷基或环亚烷基基团，或为式A²的基团；

R^9A为氢或低级烷基；

R^9B或R^9C中的一个为孤电子对而另一个为氢或低级烷基；或者R^9B和R^9C均为低级烷基，此时它们所连接的氮为季氮原子并且带有一个正电荷；或者NR^9BR^9C为一个环；

R^10A为氢或低级烷基；

R^10B和R^10C独立地为氢或低级烷基，或者R^10B和R^10C一起形成一个环；

m2为1-3；

A¹选自-N(R^9A)-R⁸-N(R^9B)(R^9C)-R⁸-N(R^9A)-和-N(R^9A)-R⁸-N(R^10B)C(＝NR^10A)(NR^10C)-R⁸-N(R^9A)-；以及A²选自

其中Ar¹和Ar²每一个独立地为芳基或杂芳基。

14.根据权利要求13的化合物，其中每一个L^a独立地为-C(O)-或共价键。

15.根据权利要求14的化合物，其中L^a为一个键。

16.根据权利要求13至15的化合物，其中R⁷为亚烷基。

17.根据权利要求13至16任一项的化合物，其中W为-N(R^9A)-R^8B-N(R^9B)(R^9C)-R^8B-N(R^9A)-。

18.根据权利要求13至16任一项的化合物，其中W为-N(R^9A)-R^8B-N(R^10B)C(＝NR^10A)(NR^10C)-R^8B-N(R^9A)。

19.根据权利要求13至16任一项的化合物，其中W为：

20.根据权利要求13至16任一项的化合物，其中W为：

21.根据权利要求13至16任一项的化合物，其中W为-N(R^9B)(R^9C)-。

22.根据前述权利要求任一项的化合物，其中A为芳基或杂芳基；

D为氧或硫；

R¹、R²和R³每一个独立地为氢、卤素、硝基、氰基、C₁-C₆烷基、羟基或C₁-C₆烷氧基，其中C₁-C₆烷基和C₁-C₆烷氧基可以进一步被一至三个选自卤素、羟基和C₁-C₄烷氧基的相同或不同的自由基所取代；

R⁴为三氟甲基羰基、C₁-C₆烷基羰基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烯氧基羰基、羟基羰基、氨基羰基、单C₁-C₄烷基氨基羰基或双C₁-C₄烷基氨基羰基、C₆-C₁₀芳基氨基羰基、芳基羰基、杂芳基羰基、杂环基羰基、杂芳基、杂环基或氰基；其中C₁-C₆烷基羰基、C₁-C₆烷氧基羰基、单C₁-C₄烷基氨基羰基和双C₁-C₄烷基氨基羰基可以进一步被一至三个相同或不同的自由基取代，所述自由基选自C₃-C₈环烷基、羟基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄烷氧基羰基、羟基羰基、氨基羰基、单C₁-C₄烷基氨基羰基和双C₁-C₄烷基氨基羰基、C₁-C₄烷基羰基氨基、(C₁-C₄烷基羰基)-C₁-C₄烷基氨基、氰基、氨基、单C₁-C₄烷基氨基和双C₁-C₄烷基氨基、杂芳基、杂环基和三(C₁-C₆烷基)甲硅烷基；并且其中杂芳基羰基、杂环基羰基、杂芳基和杂环基可以进一步被C₁-C₄烷基取代；

R⁵为C₁-C₄烷基，可以进一步被一至三个相同或不同的自由基取代，所述自由基选自卤素、羟基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆-烯氧基、C₁-C₆-烷硫基、氨基、单C₁-C₆-烷基氨基和双C₁-C₆-烷基氨基、芳基氨基、羟基羰基、C₁-C₆烷氧基羰基和自由基-O-(C₁-C₄烷基)-O-(C₁-C₄烷基)；或R⁵为氨基；

R⁶为卤素、硝基、氰基、C₁-C₆烷基、羟基或C₁-C₆烷氧基，其中C₁-C₆烷基和C₁-C₆烷氧基可以进一步被一至三个选自卤素、羟基和C₁-C₄烷氧基的相同或不同的自由基取代；并且

Y¹、Y²、Y³、Y⁴和Y⁵每一个独立地为CH、CR³、CR⁶或N。

23.根据权利要求1的化合物，所述化合物如实例1至76的任一项所定义。

24.根据权利要求1的化合物，所述化合物如实例1至17的任一项所定义。

25.根据权利要求1的化合物，所述化合物如实例22、24、33、35、36、38、41、46、65、69、70、71和76的任一项所定义。

26.根据前述权利要求任一项的化合物用于治疗。

27.一种药物组合物，包括根据权利要求1至25任一项的化合物和可药用的载体或赋形剂。

28.根据权利要求1至25任一项的化合物用于制备治疗下述病症的药物的用途，所述病症选自哮喘、炎性肠病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、慢性支气管炎、肺纤维化、肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺气肿、吸烟诱发的气肿、结节病、支气管扩张或囊性纤维化病(CF)。

29.根据权利要求28的用途，其中所述病症为COPD。

30.根据权利要求28的用途，其中所述病症为CF。

31.根据权利要求28的用途，其中所述病症为溃疡性结肠炎或克隆病。

32.根据权利要求28至31任一项的用途，其中所述病症为呼吸性疾病，所述药物通过吸入途径给药。