CN101120666B - 新品种鲤鱼的选育方法 - Google Patents
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Abstract
新品种鲤鱼的选育方法，它涉及一种鱼类新品种的选育方法。它解决了目前鲤鱼养殖和培育中群体选育方法存在易产生近亲交配，导致经济性状和生产性能下降；种内杂交方法随机性大，选育优良品种的概率低，也容易发生近亲交配问题。选育步骤：一、表型性状挑选；二、检测亲本间的遗传信息；三、根据遗传信息进行繁殖配组；四、培育子代成熟；五、以子代鲤鱼为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到鲤鱼达到新品种性状设计要求。本发明方法在选育鲤鱼新品种的过程中始终利用分子标记检测亲本与子代的遗传组成，从而可避免近亲交配，而且鲤鱼新品种的性状按所设定的方向发展，优良新品种的出现概率高，其经济性状和生产性能显著提高。
Description
技术领域
本发明涉及一种鱼类新品种的选育方法。
背景技术
鲤鱼是我国乃至世界最大的水产养殖鱼种，目前主要是采用群体选育、种内杂交或雌核发育等手段进行鲤鱼的养殖和培育。群体选育是以表型选择为主，在育种前由于不清楚选育对象的遗传组成，所以易产生近亲交配，导致鲤鱼经济性状和生产性能下降，从而出现经济性状衰退的现象。鲤鱼种内杂交随机性大，选育优良品种的概率低，而且也容易发生近亲交配，导致鲤鱼经济性状和生产性能下降。
发明内容
本发明的目的是为解决目前鲤鱼养殖和培育中群体选育方法存在易产生近亲交配，导致经济性状和生产性能下降；种内杂交方法随机性大，选育优良品种的概率低，也容易发生近亲交配的问题，而提供的一种新品种鲤鱼的选育方法。
本发明新品种鲤鱼按以下步骤选育：一、根据新品种性状的设计要求进行表型性状挑选，符合要求的鲤鱼作为繁殖亲本；二、检测亲本间的遗传信息；三、根据遗传信息进行繁殖配组，繁殖亲本至少分成2个繁殖群体，每个繁殖群体中任意一对雌雄个体间的遗传距离应大于家系三代间的遗传距离；四、繁殖群体内自由交配、培育子代鲤鱼性成熟；五、以子代鲤鱼为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到子代鲤鱼群体达到新品种性状设计要求，即得到新品种鲤鱼。
本发明步骤一中表型性状挑选公式为 公式中Xn为亲本的表型性状测定值，
为鲤鱼群体表型性状的平均值，S为鲤鱼群体表型性状的标准差。步骤二检测亲本间的遗传信息：a.提取繁殖亲本DNA；b.繁殖亲本DNA均用30对微卫星引物分别进行PCR扩增；c.利用图谱分析软件对PCR扩增产物进行数字化处理；d.数字化数据导入亲缘分析软件分析计算，获得遗传信息。
本发明方法在选育鲤鱼新品种的过程中始终利用分子标记检测亲本与子代的遗传组成，从而可避免近亲交配，而且鲤鱼新品种的性状按所设定的方向发展，优良新品种的出现概率高，其经济性状和生产性能显著提高。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式新品种鲤鱼按以下步骤选育：一、根据新品种性状的设计要求进行表型性状挑选，符合要求的鲤鱼作为繁殖亲本；二、检测亲本间的遗传信息；三、根据遗传信息进行繁殖配组，繁殖亲本至少分成2个繁殖群体，每个繁殖群体中任意一对雌雄个体间的遗传距离应大于家系三代间的遗传距离；四、繁殖群体内自由交配、培育子代鲤鱼性成熟；五、以子代鲤鱼为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到子代鲤鱼群体达到新品种性状设计要求，即得到新品种鲤鱼。
本实施方式可根据需求进行设计，如选择培育鳞被、生长速度快、饲料转化率高、肉质好等性状的鲤鱼新品种。本实施方式还可以根据选育目标对外观与体型等不可量化的表型性状进行挑选。
本实施方式步骤三中繁殖亲本所分成的繁殖群体个数越多越好，可提供更多的选择，并提高出现优良新品种的数量及机会。
本实施方式将经济性状的优势基因型一代一代地富集起来，从而实现选育出经济性状优异、生产性能高、遗传性状稳定的鲤鱼新品种的目标。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中表型性状挑选公式为 公式中Xn为亲本的表型性状测定值，
为鲤鱼群体表型性状的平均值，S为鲤鱼群体表型性状的标准差。其它步骤及参数与实施方式一相同。
由选择强度可知1倍S则选择强度最高，2倍S则选择强度中等，3倍S则选择强度最低，因此本实施方式将大于表型性状平均值+二倍标准差和小于表型性状平均值-二倍标准差的鲤鱼个体舍去。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤二检测亲本间的遗传信息：a.提取繁殖亲本DNA；b.繁殖亲本DNA均用30对微卫星引物分别进行PCR扩增；c.利用图谱分析软件对PCR扩增产物进行数字化处理；d.数字化数据导入亲缘分析软件分析计算，获得遗传信息。其它步骤及参数与实施方式一相同。
本实施方式中要对提取过DNA的繁殖亲本进行标记，可采用电子标记、常规标记方法(剪取背鳍、系不同颜色的塑料管等其它物理标记方法)或分池饲养。本实施方式也可以不使用全部30对微卫星引物，而只选用其中部分的微卫星引物(但必须多于25对微卫星引物)进行PCR扩增。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤b中每对微卫星引物的PCR反应总体积为25μL由18μL PCR反应缓冲液、50ng繁殖亲本DNA、1μL微卫星引物、1U Taq聚合酶和余量的无菌超纯水制成；其中PCR反应缓冲液每升由0.25mmolpH值为8.3的Tris·Cl、1.25mmolKCl、0.0375mmolMgCl2、0.25mLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP和余量的去离子水组成。其它步骤及参数与实施方式三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤b中PCR反应程序为：94℃预变性3min，94℃变性30sec，退火30s，72℃延伸30s，循环38次，最后72℃延伸5min。其它步骤及参数与实施方式三相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤b中选用的30对微卫星引物及其退火温度如表1所示。其它步骤及参数与实施方式三相同。
表1
| 基因座 | 引物序列 | 重复序列 | 退火温度(℃) |
| CcaO4 | F：ATCCCTTACCGCCCTGTGTR：AGCTGAAAAACGCTGTCACG | (TA)24 | 50 |
| HLJ019 | F：ACTGCTGGCTCAGGAACAR：AGAGCAAAGATGGTAGCTC | (CA)26 | 53 |
| HLJ037 | F：CGTGGAGGCATAAGGGATR：ACGGGAGCGTACAGAAAT | (CA)14 | 53 |
| HLJ038 | F：CACAGAACGCATCAGTAAR：TGTAAACCTTCAACCTCC | (CA)41 | 53 |
| HLJ041 | F：AGACCACCGCAGTAACAAR：GACTCACTCAGCACCAGA | (CA)24 | 53 |
| HLJ044 | F：GTACAGCGTGACAGCATTR：AAGTTCATCGGTGTCCTC | (CA)28 | 53 |
| HLJ046 | F：AACCCTGAACTCACAAACR：CACGGAAACTGAGAAGAC | (GT)14 | 53 |
| HLJ049 | F：GATTTGTGCTCCTCAACCR：CTGTCACTTCTCCTTCCA | (GT)28 | 54 |
| HLJ055 | F：GGTACAACGGGAACCACAR：TGATTGACAGGCAGTGGG | (CT)11；(CA)29 | 54 |
| HLJ058 | F：CAGATGGCAGACAGGTAAR：GAGCAAGTGAGGGAACAG | (CA)21 | 53 |
| HLJ060 | F：CGATCACTGGCAAGATTAR：ATGGACTACACCTCACCC | (GT)23 | 54 |
| HLJ338 | F：GAAGAATGGGTGAGTAAGAR：ACTAGGATTTGGAAGAGC | (AC)58 | 51 |
| HLJ372 | F：TCTACTTCTACCGCCACTR：GACTATTCACCTGCATCTT | (GT)18 | 54 |
| HLJ379 | F：GGGGAGACGAGAAGTGCAR：AGCAGGTCTGTGGGCAAG | (CT)13 | 54 |
| HLJ380 | F：AGGCAGACGAAAGGTAAAR：CTCGCTTCTGTAGGCATT | (CA)34 | 54 |
| HLJ383 | F：GGCTCCTCCTCATCCTCTR：GCACTTCTGCACCTTTCA | (CA)14 | 51 |
| HLJ392 | F：GGCTACAAGGCAACACTGR：TGCGGTTAATGAGGTCTG | (CA)22 | 54 |
| HLJ393 | F：TGCGGTCATTACTCATTCGR：CCCAGCACCTGTTTCCAC | (CA)10 | 54 |
| HLJ398 | F：CATTACTTGAACTATCATCCAR：TGTGCTGAGGATTATTGG | (CT)16 | 54 |
| HLJ400 | F：AAGAAGCCTCGGTCCTCCR：AAAGCCCAAAGCACATCA | (CA)22 | 51 |
| HLJ805 | F：TCTGCTGAAGGGCGAACAR：ACGATCACGCTGCGACTA | (CA)9 | 48 |
| HLJ806 | F：GGTGTCAGGCTTTAGTCCR：CATCTGAGTTTTCTCCAAGT | (CA)48 | 48 |
| HLJ809 | F：ATCATCACAGCCAAAGAAGTR：TACGGACATAGTGCAGACAA | (CA)12 | 48 |
| HLJ817 | F：GACGATCCAGCAGCAATGR：CTCTTCCTAAAGCCTCAAA | (GT)22 | 48 |
| HLJ848 | F：GAGAACACGGCTGGATGGR：GTGGGTGTTTGAATTGAGAT | (CA)29 | 48 |
| HLJ855 | F：CGACCGAACTCAGAACACR：GAGCACCGCATTAACAGA | (AC)44 | 48 |
| HLJ873 | F：AGTGTCGTTTATGCGTATCTTR：AGCTCGCCTACTCTTCTACT | (CA)50 | 48 |
| HLJ878 | F：AGTGGAGGACGTGACAGTR：AAGCAGAGCCTGATTTGA | (CA)37 | 54 |
| HLJ896 | F：ATCACCAGTACATTCACTR：CGTTTAGCAAAGGTTAGT | (CA)36 | 53 |
| HLJ900 | F：AAGGACGACGGAAGGTTTR：ACACTGACGGGTCAAGAG | (CT)5(CA)34 | 50 |
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤d中使用的亲缘分析软件为POPGENEN软件和PHYLIP软件。其它步骤及参数与实施方式三相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤c PCR扩增产物先在电压为200V的条件下凝胶电泳2h，然后Gold View染色，再以溴酚蓝为凝胶上样液凝胶电泳，之后用凝胶成像仪记录电泳结果并用图谱分析软件进行数字化处理。其它步骤及参数与实施方式三相同。
本实施方式所用的凝胶为浓度为2％的琼脂糖凝胶。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式三或八的不同点是：步骤c中使用的图谱分析软件为Gel-pro4.5软件。其它步骤及参数与实施方式三或八相同。
具体实施方式十：本实施方式新品种鲤鱼按以下步骤选育：
步骤一、根据新品种生长速度快、体重大的设计要求对国家换新良种场的400尾镜鲤亲鱼进行表型性状挑选，挑选公式为 公式中Xn为亲本的体长、体重表型性状测定值，为鲤鱼群体表型性状的平均值，S为鲤鱼群体表型性状的标准差，将大于表型性状平均值+二倍标准差和小于表型性状平均值-二倍标准差的鲤鱼个体舍去，复合要求的鲤鱼作为繁殖亲本。
步骤二、检测亲本间的遗传信息：
a.提取繁殖亲本DNA
对繁殖亲本进行常规物理标记，标记的同时一对一的剪取鳍条0.08～0.12克，放到有与繁殖亲本标记相同的离心管(可放入冰箱待用或直接用于提取DNA)；向离心管中加入0.5mL裂解液(每升裂解液中含有浓度为0.5％(W/V)的十二烷基肌氨酸钠5g、蛋白酶K200mg和浓度为0.5mol/L的EDTA200mL)后在50℃条件下消化1h，消化液再放入68℃的环境中处理15min；之后用与消化液等体积的提取液(提取液由酚、氯仿和异戊醇组成，酚、氯仿与异戊醇的体积比为25∶24∶1)抽提2次；然后用无DNA的RNA酶消化其中含有的RNA，并用提取液(同上)抽提2次；再经数次透析(每升透析液中含有50mmolpH值为8.0Tris·Cl、10mmolEDTA、10mmolNaCl)直到OD270＜0.05；向透析液中加入透析液体积2倍的冰预冷的无水乙醇，经沉淀后离心除上清液，再向沉淀中加入与沉淀等体积的冰预冷的质量浓度为70％乙醇洗涤，并离心除去上清液在室温条件下干燥，再用0.1×TE缓冲液溶解。(或者按现有其它标准方法提取可进行PCR分析所用的DNA样品，样品应置于4℃环境中保存备用)
b.繁殖亲本DNA均用30对微卫星引物分别进行PCR扩增
每对微卫星引物的PCR反应总体积为25μL由18μL PCR反应缓冲液、50ng繁殖亲本DNA、1μL微卫星引物、1U Taq聚合酶和余量的无菌超纯水制成；其中PCR反应缓冲液每升由0.25mmolpH值为8.3的Tris·Cl、1.25mmolKCl、0.0375mmolMgCl2、0.25mLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP(4种dNTP每种dNTP在PCR反应缓冲液中的浓度各为0.25mmol/L)和余量的去离子水组成；PCR反应程序为：94℃预变性3min，94℃变性30sec，退火30s，72℃延伸30s，循环38次，最后72℃延伸5min；其中选用的30对微卫星引物及其退火温度如表1所示。
c.利用图谱分析软件对PCR扩增产物进行数字化处理
PCR扩增产物先在电压为200V的条件下凝胶电泳2h，然后Gold View染色，再以溴酚蓝为凝胶上样液凝胶电泳，之后用凝胶成像仪记录电泳结果并用图谱分析软件Gel-pro4.5进行数字化处理。
d.数字化数据导入亲缘分析软件分析计算
使用的亲缘分析软件为POPGENEN软件和PHYLIP软件进行亲缘分析和计算，获得繁殖亲本的遗传信息(可以根据遗传信息剔除劣质个体)。
步骤三、根据遗传信息进行繁殖配组，繁殖亲本分成8个繁殖群体，每个繁殖群体中任意一对雌雄个体间的遗传距离应大于家系三代间的遗传距离。(本实施方式中每个雌性亲本在群体中平均有近亲雄鱼2.5个，选择无近亲关系或遗传距离大于三代家系间近亲的遗传距离即遗传距离大于0.20的亲本进行配组，去除掉遗传距离小于0.20且近亲关系重的无法配组的个体。)
步骤四、繁殖群体内自由交配、培育子代鲤鱼性成熟
步骤五、以子代鲤鱼作为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到子代鲤鱼群体成为生长速度快、体重大的新品种鲤鱼。
本实施方式得到两个新品种鲤鱼。
将国家换新良种场的另外400尾镜鲤作为对照组、兴国红鲤作为空白组与本实施方式两个新品种鲤鱼进行对比。在养殖条件相同的情况下，本实施方式两个新品种鲤鱼分别比对照组生长速度平均快18.45％和8.56％，比空白组生长速度平均快131.38％和112.07％；本实施方式两个新品种鲤鱼个体的体重分别比对照组的平均重15％和8％，比空白组平均重120％和110％。
序列表
<110>中国水产科学研究院黑龙江水产研究所
<120>新品种鲤鱼的选育方法
<160>60
<210>1
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座Cca04设计微卫星引物(1)的上游引物
<400>1
atcccttacc gccctgtgt 19
<210>2
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座Cca04设计微卫星引物(1)的下游引物
<400>2
agctgaaaaa cgctgtcacg 20
<210>3
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ019设计微卫星引物(2)的上游引物
<400>3
actgctggct caggaaca 18
<210>4
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ019设计微卫星引物(2)的下游引物
<400>4
agagcaaaga tggtagctc 19
<210>5
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ037设计微卫星引物(3)的上游引物
<400>5
cgtggaggca taagggat 18
<210>6
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ037设计微卫星引物(3)的下游引物
<400>6
acgggagcgt acagaaat 18
<210>7
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ038设计微卫星引物(4)的上游引物
<400>7
cacagaacgc atcagtaa 18
<210>8
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ038设计微卫星引物(4)的下游引物
<400>8
tgtaaacctt caacctcc 18
<210>9
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ041设计微卫星引物(5)的上游引物
<400>9
agaccaccgc agtaacaa 18
<210>10
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ041设计微卫星引物(5)的下游引物
<400>10
gactcactca gcaccaga 18
<210>11
<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ044设计微卫星引物(6)的上游引物
<400>11
gtacagcgtg acagcat 17
<210>12
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ044设计微卫星引物(6)的下游引物
<400>12
aagttcatcg gtgtcctc 18
<210>13
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ046设计微卫星引物(7)的上游引物
<400>13
aaccctgaac tcacaaac 18
<210>14
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ046设计微卫星引物(7)的下游引物
<400>14
cacggaaact gagaagac 18
<210>15
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ049设计微卫星引物(8)的上游引物
<400>15
gatttgtgct cctcaacc 18
<210>16
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ049设计微卫星引物(8)的下游引物
<400>16
ctgtcacttc tccttcca 18
<210>17
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ055设计微卫星引物(9)的上游引物
<400>17
ggtacaacgg gaaccaca 18
<210>18
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ055设计微卫星引物(9)的下游引物
<400>18
tgattgacag gcagtggg 18
<210>19
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ058设计微卫星引物(10)的上游引物
<400>19
cagatggcag acaggtaa 18
<210>20
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ058设计微卫星引物(10)的下游引物
<400>20
gagcaagtga gggaacag 18
<210>21
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ060设计微卫星引物(11)的上游引物
<400>21
cgatcactgg caagatta 18
<210>22
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ060设计微卫星引物(11)的下游引物
<400>22
atggactaca cctcaccc 18
<210>23
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ338设计微卫星引物(12)的上游引物
<400>23
gaagaatggg tgagtaaga 19
<210>24
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ338设计微卫星引物(12)的下游引物
<400>24
actaggattt ggaagagc 18
<210>25
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ372设计微卫星引物(13)的上游引物
<400>25
tctacttcta ccgccact 18
<210>26
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ372设计微卫星引物(13)的下游引物
<400>26
gactattcac ctgcatctt 19
<210>27
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ379设计微卫星引物(14)的上游引物
<400>27
ggggagacga gaagtgca 18
<210>28
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ379设计微卫星引物(14)的下游引物
<400>28
agcaggtctg tgggcaag 18
<210>29
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ380设计微卫星引物(15)的上游引物
<400>29
aggcagacga aaggtaaa 18
<210>30
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ380设计微卫星引物(15)的下游引物
<400>30
ctcgcttctg taggcatt 18
<210>31
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ383设计微卫星引物(16)的上游引物
<400>31
ggctcctcct catcctct 18
<210>32
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ383设计微卫星引物(16)的下游引物
<400>32
gcacttctgc acctttca 18
<210>33
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ392设计微卫星引物(17)的上游引物
<400>33
ggctacaagg caacactg 18
<210>34
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ392设计微卫星引物(17)的下游引物
<400>34
tgcggttaat gaggtctg 18
<210>35
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ393设计微卫星引物(18)的上游引物
<400>35
tgcggtcatt actcattcg 19
<210>36
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ393设计微卫星引物(18)的下游引物
<400>36
cccagcacct gtttccac 18
<210>37
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ398设计微卫星引物(19)的上游引物
<400>37
cattacttga actatcatcca 21
<210>38
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ398设计微卫星引物(19)的下游引物
<400>38
tgtgctgagg attattgg 18
<210>39
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ400设计微卫星引物(20)的上游引物
<400>39
aagaagcctc ggtcctcc 18
<210>40
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ400设计微卫星引物(20)的下游引物
<400>40
aaagcccaaa gcacatca 18
<210>41
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ805设计微卫星引物(21)的上游引物
<400>41
tctgctgaag ggcgaaca 18
<210>42
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ805设计微卫星引物(21)的下游引物
<400>42
acgatcacgc tgcgacta 18
<210>43
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ806设计微卫星引物(22)的上游引物
<400>43
ggtgtcaggc tttagtcc 18
<210>44
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ806设计微卫星引物(22)的下游引物
<400>44
catctgagtt ttctccaagt 20
<210>45
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ809设计微卫星引物(23)的上游引物
<400>45
atcatcacag ccaaagaagt 20
<210>46
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ809设计微卫星引物(23)的下游引物
<400>46
tacggacata gtgcagacaa 20
<210>47
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ817设计微卫星引物(24)的上游引物
<400>47
gacgatccag cagcaatg 18
<210>48
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ817设计微卫星引物(24)的下游引物
<400>48
ctcttcctaa agcctcaaa 19
<210>49
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ848设计微卫星引物(25)的上游引物
<400>49
gagaacacgg ctggatgg 18
<210>50
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ848设计微卫星引物(25)的下游引物
<400>50
gtgggtgttt gaattgagat 20
<210>51
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ855设计微卫星引物(26)的上游引物
<400>51
cgaccgaact cagaacac 18
<210>52
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ855设计微卫星引物(26)的下游引物
<400>52
gagcaccgca ttaacaga 18
<210>53
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ873设计微卫星引物(27)的上游引物
<400>53
agtgtcgttt atgcgtatctt 21
<210>54
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ873设计微卫星引物(27)的下游引物
<400>54
agctcgccta ctcttctact 20
<210>55
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ878设计微卫星引物(28)的上游引物
<400>55
agtggaggac gtgacagt 18
<210>56
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ878设计微卫星引物(28)的下游引物
<400>56
aagcagagcc tgatttga 18
<210>57
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ896设计微卫星引物(29)的上游引物
<400>57
atcaccagta cattcact 18
<210>58
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ896设计微卫星引物(29)的下游引物
<400>58
cgtttagcaa aggttagt 18
<210>59
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ900设计微卫星引物(30)的上游引物
<400>59
aaggacgacg gaaggttt 18
<210>60
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>根据基因座HLJ900设计微卫星引物(30)的下游引物
<400>60
acactgacgg gtcaagag 18
Claims (7)
1.新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于新品种鲤鱼按以下步骤选育：一、根据新品种性状的设计要求进行表型性状挑选，符合要求的鲤鱼作为繁殖亲本，表型性状挑选公式为
公式中Xn为亲本的表型性状测定值，
为鲤鱼群体表型性状的平均值，S为鲤鱼群体表型性状的标准差；二、检测亲本间的遗传信息a.提取繁殖亲本DNA；b.繁殖亲本DNA均用30对微卫星引物分别进行PCR扩增；c.利用图谱分析软件对PCR扩增产物进行数字化处理；d.数字化数据导入亲缘分析软件分析计算，获得遗传信息；三、根据遗传信息进行繁殖配组，繁殖亲本至少分成2个繁殖群体，每个繁殖群体中任意一对雌雄个体间的遗传距离应大于家系三代间的遗传距离；四、繁殖群体内自由交配、培育子代鲤鱼性成熟；五、以子代鲤鱼为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到子代鲤鱼群体达到新品种性状设计要求，即得到新品种鲤鱼。
2.根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤b中每对微卫星引物的PCR反应总体积为25μL由18μL PCR反应缓冲液、50ng繁殖亲本DNA、1μL微卫星引物、1U Taq聚合酶和余量的无菌超纯水制成；其中PCR反应缓冲液每升由0.25mmol pH值为8.3的Tris·Cl、1.25mmol KCl、0.0375mmol MgCl2、0.25mL Gelatin、2.5mL Tween、2.5mL NP-40、0.02mmol dNTP和余量的去离子水组成。
3.根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤b中PCR反应程序为：94℃预变性3min，94℃变性30sec，退火30s，72℃延伸30s，循环38次，最后72℃延伸5min。
4.根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤b中选用的30对微卫星引物及其退火温度分别为：
微卫星引物(1)上游引物：ATCCCTTACCGCCCTGTGT
下游引物：AGCTGAAAAACGCTGTCACG
退火温度为：50℃，
微卫星引物(2)上游引物：ACTGCTGGCTCAGGAACA
下游引物：AGAGCAAAGATGGTAGCTC
退火温度为：53℃，
微卫星引物(3)上游引物：CGTGGAGGCATAAGGGAT
下游引物：ACGGGAGCGTACAGAAAT
退火温度为：53℃，
微卫星引物(4)上游引物：CACAGAACGCATCAGTAA
下游引物：TGTAAACCTTCAACCTCC
退火温度为：53℃，
微卫星引物(5)上游引物：AGACCACCGCAGTAACAA
下游引物：GACTCACTCAGCACCAGA
退火温度为：53℃，
微卫星引物(6)上游引物：GTACAGCGTGACAGCAT
下游引物：AAGTTCATCGGTGTCCTC
退火温度为：53℃，
微卫星引物(7)上游引物：AACCCTGAACTCACAAAC
下游引物：CACGGAAACTGAGAAGAC
退火温度为：53℃，
微卫星引物(8)上游引物：GATTTGTGCTCCTCAACC
下游引物：CTGTCACTTCTCCTTCCA
退火温度为：54℃，
微卫星引物(9)上游引物：GGTACAACGGGAACCACA
下游引物：TGATTGACAGGCAGTGGG
退火温度为：54℃，
微卫星引物(10)上游引物：CAGATGGCAGACAGGTAA
下游引物：GAGCAAGTGAGGGAACAG
退火温度为：53℃，
微卫星引物(11)上游引物：CgATCACTGGCAAGATTA
下游引物：ATGGACTACACCTCACCC
退火温度为：54℃，
微卫星引物(12)上游引物：GAAGAATGGGTGAGTAAGA
下游引物：ACTAGGATTTGGAAGAGC
退火温度为：51℃，
微卫星引物(13)上游引物：TCTACTTCTACCGCCACT
下游引物：GACTATTCACCTGCATCTT
退火温度为：54℃，
微卫星引物(14)上游引物：GGGGAGACGAGAAGTGCA
下游引物：AGCAGGTCTGTGGGCAAG
退火温度为：54℃，
微卫星引物(15)上游引物：AGGCAGACGAAAGGTAAA
下游引物：CTCGCTTCTGTAGGCATT
退火温度为：54℃，
微卫星引物(16)上游引物：GGCTCCTCCTCATCCTCT
下游引物：GCACTTCTGCACCTTTCA
退火温度为：51℃，
微卫星引物(17)上游引物：GGCTACAAGGCAACACTG
下游引物：TGCGGTTAATGAGGTCTG
退火温度为：54℃，
微卫星引物(18)上游引物：TGCGGTCATTACTCATTCG
下游引物：CCCAGCACCTGTTTCCAC
退火温度为：54℃，
微卫星引物(19)上游引物：CATTACTTGAACTATCATCCA
下游引物：TGTGCTGAGGATTATTGG
退火温度为：54℃，
微卫星引物(20)上游引物：AAGAAGCCTCGGTCCTCC
下游引物：AAAGCCCAAAGCACATCA
退火温度为：51℃，
微卫星引物(21)上游引物：TCTGCTGAAGGGCGAACA
下游引物：ACGATCACGCTGCGACTA
退火温度为：48℃，
微卫星引物(22)上游引物：GGTGTCAGGCTTTAGTCC
下游引物：CATCTGAGTTTTCTCCAAGT
退火温度为：48℃，
微卫星引物(23)上游引物：ATCATCACAGCCAAAGAAGT
下游引物：TACGGACATAGTGCAGACAA
退火温度为：48℃，
微卫星引物(24)上游引物：GACGATCCAGCAGCAATG
下游引物：CTCTTCCTAAAGCCTCAAA
退火温度为：48℃，
微卫星引物(25)上游引物：GAGAACACGGCTGGATGG
下游引物：GTGGGTGTTTGAATTGAGAT
退火温度为：48℃，
微卫星引物(26)上游引物：CGACCGAACTCAGAACAC
下游引物：GAGCACCGCATTAACAGA
退火温度为：48℃，
微卫星引物(27)上游引物：AGTGTCGTTTATGCGTATCTT
下游引物：AGCTCGCCTACTCTTCTACT
退火温度为：48℃，
微卫星引物(28)上游引物：AGTGGAGGACGTGACAGT
下游引物：AAGCAGAGCCTGATTTGA
退火温度为：54℃，
微卫星引物(29)上游引物：ATCACCAGTACATTCACT
下游引物：CGTTTAGCAAAGGTTAGT
退火温度为：53℃，
微卫星引物(30)上游引物：AAGGACGACGGAAGGTTT
下游引物：ACACTGACGGGTCAAGAG
退火温度为：50℃。
5.根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤d中使用的亲缘分析软件为POPGENEN软件和PHYLIP软件。
6.根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤c PCR扩增产物先在电压为200V的条件下凝胶电泳2h，然后Gold View染色，再以溴酚蓝为凝胶上样液凝胶电泳，之后用凝胶成像仪记录电泳结果并用图谱分析软件进行数字化处理。
7.根据权利要求1或6所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤c中使用的图谱分析软件为Gel-pro4.5软件。
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