CN101099739A - 恩诺沙星明胶微球及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及恩诺沙星明胶微球及其制备方法。本发明以A型明胶作为载体，以恩诺沙星为载药，采用乳化冷凝法制备了静脉注射后靶向肺部的明胶微球。该微球载药量为5～50wt％，圆整度好，在水溶液中分散性好，平均粒径约12μm，粒径分布在7～30μm范围内的微球占总数的90％以上，具有肺靶向性，可有效降低原有药物的毒副作用。本发明制备工艺操作简单，制备的微球符合要求，微球制剂经静脉注射后能被动靶向于肺。
Description
技术领域
本发明属于动物药品领域，具体涉及的是一种兽医专用的氟喹诺酮类抗菌药恩诺沙星的改进制剂及其制备方法。
背景技术
恩诺沙星(enrofloxacin，ENR)是兽医专用的第三代氟喹诺酮类抗菌药，有广谱杀菌作用，对革兰氏阴性杆菌和球菌、阳性菌、支原体、衣原体均有杀灭作用，对静止期和生长期的细菌均有效，其杀菌活性依赖于浓度。临床上主要用于各种动物敏感菌引起的各种感染。
随着耐药性的产生导致药物治疗效果的降低，且喹诺酮类药物体内分布广泛，所以在治疗动物的肺炎、支气管炎等呼吸道感染时，要使药物在肺部组织达到有效的浓度，势必增加药物的剂量，这样易造成药物在其它组织中残留的增高并产生一些毒副作用。因此如能得到一种具有肺靶向性的新型制剂，则可以消除现有药物体内分布上的缺陷。
发明内容
本发明的目的在于提供一种恩诺沙星肺靶向微球，利用微球静注后被肺毛细血管机械性滤取而表现肺靶向性，以提高治疗动物的呼吸道疾病的效果，降低毒副作用。
本发明提出的一种恩诺沙星肺靶向微球，被包裹的药物为恩诺沙星，药物的载体为可生物降解的明胶，得到的肺靶向微球粒径分布在7～30μm范围内的占总数的半数以上。
所述恩诺沙星肺靶向明胶微球载药量为5～50wt％，优选20～40wt％。
所述药物载体微A型明胶(酸性)，等电点为7～9。
本发明另一目的，在于提供上述微球的制备方法。
本发明提出的恩诺沙星明胶微球的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：取明胶加入双蒸水或磷酸盐缓冲溶液，在温水浴中完全溶胀，再加入恩诺沙星混匀溶解得到水相；
步骤二：将司盘80或司盘60和液体石蜡置于容器中混匀得到油相；
步骤三：在相同温度水浴中，将水相滴加至油相，同时电磁搅拌均匀，至乳白色，然后冰浴迅速冷却至5℃以下并继续乳化得到乳化体系；
步骤四：向乳化体系中加入戊二醛，继续搅拌交联固化，再以异丙醇脱水搅拌，抽滤；
步骤五：用异丙醇洗涤洗尽戊二醛，用石油醚洗去液体石蜡，真空干燥，制得微黄色微球粉末。
其中，所述步骤一和步骤三的水浴温度为40～65℃，所述步骤三和步骤四的搅拌速度为500～1000r·min-1。
其中，步骤一中所述水相中明胶的重量体积浓度为5～15％，恩诺沙星的重量体积浓度为2.5～15％。
其中，所述油相与水相的体积比为7.5～12.5∶1。
其中，所述步骤二乳化剂的加入量为油相体积的1.5～2％。
其中，所述步骤四中加入戊二醛的量为乳化体系体积的8.5～10％。
其中，将明胶加入双蒸水或pH5.0磷酸盐缓冲溶液，在60℃温水浴完全溶胀，再加入恩诺沙星混匀溶解作为水相。
本发明方法的优点在于：采用乳化冷凝法，制备工艺操作简单，得到的肺靶向微球形态圆整、较少粘连，在水溶液中分散性好，平均粒径约12μm，粒径分布在7～30μm范围内的微球占总数的90％以上，静脉注射后被动靶向于肺。
附图说明
图1为实施例2制得的恩诺沙星肺靶向微球100倍光镜图；
图2为实施例2制得的恩诺沙星肺靶向微球10000倍电镜图；
图3为实施例2制得的恩诺沙星肺靶向微球粒径分布图。
具体实施方式
本发明目的是研究恩诺沙星的一种新的剂型——肺靶向微球，使微球静注后被肺毛细血管机械性滤取而表现肺靶向性，以提高治疗动物的呼吸道疾病的效果，降低毒副作用。
本发明提出的恩诺沙星肺靶向微球，被包裹的药物为恩诺沙星，药物的载体为可生物降解的明胶，其中以等电点为7～9的A型明胶(酸性)作为载体最好，得到的肺靶向微球应形态圆整、较少粘连，在水溶液中分散性好，平均粒径约12μm，粒径分布在7～30μm范围内的占总数的半数以上，静脉注射后即可被动靶向于肺。
本发明提出的恩诺沙星明胶微球的制备方法，具体步骤如下：取明胶加入双蒸水或磷酸盐缓冲溶液，在温水浴中完全溶胀，再加入恩诺沙星混匀溶解，然后滴加入盛有司盘80(或司盘60)和液体石蜡的烧杯中，在相同温度水浴中电磁搅拌均匀，继续搅拌一定时间至乳白色，冰浴迅速冷却至5℃以下并继续乳化，再加入戊二醛继续搅拌交联固化，以异丙醇脱水搅拌，抽滤。再用少许异丙醇洗涤，洗尽戊二醛，用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥，制得圆整度好的微黄色微球粉末；
该方法中，将明胶加入双蒸水或pH5.0磷酸盐缓冲溶液，在60℃温水浴完全溶胀，再加入恩诺沙星混匀溶解作为水相。水相中的明胶的重量体积浓度为5～15％；恩诺沙星在水相中的重量体积浓度为2.5～15％；
司盘80和石蜡组成油相，油相与水相的体积比为7.5～12.5∶1；其中司盘80为乳化剂，加入量为油相的1.5～2％(体积浓度)；
水浴温度为40～65℃；搅拌速度为500～1000r·min-1；
加入戊二醛的量为乳化体系(油相和水相混合体系)的8.5～10％(体积浓度)。
下面将通过具体的实施例对本发明作详细的介绍，试验中所用试剂和器械全部市购，微球检测中，形态观察使用光学显微镜，粒径及分布测定使用显微镜测微尺，微球的药物含量采用紫外分光光度法检测，载药量＝微球中药物总量/明胶微球重量×100％；包封率＝微球中药物总量/投药量×100％。
实施例1
取明胶0.4g，加入双蒸水溶液4mL(配成10％重量体积浓度的明胶溶液)，在60℃温水浴中完全溶胀，再加入0.2g恩诺沙星混匀溶解(恩诺沙星在水相中的重量体积浓度为5％)，然后滴加入盛有0.6mL司盘80和30mL液体石蜡(司盘80在油相中体积浓度为2.0％)的100mL烧杯中，同样在60℃温度水浴中电磁搅拌均匀，搅拌速度为1000r·min-1，搅拌15min至乳白色后，冰浴迅速冷却至5℃以下继续搅拌乳化15min，以细流状加入3mL戊二醛继续搅拌交联固化30min，以异丙醇30mL脱水搅拌10min，抽滤。再用少许异丙醇洗涤，洗尽戊二醛，用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥过夜，得到微黄色微球粉末。
对该恩诺沙星微球(以下简称GMS)粉末进行测试，其圆整度好，在水溶液中分散性好，平均粒径为12.06μm，粒径分布在7～30μm范围内的微球占总数的92.0％。微球载药量为20.67wt％、包封率为43.62％。
实施例2
取明胶0.4g，加入0.9mol·L-1 pH5.0磷酸盐缓冲溶液4mL(配制10wt％浓度的明胶溶液)，在60℃温水浴完全溶胀，再加入0.4g恩诺沙星混匀溶解，然后滴加入盛有0.6mL司盘80和30mL液体石蜡(司盘80体积浓度2.0％)的100mL烧杯中，在相同温度水浴中电磁搅拌均匀，搅拌速度为700r·min-1，搅拌15min至乳白色，冰浴迅速冷却至5℃以下继续乳化15min，以细流状加入3mL戊二醛继续搅拌交联固化30min，以异丙醇30mL脱水搅拌10min，抽滤。再用少许异丙醇洗涤，洗尽戊二醛，用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥过夜，制得微黄色微球粉末。经测试，该GMS粉末圆整度好(参见图1，2)，在水溶液中分散性好，平均粒径为11.71μm，粒径分布在7～30μm范围内的微球占总数的92.8％(参见图3)。微球载药量为38.20％、包封率为42.96％。
实施例3
取明胶0.4g，加入0.9mol·L-1 pH5.0磷酸盐缓冲溶液4mL(10％浓度的明胶溶液)，在60℃温水浴完全溶胀，再加入0.3g恩诺沙星混匀溶解，后续操作步骤同实施例2，制得圆整度好的微黄色微球粉末，在水溶液中分散性好，平均粒径为11.86μm，粒径分布在7～30μm范围内的微球占总数的90.3％。微球载药量为27.91wt％、包封率为43.82％。
实施例4
取明胶0.4g，加入0.9mol·L-1 pH5.0磷酸盐缓冲溶液4mL(10％浓度的明胶溶液)，在60℃温水浴完全溶胀，再加入0.2g恩诺沙星混匀溶解，后续操作步骤同实施例2，制得圆整度好的微黄色微球粉末，在水溶液中分散性好，平均粒径为11.94μm，粒径分布在7～30μm范围内的微球占总数的91.7％。微球载药量为20.28wt％、包封率为45.27％。
实施例5
取明胶0.6g，加入双蒸水溶液4mL(配成15％重量体积浓度的明胶溶液)，在65℃温水浴中完全溶胀，再加入0.6g恩诺沙星混匀溶解(恩诺沙星在水相中的重量体积浓度为15％)，然后滴加入盛有0.75mL司盘80和50mL液体石蜡(司盘80在油相中体积浓度为1.5％)的100mL烧杯中，同样在65℃温度水浴中电磁搅拌均匀，搅拌速度为800r·min-1，搅拌15min至乳白色后，冰浴迅速冷却至5℃以下继续搅拌乳化15min，以细流状加入5mL戊二醛继续搅拌交联固化30min，以异丙醇50mL脱水搅拌10min，抽滤。再用少许异丙醇洗涤，洗尽戊二醛，用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥过夜，得到微黄色微球粉末。
对该GMS微黄色微球粉末进行测试，其圆整度好，在水溶液中分散性好，平均粒径为12.40μm，粒径分布在7～30μm范围内的微球占总数的89.21％。微球载药量为35.31wt％、包封率为33.84％。
实施例6
取明胶0.2g，加入0.9mol·L-1 pH5.0磷酸盐缓冲溶液4mL(配成5％重量体积浓度的明胶溶液)，在40℃温水浴中完全溶胀，再加入0.1g恩诺沙星混匀溶解(恩诺沙星在水相中的重量体积浓度为2.5％)，然后滴加入盛有0.8mL司盘60和40mL液体石蜡(司盘60在油相中体积浓度为2.0％)的100mL烧杯中，同样在40℃温度水浴中电磁搅拌均匀，搅拌速度为500r·min-1，搅拌15min至乳白色后，冰浴迅速冷却至5℃以下继续搅拌乳化15min，以细流状加入4mL戊二醛继续搅拌交联固化30min，以异丙醇40mL脱水搅拌10min，抽滤。再用少许异丙醇洗涤，洗尽戊二醛，用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥过夜，得到微黄色微球粉末。
对该GMS微黄色微球粉末进行测试，其圆整度好，在水溶液中分散性好，平均粒径为15.64μm，粒径分布在7～30μm范围内的微球占总数的83.4％。微球载药量为21.37wt％、包封率为46.09％。
恩诺沙星明胶微球在犬体内药物动力学试验
一、试验材料：
1.主要试剂和药品
恩诺沙星标准品(中国兽医药品监察所，批号H0402006)；环丙沙星标准品(中国兽医药品监察所，批号H040402)；乙腈、甲醇为色谱纯；磷酸、三乙胺、二氯甲烷为分析纯；恩诺沙星注射液(拜有利10mL∶0.5g，简称ENR注射液，拜耳四川公司，批号KP033No)；本发明恩诺沙星微球(临用前用注射用生理盐水混匀配制成混悬液，简称ENR-GMS)；氯化钾注射液(山西泰盛制药有限公司)；846合剂
II(军事医学科学院军事兽医研究所，批号20040906)。
2.溶液的配制
组织提取液：取0.1mol·L-1磷酸溶液100mL，加入乙腈300mL，混匀后放置，待溶液澄清后过滤即得，于4℃保存。
流动相：取85％磷酸3.4mL用重蒸水稀释至1000mL，搅拌中滴加三乙胺调到pH2.4，配成磷酸/三乙胺(pH2.4)缓冲液，然后和乙腈按照81∶19(v∶v)的比例混合配制成流动相，脱气处理，用0.22μm滤膜过滤。
3.主要仪器设备
高效液相色谱仪(含LC-10ATvp泵，DGU-12A脱气设备，RF-10AXL荧光检测仪，Class-VP5.03工作站，日本Shimadzu)；TDL-40B离心机(上海安亭科学仪器厂)；旋转蒸发仪(德国Heidolph)；GM-0.33 II隔膜真空泵(天津腾达过滤器件厂)；WH-1涡动混合器(上海沪西分析仪器厂)；CX-100超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。
4.试验动物
北京犬，体重4.0～8.0kg，共26只，饲养在清洁动物房中，自由饮水，饲喂不含抗菌药物的全价目粮，每天定时给料一次。给药前饲养1周，以适应环境。
二、试验方法：
1.给药
将犬随机分成两组，每组各13只，每个采样时间点一只犬。给药前禁食12h，一组分别以5mg.kg-1b.w.剂量(以ENR计)于臂头静脉注射恩诺沙星(简称ENR)注射液。另一组分别以5mg·kg-1(以ENR计)静注恩诺沙星注射液微球(简称ENR-GMS)混悬液。
2.样品采集
给药前(0min)和给药后按以下时间点心脏采血：5min、10min、20min、30min、1h、2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h，采血前先注射846合剂II使犬麻醉，采血后立即静脉注射氯化钾注射液实施安乐死，快速解剖取犬的肺、肝、肾、脾、肌肉组织，待采集的新鲜血凝血后3000r·min-1离心10min，吸取上层血清与组织一并于-20℃冷冻保存。
3.血清、组织样品处理
取1mL血清加入4mL乙腈，涡动2min，3500rpm离心20min，取上清液于25mL鸡心瓶中，70℃旋转蒸发仪蒸至近干，再用氮气吹干，用流动相溶解并定容至1mL，用0.2μm滤膜过滤，取20μL进样HPLC测定。
分别取1g匀浆组织(肺、肝、肾、脾、肌肉)于15mL离心管中，加入1mL的提取液，涡动1min，再加入5mL二氯甲烷涡动1min，超声15min，3500rpm离心10min，取下层有机溶液层于50mL鸡心瓶中；然后向管内再加入3mL二氯甲烷涡动1min，离心，取下层并入鸡心瓶；再加入3mL二氯甲烷提取一次；合并3次提取的有机溶液，40℃旋转蒸发蒸至近干，再用氮气吹干，用流动相溶解并定容至1mL，用0.2μm滤膜过滤，取20μL进样HPLC测定。
4.标准曲线的绘制
准确称取ENR标准品0.0250g，先用0.03mol·L-1氢氧化钠溶液溶解，再用流动相稀释定容，配成浓度为1μg·mL-1标准工作液。取标准工作液，用流动相配成浓度分别为10、30、50、100、300、500、1000ng·mL-1的系列工作液。用同样方法配制浓度分别为10、30、50、100、300、500ng·mL-1的环丙沙星标准品(以下简称CIP)系列工作液。分别取ENR、CIP的系列工作液20μL进HPLC测定，ENR保留时间为15.16min、CIP为11.13min，得到线形回归方程ENR：A＝5407C+252196，(r＝0.9993)；CIP：A＝2934.8C+96955，(r＝0.9949)。检测限均为10ng·mL-1。
5.回收率和精密度试验
分别取空白血清1mL和各空白匀浆组织1g添加ENR和CIP标准溶液，制备成药物浓度均为30、50、100、300ng·mL-1的添加样品，按3的方法分别进行前处理后，进HPLC测定，ENR、CIP在血清、肺、肌肉、肝、脾和肾组织中四种浓度的样品添加回收率均大于70％，变异系数较小，说明本方法可用于样品测定；高、中、低3个浓度(500、100、30ng·mL-1)的肺组织样品ENR日内变异系数分别为4.4、7.4、7.8％，日间变异系数分别为3.5、6.1、6.4％，CIP日内变异系数分别为5.5、5.3、6.1％，日间变异系数分别为5.0、3.9、5.9％，结果表明本方法可用于药物动力学试验。
6.色谱条件
色谱柱：Kromasil C18柱(10μm，250×4.6mm)；流动相：0.05mol·L-1磷酸/三乙胺缓冲液(pH2.4)+乙腈(81+19v：v)；流速：0.6mL·min-1；进样量：20μL；荧光检测波长：激发波长278nm，发射波长446nm。
7.数据处理
ENR在体内代谢为亦具较强活性的CIP，将CIP浓度合并为ENR的浓度，所得各组织药-时数据采用3P97程序计算出药物动力学参数。
8.肺靶向性的确定方法
根据药物在血清与各组织中药-时曲线下面积(AUC)和峰浓度(Cp)，按以下公式计算靶向参数，然后确定其肺靶向性：
re＝(AUCi)ms/(AUCi)e
te＝(AUC)靶器官/(AUC)非靶器官
Ce＝(Cp)ms/(Cp)e
re为相对摄取率，AUCi为第i个组织或血清的AUC，ms为ENR-GMS，e为ENR注射液；te为靶向效率；Ce为峰浓度(Cp)之比。
三、试验结果：
1.血清和各组织的药-时数据
ENR注射液和ENR-GMS混悬液给药后血清和各组织中的测定结果分别见表1、表2。
表1静注ENR注射液后各组织ENR、CIP浓度(单位：μg·g-1)
| 时间(h) | 血清 | 肌肉 | 肝脏 | 脾脏 | 肺脏 | 肾脏 | ||||||
| ENR | CIP | ENR | CIP | ENR | CIP | ENR | CIP | ENR | CIP | ENR | CIP | |
| 0(用药前)0.0830.1670.3330.5124812244872 | -1.0623.2152.4122.2710.7590.2010.0710.020-- | -0.030--0.0030.1780.0940.1120.0490.004- | -3.4452.3122.0011.9811.3001.2350.3440.005- | -----0.0660.1900.0940.011- | -2.5932.5102.2212.2870.2821.1500.2320.0910.025- | -0.4480.1161.0272.8460.0380.2400.159-0.008- | -12.2386.6513.6122.2352.0601.6510.3950.1910.115- | ---0.007-0.1630.2750.2220.1830.019- | -2.8054.2423.2972.6942.4711.4900.8770.2100.2320.008-- | -0.0190.2350.0250.2320.3700.1600.1710.0540.0420.041-- | -7.6209.4682.3304.1843.6861.8410.3050.0510.002- | -0.4780.111-0.6161.0760.8750.1540.0170.044- |
-，Not detectable，the same below
表2静注ENR-GMS后各组织ENR、CIP浓度(单位：μg·g-1)
| 时间(h) | 血清 | 肌肉 | 肝脏 | 脾脏 | 肺脏 | 肾脏 | ||||||
| ENR | CIP | ENR | CIP | ENR | CIP | ENR | CIP | ENR | CIP | ENR | CIP | |
| 0(用药前)0.0830.1670.3330.5124812244872 | -4.3622.3792.0081.7290.6500.1980.1090.007- | -0.247-0.1560.1470.1740.2160.0860.020- | -0.3171.5373.6932.8742.3640.9600.2070.1320.034- | --0.082---0.4250.1420.0670.010- | -0.2781.9343.1654.8553.5410.3020.3180.2140.070- | --0.6280.5380.7030.3640.2590.1770.063-- | -0.1191.3013.3943.1392.8970.2730.2080.1590.057- | ---0.0350.1140.2320.2110.1690.0760.009- | -15.5129.6394.6654.5643.4050.7631.1020.9110.6110.0100.0050.002 | -2.4400.8610.2540.3610.2460.5610.1840.0770.085--- | -6.0363.2283.0143.2412.9470.9450.5140.3270.1080.070- | --0.1710.2940.2080.2550.3260.3210.2810.007-- |
2.肺靶向的确定
根据表1、表2中数据，将肺中药-时曲线，用3P97程序分别用一、二、三室模型拟合，经F检验，拟合优度结合AIC与r2进行模型判断，ENR-GMS在肺内动力学行为可用三室开放模型描述，ENR可用二室开放模型描述，其动力学方程分别为：
ENR-GMS∶C＝53.0287e-18.3384t+5.3926e-1.0410t+1.4489e-0.07432t
ENR∶C＝3.0998e-0.4503t+0.5384e-0.09868t
并得到ENR、ENR-GMS在犬肺内的药物动力学主要参数见表3，结果显示ENR制成微球后，在肺内药物达峰时间有所提前；分布半衰期(T1/2α)从1.54h缩短至0.67h，消除半衰期(T1/2β)从7.02h延长到9.33h，延长了1.33倍；肺内药量(Q)清除率从0.4052下降到0.1814mg/kg/h/(μg·g-1)，降低了55.2％；说明ENR制成微球后，在肺中蓄积时间显著延长，清除减慢，ENR-GMS在靶向组织肺亦具有长效作用。
表3犬静注ENR-GMS和ENR的肺靶向参数
| 组织 | AUC(μg·g1·h) | re | te | (te)us/(te)E | Cp(μg·g-1) | Ce | |||
| MS | E | MS | E | MS | E | ||||
| 血清肌肉肝脏脾脏肾脏肺脏 | 9.932911.075211.63629.545113.916736.4471 | 4.20627.49917.518717.577716.501211.0767 | 2.361.481.550.540.843.29 | 3.673.293.133.822.621 | 2.631.481.470.630.671 | 1.392.232.136.063.901 | 5.414.366.835.048.1720.33 | 5.894.764.8714.6411.916.49 | 0.920.921.400.340.693.13 |
从结果可以看出肺脏的re值最大为3.29，ENR-GMS混悬液静脉注射后在肺中分布最多，将ENR制成微球后，肺脏相对于血清和其它脏器组织的te均大于1，且与普通注射液相比，肺脏相对于血清和其它脏器组织的te增强了1.39～6.06倍，靶器官肺脏的Ce，微球制剂是普通注射液的3.13倍，ENR-GMS靶向肺的效果较好。
Claims (10)
1.一种恩诺沙星肺靶向明胶微球，其特征在于：被包裹的药物为恩诺沙星，药物的载体为可生物降解的明胶，且得到的肺靶向微球粒径分布在7～30μm范围内的占总数的半数以上。
2.根据权利要求1所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球，其特征在于：所述恩诺沙星肺靶向明胶微球载药量为5～50wt％，优选20～40wt％。
3.根据权利要求1或2所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球，其特征在于：所述药物载体为等电点为7～9的A型酸性明胶。
4.一种恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：取明胶加入双蒸水或磷酸盐缓冲溶液，在温水浴中完全溶胀，再加入恩诺沙星混匀溶解得到水相；
步骤二：将司盘80或司盘60和液体石蜡置于容器中混匀得到油相；
步骤三：在相同温度水浴中，将水相滴加至油相，同时电磁搅拌均匀，至乳白色，然后冰浴迅速冷却至5℃以下并继续乳化得到乳化体系；
步骤四：向乳化体系中加入戊二醛，继续搅拌交联固化，再以异丙醇脱水搅拌，抽滤；
步骤五：用异丙醇洗涤洗尽戊二醛，用石油醚洗去液体石蜡，真空干燥，制得微黄色微球粉末。
5.如权利要求4所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法，其特征在于，所述步骤一和步骤三的水浴温度为40～65℃，所述步骤三和步骤四的搅拌速度为500～1000r·min-1。
6.如权利要求4或5所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法，其特征在于，步骤一中所述水相中明胶的重量体积浓度为5～15％，恩诺沙星的重量体积浓度为2.5～15％。
7.如权利要求6所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法，其特征在于，所述油相与水相的体积比为7.5～12.5∶1。
8.如权利要求7所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法，其特征在于，所述步骤二乳化剂的加入量为油相体积的1.5～2％。
9.如权利要求8所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法，其特征在于，所述步骤四中加入戊二醛的量为乳化体系体积的8.5～10％。
10.如权利要求9所述的恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备方法，其特征在于，将明胶加入双蒸水或pH5.0磷酸盐缓冲溶液，在60℃温水浴完全溶胀，再加入恩诺沙星混匀溶解作为水相。
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