CN101091733B

CN101091733B - 白花前胡总香豆素作为治疗呼吸道疾病药物的应用

Info

Publication number: CN101091733B
Application number: CN200710024811A
Authority: CN
Inventors: 孔令义; 吴斐华; 何冬梅
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2007-07-02
Filing date: 2007-07-02
Publication date: 2010-05-19
Anticipated expiration: 2027-07-02
Also published as: CN101091733A

Abstract

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种白花前胡总香豆素提取物的医药用途，即其可作为治疗呼吸道疾病的药物的用途，可用于治疗急慢性支气管炎、肺炎、支气管哮喘、过敏性哮喘和百日咳等疾病。

Description

白花前胡总香豆素作为治疗呼吸道疾病药物的应用

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种白花前胡总香豆素提取物的新的医药用途，即其可作为治疗呼吸道疾病的药物的用途。

背景技术

中药前胡为伞形科植物白花前胡(Peucedanum praerupterum Dunn.)的干燥根，其性微寒，味苦、辛，具有散风清热、降气化痰之功效，多与甘草、防风、枳壳、桔梗等联用治疗风热咳嗽痰多，痰热喘满，咯痰黄稠。CN1433790A公开了白花前胡用于治疗肿瘤的用途。现代中药学研究发现其有效部位以香豆素类化合物为主，主要为白花前胡甲素和白花前胡丙素等角型二氢吡喃香豆素类化合物。有报道白花前胡的香豆素成分对心脑缺血、抗心衰有效(《中国中医药杂志》2006年第40卷第5期p64-65)；也有报道白花前胡总香豆素对小鼠肝药酶活性有影响(Herald of Medicine Vol.23 No8 August 2004 p522-524)；还有报道白花前胡总香豆素具有解热镇痛抗炎作用(《中国中医药信息杂志》，2004年8月第11卷第8期p688-689)。

发明内容

本发明公开白花前胡总香豆素的医药新用途，即白花前胡总香豆素用于治疗呼吸道疾病的用途，白花前胡香豆素可制备平喘、止咳、祛痰药物，白花前胡总香豆素优选治疗急慢性支气管炎、肺炎、支气管哮喘、过敏性哮喘或百日咳等疾病，进一步优选治疗过敏性哮喘。

本发明的白花前胡总香豆素的制备方法如下：

以粉碎的白花前胡干燥根为原料，经有机溶剂提取、过滤、回收溶剂、干燥，即得，其中有机溶剂选自石油醚、乙醚、己烷或环己烷。其中有机溶剂优选石油醚。

还可以用以下方法制备：以粉碎的白花前胡的干燥根为原料，用水、乙醇或甲醇提取，提取液用有机溶剂萃取，回收萃取溶剂，干燥，即得，其中萃取用有机溶剂选自石油醚、乙醚、己烷或环己烷。乙醇或甲醇的浓度优选30％～95％，为重量百分比。

上述方法制备所得白花前胡总香豆素主要成分为白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡E素、Peucedanocoumarin I及其它香豆素单体化合物，其总含量大于50％。

下面是白花前胡总香豆素(以下简称TCP)的部分药理实验及结果。

(一)TCP的药理实验

1、对小鼠氨水引咳的影响

18～22g ICR雄性小鼠50只按体重随机分为5组，连续灌胃给药7天，每天一次，末次给药1h后将小鼠置于500mL广口瓶中，将滴有0.3mL 25％浓氨水的滤纸片悬于瓶口，30s后取出。观察并记录小鼠咳嗽的潜伏期及3分钟内的咳嗽次数，以小鼠腹腔收缩并张口为咳嗽指标。

2、对豚鼠枸橼酸引咳的影响

350～450g雄性豚鼠40只，按体重随机分为5组，连续灌胃给药7天，每天一次，末次给药后1h，将豚鼠逐一放入玻璃钟罩内，用喷雾器喷17.5％枸橼酸溶液20s引咳，观察并记录豚鼠咳嗽潜伏期(从喷雾开始到出现第一次咳嗽的时间)和5min内咳嗽的次数。

3、对豚鼠Ach-His致喘的影响

150～200g雄性豚鼠，逐一放入玻璃钟罩内，用喷雾器喷2％Ach-0.1％His混合液(1∶1)10s，记录豚鼠的引喘潜伏期(从喷雾开始到呼吸急促、抽搐跌倒的时间)，超过150s者不予选用。将筛选出的豚鼠按体重随机分为5组，连续灌胃给药7天，每天一次，末次给药后1h，将所有豚鼠喷雾引喘，记录豚鼠的引喘潜伏期，潜伏期超过360s的当360s计。

4、对小鼠气管酚红排泌量的影响

18～22g ICR雄性小鼠50只按体重随机分为5组，连续灌胃给药7天，每天一次，末次给药0.5h后腹腔注射0.5％酚红生理盐水溶液10mL·kg^-1，再0.5h后脱颈椎处死小鼠，剥离气管，插入灌洗器，吸取5％NaHCO₃溶液0.5mL来回灌洗呼吸道3次，将灌洗液注入离心管中，重复3次，共用洗液1.5mL灌洗9次，合并灌洗液，离心(2000rpm，5min)，每管取上清0.2mL置于96孔板中，用酶标仪于546nm处测光密度OD值。

5、对小鼠二甲苯致炎的影响

18～22g ICR雄性小鼠50只按体重随机分为5组，连续灌胃给药7天，每天一次，末次给药1h后，每只小鼠右耳前后两面涂30μL二甲苯致肿，左耳不涂以作对照，1h后处死小鼠，剪下左、右耳，用8mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片称重，以左右耳差值作为肿胀度。

6、对小鼠棉球肉芽肿的影响

18～22g ICR雄性小鼠50只，腹腔注射3.5％水合氯醛10mL/kg麻醉，在无菌操作下将15mg灭菌棉球1只植入小鼠右蹊部(每只棉球高压灭菌后滴150μL 25％青霉素钠和链霉素混合液预处理)。术后按体重随机分为5组，于术后第二天开始灌胃给药，连续6天，每天一次，于第8天脱颈椎处死小鼠，剥离棉球肉芽肿，于80℃烘箱中干燥3h后称重，减去原棉球重量即为肉芽肿净重。

7、对正常小鼠碳粒廓清的影响

18～22g ICR雄性小鼠50只，随机分为5组，连续给药7天，末次给药后1h，小鼠尾静脉注射印度墨汁稀释液(使用前以生理盐水稀释4倍)，注射后分别于2、12min用定量玻璃毛细管从眶内静脉丛取血20μL，溶于1mL 0.1％的Na₂CO₃溶液，在波长675nm条件下测定光密度值(OD)。最后将小鼠脱颈椎处死，分别称取肝、脾重量，依照下式计算廓清指数κ和校正廓清指数α。

κ＝(LogOD₂-LogOD₁)/(t₂-t₁)

α＝κ^1/3(体重/肝脾合重)

8、对OVA致敏哮喘大鼠的影响

(1)动物分组及模型制备

取160±20g健康SD雄性大鼠60只，随机分为6组，采用OVA注射雾化吸入致敏激发法复制哮喘大鼠。实验第1天，将大鼠一次性腹腔注射10％OVA生理盐水溶液1mL(OVA100mg，氢氧化铝100mg，灭活百日咳杆菌菌苗6×10⁹个)以致敏；第8天起，各实验组灌胃给药，正常组和模型组分别以0.02％CMC-Na灌胃；第15天起，于灌胃后1h，将大鼠分别置于玻璃容器中，以1％OVA生理盐水溶液超声雾化，自然吸入20min，诱发哮喘，隔天1次，共7次。

(2)对血中自细胞(WBC)及嗜酸性粒细胞(EOS)数量的影响

末次激发后6h，收集标本。眼底静脉丛取血，EDTA-Na₂抗凝，混匀后各取20μL加入适量白细胞计数液和嗜酸性粒细胞计数液中，混匀，在显微镜下对白细胞和嗜酸性粒细胞进行计数。

(3)对肺泡灌洗液(BALF)中WBC及EOS数量的影响

取血后。脱颈椎处死，沿颈正中线剪开皮肤，暴露气管，开胸，分离气管及肺，结扎右支气管，经气管插入灌洗器于左支气管处，缓慢注入PBS液2mL，灌洗2～3次，保留30s后抽出，重复3次，将收集的BALF置离心管中，离心(2000rpm)10min。离心后，分离上清液与细胞沉淀，细胞沉淀用0.2mL PBS液重悬，每个样本各取20μL加入适量白细胞计数液嗜酸性粒细胞计数液中，混匀，在显微镜下对白细胞和嗜酸性粒细胞进行计数。

(4)对哮喘大鼠肺组织形态学的影响

末次激发后6h，收集标本。脱颈椎处死，沿颈正中线剪开皮肤，暴露气管，开胸，分离气管及肺脏。切取右肺，置于10％甲醛固定液中固定24h后采用HE染色。

(二)TCP的药理实验结果分析

1、对小鼠氨水引咳的影响

如表1所示，与对照组相比，TCP 50mg/kg极显著延长小鼠咳嗽潜伏期(P＜0.01)，TCP100、200mg/kg和复方甘草片200mg/kg组均能极显著延长小鼠咳嗽潜伏期(P＜0.01)和极明显减少小鼠的咳嗽次数(P＜0.01)。

表1TCP对小鼠氨水引咳的影响(X±S，n＝10)

与对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

2、对豚鼠枸橼酸引咳的影响

如表2所示，与对照组比，TCP 50、100、200mg/kg极显著地减少豚鼠咳嗽次数(P＜0.01)，并极明显延长其咳嗽潜伏期(P＜0.01)，复方甘草片200mg/kg显著延长小鼠咳嗽潜伏期(P＜0.05)和明显减少小鼠的咳嗽次数(P＜0.05)。此外，与复方甘草片200mg/kg相比，TCP200mg/kg极显著地延长其咳嗽潜伏期(P＜0.01)，可见，其止咳作用优于复方甘草片。

表2TCP对豚鼠枸橼酸引咳的影响(X±S，n＝8)

与对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与复方甘草片组相比，^△△P＜0.01

3、对豚鼠乙酰胆碱和组胺(Ach-His)致喘的影响

如表3所示，与对照组比，TCP 50mg/kg可显著延长哮喘豚鼠哮喘潜伏期(P＜0.05)，TCP 100、200mg/kg与氨茶碱100mg/kg极显著地延长豚鼠哮喘潜伏期(P＜0.01)。

表3TCP对豚鼠的平喘作用(X±S，n＝8)

与对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

4、对小鼠气管酚红排泌量的影响

如表4所示，与对照组比，TCP100、200mg/kg与氯化铵100mg/kg极显著地促进了小鼠呼吸道酚红排泌量(P＜0.01)。

表4TCP对小鼠气管酚红排泌量的影响(X±S，n＝10)

与对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

5、对小鼠二甲苯致炎的影响

如表5所示，与模型组比，TCP50、100mg/kg与地塞米松5mg/kg显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀(P＜0.05)，TCP 200mg/kg极显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀(P＜0.01)。

表5TCP对小鼠二甲苯致炎的影响(X±S，n＝10)

与对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

6、对小鼠棉球肉芽肿的影响

如表6所示，与模型组比，TCP50、100mg/kg与地塞米松5mg/kg显著抑制小鼠棉球肉芽肿的增生(P＜0.05)，TCP 200mg/kg极显著抑制棉球肉芽肿的增生(P＜0.01)。

表6TCP对小鼠棉球肉芽肿的影响(X±S，n＝10)

与对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

7、对正常小鼠碳粒廓清的影响

如表7所示，与正常对照组比较，TCP50、100mg/kg显著提高正常小鼠碳粒吞噬指数(P＜0.05)，玉屏风颗粒5000mg/kg则非常显著地提高小鼠炭粒吞噬指数(P＜0.01)，说明TCP和玉屏风颗粒均可增强小鼠非特异性免疫功能。

表7TCP对正常小鼠炭粒廓清的影响(X±S，n＝10)

与对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

8、对OVA致敏哮喘大鼠的影响

(1)对血中WBC及EOS数量的影响

如表8所示，与正常组比较，模型组血中WBC数目、EOS数目、EOS百分比值均明显升高；与模型组比较，TCP 50、100、200mg/kg与醋酸泼尼松10mg/kg均非常显著地降低血中WBC及EOS数目(P＜0.01)，TCP50、200mg/kg与醋酸泼尼松10mg/kg显著降低血中WBC及EOS数目(P＜0.05)，TCP100mg/kg则非常显著降低血中WBC及EOS数目(P＜0.01)。

表8TCP对OVA致敏哮喘大鼠曲中WBC及EOS数量的影响(X±S，n＝10)

与模型组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

(2)对BALF中WBC及EOS数量的影响

如表9所示，与正常组比较，模型组BALF中WBC数目、EOS数目、EOS百分比值均明显升高；与模型组比较，TCP 50、100、200mg/kg与醋酸泼尼松10mg/kg均非常显著地降低BALF中WBC及EOS数目(P＜0.01)，TCP 50、100、200mg/kg显著降低血中WBC及EOS数目(P＜0.05)，与醋酸泼尼松10mg/kg则非常显著降低BALF中WBC及EOS数目(P＜0.01)。

表9TCP对OVA致敏哮喘大鼠BALF中WBC及EOS数量的影响(X±S，n＝10)

与模型组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

(3)对OVA致敏哮喘大鼠肺组织形态学的影响

正常对照组大鼠肺组织切片结构清晰，肺泡壁无增厚，未见明显炎细胞浸润，支气管上皮细胞排列整齐，无变性坏死。模型对照组大鼠肺组织切片中可见肺泡壁中度到重度增厚、充血，有明显的巨噬细胞、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞浸润，病变周围肺泡呈中度代偿性肺气肿，支气管上皮细胞呈轻度到中度变性，肺内血管及支气管周围可见明显的巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎细胞的浸润。TCP 50mg/kg剂量组大鼠肺组织切片中可见肺泡有轻度到中度炎细胞浸润，支气管上皮细胞呈轻度变性。TCP100、200mg/kg量组及阳性对照组大鼠肺组织切片中可见肺泡炎性细胞数量均较模型对照组明显减少，支气管上皮细胞呈极轻度变性。此外，TCP 50、100、200mg/kg各剂量组及阳性对照组大鼠肺组织切片均可见肺泡壁轻度增厚、充血，病变周围肺泡只呈轻度代偿性肺气肿，肺内血管周围及支气管壁只有少量炎细胞浸润，可见个别嗜酸性粒细胞。

上述实验结果表明：TCP能明显抑制氨水和枸橼酸所致的咳嗽，明显抑制乙酰胆碱-组胺所致的哮喘，显著促进了小鼠呼吸道酚红排泌量，可对抗组胺和乙酰胆碱引起的离体气管平滑肌的收缩作用，对二甲苯致炎和棉球肉芽肿具有明显的抑制作用。由此可见，TCP具有显著的止咳平喘祛痰作用和抗炎活性。

综上所述，TCP可用于制备止咳、祛痰、平喘的药物，治疗各种急慢性支气管炎、肺炎、支气管哮喘、过敏性哮喘、百日咳及其它呼吸道疾病。

具体实施方式

实施例1

取粉碎白花前胡干燥根15kg，加入六倍量石油醚浸泡12小时后加热回流反复提取3次，每次1小时，所得提取液趁热过滤，合并滤液，常压加热回收溶剂，放置24小时形成沉淀，过滤干燥后得到白花前胡总香豆素147克。

实施例2

取粉碎白花前胡干燥根15kg，加入一倍量水浸泡12小时后反复煎煮4次，每次2小时，所得煎煮液趁热过滤，合并滤液，浓缩成浸膏后加入一倍体积的60％乙醇沉淀，过滤，滤液回收乙醇后用一倍量体积石油醚反复萃取3次，萃取液常压加热回收溶剂，放置24小时形成沉淀，过滤干燥后得到白花前胡总香豆素48克。

实施例3

将实施例1所得的白花前胡总香豆素10g，加适量淀粉稀释，以乙醇润湿，混匀后制软材，制颗粒，干燥，加适量润滑剂，压制成100片，每片含0.1g白花前胡总香豆素，常规包衣，打光。

实施例4

将实施例2所得的白花前胡总香豆素20g，干燥后磨粉，过筛，装入胶囊，制得胶囊100粒，每粒含0.2g白花前胡总香豆素。

Claims

1.白花前胡总香豆素用于制备治疗过敏性哮喘的药物的用途。

2.权利要求1的用途，其中白花前胡总香豆素由以下方法制备：以粉碎的白花前胡干燥根为原料，经有机溶剂提取、过滤、回收溶剂、干燥，即得，其中有机溶剂选自石油醚、乙醚、己烷或环己烷。

3.权利要求2的用途，其中有机溶剂是石油醚。

4.权利要求1的用途，其中白花前胡总香豆素由以下方法制备：以粉碎的白花前胡的干燥根为原料，用水、乙醇或甲醇提取，提取液用有机溶剂萃取，回收萃取溶剂，干燥，即得，其中萃取用有机溶剂选自石油醚、乙醚、己烷或环己烷。

5.权利要求4的用途，其中乙醇或甲醇的浓度是30％～95％，为重量百分比。