CN101091722A - 肝水解肽注射液 - Google Patents

Abstract

一种肝水解肽注射液，属于医药技术领域。本发明提供一种可以静脉注射的肝水解肽注射液。本发明的工艺过程包括六表步骤：匀浆、酶解、分离上清、冷冻、超滤、灌封。本发明省去了原工艺中的乙醇沉淀步骤及苯酚抑菌步骤，保证了制剂不含任何抑菌剂，从而使静脉注射成为可解，同时也使工艺过程简单。

Description

肝水解肽注射液

技术领域：

本发明属于医药技术领域。

背景技术：

目前关于肝水解肽注射液的生产工艺已是普遍应用的工艺，其缺点是：1、工艺过程较为复杂，有些试药如A-T3942霉菌蛋白酶已无厂家生产。2、另外由于工艺过程时间较长，且在高温条件下进行，造成产品氧化，并使终产品颜色较深，为棕色。3、工艺过程中加入苯酚为抑菌剂，使产品不可静脉注射。4、工艺中无截留1万分子量大分子超滤过程，使产品过敏性难以保障，也使静脉注射已乎不可能。

发明内容：

为了解决上述问题，本发明提供一种可以静脉注射的肝水解肽注射液。

本发明的工艺过程是：

a、匀浆：取新鲜牛肝，去除脂肪、大血管及其它结缔组织，切成块，水洗二次，冲净血水，再用纯化水冲洗二次，称重，按1∶0.5--3加水，用胶体磨匀浆，循环数分钟，放入血浆瓶中，备用。

b、酶解：用C_a(OH)₂的混悬液将上述匀浆调至pH至7.0--7.5。将胰酶按组织重量的0.5--5％称出胰酶，每500g胰酶加纯化水1000ml，加入C_aCl₂5-6g，搅匀，室温放置1小时活化。将上述活化的胰酶加入匀浆中，搅匀，在水浴锅中加热至54℃--60℃，将上述混合物分至血浆瓶或不锈钢桶中，放入54℃--60℃的水浴锅中，每半小时搅拌一次，54℃--60℃保温1-5小时。可根据水解情况调整。

c、分离上清：将上述水解液取出，用磷酸调pH5-8，按肝组织重量的0.5--4％(w∶w)加入活性碳或不加活性碳，根据上清晰出情况定，加热至沸，持续数分钟，自然放冷，吸取上清液过滤，滤液煮开后按组织重量的0.5--2‰加入亚硫酸氢钠，如水解液颜色较浅，亦可不加。冷却后，过滤至澄清。

d、冷冻：上述滤液过5万或10万分子量的超滤柱，滤液立即放入-20～-30℃冷库或冷柜深冻过夜，24小时后取出，室温条件下自然化冻。

e、超滤：注意观察化冻进程，待有少量冰块时，即吸取上清过1万分子量超滤柱二次，得超滤液即为肝水解肽原液，每1kg牛肝大约得到中间体溶液600---1200ml。

f、灌封：上述原液进行检测，合格后加水稀释至11.5-12.0mg/m1，调节pH至5.5-7.0除菌过滤，灌封灭菌即得。

本发明优点：

1、本工艺省去了原工艺中的乙醇沉淀步骤及苯酚抑菌步骤，保证了制剂不含任何抑菌剂，从而使静脉注射成为可解，同时也使工艺过程简单。

2、由于工艺加热时间较原工艺大大缩小，使该产品颜色变化不大，符合新的国家药品质量标准，即微黄色至淡黄色或淡黄棕色。

3、由于采用了现化的超滤技术，保证了成品的分子量在1万道尔顿以下，使得静脉注射后不过敏，从而使静脉给药成为可能。

本发明的具体实施方式：

1、匀浆：取新鲜牛肝，去除脂肪、大血管及其它结缔组织，切成4-6cm小块，水洗二次，冲净血水，再用纯化水冲洗二次，称重，按1∶1(w∶w)加水，用胶体磨匀浆，循环数5钟，放入1万毫升血浆瓶或不锈钢桶中，备用。

2、酶解：用C_a(OH)₂的混悬液将上述匀浆调至pH至7.0--7.5。将胰酶按组织重量的1.25％称出胰酶，每500g胰酶加纯化水1000ml，加入C_aCl₂5-6g，搅匀，室温放置1小时活化。将上述活化的胰酶加入匀浆中，搅匀，在水浴锅中加热至54℃--60℃，将上述混合物分至血浆瓶或不锈钢桶中，放入54℃--60℃的水浴锅中，每半小时搅拌一次，54℃--60℃保温2小时。

3、分离上清：将上述水解液取出，用磷酸调pH5-8，按肝组织重量的1.0％(w∶w)加入活性碳，加热至沸，持续10分钟，自然放冷，吸取上清液过滤，滤液煮开后按组织重量的2‰加入亚硫酸氢钠，冷却后，过滤至澄清。

4、冷冻：上述滤液过5万或10万分子量的超滤柱，滤液立即放入-20～-30℃冷库或冷柜深冻过夜，24小时后取出，室温条件下自然化冻。

5、超滤：注意观察化冻进程，待有少量冰块时，即吸取上清过1万分子量超滤柱二次，得超滤液即为肝水解肽原液，每1kg牛肝大约得到中间体溶液600---1200ml。

6、灌封：上述原液进行检测，合格后加水稀释至11.5-12.0mg/ml，调节pH至5.5-7.0除菌过滤，灌封灭菌即得。

实验数据：

1、上述的水解溶液按质量标准方法测定多肽浓度(方法见参考文献1)，结果如下：

批号	050301	050302	050303
				投料量(牛肝)	50kg	50kg	50kg
半成品体积(ml)	约50000	约42000	约53000
				半成品浓度(mg/ml)	15.3	16.0	16.2
收率(g/kg)	15.3	13.4	17.2

2、鉴别实验：三批均符合国家药品标准WS-10001(HD--0808)--2002肝水解肽注射液项下的规定。

3、蛋白质检测：取本品稀释至10mg/ml，取1ml，加20％磺基水杨酸，混匀，均未发生混浊。

4、高分子物质：按国家药品标准WS-10001(HD--0808)--2002肝水解肽注射液项下进行，取本品适量加水制成每ml含1mg的溶液，作为供试品溶液，另取细胞素C适量，加水制成每ml含5mg的溶液，作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录VD)测定。

采用凝胶色谱柱(如TSKgelG2000SW)，以磷酸缓冲液(取磷酸氢二钾13.93g，磷酸二氢钾5.32g，加异丙醇50ml，加水至1000ml，用磷酸调pH7.0)为流动相，检测波长为280nm，取对照溶液与供试品各20ul，分别注入液相色谱柱，记录色谱图，供试品色谱图中，各峰的保留时间均应大于对照溶液峰的保留时间。结果：细胞色素C主峰保留时间为8.49min，各批样品峰保留时间大于8.49min。

5、热源：取本品制成注射液后，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI D)，剂量按家兔每1kg注射0.5ml，结果均符合规定。

6、过敏实验：取本品，加氯化钠注射液制成每ml含2mg的溶液作为致敏液及供试品，依法检查，健康豚鼠，雌雄均可，体重250--350g，试验前及试验期内，均应按正常饲养条件饲养，取上述豚鼠6只，隔日腹腔注射供试品0.5ml，连续3次，然后分成两组，每组3只，分别在第一次注射后14日及21静脉注射供试品溶液1.0ml。静脉注射15分钟内均不得出现过敏反应，如有竖毛，呼吸困难，喷嚏、干哎或咳嗽3声等现象中的两种以上者，或有啰音、抽搐、虚脱或死亡现象之一者应判断为阳性。

7、降压物质：取肝水解肽注射液，加0.9％氯化钠注射液制成1ml中含0.5mg的溶液，依法检查(中国药典2000年版第二部附录XG)，剂量按猫体重每1kg注射0.2ml，结果三批均符合规定。

8、其他：应符合注射剂项下有关的各项规定，各批均符合，尤其澄明度很好。

Claims (1)

1、一种肝水解肽注射液，其特征在于：其工艺过程是：

a、匀浆：取新鲜牛肝，去除脂肪、大血管及其它结缔组织，切成块，水洗二次，冲净血水，再用纯化水冲洗二次，称重，按1∶0.5--3加水，用胶体磨匀浆，循环数分钟，放入血浆瓶中，备用。

b、酶解：用C_a(OH)₂的混悬液将上述匀浆调至pH至7.0--7.5。将胰酶按组织重量的0.5--5％称出胰酶，每500g胰酶加纯化水1000ml，加入C_aCl₂5-6g，搅匀，室温放置1小时活化。将上述活化的胰酶加入匀浆中，搅匀，在水浴锅中加热至54℃-60℃，将上述混合物分至血浆瓶或不锈钢桶中，放入54℃-60℃的水浴锅中，每半小时搅拌一次，54℃-60℃保温1-5小时。可根据水解情况调整。

c、分离上清：将上述水解液取出，用磷酸调pH5-8，按肝组织重量的0.5-4％(w∶w)加入活性碳或不加活性碳，根据上清晰出情况定，加热至沸，持续数分钟，自然放冷，吸取上清液过滤，滤液煮开后按组织重量的0.5--2‰加入亚硫酸氢钠，如水解液颜色较浅，亦可不加。冷却后，过滤至澄清。

d、冷冻：上述滤液过5万或10万分子量的超滤柱，滤液立即放入-20～-30℃冷库或冷柜深冻过夜，24小时后取出，室温条件下自然化冻。

e、超滤：注意观察化冻进程，待有少量冰块时，即吸取上清过1万分子量超滤柱二次，得超滤液即为肝水解肽原液，每1kg牛肝大约得到中间体溶液600---1200ml。

f、灌封：上述原液进行检测，合格后加水稀释至11.5-12.0mg/ml，调节pH至5.5-7.0除菌过滤，灌封灭菌即得。