CN101072796A - 马血红蛋白的单克隆和多克隆抗体以及采用这些抗体和/或过氧化物酶反应的用于鉴定和定位马溃疡的装置和方法 - Google Patents

Abstract

公开了一种诊断检测装置和相关使用方法，获得了抗马珠蛋白和血红素的抗体并将这些抗体用于检测和定位马胃溃疡和结肠溃疡的检测装置、试剂盒及方法。将受试马的粪便与经缓冲的溶液一起放于大容器中，充分混匀，然后取容器中的几滴液滴置于检测试剂盒。检测试剂盒中的可见标记显示作为指标的血红素和马珠蛋白的检测结果，这两个指标分别指示胃溃疡和/或结肠溃疡。

Description

马血红蛋白的单克隆和多克隆抗体以及采用这些抗体和/或过氧化物酶反应的用于鉴定和定位马溃疡的装置和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2004年12月4日提交的第60/633,167号美国临时专利申请的优先权，其标题为“马珠蛋白和血红素的抗体以及在马的溃疡的鉴定和定位中利用该抗体的装置和方法”，所述申请在此全文引入作为参考。

发明背景

发明领域

本发明主要涉及诊断和检测装置和方法，更具体的涉及马血红蛋白和血红素的抗体及其在检测和定位马的胃和结肠溃疡的检测装置、试剂盒和方法中的应用。

在讨论检测和诊断马的溃疡之前，有必要讨论一下马独特的消化道解剖学结构，该结构导致马消化道溃疡的高发病率。在人和其他大多数动物中，胃酸的分泌是胃对进食的反应。与此相反，千百年来马已进化为滴流摄食动物(吃得慢，但整天大部分时间或多或少不断的吃)，它们的消化系统已适应这种饮食方式，不断产生胃液和肝分泌的胆汁进入前肠。因此，无论马是否正在进食，马胃都可视为整天或多或少不断产生胃酸的酸泵。

表演马的消化道溃疡的发病率已急剧升高，从1920年的约20％上升到近十年的约90％或更高。例如，在赛马中，据报道多达97％的赛马患有消化道溃疡，患消化道溃疡的展示马的百分率紧随其后。甚至表演马驹也已罹患该病症，约60％的表演马驹患有消化道溃疡。虽然娱乐马消化道溃疡的发病率比展示马低，但是近二十年来消化道溃疡越来越高的发病率在所有类型的马包括娱乐马中都显著升高。

最近一项马的随机交叉科学研究显示，大约55％的受试马患有胃溃疡，40％的受试马患有结肠溃疡。胃和结肠溃疡的发病率不相同，表明一些马仅患有胃溃疡，另一些马仅患有结肠溃疡。然而，大多数患有结肠溃疡的马也患有胃溃疡，作为一个整体的马群中只有不到30％既不患结肠溃疡，也不患胃溃疡。如上所述，展示马和赛马消化道溃疡的发病率与一般马群的这些统计数字相比甚至更高。

本领域存在大量解决马消化道溃疡问题的方法。这些解决方法包括使用抗酸剂暂时中和胃中的酸，使用药物抑制胃酸的产生，以及延长休息和草料的进食。最近，开发了一种新的和非常有效的食料添补剂用于治疗和/或预防胃溃疡和结肠溃疡，如2003年5月9日提交的第10/435,367号美国专利申请所公开的，其标题为“在马和其他动物中用于治疗和预防消化道溃疡的食料添补剂及其方法”，该专利申请被指派给本发明的代理人，该专利申请在此全文引入作为参考。

尽管存在这种治疗方法，但是准确诊断马的胃溃疡仍然非常困难，而诊断马的结肠溃疡根本就不可能。最常用的诊断马溃疡的方法，就是利用症状(这经常是模糊的，非特异的迹象例如体重减轻，食欲不振，嗜睡，或者间歇性发烧)与治疗观察的结果联合，这被发现几乎是完全不可靠的。这是因为有许多可能的原因造成相同的症状，并且不是所有的马都显示相同或者甚至显著的溃疡症状。因此，使用这种技术的效果通常不比竞猜游戏更好。

诊断马胃溃疡的唯一可靠的方法是使用3米视频内窥镜，但其具有显著缺点：昂贵、耗时和压力大(对马和训练员/马主都是)。购买3米视频内窥镜的费用很高，其价格是马主和所有训练员(除了最杰出的外)高得买不起的。除了内窥镜的费用之外，操作步骤也是繁琐和费时的。没有3米视频内窥镜的马主、训练员和兽医必须求助于拥有内窥镜的诊所或兽医。这需花费额外的时间和费用，对马的压力更大，而且易产生挫折感，因为马不再是在马主、训练员或平常兽医的照顾下。

此外，即使拥有和使用了3米视频内窥镜，结果也不是结论性的，因为即使是最复杂的内窥镜也会错过75英尺的消化道—完整的后肠。利用内窥镜不能看到后肠，因为还没有足够长度的内窥镜，而且内窥镜的使用需要完全排空后肠，这极有可能杀死马匹。事实上，只是在最近才记载了马结肠溃疡的高发病率，这完全是通过死后观察分析的使用完成的。

因此，本发明的主要目标是提供一种马溃疡检测试剂盒以及使用该检测试剂盒的相关方法，该试剂盒和方法可有效诊断马的胃溃疡和结肠溃疡。本发明的一相关目标是为胃溃疡或结肠溃疡或两者的存在提供高度特异的指标。本发明的另一相关目标是既能准确鉴定马溃疡的存在又能准确鉴定马溃疡的类型，而且不会产生过度假阳性显示。

本发明的另一目标是检测可以方便快捷的进行，不要求检测的操作者具有专门的技术或者接受培训。本发明的另一目标是它是完全自给自足的，不需要实验室分析或者其他处理装备，这样的话它可以作为现场检测在任何地点使用。本发明的另一目标是快速提供检测结果，只需几分钟而不是很长的时间。

本发明的马溃疡检测试剂盒的构成还必须是持久耐用的，而且应该无需要特殊的保存条件就可确保较长的贮存期。为增强本发明马溃疡检测试剂盒的市场吸引力，其构成应该不昂贵从而使之具有最广阔的潜在市场。最后，还有一个目标是本发明马溃疡检测试剂盒及方法的所有上述优点和目标的获得不应附带造成任何严重的缺点。

发明概述

本发明克服了上述背景技术中讨论的缺点和限制。本发明提供了马溃疡检测试剂盒及使用该检测试剂盒的方法，所述试剂盒和方法能够以高度的灵敏度和特异性鉴定马的胃溃疡或结肠溃疡或这二种溃疡，因为本发明马溃疡检测试剂盒和方法可以清楚的区分胃溃疡和结肠溃疡。本发明的溃疡检测是一种粪便血液检测，因为它鉴定被测马的粪便中所含的血液成分。

根据本发明所述，已经鉴定出两种血液成分，它们分别对胃溃疡或结肠溃疡的存在具有高度的指征性。本发明的发明者已经确定，粪便中包含的完整珠蛋白其最有可能的来源是结肠。这是基于以下事实：来自胃溃疡的血液(和其他任意在十二指肠之前的血液，就此而言)会被胃中的酸和肽降解，产生血红素(它是由两个亚铁血红素(heme)分子连接在一起构成的分子)等产物。

因此，粪便中完整珠蛋白的存在表明有结肠溃疡，而血红素的存在则表明有胃溃疡。本领域技术人员还可以看出，以血红素和珠蛋白作为指标的马溃疡检测试剂盒和方法将为检测和定位马体内一处或多处溃疡提供很好的指标。本发明的马溃疡检测试剂盒和方法的优选形式是用于检测血红素指标和珠蛋白指标的免疫分析，具体的说，本发明马溃疡检测的优选实施例是酶联免疫吸附分析(“ELISA”检测)，这是生物化学中经常用于检测样品中是否存在特定物质的方法。

ELISA检测是一种快速的免疫化学检测，涉及抗体或抗原(免疫学分子)和酶(催化生化反应的蛋白)。ELISA检测被用于检测具有抗原性的物质，主要是蛋白(不同于葡萄糖和钾之类小分子和离子)，诸如抗体、细菌抗原和激素。所谓的“快速”ELISA检测由一张具有液体路径的膜组成，该路径由连接于液体源头的一段制止连接于液体吸收池的另一端，沿膜有三个分离且独立的区域。

第一个区域包含标记抗体，即连接有染色试剂的抗体，所述染色剂诸如染料或者胶体金。标记抗体随流体的流动从第一个区域向第二个和第三个区域移动，最终流向液体吸收池。如果感兴趣的物质存在于流体中，它将结合标记抗体。第二个区域，通常是一条跨膜横线，其中包含结合到膜上的抗体。

第二个区域的抗体对感兴趣的物质具有亲合力(将吸引和锁定该物质)，与标记抗体以及在与第二个区域中的抗体结合的感兴趣的物质一起形成“三明治”，从而产生一个作为阳性显示的色线，表明存在感兴趣的物质。流体中包含越多的感兴趣的物质，越多的被感兴趣的物质所结合标记抗体与第二个区域的抗体结合。

第三个区域，通常也是一条跨膜的横线，利用另一种不同的抗体/抗原反应，如果达到足够的流速和流量，该反应就会产生一根色线，不论是否存在感兴趣的物质。这作为对照表明检测系统运行正常。第三个区域相对于第一区域位于第二个区域的另一侧，指示接受检测的液体已经流过第二个区域，从而表明检测系统已经接受了足量的使检测系统得以正常运行被测流体。

May等人的第5,602,040号美国专利描述了一种这样的检测系统，它以两种抗体为基础。包括第一组抗体的颗粒粘附于有色乳胶或金胶体颗粒的表面，它们被干燥在硝酸纤维素膜的第一端，代表上文所述的第一个区域。第二组抗体以线条形式粘附于硝酸纤维素膜，代表上文所述的第二个区域。

通过在第一端让液体样品被硝酸纤维素膜吸收来进行检测。第一个区域的颗粒被液体流动释放，被测分析物与所述颗粒上的抗体结合。在第二个区域，被测分析物又与线上存在的另一抗体结合，形成一道可见的色线，显示所述分析物的存在。这种免疫层析检测技术基于过膜流动，又称为“胶体金免疫层析试纸技术(lateral flow technique)”。本发明参考了第5,602,040号美国专利，本发明还参考了Kouvonen等人的第5,712,170号美国专利，后者很好地概括了该领域该技术。

快速ELISA检测制备起来相对便宜，操作相对简便，提供一种不需要实验室装备的快速检测方法。ELISA检测中的抗体通常用以下方式获得：给动物接种感兴趣的物质，然后动物产生抗那种物质的抗体。这种生化关系进而被用作分离和检测感兴趣的物质的机制。ELISA检测既灵敏又具有特异性，堪与放射免疫分析(“RIA”)检测相比。ELISA检测的优点还在于：不需要放射性同位素或者放射性计量装置。

本发明马溃疡检测试剂盒的优选实施例包括包含在一个或两个塑料盒体中的两个检测试纸条。将接受检测的马的粪便放入诸如桶或罐或塑料袋的容器中，加入溶液(可以是水或加有缓冲剂如盐的水)，然后利用涡旋、搅动或搅揉将混合物充分混匀。用点样器(如滴眼液滴管)从容器中取数滴液体加到盒体中的检测试纸条上。

经过一段时间，优选约5分钟到约30分钟，两个检测试纸条将呈现一个代表对照指标的可见标记，如果有被测指标存在，还将呈现表示检测到了分别指示胃溃疡和/或结肠溃疡的指标的可见标记。本发明使用两种指标，其中一种标示胃溃疡，另一种标示结肠溃疡。胃溃疡指标可利用过氧化物酶反应(诸如潜血反应(guaiac reaction)或四甲基联苯胺酶(TMB)反应)取代抗体反应。

在优选的实施例中，如果测到就表明有结肠溃疡的感兴趣物质是马珠蛋白，而如果测到就表明有胃溃疡的感兴趣物质是马血红素或亚铁血红素。本发明的马溃疡检测试剂盒和方法由此可以诊断胃溃疡和/或结肠溃疡，及时提供治疗基础。

因此可以看出，本发明介绍了一种马溃疡检测试剂盒及使用该试剂盒的相关方法，它们可有效诊断马的胃溃疡和结肠溃疡。本发明的马溃疡检测试剂盒和方法可高度特异性地指示胃溃疡或结肠溃疡或这两种溃疡。本发明的马溃疡检测试剂盒和方法即能准确鉴定马溃疡的存在又能准确鉴定马溃疡的类型，而且不会产生过度假阳性显示。

本发明的马溃疡检测试剂盒和方法使用起来方便快捷，不要求检测的操作者具有专门的技术或者接受培训。本发明的马溃疡检测试剂盒和方法是完全自给自足的，不需要实验室分析或者其他处理装备，从而使它可以作为现场检测在任何地点进行。本发明的马溃疡检测试剂盒和方法可以快速提供检测结果，只需几分钟而不是很长的时间。

本发明的马溃疡检测试剂盒的构造持久耐用，试剂盒不需要特殊的保存条件，具有较长的贮存期。本发明马溃疡检测试剂盒的构成不昂贵，从而提供了最广阔的潜在市场。最后，本发明马溃疡检测试剂盒及方法的所有上述优点和目标的获得不会附带造成任何严重的缺点。

附图描述

参考附图，可最好地理解本发明的这些和其他优点，其中：

图1是显示马消化道解剖学结构的示意图。

图2是等角投影视图，显示根据本发明构建和使用的马溃疡检测试剂盒，它具有包含胃溃疡检测试纸条的第一盒体和包含结肠溃疡检测试纸条的第二盒体。

图3是等角投影视图，显示同样根据本发明构建和使用的另一马溃疡检测试剂盒，它只有一个既包含胃溃疡检测试纸条又包含结肠溃疡检测试纸条的单一盒体。

优选实施例的详述

在讨论本发明的马溃疡检测试剂盒和方法之前，有必要简要的论述马消化系统的解剖学结构。参见附图1，该图展示了马20的侧视图，以图形显示说明了马的消化道。马20的消化道可分为前肠，总体以参考数字22表示，和后肠，总体以参考数字24表示。

马20的消化道从其口26开始，按顺序延伸通过食管28进入胃30，然后到小肠32，它们一起构成了马20的前肠22。马20的前肠22大约占马20消化道相对容量的35-40％。

从小肠32起，消化道延伸通过盲肠34、大结肠36和小结肠38，至直肠40。马20消化道的这些元件一起构成马20的后肠24。后肠24大约占马20消化道相对容量的60-65％。

本发明的马溃疡检测试剂盒的优选实施例如图2所示。图中显示了第一盒体50，它包含用于检测胃溃疡的马溃疡检测试剂盒。第一盒体50有一个孔52，待分析的液体由该空引入。第一盒体50还有观察窗54，通过该观察窗54可以看到定位在那里的具有试验指示区58和对照指示区60的检测试纸条膜56。当感兴趣物质被检测到时，试验指示区58将有可见显示，从而表明有胃溃疡。

图2还显示第二盒体70，它包含用于检测结肠溃疡的马溃疡检测试剂盒。第二盒体70有一个孔72，待分析的液体由该孔引入。第二盒体70还具有观察窗74，通过该观察窗可以看到定位在那里的具有试验指示区78和对照指示区80的检测试纸条膜76。当感兴趣物质被检测到时，试验指示区78将有可见显示，从而表明存在结肠溃疡。尽管图中显示它们紧靠在一起，但是在图2所示的实施例中，第一盒体50和第二盒体70是彼此独立的。

现在参见图3，该图显示本发明检测试剂盒的另一种实施例，只有单一盒体90。盒体90具有单一(但更宽)的孔92，待分析的液体由该孔引入。盒体90还具有第一和第二观察窗94和96，分别位于盒体90相对的两边。通过第一观察窗94可见的是定位于那里的具有试验指示区100和对照指示区102的检测试纸条膜98。当感兴趣物质被检测到时，试验指示区100将有可见显示，从而表明存在胃溃疡。当足量液体通过孔92流入盒体90后，对照指示区102将有可见显示。

通过第二观察窗96可见的是定位于那里的具有试验指示区106和对照指示区108的检测试纸条膜104。当感兴趣物质被检测到时，试验指示区106将有可见显示，从而表明存在胃溃疡。当足量液体通过孔92流入盒体90后，对照指示区108将有可见显示。

图2中检测试纸条56和76以及图3中检测试纸条98和104的构建是本领域技术人员公知的。相似的，具有不同盒体设计的不同类型其他检测试剂盒的构建也是本领域技术人员公知的。图2和图3所示检测装置的关键部分是用于检测胃溃疡和结肠溃疡的抗体的类型和来源(derivation)，见下文。

讨论之前，先简要描述图2和图3所示的试剂盒的操作。兽医、驯马师或马主采集接受检测的马的粪便样本(优选全部的排粪)。将粪便样本放于诸如桶或罐或塑料袋的容器中，然后通过涡旋、搅动或搅揉与水溶液(可以是水或加有缓冲剂如盐的水)混合。利用滴眼液滴管或其他任何方便的器械，兽医、驯马师或马主将几滴液体通过图1所示盒体50和70中的孔52和72或通过图2所示盒体90中的孔92加入检测装置中。

几分钟后，图1所示实施例中，对照指示区60和80出现可见显示，或者，图2所示实施例中，对照指示区102和108出现可见显示，表明试剂盒运作正确。如果检测到珠蛋白，图1实施例中，试验指示区58出现可见显示，或者，图2实施例中，试验指示区100出现可见显示。相似的，如果检测到血红素，图1实施例中，试验指示区78出现可见显示，或者，图2实施例中，试验指示区106出现可见显示。该检测由此可以诊断出胃溃疡或结肠溃疡，如果检测到其中一种或两种溃疡，该检测就提供了及时治疗的基础。

虽然如图2和3所示，图2所示实施例采用彼此独立的检测试纸条膜56和76，图3所示实施例采用彼此独立的检测试纸条膜98和104，本领域技术人员应能立即想到可将两条检测试纸条膜整合在同一张膜上。

本发明的马溃疡检测试剂盒和方法的优选实施例中，若检测到则指示结肠溃疡的感兴趣的物质是马珠蛋白，而若检测到则指示胃溃疡的感兴趣的物质是马血红素或者亚铁血红素。选择马珠蛋白来指示结肠溃疡可提供特异性，因为马粪便中检测到的珠蛋白只可能来源于结肠。这是因为，来自胃溃疡的血液(和其他任意十二指肠之前的血液，就此而言)会被胃中的酸和肽降解，因此，粪便中检测到的珠蛋白不大可能来源于胃溃疡。

但是，胃中酸和肽的作用会产生包括血红素或者亚铁血红素在内的多种物质。粪便中检测到的血红素或者亚铁血红素几乎肯定来源于胃，而不是结肠(或者在胃之后的血液，就此而言)，因此，粪便中检测到的血红素不大可能来源于结肠溃疡。因此，本领域技术人员应能理解，本发明的马溃疡检测试剂盒和方法由此提供诊断胃溃疡和/或结肠溃疡的机制和方法，为展开对这些溃疡的治疗提供了可信依据。

珠蛋白检测

珠蛋白检测是一种高度灵敏的单克隆/多克隆免疫分析。这种免疫分析包括四个不同步骤，即免疫接种、融合、克隆和制备。第一阶段是免疫接种，其中，给兔子、小鼠、大鼠、豚鼠或其他合适的实验动物注射来自马血的马珠蛋白。这将在实验动物中诱发免疫反应，从而在其血液和脾中产生大量抗体。

大约6周后，从动物取血，用ELISA实验检测抗体。这涉及实验动物的血液在体外与马血清相互反应。如果存在抗体，ELISA将变色。如果存在的抗体水平不足，实验动物需要一次或多次马珠蛋白的加强免疫注射。这些首次放出的血可用于制备多克隆抗体。这一阶段通常需要大约3个月。

第二阶段是融合，其中，处死实验动物，对它们的脾进行浸渍裂解以释放出产生马抗体的细胞。可将这些细胞与骨髓瘤细胞系融合以使其无限繁殖化，如Stanker等人的第5,552,295号美国专利所述，该专利在此引入作为参考。无限繁殖化后，这些细胞可以无限培养以提供持续的抗体源。

将杂交瘤(融合细胞)接种于几块96孔孔板上。对这些细胞进行另一次ELISA实验检测，那些显示正确抗体反应的细胞在更多微孔中扩增。再用ELISA实验检测这些细胞以提供产生所需抗体的纯细胞系，这个阶段通常需要大约5至6周。

第三阶段是克隆，其中，在第二阶段检测呈阳性的细胞被克隆，再用ELISA实验检测。可能需要进行多轮克隆来得到稳定克隆。然后将这些克隆注射到小鼠腹腔，在那里产生腹水。从腹水液体中纯化单克隆抗体，备用。本领域技术人员非常清楚，这种技术将产生特异抗马珠蛋白的单克隆抗体。第三个步骤通常需要大约3个月。

或者，可用抗原免疫鸡，接受免疫的鸡将在鸡蛋的蛋黄中产生抗体。这种技术不需要上述克隆步骤，因为鸡可以下足够的蛋以提供抗体。但是，这些抗体的纯化步骤与上面所述的相似。

第四步也是最后一步是制备检测试剂盒。将抗体涂布于本领域常用的多孔硝酸纤维素或尼龙膜。当马珠蛋白置于检测装置上时，它通过毛细作用通过膜，带走携有着色剂的标记抗体，最终被试验指示区上的抗体捕获。在那里，标记抗体的浓集造成清晰的颜色变化，表明在接受检测的马的粪便中存在马珠蛋白。本领域技术人员可以看出，这种新型抗体检测是极其灵敏的(灵敏度可达到大约百万分之一(1微克每毫升))，并对马珠蛋白特异。

血红素检测

血红素是由两个亚铁血红素分子连接在一起组成的分子。因为亚铁血红素是高度保守的(在所有哺乳动物中基本是相同的)，因此实验动物不可能产生针对它的抗体。(如果产生了抗体，它们将攻击动物自身血液并且杀死它。)因为这个原因，在优选的实施例中，用鸡蛋来制备血红素的抗体。这个过程包括四个步骤，即接种、收集、纯化和制备。

第一步是接种，其中，在产蛋前给鸡肌内注射马血红素。以这种方式注射的鸡通常会产生含有所需抗体的鸡蛋。

第二步是收集，其中，收集接种母鸡产的鸡蛋，标记并冷藏(refrigerate)。每个鸡蛋在蛋黄中包含多达150毫克抗体。

第三步是纯化，其中，打破鸡蛋，用亲和层析纯化蛋黄。然后用ELISA检测分析进一步纯化洗脱液。

第四步是制备，其中一旦纯化得到抗体，将它们涂布于本领域常用的多孔硝酸纤维素或尼龙膜。当马血红素置于检测装置上时，它通过毛细作用通过膜，带走携有着色剂的标记抗体，最终被试验指示区上的抗体捕获。在那里，标记抗体的浓集将造成清晰的颜色变化，表明在接受检测的马的粪便中存在血红素。本领域技术人员可以看出，这种新型抗体检测是极其灵敏的(灵敏度可达到大约百万分之一(1微克每毫升))，并对血红素特异。

或者，可用高度灵敏的潜血反应(guaiac reaction)或四甲基联苯胺酶(TMB)反应来检测亚铁血红素或者血红素。在这个实施例中，液体通过毛细作用经过愈创木脂(quaiac)或者TMB，将过氧化物指示剂施加于检测窗口，在亚铁血红素或者血红素存在时，该指示剂将改变颜色。

联合检测

通过将血红素检测和珠蛋白检测组合在同一检测试剂盒中，可以得到一种针对马溃疡的简单、便宜、高灵敏度且诊断特异性的检测方法。或者，可将这两种检测做在不同试剂盒中。在优选的实施例中，将两个检测试纸条连接到一个孔，这样的话只用一份粪便液体就可满足两种检测的需要。

如果血红素检测呈阳性，表明有胃溃疡。如果珠蛋白检测呈阳性，表明有结肠溃疡。如果两个结果都呈阳性，表明同时存在胃溃疡和结肠溃疡。本领域技术人员可以看出，这种双检测提供了一种方便、非侵入性的胃溃疡(目前的胃溃疡诊断困难而昂贵)和结肠溃疡(目前为止还没有准确的结肠溃疡诊断方法)检测。

因此，从以上本发明优选实施例的详细描述可以看出，本发明介绍了一种马溃疡检测试剂盒和该检测试剂盒的相关使用方法，所述试剂盒和所述方法可有效诊断马的胃溃疡和结肠溃疡。本发明的马溃疡检测试剂盒和方法为胃溃疡或者结肠溃疡或两者的存在提供了一种高度特异性的指标。本发明的马溃疡检测试剂盒和方法在鉴定马溃疡的存在以及马溃疡的类型方面都非常可靠，不会产生过度假阳性显示。

本发明的马溃疡检测试剂盒和方法使用起来方便快捷，不需要检测的操作者具有专门的技术或者接受特殊培训。本发明的马溃疡检测试剂盒是完全自给自足的(self-contained)，不需要实验室分析或者其他处理装备，从而使它可以作为现场检测在任何地点进行。本发明的马溃疡检测试剂盒和方法可以快速提供检测结果，只需几分钟而不是很长的时间。

本发明的马溃疡检测试剂盒的结构使之持久耐用，试剂盒不需要特殊的保存条件，具有较长的贮存期。本发明的马溃疡检测试剂盒的构成不昂贵，这增强了其市场吸引力，使之具有最广阔的潜在市场。最后，获得所有上述本发明马溃疡检测试剂盒及方法的优点和目标的同时没有附带造成任何严重的缺点。

虽然已结合具体实施例及其应用说明和描述了本发明，但是阐述的目的是示例性和描述性的，而不是排他性或者限制本发明于所公开的具体实施例及其应用。本领域技术人员明白，可对本文所述的本发明进行许多改变、改进、变化或替代，这些均不背离本发明的精神和范围。选择和描述具体实施例及其应用是为了对本发明原理及其实际应用提供最佳说明，以使本领域普通技术人员能够在适合于预期具体应用的各种实施例和各种改进中利用本发明。因此，当公平、合法、公正的解释其外延含义时，所有这些改变、改进、变化或替代均应视为属于本文所附权利要求所确定的本发明范围之内。

Claims (26)

1.特异结合马珠蛋白的抗马珠蛋白抗体。

2.权利要求1所述的抗马珠蛋白抗体，其中所述抗马珠蛋白抗体与马珠蛋白结合的灵敏度等于或超过大约百万分之一(1微克每毫升)。

3.权利要求1所述的抗马珠蛋白抗体，其中抗马珠蛋白抗体是单克隆抗体。

4.权利要求1所述的抗马珠蛋白抗体，其中抗马珠蛋白抗体是多克隆抗体。

5.权利要求1所述的抗马珠蛋白抗体，其中抗马珠蛋白抗体是从被接种的兔、小鼠、大鼠或者豚鼠的脾浸渍裂解物中分离的。

6.特异结合马血红素的抗马血红素抗体。

7.权利要求6所述的抗马血红素抗体，其中所述抗马血红素抗体与马血红素结合的灵敏度等于或超过大约百万分之一(1微克每毫升)。

8.权利要求6所述的抗马血红素抗体，其中抗马血红素抗体是单克隆抗体。

9.权利要求6所述的抗马血红素抗体，其中抗马血红素抗体是多克隆抗体。

10.权利要求6所述的抗马血红素抗体，其中抗马血红素抗体是从被接种的鸡蛋中分离的。

11.产生和分泌与马珠蛋白特异结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞系。

12.产生和分泌与马血红素特异结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞系。

13.制备与马珠蛋白特异结合的抗体的方法。

14.权利要求13所述的制备抗马珠蛋白抗体的方法，包括表达来自免疫细胞的珠蛋白抗体，所述免疫细胞已与无限繁殖化的骨髓瘤细胞系杂交。

15.权利要求14所述的制备抗马珠蛋白抗体的方法，其中所述免疫细胞从被接种的兔、小鼠、大鼠或者豚鼠的脾浸渍裂解物中分离。

16.制备与马血红素特异结合的抗体的方法。

17.权利要求16所述的制备抗马血红素抗体的方法，包括表达来自免疫细胞的血红素抗体，所述免疫细胞已与无限繁殖化的骨髓瘤细胞系杂交。

18.权利要求16所述的制备抗马血红素抗体的方法，其中所述免疫细胞从被接种的鸡蛋中分离。

19.一种用于检测和定位马溃疡的快速检测试剂盒，其包含：

用于快速免疫分析或者过氧化物酶反应以检测马胃溃疡的第一检测试纸条；和

用于快速免疫分析以检测马结肠溃疡的第二检测试纸条。

20.权利要求19所述的快速检测试剂盒，其中所述第一检测试纸条检测血红素，所述血红素指示马胃溃疡。

21.权利要求19所述的快速检测试剂盒，其中所述第一检测试纸条还包含用于表明检测运作正确的对照指标。

22.权利要求19所述的快速检测试剂盒，其中所述第二检测试纸条检测马珠蛋白，所述马珠蛋白指示马结肠溃疡。

23.权利要求22所述的快速检测试剂盒，其中所述第二检测试纸条还包含用于表明检测运作正确的对照指标。

24.一种用于检测和定位马溃疡的快速检测试剂盒，其包含：

用于快速免疫分析或者过氧化物酶反应以检测血红素的第一检测试纸条，所述血红素指示马胃溃疡；和

用于快速免疫分析以检测马珠蛋白的第二检测试纸条，所述马珠蛋白指示马结肠溃疡。

25.权利要求24所述的快速检测试剂盒，其中所述第一检测试纸条还包含用于表明检测运作正确的对照指标，所述第二检测试纸条还包含用于表明检测运作正确的对照指标。

26.权利要求24所述的快速检测试剂盒，其中所述第一和第二检测试纸条包含：

用于检测血红素和马珠蛋白的单一检测试纸条。

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