CN101062408B - 口服胰岛素复合制剂及其制备方法 - Google Patents

口服胰岛素复合制剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101062408B
CN101062408B CN2006100604990A CN200610060499A CN101062408B CN 101062408 B CN101062408 B CN 101062408B CN 2006100604990 A CN2006100604990 A CN 2006100604990A CN 200610060499 A CN200610060499 A CN 200610060499A CN 101062408 B CN101062408 B CN 101062408B
Authority
CN
China
Prior art keywords
insulin
solution
polyethylene glycol
make
containing compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN2006100604990A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101062408A (zh
Inventor
邓柳红
张春发
杨卫帆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tonghua Golden-Horse Group Co., Ltd.
Original Assignee
SHENZHEN LONGYANG BIOSCIENCE CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHENZHEN LONGYANG BIOSCIENCE CO Ltd filed Critical SHENZHEN LONGYANG BIOSCIENCE CO Ltd
Priority to CN2006100604990A priority Critical patent/CN101062408B/zh
Publication of CN101062408A publication Critical patent/CN101062408A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101062408B publication Critical patent/CN101062408B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明涉及一种口服胰岛素复合制剂，包括有：胰岛素原料1-15％；稳定保护剂50-97％；载药载体1-15％；吸收促进剂1-20％；其中稳定保护剂包括聚乙二醇及酪蛋白、鱼精蛋白、白蛋白和蛋白酶抑制剂中的一种或几种，载药载体包括磷酸钙盐，吸收促进剂包括水杨酸、胆酸盐和脂肪酸中的一种或几种，胰岛素原料包括人重组胰岛素或经单甲氧基聚乙二醇衍生物化学修饰的人重组胰岛素。本发明还提供一种口服胰岛素复合制剂制备方法。本发明通过将胰岛素原料进行包被，提高了人重组胰岛素的生物稳定性，能较好抵抗胃肠道酶的降解作用，可口服起到降血糖的作用。本发明可明显改善胰岛素的药代学和药效学性质，如降低免疫原性、增加对蛋白水解酶的稳定性及延长体内的半衰期等。

Description

口服胰岛素复合制剂及其制备方法 
技术领域
本发明属于医药领域，更具体地说，涉及一种口服胰岛素复合制剂及其制备方法。 
背景技术
糖尿病是一种威胁人类的常见慢性病，全世界目前已有1.3亿糖尿患者。随着物质生活的丰富以及体力活动的减少，糖尿病患病人数逐年增加。糖尿病的发病率已由十几年前的1％增长至目前2.5％。糖尿病的各种并发症如心血管、肾脏、眼底和神经的病变是造成患者丧失劳动力、致残致死的主要因素，而且其死亡率也上升至继心血管病、癌症之后跃居第三位。 
胰岛素是治疗糖尿病的首选药物。由于胰岛素为蛋白质多肽类物质，易被胃肠道的蛋白水解酶降解且不被吸收，所以临床使用的剂型主要是针剂(iv与im两种)。长期注射用药给患者带来极大的痛苦与不便，副作用十分明显，同时针剂用药不方便，剂量不易掌握，极易发生事故。此外，注射给药能引起与抗体关联的胰岛素抵抗、注射点萎缩、与抗体相关的内源胰岛素分泌的抑制和巨脉管病等。另外，长期注射用药还会产生许多不良反应如：胰岛素浮肿、低血糖反应、肥大性脂肪营养不良及皮下脂肪萎缩等等。 
因此，胰岛素非注射给药剂型的开发近二十年来一直在不断地研制探索中，包括口服给药、肺部给药、鼻腔给药、眼内给药、口腔给药等，其中口服给药是最为方便的一种。与注射剂相比，口服给药制剂较注射制剂要求低、药物储存稳定、携带和使用方便、成本相对低，在临床上具有巨大的应用前景。 
然而，胰岛素属于多肽药物，很容易被体内的蛋白酶水解，导致物理化学性质不稳定生物利用度降低。此外在口服给药过程中，胰岛素可能在消化系统中遭到破坏及肾、脾或肝脏消除，例如胃酸破坏、肠道蛋白水解酶的分解、蛋 白酶的降解等。 
发明内容
本发明要解决的技术问题在于，针对现有注射胰岛素制剂使用麻烦并容易造成抗药性和口服制剂使用过程中药效被破坏的缺陷，提供一种新的口服胰岛素复合制剂。 
本发明的另一目的是提供一种口服胰岛素复合制剂的制备方法。 
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种口服胰岛素复合制剂，包括有以下成份： 
胰岛素原料    1-15％； 
稳定保护剂    50-97％； 
载药载体      1-15％； 
吸收促进剂    1-20％； 
其中所述稳定保护剂包括聚乙二醇以及酪蛋白组合、鱼精蛋白、白蛋白和蛋白酶抑制剂中的一种或几种，所述载药载体包括磷酸钙盐，所述吸收促进剂包括水杨酸、胆酸盐和脂肪酸中的一种或几种，所述胰岛素原料包括人重组胰岛素或经单甲氧基聚乙二醇衍生物化学修饰的人重组胰岛素。 
在本发明所述的口服胰岛素复合制剂中，所述经单甲氧基聚乙二醇衍生物化学修饰的人重组胰岛素中，所述人重组胰岛素通过酰氨键将其游离氨基与单甲氧基聚乙二醇衍生物连接在一起，所述的游离氨基包括赖氨酸的ε-NH2或N末端的α-NH2。 
在本发明所述的口服胰岛素复合制剂中，所述单甲氧基聚乙二醇衍生物的分子量包括750-5000Da的mPEG-SPA、mPEG-SBA、mPEG-SMB和mPEG-NHS中的一种或多种，所述聚乙二醇包括分子量2000-8000Da中的一种或几种。 
在本发明所述的口服胰岛素复合制剂中，在进行所述胰岛素与单甲氧基聚乙二醇衍生物的连接反应时的反应pH值为9-10、试剂比例为1∶1-1.4，其中所述试剂比例为物质的量比。 
在本发明所述的口服胰岛素复合制剂中，所述复合制剂还包括填充的肠溶 胶囊或外包的肠溶衣。 
本发明还提供一种口服胰岛素复合制剂的一次冻干制备方法，包括以下步骤： 
(a)使聚乙二醇包围在胰岛素周围并加入含钙化合物溶液制成A溶液； 
(b)将稳定剂溶解于含磷化合物中制成B溶液，并将B溶液和A溶液混合反应形成载胰岛素的磷酸钙盐； 
(c)将混合后的溶液冷冻干燥后加入适量吸收促进剂、蛋白酶抑制剂和崩解剂，填充肠溶胶囊或制成肠溶片剂； 
所述步骤(a)包括： 
(a1)将胰岛素冻干粉溶解于0.01mol/L HCl溶液中，配成浓度为5-60mg/ml的胰岛素溶液； 
(a2)在上述溶液中加入1％的分子量为2000-8000Da的聚乙二醇中的一种或多种，使胰岛素与聚乙二醇的质量比为5-15； 
(a3)加入0.1-1mol/L的含钙化合物溶液，使它与胰岛素溶液体积比为1∶1-2； 
(a4)加入0.1-1mol/L的Na3C6H5O7，使含钙化合物溶液与Na3C6H5O7溶液的体积比为1∶0.2-1，调pH值为6-11，制成A溶液； 
所述步骤(b)包括： 
(b1)将稳定剂如酪蛋白溶解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml，制成B溶液； 
(b2)以胰岛素和酪蛋白的质量比为5-15将B溶液加入A溶液中。 
本发明还提供一种口服胰岛素复合制剂的制备方法，包括以下步骤： 
(a)使聚乙二醇包围在胰岛素周围并加入含钙化合物溶液制成A溶液； 
(b)将含磷化合物和A溶液混合反应形成载胰岛素的磷酸钙盐B干粉； 
(c)将B干粉加入酪蛋白溶液； 
(d)将混合后的溶液冷冻干燥后加入适量吸收促进剂、蛋白酶抑制剂和崩解剂，填充肠溶胶囊或制成肠溶片剂； 
所述步骤(a)包括： 
(a1)将胰岛素冻干粉溶解于0.01mol/L HCl溶液中，配成浓度为5-60mg/ml的胰岛素溶液； 
(a2)在上述溶液中加入1％的分子量为2000-8000Da的聚乙二醇中的一种或多种，使胰岛素与聚乙二醇的质量比为5-15； 
(a3)加入0.1-1mol/L的含钙化合物溶液，使它与胰岛素溶液体积比为1∶1-2； 
(a4)加入0.1-1mol/L的Na3C6H5O7，使含钙化合物溶液与Na3C6H5O7溶液的体积比为1∶0.2-1，调pH值为6-11，制成A溶液； 
所述步骤(b)包括： 
(b1)将0.1-1mol/L含磷化合物加入A溶液，使它与含钙化合物溶液体积比为1-3∶1，冷冻干燥制成载胰岛素的磷酸钙盐B干粉； 
所述步骤(c)包括： 
(c1)将稳定剂解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml，制成C溶液； 
(c2)以胰岛素和稳定剂的质量比为5-15将B干粉加入C溶液中。 
本发明还提供一种口服胰岛素复合制剂的制备方法，包括以下步骤： 
(a)使用单甲氧基聚乙二醇衍生物作为胰岛素的修饰材料，使单甲氧基聚乙二醇与胰岛素游离氨基通过酰氨键连接在一起，制成单甲氧基聚乙二醇衍生物共价修饰的胰岛素； 
(b)使聚乙二醇包围在单甲氧基聚乙二醇衍生物共价修饰的胰岛素周围并加入含钙化合物溶液制成A溶液； 
(c)将稳定剂溶解于含磷化合物溶液中制成B溶液，并将B溶液和A溶液混合反应形成载胰岛素的磷酸钙盐； 
(d)将混合后的溶液冷冻干燥后加入适量吸收促进剂、蛋白酶抑制剂和崩解剂，填充肠溶胶囊或制成肠溶片剂； 
所述步骤(a)包括： 
(a1)将胰岛素在溶解于60％DMF水溶液中，使pH值为9-10； 
(a2)将分子量为750-5000Da的mPEG-SPA、mPEG-SBA、mPEG-SMB、mPEG-NHS中的一种或多种单甲氧基聚乙二醇衍生物溶解于DMF中，并使胰岛素与单甲氧 基聚乙二醇衍生物的摩尔比为1∶1-1.4； 
(a3)将步骤(a1)所得溶液迅速加入步骤(a2)所得溶液中进行反应，并使用1mol/L NaOH维持反应pH值； 
(a4)将反应混合物用NH4HCO3透析后冷冻干燥，得到聚乙二醇-胰岛素连接物； 
所述步骤(b)包括： 
(b1)将聚乙二醇-胰岛素连接物溶解于水，配成浓度为10mg-100mg/ml的胰岛素溶液； 
(b2)以胰岛素和聚乙二醇的质量比为5-15，将1％的分子量为2000-8000Da的聚乙二醇中的一种加入聚乙二醇-胰岛素连接物溶液中； 
(b3)加入0.1-1mol/L的含钙化合物溶液，使它与胰岛素溶液体积比为1∶1-2； 
(b4)加入0.1-1mol/L的Na3C6H5O7，使含钙化合物溶液与Na3C6H5O7溶液的体积比为1∶0.2-1，调pH值为6-11，制成A溶液； 
所述步骤(c)包括： 
(c1)将稳定剂溶解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml，制成B溶液； 
(c2)以胰岛素与酪蛋白的质量比为5-15将B溶液加入A溶液中。 
本发明还提供一种口服胰岛素复合制剂的制备方法，包括以下步骤： 
(a)使用单甲氧基聚乙二醇衍生物作为胰岛素的修饰材料，使单甲氧基聚乙二醇与胰岛素游离氨基通过酰氨键连接在一起，制成单甲氧基聚乙二醇衍生物共价修饰的胰岛素； 
(b)使聚乙二醇包围在单甲氧基聚乙二醇衍生物共价修饰的胰岛素周围并加入含钙化合物溶液制成A溶液； 
(c)将含磷化合物溶液和A溶液混合反应形成载胰岛素的磷酸钙盐B干粉； 
(d)将B干粉加入酪蛋白溶液； 
(e)将混合后的溶液冷冻干燥后加入适量吸收促进剂、蛋白酶抑制剂和崩解剂，填充肠溶胶囊或制成肠溶片剂； 
所述步骤(a)包括： 
(a1)将胰岛素在溶解于60％DMF水溶液中，使pH值为9-10； 
(a2)将分子量为750-5000Da的mPEG-SPA、mPEG-SBA、mPEG-SMB、mPEG-NHS中的一种或多种单甲氧基聚乙二醇衍生物溶解于DMF中，并使胰岛素与单甲氧基聚乙二醇衍生物的摩尔比为1∶1-1.4； 
(a3)将步骤(a1)所得溶液迅速加入步骤(a2)所得溶液中进行反应，并使用1mol/L NaOH维持反应pH值； 
(a4)将反应混合物用NH4HCO3透析后冷冻干燥，得到聚乙二醇-胰岛素连接物； 
所述步骤(b)包括： 
(b1)将聚乙二醇-胰岛素连接物溶解于水，配成浓度为10mg-100mg/ml的胰岛素溶液； 
(b2)以胰岛素和聚乙二醇的质量比为5-15，将1％的分子量为2000-8000Da的聚乙二醇中的一种加入聚乙二醇-胰岛素连接物溶液中； 
(b3)加入0.1-1mol/L的含钙化合物溶液，使它与胰岛素溶液体积比为1∶1-2； 
(b4)加入0.1-1mol/L的Na3C6H5O7，使含钙化合物溶液与Na3C6H5O7溶液的体积比为1∶0.2-1，调pH值为6-11，制成A溶液； 
所述步骤(c)包括： 
(c1)将0.1-1mol/L含磷化合物加入A溶液，使它与含钙化合物溶液体积比为1-3∶1，冷冻干燥制成载胰岛素的磷酸钙盐B干粉； 
所述步骤(d)包括： 
(d1)将稳定剂如酪蛋白溶解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml，制成C溶液； 
(d2)以胰岛素和酪蛋白的质量比为5-15将B干粉加入C溶液中。 
本发明的口服胰岛素复合制剂及其制备方法，制备工艺条件简单，采用无毒且具良好生物相容性的磷酸钙盐作为人重组胰岛素和聚乙二醇共价修饰的人重组胰岛素的载药系统，聚乙二醇、酪蛋白和白蛋白及其类似物作为磷酸钙 盐稳定剂，可防止因磷酸钙盐聚合形成大颗粒而导致的载药能力下降，避免载药不均匀，药品质量不稳定等问题出现。同时聚乙二醇、酪蛋白、鱼精蛋白、白蛋白及其类似物和蛋白酶抑制剂还可作为人重组胰岛素和聚乙二醇共价修饰的人重组胰岛素保护剂，降低蛋白酶对胰岛素的降解，增加生物稳定性。 
本发明的口服胰岛素复合制剂及其制备方法，通过使用单甲氧基聚乙二醇共价修饰胰岛素，明显改善了胰岛素的药代学和药效学性质。聚乙二醇共价修饰后的胰岛素分子量增加，减缓了胰岛素在肝脏中被破坏的速度，具有生物稳定性高，体内半衰期长的优点。同时聚乙二醇能有效地覆盖将重组蛋白的免疫源区和抗原区，降低免疫原性。 
附图说明
下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中： 
图1是使用实施例1所获得的口服胰岛素复合制剂冻干粉给糖尿病大鼠口服用药图； 
图2是使用实施例2所获得的口服胰岛素复合制剂冻干粉给糖尿病大鼠口服用药图。 
具体实施方式
聚乙二醇(poly ethylene glycol，PEG)是一类具有独特理化性质的大分子聚合物，多肽和蛋白质类药物经聚乙二醇共价修饰后能明显改善其药代学和药效学性质，如降低免疫原性、增加对蛋白水解酶的稳定性及延长体内的半衰期等。磷酸钙盐具有无毒、良好的生物相容性和吸附蛋白质的特性，在本发明中可将其作为蛋白质的载药系统。 
在本发明的口服胰岛素复合制剂中，首先使分子量为2000-8000的聚乙二醇(PEG)包围在胰岛素(Insulin)周围起到保护胰岛素作用，再将用于制备磷酸钙盐的原料氯化钙(或其他含钙化合物如硝酸钙等)溶液分散于其中，而稳定剂溶解于含磷化合物溶液中，防止磷酸钙盐聚合形成沉淀。当然，上述的稳定保护剂、载药载体及吸收促进剂也可采用具有相似理化性质的其他组份。
以下是上述口服胰岛素复合制剂的制备实施例： 
实例一 
1、100mg重组人胰岛素冻干粉溶解于5ml0.01mol/L HCl溶液中，加入100ml1％的PEG3350(聚乙二醇，也可以是分子量为2000-8000中的一种或多种，下同)； 
2、依次加入5ml125mmol/L的CaCl2(或其他含钙化合物如硝酸钙等)和1ml的165mmol/L的Na3C6H5O7，pH调节为6-9，制成A溶液； 
3、将1000mg酪蛋白溶解于含磷化合物(如磷酸、磷酸盐溶液)缓冲液中，制成酪蛋白浓度为3mg/ml B溶液； 
4、将B溶液加入A溶液中，搅拌24-48小时，反应温度4-5℃； 
5、真空冷冻干燥制成本发明的口服胰岛素复合制剂。 
实例二 
1、100mg重组人胰岛素冻干粉溶解于5ml0.01mol/L HCl溶液中，加入100ml1％的PEG3350； 
2、依次加入5ml125mmol/L的CaCl2和1ml的165mmol/L的Na3C6H5O7，调节pH为6-9； 
3、将5ml125mmol/L Na2HPO4加入上述溶液中，搅拌24-48小时；真空冷冻干燥制成冻干物； 
4、将1000mg酪蛋白溶解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml； 
5、将冻干物加入酪蛋白磷酸缓冲液中，搅拌混匀，反应温度4-5℃； 
6、真空冷冻干燥制成本发明的口服胰岛素复合制剂。 
将实施例1-2所述的口服胰岛素复合制剂冻干物加入吸收促进剂脱氧胆酸钠600-800mg，崩解剂微晶纤维素200mg装填在肠溶胶囊中制成口服胰岛素肠溶胶囊制剂；或者包裹在肠溶膜中制成口服胰岛素肠溶片，可口服起到降血糖的作用。 
上述实施例1-2所制成的口服胰岛素复合制剂冻干物(制成片剂前)，按56mg/Kg剂量给糖尿病大鼠口服用药见图1和图2，由图1和图2可知，该口 服胰岛素复合制剂可显著降血糖作用。 
此外，还可使用分子量为750-5000的甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG-SPA，PEG succinimidyl propionate)、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丁酸酯(mPEG-SBA，PEG succinimidyl butanoate)、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺α-甲基丁酸酯(mPEG-SMB，succinimidyl methylbutanoate)、甲氧基聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺(mPEG-NHS，PEG-succinimide)中的一种或几种活化的聚乙二醇即单甲氧基聚乙二醇衍生物作为修饰材料对胰岛素进行共价修饰，可以得到经化学修饰的胰岛素。单甲氧基聚乙二醇衍生物与胰岛素的游离氨基通过酰氨键连接在一起，起到保护胰岛素的作用，其中游离氨基为赖氨酸的ε-NH2或N末端的α-NH2。该单甲氧基聚乙二醇-胰岛素连接物具有天然胰岛素降血糖活性，相比天然胰岛素，其具有生物稳定性高，体内半衰期长，免疫原性减少等优点。由于PEG通常不能得到有精确和单一分子量的聚合物，上述的分子量描述是指其平均分子量。 
上述的单甲氧基聚乙二醇-胰岛素连接物具有下列任意一种结构： 
Figure S06160499020060524D000091
当将单一胰岛素分子与单一mPEG结合时，所得的产物可以是位点异构物的混合物(位点异构物的混合物是指可以在胰岛素分子的不同氨基酸位点连接有mPEG的混合物)。在本发明中，所修饰的胰岛素具有3个自由氨基：A链的Gly1和B链的Phe1上的N末端的α-NH2和B链的Lys29上的ε-NH2。因此， mPEG修饰的胰岛素属于混合物，mPEG可以与胰岛素的游离氨基，即Gly1和Phe1上的N末端的α-NH2及Lys29的ε-NH2通过酰氨键连接在一起。本发明通过控制反应条件及试剂比例可以主要得到单个位点单PEG修饰的产物：Insulin-Lys29-1PEG。 
在口服胰岛素复合制剂中，使用单甲氧基聚乙二醇衍生物作为胰岛素的修饰材料：单甲氧基聚乙二醇与胰岛素游离氨基通过酰氨键连接在一起，可明显改善天然胰岛素药代学和药效学性质，更赋予胰岛素免疫原性降低、对蛋白水解酶的稳定性增加及体内的半衰期延长等优点。同时采用无毒且具良好生物相容性的磷酸钙盐作为胰岛素的载药系统，聚乙二醇、酪蛋白和白蛋白及其类似物作为磷酸钙盐稳定剂，可防止因磷酸钙盐聚合形成大颗粒而导致的载药能力下降，从而避免载药不均匀、药品质量不稳定等问题出现。此外还可以使用聚乙二醇、酪蛋白、鱼精蛋白、白蛋白及其类似物和蛋白酶抑制剂作为胰岛素保护剂，降低蛋白酶对胰岛素的降解；还可使用吸收促进剂如水杨酸、胆酸盐和脂肪酸及其类似物使肠粘膜细胞间隙扩大，药物扩散更容易进行，促进药物吸收。通过上述方法制备的制剂可以口服起到降血糖的作用。以下是该口服胰岛素复合制剂的制备的实施例： 
实例三 
1、将20umol的胰岛素在室温下溶解于10ml的60％DMF/40％H2O(pH9.6)； 
2、将28umol的mPEG-SPA溶解于1.5ml的DMF中，并加入胰岛素溶液中进行反应，加入1mol/L的NaOH维持反应pH值，在室温下反应约30分钟后加入25ml H2O结束反应； 
3、反应混合物用0.01％NH4HCO3透析，透析后冷冻干燥得到单甲氧基聚乙二醇衍生物-胰岛素复合制剂； 
4、将单甲氧基聚乙二醇衍生物-胰岛素复合制剂溶解于5ml水，加入100ml1％的PEG3350，混匀后，依次加入5ml的125mmol/L的CaCl2和1ml的165mmol/L的Na3C6H5O7，调pH值为6-9制成A溶液； 
5、将1000mg酪蛋白溶解于磷酸缓冲液中，制成酪蛋白浓度为3mg/ml B溶液；
6、将B溶液加入A溶液中，搅拌24-48小时，反应温度4-5℃；真空冷冻干燥制成本发明的口服胰岛素复合制剂。 
实例四 
1、将20umol的胰岛素在室温下溶解于10ml的60％DMF/40％H2O(pH9.6)； 
2、将28umol的mPEG-SPA溶解于1.5ml的DMF中，迅速加入胰岛素溶液中进行反应，并加入1mol/L NaOH维持反应pH值，在室温下反应约30分钟后，加入25mlH2O结束反应； 
3、反应混合物用0.01％NH4HCO3透析，透析后冷冻干燥得到单甲氧基聚乙二醇衍生物-胰岛素复合制剂； 
4、将得到单甲氧基聚乙二醇衍生物-胰岛素复合制剂溶解于5ml水，加入100ml1％的PEG3350，混匀后，依次加入5ml的125mmol/L的CaCl2和1ml的165mmol/L的Na3C6H5O7，调节pH为6-9； 
5、将5ml125mmol/L Na2HPO4加入上述溶液中，搅拌24-48小时；真空冷冻干燥制成冻干物； 
6、将1000mg酪蛋白溶解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml，然后将冻干物加入酪蛋白磷酸缓冲液中，搅拌混匀，反应温度4-5℃； 
7、真空冷冻干燥制成本发明的口服胰岛素复合制剂。 
将实施例3-4所述的口服胰岛素复合制剂冻干物加入吸收促进剂脱氧胆酸钠600-800mg，崩解剂微晶纤维200mg装填在肠溶胶囊中制成口服胰岛素肠溶胶囊制剂；或者包裹在肠溶膜中制成口服胰岛素肠溶片，可口服起到降血糖的作用。 
上述制备实施例中的保护剂除聚乙二醇、酪蛋白外，还可采用鱼精蛋白、白蛋白及其类似物和蛋白酶抑制剂等；而吸收促进剂则可包括水杨酸、胆酸盐和脂肪酸及其类似物中的一种或几种。 
经由上述方法制备的口服胰岛素复合制剂，其成份及配比如下：胰岛素原料1-15％；稳定保护剂50-97％；载药载体1-15％；吸收促进剂1-20％，其中所述稳定保护剂包括聚乙二醇、酪蛋白、鱼精蛋白、白蛋白及其类似物和蛋白 酶抑制剂，所述载药载体包括磷酸钙盐，所述吸收促进剂包括水杨酸、胆酸盐和脂肪酸及其类似物，所述胰岛素原料包括人重组胰岛素及其类似物和经单甲氧基聚乙二醇衍生物化学修饰的人重组胰岛素及其类似物。 
上述的口服胰岛素复合制剂及其制备方法，采用无毒且具良好生物相容性的磷酸钙盐作为人重组胰岛素及其类似物和聚乙二醇共价修饰的人重组胰岛素及其类似物的载药系统，聚乙二醇、酪蛋白和白蛋白及其类似物作为磷酸钙盐稳定剂，可防止因磷酸钙盐聚合形成大颗粒而导致的载药能力下降，避免载药不均匀，药品质量不稳定等问题出现，且制备工艺条件简单。同时聚乙二醇、酪蛋白、鱼精蛋白、白蛋白及其类似物和蛋白酶抑制剂作为人重组胰岛素和聚乙二醇共价修饰的人重组胰岛素保护剂，降低蛋白酶对胰岛素的降解，增加生物稳定性。 
上述的口服胰岛素复合制剂及其制备方法，通过使用单甲氧基聚乙二醇共价修饰胰岛素，明显改善了胰岛素的药代学和药效学性质。聚乙二醇共价修饰后的胰岛素分子量增加，减缓了胰岛素在肝脏中被破坏的速度，具有生物稳定性高，体内半衰期长的优点。同时聚乙二醇能有效地覆盖将重组蛋白的免疫源区和抗原区，降低免疫原性。

Claims (4)

1.一种口服胰岛素复合制剂的一次冻干制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)使聚乙二醇包围在胰岛素周围并加入含钙化合物溶液制成A溶液；
(b)将稳定剂溶解于含磷化合物中制成B溶液，并将B溶液和A溶液混合反应形成载胰岛素的磷酸钙盐；
(c)将混合后的溶液冷冻干燥后加入适量吸收促进剂、蛋白酶抑制剂和崩解剂，填充肠溶胶囊或制成肠溶片剂；
所述步骤(a)包括：
(a1)将胰岛素冻干粉溶解于0.01mol/L HCl溶液中，配成浓度为5-60mg/ml的胰岛素溶液；
(a2)在上述溶液中加入1％的分子量为2000-8000Da的聚乙二醇中的一种或多种，使胰岛素与聚乙二醇的质量比为5-15；
(a3)加入0.1-1mol/L的含钙化合物溶液，使它与胰岛素溶液体积比为1∶1-2；
(a4)加入0.1-1mol/L的Na3C6H5O7，使含钙化合物溶液与Na3C6H5O7溶液的体积比为1∶0.2-1，调pH值为6-11，制成A溶液；
所述步骤(b)包括：
(b1)将稳定剂如酪蛋白溶解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml，制成B溶液；
(b2)以胰岛素和酪蛋白的质量比为5-15将B溶液加入A溶液中。
2.一种口服胰岛素复合制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)使聚乙二醇包围在胰岛素周围并加入含钙化合物溶液制成A溶液；
(b)将含磷化合物和A溶液混合反应形成载胰岛素的磷酸钙盐B干粉；
(c)将B干粉加入酪蛋白溶液；
(d)将混合后的溶液冷冻干燥后加入适量吸收促进剂、蛋白酶抑制剂和崩解剂，填充肠溶胶囊或制成肠溶片剂；
所述步骤(a)包括：
(a1)将胰岛素冻干粉溶解于0.01mol/L HCl溶液中，配成浓度为5-60mg/ml的胰岛素溶液；
(a2)在上述溶液中加入1％的分子量为2000-8000Da的聚乙二醇中的一种或多种，使胰岛素与聚乙二醇的质量比为5-15；
(a3)加入0.1-1mol/L的含钙化合物溶液，使它与胰岛素溶液体积比为1∶1-2；
(a4)加入0.1-1mol/L的Na3C6H5O7，使含钙化合物溶液与Na3C6H5O7溶液的体积比为1∶0.2-1，调pH值为6-11，制成A溶液；
所述步骤(b)包括：
(b1)将0.1-1mol/L含磷化合物加入A溶液，使它与含钙化合物溶液体积比为1-3∶1，冷冻干燥制成载胰岛素的磷酸钙盐B干粉；
所述步骤(c)包括：
(c1)将稳定剂解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml，制成C溶液；
(c2)以胰岛素和稳定剂的质量比为5-15将B干粉加入C溶液中。
3.一种口服胰岛素复合制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)使用单甲氧基聚乙二醇衍生物作为胰岛素的修饰材料，使单甲氧基聚乙二醇与胰岛素游离氨基通过酰氨键连接在一起，制成单甲氧基聚乙二醇衍生物共价修饰的胰岛素；
(b)使聚乙二醇包围在单甲氧基聚乙二醇衍生物共价修饰的胰岛素周围并加入含钙化合物溶液制成A溶液；
(c)将稳定剂溶解于含磷化合物溶液中制成B溶液，并将B溶液和A溶液混合反应形成载胰岛素的磷酸钙盐；
(d)将混合后的溶液冷冻干燥后加入适量吸收促进剂、蛋白酶抑制剂和崩解剂，填充肠溶胶囊或制成肠溶片剂；
所述步骤(a)包括：
(a1)将胰岛素在溶解于60％DMF水溶液中，使pH值为9-10；
(a2)将分子量为750-5000Da的mPEG-SPA、mPEG-SBA、mPEG-SMB、mPEG-NHS中的一种或多种单甲氧基聚乙二醇衍生物溶解于DMF中，并使胰岛素与单甲氧基聚乙二醇衍生物的摩尔比为1∶1-1.4；
(a3)将步骤(a1)所得溶液迅速加入步骤(a2)所得溶液中进行反应，并使用1mol/L Na0H维持反应pH值；
(a4)将反应混合物用NH4HCO3透析后冷冻干燥，得到聚乙二醇-胰岛素连接物；
所述步骤(b)包括：
(b1)将聚乙二醇-胰岛素连接物溶解于水，配成浓度为10mg-100mg/ml的胰岛素溶液；
(b2)以胰岛素和聚乙二醇的质量比为5-15，将1％的分子量为2000-8000Da的聚乙二醇中的一种加入聚乙二醇-胰岛素连接物溶液中；
(b3)加入0.1-1mol/L的含钙化合物溶液，使它与胰岛素溶液体积比为1∶1-2；
(b4)加入0.1-1mol/L的Na3C6H5O7，使含钙化合物溶液与Na3C6H5O7溶液的体积比为1∶0.2-1，调pH值为6-11，制成A溶液；
所述步骤(c)包括：
(c1)将稳定剂溶解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml，制成B溶液；
(c2)以胰岛素与酪蛋白的质量比为5-15将B溶液加入A溶液中。
4.一种口服胰岛素复合制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)使用单甲氧基聚乙二醇衍生物作为胰岛素的修饰材料，使单甲氧基聚乙二醇与胰岛素游离氨基通过酰氨键连接在一起，制成单甲氧基聚乙二醇衍生物共价修饰的胰岛素；
(b)使聚乙二醇包围在单甲氧基聚乙二醇衍生物共价修饰的胰岛素周围并加入含钙化合物溶液制成A溶液；
(c)将含磷化合物溶液和A溶液混合反应形成载胰岛素的磷酸钙盐B干粉；
(d)将B干粉加入酪蛋白溶液；
(e)将混合后的溶液冷冻干燥后加入适量吸收促进剂、蛋白酶抑制剂和崩解剂，填充肠溶胶囊或制成肠溶片剂；
所述步骤(a)包括：
(a1)将胰岛素在溶解于60％DMF水溶液中，使pH值为9-10；
(a2)将分子量为750-5000Da的mPEG-SPA、mPEG-SBA、mPEG-SMB、mPEG-NHS中的一种或多种单甲氧基聚乙二醇衍生物溶解于DMF中，并使胰岛素与单甲氧基聚乙二醇衍生物的摩尔比为1∶1-1.4；
(a3)将步骤(a1)所得溶液迅速加入步骤(a2)所得溶液中进行反应，并使用1mol/L NaOH维持反应pH值；
(a4)将反应混合物用NH4HCO3透析后冷冻干燥，得到聚乙二醇-胰岛素连接物；
所述步骤(b)包括：
(b1)将聚乙二醇-胰岛素连接物溶解于水，配成浓度为10mg-100mg/ml的胰岛素溶液；
(b2)以胰岛素和聚乙二醇的质量比为5-15，将1％的分子量为2000-8000Da的聚乙二醇中的一种加入聚乙二醇-胰岛素连接物溶液中；
(b3)加入0.1-1mol/L的含钙化合物溶液，使它与胰岛素溶液体积比为1∶1-2；
(b4)加入0.1-1mol/L的Na3C6H5O7，使含钙化合物溶液与Na3C6H5O7溶液的体积比为1∶0.2-1，调pH值为6-11，制成A溶液；
所述步骤(c)包括：
(c1)将0.1-1mol/L含磷化合物加入A溶液，使它与含钙化合物溶液体积比为1-3∶1，冷冻干燥制成载胰岛素的磷酸钙盐B干粉；
所述步骤(d)包括：
(d1)将稳定剂如酪蛋白溶解于磷酸缓冲液中，浓度为3mg/ml，制成C溶液；
(d2)以胰岛素和酪蛋白的质量比为5-15将B干粉加入C溶液中。
CN2006100604990A 2006-04-27 2006-04-27 口服胰岛素复合制剂及其制备方法 Active CN101062408B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2006100604990A CN101062408B (zh) 2006-04-27 2006-04-27 口服胰岛素复合制剂及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2006100604990A CN101062408B (zh) 2006-04-27 2006-04-27 口服胰岛素复合制剂及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101062408A CN101062408A (zh) 2007-10-31
CN101062408B true CN101062408B (zh) 2010-12-08

Family

ID=38963824

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2006100604990A Active CN101062408B (zh) 2006-04-27 2006-04-27 口服胰岛素复合制剂及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101062408B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUP0900482A2 (en) * 2009-08-03 2011-03-28 Cera Med Kft Pharmaceutical formulation for oral administration
CN102283818A (zh) * 2010-06-20 2011-12-21 段明华 多肽和蛋白质类药物口服肠溶胶囊及其制备方法
CN102120781B (zh) * 2011-03-16 2013-07-17 中国药科大学 一种新型胰岛素口服纳米粒的制备及应用
CN102854325B (zh) * 2011-07-01 2015-01-07 复旦大学 胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力指标测定方法及应用
CN106963941A (zh) * 2017-03-14 2017-07-21 沈阳大学 一种具有肠道粘液穿透能力的胰岛素口服剂及其制备方法
CN109498559B (zh) * 2018-11-30 2022-04-12 复旦大学 一种负载糖尿病治疗多肽的口服制剂及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1326784A (zh) * 2000-06-07 2001-12-19 张昊 结肠定位释放的口服生物制剂
WO2002064112A2 (en) * 2001-02-09 2002-08-22 Biosante Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic agents complexed with calcium phosphate and encased by casein
WO2004050015A2 (en) * 2002-12-03 2004-06-17 Natreon, Inc. Withania somnifera composition, method for obtaining same and pharmaceutical, nutritional and personal care formulations thereof
CN1651463A (zh) * 2004-12-02 2005-08-10 华东师范大学 一种单甲氧基聚乙二醇－胰岛素复合物及其制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1326784A (zh) * 2000-06-07 2001-12-19 张昊 结肠定位释放的口服生物制剂
WO2002064112A2 (en) * 2001-02-09 2002-08-22 Biosante Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic agents complexed with calcium phosphate and encased by casein
WO2004050015A2 (en) * 2002-12-03 2004-06-17 Natreon, Inc. Withania somnifera composition, method for obtaining same and pharmaceutical, nutritional and personal care formulations thereof
CN1651463A (zh) * 2004-12-02 2005-08-10 华东师范大学 一种单甲氧基聚乙二醇－胰岛素复合物及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周建平.药剂学 1.化学工业出版社,2006,第五章.
周建平.药剂学 1.化学工业出版社,2006,第五章. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN101062408A (zh) 2007-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101514223B (zh) 位点特异性蛋白质偶联物的制备方法
CN1046635C (zh) 使用氮氧化物去除氧毒性的组合物和方法
JP4113778B2 (ja) 真性糖尿病の治療方法
JP5432183B2 (ja) タンパク質およびペプチドの治療薬の経口投与に関する方法および組成物
US6221397B1 (en) Surface cross-linked particles suitable for controlled delivery
CN101062408B (zh) 口服胰岛素复合制剂及其制备方法
US8974819B2 (en) Sustained-release chitosan capsules comprising chitosan and phytic acid
CN102625695A (zh) 长效胰岛素组合物
CN101027318A (zh) 胰岛素－低聚物共轭物，制剂及其用途
CN1094611A (zh) 改性水解植物蛋白微球及其制备方法的用途
CA2041044C (en) Large intestinal dissociative polypeptide series oral formulation
CN101180073A (zh) 胰岛素组合
CN107432936A (zh) 一种改性壳聚糖的用途和包含该改性壳聚糖的纳米复合物
CN101891800B (zh) 饱和脂肪链醇rgd五肽酯化合物及其合成方法和用途
KR101389226B1 (ko) 포유동물에게 인슐린을 전달하기 위한 지질 구조물
CN114344484B (zh) 一种用于口服蛋白质给药的金属有机框架纳米粒子及其制备方法
CN110862448A (zh) 两性离子多肽修饰的glp-1衍生物及其制备方法和应用
CN100415801C (zh) 聚乙二醇氨基酸n-内环羰酐活性衍生物及其药物键合物和凝胶
CN101176785B (zh) 一种重组双功能水蛭素口服制剂及其制备方法
CN101366946B (zh) 淀粉基结肠靶向特异性粘附材料及其制备方法和应用
CN102234331A (zh) Exendin-4衍生物的复合物及其制备方法和应用
CN101721687B (zh) 胰岛素-羟基磷灰石纳米复合物及其制备方法和应用
CN109954145A (zh) 一种艾塞那肽口服纳米颗粒
CN101891801B (zh) 饱和脂肪链醇rgd五肽双酯化合物及其合成方法和应用
CN116531486A (zh) 一种人血清白蛋白负载奥曲肽纳米颗粒制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20071207

Address after: The three cross road Jinpan industrial construction in Hainan Province, Haikou Jinma Arts crafts emporium 5-A

Applicant after: Hainan Senruipu Life Science Medicine Stock Co., Ltd.

Address before: Room 2-503, a biological incubator building, Nanshan District hi tech, Guangdong, Shenzhen

Applicant before: Shenzhen Longyang Bioscience Co., Ltd.

C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: LONGYANG BIOLOGICAL TECHNOLOGY CO., LTD, SHENZHEN

Free format text: FORMER OWNER: HAINAN SEN RUI PU LIFE SCIENCE PHARMACEUTICAL CO., LTD.

Effective date: 20091023

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20091023

Address after: Guangdong city of Shenzhen province Nanshan District Taoyuan Lu Bei Chang Xing Lu Dong Chang Xing Square East Building 15N post encoding: 518000

Applicant after: Shenzhen Longyang Bioscience Co., Ltd.

Address before: The three cross road Jinpan industrial construction in Hainan Province, Haikou Jinma Arts crafts emporium 5-A post encoding: 570216

Applicant before: Hainan Senruipu Life Science Medicine Stock Co., Ltd.

EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Assignee: Tonghua Golden-Horse Group Co., Ltd.

Assignor: Shenzhen Longyang Bioscience Co., Ltd.

Contract fulfillment period: 2009.9.15 to 2019.9.15 contract change

Contract record no.: 2009990001261

Denomination of invention: Oral insulin compound medicine preparation and its preparing method

License type: Exclusive license

Record date: 20091113

LIC Patent licence contract for exploitation submitted for record

Free format text: EXCLUSIVE LICENSE; TIME LIMIT OF IMPLEMENTING CONTACT: 2009.9.15 TO 2019.9.15; CHANGE OF CONTRACT

Name of requester: TONGHUA JINMA PHARMACEUTICAL INDUSTRY GROUP CO., L

Effective date: 20091113

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: HAINAN SENRUIPU LIFE SCIENCE MEDICINE STOCK CO., L

Free format text: FORMER OWNER: SHENZHEN LONGYANG BIOLOGY TECHNOLOGIES CO., LTD.

Effective date: 20120605

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 518000 SHENZHEN, GUANGDONG PROVINCE TO: 570216 HAIKOU, HAINAN PROVINCE

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20120605

Address after: The construction of gold industrial zone three road 570216 in Hainan Province, Haikou Jinma Arts crafts emporium 5-A

Patentee after: Hainan Senruipu Life Science Medicine Stock Co., Ltd.

Address before: 518000 Guangdong city of Shenzhen province Nanshan District Taoyuan Lu Bei Chang Xing Lu Dong Chang Xing Square East Building 15N

Patentee before: Shenzhen Longyang Bioscience Co., Ltd.

EC01 Cancellation of recordation of patent licensing contract

Assignee: Tonghua Golden-Horse Group Co., Ltd.

Assignor: Shenzhen Longyang Bioscience Co., Ltd.

Contract record no.: 2009990001261

Date of cancellation: 20120522

ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: TONGHUA GOLDEN-HORSE PHARMACEUTICAL INDUSTRY CO.,

Free format text: FORMER OWNER: HAINAN SENRUIPU LIFE SCIENCE MEDICINE STOCK CO., LTD.

Effective date: 20140901

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 570216 HAIKOU, HAINAN PROVINCE TO: 134001 TONGHUA, JILIN PROVINCE

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20140901

Address after: 134001 No. 100-1 Jiangnan Road, Jilin, Tonghua

Patentee after: Tonghua Golden-Horse Group Co., Ltd.

Address before: The construction of gold industrial zone three road 570216 in Hainan Province, Haikou Jinma Arts crafts emporium 5-A

Patentee before: Hainan Senruipu Life Science Medicine Stock Co., Ltd.