CN101045073B

CN101045073B - 六月青提取物的制备及应用

Info

Publication number: CN101045073B
Application number: CN2007101036212A
Authority: CN
Inventors: 黄仁彬; 蒋伟哲; 张士军; 林兴; 莫国艳; 林军; 刘曦; 荣延平; 曾嵘; 黄权芳; 梁霜
Original assignee: 黄仁彬
Priority date: 2007-04-29
Filing date: 2007-04-29
Publication date: 2010-09-29
Anticipated expiration: 2027-04-29
Also published as: CN101045073A

Abstract

本发明是从民间药材六月青粗粉提取分离得到六月青水提物、醇提物、石油醚部位和60％乙醇部位。经研究发现，本品对四氯化碳、对乙酰氨基酚、D-半乳糖胺等致大鼠急性化学性肝损伤有保护作用，能明显降低丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶的活性；增加免疫抑制小鼠的胸腺重量，提高血清溶菌酶、肿瘤坏死因子的含量；增加S180荷瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子和白细胞介素含量，抑制S180荷瘤小鼠的肿瘤生长。本品还对癌细胞株SGC 7901、低分化黏液胃腺癌细胞株MGC 803、人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、人口腔表皮样癌KB细胞亦有较强的抑制作用。为乙型肝炎、急慢性肝损伤、肿瘤的治疗提供一种新的天然药物制剂。

Description

六月青提取物的制备及应用

技术领域

本发明涉及一种中草药的制备及应用，具体地说，涉及六月青水提物、醇提物、石油醚部位及60％乙醇部位的制剂及其医药用途。

背景技术

六月青(LYQ)，系爵床科(Acanthaceae)植物肖鸡笼(顶头马兰)Taraphochlamys affinis(Griff)Bremekhu(Strobilanthes affinis(griff)Y.C.Tang)的干燥地上部分。发明人对该药进行了大量的研究，实验发现，本品对四氯化碳(CCl₄)等所致大鼠急性化学性肝损伤有保护作用，能降低丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的活性，增加免疫抑制小鼠的胸腺重量，提高血清溶菌酶、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量；能增加S180荷瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-2)含量，抑制S180荷瘤小鼠的肿瘤生长。体外试验表明：本品可降低HepG2.2.15细胞培养上清中的HBsAg、HBeAg含量，可抑制HBV-DNA的复制；此外，对癌细胞株SGC 7901、低分化黏液胃腺癌细胞株MGC 803、人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、人口腔表皮样癌KB细胞也有较强的抑制作用。六月青对急慢性肝损伤、乙型肝炎，黄疸的治疗有较大的潜在应用价值。目前，尚未发现有把六月青水提物、醇提物等活性部位制成药用制剂并应用于临床的报告。

发明内容

本发明的目的是把六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位制成片剂、合剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂等药用制剂，应用于急慢性肝损伤、乙型肝炎，肿瘤的治疗。

本发明采取的技术方案：

将六月青进行水提取、醇提取、制取石油醚部位、制取60％乙醇部位，并将六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位加入相应药用辅料制成片剂、合剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂。

1、六月青水提物的提取：六月青干燥粗粉，加10倍量水，煮3次，每次2h，收集水煮液，浓缩成稠膏。

2、六月青醇提物的提取：六月青干燥粗粉，加10倍量95％乙醇，回流提取3次，每次2h，提取液回收乙醇，浓缩成稠膏。

3、六月青石油醚部位的制备方法是：六月青粗粉，加10倍量浓度80％乙醇浸泡30min后，回流提取2h，过滤。药渣再加8倍量80％乙醇，回流提取1h，过滤。合并两次滤液，离心(3000γ/min)15min。回收乙醇后，收集提取液，减压浓缩，用石油醚萃取4次，除去叶绿素，取醚相，醚相经回收得到六月青石油醚部位。

4、六月青60％乙醇部位的制备方法是：六月青粗粉，加10倍量浓度80％乙醇浸泡30min后，回流提取2h，过滤。药渣再加8倍量80％乙醇，回流提取1h，过滤。合并两次滤液，离心(3000γ/min)15min。回收乙醇后，收集提取液，减压浓缩，得到浸膏，将浸膏与柱层析硅胶拌样，所得粉末依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水饱和正丁醇、60％乙醇萃取。60％乙醇部位减压回收乙醇后得到六月青60％乙醇部位。

5、制剂的制备：六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位加入相应药用辅料制成片剂、合剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂。

6、对急性肝损伤的影响：以四氯化碳(CCl₄)、对乙酰氨基酚、D-半乳糖胺等制备Wistar大鼠急性化学性肝损伤模型，经灌胃给药后用全自动生化测定仪测定大鼠的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血清总胆红素(T.BIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、球蛋白(GLo)、γ-谷氨酰基转移酶(G-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以观察六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对急性肝损伤大鼠的影响。

7、六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对免疫抑制小鼠的影响：昆明种小鼠的免疫抑制模型由注射环磷酰胺制备，观察六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对小鼠胸腺重量，脾脏重量和血清中溶菌酶、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量。

8、六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对S180荷瘤小鼠的影响：无菌抽取S180荷瘤小鼠的腹水，制成癌细胞悬液，将其接种于小鼠右前肢腋部皮下，制成局灶性肿瘤模型，观察六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位部位对S180荷瘤鼠免疫功能的影响，以TNF-α、IL-2的含量、抑瘤率、胸腺指数，脾腺指数做为观测指标。

9、六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对肝癌细胞HepG2.2.15细胞的影响：采用WST-8法测定六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对HepG2.2.15细胞毒性，ELISA法测定细胞培养上清中的HBsAg、HBeAg，测定六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位的半数中毒浓度(TC₅₀)、半数抑制浓度(IC₅₀)。采用PCR体外扩增法定量检测各活性部位对HepG2.2.15细胞HBV-DNA的拷贝数和循环数(CT)的影响

10、六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对T淋巴细胞转化功能的影响：S180荷瘤鼠造模、分组，给药10天后将小鼠处死，于超净台中无菌取出脾脏，制成脾细胞悬液。将其接种于96孔板内，每孔加100μL刀豆蛋白A(ConA，10μg/ml)，观察六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对T淋巴细胞转化功能的影响，以刺激指数(SI)为观察指标。

11、六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响：S180荷瘤鼠造模、分组，给药10天后处死小鼠，无菌条件下制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液。观察六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。

12、六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对癌细胞株的影响：体外培养癌细胞株，采用MTT法观测六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对所培养的癌细胞的生长有无抑制作用。

本发明是对天然药物资源进行挖掘整理，将为中草药的深度开发提供新思路，对促进我国中草药产业现代化具有重大意义。为乙型肝炎、急慢性肝损伤、肿瘤的治疗提供一种新的天然药物制剂。

具体实施方式

1、六月青水提物的提取：取1000g六月青干燥粗粉，加10L水，煮3次，每次2h，收集水煮液，浓缩成稠膏。加入相应辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、合剂。

2、六月青醇提物的提取：取1000g六月青干燥粗粉，加10L95％乙醇，回流提取3次，每次2h，提取液回收乙醇，浓缩成稠膏。加入相应辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、合剂。

4、六月青60％乙醇部位的制备方法是：六月青粗粉，加10倍量浓度80％乙醇浸泡30min后，回流提取2h，过滤。药渣再加8倍量80％乙醇，回流提取1h，过滤。合并两次滤液，离心(3000γ/min)15min。回收乙醇后，收集提取液，减压浓缩，得到浸膏，将浸膏与柱层析硅胶拌样，所得粉末依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水饱和正丁醇、60％乙醇依次萃取。60％乙醇部位减压回收乙醇后得到六月青60％乙醇部位。

药效学研究

1、对急性肝损伤作用的研究：

Wistar大鼠经四氯化碳(CCl₄)、对乙酰氨基酚、D-半乳糖胺等诱导，制备大鼠急性化学性肝损伤模型，经灌胃给药后用全自动生化测定仪测定大鼠的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血清总胆红素(T.BIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、球蛋白(GLo)、γ-谷氨酰基转移酶(G-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以观察六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对急性肝损伤大鼠的影响。结果表明，六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位能降低急性肝损伤大鼠血清各种酶含量和蛋白含量，与模型组相比，均有P＜0.05或P＜0.01。结果见表1，2：

表1 六月青活性部位对急性肝损伤作用的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表2 六月青活性部位对急性肝损伤作用的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

2、对免疫抑制小鼠的影响：

小鼠经注射环磷酰胺制备免疫抑制模型，比较模型组和各给药组之间小鼠的胸腺指数，脾脏指数和血清中溶菌酶、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量。结果发现，与模型组小鼠相比，六月青水提物，醇提物，石油醚部位，60％乙醇部位能提高小鼠的胸腺指数、血清溶菌酶含量以及血清的TNF-α的含量，而对脾脏指数无显著性影响。与模型组相比，均有P＜0.05或P＜0.01。结果见表3：

表3 六月青活性部位对免疫抑制小鼠的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

3、对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响

选择腹腔接种7～9天，生长良好的荷S180肉瘤小鼠，断颈处死，无菌抽取腹水，以无菌生理盐水稀释成1×10⁷·mL^-1瘤细胞悬液，接种于健康昆明种小鼠右前肢腋部皮下，制备局灶性肿瘤模型。各组灌胃给药，每日一次，连续10天。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。结果表明：给予六月青水提物，醇提物，石油醚部位，60％乙醇部位组的小鼠血清TNF-α和IL-2的含量增加，与荷瘤对照组比较有显著性差异(P＜0.01)，表明六月青水提物，醇提物，石油醚部位，60％乙醇部位有一定的抗肿瘤作用。六月青水提物，醇提物，石油醚部位，60％乙醇部位组的胸腺指数较空白对照组、阴性对照组有所增高，脾腺指数则无显著差异(P＞0.05)。结果见表4：

表4 六月青活性部位对S180荷瘤小鼠的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01。

4、对肝癌细胞HepG2.2.15细胞的影响

对HepG2.2.15细胞进行细胞分泌动力学实验，以确定加入受度药物时间和周期；采用WST-8法测定六月青水提物，醇提物，石油醚部位，60％乙醇部位对HepG2.2.15细胞毒性，ELISA法测定细胞培养上清中的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)，测定各个活性成分的TC₅₀、IC₅₀；并采用PCR体外扩增法定量检测HepG2.2.15细胞培养上清中HBV-DNA的拷贝数和循环数(CT)。结果发现，六月青水提物，醇提物，石油醚部位，60％乙醇部位活性成分可降低HBV-DNA的拷贝数和循环数。显示各活性成分对HBV-DNA的复制有抑制作用。结果见表5：

表5 六月青活性部位对HepG2.2.15细胞的影响(x±s)

5、对S180荷瘤小鼠T淋巴细胞转化功能的影响

荷瘤鼠造模、分组，给药10天后处死小鼠，于超净台中无菌取出脾脏，用眼科剪反复剪碎，经200目尼龙网过滤至离心管中，1500γ/min，离心5min，弃上清，同样方式洗涤细胞两次，制成1×10⁷/ml单个脾细胞悬液。取上述脾细胞悬液接种于96孔板，每只鼠设：对照孔，4复孔，每孔加100μl1640培养液；ConA刺激孔，4复孔，每孔加100μl ConA(10μg/ml)溶液。之后每孔加100μl脾细胞悬液，于37℃、5％CO₂孵箱中孵育40小时。采用MTT法在酶标仪上选择570nm处波长，测OD值，计算刺激指数(SI)。结果发现：六月青水提物，醇提物，石油醚部位、60％乙醇部位与对照组比较，均能提高荷瘤鼠T淋巴细胞转化功能，有显著差异(P＜0.01)。结果见表6：

表6 六月青活性部位S180荷瘤小鼠T淋巴细胞转化功能的影响(x±s，n＝10)

注：与对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

6、对S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红试验

荷瘤鼠造模、分组，给药10天后处死小鼠，无菌条件下制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液，调整细胞密度为2×10⁶/ml，接种于96孔板中，每孔100ul，设四个复孔，以含10％血清的1640培养基为对照组，置培养箱培养2h，去上清液，用PBS冲洗2次，每孔加入0.075％中性红生理盐水液0.1ml。培养2h后，甩弃中性红，并用预温的PBS清洗未吸收的中性红，吸水纸吸干，每孔加入细胞裂解液(乙酸∶无水乙醇＝1∶1)0.15ml，静置4℃过夜，用酶标仪于波长490nm处测定OD值，表示巨噬细胞吞噬功能的强弱。结果发现：六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位能提高荷瘤鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。结果见表7：

表7 六月青活性部位对S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(x±s，n＝10)

注：与对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

7、体外细胞抑制试验

体外培养胃癌细胞株SGC 7901、低分化黏液胃腺癌细胞株MGC 803、人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、人口腔表皮样癌KB细胞，用MTT法检测各极性部位对各个细胞株的增殖抑制率。结果发现：六月青水提物、醇提物、石油醚部位、60％乙醇部位对上述细胞株均有抑制作用。

实施例：

1、六月青水提物的提取及其制剂的制备：

1.1六月青水提物的制备：取六月青干燥粗粉10kg，加100L水，煮3次，每次2h，过滤，收集水煮液，浓缩成比重为1.3的稠膏。

1.2制水提物片剂：取六月青干燥粗粉10kg，同第1.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加入2倍量食用淀粉，并加入80％酒精混均，过筛制粒，60℃下干燥，整粒，加入3％的滑石粉、4％的羧甲基淀粉钠，压片(素片要求为0.3g/片)，包糖衣片(或薄膜衣片)，外观检查符合规定后即可。

1.3制水提物胶囊剂：取六月青干燥粗粉10kg，同第1.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加入2倍量食用淀粉，并加入浓度80％酒精混均，过筛制粒，60℃下干燥，整粒，分装入胶囊(0.5g/颗)。

1.4制水提物颗粒剂：取六月青干燥粗粉10kg，同第1.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加1倍量糊精和1倍糖粉搅拌混合均匀，制成干湿合适的松软团块，压过10目筛子，颗粒于50～60℃干燥，干燥过的颗粒再过12～14目筛，取过筛颗粒装袋密封，规格为10g/袋。

1.5制水提物合剂：取六月青干燥粗粉10kg，同第1.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加入5倍量蒸馏水溶解，高压灭菌，加0.1％苯甲酸，分装入瓶中(10ml/瓶)。

1.6制水提物注射剂：取六月青干燥粗粉10kg，同第1.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加入10倍量蒸馏水搅拌溶解，过滤，滤液加入0.3％活性炭，煮沸10min，脱色，过滤，冷却后加入0.2％吐温80，搅匀后过滤，在滤液中加入1％～2％苯甲醇，混匀，再用10％氢氧化钠调pH6.5左右，4～8℃保存过夜，经粗滤后，用94号玻璃除菌漏斗过滤，或通过除菌滤板，如未达到澄明度应再过滤一次，除菌后的药液即装入安瓿中，封口。安瓿再次经蒸汽灭菌。

2、六月青醇提物的提取及其制剂的制备：

2.1六月青醇提物的制备：取六月青干燥粗粉1kg，加10L浓度95％乙醇，回流提取3次，每次2h，过滤，提取液回收乙醇，浓缩成比重为1.3的稠膏。

2.2制醇提物片剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第2.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加入2倍量食用淀粉，并加入浓度80％酒精混均，过筛制粒，60℃下干燥，整粒，加入3％的滑石粉、4％的羧甲基淀粉钠，压片(素片要求为0.2g/片)，包糖衣片(或薄膜衣片)，外观检查符合规定后即可。

2.3制醇提物胶囊剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第2.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加入2倍量食用淀粉，并加入浓度80％酒精混均，过筛制粒，60℃下干燥，整粒，分装入胶囊(0.2g/颗)。

2.4制醇提物颗粒剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第2.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加1倍量糊精和1倍糖粉搅拌混合均匀，制成干湿合适的松软团块，压过10目筛子，颗粒于50～60℃干燥，干燥过的颗粒再过12～14目筛，取过筛颗粒装袋密封，规格为1g/袋。

2.5制醇提物合剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第2.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加入5倍量蒸馏水溶解，高压灭菌，加0.1％苯甲酸，分装入瓶中(10ml/瓶)。

2.6制醇提物注射剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第2.1项方法制备稠膏，称重并记录稠膏重量，加入10倍量蒸馏水搅拌溶解，过滤，滤液加入0.3％活性炭，煮沸10min，脱色，过滤，冷却后加入0.2％吐温80，搅匀后过滤，在滤液中加入1％～2％苯甲醇，混匀，再用10％氢氧化钠调pH6.5左右，4～8℃保存过夜，经粗滤后，用94号玻璃除菌漏斗过滤，或通过除菌滤板，如未达到澄明度应再过滤一次，除菌后的药液即装入安瓿中，封口。安瓿再次经蒸汽灭菌。

3、六月青石油醚部位的提取及其制剂的制备：

3.1六月青石油醚部位的制备：称取六月青粗粉1kg，加80％乙醇10L浸泡30min后，回流提取2h，过滤。药渣再加80％乙醇8L，回流提取1h，过滤。合并两次滤液，离心(3000γ/min)15min。回收乙醇后，收集提取液，减压浓缩，用石油醚萃取4次，除去叶绿素，取醚相，醚相经回收得到六月青石油醚活性部位。

3.2制石油醚部位片剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第3.1项方法制备石油醚部位，称重并记录石油醚部位重量，加入2倍量食用淀粉，并加入浓度80％酒精混均，过筛制粒，60℃下干燥，整粒，加入3％的滑石粉、4％的羧甲基淀粉钠，压片(素片要求为0.1g/片)，包糖衣片(或薄膜衣片)，外观检查符合规定后即可。

3.3制石油醚部位胶囊剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第3.1项方法制备石油醚部位，称重并记录石油醚部位重量，加入2倍量食用淀粉，并加入浓度80％酒精混均，过筛制粒，60℃下干燥，整粒，分装入胶囊(0.2g/颗)。

3.4制石油醚部位颗粒剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第3.1项方法制备石油醚部位，称重并记录石油醚部位重量，加1倍量糊精和1倍糖粉搅拌混合均匀，制成干湿合适的松软团块，压过10目筛子，颗粒于50～60℃干燥，干燥过的颗粒再过12～14目筛，取过筛颗粒装袋密封，规格为0.5g/袋。

3.5制石油醚部位合剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第3.1项方法制备石油醚部位，称重并记录石油醚部位重量，加入5倍量蒸馏水搅拌混匀，高压灭菌，加0.1％苯甲酸，分装入瓶中(10ml/瓶)。

3.6制石油醚部位注射剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第3.1项方法制备石油醚部位，称重并记录石油醚部位重量，加入10倍量蒸馏水并用10％氢氧化钠调pH7.2搅拌溶解，过滤，滤液加入0.3％活性炭，煮沸10min，脱色，过滤，冷却后加入0.2％吐温80，搅匀后过滤，在滤液中加入1％～2％苯甲醇，混匀，再用10％氢氧化钠调pH7.2左右，4～8℃保存过夜，经粗滤后，用94号玻璃除菌漏斗过滤，或通过除菌滤板，如未达到澄明度应再过滤一次，除菌后的药液即装入安瓿中，封口。安瓿再次经蒸汽灭菌。

4、六月青60％乙醇部位的提取及其制剂的制备：

4.1六月青60％乙醇部位的制备：称取六月青粗粉1kg，加80％乙醇10L浸泡30min后，回流提取2h，过滤。药渣再加80％乙醇8L，回流提取1h，过滤。合并两次滤液，离心(3000γ/min)15min。回收乙醇后，收集提取液，减压浓缩，得到浸膏，将浸膏与柱层析硅胶拌样，所得粉末依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水饱和正丁醇、60％乙醇萃取。60％乙醇部位减压回收乙醇后得到六月青60％乙醇部位

4.2制60％乙醇部位片剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第4.1项方法制备60％乙醇部位，称重并记录60％乙醇部位重量，加入2倍量食用淀粉，并加入浓度80％酒精混均，过筛制粒，60℃下干燥，整粒，加入3％的滑石粉、4％的羧甲基淀粉钠，压片(素片要求为0.1g/片)，包糖衣片(或薄膜衣片)，外观检查符合规定后即可。

4.3制60％乙醇部位胶囊剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第4.1项方法制备60％乙醇部位，称重并记录60％乙醇部位重量，加入2倍量食用淀粉，并加入浓度80％酒精混均，过筛制粒，60℃下干燥，整粒，分装入胶囊(0.2g/颗)。

4.4制60％乙醇部位颗粒剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第4.1项方法制备60％乙醇部位，称重并记录60％乙醇部位重量，加1倍量糊精和1倍糖粉搅拌混合均匀，制成干湿合适的松软团块，压过10目筛子，颗粒于50～60℃干燥，干燥过的颗粒再过12～14目筛，取过筛颗粒装袋密封，规格为0.5g/袋。

4.5制60％乙醇部位合剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第4.1项方法制备60％乙醇部位，称重并记录60％乙醇部位重量，加入5倍量蒸馏水搅拌混匀，高压灭菌，加0.1％苯甲酸，分装入瓶中(10ml/瓶)。

4.6制60％乙醇部位注射剂：取六月青干燥粗粉1kg，同第4.1项方法制备60％乙醇部位，称重并记录60％乙醇部位重量，加入10倍量蒸馏水并用10％氢氧化钠调pH7.2搅拌溶解，过滤，滤液加入0.3％活性炭，煮沸10min，脱色，过滤，冷却后加入0.2％吐温80，搅匀后过滤，在滤液中加入1％～2％苯甲醇，混匀，再用10％氢氧化钠调pH7.2左右，4～8℃保存过夜，经粗滤后，用94号玻璃除菌漏斗过滤，或通过除菌滤板，如未达到澄明度应再过滤一次，除菌后的药液即装入安瓿中，封口。安瓿再次经蒸汽灭菌。

Claims

1.六月青提取物在制备提高机体免疫力的药物中的应用，所述的六月青提取物为水提物、醇提物或石油醚活性部位。