CN101041852A - 一种建立小麦品种的ssr指纹代码的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种建立小麦品种SSR指纹代码的方法，包括以下步骤：(1)使用小麦的各个SSR核心引物对现有小麦品种的DNA进行PCR扩增，获得每个SSR位点的各个等位位点的带型；(2)为每种带型编号；(3)确定各个带型编号所对应的带型代码；(4)使用相同的SSR核心引物，在相同的试验条件下对代表品种与待测品种进行PCR扩增；(5)对比步骤(4)中所获得的带型；(6)汇聚待测品种的各个带型编号，从而形成所述待测品种的SSR指纹代码。本发明的方法简化了记录小麦SSR带型的方法，减少了这一环节的记录误差和工作时间。而且本发明可以有效地应用于小麦新品种的鉴定。
Description
技术领域
本发明涉及植物分子遗传学领域，具体地，本发明涉及一种建立小麦品种的SSR指纹代码的方法。
背景技术
SSR为简单重复序列(Simple sequence repeats)的缩写，是一类以2-6个核苷酸串联重复的DNA序列，处于染色体的非编码区。SSR广泛分布于真核生物基因组中，小麦品种间同一位点的SSR重复次数的差异，造成品种间等位位点的差异。利用由SSR位点两翼的非重复核苷酸序列设计的引物，对小麦DNA进行PCR扩增，在特定条件下可扩增出相应位点的DNA片段，经过电泳分离和硝酸银染色，DNA带纹显现于凝胶上。凝胶上所显现的DNA核苷酸序列长度多态性片段即为SSR标记。本发明所使用的SSR引物均为德国慕尼黑技术大学植物栽培育种研究室Marion S.Roder博士等设计，发表在Genome的1998年149期2007-2023页。鉴于SSR标记方法具有经济、快捷、分辨率高的优点，目前被认为是建立小麦DNA指纹的最佳分析方法。小麦的SSR指纹是由某些SSR位点所产生的带型而形成的。目前记录带型的方法是，在凝胶某区段用1表示有SSR带纹，用0表示没有SSR带纹。但是小麦的SSR带型具有“带型种类多，每种带型的带纹数目多，带纹分布不均匀”的特点，用1和0记录每条带纹就非常困难。
小麦的每个SSR等位位点的带型是由2～5条带组成，用1和0记录带型时，只记录每组带的最上面一条，以下的带作为影子带对待。图1表示14个小麦品种的WMS334位点(SSR位点，参见Marion S.Roder等，1998年Genome的149期2007-2023页)的SSR带型。如图1所示，品种1的带型包括4条带。因为每两条带为一个等位位点的带型，所以只记录每两条带上面的一条。4条带中上面两条来自一个位点，从而上面的一条记作1，下面的一条视为影子带而记作0。第3、4条带是另一位点的带型，第3条带而记作1，第4条视为影子带记作0。如果由下至上记录带纹的有无，还需要知道其他小麦品种WMS334带型在这4条带的上下有多少带，才能为这个带型标出正确的代码。本发明的发明人使用300个小麦品种进行试验，在位点WMS334处共扩增出18种带型。在同一块胶上将具有不同带型的样品一起电泳，多态区中由下至上共有16组带，所以18种带型的代码均为16位数。图1仅列出14个品种中的12种带型，其中，品种1(农林10号)缺少第1、2、3、4、6、8、9、10、11、12、13、14、15、16组带，其WMS334的带型代码应记为0000101000000000。品种2(豫麦18)缺少第1、2、4、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16组带，其代码应记为0010100000000000。品种3(复壮30)缺少第1、2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、15、16组带，应记为0010000000000100。依次品种4、5、7和8、9、10(京花1号、泽优1号、丰抗8号、淮麦19、中优16、Chenny)应记为0010000000000010、0010000000000001、0001000010000000、0001000001000000和0001000000100000。品种11和12、13、14(扬00-126、扬麦13、扬麦9号、兴农2号)分别记为0000101000000000、0000100100000000和0000100001000000。品种6为一杂交种，需要根据父母本的带型标注，此处暂不详述。由此可见，建立某位点带型代码，必须收集到带纹长度连续排列的一套带型，否则将无法确定每个带型代码的数字位数。
一个位点的带型多，有利于展现品种间的多样性，但是却提高了记录带型的难度。首先是难以准确标注带纹，如图1所示，第14个品种(兴农2号)的带型发生了倾斜，该带型第一组带与相邻的品种13(扬麦9号)的带型相同，可以认为他们的迁移率相同。但处于175-200bp的第二组带与第9、10个品种(中优16、Chenny)的两种带型的第二组带迁移率相近，与哪组带相同决定这一个品种指纹的正确与否。如果品种14与品种9、10处于相邻泳道，并不难判断，若是相隔十条泳道以上就很难作判断。配制聚丙烯酰胺凝胶和电泳过程中的很多因素都会造成带纹的倾斜，此时需要人为进行矫正，但是一块凝胶可以同时电泳五、六十个PCR样品，在五、六十条泳道之间矫正带纹，很容易造成错误判断，必须对照带型标准反复核对校正，才可为每个样品的带型确定代码。一块凝胶除对照样品以外，还可同时电泳约40个待测样品，判读40个待测样品的带型需要2～3个小时，而且代码的数字多，记录时也容易产生笔误。
用1和0标记带型所得到的带型代码，随着新带型的增加还有可能需要增加代码的数字位数。如果WMS334位点新带型的第二组带纹比品种5(泽优1号)的第二组带高一条带，其代码应为00100000000000001，共17位数。因为其他带型没有此带，他们的代码的最后还需加一个0。由于带型代码的变更，由带型代码组成的指纹代码也必须随之而变。
发明内容
因此，本发明的发明人为了克服现有技术中存在的问题而提出并完成本发明。
本发明的目的是提供一种建立小麦品种的SSR指纹代码的新方法。
本发明的再一目的为提供上述方法在鉴定小麦品种中的应用。
本发明的再一目的为提供上述方法在小麦分类中的应用。
本发明的方法基于发现一种简单快速记录SSR带型的方法，从而简化了SSR指纹代码，进一步确保快速准确地建立小麦品种的SSR指纹代码。
小麦的很多SSR位点具有10个左右的等位位点，可产生10种左右的带型，如上所述，用1和0为每组带纹赋值，难以为每个品种确立准确无误的指纹。因此，本发明提出了按小麦SSR带型赋值的新方法，即为每种带型赋予不同的编号以示区别。
具体地，一种建立小麦品种SSR指纹代码的方法，包括以下步骤：
(1)分别使用小麦的各个SSR核心引物，对所有的现有小麦品种的DNA进行PCR扩增，分别获得各现有小麦品种的对应于每个SSR位点的各个等位位点的带型，其中，每个核心引物对应于小麦染色体上的一个SSR位点；
(2)对于使用每一SSR核心引物获得的现有小麦品种的各SSR等位位点的带型进行分类，相同带型被分为同一类，在具有相同等位位点带型的品种中选择推广广泛的品种作为代表品种，为每种代表品种的带型编号；
(3)以代表品种作为对照，使用相同的SSR核心引物，在相同的试验条件下对代表品种与待测品种的DNA进行PCR扩增，所得PCR产物在同一张凝胶上进行电泳，从而获得两者的带型；
(4)对比步骤(3)中所获得的待测品种与代表品种的带型，依据代表品种的已知带型为待测品种的带型编号；
(5)按照与步骤(3)中所使用的SSR核心引物对应的SSR位点在小麦染色体上的固定顺序，汇聚待测品种的各个带型编号，从而形成所述待测品种的SSR指纹代码。
根据本发明的方法进一步包括依据各个带型中的带纹分布，确定各个带型编号所对应的以数个0或1表示的带型代码的步骤。
根据本发明，用150对已公开的小麦SSR引物对300个小麦品种进行SSR分析，从中选出40对带纹清晰、带型简明的引物作为小麦SSR指纹分析的常用引物。在常用引物中进一步筛选出16对多态性信息指数高的作为核心引物。16对核心引物为WMS294(2AL)、WMS339(2A)、WMS614(2AS)、WMS120(2BL)、WMS261(2DS)、WMS155(3AL)、WMS131(3BL)、WMS161(3DS)、WMS160(4AL)、WMS186(5AL)、WMS304(5AS)、WMS272(5DL)、WMS334(6AS)、WMS617(6AL)、WMS350(7AS/7DS)、WMS44(7DM)。16对引物的序列见表1。
表1 核心引物名称和序列
WMS44： P1：5’GTTGAGCTTTTCAGTTCGGC 3’，
P2：5’ACTGGCATCCACTGAGCTG 3’；
WMS120：P1：5’GATCCACCTTCCTCTCTCTC 3’，
P2：5’GATTATACTGGTGCCGAAAC 3’；
WMS131：P1：5’AATCCCCACCGATTCTTCTC 3’，
P2：5’AGTTCGTGGGTCTCTGATGG 3’；
WMS155：P1：5’AATCATTGGAAATCCATATGCC 3’，
P2：5’CCAACCGTGCTATTAGTCATTC 3’；
WMS160：P1：5’TTCAATTCAGTCTTGGCTTGG 3’，
P2：5’CTGCAGGAAAAAAAGTACACCC 3’；
WMS161：P1：5’GATCGAGTGATGGCAGATGG 3’，
P2：5’TGTGAATTACTTGGACGTGG 3’；
WMS186：P1：5’GCAGAGCCTGGTTCAAAAAG 3’，
P2：5’CGCCTCTAGCGAGAGCTATG5’3’；
WMS261：P1：5’CTCCCTGTACGCCTAAGGC 3’，
P2：5’CTCGCGCTACTAGCCATTG 3’；
WMS272：P1：5’TGCTCTTTGGCGAATATATGG 3，’
P2：5’GTTCAAAACAAATTAAAAGGCCC 3’；
WMS294：P1：5’GGATTGGAGTTAAGAGAGAACCG 3’，
P2：5’GCAGAGTGATCAATGCCAGA 3’；
WMS304：P1：5’AGGAAACAGAAATATCGCGG 3’，
P2：5’AGGACTGTGGGGAATGAATG 3’；
WMS334：P1：5’AATTTCAAAAAGGAGAGAGA 3’，
P2：5’AACATGTGTTTTTAGCTATC 3’；
WMS339：P1：5’AATTTTCTTCCTCACTTATT 3’，
P2：5’AAACGAACAACCACTCAATC 3’；
WMS350：P1：5’ACCTCATCCACATGTTCTACG 3’，
P2：5’GCATGGATAGGACGCCC 3’；
WMS614 5’GATCACATGCATGCGTCATG 3’
5’TTTTACCGTTCCGGCCTT 3’
WMS617：P1：5’GATCTTGGCGCTGAGAGAGA 3’，
P2：5’CTCCGATGGATTACTCGCAC 3’。
在本发明中，分别使用上述各SSR核心引物，对300个小麦品种的DNA进行PCR扩增。所用的各品种的名称、亲本、育种单位名称均刊登于农业部全国农业技术推广服务中心印发的2003-2005年度国家冬小麦品种试验汇总和《全国农作物审定品种目录》。本领域普通的技术人员，可以根据试验的需要、和本领域的公知常识确定选用的小麦品种数目。
根据本发明的方法，当比较对照品种和待测品种时，所使用的核心引物的数目可以根据两者的遗传背景的远近而决定，被比较的品种的亲缘关系越近，鉴定时所使用的核心引物的数目就应相应地增加。具体地，当比较对照品种和待测品种时，可以先用10对SSR对待测品种进行分析，获得品种的指纹代码，如果这个指纹代码与其他品种相同，则再做6对引物。通过核心引物的分析可以区别绝大多数品种，但如果对照品种和待测品种具有相同亲本，育种的选择目标又相同，品种间的表型无明显差异，16个位点也都相同，此时应继续增加引物数量，直到40对常用引物都用过，仍检测不到品种间的差异，就可否定品种间的特异性。如果需要进行聚类分析，则可将每个带型编号转换成以1和0表示的带型代码，按软件要求输入计算机进行聚类分析。
根据本发明，简化了记录小麦SSR带型的方法，减少了这一环节的记录误差和工作时间，并将小麦的SSR指纹代码由一个距阵缩小为一组数据，使之更加易于转换成条形码。而且本发明可以有效地应用于小麦新品种的鉴定、品种真伪鉴别和品种分类。
附图说明
图1为14个品种WMS334位点的带型电泳图，其中，M：DNA标准，1～14：14个品种的编号，每两条泳道为同一品种的带型。
图2为WMS334的17种带型电泳图，其中06～62：17种WMS334带型的编号，每两条泳道为同一种带型。
图3为待测品种的WMS334带型与对照的WMS334带型比对电泳图，其中，第1、10、20、22、24、26、28、39、41泳道为带型06、20、25、29、30、31、34、35、36的对照样品，其余泳道为待测品种。
图4为WMS44位点各种带型的电泳图。
具体实施方式
本发明中所涉及的小麦品种均刊登于农业部全国农业技术推广服务中心印发的2003-2005年度国家冬小麦品种试验汇总和《全国农作物审定品种目录》。
实施例1 为小麦的WMS334位点的各种SSR带型编号
位点WMS334在300个品种中产生18种带型，其中16种由两组带纹构成(见图2，图2中只列出17种带型，)。按照第一组带纹迁移率，对所得的带型进行分类，把第一组带纹的迁移率相同的带型分在一组，从而，所得的18种带型被分为6组。目前第一组中只有一种带型，编号为06。因为06的两组带之间相隔6条带，据此估计与06的第一组带相同而比第二组带低的带型应该有5种，所以目前第一组中唯一的带型编号为06。第二组带型目前已有6种，他们的第一组带的迁移率相同，按第二组带迁移率的大小顺序排列6种带型，形成阶梯状，但因有些带型尚未收集到，编号时必须预先留出预计带型的编号，所以第二组的6种带型分别编号为20、25、28、29、30、31。第3组已收集到4种带型，因考虑到他们与带型31之间可能会有两种带型，而从34开始编号，分别为34、35、36、37，第4组已收集到5种带型，分别编号42、43、44、45、46。第5、6组分别只收集到1种带型，他们只有一组带纹，分别编号为52、62。由此每种带型便具有了属于自己的编号。因为考虑到随着检测的品种不断增加，还会发现的新带型，为此没有连续编号。当其他品种的WMS334处的SSR分析产生的带型与某带型标准相同时，为该品种赋予相应的带型编号。若产生出新的带型将插入相似的带型之间，不需因增加了新的带型而为所有带型重新编号。小麦SSR引物最多可产生20多种带型，为此带型编号只需两位数。
这样，在确定待测品种某SSR位点的带型时，由于对照品种的带型编号已提前被确定，从而，将待测品种的SSR样品与产生的相似带型的样品在同一块胶上电泳，进行比对，便可确定待测品种的带型编号。如图3所示，第1、10、20、22、24、26、28、39、41泳道为带型06、20、25、29、30、31、34、35、36的对照样品，其余泳道为待测品种。这样判读一块凝胶的带型，只要10～30分钟。可见按带型记录带型编号比用1和0记录带型代码，更加快捷并避免了错判，另外由于带型编号仅两位数，不容易产生记录笔误。两种记录方法相比，为带型赋予两位数的编号，给人的感觉更直观、更简单。表2中列出了5个小麦品种的8种带型的编号，两品种之间SSR位点的异同在表中一目了然。
表2 5个小麦品种的8个位点的SSR带型编号
| 品种名称 | WMS334 | WMS261 | WMS155 | WMS437 | WMS325 | WMS566 | WMS186 | WMS350 |
| 中优9507丰抗8号京冬8号京冬10号荔垦2号 | 0635353536 | 2007111120 | 1007111108 | 1006062202 | 1012080412 | 1012140814 | 1208141612 | 0606060612 |
尽管以1和0的记录方法有缺陷，但可以客观地记录双位点和三位点的遗传信息，进行品种聚类分析和计算遗传相似系数的软件读入的信息必须是1和0组成的指纹代码，所以在为每种带型编号的同时还须建立相应的带型代码，表3为WMS334各带型的编号和代码。每种带型具备了编号和代码，在人工记录电泳结果时，使用带型编号可以快速记录每个样品的带型，当进行聚类分析和计算遗传相似系数时，通过计算机轻而易举地将每个带型编号转换成带型代码，输入软件进行计算。每种带型既有根据带型特征赋予的编号，又有表示带纹位置的代码，一个编号对应一个代码，可以根据需要相互转换。编号为人工操作提供了方便，代码主要用于软件分析。
表3 WMS334各带型的编号和代码
| 带型编号 | 带型代码 | 带型编号 | 带型代码 |
| 062025282930313435 | 100000100000000000101000000000000010000001000000001000000000100000100000000001000010000000000010001000000000000100010001000000000001000010000000 | 363742434445465262 | 000100000100000000010000001000000000101000000000000010010000000000001000100000000000100001000000000010000010000000000010000000000000000100000000 |
一个小麦品种的DNA经过对不同SSR位点的分析，将获得一系列带型编号，按照固定的位点顺序，串联各带型编号，形成一组数据，成为该品种的指纹代码。将指纹代码转换成条形码，便形成了该品种的指纹。表4中5个品种的指纹代码是按表1中位点排列顺序，集合各带型编号而形成的。
表4 5品种的指纹代码
| 品种名称 | 指纹代码 |
| 中优9507丰抗8号京冬8号京冬10号荔垦2号 | 06201010101012063507070612120806351111060814140635111122040816063620080212141212 |
实施例2 鉴定小麦品种隆安麦4号是否具有新颖性
小麦品种济麦20为山东省农业科学院培育的新品种，于2003年通过山东省审定、2004年通过国家审定，但是2005年安徽省濉溪县农科所申请安徽省审定的小麦品种隆安麦4号与济麦20的表型极为相似。根据本发明的方法，通过比较隆安麦4号和济麦20的SSR指纹代码，认为隆安麦4号与济麦20的遗传背景极为相似，否定了隆安麦4号的新颖性。具体步骤如下：
(1)筛选小麦SSR引物
用150对小麦SSR引物对(均为德国慕尼黑技术大学植物栽培育种研究室Marion S.Roder博士等设计，发表在Genome的1998年149期2007-2023页)与300个小麦品种(各品种名称、亲本、育种单位名称均刊登于农业部全国农业技术推广服务中心印发的2003-2005年度国家冬小麦品种试验汇总和《全国农作物审定品种目录》)进行SSR分析，从中选出40对带纹清晰、带型简明的引物作为小麦SSR指纹分析的常用引物。在常用引物中进一步筛选出15对多态性信息指数高的作为核心引物。用这15对引物可以为我国的绝大多数小麦品种分别建立各自的指纹代码，有效地区分品种间的特异性。15对核心引物为WMS294、WMS339、WMS120、WMS261、WMS155、WMS131、WMS161、WMS160、WMS186、WMS304、WMS272、WMS334、WMS617、WMS350、WMS44。各引物的序列见表1。
(2)建立小麦SSR位点各等位变异的带型图谱
汇集每对引物产生的各种带型，有规律地进行排列，形成每个SSR位点各等位变异的带型图谱。见图2和图4。
(3)确定每种带型的代表品种，为每种带型编号
从具有相同带型的品种中选知名度较高、纯度高的品种作为该带型的代表品种。每种带型的编号方法参见实施例1中WMS334的例子。
(4)为待测品种的带型编号
以代表品种的SSR样品为对照，与待测品种的样品在同一张凝胶上电泳，将待测品种的SSR带型与对照比对，为待测品种的带型赋予编号。
(5)待测品种指纹代码的形成
按固定的位点顺序汇聚待测品种的各个带型编号，形成该品种的指纹代码。
(6)比较两品种
在以往的工作中，用这15对核心引物进行品种间特异性鉴定，很容易在品种间检测到两个位点以上的差异。但是用15对核心引物对隆安麦4号与济麦20进行SSR分析后，只检测到在一个位点上一个碱基的差异。如此微弱的差异无法证明隆安麦4号与济麦20不同，为此增加检测位点到40个，又检测到另一个位点一个碱基的差别。证明两品种的遗传差异微弱，指纹代码很相似，可以否认隆安麦4号的新颖性。
实施例3 鉴定冀曲麦12号的新颖性是否具有新颖性
按照实例2的方法检测冀曲麦12号与邯郸农科院培育的国家审定品种邯5316，否定了冀曲麦12号的新颖性。
实施例4 鉴定小麦品种洛川9510与洛川9538之间是否存在特异性
按照实例2的方法，对洛川9510与洛川9538进行了特异性检测，认为洛川9510与洛川9538之间不存在特异性。
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<110>Applicant：北京杂交小麦工程技术研究中心
<120>Title：一种建立小麦品种的SSR指纹代码的方法
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ctcgcgctac tagccattg 19
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tgctctttgg cgaatatatg g 21
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gttcaaaaca aattaaaagg ccc 23
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ggattggagt taagagagaa ccg 23
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gcagagtgat caatgccaga 20
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aggaaacaga aatatcgcgg 20
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aattttcttc ctcacttatt 20
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aaacgaacaa ccactcaatc 20
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ctccgatgga ttactcgcac 20
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Claims (9)
1、一种建立小麦品种SSR指纹代码的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)分别使用小麦的各个SSR核心引物，对所有的现有小麦品种的DNA进行PCR扩增，分别获得各现有小麦品种的对应于每个SSR位点的各个等位位点的带型，其中，每个核心引物对应于小麦染色体上的一个SSR位点；
(2)对于使用每一SSR核心引物获得的现有小麦品种的各SSR等位位点的带型进行分类，相同带型被分为同一类，在具有相同等位位点带型的品种中选择推广广泛的品种作为代表品种，为每种代表品种的带型编号；
(3)以代表品种作为对照，使用相同的SSR核心引物，在相同的试验条件下对代表品种与待测品种的DNA进行PCR扩增，所得PCR产物在同一张凝胶上进行电泳，从而获得两者的带型；
(4)对比步骤(3)中所获得的待测品种与代表品种的带型，依据代表品种的已知带型为待测品种的带型编号；
(5)按照与步骤(3)中所使用的SSR核心引物对应的SSR位点在小麦染色体上的固定顺序，汇聚待测品种的各个带型编号，从而形成所述待测品种的SSR指纹代码。
2、如权利要求1所述的建立小麦品种SSR指纹代码的方法，其特征在于，所述SSR核心引物的名称及其核苷酸序列如下：
WMS44： P1：5’GTTGAGCTTTTCAGTTCGGC 3’，
P2：5’ACTGGCATCCACTGAGCTG 3’；
WMS120：P1：5’GATCCACCTTCCTCTCTCTC 3’，
P2：5’GATTATACTGGTGCCGAAAC 3’；
WMS131：P1：5’AATCCCCACCGATTCTTCTC 3’，
P2：5’AGTTCGTGGGTCTCTGATGG 3’；
WMS155：P1：5’AATCATTGGAAATCCATATGCC 3’，
P2：5’CCAACCGTGCTATTAGTCATTC 3’；
WMS160：P1：5’TTCAATTCAGTCTTGGCTTGG 3’，
P2：5’CTGCAGGAAAAAAAGTACACCC 3’；
WMS161：P1：5’GATCGAGTGATGGCAGATGG 3’，
P2：5’TGTGAATTACTTGGACGTGG 3’；
WMS186：P1：5’GCAGAGCCTGGTTCAAAAAG 3’，
P2：5’CGCCTCTAGCGAGAGCTATG5’3’；
WMS261：P1：5’CTCCCTGTACGCCTAAGGC 3’，
P2：5’CTCGCGCTACTAGCCATTG 3’；
WMS272：P1：5’TGCTCTTTGGCGAATATATGG 3，’
P2：5’GTTCAAAACAAATTAAAAGGCCC 3’；
WMS294：P1：5’GGATTGGAGTTAAGAGAGAACCG 3’，
P2：5’GCAGAGTGATCAATGCCAGA 3’；
WMS304：P1：5’AGGAAACAGAAATATCGCGG 3’，
P2：5’AGGACTGTGGGGAATGAATG 3’；
WMS334：P1：5’AATTTCAAAAAGGAGAGAGA 3’，
P2：5’AACATGTGTTTTTAGCTATC 3’；
WMS339：P1：5’AATTTTCTTCCTCACTTATT 3’，
P2：5’AAACGAACAACCACTCAATC 3’；
WMS350：P1：5’ACCTCATCCACATGTTCTACG 3’，
P2：5’GCATGGATAGGACGCCC 3’；
WMS614 5’GATCACATGCATGCGTCATG 3’
5’TTTTACCGTTCCGGCCTT 3’
WMS617：P1：5’GATCTTGGCGCTGAGAGAGA 3’，
P2：5’CTCCGATGGATTACTCGCAC 3’。
3、如权利要求1所述的建立小麦品种SSR指纹代码的方法，其特征在于，在步骤(3)中，使用4～16对SSR核心引物分别进行PCR扩增。
4、如权利要求1所述的建立小麦品种SSR指纹代码的方法，其特征在于，在步骤(3)中，使用8～12对SSR核心引物分别进行PCR扩增。
5、如权利要求1所述的建立小麦品种SSR指纹代码的方法，其特征在于，在步骤(3)中，使用10对SSR核心引物分别进行PCR扩增。
6、如权利要求1所述的建立小麦品种SSR指纹代码的方法，其特征在于，在步骤(3)中，使用15对SSR核心引物分别进行PCR扩增。
7、如权利要求1所述的建立小麦品种SSR指纹代码的方法，其特征在于，该方法还包括依据各个带型中的带纹分布，确定各个带型编号所对应的以数个0或1表示的带型代码的步骤。
8、如权利要求1所述的方法在鉴定小麦品种中的应用。
9、如权利要求1所述的方法在小麦品种分类中的应用。
Priority Applications (1)
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| Country | Link |
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| CN (1) | CN101041852A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101984446A (zh) * | 2010-10-22 | 2011-03-09 | 云南省烟草农业科学研究院 | 基于亲缘相关系数的共显性分子标记遗传相似指数估计方法 |
| CN101429541B (zh) * | 2007-11-09 | 2011-12-07 | 中国农业科学院棉花研究所 | 一种ssr分子指纹鉴定方法 |
| CN106755314A (zh) * | 2016-11-16 | 2017-05-31 | 江汉大学 | 小麦微卫星标记位点开发方法与微卫星标记位点内的微卫星标记的长度检测方法 |
| CN113817859A (zh) * | 2021-08-24 | 2021-12-21 | 江汉大学 | 用于小麦品种鉴定的mnp标记位点、引物组合物和试剂盒及其应用 |
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2006
- 2006-03-21 CN CN 200610065685 patent/CN101041852A/zh active Pending
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