CN101028368A - 地黄多糖提取物的医药用途及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及地黄多糖提取物在制备治疗和/或预防I型过敏反应相关性疾病的药物组合物的应用，I型过敏反应相关性疾病包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性眼病、过敏性皮肤病、特应性皮炎、急慢性荨麻疹。地黄多糖提取物具有明显的抗炎、抗过敏活性，毒副作用小。本发明还提供了地黄多糖提取物的制备方法。

Description

地黄多糖提取物的医药用途及制备方法

技术领域

本发明涉及医药领域，地黄多糖提取物有效地预防和治疗过敏性哮喘病、过敏性鼻炎和其它过敏病症的的医药用途。本发明特别适用于治疗和预防过敏性哮喘，也可用于治疗和预防过敏性鼻炎和过敏性皮肤病。

背景技术

过敏性疾病包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性眼病、过敏性皮肤病、特应性皮炎、急慢性荨麻疹等。

支气管哮喘是世界范围内最为常见的慢性呼吸道疾病，保守估计全世界至少有一亿以上的人患哮喘病，近年来，因其患病率和死亡率均呈上升的趁势。哮喘已成为严重的公共卫生问题而受到世界各国的极大关注。因此需要提供有效地治疗哮喘病的药物和方法。

近三十年来，全世界对治疗哮喘病的药物进行了大量的开发研究工作。已经开发出来的治疗哮喘病的药物有β₂-肾上腺素能受体激动剂类、α-肾上腺素能受体拮抗剂类、氨茶碱类、胆碱能受体拮抗剂类、钙离子拮抗剂类、钾离子通道激动剂、糖皮质激素、细胞膜稳定剂(色甘酸钠、尼多考米钠)、抗组胺药物、白三烯受体拮抗剂、血小板活化因子(PAF)拮抗剂、特异性免疫治疗剂、非特异性免疫治疗剂等。哮喘是一种机理极为复杂的多因素疾病，是多细胞多介质参与的炎症性疾病。上述这些药物(或者治疗方法)作用机理单一(对一种或二、三种介质、因子、受体或通道起作用)，这些药物或者治疗效果不明显、或者口服无效须特殊途径给药、或者副作用大无法长期使用。目前临床上普遍采用的也是最有效的治疗方法是长期吸入糖皮质激素(轻中度吸入色甘酸钠、尼多考米钠)抗炎治疗，哮喘发作时吸入β₂-肾上腺素能受体激动剂、胆碱能受体拮抗剂等支气管扩张剂。这些治疗方法对缓解哮喘症状，改善哮喘病人的生活质量有一定的效果，但没有使哮喘病的发病率和死亡率有所降低。降低哮喘病的发病率和死亡率、改善哮喘病的预后仍然缺乏有效手段(李明华等，哮喘病学，人民卫生出版社，1998，p2)。治疗哮喘病需要更有效的和更安全的药物。

地黄是玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libsch.的新鲜块茎或干燥块茎，多年生草本，主要为栽培品，亦野生于海拔50-1100米的山坡及路旁荒地。

地黄有鲜地黄、生地黄、熟地黄之分。提取地黄多糖提取物使用的地黄是鲜地黄、生地黄以及鲜地黄自然干燥品(晒干或风干)或者鲜地黄用沸水煮5-10分钟(杀酶)后，晒干或风干的干燥品。

发明内容

本发明涉及治疗和/或预防过敏性疾病的药物组合物，特别是涉及治疗和/或预防I型过敏反应疾病的药物组合物，I型变态反应性疾病包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性眼病、过敏性皮肤病、特应性皮炎、急慢性荨麻疹和其它过敏性疾病的药物组合物。特别涉及以中药地黄为原料制备的水苏糖为有效成分的地黄多糖提取物，在制备治疗和/或预防I型变态反应性疾病的药物组合物，I型变态反应疾病包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性眼病、过敏性皮肤病、特应性皮炎、急慢性荨麻疹和其它过敏性疾病的药物组合物中的应用。本发明提供了地黄多糖提取物的提取、分离、纯化的方法。

用于制备治疗和/或预防过敏性疾病的药物组合物是地黄多糖提取物，过敏性疾病，包括I型过敏反应疾病，I型变态反应性疾病包括过敏性哮喘病、过敏性鼻炎和/或其它I型变态反应性疾病，地黄多糖提取物是用地黄为原料制备的。

用于制备治疗和/或预防过敏性疾病的地黄多糖提取物，特别是涉及治疗和/或预防I型过敏反应疾病的地黄多糖提取物的地黄，是生地黄和/或鲜地黄。

本发明的目的是提供地黄多糖提取物在制备治疗和/或预防过敏性疾病的药物组合物，特别是涉及治疗和/或预防I型过敏反应疾病的药物组合物，是地黄多糖提取物在药物制剂中的应用。地黄多糖提取物是从中药地黄中提取的，包括地黄的水提取物、醇提取物、水醇提取物，以及用其它溶剂从地黄中提取出来的物质。特别地，是指从地黄中提取出来的含水苏糖为有效成分的地黄多糖提取物，地黄多糖提取物主要由以下化学成分组成：水苏糖(stachyose)15-75％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为30-98％。特别地，水苏糖30-65％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为50-85％。

地黄多糖提取物，用Wistar健康小鼠做急性毒性试验，口服最大给药量为70.0-85.0g/kg，未见动物死亡；腹腔注射给药LD₅₀为17.5～38.8g/kg，静脉注射给药LD₅₀为2.75～5.97g/kg。

本发明提供的地黄多糖提取物，可以与一种或多种药学上可接受的铺料成分混合，以及含地黄多糖的组合物中进一步含有β₂-肾上腺素能受体激动剂。

本发明提供了地黄多糖提取物治疗哺乳动物呼吸道免疫介导的炎性疾病的方法，所述方法包括给所述的哺乳动物施用治疗有效量的地黄多糖提取物，或施用含有地黄多糖提取物的药物组合物，或进一步含有β₂-肾上腺素能受体激动剂的所述组合物。

地黄多糖提取物的药物组合物可以是各种形式，包括口服剂型，吸入形式以及可注射和输注的溶液。当以吸入剂或气雾剂形式使用时，地黄多糖提取物与药学上可接受的载体溶液或可转化成气雾剂的形式的干粉结合使用。与此类似，当以口服给药使用时，地黄多糖提取物与使用于口服给药的药学上可接受的载体结合使用。当用于治疗免疫介导的炎性皮肤病时，地黄多糖提取物可以与无毒的、药学上可接受的局部用载体结合使用。地黄多糖提取物可以与哮喘治疗剂，如β₂-肾上腺素能受体激动剂、胆碱能受体拮抗剂、氨茶碱类、糖皮质激素、抗组胺药物等结合使用。

地黄多糖提取物用于预防和治疗免疫介导的炎性疾病，特别是包括哮喘在内的与呼吸道相关的疾病，以及特别是与慢性哮喘相关的应答过强和变应性鼻炎。因此本发明也提供了治疗免疫介导的炎性疾病的方法，该方法包括给有免疫介导的炎性疾病患者用治疗有效剂型和剂量的地黄多糖提取物。

本发明的地黄提取物的给药量，因患者的状态、体重、给药方式等不同而异。比如在非口服情况下、肌内、静脉、肠内给药，以地黄生药计算0.20mg-2000mg/kg.日，优选2.0mg-200mg/kg.日，口服情况下以地黄生药计算2.0-20g/kg.日，优选20-2000mg/kg.日。

本发明的地黄多糖提取物水苏糖30-65％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为50-85％。其给药量，因患者的状态、体重、给药方式等不同而异。比如在非口服情况下、肌内、静脉、肠内给药0.01mg-100mg/kg.日，优选0.1mg-10mg/kg.日，口服情况下0.1-1000mg/kg.日，优选1-100mg/kg.日。

本发明的目的是提供地黄多糖提取物的制备方法。地黄多糖提取物是从中药地黄中提取的，地黄多糖提取物主要由以下化学成分组成：水苏糖(stachyose)15-75％。地黄总多糖含量以葡萄糖计为30-98％。特别地，水苏糖30-65％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为50-85％。

本发明提供了地黄多糖提取物的提取、分离、纯化的方法。该方法是：

1、取地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)的根的切片，用水、或水与甲醇、乙醇、丙酮等溶剂组成的二种及多种混合溶剂提取，提取液在真空中70℃以下浓缩并蒸去有机溶剂(如无有机溶剂时也可以直接上柱)，加水至合适的体积，去除沉淀(如有沉淀)。

2、上述水溶液通过活性炭分离柱(采用活性炭粒度大于40目，液体易于通过分离柱)，中药地黄与活性炭的重量之比为1∶0.5～1∶20，所用的活性炭是粒度大于40目的活性炭颗粒。

3、用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，为了提高地黄多糖的含量，可以再用3-10％的稀乙醇，或5-15％的稀甲醇或3-10％的稀丙酮洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，以洗脱去单糖和双糖。

4、用10％以上的乙醇水溶液，或甲醇或者15％以上的甲醇水溶液，或者10％以上的丙酮水溶液洗脱。收集洗脱液并且浓缩至干，即得地黄多糖提取物。

本发明的创造性在于通过科学可行的方法从地黄中提取分离出了用于治疗哮喘病和其它过敏性疾病的地黄多糖提取物。如前所述，本发明提供的用于治疗哮喘病和其它过敏性疾病的药物的有效成分是包括含有水苏糖的地黄多糖提取物。

为保证地黄多糖的质量，在生产过程中需要对洗脱液和最终提取物中的有效成分的含量进行检测，用于检测水苏糖和地黄总多糖含量的方法可以借助任何可行的检测手段和公知的方法，本发明参照有关文献在此提出一套可行的检测方法。

(一)地黄多糖提取物水苏糖的含量测定

水苏糖的含量测定方法用高压液相色谱法(HPLC)，色铺柱：Sugar-pak-l型阳离子凝胶交换柱(0.65cm×30cm)，流动相为水，柱温80℃，流速0.7ml/min，视差检测器，进样10μl。

标准曲线：精密称取水苏糖对照品10mg，置于10ml的容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。分别取稀释液0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml置于1ml的容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，备用。分别进样10μl，进行测定，以峰面积值(X)对含量(Y)作标准曲线。

回归方程Y＝2.35×10^-5X+3.65×10^-2

相关系数R＝0.9997

线形范围2.0μg-10.0μg。

(二)地黄多糖提取物的总多糖的含量测定

照紫外分光光度法测定(《中国药典》2005年版一部附录VID)测定。

1、对照品溶液的制备取葡萄糖对照品约5mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml至25ml容量瓶中，加水稀释至刻度、摇匀、即得。

2、5％的a-萘酚溶液：取a-萘酚5g，用乙醇约70ml溶解，并用乙醇稀释成100ml。

3、50％硫酸乙醇溶液：取乙醇约40ml，在搅拌下加入硫酸50ml，加乙醇至100ml，搅拌均匀即得。

4、标准曲线的制备：分别取葡萄糖的对照品溶液10，20，30，40，50，60μl，置于10ml具塞刻度试管中，加5％的a-萘酚溶液0.5ml，50％硫酸乙醇溶液5ml，摇匀，在80℃恒温水浴中加热60分钟后，取出，置于冰水浴中冷却10分钟后，在460nm处测定吸收度，绘出标准曲线。线性范围5-30μg；回归方程Y＝106.54X+0.086；相关系数R＝0.9995

5、样品溶液制备：取地黄多糖提取物约0.05克，精密称定，置于50ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

4、含量的测定：分别取葡萄糖的对照品溶液和样品溶液各10μl，置于具塞试管中，加5％的a-萘酚溶液0.5ml，50％硫酸乙醇溶液5ml，摇匀，在80℃恒温水浴中加热60分钟后，取出，置于冰水浴中冷却10分钟后，在460nm处测定吸收度，以吸收度计算含量。

具体实施方式

用以下的实施例对本发明作具体说明，但本发明并不限于下列实施例包含的内容。

[实施例一]药理试验所用的样品：

样品1、水苏糖15％。地黄总多糖含量以葡萄糖计为30％；

样品2、水苏糖25％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为50％；

样品3、水苏糖35％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为60％；

样品4、水苏糖50％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为75％；

样品5、水苏糖60％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为85％；

样品6、水苏糖70％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为97％。

卵白蛋白气雾吸入引喘试验

取200-250g豚鼠70只，雌雄各半，先于右后腿外侧肌肉注射4％卵白蛋白生理盐水溶液0.2ml/只，同时腹腔注射4％氢氧化铝凝胶0.2ml致敏。从致敏第二天起，动物随机分为7组：对照组、治疗组6组(样品1、2、3、4、5、6)。治疗组灌胃给药，共14天，末次药后，将动物放于密闭的玻璃钟罩内，待安静后，启动空气压缩机，以53kPa(400mmHg)的恒压喷入3.5％卵白蛋白生理盐水30秒钟，观察6分钟内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期与发生抽搐的动物数。(徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年11月第二版，1199页)。

        表1、地黄多糖提取物对药物引豚鼠喘的影响

组别	动物数(n)	剂量(g/kg)	引喘潜伏期(秒)	抽搐动物数(只)
					对照样品1样品2样品2样品4样品5样品6	10101010101010	-20001000500400400400	58.8±29.7109.5±61.1*112.9±87.1*115.3±89.7*135.5±87.8*171.7±97.9*201.1±112.1*	10/109/109/1010/109/108/108/10

注：与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。

试验结果显示，地黄多糖提取物能显著延长卵白蛋白生理盐水溶液引喘豚鼠的潜伏期，与对照组相比有显著差异(P＜0.05)，表明地黄多糖提取物具有一定的平喘作用。

被动皮肤过敏试验(PCA)

将大鼠体按重随机分为7组，10只/组，♀♂各半，分笼饲养，5只/笼。分别为空白对照组、治疗组6组(样品1、2、3、4、5、6)。治疗组灌胃给药，在抗原攻击前连续给药14d。

抗血清制备：将上述天花粉氢氧化铝悬液四只脚掌注射，每只脚掌注射0.1ml，共0.4ml。10-15d成熟，眼球放血约10ml，以3000转/min离心15min，取上层血清即得抗血清。

被动皮肤致敏：将试验各组大鼠背部脱毛，脊柱两侧距中线1.5cm，各取两点，每点间隔2cm，面积约1×1cm2，共4点。分别在背部皮肤内注射抗血清的不同稀释度(1∶30 1∶40)。48h后进行定量的相应抗原攻击。尾静脉注射天花粉加依文思蓝溶液1mg/kg，30min后断头处死。

观察指标：皮内注射抗血清的局部皮肤反应，并测量依文思蓝渗出的蓝斑直径大小。计算PCA抑制百分率(％)。PCA抑制百分率＝(空白对照组蓝斑直径-用药组蓝斑直径)/空白对照组蓝斑直径×100％(徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年11月第二版，1197页)

            表2、地黄多糖提取物对大鼠被动皮肤过敏反应影响

组别	动物数(只)	剂量mg/kg	不同血清浓度蓝斑直径(cm)
					1∶30	1∶40
			空白对照样品1样品2样品2样品4样品5样品6	10101010101010			水20001000500400400400	1.52±0.220.93±0.18*0.88±0.21*0.92±0.23*0.90±0.23*0.93±0.19*0.89±0.21*	0.93±0.250.61±0.19*0.59±0.18*0.58±0.21*0.55±0.19*0.59±0.19*0.56±0.21*

注：与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。

试验结果见表2。从表中结果可以看出，试药地黄多糖提取物在抗血清稀释度1∶30，1∶40时，表现出显著性抑制蓝斑直径(P＜0.05)。表明地黄多糖提取物对被动皮肤过敏反应有一定的抑制作用。

迟发性足垫反应试验

将小鼠按体重随机分组，10只/组，♀♂各半，分笼饲养，5只/笼，共7组，分别为空白对照组、地黄多糖组6组(样品1、2、3、4、5、6)。采用治疗性给药，致敏前给药5d至致敏后继续给药5d，共10d。

致敏5d后NIH小鼠颈部s.c5％绵羊红细胞(SRBC)0.05ml/只致敏。6d后右足垫s.c5％绵羊红细胞(SRBC)0.02ml，进行攻击。左足注射等量生理盐水作对照。24h后，末次给药50min后处死动物。从踝关节部位剪下两足称重。求出两足的重量差，计算足肿胀抑制率。足肿胀抑制率＝空白对照组足肿胀程度-用药组足肿胀程度)/空白对照组足肿胀程度×100％，试验结果见表4。(徐叔云等主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年第二版，1226页，1228页)

     表3、地黄多糖对绵羊红细胞引起的小鼠迟发性足垫反应的影响

组别	动物数(只)	剂量(mg/kg)	足肿胀程度(g)	抑制率(％)
					空白对照组样品1样品2样品2样品4样品5样品6	9101010101010	水20001000500400400400	2.62±0.811.83±0.67*1.71±0.63*1.80±0.85*1.78±0.71*1.727±0.65*1.67±0.55*	---32.0233.2030.8332.8133.9934.39

注：与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。

从表中结果可以看出，地黄多糖提取物与空白对照组比较表现出显著性抑制足肿胀程度(P＜0.05)，抑制率为32％以上。表明地黄多糖提取物对抑制绵羊红细胞引起的小鼠迟发性免疫反应效果较明显。

I型变态反应—肥大细胞脱颗粒试验

将40只SD大鼠按体重随机分为4组：空白对照、色甘酸钠、纯鲜地黄汁25ml/kg.d、纯鲜地黄汁50ml/kg.d，每组10只，雌雄各半，给药1次/d，连续给药14天。将大鼠头部皮下注射1∶5稀释的抗卵白蛋白血清0.1-0.2ml，48h后，尾静脉注射1ml卵白蛋白伊文思兰溶液进行攻击。攻击后30min将动物处死，剥去头部皮肤，取下颅骨，放入95％乙醇处理1h，放入无水甲醇过夜。肥大细胞用0.18％中性红处理后，流水冲洗，用一个大头针将颅骨的一侧固定在小木板上，用镊子小心剥离骨膜，展开于载玻片上，干燥，封固。在目镜中装有标尺显微镜下直接观察，选择肥大细胞密度较高的2-3个区域，计算每mm²的肥大细胞数。并在高倍镜下，对肥大细胞进行观察把肥大细胞分成脱颗粒和未脱颗粒两类，算出细胞脱颗粒的百分率。

         表3  纯鲜地黄汁对大鼠肥大细胞脱颗粒的影响

组别	动物数(只)	剂量(ml/kg)	脱颗粒百分率(％)
				空白对照组色甘酸钠样品1样品2样品2样品4样品5样品6	1010101010101010	--50mg20001000500400400400	98.2±10.485.0±8.3*84.6±8.7*69.9±8.2*78.0±7.3*77.6±6.7*75.5±7.2*73.5±6.8*

注：与空白对照组比较：*P＜0.05

表3结果可看出，与空白对照组比较，纯鲜地黄汁对肥大细胞脱颗粒有显著的抑制作用。表明纯鲜地黄汁对此类I型变态反应有显著抑制作用。

[实施例二]取地黄的干燥根500g，用55％的甲醇加热回流提取3次，每次4000ml 1小时，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(1kg活性炭)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用60％的甲醇5000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物43.4克。地黄多糖提取物化学成分水苏糖38.5％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为54.8％。

[实施例三]取地黄的干燥根1kg，用45％的甲醇加热回流提取3次，每次8000ml 1小时，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(500g活性炭，粒度28目)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用8％的稀甲醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用70％的甲醇3000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物56.1克。将地黄多糖提取物进行检验，水苏糖35％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为64.5％。

[实施例四]取地黄的干燥根2kg，用25％的甲醇加热回流提取3次，每次16升1小时，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(2kg活性炭，粒度40目，120℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用70％的甲醇10000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物108.4克。将地黄多糖提取物进行检验，水苏糖27％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为53.6％。

[实施例五]取地黄的干燥根500g，用35％的丙酮加热回流提取3次，每次4000ml 0.5小时，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(5kg活性炭，粒度20目，140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用50％的丙酮25000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物35.4克。地黄多糖提取物含水苏糖45.0％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为71.2％。

[实施例六]取鲜怀地黄1kg，用40％的丙酮加热回流提取3次，每次8000ml 1小时，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(20kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用7％的稀丙酮洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用50％的丙酮50000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物43.9克。将地黄多糖提取物进行检验，水苏糖51.1％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为75.3％。

[实施例七]取地黄的干燥根500g，用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(3kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用50％的乙醇15000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物36.4克。将地黄多糖提取物进行检验，水苏糖24.1％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为58.2％。

[实施例八]取鲜怀地黄2500g，用35％的乙醇加热回流提取3次，每次4000ml0.5小时，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至2000ml，上已处理好的活性炭(6kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用50％的乙醇30000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物27.5克。将地黄多糖提取物进行检验，水苏糖41.0％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为58.2％。

[实施例九]取鲜怀地黄2500g，用45％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用25％的乙醇加热回流提取2次，每次4000ml 1小时，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(8kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用50％的乙醇40000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至干，即得地黄多糖提取物46.5克。地黄多糖提取物含水苏糖48.2％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为68.9％。

[实施例十]取鲜怀地黄2500g，用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭105℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用4％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇5000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物35.8克。水苏糖63.1％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为85.7％。

[实施例十一]取地黄的干燥根1kg，用水加热煎煮3次，每次6000ml 0.5小时，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭110℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用8％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用60％的乙醇4000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物48.9克。将地黄多糖提取物进行检验，其化学成分水苏糖68.4％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为90.3％。

[实施例十二]取地黄的干燥根2kg，用水12升加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水加热煎煮2次，每次8升1小时，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭120℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用60％的乙醇4000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物165.5克。地黄多糖提取物化学成分水苏糖72.5％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为93.4％。

[实施例十三]取地黄的干燥根500g，用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水加热煎煮2次，每次3000ml 1小时，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭130℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用60％的乙醇4000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物67.3克。地黄多糖提取物其化学成分水苏糖60.3％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为82.5％。

[实施例十四]取地黄的干燥根10kg，用水60升加热煎煮30小时，倾取提取液，药渣再用水加热煎煮2次，每次50升1小时，合并三次提取液，去除沉淀，上已处理好的活性炭(10kg)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，，用70％的乙醇50000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄多糖提取物1350克。将地黄多糖提取物进行检验，其化学成分水苏糖50.5％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为72.3％。

Claims (8)

1、地黄多糖提取物在用于制备治疗和/或预防变态反应性疾病的药物组合物的应用，其特征是地黄多糖提取物以地黄为原料制备，水苏糖15-75％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为30-98％，优选地黄多糖提取物含水苏糖30-65％，地黄总多糖含量以葡萄糖计为50-85％。

2、按照权利要求1中所述的应用，其特征是地黄多糖提取物在用于制备治疗和/或预防I型变态反应性疾病的药物组合物的应用。

3、按照权利要求2中所述的应用，其中I型变态反应性疾病包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性眼病、过敏性皮肤病、特应性皮炎、急慢性荨麻疹和/或其它I型变态反应性疾病。

4、按照权利要求1、2或3中所述的应用，其中地黄多糖提取物是通过活性炭吸附分离制备。

5、按照权利要求4所述的应用，其中地黄多糖提取物是通过活性炭吸附分离制备，地黄药材与活性炭的重量之比为1∶0.5～1∶20。

6、按照权利要求4或5中所述的应用，其中地黄多糖提取物是通过活性炭吸附分离制备，所用的活性炭是粒度大于40目的活性炭颗粒。

7、按照权利要求4、5或6中所述的应用，其中地黄多糖提取物的提取方法是，(1)地黄用水或者含水有机溶剂提取；(2)必要时浓缩，并除去有机溶剂，滤除沉淀；(3)地黄提取物水溶液通过活性炭分离柱，用水常规冲洗；(4)用有机溶剂浓度较低水溶液洗脱；(5)用有机溶剂浓度较高水溶液洗脱；(6)收集有机溶剂浓度较高水溶液的洗脱液，浓缩至干，即得地黄多糖提取物。

8、按照权利要求4、5、6、7或8中所述的应用，其中地黄多糖提取物的提取方法是，(1)地黄用水提取；(2)地黄提取水溶液通过活性炭分离柱，用水常规冲洗；(4)用低于10％的乙醇水溶液冲洗；(5)用10％以上的乙醇水溶液水溶液洗脱；(6)收集乙醇浓度较高洗脱液，浓缩至干，即得地黄多糖提取物。