CN101028320A - 一种具有降糖降脂作用的植物药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于治疗糖尿病的植物药组合物，其组合物的特征主要是由囊状紫檀、匙羹藤、网状五层龙或圆叶五层龙四种植物中的三种植物的提取物复方组合而成。其组合药物中还可以含有微量元素铬、钒和锌。本发明的植物药组合物中各组分的药物作用机理相对明确，通过不同的作用机理，相互发挥协同作用，具有降低血糖和血脂的作用，并能明显改善和缓解糖尿病患者由高血糖引发的症状。本发明还涉及这些植物提取物以及相应口服组合药物的制备方法，也涉及这些植物组合药物制剂的检测和质量控制方法，并通过高效液相色谱和高分辨高灵敏度质谱仪建立了相应的指纹图谱。

Description

一种具有降糖降脂作用的植物药组合物及其制备方法

发明领域

本发明涉及的是由一种由天然植物提取物为主要原料用于治疗糖尿病的药物组合物。

背景技术

糖尿病是由遗传、饮食和生活习惯的改变等多种因素引起的代谢性疾病。由于体内胰岛素分泌的相对或绝对不足而引起体内糖、脂肪和蛋白质代谢的紊乱，其主要特点是高血糖。体内胰岛素分泌绝对或相对缺乏而导致的血中葡萄糖浓度升高，糖大量从尿中排出，并出现多饮、多尿、多食和体重下降的现象，糖尿病直到目前为止还没有根治的方法，一旦确诊为糖尿病就要终身服药。糖尿病患者如果在确诊后不能很好的控制血糖，就会引发并发症，如心血管病、神经系统病变、视网膜病变、糖尿病肾病和糖尿病足等，并会引发急性心肌梗塞、脑血管意外，严重的还会导致失明或截肢。糖尿病晚期的并发症极大地影响糖尿病患者的生活质量。治疗糖尿病不但消耗了大量有限的医疗资源，而且经济上的代价非常高昂。美国糖尿病协会报导美国2003年花费在糖尿病上的费用是1320亿美元，其中直接用于治疗的费用是980亿美元。每个糖尿病人的平均花费是14243美元，这个数字是非糖尿病人的5倍。据报导中国治疗糖尿病的相关费用也超过了1000亿人民币。

糖尿病近年来已成为人们日益关注的一种流行病。根据世界卫生组织的统计，目前全球已有超过二亿人患糖尿病，预估到2030年，这个数字还会增加一倍。根据美国糖尿病协会2005年的报导，美国人口中超过6％即有一千八百万人患有糖尿病，其中超过一千二百万人已经被确诊，另外近六百万患者还不知道他们已患有糖尿病。中国糖尿病患者据保守统计现已经超过4000万人，已超过印度成为世界上糖尿病患者最多的国家，随着人们生活方式的急剧变化，中国糖尿病患者正以每年200万-300万人的幅度急速递增。糖尿病是继心血管和癌症之后人类的第三杀手，全球每年大约有超过300万人因糖尿病或糖尿病引发的并发症而死亡。

临床上将糖尿病分为两型：胰岛素依赖型(IDDM)，又称1型糖尿病，约占糖尿病人的10％，1型糖尿病通常因遗传因素在幼年发病。由于胰岛中的β细胞严重损坏或完全损坏，血液胰岛素水平低于正常低限，从而导致高血糖。这种患者只能依赖于体外给予胰岛素进行治疗。另一类为非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)，又称为2型糖尿病。2型糖尿约占糖尿病病人总数的90％，多发生在成年人中。2型糖尿病是由于病人胰岛β细胞功能失常，胰岛素分泌相对不足以及体内组织细胞对胰岛素敏感性降低而导致体内血糖、脂肪等内分泌系统代谢混乱。由于大部分糖尿病患者为2型糖尿病，因此服用疗效确切副作用少的口服降糖药物，控制和改善患者的血糖至正常人指标，延缓或减少并发症是治疗的关键。

目前治疗2型糖尿病的口服西药主要有四类：一、磺脲类：如格列苯脲(Glibenclamide，Glyburide优降糖)，格列齐特(Gliclazide)和格列美脲(glimepiride)，其主要药物作用机理是通过刺激胰岛细胞分泌胰岛素，提高体内胰岛素的水平。二、双胍类：如二甲双胍(Metformin)，其主要药物作用机理抑制食欲及身体对葡萄糖的吸收，减少肝脏对葡萄糖的转换能力。三、α-葡萄糖苷酶抑制剂：如阿卡波糖Acarbose。其降血糖作用的机理是抑制小肠壁细胞α-葡萄糖苷酶的活性，降低并延缓摄入的碳水化合物的降解为可进入血液的简单糖，从而阻止了餐后血糖得升高。四、胰岛素增敏剂：如罗格列酮(Rosiglitazone，文迪雅)、比格列酮(Pioglitazone，艾汀)，这类药物主要作用于肝脏和脂肪肌肉等外围组织细胞，增强细胞受体对自身胰岛素的敏感性，提高体内胰岛素的和用率，使血中葡萄糖充分被上述器官和组织细胞利用，从而降低血糖。

近10余年来，临床一般会根据糖尿病患者的病情和症状采用联合用药治疗法。联合用药是将两种或多种作用机理不同的药物联合使用，如双胍类+葡糖苷酶抑制剂或胰岛素增敏剂，由于多种作用机理不同药物的协同作用，联合用药强化了治疗效果，确保将患者血糖控制在正常或接近正常的水平，阻止和延缓糖尿病并发症的发生和发展，联合用药治疗法是治疗糖尿病的较佳选择。

虽然西药降糖机理清楚，降糖效果通常明显，对控制血糖和治疗糖尿病有肯定的作用。由于糖尿病患者需要终身服药，长期服用合成西药对人体某些器官如消化道，肝和肾的副作用也会随时间的增长而变得显著起来。许多糖尿病患者长期服用西药，逐渐对西药的降糖功能失去了作用。另外一些患者服用西药会导致低血糖的发生，还有一些患者由于肝和肾功能的缺陷，不适合选用合成药物。因此研究筛选和选用和合成药物有相同降糖功能的天然药物很自然的受到了空前的重视。

中草药及天然药物在用于治疗糖尿病已有上千年的历史，中草药及天然药物曾经是预防和治疗糖尿病的的主要手段。尽管近代科学的发展可以使人们通过合成的方法生产出治疗糖尿病的药物，但天然植物药对于预防和治疗糖尿病至今仍然占有重要的位置，有着合成药物无法取代的作用。随在糖尿病患者人数的急剧上升，近年来在研究开发和临床应用降糖天然药物方面作了大量的工作，中国专利申请号分别为CN1401318A、CN1559549A、CN13154118A以及CN1616010A等专利中提供了用人参、丹参、鬼箭羽、黄芪、葛根、五味子、玉米须等植物及其提取物制备的中药制剂对早期轻症糖尿病有一定的降血糖作用，其中有些其治疗效果已得到临床上的肯定。中国专利申请号分别为1679860A，1268515A和1742536A的专利中提供了含有匙羹藤的药物，但这些含有匙羹藤的药物没有说明具有协同降糖作用。尽管中草药长期以来在民间一直用于糖尿病的治疗，但市场上许多中成药还是存在存下列缺陷：有些中成药组成味数太多，而相应的有效成分及相关的作用机理不明确，有些疗效不显著，有些产品没有相应的医学和科学实验数据的支持。虽然目前有些天然药物或制剂在治疗糖尿病以及有关的并发症上也显示了一定的疗效，至今降糖效果显著、有效成分及降糖机理清楚、并具有协同降糖降血脂和防治由糖尿病引起的并发症作用的天然药物产品至今还没有太多报导。

发明内容

本发明的主要目的是为了克服上述技术领域的不足，通过筛选多种天然植物，提供了一种以天然植物的提取物为主要组分的植物组合药物，这种植物组合药物可以用来预防和治疗糖尿病及延缓和改善由糖尿病引起的并发症状。

本发明的另一个目的是提供上述植物组合药物制剂及其相应的制备方法。

本发明的另外一个目的是提供上述植物药物组合物，这种植物组合药物具有显著降低血糖和血脂及改善由糖尿病并发症状的功效，组合药物中各组分药用机理明确，通过不同的作用机理，相互发挥协同作用。

本发明的再一个目的是建立本发明物药组合物原料和制剂的高效液相色谱(HPLC)和高效液相色谱-高分辨高灵敏度质谱联用(HPLC-MS)指纹图谱，用于上述制剂的定性鉴定和产品质量的定量质量控制。

本发明所提供的植物药组合药物是由圆叶五层龙、网状五层龙、囊状紫檀及匙羹藤四种植物中的三种植物或其相应的提取物组成。本发明所提供的植物组合药物其特征在于组合物中的植物或其提取物的重量百分比可以是：

圆叶五层龙   1-95％，

网状五层龙   1-95％

囊状紫檀     1-95％

匙羹藤       1-95％

优选重量百分比是：

圆叶五层龙   5-60％

网状五层龙   5-60％

囊状紫檀     5-60％

匙羹藤       5-60％

本发明所提供的植物药组合药最优选组份及相应重量百分比是：

网状五层龙    35-45％

囊状紫檀      30-40％

匙羹藤        20-30％

本发明所提供的植物药组合物另一个最优选组份及相应重量百分比是：

圆叶五层龙    35-45％

囊状紫檀      30-35％

匙羹藤        20-30％

本发明通过筛选多种植物，发现由圆叶五层龙、网状五层龙、囊状紫檀和匙羹藤提取物为主复合组成的药物组合物具有显著的降糖作用，相应的有效成分及作用机理清楚。由这几种植物或其相应的提取物组成植物药组合物的有协同作用，疗效显著。

圆叶五层龙(salacia oblonga)和网状五层龙(salacia reticulata)，五层龙属，翅子藤科(Hippocrateaceae)，主要生长在斯里兰卡和印度南部森林的树木。这种植物自远古以来便一直被当地人常用于治疗风湿病、皮肤病、肝炎和糖尿病。这种植物还被认为有镇痛、抗炎的功效。其茎和根的水提取物含有多种三萜类和多酚类化合物，具有显著的降糖作用。近年来的研究发现圆叶五层龙和网状五层龙根茎提取物的主要降糖成分是硫代内盐salacinol和katalanol。

salacinol                                     Kotalanol

(C₉H₁₈O₉S₂)                              (C₁₂H₂₄O₁₂S₂)

这两种化合物在小肠中与可与将碳水化合物分解成能被体内吸收的简单葡萄糖的酶结合，从而部分阻止及延缓淀粉等多糖分解为单糖并经肠道吸收，降低了餐后血糖，其降糖作用机理方式类似于a-葡糖苷酶抑制剂，一类目前广泛用于临床来治疗糖尿病的处方药物，例如阿卡波糖。圆叶五层龙和网状五层龙水提取物还具有保肝、降脂的作用。

囊状紫檀(Pterocarpus marsupium Roxb.)又称为吉纳檀，马拉巴紫檀。紫檀属，蝶形花科(Papilionaceae))。是一种生长在印度洋丘陵地区植物，以印度斯里兰卡分布最多。当地人称为印度龙血。其茎的水萃取物具有显著的降糖作用。动物实验已证实囊状紫檀水提取物对胰岛β细胞有再生的功效。囊状紫檀水提取物的主要降糖组份是酚类化合物marsupin，pterosupin和紫檀芪(pterostilbene)。囊状紫檀其树皮树茎提取物中的酮类化合物，-(-)epicatechin和pterosupin已被证明具有修复胰岛素已损坏的细胞功能。水萃取物紫檀芪(pterostilbene)除了降糖作用外，还有降低血脂肪、胆固醇、三酸甘油脂及抗氧化的功能。

紫檀芪(Pterostilbene)                           Marsupin

(C₁₆H₁₆O₃)                                  (C₁₆H₁₃O₆)

匙羹藤(Gymnema sylvestre)(Retz.)Schult.，又称武靴藤，属萝摩科(Asclepiadaceae)植物。匙羹藤是一种主要生长在印度洋周边国家的植物，以印度、斯里兰卡和非洲分布最多，我国南方等省区也有分布。其树叶被用于制备植物药。当咀嚼匙羹藤树叶的时候，它会干扰人们品尝甜食的能力，使甜味食物会变得无味。人们给它起名为″灭糖剂″。匙羹藤提取物已经证明是帮助糖尿病患者控制和降低血糖的实用植物药。匙羹藤提取物能促进1型和2型糖尿病人的胰岛功能，改善其分泌胰岛素的能力。另外匙羹藤提取物只会降低糖尿病患者血糖，而对健康人不会产生降低血糖的效果。匙羹藤树叶的提取物的主要降糖组份是一类称为匙羹藤酸(Gymnenic acid简称GA)的鞣质。已确知的匙羹藤酸至少有五种，其中最主要的降血糖有效成分是匙羹藤酸IV(Gymnenic acid IV)。这些匙羹藤酸作为活性成分除了有降糖作用外，还有防治肥胖症、保肝、降血脂、抗动脉粥样硬化和抗氧化活性及功能。

GlcA：β-D-Glucopyranosyl

                    Tig：tigloyl

匙羹藤酸IV(Gymnema sylvestre acid IV)

本发明所提供的植物药组合物是由上述植物或其提取物来制备。在此基础上，本发明所提供的植物药组合物还可以含有微量元素三价铬、钒和锌。这些微量元素可以在最后植物药组合物制剂制备时，以添加其相应金属盐的方式加入，如比啶甲酸铬、硫酸氧钒和硫酸锌。

本发明所提供的植物药组合物，微量元素三价铬的每日剂量约为20毫克-250毫克，微量元素钒的每日剂量约为5微克-1毫克，微量元素锌的每日剂量约为5毫克-20毫克。微量元素三价铬在植物药组合物活性组分中的总重量约为0.4％-5.5％，微量元素钒在植物药组合物活性组分中的总重量约为0.0001％-0.025％，微量元素锌在植物药组合物活性组分中的总重量约为0.1％-0.45％。

微量元素在胰岛素的代谢作用过程中起着重要的作用。与糖尿病密切相关的微量元素主要有铬、矾和锌这三种元素。体内这些微量元素的缺乏会导致糖代谢紊乱，且与糖尿病以及由糖尿病引发的并发症具有高度负相关性。

金属铬是人体内醣类及血脂代谢中不可缺少的微量元素，三价铬可以促进胰岛素对葡萄糖的吸收和利用，是构成人体中的葡萄糖耐量因子(glucose tolerance factor，GTF)的重要组分。GTF中的三价铬协助胰岛素分子中的硫与细胞膜上胰岛素受体的硫基形成二硫键，使胰岛素可以发挥相应的功效，调节糖的代谢。可以说铬能激活胰岛素受体，而胰岛素发挥作用又需铬的参与。铬同时也被认为有刺激体内脂肪代谢以及有降低体内胆固醇和三酸甘油脂的功效。日常食物中只有极微量的铬可被人体吸收利用，人的老化均会减低人体对三价铬的吸收率。三价铬在人体组织内的含量随著年龄的增加而逐渐减少，这也许是为什么人们在年龄超过40岁以后得糖尿病的几率显著增加的原因之一。补充带铬的食物明显降低了糖尿病患者空腹血糖水平，改善了对葡萄糖耐受能力和降低了胰岛素浓度，达到降低血糖目的，与此同时还降低了体内总的胆固醇水平并增加了好胆固醇(HDL)水平。

金属钒是存在于人体内的基本微量元素之一。研究证明四价和五价钒的金属盐具有降血糖作用，金属钒可以增加2型糖尿病人病人对胰岛素的敏感性。钒化合物降血糖作用机制主要是通过抑制与胰岛素代谢中相关的磷酸酪氨酸磷酸酶(PTPase)，进而激活参与胰岛素信号转导途径的胰岛素受体酪氨酸受体激酶(IRKase)。钒的降血糖优点在于不用通过增加胰岛素的分泌而达到降糖目的。钒可以增加2型糖尿病人病人对胰岛素的敏感性，临床实验结果证明2型糖尿病病人在口服硫酸钒(钒的活性形式)后，空腹血糖值明显降低。

金属锌作为微量元素在胰岛素的代谢过程中起着重要的作用。锌也是许多葡萄糖代谢酶及蛋白代谢酶的重要组成部分。研究发现糖尿病患者体内的锌含量普遍偏低。糖尿病患者适量补充锌可增强糖尿病人体内胰岛素活性，使糖尿病患者的空腹和餐后血糖得到改善，同时也能改善相应的临床症状。

由于糖尿病与上述微量元素之间具有高度相关性，这些微量元素的缺乏可能导致机体正常糖耐量减低或发展成糖尿病。给糖尿病病人适当的补充这些微量元素，使之在机体内重新得到平衡，不仅可用促进糖、脂肪和蛋白质等的代谢正常，还可以对糖尿病人的病情有所控制，同时也有助于阻止和延缓糖尿病并发症的发生和发展。

在本发明所提供的实施例中，具体描述了含有这三种微量元素铬、钒和锌组份的药物组合物及其制备方法。

本发明所述的提取物是指植物含有有效药用组份经加工处理后的浓缩制备物。提取物可以是经过浓缩的液体，在一般情况下也可进一步制备成固体。植物提取物物通常可通过下面的方法得到。将筛选过的植物药用部位洗净，干燥，切割或研磨粉碎。然后用溶剂进行浸泡提取，也可以通过加热回流或二氧化碳(CO₂)超临界提取工艺来制备。经过过滤所得到的提取物为液体，再经过浓缩和干燥处理得到提取物为浸膏或干膏。上述制备过程中所述的溶剂可以是水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、己烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚等溶剂。上述溶剂也可以是混合溶剂，例如水和乙醇按一定比例配制成的混合溶剂。

本发明所述的提取物，可以将组合物组份中的所有植物混合后一起提取。在本发明的一个实施例中，具体提供了这种先将组合物组份中的各种植物按比例混合后一起提取，然后再加入其余组分和辅料来制备本发明组合药物制剂的实施方法。

植物提取物制备包括将圆叶五层龙、网状五层龙、囊状紫檀及匙羹藤等植物进行筛选，植物药用部位洗净、干燥、切割或研磨粉碎，然后将各植物按比例混合后加6-10倍的水煎煮2-3次，每次1-2小时；过滤合并滤液，浓缩后加70％乙醇静置过夜，分离上清液，回收乙醇，减压浓缩至比重为1.25-1.40时得组合物植物活性浸膏，然后加入其余组分和辅料混合均匀，制备制剂。

本发明所述的提取物，也可以将各植物原料分别进行提取。

植物药组合物的制备方法，其植物提取物分别制备，包括将圆叶五层龙、网状五层龙、囊状紫檀及匙羹藤等植物进行筛选，植物药用部位洗净、干燥、切割或研磨粉碎：然后将各植物原料分别用水或乙醇进行浸泡加热提取；提取液体经过浓缩和干燥处理后得到提取物：最后将各组分按比例混合后制备制剂。

网状五层龙活性组份的制备方法：将网状五层龙根茎去除杂质、洗净后凉干，然后粉碎成粗粉。加6-10倍水煎煮2-3次，每次1-2小时过滤，合并滤液。40℃-60℃减压浓缩，加70％乙醇静置过夜，分离上清液，40℃-50℃减压回收乙醇，浓缩、干燥、粉碎。过筛得到网状五层龙活性组份。

圆叶五层龙活性组份的制备方法：将圆叶五层龙根茎去除杂质、洗净后凉干，然后粉碎成粗粉。加6-10倍水煎煮2-3次，每次1-2小时。过滤合并滤液。40℃-60℃减压浓缩，加70％乙醇静置过夜，分离上清液，40℃-50℃减压回收乙醇，浓缩、干燥、粉碎。过筛得到圆叶五层龙活性组份提取物。

囊状紫檀活性组份的制备方法：将切割好的囊状紫檀树茎去除杂质、洗净，干燥后粉碎成粗粉。加5-10倍水热水浸后泡煎煮2-3次，每次1-3小时。过滤合并水提取液。40℃-60℃减压浓缩后加70％乙醇静置过夜，分离上清液，40℃-50℃减压回收乙醇，浓缩，干燥、粉碎。过筛得囊状紫檀活性组份提取物。

匙羹藤活性组份的制备方法：将匙羹藤叶除去杂质、洗净，然后粉碎成粗粉。加5-10倍乙醇回流提取2-3次，每次1-3小时。合并滤液，过滤，40℃-50℃减压回收乙醇，浓缩后再加70％乙醇静置过夜，过滤后将上清液40℃-50℃减压回收乙醇至无醇味。干燥、粉碎、过筛得到匙羹藤活性组份提取物。

本发明所述的药物组合物可以制备成药剂学上可应用的任何一种剂型，如片剂、胶囊、颗粒物、丸剂、口服液。所有的剂型均可通过添加医学上认可的辅料或通过已知的技术而制备。

本发明所述的药物组合物的给药方式可以是口服、肌肉注射、静脉注射以及其他临床上可以接受的给药方式。

本发明药物组合物的最佳给药方式是口服，最佳剂型是片剂、胶囊、颗粒剂及口服液。

本发明所述的口服剂型可以通过加入适当的辅料制备成缓释剂型以延长药物作用时间；也可以根据现有技术和添加相应的辅料制备成特殊剂型以增加药物的生物利用度。

本发明药物组合物还进行了有关毒理，药效和临床疗效实验。有关实验结果如下：

1.急性毒性试验资料

试验目的和方法

观察本发明的药物灌胃给予受试动物后所产生的的急性毒性反应和死亡情况。

受试药品由发明人提供。临用前用蒸馏水配成0.4g/mL的供试液。取20只SPF级KM小鼠，体重18-22g，雌雄各半，试验前禁食14小时，按最大胃容量40mL/Kg的剂量给予本发明受试药物溶液，每日给药一次，连续观察7天，记录动物的反应，体重变化及死亡情况

1.2试验结果

试验结果显示：小鼠经灌胃给予本发明药物后无异常反应，外观，活动，饮食，粪便均正常，体重增加。

KM种小鼠灌胃给予本发明药物的的最大耐受量(NTD)不低于16g/Kg，以成人体重60Kg计算，即不低于成人临床用药量的230倍。

2.药效学资料

试验目的和方法

2.1.1、观察本发明的药物对高脂糖尿病模型大鼠空腹血糖浓度的影响

2.1.2观察本发明的药物对血清中胆固醇(TG)和甘油三酯(TC)含量的影响

2.1.3、观察本发明的药物对血清中高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量的影响

2.1.4、试验方法50只Sprague Dawley(SD)雌性大鼠，体重为180-220g，随机取出10只作为正常对照组，其余用高脂饲料喂养两周。动物禁食12h后，采用一次性腹腔注射链尿霉素(STZ，65mg/kg)制造糖尿病大鼠模型。成模大鼠出现多饮、多食、多尿，运动减少等显著症状。注射STZ48小时后测空腹血糖值，然后将造模成功(空腹血糖16.7mmol/L)的大鼠每组10只随机分为四组。并于次日开始每天1次按下述剂量灌胃给药，对照组和模型组给蒸馏水。连续观察三周。分别于给药后7天，14天和21天尾尖取血各测定空腹血糖1次。最后一次给药测定空腹血糖后，将大鼠断头处死，取样检测其余各项指标。

第一组：糖尿病模型组

第二组：低剂量组(0.375g/kg)

第三组：中剂量组(0.75g/kg)

第四组：高剂量组(1.125g/kg)

数据处理：数据统计分析用 x±s表示，数据比较用t检验。

试验结果：

             表1对高脂糖尿病模型大鼠空腹血糖浓度的影响( x±s，n＝10)

组别	给药前血糖浓度(mmol/L)	给药1周血糖浓度(mmol/L)	给药2周血糖浓度(mmol/L)	给药3周血糖浓度(mmol/L)
					正常对照组	4.75±0.72	4.66±0.0.66	4.79±0.68	4.84±0.63
模型对照组	21.85±6.0	22.38±5.23	22.84±5.13	22.84±5.13
					低剂量组	21.58±5.59	19.45±4.69	15.74±4.26**	13.73±3.85**
中剂量组	22.14±5.78	13.71±4.00**	13.68±3.92**	11.26±2.11**
					高剂量组	21.80±6.11	11.57±2.36**	11.05±2.20**	10.13±1.86**

与模型对照组比较，**为P＜0.01

表1数据显示本发明组合药物能显著降低糖尿病大鼠的空腹血糖。和糖尿病模型组相比较，本发明药物组合药物高剂量组能使糖尿病大鼠的空腹血糖显著下降(与模型组比较，P＜0.01)，中剂量组和低剂量组也能使糖尿病大鼠的空腹血糖水平明显降低(与模型组比较P＜0.01)，且呈现显量效关系。

表2对血清中胆固醇(TG)和甘油三酯(TC)含量的影响

组别	TG(mmol/L)	TC(mmol/L)
			正常对照组	0.92±0.31	2.01±0.32
模型对照组	3.12±0.79	2.76±0.60
			低剂量组	2.42±0.56*	2.53±0.56
中剂量组	2.09±0.35*	2.40±0.48
			高剂量组	1.85±0.26**	2.21±0.36*

与模型对照组比较，*为P＜0.05，**为P＜0.01

表3对血清中高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量的影响

组别	HDL-C(mmol/L)	LDL-C(mmol/L)
			正常对照组	1.08±0.14	1.33±0.24
模型对照组	0.88±0.12	1.86±0.26
			低剂量组	1.09±0.15*	1.63±0.24
中剂量组	1.14±0.13**	1.52±0.26*
			高剂量组	1.19±0.12**	1.43±0.22**

与模型对照组比较，*为P＜0.05，**为P＜0.01

表2和表3的结果说明本发明组合药物除具有降低血糖作用外，还有能显著降低糖尿病高血脂模型大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)(P＜0.05～0.01)，以及显著提高高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)(P＜0.05～0.01)的功效。

本发明组合药物通过调节糖尿病大鼠有关血糖和脂代谢环节，改善糖代谢紊乱。其作用可能通过以下机理来实现：1、对受损胰岛β细胞具有修复、再生及促进胰岛素释放作用；2、促进肝糖原和肌糖原的合成；3、改善肝脏和肌肉等组织细胞对胰岛素的抵抗；4、抑制小肠内a-葡糖苷酶的活性，控制淀粉等多糖类在小肠中的分解和吸收。

3.临床疗效观察试验

3.1资料和方法

随机选择32例2型糖尿病患者，所有病例均符合1999年WHO、IDF公布的糖尿病诊断标准。其中男性19例，女性13例，年龄最大的67岁，最小的48岁，平均年龄56岁。病史最长的9年，最短的2.5年。服用本发明组合药物前和结束服用本发明组合药物后按临床常规检验血、尿、肝功能、血脂、CK、Cr，血脂、LDL-C以及HDL-C，在开始服用本发明组合药物前及开始服用后每天检测空腹、餐后2小时血糖。等血糖基本稳定后改为每三天检验一次空腹及餐后2小时血糖。

3.2服用方法：

糖尿病患者按要求热量合理控制饮食，所有病例服用前三天停服所有降糖药，并连续观测空腹及餐后2小时血糖。本发明组合药物胶囊每粒重0.31g，服用方法为每日三次，每次5粒，均为餐前15分钟服用。患者随机分为两组，每组16人。第一组服用初期除停用a-糖苷酶抑制剂外，继续服用原口服降糖药物，并按上述方法加服本发明组合药物胶囊，视血糖情况逐渐减少原口服降糖药药量，直至完全停用原口服降糖药，但最迟不超过15天停用：第二组为完全停用所有口服降糖药物，改服本发明组合药物胶囊，剂量同上。若血糖控制良好，减量至每次4粒。

3.3疗效标准

3.3.1.显效：治疗后自觉症状完全消失，空腹血糖＜6.39mmol/L，餐后2小时血糖＜7.8mmol/L，或血糖较前下降30％以上。

3.3.2.有效：治疗后口干、多饮、多尿、夜尿增多等症状明显改善，空腹血糖降至＜7.8mmol/L，餐后2小时血糖＜11.1mmol/L，或血糖较前下降10～29％。

3.3.3.无效：经三个疗程治疗，而血糖下降未达到有效标准者。

3.4结果

3.4.1、两组病人中，第二组有1人服用半月后，因血糖下降不显著而自行停服外，其余均服用达2月以上。除1例患者有轻微上腹饱胀感外，其余患者均未出现不良反应。有2例原有长期便秘患者，半月后症状全部消失。

3.4.2、第一组患者显效者9例，有效6例，无效1例：第二组患者显效7例，有效8例，无效1例。总有效率93.75％。第一组和第二组组间比较，统计学上无显著差别。31例糖尿病患者，治疗后空腹血糖平均值为(6.38±1.53)mmol/L，其中16例血糖值恢复至正常范围。治疗前(9.83±2.32)后血糖差异显著(P＜0.05)。观察结束后复查肝功能、CK、Cr无明显变化。血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)有不同程度的降低，但无统计学意义。

3.4.3、治疗后血糖下降时间：第一组平均血糖下降时间为2.2天，至4.6天趋于平稳；第二组平均血糖下降时间为8.7天，至16.2天趋于平稳。

3.4.4、典型病例

乔×春，男性，66岁，身高168cm，体重53kg，患2型糖尿，病史7年。先后服用多种降糖西药和中药制剂，仍有口干、多尿，特别是夜尿次数多，每晚3～5次，被随机分在观察病例第一组服用前空腹血糖11.9mmol/L，餐后2小时血糖19.3mmol/L。服用发明组合药物胶囊5粒，每日三次，10天后停服所有原口服降糖药，一月后空腹血糖维持在5.5～6.1mmol/L、餐后2小时血糖维持在7.0～7.6mmol/L之间，口干、多尿及夜尿症状消失，体重增加至56.5kg。

张×英，女性，52岁，患2型糖尿，病史4年。一直服用二甲双胍、优降糖，空腹血糖维持在7.2～8.6mmol/L之间，但自觉症状不明显，被随机分在观察病例第二组。停服原口服降糖药三天，空腹血糖为10.6mmol/L，餐后2小时血糖为18.8mmol/L。改服发明组合药物胶囊半月后空腹血糖维持在6.2～7.1mmol/L之间，餐后2小时血糖维持在8.4～9.3mmol/L之间。继续服用一个半月后，空腹血糖维持在5.1～6.3mmol/L之间，餐后2小时血糖在6.8～7.8mmol/L之间。

本发明所提供的植物药组合物为纯天然植物制剂，以上临床实验结果说明本发明天然植物制剂用于2型糖尿病患者取得了良好的效果，且没有长期服用化学药物对肝肾等器官的毒副作用。除个别患者有轻微上腹饱胀感外，一般无不良反应。但该制剂和合成西药相比起效时间较慢，服用初期不需要停服原降糖药物。根据病情轻重和血糖情况，可联合使用其他降糖药物。

本发明所述的药物组合物的主要优点是通过多种降糖机理的协同作用，可以显著改善病人血糖、尿糖水平，同时还有降低血脂的功效。临床服用结果显示：病人服药后除血糖、血脂指标下降外，其他症状如口渴、尿频、全身乏力等症状也得到明显改善。对延缓糖尿病并发症的发生与发展有着重要的意义。本发明药物的协同作用是依靠组合药物中的多种已知有效组合的协同作用来实现的。这些已知有效组合的作用包括刺激胰岛β细胞的再生，促进肝糖原和肌糖原的合成，改善肝脏和肌肉等组织细胞对胰岛素的抵抗以及抑制小肠内a-葡糖苷酶的活性以控制淀粉等多糖类在小肠中的分解和吸收。

本发明药物组合物的口服给药剂量根据临床病人的年龄、体重、病史、全身状况、血糖、血脂水平等因素来决定。口服给药剂量的范围可以从每天0.5g到每天15g。优选口服给药剂量的范围是每天2g到5g，分成二到三次，餐前15分钟到30分钟服用。

植物组合药物活性组份及口服制剂指纹图谱的建立

本发明也提供了上述植物组合药物活性组份和制剂的鉴定检测和质量控制方法，并通过高压液相色谱和高分辨高灵敏度质谱建立了相应的指纹图谱。

1.高效液相色谱仪的测试仪器及条件：

高压液相色谱仪为安捷伦1100，包括四元泵，真空脱气系统，自动进样器，二极阵列和可变波长检测器。图形及数据处理：HP化学工作站。色谱柱：Waters Symmetry C₁₈反相柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相A为甲醇，流动相B为0.1％三氟乙酸，流速为1mL/min，检测波长为260nm，280nm，和320nm，洗脱梯度条件见表4。

       表4高效液相色谱流动相洗脱梯度

时间(分钟)	A(甲醇)％	B(0.1％三氟乙酸水溶液)％
			0	15	85
5	15	85
			20	85	15
24	85	15
			25	15	85

1.1高效液相色谱指纹图谱样品的准备

1.1.1、精确称取了100.0mg供试样品，置于100mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，用去离子水稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成制剂供试样品溶液备用。

1.1.2、精确称取了10.0mg芒果苷标准品置于50mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成标准品溶液备用。

1.1.3、精确称取了5.0mg紫檀芪标准品置于50mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成标准品溶液备用。

1.2高效液相色谱供试样品指纹图谱的测定

精密吸取供试样品溶液和标准品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行测定。分别得到相应的供试样品和标准品的相对保留时间和相对峰面积，下述指纹图谱数据用相对保留时间(相对峰总面积％)来表示。相对保留时间以分钟计算。

2.液质联用HPLC/MS测试仪器，条件及分析方法

2.1高效液相色谱仪器及条件：

仪器为Waters1525，色谱柱为Waters Symmetry C₁₈反相柱，150mm×2.1mm，3μm)，流动相A：甲醇-三氟乙酸(99.95∶0.05)，流动相B：水-三氟乙酸(99.95∶0.05)。流速为0.1mL/min，梯度洗脱条件见表5

                表5液质联用高效液相色谱流动相洗脱梯度

时间(Min)	流动相A(％)	流动相B(％)
				甲醇-三氟乙酸(99.95∶0.05)	水-三氟乙酸(99.95∶0.05)
0.0	25	75
			35.0	100	0
45.0	100	0
			46.0	25	75

2.2高分辨高灵敏度质谱条件

仪器为英国Micromass高分辨高灵敏度质谱仪(Q-Tof Ultima MassSpectrometer)；ESI电喷雾电离，正离子化模式，质量范围m/z：50-1100；锥孔电压20V；源温度80℃；去溶剂温度160℃；所有测定均在正离子方式下进行，仪器校正：用Glu-fib(Sigma)的串联质谱碎片校正，质量准确度±0.01Da；处理软件：MassLynx4.0。

液质联用HPLC/MS样品的准备

1.1.1精确称取了100.0mg供试样品，置于100mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，用去离子水稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成制剂供试样品溶液备用。

1.1.2精确称取了10.0mg芒果苷标准品置于50mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成标准品溶液备用。

1.1.3精确称取了5.0mg紫檀芪标准品置于50mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，加入甲醇稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成标准品溶液备用。

2.4高分辨高灵敏度质谱供试样品指纹图谱的测定

2.4.1精密吸取供试样品溶液，注入液质联用HPLC/MS高效液相色谱仪进行测定。得到相应的供试样品的高效液相色谱图和高分辨高灵敏度质谱的质量指纹图谱。

2.4.2精密吸取供试样品溶液，直接注入高分辨高灵敏度质谱仪测定，得到高分辨高灵敏度质谱供试样品的质量指纹图谱

附图说明

图1治疗前后临床疗效观察试验结果(空腹血糖)

图2高效液相色谱(RP-HPLC)指纹图谱

实施例5，片剂制备实例1，波长280nm

图3高效液相色谱(RP-HPLC)指纹图谱

实施例8，片剂制备实例4，波长320nm

图4高效液相色谱(RP-HPLC)指纹图谱

实施例9，胶囊制备1，波长320nm

图5高效液相色谱(RP-HPLC)指纹图谱

实施例11胶囊制备3，波长320nm

图6标准品芒果苷(Mangiferin)和紫檀芪(Pterostilbene)

波长320nm

图7高分辨高灵敏度质谱指纹图谱

实施例5，片剂制备实例1，未经高效液相色谱仪的质谱指纹图谱图8液质联机(HPLC-MS)液相色谱指纹图谱

实施例11胶囊制备3，液质联机(HPLC-MS)液相色谱指纹图谱

图9液质联机(HPLC-MS)质谱指纹图谱

实施例11胶囊制备3，液质联机(HPLC-MS)质谱指纹图谱

图10高分辨高灵敏度质谱指纹图谱

实施例10胶囊制备2，未经高效液相色谱仪的质谱指纹图谱

实施例10胶囊制备2，加标准品未经高效液相色谱仪的质谱指纹图谱

本发明植物药组合药物活性组份及制剂的制备方法

实施例1网状五层龙活性组份的制备方法

将1公斤网状五层龙根茎去除杂质、洗净后凉干，然后粉碎成粗粉。加8公斤水煎煮2次，每次2小时。过滤，合并滤液。50℃减压浓缩，加70％乙醇静置过夜，分离上清液，50℃减压回收乙醇，浓缩、干燥、粉碎。过80目筛得到76克网状五层龙提取物。

高效液相色谱指纹图谱的主要指纹峰的相对保留时间(相对峰面积％)：

UV＝260nm：2.314(9.432)，4.616(3.778)，4.855(4.899)，8.324(4.350)，10.653(5.221)，11.300(7.160)，11.832(14.827)，12.239(6.813)，14.711(1.314)，

UV＝320nm：11.832(63.255)，12.242(18.141)

实施例2圆叶五层龙活性组份的制备方法

将1公斤圆叶五层龙根茎去除杂质、洗净后凉干，然后粉碎成粗粉。加8公斤水煎煮2次，每次2小时。过滤，合并滤液。50℃减压浓缩，加70％乙醇静置过夜，分离上清液，50℃减压回收乙醇，浓缩、干燥、粉碎。过80目筛得到78克圆叶五层龙提取物。

高效液相色谱指纹图谱的主要指纹峰的相对保留时间(相对峰面积％)：

UV＝260nm：

2.326(6.928)，3.240(3.805)，4.880(3.677)，8.324(2.491)，9.457(2.569)，11.287(18.765)，11.821(25.358)，12.228(9.237)，22.082(1.119)，24.618(2.482)，

UV＝320nm：11.821(70.244)，12.230(12.423)

实施例3囊状紫檀活性组份的制备方法

将1公斤切割好的囊状紫檀树茎去除杂质、洗净，干燥后粉碎成粗粉。加8公斤热水浸后泡煎煮3次。过滤，合并水提取液。浓缩后加70％乙醇静置过夜，分离上清液，50℃减压回收乙醇，浓缩、干燥、粉碎。过100目筛得到82克囊状紫檀提取物。

高效液相色谱指纹图谱的主要指纹峰的相对保留时间(相对峰面积％)：

UV＝260nm：2.879(7.443)，3.769(5.012)，4.590(2.979)，6.406(3.084)，8.290(3.010)，9.421(3.821)，9.828(3.257)，10.642(3.872)，10.998(3.967)，11.413(6.090)，12.533(8.826)，13.329(8.064)，13.937(4.962)，14.423(5.539)，14.771(4.214)，15.213(6.542)，16.027(5.473)，16.734(5.059)，18.029(2.760)，

UV＝320nm：9.362(22.424)，9.824(8.234)，10.998(12.085)，18.482(5.558)，19.720(30.345)，

实施例4匙羹藤活性组份的制备方法

将1公斤匙羹藤叶除去杂质、洗净，然后粉碎成粗粉。加7升乙醇回流提取2次，每次2小时。合并滤液，过滤，分离上清液，50℃减压回收乙醇，浓缩后再加70％乙醇静置过夜，过滤后将上清液50℃减压回收乙醇至无醇味。干燥、粉碎、过100目筛得到72克匙羹藤活性组产物。

高效液相色谱指纹图谱的主要指纹峰的相对保留时间(相对峰面积％)：

UV＝260nm：2.198(1.615)，2.635(2.045)，11.910(2.089)，12.475(2.278)，13.652(7.064)，14.770(12.758)，15.820(7.647)，16.409(5.207)，17.560(8.137)，18.201(6.527)，18.753(4.839)，19.246(5.758)，19.512(2.980)，20.042(6.507)，20.329(6.108)，21.441(11.749)，21.985(3.495)

UV＝320nm：12.354(1.500)12.725(2.979)，14.112(7.436)，14.372(4.793).14.833(7.120)，15.666(5.367).16.979(19.200)，18.939(8.394)，19.152(10.050)，20.019(8.496)，20.350(7.040)，21.433(17.630)

实施例5片剂制备实例1

网状五层龙活性组份           200g

囊状紫檀活性组份             175g

匙羹藤活性组份               125g

微晶纤维素                   188g

羧甲基淀粉钠                 65g

硬脂酸镁                     6g

十二烷基硫酸钠               5g

微粉硅胶                     3g

各原料先过100目筛，再按上述配方称取植物提取物活性组份和辅料，混合均匀。湿法制粒后压片，包衣，片重505毫克。

高效液相色谱指纹图谱的主要指纹峰的相对保留时间(相对峰面积％)：

UV＝280nm：6.927(5.239)，9.425(15.468)，9.706(15.468)，10.056(7.807)，11.203(11.555)，11.673(4.543)，12.321(2.557)，13.066(3.229)，14.600(5.033)，15.418(5.033)，16.091(3.833)，17.031(3.991)，18.228(5.240)，19.850(2.214)，21.505(0.582)，

UV＝320nm：9.428(13.886)，9.868(6.657)，10.973(11.886)，11.410(3.492)，

11.788(4.525)，12.097(4.767)，12.497(5.070)，13.312(6.873)，14.366(9.741)、

14.819(3.556)，15.154(3.472)，15.611(4.089)，19.662(14.190)，

实施例6片剂制备实例2

圆叶五层龙活性组份           200g

囊状紫檀活性组份             175g

匙羹藤活性组份               125g

微晶纤维素                   188g

羧甲基淀粉钠                 65g

硬脂酸镁                     6g

十二烷基硫酸钠               5g

微粉硅胶                     3g

各原料先过100目筛，再按上述配方称取植物提取物活性组份和辅料，混合均匀。湿法制粒后压片，包衣，片重505毫克。

实施例7片剂制备实例3

网状五层龙活性组份           200g

囊状紫檀活性组份             175g

匙羹藤活性组份               125g

硫酸氧钒                     33g

吡啶甲酸铬                   8g

一水硫酸锌                   4.5g

预交联淀粉颗粒               285g

微晶纤维素                   20g

羧甲基淀粉钠                 65g

十二烷基硫酸钠               5g

硬脂酸镁                    5g

微粉硅胶                    2.5g

各植物提取物及其余组分原料先过筛，然后按上述配方称取植物提取物活性原料及其余活性物质，混合均匀，然后将上述原料和预交联淀粉，交联羧甲基纤维素钠用10％淀粉浆制粒、干燥整粒。再和其余辅料混合均匀后压片，片剂重量为500毫克。将上述所得片剂进行包衣处理，片剂重量为510毫克。

实施例8片剂制备实例4

圆叶五层龙活性组份          200g

囊状紫檀活性组份            175g

匙羹藤活性组份              125g

硫酸氧钒                    33g

吡啶甲酸铬                  8g

一水硫酸锌                  4.5g

预交联淀粉颗粒              285g

微晶纤维素                  20g

羧甲基淀粉钠                65g

十二烷基硫酸钠              5g

硬脂酸镁                    5g

微粉硅胶                    2.5g

各植物提取物及其余组分原料先过筛，然后按上述配方称取植物提取物活性原料及其余活性物质，混合均匀，然后将上述原料和预交联淀粉，交联羧甲基纤维素钠用10％淀粉浆制粒、干燥整粒。再和其余辅料混合均匀后压片，片剂重量为500毫克。将上述所得片剂进行包衣处理，片剂重量为510毫克。

实施例9胶囊制备1

网状五层龙活性组份           200g

囊状紫檀活性组份             175g

匙羹藤活性组份               125g

硬脂酸镁                     5g

十二烷基硫酸钠               5g

微粉硅胶                     2.5g

各植物提取物及其余组分原料先过100目筛，然后按上述配方称取植物提取物活性原料，混合均匀，然后用十二烷基硫酸钠水溶液湿法制粒，干燥整粒后再和其余辅料组分混合均匀，最后将该混合物装入胶囊壳中。胶囊重量310毫克。

实施例10胶囊制备2

圆叶五层龙活性组份           200g

囊状紫檀活性组份             175g

匙羹藤活性组份               125g

硫酸氧钒                     33g

吡啶甲酸铬                   8g

硬脂酸镁                     5g

十二烷基硫酸钠               5g

微粉硅胶                     2.5g

各植物萃取物及其余组分原料先过100目筛，然后按上述配方称取植物提取物活性原料，混合均匀，然后用十二烷基硫酸钠水溶液湿法制粒，干燥整粒后再和其余辅料组分混合均匀，最后将该混合物装入明胶胶囊壳中。胶囊重量310毫克。

高效液相色谱指纹图谱的主要指纹峰的相对保留时间(相对峰面积％)：

UV＝260nm：3.721(0.648)，8.333(1.169)，9.451(2.385)，9.862(2.107)，10.668(2.243)，11.027(3.041)，11.315(3.535)，11.840(3.912)，12.245(2.952)，

12.646(4.687).13.331(8.230)，14.046(6.629)，14.423(2.998)，14.785(6.826)，

15.225(7.020)，16.023(7.424)，16.745(7.859)，18.043(5.188)，18.886(3.216)，19.271(7.238)，19.722(3.456)，20.035(4.262)，

21.450(2.924)，

UV＝320nm：9.415(16.515)，

9.861(10.021)，11.487(4.234)，11.864(7.046)，

12.570(8.156)，13.833(3.395)，14.405(3.656)，15.219(2.833)，15.666(1.594)，18.490(1.915)，18.906(1.732)，19.722(18.990)，

实施例11胶囊制备3

网状五层龙活性组份            200g

囊状紫檀活性组份              175g

匙羹藤活性组份                125g

硫酸氧钒                      33g

吡啶甲酸铬                    8g

一水硫酸锌                    4.5g

硬脂酸镁                      5g

十二烷基硫酸钠                5g

微粉硅胶                     2.5g

备植物提取物及其余组分原料先过100目筛，然后按上述配方称取植物提取物活性原料，混合均匀，然后用十二烷基硫酸钠水溶液湿法制粒，干燥整粒后再和其余辅料组分混合均匀，最后将该混合物装入明胶胶囊壳中。胶囊重量310毫克。

实施例12胶囊制备4

按实施例11胶囊制备4的比例称取切割好的网状五层龙、囊状紫檀、匙羹藤叶。加10倍的水煎煮2到3次，每次2小时。过滤，合并滤液，浓缩后加70％乙醇静置过夜，分离上清液，回收乙醇，减压浓缩至比重为1.25-1.40时得组合物植物活性浸膏，然后加入其余组分混合均匀，干燥整粒后再加入其余辅料，混合均匀后最后将该混合物装入明胶胶囊壳中。胶囊重量310毫克。

实施例13胶囊制备5

网状五层龙活性组份          460g

囊状紫檀活性组份            20g

匙羹藤活性组份              20g

硬脂酸镁                    5g

十二烷基硫酸钠              5g

微粉硅胶                    2.5g

各植物提取物及其余组分原料先过100目筛，然后按上述配方称取植物提取物活性原料，混合均匀，然后用十二烷基硫酸钠水溶液湿法制粒，干燥整粒后再和其余辅料组分混合均匀，最后将该混合物装入明胶胶囊壳中。胶囊重量310毫克。

实施例14颗粒剂制备

圆叶五层龙活性组份          200g

囊状紫檀活性组份            175g

匙羹藤活性组份              125g

硫酸氧钒                    33g

吡啶甲酸铬                  8g

一水硫酸锌                  4.5g

淀粉                        470g

微晶纤维素                  20g

硬脂酸镁                    10g

各植物萃取物及其余组分原料先过100目筛，然后按上述配方称取植物萃取物活性原料及其活性原料，混合均匀，然后淀粉液湿法制粒，干燥整粒后再和其余辅料组分混合均匀，最后将该混合物装入颗粒剂袋中。每袋颗粒剂重2.0克。

实施例15口服液制备

圆叶五层龙活性组份          199g

囊状紫檀活性组份            175g

匙羹藤活性组份              125g

硫酸氧钒                    33g

吡啶甲酸铬                  8g

一水硫酸锌                  4.5g

木糖醇                      300g

每瓶口服剂总量              100ml

各植物萃取物及其余组分原料先过100目筛，然后按上述配方称取植物萃取物活性原料取，加入适量得纯净水并进行搅办得同时，加入300克木糖醇，用稀盐酸溶液调节酸碱度至5.0，用纯净水稀释至2000毫升。

实施例16匙羹藤酸含量的测定

称取5克重的供试样品放入100毫升的三角烧瓶，缓慢加入0.1N氢氧化钠溶液使其溶解，然后用一号滤纸进行过滤。将0.1N硫酸溶液缓慢滴加到滤液中直到完全沉淀。沉淀物在室温静置60分钟。然后过滤并用去离子水洗涤过滤物直到过滤物不含酸为止。干燥过滤物然后称重。

匙羹藤酸含量(％)＝(过滤物干燥后的重量/供试样品重量)×100

Claims (17)

1.一种具有降糖降脂作用的植物药组合物，它包括圆叶五层龙、网状五层龙、囊状紫檀及匙羹藤四种植物提取物中的三种植物提取物组成，它们的重量百分比是：

圆叶五层龙            1-95％

网状五层龙            1-95％

囊状紫檀              1-95％

匙羹藤                1-95％。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于植物药组合物中的植物提取物的优选重量百分比是：

圆叶五层龙            5-60％

网状五层龙            5-60％

囊状紫檀              5-60％

匙羹藤                5-60％。

3.根据权利要求项1或2所述的组合物，其特征是所提供的植物药组合物最优选组份及相应重量百分比是：

网状五层龙            35-45％

囊状紫檀              30-40％

匙羹藤                20-30％。

4.根据权利要求项1或2所述的组合物，其特征是所提供的植物药组合物另一个最优选组份及相应重量百分比是：

圆叶五层龙            35-45％

囊状紫檀              30-40％

匙羹藤                20-30％。

5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征是它可含有以金属盐形式存在的微量元素铬，微量元素三价铬在植物药组合物活性组分中约占总重量的0.4％-5.5％。

6.根据权利要求1或2所述的植物药组合物，其特征是它可含有以金属盐形式存在的微量元素钒，它在植物药组合物活性组分中约占总重量的0.0001％-0.025％。

7.根据权利要求1或2所述的植物药组合物，其特征是它还含有以金属盐形式存在的微量元素锌，它在植物药组合物活性组分中约占总重量的0.1％-0.45％。

8.根据权利要求1或2所述的植物药组合物，其特征在于所述的组合物可以是药剂学上可应用的任何一种剂型，所有的剂型均可通过添加医学上认可的辅料或通过已知的技术而制备。

9.一种如权利要求1所述植物药组合物的制备方法，其植物提取物制备包括将圆叶五层龙、网状五层龙、囊状紫檀及匙羹藤等植物进行筛选，植物药用部位洗净、干燥、切割或研磨粉碎，然后将各植物按比例混合后加6-10倍的水煎煮2-3次，每次1-2小时；过滤合并滤液，浓缩后加70％乙醇静置过夜，分离上清液，回收乙醇，减压浓缩至比重为1.25-1.40时得组合物植物活性浸膏，然后加入其余组分和辅料混合均匀，制备制剂。

10.一种如权利要求1所述植物药组合物的制备方法，其植物提取物分别制备，包括将圆叶五层龙、网状五层龙、囊状紫檀及匙羹藤等植物进行筛选，植物药用部位洗净、干燥、切割或研磨粉碎：然后将各植物原料分别用水或乙醇进行浸泡加热提取；提取液体经过浓缩和干燥处理后得到提取物：最后将各组分按比例混合后制备制剂，其中：

A.网状五层龙活性组份的制备

将网状五层龙根茎去除杂质、洗净后凉干，然后粉碎成粗粉；加6-10倍水煎煮2-3次，每次1-2小时；过滤合并滤液；40℃-60℃减压浓缩，加70％乙醇静置过夜，分离上清液，40℃-50℃减压回收乙醇，浓缩、干燥、粉碎；过筛得到网状五层龙活性组份；

B.圆叶五层龙活性组份的制备方法

将圆叶五层龙根茎去除杂质、洗净后凉干，然后粉碎成粗粉；加6-10倍水煎煮2-3次，每次1-2小时；过滤合并滤液；40C-60℃减压浓缩，加70％乙醇静置过夜，分离上清液，40℃-50℃减压回收乙醇，浓缩、干燥、粉碎；过筛得到圆叶五层龙活性组份提取物；

C.囊状紫檀活性组份的制备方法

将切割好的囊状紫檀树茎去除杂质、洗净，干燥后粉碎成粗粉；加5-10倍水热水浸后泡煎煮2-3次，每次1-3小时；过滤合并水提取液；40℃-60℃减压浓缩后加70％乙醇静置过夜，分离上清液，40℃-50℃减压回收乙醇，浓缩，干燥、粉碎；过筛得囊状紫檀活性组份；

D.匙羹藤活性组份的制备方法

将匙羹藤叶除去杂质、洗净，然后粉碎成粗粉；加5-10倍乙醇回流提取2-3次，每次1-3小时；合并滤液，过滤，40℃-50℃减压回收乙醇，浓缩后再加70％乙醇静置过夜，过滤后将上清液40℃-50℃减压回收乙醇至无醇味；干燥、粉碎、过筛得到匙羹藤活性组份提取物。

11.权利要求1或2所述的植物药组合物在制备治疗糖尿病、辅助降血脂、改善糖尿病患者全身症状及并发症的药物中的应用。

12.权利要求5或6或7所述的植物药组合物在制备治疗糖尿病、辅助降血脂、改善糖尿病患者全身症状及并发症的药物中的应用。

13.根据权利要求11所述植物药组合物的用途，其特征在于该植物药组合物可与治疗糖尿病有关的合成药物的联合应用。

14.根据权利要求13所述植物药组合物的用途，其特征在于所述的与治疗糖尿病有关的合成药物是刺激胰岛素分泌的药物。

15.根据权利要求13所述植物药组合物的用途，其特征在于所述的与治疗糖尿病有关的合成药物是胰岛素增敏剂。

16.根据权利要求13所述植物药组合物的用途，其特征在于所述的与治疗糖尿病有关的合成药物是α-糖苷酶抑制剂。

17.权利要求1或8所述植物药组合物的鉴定检测和质量控制方法，包括植物组合药物活性组份及口服制剂指纹图谱的建立：

A.高效液相色谱仪的测试仪器及条件：

高压液相色谱仪为安捷伦1100，包括四元泵，真空脱气系统，自动进样器，二极阵列和可变波长检测器；图形及数据处理：HP化学工作站。色谱柱：Waters Symmetry C₁₈反相柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相A为甲醇，流动相B为0.1％三氟乙酸，流速为1mL/min，检测波长为260nm，280nm，和320nm，洗脱梯度条件如下：

             高效液相色谱流动相洗脱梯度   时间(分钟)   A(甲醇)％   B(0.1％三氟乙酸水溶液)％   0   15   85   5   15   85   20   85   15   24   85   15   25   15   85

a.高效液相色谱指纹图谱样品的准备

(a)精确称取了100.0mg供试样品，置于100mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，用去离子水稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成制剂供试样品溶液备用；

(b)精确称取了10.0mg芒果苷标准品置于50mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成标准品溶液备用；

(c)精确称取了5.0mg紫檀芪标准品置于50mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成标准品溶液备用；

b.高效液相色谱供试样品指纹图谱的测定

精密吸取供试样品溶液和标准品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行测定；分别得到相应的供试样品和标准品的相对保留时间和相对峰面积，下述指纹图谱数据用相对保留时间(相对峰总面积％)来表示；相对保留时间以分钟计算；

B.液质联用HPLC/MS测试仪器，条件及分析方法

a.高效液相色谱仪器及条件：

仪器为Waters1525，色谱柱为Waters Symmetry C₁₈反相柱，150mm×2.1mm，3μm)，流动相A：甲醇-三氟乙酸(99.95∶0.05)，流动相B：水-三氟乙酸(99.95∶0.05)；流速为0.1mL/min，梯度洗脱条件如下：

                液质联用高效液相色谱流动相洗脱梯度   时间(Min)   流动相A(％)   流动相B(％)   甲醇-三氟乙酸(99.95∶0.05)   水-三氟乙酸(99.95∶0.05)   0.0   25   75   35.0   100   0   45.0   100   0   46.0   25   75

b.高分辨高灵敏度质谱条件

仪器为英国Micromass高分辨高灵敏度质谱仪(Q-Tof UltimaMass Spectrometer)；ESI电喷雾电离，正离子化模式，质量范围m/z：50-1100；锥孔电压20V；源温度80℃；去溶剂温度160℃；所有测定均在正离子方式下进行，仪器校正：用Glu-fib(Sigma)的串联质谱碎片校正，质量准确度±0.01Da；处理软件：MassLynx4.0；

c.液质联用HPLC/MS样品的准备

(a)精确称取了100.0mg供试样品，置于100mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，用去离子水稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成制剂供试样品溶液备用；

(b)精确称取10.0mg芒果苷标准品置于50mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成标准品溶液备用；

(c)精确称取了5.0mg紫檀芪标准品置于50mL容量瓶中，加入50mL甲醇，超声溶解，加入甲醇稀释至刻度，摇匀后经45μM微孔滤膜过滤，制备成标准品溶液备用；

d.高分辨高灵敏度质谱供试样品指纹图谱的测定

(a)精密吸取供试样品溶液，注入液质联用HPLC/MS高效液相色谱仪进行测定；得到相应的供试样品的高效液相色谱图和高分辨高灵敏度质谱的质量指纹图谱；

(b)精密吸取供试样品溶液，直接注入高分辨高灵敏度质谱仪测定，得到高分辨高灵敏度质谱供试样品的质量指纹图谱。

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