CN101019886A - 大枣多糖在治疗肝损伤中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种大枣多糖在治疗肝损伤中的用途，可有效用于解决在制备治疗肝损伤药物中的应用问题，其解决的技术方案是，选取大枣成熟果实，处理干净后，将大枣粉碎为块状，用乙醇回流脱脂，药渣晾干，水浴提取，浓缩，调醇浓度，收集醇沉物；将粗沉物溶解，脱蛋白，置透析袋在流水中透析，再调醇浓度沉淀，干燥得大枣多糖，该大枣多糖用于制备治疗肝损伤药物，经动物实验，大枣多糖对肝损伤有良好的保护治疗作用，提供了大枣的医学新用途，是医药中的一大发明，其应用为中医药学作出创造性贡献，造益于人类。
Description
一、技术领域
本发明涉及物质的医药用途，特别是一种大枣多糖在治疗肝损伤中的用途。
二、背景技术
大枣是鼠李科植物枣的干燥成熟果实，其药用价值早已被公认，具有补脾和胃、益气生津之功能，可用于治疗脾胃虚弱、体倦少食和脏躁证。大枣中含有蛋白质、糖类、有机酸、粘液质、维生素ABC、微量钙、磷、铁，随着科学技术的发展和对中医药学研究的深入，其大枣的药用价值在拓宽，特别是在提取的活性成分应用上有了新的突破与发展，但大枣多糖作为从大枣中提取的活性物质用于治疗肝损伤、保护肝脏至今尚未见有任何报导。
三、发明内容
针对上述情况，本发明之目的就是提供一种大枣多糖在治疗肝损伤中的用途，可有效用于解决在制备治疗肝损伤药物中的应用问题，其解决的技术方案是，选取大枣成熟果实，处理干净后，将大枣粉碎为块状，用乙醇回流脱脂，药渣晾干，水浴提取，浓缩，调醇浓度，收集醇沉物；将粗沉物溶解，脱蛋白，置透析袋在流水中透析，再调醇浓度沉淀，干燥得大枣多糖，该大枣多糖用于制备治疗肝损伤药物，经动物实验，大枣多糖对肝损伤有良好的保护治疗作用，提供了大枣的医学新用途，是医药中的一大发明，其应用为中医药学作出创造性贡献，造福于人类。
四、具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
大枣采用秋季成熟果实，拣净杂质，晒干或烘至皮软，再行晒干，将大枣粉碎为块状，用质量浓度为95％的乙醇回流脱脂，药渣晾干，由90℃～100℃水浴提取，浓缩水提液；调醇浓度为60％，醇沉，将粗沉物加温水溶解，再用质量浓度为15％的三氯乙酸脱蛋白，置透析袋中，对流水透析，将透析液调醇浓度为60％，醇沉，醇沉物真空干燥即得大枣多糖，经硫酸蒽酮法测其多糖含量为95％左右，其提取的大枣多糖用于制备治疗肝损伤药物，对肝损伤有良好保护作用，非常利于肝损伤的治疗，并经动物实验得到了充分证明，有关试验资料如下。
1.实验材料
1.1药品试剂
大枣购于河南省医药公司，经鉴定大枣为鼠李科植物枣(Ziziphusjujube Mill的干燥成熟果实)正品大枣，按上述方法提取大枣多糖；对照组肝泰乐，其它药品有：乙硫氨酸、扑热息痛、丙氨酸氨基转移酶试剂盒、甘油三酯测定试剂盒、生理盐水。
1.2实验动物
昆明种小鼠，体重20～22g，SD大鼠，体重170～190g，雌雄各半，均由河南省医学实验动物中心提供。
1.3实验仪器
LEICA RM2125型切片机，德国；OLYMPUS TOKYO显微照相机，JAPAN；722分光光度计，上海分析仪器厂生产。
2.验方法与结果
2.1对CCL4致小鼠肝脏病理变化的影响
取小鼠50只，雌雄各半，随机均匀分为5组，其中4组口服CCL4造肝损伤模型。造模型4组分别灌服大、小剂量的大枣多糖液(用生理盐水配大枣多糖浓度分别为20mg/ml、10mg/ml、0.2ml/10g、400mg/kg、200mg/kg，肝泰乐混悬液(用生理盐水配成浓度为12mg/ml、0.2ml/10g、240mg/kg)和同体积的生理盐水(0.2ml/10g)，每天给药1次，连续给药7天。分别于给药第1、4、7天给造模型小鼠加灌0.2％的CCL4花生油液，用量为10ml/kg，空白对照组灌同体积的生理盐水。于最后1次给药后2小时和给CCL4后(禁食不禁水)17小时，小鼠眼眶取血，测血清ALT水平，结果见表1。小鼠取血后处死，取肝脏，10％福尔马林固定，切片，镜检，结果见表2。
表1大枣多糖对CCL4致小鼠肝损伤模型血清ALT水平的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量(mglkg) | 血清ALT水平(u/L) |
| 空白对照组 | 10 | 58.1±7.6** | |
| 模型组 | 10 | 152.3±29.6 | |
| 肝泰乐组 | 10 | 240 | 120.2±23.7* |
| 大剂量组大枣多糖 | 10 | 400 | 85.3±26.0** |
| 小剂量组大枣多糖 | 10 | 200 | 97.0±25.4** |
*表示与模型组比P＜0.05，**表示与模型组比P＜0.01
从上表可看出，与空白对照组比，模型组血清ALT水平显著升高(P＜0.01)，说明造小鼠肝损伤模型成功；与模型组比，大、小剂量大枣多糖组均可显著降低CCL4致小鼠肝损伤模型血清ALT水平(P＜0.01)，肝泰乐组可明显降低CCL4致小鼠肝损伤模型血清ALT水平(P＜0.05)，说明大枣多糖对CCL4所致小鼠肝损伤有好的对抗作用。
病理观察，本实验模型组的动物肝脏主要病理变化为肝细胞出现广泛的变性和点状坏死及淋巴细胞浸润；用药各组对这一损伤均有不同程度的改善，按其病理变化分为四级：“-”：肝脏组织结构及细胞均正常；“+”：肝细胞出现相对广泛的浊肿及少量点状坏死；“++”：肝细胞出现广泛的浊肿及增多的点状坏死；“+++”：肝细胞出现广泛的浊肿及中度的空泡变性和脂肪变性，出现广泛的点状坏死。
表1大枣多糖对CCL4致小鼠肝脏病理变化的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量(mglkg) | - | + | ++ | +++ |
| 空白对照组 | 10 | 10 | - | - | - | |
| 模型组 | 10 | - | - | 1 | 9 | |
| 肝泰乐组 | 10 | 240 | - | 1 | 2 | 7 |
| 大剂量组大枣多糖 | 10 | 400 | 9 | 1 | - | - |
| 小剂量组大枣多糖 | 10 | 200 | 6 | 2 | 2 | - |
从上表可看出，空白对照组动物肝组织正常，与正常组比较，模型组动物肝组织浊肿、空泡变性和脂肪变性明显，点状坏死明显，经Ridit检验p＜0.01，说明造小鼠肝损伤模型成功。与模型组比，肝泰乐组肝组织浊肿、空泡变性和脂肪变性有所减轻，点状坏死有所减少，但经Ridit检验p＞0.05；大枣多糖大、小剂量组对CCL4致小鼠肝脏病理变化可显著减轻，使肝组织浊肿、空泡变性和脂肪变性显著减轻，点状坏死显著减少(P＜0.01)，以大枣多糖大剂量组对CCL4致小鼠肝脏病理变化的减轻作用更好。
2.2对乙硫氨酸致小鼠肝损伤病理变化的影响
取小鼠50只，雌雄各半，随机均匀分为5组，其中4组口服乙硫氨酸造肝损伤模型。造模型4组分别灌服大、小剂量的大枣多糖液(用生理盐水配大枣多糖浓度为20mg/ml、10mg/ml、0.2ml/10g、400mg/kg、200mg/kg)，肝泰乐混悬液(用生理盐水配成浓度为12mg/ml、0.2ml/10g、240mg/kg)和同体积的生理盐水(0.2ml/10g)，每天给药1次，连续给药7天。于第6天灌胃后，每鼠按250mg/kg给小鼠灌服乙硫氨酸混悬液(12.5mg/ml、0.2ml/10g、250mg/kg、)，空白对照组灌同体积的生理盐水。于最后1次给药后2小时和给乙硫氨酸后(禁食不禁水)16小时，小鼠眼眶取血，测血清ALT水平，结果见表3。小鼠取血后处死，取肝脏，一半用生理盐水制肝匀浆，测定肝匀浆中甘油三酯水平，结果见表3；另一半肝组织用10％福尔马林固定，切片，镜检，结果见表4。
表3大枣多糖对乙硫氨酸致小鼠肝损伤模型血清ALT水平和肝匀浆TG水平的影响
| 空白对照组 | 动物数(n) | 剂量(mglkg) | 血清ALT水平(u/L) | 肝匀浆TG水平(mmol/100g) |
| 空白对照组 | 10 | 54.4±7.9** | 0.914±0.074** | |
| 模型组 | 10 | 164.6±28.4 | 1.936±0.355 | |
| 肝泰乐组 | 10 | 240 | 108.3±22.0** | 1.400±0.297** |
| 大剂量组大枣多糖 | 10 | 400 | 75.6±21.0** | 1.088±0.258** |
| 小剂量组大枣多糖 | 10 | 200 | 93.1±24.7** | 1.199±0.228** |
**表示与模型组比P＜0.01
从上表可看出，与空白对照组比，模型组血清ALT水平显著升高(P＜0.01)、血清TG水平显著升高(P＜0.01)，说明造小鼠肝损伤模型成功；与模型组比，大、小剂量大枣多糖组和肝泰乐组均可显著降低乙硫氨酸致小鼠肝损伤模型血清ALT水平(P＜0.01)，可显著降低乙硫氨酸致小鼠肝损伤模型肝匀浆TG水平(P＜0.01)。说明大枣多糖对乙硫氨酸所致小鼠肝损伤有好的对抗作用。
各组小鼠肝组织光镜下观察：正常组小鼠肝细胞索及肝窦均正常，无浊肿和充血及炎细胞浸润的病理现象；模型组小鼠肝脏有明显的充血及肝细胞浊肿，出现明显点状坏死等病理变化；肝泰乐组小鼠肝脏充血明显减轻，肝细胞浊肿也得到恢复，点状坏死明显减少；大枣多糖大剂量组小鼠肝细胞浊肿得到一定恢复，肝窦相对较窄，充血不太明显，点状坏死消失；大枣多糖小剂量组小鼠肝细胞浊肿有所减轻，充血不太明显，但还有轻度充血，肝细胞再生明显。
根据各组小鼠肝脏病理组织学观察，按肝细胞损伤的程度，将浊肿变性的情况分为四级：“-”：肝细胞、肝窦均正常；“+”：肝细胞浊肿得到恢复，充血不明显，点状坏死消失；“++”：肝细胞充血减轻，肝细胞浊肿得到一定恢复，点状坏死明显减少；“+++”：肝细胞有明显的充血及肝细胞浊肿，点状坏死明显。
表4大枣多糖对乙硫胺酸致小鼠肝损伤病理变化的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量(mglkg) | - | + | ++ | +++ |
| 空白对照组 | 10 | 10 | - | - | - | |
| 模型组 | 10 | - | - | 2 | 8 | |
| 肝泰乐组 | 10 | 240 | - | 4 | 6 | - |
| 大剂量组大枣多糖 | 10 | 400 | - | 8 | 2 | - |
| 小剂量组大枣多糖 | 10 | 200 | - | 6 | 4 | - |
从上表可看出，空白对照组动物肝组织均正常，与正常组比较，模型组动物肝组织充血、肝细胞浊肿及点状坏死明显明显，经Ridit检验p＜0.01，说明造小鼠肝损伤模型成功。与模型组比，肝泰乐组、大枣多糖大、小剂量组对乙硫胺酸致小鼠肝损伤病理变化显著减轻，使肝细胞充血及肝细胞浊肿显著减轻，点状坏死显著减少(p＜0.01)，以大枣多糖大剂量组对乙硫胺酸致小鼠肝损伤病理变化的改善作用更好。
2.3对扑热息痛致小鼠肝脏病理变化的影响
取小鼠50只，雌雄各半，随机均匀分为5组，其中4组腹腔注射扑热息痛混悬液造肝损伤模型。造模型4组分别灌服大、小剂量的大枣多糖液(用生理盐水配大枣多糖浓度为20mg/ml、10mg/ml、0.2ml/10g、400mg/kg、200mg/kg)，肝泰乐混悬液(用生理盐水配成浓度为12mg/ml、0.2ml/10g、240mg/kg)和同体积的生理盐水(0.2ml/10g)，每天给药1次，连续给药7天。于第6天给药后每鼠按150mg/kg腹腔注射扑热息痛混悬液(15mg/ml，0.1ml/10g)，第7天正常灌药，空白对照组腹腔注射同体积的生理盐水。于最后1次给药后2小时和腹腔注射扑热息痛混悬液(禁食不禁水)16小时，小鼠眼眶取血，测血清ALT水平，结果见表5。小鼠取血后处死，取肝脏，10％福尔马林固定，切片，镜检，结果见表6。
表5大枣多糖对扑热息痛致小鼠肝损伤模型血清ALT水平的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量(mglkg) | 血清ALT水平(u/L) |
| 空白对照组 | 10 | 45.2 ±9.2** | |
| 模型组 | 10 | 128.6±33.4 | |
| 肝泰乐组 | 10 | 240 | 85.4±20.6** |
| 大剂量组大枣多糖 | 10 | 400 | 61.3±19.1** |
| 小剂量组大枣多糖 | 10 | 200 | 77.2±16.4** |
**表示与模型组比P＜0.01
从上表可看出，与空白对照组比，模型组血清ALT水平显著升高(P＜0.01)，说明造大鼠肝损伤模型成功；与模型组比，大、小剂量大枣多糖组和肝泰乐组均可显著降低扑热息痛致小鼠肝损伤模型血清ALT水平(P＜0.01)。说明大枣多糖对扑热息痛所致小鼠肝损伤有好的结抗作用。
肝组织光镜下显示：正常组小鼠肝细胞及肝窦均正常，胞核结构清晰，无浊肿、充血及炎细胞浸润的病理现象；模型组小鼠肝脏有明显的充血及空泡样变，嗜酸性变增多，肝窦消失；肝泰乐组小鼠肝脏充血不明显，但肝细胞还有浊肿和肝窦变窄病理改变；大枣多糖大剂量组小鼠肝细胞有轻度充血现象，肝细胞浊肿明显减轻，肝窦已变宽；大枣多糖小剂量组小鼠肝细胞浊肿有所减轻，充血不太明显，肝细胞再生明显。
根据各组大鼠肝脏病理组织学观察，按肝细胞损伤的程度，将浊肿变性的情况分为四级：“-”：肝细胞、肝窦均正常；“+”：肝细胞充血和浊肿明显减轻，肝窦变宽；“++”：肝细胞充血和浊肿减轻，肝窦相对狭窄；“+++”：肝细胞出现显著的充血及空泡样变，嗜酸性变增多，肝窦消失。
表6大枣多糖对扑热息痛致小鼠肝脏病理变化的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量(mglkg) | - | + | ++ | +++ |
| 空白对照组 | 10 | 10 | - | - | - | |
| 模型组 | 10 | - | - | 3 | 7 | |
| 肝泰乐组 | 10 | 240 | - | 3 | 7 | - |
| 大剂量组大枣多糖 | 10 | 400 | - | 7 | 3 | - |
| 小剂量组大枣多糖 | 10 | 200 | - | 5 | 5 | - |
从上表可看出，空白对照组动物肝组织正常，与正常组比较，模型组动物肝细胞充血及空泡样变浊肿变性明显，经Ridit检验p＜0.01，说明造小鼠肝损伤模型成功。与模型组比，肝泰乐组、大枣多糖大、小剂量组对扑热息痛致小鼠肝脏病理变化显著减轻，使肝细胞充血及空泡样变浊肿变性显著减轻(p＜0.01)，以大枣多糖大剂量组对扑热息痛致小鼠肝脏病理变化的减轻作用更好。
2.4对CCL4致大鼠肝脏病理变化的影响
取大鼠50只，雌雄各半，随机均匀分为5组，其中4组皮下注射CCL4造大鼠肝损伤模型。造模型4组分别灌服大、小剂量的大枣多糖液(用生理盐水配大枣多糖浓度为10mg/ml、5mg/ml、2ml/100g、200mg/kg、100mg/kg)，肝泰乐混悬液(用生理盐水配成浓度为6mg/ml、2ml/100g、120mg/kg)和同体积的生理盐水(2ml/100g)，每天给药1次，连续给药7天。分别于给药第1、5天给造模型大鼠皮下注射25％的CCL4花生油液，用量为0.5ml/100g，空白对照组皮下注射同体积的生理盐水。于最后1次给药后2小时和给CCL4后(禁食不禁水)17小时，小鼠眼眶取血，测血清ALT水平，结果见表7。小鼠取血后处死，取肝脏，10％福尔马林固定，切片，镜检，结果见表8。
表7大枣多糖对CCL4致大鼠肝损伤模型血清ALT水平的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量(mglkg) | 血清ALT水平(u/L) |
| 空白对照组 | 10 | 52.2±8.7** | |
| 模型组 | 10 | 155.9±27.4 | |
| 肝泰乐组 | 10 | 240 | 92.1±22.5** |
| 大剂量组大枣多糖 | 10 | 400 | 83.9±22.5** |
| 小剂量组大枣多糖 | 10 | 200 | 76.1±20.2** |
**表示与模型组比P＜0.01
从上表可看出，与空白对照组比，模型组血清ALT水平显著升高(P＜0.01)，说明造大鼠肝损伤模型成功；与模型组比，大、小剂量大枣多糖组和肝泰乐组均可显著降低CCL4致大鼠肝损伤模型血清ALT水平(P＜0.01)。说明大枣多糖对CCL4所致大鼠肝损伤有显著结抗作用。
各组大鼠肝组织光镜观察显示：正常组大鼠肝小叶中的肝细胞索呈放射状排列，肝细胞正常，肝窦正常，胞核结构清晰，无浊肿和充血及炎细胞浸润的病理现象；模型组大鼠肝小叶已分辨不清，被脂肪变的肝细胞破坏，肝脏95％的肝细胞已完全脂肪变，部分动物肝脏汇管区出现大量纤维间隔的增生，出现肝纤维化；肝泰乐组大鼠肝脏的脂肪变明显减轻，脂肪变主要在肝小叶周边较严重；大枣多糖大剂量组肝细胞脂肪变病理改变明显减轻和改善，炎细胞浸润明显减轻，肝窦基本恢复正常，中央静脉周围部分肝细胞已恢复正常，周边肝细胞仍处于浊肿状态，个别肝细胞处于气球样变；大枣多糖小剂量组肝细胞脂肪变病理改变显著减轻和改善，肝窦基本恢复正常，肝细胞索呈放射状排列，肝细胞浊肿明显恢复，可见明显的肝细胞再生。
根据各组大鼠肝脏病理组织学观察，按肝细胞损伤的程度，将浊肿变性的情况分为四级：“-”：肝小叶、肝细胞索、肝窦均正常；“+”：肝细胞出现轻度的脂肪变，肝细胞出现脂滴，少数肝细胞出现大的脂泡；“++”：肝细胞大的脂泡明显增多；“+++”：肝细胞大的脂泡显著增多，并出现大量纤维增生纤维化。
表8大枣多糖对CCL4致大鼠肝脏病理变化的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量(mglkg) | - | + | ++ | +++ |
| 空白对照组 | 10 | 10 | - | - | - | |
| 模型组 | 10 | - | - | 4 | 6 | |
| 肝泰乐组 | 10 | 240 | - | 3 | 7 | - |
| 大剂量组大枣多糖 | 10 | 400 | - | 5 | 5 | - |
| 小剂量组大枣多糖 | 10 | 200 | - | 8 | 2 | - |
从上表可看出，正常组动物肝组织正常，与空白对照组比较，模型组动物肝组织脂泡变性明显，并出现大量纤维增生纤维化，经Ridit检验p＜0.01，说明造大鼠肝损伤模型成功。与模型组比，肝泰乐组、大枣多糖大、小剂量组对CCL4致大鼠肝脏病理变化显著减轻，使肝细胞组织脂泡变性显著减轻，纤维增生显著减轻(p＜0.01)，以大枣多糖小剂量组对CCL4致大鼠肝脏病理变化的减轻程度为最好。
Claims (1)
1、一种大枣多糖在治疗肝损伤中的用途，其特征在于用于制备治疗肝损伤药物中的应用。
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| CN 200710054083 CN101019886A (zh) | 2007-03-20 | 2007-03-20 | 大枣多糖在治疗肝损伤中的用途 |
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| CN 200710054083 CN101019886A (zh) | 2007-03-20 | 2007-03-20 | 大枣多糖在治疗肝损伤中的用途 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104277136A (zh) * | 2014-09-24 | 2015-01-14 | 山东省千佛山医院 | 黄河滩枣多糖、其提取精制方法及应用 |
| CN106511838A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-03-22 | 河南中医药大学 | 一种治疗酒精性肝损伤的中药颗粒 |
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2007
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20070822 |