CN101018799A

CN101018799A - 抑制血小板聚集的组合物和方法

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Publication number: CN101018799A
Application number: CNA2005800105549A
Authority: CN
Inventors: J·博耶; J·G·道格拉斯三世; S·R·谢弗; P·S·沃森; R·克里希纳穆斯
Original assignee: North Carolina State University; Inspire Pharmaceuticals Inc
Current assignee: North Carolina State University; Inspire Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2004-03-30
Filing date: 2005-03-30
Publication date: 2007-08-15
Also published as: KR20070003993A; US20040220133A1; US7132408B2; WO2005097814A3; AU2005230677A1; MXPA06011136A; BRPI0508062A; JP2007531737A; RU2006138015A; CA2561958A1; WO2005097814A2; EP1758915A2

Abstract

本发明针对一种预防或治疗与血小板聚集相关的疾病或病况的方法。该方法还针对一种治疗血栓形成的方法。该方法包括对个体施用一种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的P2Y₁₂受体拮抗剂化合物，其中所述量有效结合血小板上的P2Y₁₂受体，并抑制ADP－诱导的血小板聚集。本发明有用的P2Y₁₂受体拮抗剂化合物包括通式(I)的单核苷5′－单磷酸、单核苷多磷酸和二核苷多磷酸或其盐。本发明还提供了新颖的单核苷5′－单磷酸、二核苷二磷酸化合物。本发明还提供了包含药物载体和单核苷5′－单磷酸或二核苷二磷酸的药物制剂。

Description

抑制血小板聚集的组合物和方法

技术领域

本发明涉及单-和二核苷多磷酸化合物和使用这些化合物预防或治疗与血小板聚集有关的疾病或病况，包括人和其它哺乳动物的血栓生成的方法。

发明背景

止血是受损血管停止出血的自发过程。当切开时前毛细血管立即收缩；在几秒钟内，凝血细胞或血小板通过称为血小板粘附的过程向受损血管暴露的基质集中。在称为血小板聚集的现象中，血小板还彼此粘合形成血小板栓，以迅速停止出血。

血管内血栓导致止血的病理性紊乱。血小板粘附和聚集是血管内血栓形成的关键事件。在患病血管中的湍流血流条件下，或由于其它循环细胞和血管中排列的受损内皮细胞释放介导物，血小板被活化，在血管损伤位点聚集，并引来更多血小板开始形成血栓。血栓可长到足够大，以封闭动脉血管。血栓还可以在静脉内的静止区域或缓慢血流中形成。静脉血栓可以容易地部分分离，称为栓塞，它通过循环系统运动，可导致其它血管，例如肺动脉堵塞。因此，动脉血栓通过局部堵塞可引起严重的疾病，而静脉血栓主要是通过远端堵塞，或形成栓塞起作用。这些病况包括静脉血栓形成、血栓性静脉炎、动脉栓塞、冠状和大脑动脉血栓生成、不稳定型心绞痛、心肌梗塞、中风、脑栓塞、肾栓塞和肺栓塞。

许多聚集途径导致血小板聚集。不论最初的刺激是什么，最终的共同事件是通过纤维蛋白原与膜结合位点，糖蛋白IIb/IIIa(GPIIb/IIIa)结合来交联血小板。作为GPIIb/IIIa受体络合物拮抗剂的化合物已显示抑制血小板聚集(美国专利号6,037,343和6,040,317)。针对GPIIb/IIIa的抗体也显示具有高抗血小板效力(EPIC调查员，New Engl.J.Med.(1994)330：956-961)。然而，该类抗血小板剂有时导致出血问题。

凝血酶可几乎不依赖于其它途径，产生血小板聚集，但在其它机制首先活化血小板前，不太可能存在足够数量的凝血酶。凝血酶抑制剂，例如水蛭素是非常有效的抗血栓药。然而，由于起着抗血小板和抗凝血药物的功能，凝血酶抑制剂也能产生过量出血。(TIMI 9a调查员，GUSTO Iia调查员，Circulation，90：1624-1630(1994)；Circulation，90：1631-1637(1994)；Neuhaus K.L.等，Circulation，90：1638-1642(1994))。

对各种抗血小板药物作为抑制血栓形成的可能目标进行了多年的研究，。些药物，例如阿司匹林和双嘧达莫已被用作预防性抗血栓药，其它也是临床研究的目标。迄今，显示强有效的药物，例如解离素和噻吩并吡啶噻氯匹定和氯吡格雷已显示出很强的副作用，而阿司匹林等药物是有用的但是效力有限(Hass等，N.Engl.J.Med.，321：501-507(1989)；Weber等，Am.J.Cardiol.66：1461-1468(1990)；Lekstrom和Bell，Medicine 70：161-177(1991))。特别是，噻吩并吡啶在抗血小板治疗中的使用已显示提高了可能的有生命危险的血栓性血小板减少性紫癜的发病率(Benett，C.L等，N.Engl.J.Med(2000)342：1771-1777)。阿司匹林对血小板聚集有有益效果(Br.Med.J.(1994)308：81-106；159-168)是通过诱导前列腺素合成的阻碍起作用的。阿司匹林对于ADP-诱导的血小板聚集没有作用，因此对血小板聚集作用有限。另外，在文献中充分记载了它对于肠胃副作用的高发生率，限制了其在很多病人中的使用。一些较新的药物，例如ReoPro(7E3)的临床效力是令人印象深刻的，但是近来的实验发现这些方法与大出血风险增加有联系，有时需要输血(New.Engl.J.Med.(1994)330：956-961)。因此似乎理想的“益处/风险”比还未达到。

近来的研究提示，5’-二磷酸腺苷(ADP)，一种常规激动剂，在激发和进行动脉血栓形成中起到了关键作用(Bernat等，Thromb.Haemostas(1993)70：812-826；Maffrand等，Thromb.Haemostas.(1988)59：225-230；Herbert等，Arterioscl.Thromb.(1993)13：1171-1179)。ADP诱导血小板聚集，形状改变，分泌，Ca2+的注入和胞内运动，以及腺苷酸环化酶的抑制。ADP与血小板受体的结合是引起ADP-诱导的血小板应答所必需的。在人血小板中至少表达三种P2受体：阳离子通道受体P2X₁，一种G蛋白偶联受体P2Y₁，和一种G蛋白偶联受体P2Y₁₂(也称为P2Y_ac和P2_T)。P2X₁受体负责迅速钙流入，由ATP激活。尚未完全了解P2X₁受体在血小板聚集中的作用。然而，已经提出P2X₁受体参与血小板形状的变化(Rolf等，ThrombHaemost，85：303-308，2001)，并在高剪切力下参与血小板thombi的形成。(Hechler等，J Exp Med.198：661-667，2003)P2Y₁受体负责钙迁移，形状改变和聚集的引发。P2Y₁₂受体负责腺苷酸环化酶的抑制，是完全聚集所必需的(Hourani等，ThePlatelet ADP Receptors Meeting，La Thuile，Italy，三月29-31日，2000)。

Ingall等(J.Med.Chem.42：213-220(1999))描述了三磷酸腺苷(ATP)的类似物对ADP-诱导的血小板聚集的剂量相关抑制，该类似物是一种弱的非选择性但是竞争性的P2Y₁₂受体拮抗剂。Zamencnik(USPN5,049,550)公开了一种抑制哺乳动物中血小板聚集的方法，通过对所述哺乳动物施用App(CH₂)ppA或其类似物的四磷酸二腺苷化合物。Kim等(USPN5,681,823)公开了P¹，P⁴-二硫代-P²，P³-一氯亚甲基5’，5二腺苷P¹，P⁴四磷酸作为抗血栓生成药物。噻吩并吡啶噻氯匹定和氯吡格雷被代谢为血小板P2Y₁₂受体的拮抗剂，显示了在体内抑制血小板的功能(Quinn和Fitzgerald，Circulation 100：1667-1672(1999)；Geiger等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.19：2007-2011(1999))。然而，这些噻吩并吡啶有许多治疗上的缺点：

●起效慢(Gurbel等，Am J.Cardiol.90：312-315，2002)

●由于这些抑制剂对P2Y₁₂受体的不可逆性质，如果必须进行外科手术的话，用噻吩并吡啶治疗的对象具有很高的出血风险。由于需要产生新的血小板以恢复止血作用，对于选择性外科手术，必须停止使用该药物至少5-10天，从而使对象在此期间处于血栓形成事件的高风险中(Kapetanakis等，Eur Heart J.26：576-583，2005)。

●以这些化合物的标准给药方案治疗的对象在药物的药效上显现出很大的个体差异性，且很高比例的患者对局部缺血事件发生的保护低下(Gurbel等，Circulation 107：2908-2913，2003；Aleil等，J Thromb Haemost.3：85-92，2005).

在心血管和脑血管治疗领域中，需要一种无需代谢、可快速起效并快速解除反应的直接、可逆的P2Y₁₂受体抑制剂，可将其用于预防和治疗血栓形成，且其副作用(例如过度不良的出血延长)小，同时预防或治疗靶标血栓。

发明简述

本发明针对一种治疗或预防与血小板聚集和/或血小板活化有关的疾病或病况的方法，这些疾病包括静脉血栓形成、血栓性静脉炎、动脉栓塞、冠状动脉和脑动脉血检形成、不稳定心绞痛、心肌梗塞、中风、脑动脉栓塞、肾动脉栓塞和肺动脉栓塞。该方法还针对一种预防、治疗或减轻血栓形成、血栓性事件、栓子事件，或与手术中或手术后与血栓形成、血栓性事件、栓子事件相关的病理状况发病率的方法。

该方法包括对个体施用一种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的P2Y₁₂受体拮抗剂化合物，其中所述量有效结合血小板上的P2Y₁₂受体，并抑制ADP-诱导的血小板聚集。

本发明有用的P2Y₁₂受体拮抗剂化合物包括通式I的化合物或其盐：

其中：

X₁、X₂和X₃分别是氧、亚甲基、一氯亚甲基、二氯亚甲基、一氟亚甲基、二氟亚甲基或亚氨基(imido)；

T₁、T₂、W和V分别是氧或硫：

m＝0，1或2；

n＝0或1；

p＝0，1，或2；

其中m+n+p之和是0-5；(单磷酸-六磷酸)

M＝H或药物学上可接受的无机或有机抗衡离子；

D₁＝O或CH₂；

B′是通式IV和V的嘌呤或嘧啶残基，它分别通过碱基的9-或1-位与呋喃糖或碳环的1′位连接；

Y′＝H、OH或OR₁；

Z′＝H、OH或OR₂；

条件是当A＝M时，Y′和Z′中的至少一个分别等于OR₁或OR₂；

A＝M或

A是核苷残基，定义为：

其通过呋喃糖或碳环的5′位与磷酸链连接，

其中D₂＝O或CH₂；

Z＝H、OH或OR₃；

Y＝H、OH或OR₄；

条件是Y′、Z′、Y和Z中的至少一个分别等于OR₁、OR₂、OR₃或OR₄；

B是通式IV和V的嘧啶残基，它分别通过碱基的9-或1-位与呋喃糖或碳环的1′-位连接；

R₁、R₂、R₃和/或R₄是如通式II的通过碳原子直接与呋喃糖或碳环各自的2′-和/或3′-羟基连接的残基，或如通式III的通过所述的共用碳原子与呋喃糖或碳环各自的两个(2′-和3′-)羟基直接连接的残基，即存在符合式II定义的R₁、R₂、R₃和R₄的一个至四个独立残基，或存在由R₁+R₂和/或R₃+R₄构成的1-2个独立残基。

本发明还提供了新颖的单核苷5′-单磷酸和二核苷5′-二磷酸化合物。本发明还提供了一种包含通式I的化合物和药学上可接受的载体的药物制剂。

附图简述

图1显示了通过不同化合物抑制ADP诱导的聚集的效果。

图2显示了将INS50589静脉注射入小鼠后，抑制ADP诱导的聚集作用的动力学。

图3显示了INS50589治疗在小鼠中对由血栓栓塞引发的死亡率的保护作用。

图4显示了通过对狗进行INS50589连续静脉输液而产生的对血小板聚集的剂量依赖性抑制。

图5A显示了以0.3mg/kg/小时的剂量给予狗INS50589的过程中预设时间和给药之后的血小板聚集。图5B显示了输液给药INS50589过程中预设时间和给药之后的INS50589血浆水平。

发明详述

定义

除非另有说明，以下术语如果存在的话通常如下所定义，包括但不限于：

烷基包含直链或直链、不饱和或饱和、含有或不含杂原子的1-12个碳原子，更优选包含2-8个碳，最优选包含2-6个碳。

环烷基包含3-12个碳，更优选包含3-10个碳，最优选包含3-6个碳，其可为不饱和或饱和、含有或不含杂原子。

芳烷基在其烷基部分包含1-8个碳原子，更优选在其烷基部分包含1-6个碳，最优选在其烷基部分包含1-4个碳；如上文对烷基的定义所述，芳烷基的烷基部分可包含一个或多个不饱和位点，例如当链中包含两个或两个以上碳原子时，该链中可具有双键或三键；芳烷基的烷基部分还可包含一个或多个杂原子和/或取代基；芳烷基的芳基部分可为在芳基部分的每个环中包含3-8个碳的单环或多环部分，更优选在每个环中包含4-6个碳，最优选在每个环中包含5-6个碳；芳烷基的芳基部分还可带有一个或多个取代基和/或杂原子。

芳基为单环或多环，在每个环中包含3-8个碳，更优选在每个环中包含4-6个碳，最优选在每个环中包含5-6个碳；芳基还可带有一个或多个取代基和/或杂原子。

杂芳烷基在其烷基部分包含1-8个碳原子，更优选在其烷基部分包含1-6个碳，最优选在其烷基部分包含1-4个碳；如上文对烷基的定义所述，杂芳烷基的烷基部分可包含一个或多个不饱和位点，例如当链中包含两个或两个以上碳原子时，该链中可具有双键或三键；杂芳烷基的烷基部分还可包含一个或多个杂原子和/或取代基；杂芳烷基的杂芳基部分可为在杂芳基部分的每个环中包含3-8个碳的单环或多环部分，每个环中含有1-4个杂原子，更优选在每个环中包含4-6个碳，最优选在每个环中包含5-6个碳；杂芳烷基的杂芳基部分还可带有一个或多个取代基和/或杂原子。

杂芳基为单环或多环，在每个环中包含1-4个杂原子，且每个环中包含3-8个原子，更优选在每个环中包含4-6个原子，最优选在每个环中包含5-6个原子；杂芳基还可带有取代基和/或杂原子。

前述基团中的取代基可为(但不限于)：羟基、硝基、甲氧基、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、丁基、硫代烷基(thioalkyl)、烷氧基、羧基、酰胺基、烷基磺酰基、烷基磺酰基氨基、磺酰氨基、氰基、氨基、取代的氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、苯基、吡啶基、咪唑基、环丙基、环戊基和环己基；优选的杂原子为氧、氮和硫。

非对映体为立体异构体(具有相同构成但在三维结构上有所不同的异构体)，它们彼此不为镜像关系。

药学上可接受的盐是指保留了母体化合物所希望的生物活性且不具有不希望的毒理作用的盐类。药学上可接受的盐的形式包括衍生自酸或碱加成反应的不同盐的无定形形式和各种多晶型物。可用无机或有机酸形成酸加成盐。此类酸的示例包括但不限于：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、醋酸、丙酸、苯甲酸、napthoic、草酸、琥珀酸、马来酸、苹果酸、己二酸、乳酸、酒石酸、水杨酸、甲磺酸、2-羟基乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、樟脑磺酸和乙磺酸。药学上可接受的碱加成盐可由金属或有机抗衡离子形成，包括但不限于：碱金属盐，例如钠盐或钾盐；碱土金属盐，例如镁盐或钙盐；以及铵盐或四烷基铵盐，即，NX⁴⁺(其中X为C_1-4)。在本发明的核苷单-或二-磷酸的情况下，所述盐的形式通常为碱-碱土金属盐(例如钠盐、钾盐、锂盐)或碱性盐(例如铵盐)。

溶剂化物是加成的复合物，在溶剂化物中化合物与药学上可接受的共溶剂以一定的混合比结合。共溶剂包括但不限于：水、甲醇、乙醇、1-丙醇、异丙醇、1-丁醇、异丁醇、叔丁醇、丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、苯、甲苯、二甲苯、乙二醇、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、N-甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基乙酰胺、吡啶、二氧六环和二乙醚。水合物是其中的共溶剂为水的溶剂化物。应理解的是本发明化合物的定义中包含了占任何比例的所有可能的水合物和溶剂化物，这些水合物和溶剂化物具有稳定的活性。

P2Y₁₂受体拮抗剂化合物

可用于预防或治疗与血小板聚集和/或血小板活化有关的疾病或病况的P2Y₁₂受体拮抗剂化合物包括通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物：

其中：

X₁、X₂和X₃分别是氧、亚甲基、一氯亚甲基、二氯亚甲基、一氟亚甲基、二氟亚甲基或亚氨基；

T₁、T₂、W和V分别是氧或硫：

m＝0，1或2；

n＝0或1；

p＝0，1，或2；

其中m+n+p之和是0-5(从单磷酸到六磷酸)；

M＝H或药物学上可接受的无机或有机抗衡离子；

D₁＝O或CH₂；

Y′＝H、OH或OR₁；

Z′＝H、OH或OR₂；条件是当A＝M时，Y′和Z′至少一个是OR₁或OR₂；

A＝M，或

A为如下式所定义的核苷残基：

其通过呋喃糖或碳环的5′位与磷酸链连接；

其中：

D₂＝O或CH₂；

Z＝H、OH或OR₃；

Y＝H、OH或OR₄；

条件是Y′、Z′、Y和Z中至少一个分别等于OR₁、OR₂、OR₄或OR₃；

根据通式IV和V，B是分别通过碱基的9-或1-位与呋喃糖或碳环的1′位连接的嘌呤或嘧啶残基；

R₁、R₂、R₃和/或R₄是如式II的通过碳原子分别与呋喃糖或碳环的2′-和/或3′-羟基直接连接的残基，或如式III的通过的共用碳原子分别与呋喃糖或碳环的两个(2′-和3′-)羟基直接连接，从而R₁、R₂、R₃和/或R₄中存在符合通式II定义的1-4个独立残基，或存在由R₁+R₂和/或R₃+R₄组成的1-2个独立残基，

其中：

O是各呋喃糖或碳环相应的2′-和/或3′-氧；

C是碳原子；

R₅、R₆和R₇是H、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基或取代的芳基，这样式II定义的基团是醚；或

R₅和R₆是H、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基或取代的芳基，R₇是烷氧基、环烷氧基、芳烷氧基、芳氧基、取代的芳烷氧基或取代的芳氧基，这样式II定义的基团是非环状缩醛或缩酮；或

R₅和R₆合起来作为与C双键键合的氧或硫，R₇是烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基或取代的芳基，这样式II定义的基团是酯或硫代酸酯(thioester)；或

R₅和R₆合起来作为与C双键键合的氧或硫，R₇是氨基或一或二取代的氨基，其中取代基是烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基或取代的芳基，这样式II的基团是氨基甲酸酯或硫代氨基甲酸酯；或

R₅和R₆合起来作为与C双键键合的氧或硫，R₇是烷氧基、环烷氧基、芳烷氧基、芳氧基、取代的芳烷氧基或取代的芳氧基，这样式II的基团是碳酸酯或硫代碳酸酯；或

R₇不存在，R₅和R₆合起来作为与C双键键合的氧或硫，呋喃糖或碳环各自的2′-和3′-氧直接与C键合，形成环状碳酸酯或硫代碳酸酯；

其中：

所述O原子是呋喃糖或碳环的2′-和3′-氧，呋喃糖或碳环的2′-和3′-氧与共用碳原子(C)连接，形成环状缩醛、环状缩酮或环状原酸酯；

对于环状缩醛和环状缩酮，R₈和R₉分别是氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基、取代的芳基，或能合起来形成由3-8个原子，优选3-6个原子组成的碳环或杂环；

对于环状原酸酯，R₈是氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基、或取代的芳基，R₉是烷氧基、环烷氧基、芳烷氧基、芳氧基、取代的芳烷氧基、或取代的芳氧基。

当R₅、R₆和R₇不相同时，或当R₈和R₉不相同时，通式I的化合物可以多种非对映体形式存在。除非特别说明，通式I的通用结构中包括了这些材料的所有非对映体形式。通式I还包括通式I化合物的混合物，其中包括由任何比例的对映体、非对映体和/或其它异构体构成的混合物。

本发明的一个实施例是A＝M，其中M＝H或药物学上可接受的无机或有机抗衡离子。在该实施例中，化合物可为单磷酸核苷、二磷酸核苷、三磷酸核苷、四磷酸核苷、五磷酸核苷或六磷酸核苷，其呋喃糖或碳环的2′-和/或3′-位中的一个或两个被修饰。最优选的是单磷酸核苷、二磷酸核苷、三磷酸核苷和四磷酸核苷。当T₂、W、V或T₁是硫时，该原子的优选取代位是在多磷酸链的末端磷上(即从核苷残基开始离得最远的磷)。

对于单磷酸，当m、n和p均等于0时，优选R₈为氢，且R₉为芳基或芳烷基，其中在芳烷基的烷基部分中包含1、2、3或4个碳，而在芳烷基或芳基的芳基部分中包含6个碳；当芳烷基中烷基部分的碳数为2时，最优选通过双键或三键来连接所述碳原子。

本发明的另一个实施例是A是核苷残基，定义如下：

并通过呋喃糖或碳环的5′-位与磷酸链连接(从而得到多磷酸二核苷，呋喃糖或碳环部分的2′-、3′-、2″-和3″-位至少之一被修饰为OR₁、OR₂、OR₄和OR₃)

当T₂、W、V和/或T₁是硫时，优选位置(针对硫而言)是T₁和T₂。

其它条件是当D₁或D₂是氧时，对应的呋喃糖优选是β-构型；相应的呋喃糖优选是β-D-构型。

在一个实施例中，通式I的化合物是其结构符合式Ia和式Ib定义的分子：

其中D₁＝O或CH₂；

D₂＝O或CH₂；

B和B′分别是通式IV或V的嘌呤或嘧啶残基；

m和p＝0、1或2；n＝0或1；这样m+n+p的和是0-5，优选0-4，最优选0-3；

X₁、X₂和X₃＝分别是O、NH、CH₂、CHF、CHCl、CF₂、CCl₂；

T₁、T₂、V和W分别是O或S；

M＝H⁺、NH₄ ⁺、Na⁺或其它药物学上可接受的无机或有机抗衡离子；

Y′＝H、OH或OR₁；

Z′＝OH或OR₂；

Z＝OH或OR₃；

Y＝H、OH或OR₄，其中R₁、R₂、R₃和R₄符合通式II或III的定义，条件是Y′、Z′、Z和Y中至少一个是OR₁、OR₂、OR₃或OR₄。

式Ia的优选化合物包括：

D₁＝O或CH₂；

D₂＝O或CH₂；

X₁、X₂和X₃＝O；

T₁、T₂、V和W＝O；或

D₁＝O或CH₂；

D₂＝O或CH₂；

X₁和X₃＝O；

X₂＝亚甲基、一氯亚甲基、二氯亚甲基、一氟亚甲基、二氟亚甲基或亚氨基；

T、T₁、T₂、V和W＝O；或

D₁＝O或CH₂；

D₂＝O或CH₂；

m、n和p＝1；或

X₁和X₃＝O；

T₁和T₂＝S；

V和W＝O。

D₁＝O或CH₂；

n和p＝0，1，或2，这样n+p之和是0-3；

A＝M；其中M＝H⁺、NH₄ ⁺、Na⁺或其它药物学上可接受的无机或有机抗衡离子；B是通式IV和V的嘌呤或嘧啶残基；

X₁和X₂分别是O、NH、CH₂、CHF、CHCl、CF₂、CCl₂；

T₁、V和W分别是O或S；

Y′＝H、OH或OR₁，

Z′＝H、OH或OR₂，其中R₁和Rx符合通式II或III的定义；条件是Y′和Z′的至少一个分别是OR₁或OR₂。

式Ib的优选化合物包括：

D₁＝O或CH₂；

n和p＝0，1，或2，这样n+p之和是0-3，优选1-2；

X₁和X₂＝O；

T₁、V和W＝O；或

D₁＝O或CH₂；

X₁和X₂＝O；

T₁和V＝O；

W＝S；或

D₁＝O；

n和p＝0，这样n+p的和是0；

V＝O；

B′是通式IV的嘌呤残基；

Y′和Z′符合通式III的定义；或

D₁＝O或CH₂；

p＝0，1或2，n＝1，这样n+p之和是1-3；

X₁＝O；

T₁、V和W＝O；

Y′＝H、OH或OR₁；

Z′＝H、OH或OR₂，其中R₁和R₂符合通式II或III的定义；条件是Y′和Z′中至少一个分别是OR₁或OR₂。

还可用式Ia-1和Ib-2描述多个优选的化合物。

对于式I的化合物，B和B′可分别是式IV中的嘌呤残基，通过9-位连接，或式V的嘧啶残基，通过1-位连接。式Ia、Ib、Ia-1和Ib-1中的核糖基部分是如所示的D-构型，但也可以是L-或D-和L-。对于核糖基部分，D-构型是优选的。

其中：

R₁₀和R₁₄各自是羟基、氧代、氨基、巯基、烷硫基、烷氧基、芳氧基、烷基氨基、环烷基氨基、芳烷基氨基、芳基氨基、二芳烷基氨基、二芳基氨基或二烷基氨基，其中烷基可任选的连接，形成杂环；或

R₁₀和R₁₄各自是酰氨基，条件是它们掺入嘌呤C-6位或嘧啶C-4位的氨基残基；或

当嘌呤中的R₁₀，或嘧啶中的R₁₄的第一个原子是氮时，R₁₀和R₁₁或R₁₄和R₁₅可合起来形成5-元稠合咪唑环(以形成亚乙烯基(etheno)化合物)，在亚乙烯基环上可任选的被如上R₅-R₉所述的一个或多个烷基、环烷基、芳烷基或芳基基团取代；

J是碳或氮，条件是当J＝氮时，R₁₂不存在；

R₁₁是氢、O(1-氧化腺嘌呤衍生物)或不存在(腺嘌呤衍生物)；

R₁₅是氢或酰基(例如取代或未取代的乙酰基、苯甲酰基、苯基酰基，具有或不具体取代基)：

R₁₂是氢、烷基、溴、叠氮基、烷基氨基、芳基氨基或芳烷基氨基、烷氧基、芳氧基或芳烷氧基、烷硫基、芳硫基或芳烷硫基、或ω-A(C_1-6烷基)B-，其中A和B分别是氨基、巯基、羟基或羧基；

R₁₃是氢、氯、氨基、一取代氨基、二取代氨基、烷硫基、芳硫基或芳烷硫基，其中硫上的取代基含有最多达20个饱和或不饱和的碳原子，在该链上含有或不含取代基；

R₁₆是氢、甲基、烷基、卤素、烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基或取代的炔基。

R₁₀或R₁₄是酰氨基的式IV和V的化合物符合式VI的范围：

其中：

NH是嘌呤的C-6位的氨基残基或嘧啶C-4位的氨基残基；

C是碳原子；

W₁是氧或硫；

R₁₇是氨基或一或二取代的氨基，所述一个或两个氨基的取代基为烷基、环烷基、芳烷基或芳基，所述取代基包含或不含进一步的取代基、不饱和或杂原子，这样式VI的基团是脲或硫脲；或

R₁₇是烷氧基、芳烷氧基、芳氧基、取代的芳烷氧基或取代的芳氧基，这样式VI的基团是氨基甲酸酯或硫代氨基甲酸酯；或

R₁₇是具有或不具有取代基或杂原子的烷基、环烷基、芳烷基或芳基，这样式VI的基团是酰胺；烷基、环烷基、芳烷基或芳基的定义如先前在R₅-R₉的可比较基团中定义的。

新化合物

本发明的新化合物包括如下的式Ia化合物：其中B和B′独立地为嘧啶(嘧啶/嘧啶二核苷酸)，条件是当m+n+p＝1，R₁₆＝CH₃，且R₅和R₆一起作为氧双键连接于C时，R₇不等于CH₃(Z′不等于乙酸酯)；另一条件是当m+n+p＝3，B和B′＝尿苷，且R₅和R₆一起作为氧双键连接于C时，对于Y′＝OR₁和/或Y＝OR₄，R₇不等于苯基(Y和Y′不等于苯甲酰基)；另一条件是当m+n+p＝1时，R₈和R₉不都为CH₃(Z′和Y′在一起不等于异亚丙基(isopropylidine))。

本发明的新化合物还包括如下的式Ia化合物：其中B是嘌呤或通式IV的残基，B′为通式V的嘧啶残基(嘌呤/嘧啶二核苷酸)；条件是当Z′、Y或Y′＝H或OH时，Y′不等于OCH₃；另一条件是当R₉＝H时，R₈不等于OCH₂CH₃(Z′和Y′或Z和Y一起不等于原乙酯(orthoethylester))。

本发明的新化合物还包括如下的式Ia化合物：其中B和B′独立地为通式IV的嘌呤残基(嘌呤/嘌呤二核苷酸)；条件是(a)当R₁₀＝NH₂或O时，Y或Y′不等于OCH₃；(b)当R₉＝H时，R₈不等于OCH₃或OCH₂CH₃；(c)R₈和R₉不都等于CH₃；(d)当m+n+p＝1时，R₈和R₉不等于OCH₂CH₃；(e)当R₁₀＝NH₂，且R₅和R₆一起作为氧双键连接于C时，R₇不等于邻-甲氨基苯基；(f)当m+n+p＝1，且R₅和R₆一起作为氧双键连接于C，R₇不等于CH(CH₂CH₂SCH₃)NHS(o-NO₂-Ph)或CH(CH₂Ph)NHS(o-NO₂-Ph)。

本发明的新化合物包括式Ib的化合物(单核苷酸)，条件是但n＝1时，X₁和X₂不都是O；和当n＝0时，X₁不为O；以及条件是当Y′＝H，X₂独立地为O、CH₂、CHF、CHCl、CF₂、CCl₂；另外的条件是当R₁₀＝NH₂或O，且R₅和R₆一起作为氧双键连接于C时，R₇不等于邻-甲氨基苯基；另一条件是当n＝p＝1，X₂＝CH₂且B′＝腺苷时，R₁和R₂不等于亚萘基甲基(napththylenylmethyl)、亚萘基亚甲基或苯基亚甲基。

新的二核苷5’-二磷酸化合物包括式Ia-1的化合物：

其中：

V＝O；

M＝H或药学上可接受的无机或有机抗衡离子；

D₁和D₂＝O；

Y’＝H、OH或OR₁；

Z′＝H，OH或OR₂；

Z＝H，OH或OR₃；

Y＝H、OH或OR₄，其中R₁、R₂、R₃和R₄符合通式II或III的定义，条件是Y’、Z’、Z和Y中的至少一个是OR₁、OR₂、OR₃或OR₄；

R₁、R₂、R₃和R₄是如式II所示的通过碳原子直接连接于呋喃糖的2′和/或3′羟基的残基，或者，优选含有如式III所示的包含通过共用的碳原子连接于呋喃糖的2′和3′羟基的部分，

式中，

所述O原子为呋喃糖的2’-和3’-氧；和

所述呋喃糖的2’-和3’-氧通过共用的碳原子相连，形成环状缩醛；和

R₈是氢；和

R₉为选自下组的基团：芳烷基、芳基、取代的芳烷基和取代的芳基；

其中所述芳烷基的烷基部分为饱和或不饱和、不含杂原子的1-5个碳的直链，芳基部分为5-6个碳的单环部分；所述芳基是包含或不含杂原子的4-6个碳的单环部分；

B′是通式IV的嘌呤残基

其中：

R₁₀是式VI的酰氨基；和

R₁₇是氨基或单-或二取代的氨基，从而使得式VI所示部分为脲；

J＝碳；

R₁₁不存在；

R₁₂是氢；和

R₁₃是氢。

新的单核苷5’-单磷酸化合物包括式Ib-1的化合物：

其中：

V＝O：

M＝H或药学上可接受的无机或有机抗衡离子；

D₁＝O；

Y′＝H、OH或OR₁；

Z′＝H、OH或OR₂；条件是Y′和Z′中的至少一个是OR₁或OR₂；

R₁和R₂是如式II所示的通过碳原子直接连接于呋喃糖的2′和/或3′羟基的残基，或者，或者R₁和R₂如式III所示通过共用的碳原子连接于呋喃糖的2′和3′羟基

其中：

所述O原子为呋喃糖的2’-和3’-氧；和

R₈是氢；和

B′是通式IV的嘌呤残基

其中：

R₁₀是式VI的酰氨基；和

J＝碳；

R₁₁不存在；

R₁₂是氢；和

R₁₃是氢。

本发明的化合物符合通式I的定义，所述通式I可进一步划分为通式Ia(二核苷酸)、Ib(单核苷酸)、Ia-1(二核苷二磷酸)和Ib-l(单核苷单磷酸)。虽然在任一这些小类中均能找到强效和选择性的P2Y₁₂拮抗剂，但是单核苷酸由于其易于合成和成本低而优于二核苷酸。通常，符合通式Ib的单核苷二磷酸和单核苷三磷酸是比对应于式Ib-1的单核苷单磷酸更强的P2Y₁₂拮抗剂。然而，与单核苷二磷酸和单核苷三磷酸相比，核苷5’-单磷酸及其类似物更容易制备，且具有更大的化学和生物稳定性。因此，出于合成的理由，具有适宜的药物样特性的核苷5’-单磷酸有时比带有多于一个磷酸的其它单核苷酸或相应的二核苷酸更具有优势。对于符合通式Ia的二核苷酸，由式Ia-1所示的仅具有2个磷酸的那些二核苷酸最为理想，这是由于与符合式Ib-1的单核苷5’-单磷酸相比，它们的制备可在简单的反应条件下以良好的产率进行。在血流中受到酶攻击时，核苷5’-单磷酸因失去磷酸而仅产生一种副产物。二核苷二磷酸是最容易制备的二核苷酸；与具有较长的磷酸链长度的二核苷酸相反，二核苷二磷酸稳定且产生有限数量的分解产物。对于抑制血小板聚集，核苷5’-单磷酸和二核苷二磷酸均为优选的化合物。

可对通式Ia-1和Ib-1的化合物进行两种修饰，从而使它们成为血小板P2Y₁₂受体的强拮抗剂。通常，优选的核苷5’-单磷酸起始材料为腺苷5’-单磷酸(AMP)或AMP衍生物，其含有用于所需修饰的适宜官能团，且与其它可常规得到的核苷酸单磷酸类似修饰相比，由所述起始材料可得到更为强效和更具选择性的拮抗剂。第一种修饰是加载入与核糖的2′-和3′-羟基桥连的芳基或芳烷基缩醛，所述芳基或芳烷基的性质如前所述。在这些描述的基团中，最优选的是苯基、苄基和苯乙烯基，它们是由核糖的2′-和3′-羟基分别与苯甲醛、苯基乙醛和肉桂醛反应产生的缩醛。这些部分具有超出许多类似修饰物的多个重要优点。首先，它们衍生自易于获得、低成本的醛或醛等价物(例如，醛、二烷基缩醛)。其次，可通过这些部分合成一种或两种可能的非对映体，所述非对映体可采用数个合成方案，由缩醛与手性核糖残基加成反应产生。最后，含有这些缩醛部分的分子提供了本发明的强效类似物。

第二种修饰是在腺嘌呤碱基的6-氨基位上加入氨基羰基或取代的氨基羰基，从而在该位置得到脲部分。在所述脲部分上的取代基符合对R₁₇的氨基取代基的定义，即含有或不含取代基或杂原子的饱和或不饱和烷基、环烷基、芳烷基或芳基。可将这些脲取代基根据性质广义分类为芳族或脂族。选自芳基的优选取代基为苯基。当所述脲基团为脂族脲时，氮上优选的取代基为饱和或不饱和的直链、支链或环状C₁-C₆烷基。优选的脲部分为包含2-6个碳的直链烷基脲，或环中包含3-6个碳的环状烷基脲。更优选的脲部分为在链中含有2-4个碳的直链烷基脲，或环中包含3-5个碳的环烷基脲。

式Ia-2和Ib-2显示了具有上述修饰的新化合物。

其中：

R₁₈和R_18′独立地为苯基、苄基或苯乙烯基；和

R₁₉和R_19′独立地为C₂-C₆烷基；C₃-C₆环烷基；在烷基部分包含1-2个碳原子、在环烷基部分包含3-6个碳的烷基环烷基；苯基；它们可被取代或未被取代。

例如，R₁₉和R₁₉独立地为乙基、丙基、丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基、环戊基或苯基。

虽然R₁₈和R_18′、R₁₉和R_19′可为独立给定的基团，但是出于合成的原因，优选它们是相同的对。

其中：

R₁₈是苯基(苯甲醛缩醛)、苄基(苯基乙醛缩醛)或苯乙烯基(肉桂基缩醛)；

R₁₉是C₂-C₆烷基；C₃-C₆环烷基；在烷基部分包含1-2个碳原子、在环烷基部分包含3-6个碳的烷基环烷基；苯基；它们可被取代或未被取代。

例如，R₁₉为乙基、丙基、丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基、环戊基或苯基。

本发明的一个方面是：虽然任何式I的化合物均能拮抗ADP-诱导的血小板聚集，但在同一分子中具有2’/3′和6-N修饰的组合产生了高度强效和选择性的P2Y₁₂拮抗剂化合物。

本发明的另一方面是：化合物结构对于所得效力的作用，在洗出的血小板(washed platelet)和全血中是可比的。通常，给定化合物在全血中的效力低于其在洗出的血小板中的效力，表面上这是由所述化合物与前者中较高水平血液蛋白质的结合增加而导致的。这一特性在核苷5’-单磷酸中比在相应的二-和三磷酸中更为突出，这是由于前者中具有较少的可电离基团来中和推测会提高全血中蛋白质结合的亲脂缩醛和脲基。出人意料地是，在全血和洗出的血小板分析测试中，我们发现具有脂族脲的化合物产生了可比的结果。另外，我们还发现在洗出的血小板中，具有脂族脲的化合物比它们的芳族对应物具有更强的效力。

本发明的新化合物包括下列化合物：2′-或3′-苯基氨基甲酸酯UTP、2′，3′-二苯基氨基甲酸酯UTP、2′，3′-苯基乙醛缩醛ADP、二[3′(苯基氨基甲酸酯)dUp2dU]、2′，3′-苯基乙醛缩醛Up3U、二2′，3′-苯基乙醛缩醛Up3U、2′，3′-苯基乙醛缩醛Up4A、2′，3′-苯基乙醛缩醛Ap4U、二2′，3′-苯基乙醛缩醛Ap4U、2′，3′-苯基乙醛缩醛Ip4U、2′，3′-苯基乙醛缩醛Up4U、2′，3′-苯基乙醛缩醛Ip4U、2′，3′-苯基乙醛缩醛Up4dC、四苯基氨基甲酸酯Up4U、二2′，3′-苯甲醛缩醛Ip4U、二2′，3′-苯甲醛缩醛Up4U、2′，3′-苯甲醛缩醛Up4U、二2′，3′-苯基乙醛缩醛Cp4U、2′，3′-苯基乙醛缩醛Cp4U、2′，3′-苯基乙醛缩醛Up4C、2′，3′-苯基乙醛缩醛Up4T、二2′，3′-苯甲醛缩醛Cp4U、2′，3′-苯甲醛缩醛Ip4U、2′，3′-苯甲醛缩醛Up4U、2′，3′-苯甲醛缩醛Up4dC、2′，3′-苯甲醛缩醛Cp4U、2′，3′-苯甲醛缩醛Up4C、2′，3′-苯基丙醛缩醛Up4U、二2′，3′-苯基丙醛缩醛Up4U、2′，3′-苯甲醛缩醛Cp4C、二MANT Up4U、Mant Up4U、二2′/，3′-苄基缩醛Up4U、单2′/，3′-苄基缩醛Up4U、三苯基氨基甲酸酯Up4U、2′，3′-苯基氨基甲酸酯Up4U和一苯基氨基甲酸酯Up4U。

新的二核苷5’-二磷酸化合物包括：P¹，P²-二-(2’，3’-肉桂基缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸(化合物44)、P¹，P²-二-(2’，3’-苯基炔丙基缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸(化合物45)、P¹，P²-二-(2’，3’-苯基乙醛缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸(化合物46)和P¹，p²-二-(2’，3’-苯基缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸(化合物47)。

新的单核苷5’-单磷酸化合物包括：2’，3’-苯基乙醛缩醛-6-N-苯脲AMP(化合物22)、2’，3’-苯基乙醛缩醛-6-N-正己基脲AMP(化合物23)、2’，3’-苯基乙醛缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物24)、2’，3’-苯基乙醛缩醛-6-N-环戊基脲AMP(化合物25)、2’，3’肉桂基缩醛-6-N-正己基脲AMP(化合物26)、2’，3’-肉桂基缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物27)、2’，3’-肉桂基缩醛-6-N-苯脲AMP(化合物28)、2’，3’-肉桂基缩醛-6-N-正丙基脲AMP(化合物29)、2’，3’-肉桂基缩醛-6-N-正丁基脲AMP(化合物30)、2’，3’-苯基炔丙基缩醛-6-N-苯脲AMP(化合物31)、2’，3’-苯基炔丙基缩醛-6-N-正己基脲AMP(化合物32)、2’，3’-苯基炔丙基缩醛-6-N-正丁基脲AMP(化合物33)、2’，3’-苯基炔丙基缩醛-6-N-正丙基脲AMP(化合物34)、2’，3’-苯基炔丙基缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物35)、2’，3’-苯甲醛缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物36)、2’，3’-苯甲醛缩醛-6-N-正丙基脲AMP(化合物37)、2’，3’-苯甲醛缩醛-6-N-正丁基脲AMP(化合物38)、2’，3’-苯甲醛缩醛-6-N-正己基脲AMP(化合物39)、2’，3’-苯甲醛缩醛-6-N-环戊基脲AMP(化合物40)、2’3’-(反式)肉桂基缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物41)、2’3’-(反式)苯基缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物42)和2’3’-(顺式)苯基缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物43)。在化合物41-43中，顺式或反式指氢原子在间二氧杂环戊烯环上的相对位置。

新化合物1-47的结构如下所示。在以下的结构中，为了简便起见已省略了可理解的存在的氢。所示的互变异构体代表所有可能的互变异构体。由于引入缩醛基团时产生了非对映体，并未用立体化学明确定义的包含此部分的结构(化合物1-20和23-26)应理解为表示单独的可能的非对映体或以任何比例存在的非对映体混合物。

2-(3-三氟甲基丙基)硫代-6-(2-甲硫基)乙基氨基-2’，3’-(苄基)亚甲二氧基嘌呤核糖核苷5’-α，β-二氟亚甲基二磷酸

P¹-[2-(3-三氟甲基丙基)硫代-6-(2-甲硫基)乙基氨基2’，3’-(苄基)亚甲二氧基嘌呤核糖核苷]-P⁴-(2’，3’-(苄基)亚甲二氧基尿苷)四磷酸

药物制剂

本发明还提供了新的药物制剂，所述药物制剂包含式I、Ia、Ib、Ia-1、Ib-1、Ia-2或Ib-2的化合物以及药学上可接受的载体。可由本领域的技术人员根据常规标准对药学上可接受的载体进行选择。药学上可接受的载体包括但不限于：盐溶液、电解质水溶液、等渗调节剂、水聚醚(water polyether，例如聚乙二醇)、聚乙烯(例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮)、纤维素衍生物(例如甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素)、丙烯酸聚合物(例如聚丙烯酸凝胶)、多糖(例如葡聚糖)、氨基葡聚糖(例如透明质酸钠)和盐类(例如氯化钠和氯化钾)。

本发明的药物制剂提供了一种水溶液，所述水溶液包含水、适宜的离子或非离子张力调节剂、适宜的缓冲剂、螯合剂、pH调节剂和0.005-3％w/v的式I、Ia、Ib、Ia-1、Ib-1、Ia-2或Ib-2化合物，其中所述水溶液的张力为200-400mOsm/kG，pH为4-9。在优选的实施方式中，所述药物制剂包含0.025-3、0.05-2.5％或0.01-1.5％w/v的式I、Ia、Ib、Ia-1、Ib-1、Ia-2或Ib-2化合物。在另一优选的实施方式中，所述药物制剂的张力为220-360或250-350mOsm/kG。在另一优选的实施方式中，所述药物制剂的pH为4.5-8.5或5.5-7.5。在另一优选的实施方式中，所述螯合剂的含量为0.005-0.01％w/v；优选0.008-0.01％w/v。

可将所述药物制剂滤过灭菌级的滤器，对其进行灭菌，所述滤器的额定孔径优选为0.22微米。也可采用一种或多种灭菌技术对药物制剂进行终点灭菌，所述技术包括但不限于：热处理，例如高压灭菌处理；或辐射灭菌处理；或使用脉冲光，以生产出无菌制剂。在一个实施方式中，所述药物制剂是活性成分的浓缩液；静脉注射给药前，可用适宜的可接受的无菌稀释剂对所述制剂进行系列稀释。

在一个实施方式中，所述张力调节剂是诸如NaCl的离子型张力调节剂，其含量为例如0.5-0.9％w/v，优选0.6-0.9％w/v。

在另一实施方式中，所述张力调节剂是诸如甘露醇、右旋糖的非离子型张力调节剂，其含量至少为2％，或至少为2.5％，或至少为3％以及不超过7.5％；例如，其范围为3-5％，优选3.5-5％，更优选4.2-5％w/v。相对于其它可用的非离子型张力调节剂而言，甘露醇和右旋糖更为优选，所述其它张力调节剂包括例如：丙二醇和相关的二醇、各种分子量范围的聚乙二醇、山梨醇、聚合物(例如聚乙烯醇、PVP)、山梨醇、蔗糖和海藻糖，这是由于这些非离子张力调节剂大部分不适于通过静脉给药途径长期给药。例如，当通过静脉给药途径给予蔗糖和海藻糖时，它们不发生代谢并以原型排泄，因此它们不能作为静脉用剂型的候选物。此外，包含甘露醇的制剂具有可进行冷冻干燥或冻干的优点。

在另一实施方式中，所述药物制剂包含0.5-0.9％的离子型张力调节剂，例如氯化钠；所述制剂可任选含有附加的0.01-0.2％w/v的缓冲剂(例如磷酸钠和/或柠檬酸钠)、0.005-0.01％w/v的螯合剂以及pH调节剂。该水性组合物的张力为250-350mOsm/kG，并调配到生理学上可接受的pH。然而，根据化合物的类型和浓度，较高浓度(＞0.1％w/v)某些化合物的NaCl制剂倾向于形成沉淀。

包括单-磷酸核苷、二-磷酸核苷和三-磷酸核苷在内的核苷化合物在水性溶液中通常是可溶的。然而，根据取代基和盐形式的程度和性质，相应的水溶性是可变的。

为了制备静脉给药用水溶液制剂，所述溶液优选是澄清(即，没有沉淀)、等张的，且具有生理学上可接受的pH。本发明化合物的水溶性随取代基和盐形式的变化而改变，而盐形式对水溶性的影响更大。某些化合物的盐形式，即便在低浓度下(例如＜0.05％w/v)也倾向于形成沉淀或在静脉给药常用的载体——普通的盐水溶液中(0.9％NaCl)的溶解度有限。

申请人己揭示了：在非离子型、等渗基载体中制备的本发明化合物的药物制剂为澄清、生理pH的等张制剂。药物制剂中非等张的张力调节剂(例如甘露醇或右旋糖)的水平随所述化合物的期望目标浓度的变化而改变(由于化合物本身对张力有影响并对制剂的整体张力产生作用)。可将在非离子型载体中制备的所述药物制剂的pH由大范围调节到目标pH而不影响母体化合物的溶解度。

在一个实施方式中，本发明提供了一种药物制剂，所述药物制剂包含0.0005-0.3％w/v的式I、Ia、Ib、Ia-1、Ib-1、Ia-2或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物、缓冲剂、螯合剂(例如EDTA)、非离子型张力调节剂，其中所述药物制剂的张力为250-350mOsm/kG，pH为4-9。优选的非离子型张力调节剂是右旋糖或甘露醇，其含量至少为2％，或至少2.5％，或至少3％，而不超过7.5％；例如，其范围为3-5，优选3.5-5，更优选4.2-5％w/v。该药物制剂可含有或不含有任何离子型张力调节剂，例如NaCl。例如，所述药物制剂可包含如下化合物：2’，3’-苯基乙醛缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物24)、2’，3’-肉桂基缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物27)、2’，3’-苯甲醛缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物36)、P¹，p⁴-二-(2’，3’-肉桂基缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸(化合物44)、P¹，p⁴-二-(2’，3’-苯基乙醛缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸(化合物46)或P¹，P⁴-二-(2’，3’-苯基缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸(化合物47)。

化合物的制备

本领域技术人员能方便的用熟知化学方法合成本发明的化合物。可从商品来源获得一、二和三磷酸单核苷，或用化学文献中找到的各种磷酸化反应方法从核苷合成。可通过用偶联剂，例如但不限于二环己基碳二亚胺或1，1′-羰基二咪唑活化一、二或三磷酸核苷，然后与另一个一、二或三磷酸核苷(可以与活化的分子相同或不同)缩合，制备对称或非对称的多磷酸二核苷。用二环己基碳二亚胺活化三磷酸核苷得到作为活化物质的环状三偏磷酸酯，它可以有利的与各种亲核试剂反应，将特定取代基加到三磷酸酯的末端磷酸酯上。

可通过在核苷水平衍生或取代，然后如前所述磷酸化或缩合制备本发明的化合物，或反应可以直接在预先形成的单或二核苷酸上进行。在通式Ia和Ib中，Y′、Z′、Y和Z的取代基可以是酯、氨基甲酸酯或碳酸酯，如式II一般描述的。酯可以方便的通过使核苷或核苷酸中呋喃糖的羟基与合适的有机酸的活化形式，例如酸酰卤或酸酐在有机或无机碱的存在下反应制备。另外，可用合适的偶联试剂，例如二环己基碳二亚胺、1，1′-羰基二咪唑等活化有机酸，达到相同的结果。

通过在惰性溶剂中，使核苷或核苷酸中呋喃糖上的羟基与许多市售异氰酸酯或异硫氰酸酯之一反应，可最方便地制备氨基甲酸酯或硫代氨基甲酸酯。另外，当不能从商品来源获得所需异氰酸酯或异硫氰酸酯时，可从相应的胺，分别使用光气或硫光气或其化学等价物制备。可通过在有机或无机碱的存在下，使核苷或核苷酸中的呋喃糖的羟基与合适的卤代甲酸酯反应，合成碳酸酯或硫代碳酸酯。

在通式Ia、Ib和Ib-1中，Y′和Z、Y和Z上的取代基可合起来意味着缩醛基、缩酮基或原酸酯，如通式III所示。

可通过在酸性催化剂的存在下，使合适的核苷或核苷酸中呋喃糖的邻近2′-和3′-羟基分别与醛或酮或其等价物反应，容易地制备缩醛和缩酮。特别有利的是使用有机酸，它可以实现转化而不影响分子其余部分的完整性。另外，可以催化量使用强酸，例如三氯乙酸、对甲苯磺酸、甲磺酸等和惰性溶剂。最优选的是甲酸，可通过减压蒸发将其去除，它理想地适合作为这些反应的溶剂和催化剂。或者，在反应中也可用三氟乙酸代替甲酸；条件是该反应在低温下进行，且用于制备缩醛的乙醛或乙醛等价物在强酸性条件下是稳定的。

可通过不同的过程合成由缩醛与手性核糖残基加成而形成的两种可能的非对映体中的任何一种。在制备2′，3′-苯基缩醛-6-N-乙脲AMP的实施例中，使苯甲醛与核糖的2′和3′羟基在低温(例如-10到0℃)下反应，制备了由苯基取代的缩醛非对映体中的一个(顺式异构体，化合物43)。如下制备了另一反式异构体(化合物42)：首先在室温下进行同样的缩醛形成反应以产生顺式和反式非对映异构体的平衡混合物，然后在酸性水溶液条件下，对顺式异构体进行选择性降解。在另一制备2′，3′-肉桂基缩醛-6-N-乙脲AMP(化合物27)的实施例中，使肉桂醛与核糖的2′和3′羟基在例如20℃的温度下反应，制备了由苯乙烯基取代的缩醛顺式和反式异构体的混合物。通过在酸性水溶液条件下，对顺式异构体进行选择性降解，制备了反式异构体(化合物41)。

环状原酸酯可以通过在酸存在下使呋喃糖的邻位2′-和3′-羟基与非环状原酸酯反应而制备。当要衍生的核苷或核苷酸是含有6-氨基官能团的嘌呤或含有4-氨基官能团的嘧啶时，它可以通过分别用一种异氰酸酯或异硫氰酸酯处理而转化为各自的脲或硫脲，如先前对于呋喃糖2′或3′羟基的氨基甲酸酯或硫代氨基甲酸酯所述。发现此氨基与异氰酸酯或异硫氰酸酯的反应可通过合适操纵反应的化学计量在呋喃糖上一个或多个羟基的存在下进行。

本文所述的所有衍生化反应可在预先形成的多磷酸二核苷酸上进行，根据反应的化学计量和是否存在多种反应性基团得到多种产物。当获得多种产物时，这些可以通过使用制备性反相高效液相层析(HPLC)方便地分离。特别有利的是使用C18或苯基反相柱并结合使用梯度液，从乙酸铵缓冲液开始，以甲醇结束。缓冲液的使用提供了核苷酸稳定性，改善了洗脱产物的峰形状，使用甲醇能够有效地使这些亲脂化合物从柱上解吸。特别有利的是使用乙酸铵缓冲溶液联合甲醇，因为这些溶剂可以任何比例混合，并不难从层析产物中通过蒸发，然后冻干除去。

虽然可用HPLC进行多种产物的分离，另一种策略是使用含有仅一个反应官能团的核苷或核苷酸，不论是仅存在一个基团，或使用保护性基团封闭分子内其它位置的副反应。这可以在预先形成的多磷酸二核苷酸水平进行，或者可以在一、二或三磷酸核苷进行，生成它们自身的新产物，或可以与其它一、二或三磷酸核苷通过先前所述的方法偶联。

也可将上述反应和纯化技术应用于核苷、核苷酸及其衍生物的卡巴-核糖(carba-ribose)类似物(例如D₁＝CH₂)，例如“单核苷酸”和“二核苷酸”的术语也用于描述以式I-IV定义的卡巴-核糖类似物以及其它衍生物。

本领域的技术人员应知晓用于制备所述化合物无毒性的药学上可接受的盐和酰化前药的不同合成方法。

P2Y₁₂受体拮抗剂化合物的用途

本发明提供了一种预防或治疗与血小板聚集和/或血小板活化相关的疾病或病况的方法。该方法还提供了一种治疗血栓形成的方法。该方法包括给对象施用一种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的P2Y₁₂受体拮抗剂化合物，其中所述量有效结合血小板上的P2Y₁₂受体，并抑制ADP-诱导的血小板聚集。

通式I的化合物是ADP对其血小板膜受体(即P2Y₁₂受体)作用的拮抗剂。通式I的化合物在治疗中有效，尤其是在血小板聚集的预防或治疗中。该化合物通过其封闭ADP，阻止其作用于其血小板受体位点，从而防止血小板聚集提供作为抗血栓药物的效力。所述化合物以比阿司匹林提供更有效的抗血栓作用，但对于出血的影响比纤维蛋白受体的拮抗剂较小。

与目前可市售获得的产品氯吡格雷(Plavix^)和噻氯匹定(Ticlid^)相反，本发明的P2Y₁₂受体拮抗剂与P2Y₁₂受体以可逆的方式结合，由此可通过简单地停止用药治疗来逆转本发明化合物的治疗效果，从而重获所需的血小板的止血功能。由于血小板是缺乏合成新蛋白质的能力的无核细胞颗粒，用不可逆的P2Y₁₂拮抗剂治疗对象会导致血小板生命周期(约8-10天)中的功能缺陷。使用不可逆的P2Y₁₂拮抗剂(例如氯吡格雷)已关系到血液流失的提高、对输血的需要以及心脏手术后的再手术比率(Kapetanakis等，Eur Heart J.26：576-83，2005)。为了防止这些并发症，进行选择性外科手术的对象，需要在手术前至少5天停止用不可逆拮抗剂进行的治疗，这就提高了在此期间发生血栓形成事件的风险性。因此，本发明所述的化合物表现出胜过目前市场上销售的化合物的优势。

ADP-诱导的血小板聚集是通过同时活化P2Y₁₂和P2Y₁受体介导的，因此将式I的化合物与血小板P2Y₁受体拮抗剂的联合给药在各拮抗剂的浓度低于在其它系统中封闭各受体亚型的有效浓度下，能提供更有效的抗血栓效果，导致副作用的发生可能性下降。另外，这些化合物可与较低剂量的通过不同机制起作用的其它血小板聚集抑制剂的联合使用，来减少所述药物可能引起的副作用。

本发明的化合物可用作抗血栓药物，因此用于治疗或预防不稳定型心绞痛、冠状动脉血管成形术(PTCA)和心肌梗塞。

本发明的化合物可用于治疗或预防动脉粥样硬化的原发性动脉血栓并发症，例如血栓性中风、周围血管疾病和心肌梗塞而不溶栓。

本发明的化合物可用于治疗或预防由于动脉粥样硬化疾病的干预，例如血管成形术、动脉内膜切除术、支架放置、冠状和其它血管移植手术引起的动脉血栓并发症。

本发明的化合物可用于治疗或预防手术或机械损伤，例如手术或偶然创伤后的组织补救，重建性手术包括皮瓣，和“还原性”手术例如乳房减小的血栓并发症。

本发明的化合物可用于预防体内机械诱导的血小板活化，例如由导致暂时性血小板功能障碍的心肺分流术引起的血小板活化(预防微血栓栓塞)。本发明的化合物可用于预防体外机械诱导的血小板活化。例如可将本发明的化合物用于血液产品(例如血小板浓缩物)的防腐化合物、预防分流阻塞，例如肾透析和血浆置换、以及预防由于血管损伤/炎症，例如血管炎、动脉炎、肾小球肾炎和器官移植排斥造成的血栓形成。

本发明化合物可用于具有弥散性血栓/血小板消耗成分的病症，例如播散性血管内凝结、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒症综合征、肝素诱导的血小板减少症和先兆子痫/子痫。

本发明化合物可用于治疗或预防静脉血栓，例如深静脉血栓、静脉栓塞疾病、血液学病况，例如血小板增多症和红细胞增多症，以及偏头痛。

本发明的化合物可用于治疗哺乳动物，减轻动脉粥样硬化和动脉硬化、急性MI、慢性稳定性心绞痛、不稳定性心绞痛、短暂性局部缺血发作和中风、周围血管疾病、动脉血栓形成、先兆子痫、栓塞、血管成形术、颈动脉内膜切除术和血管移植吻合术后的再狭窄或突然闭合。

本发明的化合物可用于治疗过聚集性的慢性或急性状态，例如弥散性血管内凝血(DIC)、败血症、手术或感染性休克、手术后和产后创伤、心肺分流术、不兼容输血、胎盘早期脱离、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、蛇毒和免疫疾病也可能对这些治疗有反应。

本发明的化合物可用于治疗因血液与人造装置接触而造成的与血小板聚集和/或血小板活化相关的疾病或病况。在一个实施方式中，所述人造装置是体旁人造肺(paracorporeal artificial lung)和体外膜产氧装置(extracorporeal membrane oxigenationdevice)。在另一实施方式中，所述人造装置是可植入的人造心脏。在另一实施方式中，所述人造装置是用于去除或分离血液中特定成分并将其余的血液成分返还给供血者的血液成分部分清除仪器(apheresis instrument)。在另一实施方式中，所述人造装置是血液透析仪。

本发明的化合物可用于在体外抑制血液和血液制品中的血小板聚集，例如用于储存或离体操作(例如用于诊断或研究)。在这些应用中，可将所述化合物施用于血液或血液制品。

最后，如果本发明的化合物具有足够的结合亲和力并带有荧光部分，可将其用作P2Y₁₂受体的生物探针。

在优选的实施方式中，将所述化合物用于治疗不稳定心绞痛、冠状动脉血管成形术和心肌梗塞。

在另一优选的实施方式中，将所述化合物用作预防或治疗血栓形成性疾病中的辅助疗法，所述血栓形成性疾病为例如不稳定心绞痛治疗中的冠状动脉血栓形成、冠状动脉血管成形术和急性心肌梗塞，即perithrombolysis。将所述化合物与其它抗血小板和/或抗凝血药物(例如肝素、阿司匹林、GP IIb/IIIa拮抗剂或凝血酶抑制剂)联合用药。

本发明提供了一种在哺乳动物(尤其是人)中抑制血小板聚集和凝块形成的方法，所述方法包括给予所述对象式(I)的化合物和药学上可接受的载体。

本发明还提供了一种在纤维蛋白溶解治疗后抑制动脉或静脉重新阻塞的方法，它包括给予对象式(I)的化合物和纤维蛋白溶解剂。当在本发明中使用时，术语纤维蛋白溶解剂是指任何化合物，不论天然或合成产物，直接或间接导致纤维蛋白凝块的溶解。纤溶酶原活化剂是一类熟知的纤维蛋白溶解剂。有用的纤溶酶原活化剂包括例如复合纤溶酶链激酶、尿激酶(UK)、前尿激酶(pUK)、链激酶(SK)、组织纤溶酶原活化剂(tPA)和突变剂，或其变体，它维持纤溶酶原活化剂活性，例如化学修饰过，或其中加入、缺失或取代一个或多个氨基酸，或其中通过联合一种纤溶酶原活化剂的活性位点或另一种纤溶酶原活化剂或纤维蛋白结合分子的纤维蛋白结合域，加入、缺失或改变一个或多个功能域的变体。

在心血管手术中常规使用体外循环，以对血液充氧。血小板粘附在体外回路表面。从人工表面释放的血小板显示受损的止血功能。本发明的化合物可用于防止粘附。

这些化合物的其它应用包括预防血栓治疗期间和血栓治疗后的血小板血栓形成、血栓栓塞和重新阻塞，和预防冠状和其它动脉的血管成形术后和冠状动脉分流术后的血小板血栓形成、血栓栓塞和重新阻塞。

本发明活性化合物可全身施给需要治疗的个体的目标位点，这样来提高P2Y₁₂激动剂的胞外浓度，以封闭ADP与P2Y₁₂受体的结合，从而抑制血小板聚集。本文所用的术语“全身性”包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射、玻璃体内注射、输液、吸入、透皮给药、口腔给药、直肠给药和手术内滴注。还包括泵导管系统和连续或选择性释放装置的装置将所述化合物输注给目标血小板。

对于全身性给药，例如注射和输液，药物制剂可制备在无菌介质中。根据所用的载体和浓度，活性成分可以悬浮或溶解在载体内。佐剂，例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可溶于载体。无菌可检控制剂可以是无毒可接受的去污剂(diligent)或溶剂中的无菌可检控溶液或悬液。在使用的可接受的载体和溶剂中有无菌水、盐水溶液或Ringer氏溶液。

全身施用活性化合物的另一种方法涉及口腔给药，其中含有活性化合物的药物组合物的形式是片剂、锭剂、水相或油相悬液、粘性凝胶、口香糖、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊或糖浆或酏剂。

对于口腔使用，在可分散粉末和颗粒中加入水和分散或湿润剂、悬浮剂、一种或多种防腐剂和其它赋形剂，制备水相悬液。悬浮剂包括例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素和海藻酸钠。分散剂或湿润剂包括天然存在的磷脂，丙炔化氧与脂肪酸的缩合产物、环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物、环氧乙烷与脂肪酸和己糖醇的部分酯的缩合产物，和环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的部分酯的缩合产物。防腐剂包括例如对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸乙酯正丙酯。其它赋形剂包括甜味剂(例如蔗糖、糖精)、调味剂和着色剂。本领域技术人员应认识到上面的一般描述包括许多具体的赋形剂和湿润剂。

对于口腔给药，通过将活性化合物与适用于制造片剂的无毒的药物学上可接受的赋形剂混合来制备片剂。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；粒化剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是不上糖衣或可以通过已知技术上糖衣，以延迟在胃肠道内崩解和吸收的时间，从而在更长的时间内提供缓释作用。例如，可使用一种时间延迟材料，例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。口腔使用的制剂还可做成硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固相稀释剂，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或做成软明胶胶囊，其中活性成分与水或油基质，例如花生油、液态石蜡或橄榄油混合。口腔使用的制剂还可做成口香糖，通过将活性成分包埋在胶中，从而活性成分可以随着咀嚼缓慢释放。

对个体目标血小板全身性施用活性化合物的另一种方法涉及活性化合物的栓剂形式，这样化合物的治疗有效量可通过全身性吸收和循环到达目标位点。

对于直肠给药，可以通过将活性成分与合适的无刺激性赋形剂(在常温是固体但在直肠温度下是液体，从而能够在直肠中融化，以释放化合物)混合，制备栓剂形式的组合物。这些赋形剂包括可可脂和聚乙二醇。

还可用透皮贴片或垫通过皮肤吸收，对血小板聚集位点全身性施用活性化合物。活性化合物可通过皮肤吸收到血流中。可用含有不同浓度活性化合物的贴片控制活性化合物的血浆浓度。

一种全身性方法涉及含有活性化合物的可呼吸颗粒的气溶胶悬液，它被个体吸入。活性化合物可以通过肺被吸收入血流，然后以药物有效量接触目标血小板。可呼吸颗粒可以是液体或固体，颗粒尺寸足够小，在吸入后能通过口腔和喉咙；一般约1-10微米，但更优选是1-5微米大小的颗粒被认为是合适的。

另一种对个体的血小板聚集位点全身性施用活性化合物的方法涉及施用滴眼液或洗眼液的液体/悬液，或液体形式的滴鼻液，或让个体吸入的可呼吸颗粒的鼻部喷雾。可通过将活性化合物与合适的载体，例如无菌无热原水或无菌盐水，通过本领域技术人员已知的技术混合，来制备用于制备鼻部喷雾或鼻或眼药水的活性化合物的液体药物组合物。

玻璃体内传递可包括一次或多次玻璃体内注射，或通过以缓释形式释放P2Y₁₂拮抗剂的可植入玻璃体内装置。玻璃体内传递还可包括在手术过程中作为眼内冲洗溶液的附加成分传递，或直接在手术过程中对玻璃体施用。

对于全身性给药，传递的活性化合物的血浆浓度可根据化合物改变，但通常是1×10^-10-1×10^-4摩尔/升，优选1×10^-8-1×10^-5摩尔/升。

本发明的P2Y₁₂拮抗剂化合物的药物利用性是由其对ADP-诱导的血小板聚集的抑制表示的。该广泛使用的试验，如S.M.O.Hourani等，Br.J.Pharmacol.105，453-457(1992)所述，依赖于在添加聚集剂，例如ADP后血小板悬液的聚集的测定。

用下列实施例进一步说明了本发明。这些实施例不是为了将本发明限于说明书所描述的方法范围内。

实施例

实施例1

2′(3′)-O-((苯基氨基羰基)-尿苷5′-)三磷酸

在无水DMF(1ml)中溶解5′-三磷酸尿苷二三丁基铵盐(100mg，0.176mmol；从三钠盐通过用Dowex 50Wx4H⁺在水中处理，然后将质子化的物质与过量三丁胺反应，反萃取并冻干)，加入异氰酸苯酯(19微升，0.176mmol)。反应混合物在45℃加热15分钟，此时再加入一份异氰酸苯酯(19微升，0.176mmol)。溶液在45℃加热过夜，在旋转蒸发器上除去DMF。剩余的油在水(2mL)和乙酸乙酯(2ml)之间分配，并分层。用乙酸乙酯(各2ml)再萃取水层2次，在旋转蒸发器上除去水。剩余物溶于水(1.5ml)，重复将产物注射入制备级HPLC柱(Alltech核苷酸/核苷C18，7微米，10×250mm，梯度为0.1M乙酸铵-甲醇，经过30分钟，5ml/分钟，在260nm监测)分离产物。氨基甲酸酯的产率是26mg(22％，对于季铵盐计算)。1H NMR显示产物是2′和3′氨基甲酸酯的混合物。如此获得的产物本身可用于本发明，或可用适合的偶联剂(例如碳二亚胺)活化，并与各种核苷酸反应，以产生新颖的多磷酸二核苷。

1H NMR(D2O，300MHz)：δ4.10-4.47(m，4H)，5.17(m，1H)，5.83(dd，1H)，5.96(m，1H)，7.04(t，1H)，7.25(m，4H)，7.79(m，1H).31P NMR(D2O，121.47MHz)：δ-9.54(m，1P)，-10.20(m，1P)，-21.87(m，1P)。

实施例2

2′(3′)-O-(苯基氨基羰基)-P¹，P⁴-二(尿苷5′-)四磷酸[“一苯基氨基甲酸酯Up4U”]，二-2′(3′)-O-(苯基氨基羰基)-P¹，P⁴-二(尿苷5′-)四磷酸[“二苯基氨基甲酸酯Up4U”]和三-2′(3′)-O-(苯基氨基羰基)-P¹，P⁴-二(尿苷5′-)四磷酸[“三苯基氨基甲酸酯Up4U”]

在无水DMF(2ml)中溶解P¹，P⁴-二(尿苷5′)′-四磷酸二三丁基改盐(211mg，0.182mmol；从四钠盐通过用Dowex 50Wx4H⁺的水溶液处理，然后将质子化物质与过量三丁胺反应，反萃取并冻干)，加入一份异氰酸苯酯(40微升，3.64mmol)。均匀反应混合物在45℃加热过夜，此时TLC(硅胶，50％异丙醇/50％氢氧化铵)表明基本转化成两种产物。在旋转蒸发器上除去溶剂，剩余物在水(7mL)和乙酸乙酯(10ml)之间分配。分离层，用乙酸乙酯(各10ml)再萃取水层2次。从水萃取物中除去水，剩余的油冻干过夜。获得的固体在水(3ml)中重建，重复将产物注射入半制备级HPLC柱(Alltech核苷酸/核苷C18，7微米，10×250mm，梯度为0.1M乙酸铵-甲醇，经过30分钟，5ml/分钟，在260nm监测)分离两种产物。反萃取和冻干得到一苯基氨基甲酸酯(48mg，产率27％)、二苯基氨基甲酸酯(16mg，产率8％)和痕量的三苯基氨基甲酸酯，作为四铵盐。所有三种产物是相应的2′/3′区域异构体的混合物。

一苯基氨基甲酸酯：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ4.08-4.65(m，9H)，5.14(d，1H)，5.75-5.94(m，4H)，7.01(t，1H)，7.22(m，4H)，7.76(m，2H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.17(m，2P)，-21.81(m，2P)。

二苯基氨基甲酸酯：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ4.13-4.43(m，8H)，5.12(m，2H)，5.84(m，4H)，7.01(m，2H)，7.21(m，8H)，7.75(dd，2H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.19(m，2P)，-21.65(m，2P)。

三苯基氨基甲酸酯：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ4.29(m，7H)，4.5.10(m，1H)，5.27(m，2H)，5.87(m，4H)，7.09(m，15H)，7.76(d，2H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.30(m，2P)，-21.73(m，2P)。

实施例3

P¹，P⁴-四(2′(3′)-O-(苯基氨基羰基)-二(尿苷5′-)四磷酸[四苯基氨基甲酸酯Up4U”]

根据实施例2的方法制备了该衍生物。用16当量异氰酸苯酯(300微升，2.76mmol)的DMF溶液处理P¹，P⁴-二(尿苷5′-)四磷酸二三丁基铵盐(200mg，0.172mmo)，35℃搅拌过夜。蒸发溶剂，用乙酸乙酯萃取产物水溶液除去过量试剂。如前所述制备级HPLC后，获得93mg(30％产率)的四苯基氨基甲酸酯。

四苯基氨基甲酸酯：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ7.75(d，2H)，7.11(m，16H)，6.94(m，4H)，5.95(d，2H)，5.80(d，2H)，5.32(m，2H)，5.23(m，2H)，4.42(m，2H)，4.25(m，2H)，4.16(m，2H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.30(m，2P)，-22.32(m，2P)。

实施例4

2′，3′-(苄基)亚甲基二氧基-P¹，P⁴-二(尿苷5′-)四磷酸[“一2′/3′苄基缩醛Up4U”]和P¹，P⁴-二-(2′，3′-((苄基)亚甲基二氧基)二(尿苷5′-)四磷酸[“二2′/3′苄基缩醛Up4U”]

在98％甲酸中溶解P¹，P⁴-二(尿苷5′)′-四磷酸四钠盐(290mg，0.332mmol)，加入苯基乙醛二甲基缩醛(110微升，0.662mmol)。在室温搅拌反应物3天，此时TLC(硅胶，50％异丙醇/50％氢氧化铵)和HPLC(C18)表明良好转化成两种极性较小的产物。在旋转蒸发器上除去甲酸，剩余物在0.7M碳酸氢铵(15mL)和乙酸丁酯(15ml)之间分配。分离层，用另一份乙酸丁酯(10ml)洗涤水层。反萃取水层，剩余物冻干过夜。将粗产物溶于水(5ml)，通过制备级HPLC柱(Waters Novapak C18，6微米，25×100mm，梯度为0.1M乙酸铵-甲醇，经过30分钟，30ml/分钟，在260nm监测)分离组分。单缩醛的产率是88mg(28％)，二缩醛是60mg(17％)都是四铵盐。

单缩醛：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ2.99(d，2H)，4.01-4.32(m，8H)，4.77(m，2H)，5.33(m，2H)，5.74(d，1H)，5.81(m，2H)，7.21(m，5H)，7.64(d，1H)，7.79(d，1H).³¹P NMR (D₂O，121.47 MHz)：δ-10.18(m，1P)，-10.78(m，1P)，-22.00(m，2P)。

二缩醛：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ2.98(d，4H)，3.99(m，4H)，4.27(m，2H)，5.27(m，2H)，5.36(m，2H)，5.73(d，J＝8.1Hz，2H)，7.21(m，10H)，7.61(d，J＝8.1Hz，2H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.57(m，2P)，-21.81(m，2P)。

实施例5

2′，3′-((苄基)亚甲基二氧基)P¹，P³-尿苷5′-)三磷酸[“2′3′苯基乙醛缩醛Up3U”]和P¹，P³-二-(2′，3′-((苄基)亚甲基二氧基)尿苷5′-)三磷酸[“二2′3′苯基乙醛缩醛Up3U”]

在98％甲酸中溶解P¹，P³-二(尿苷5′)′-三磷酸三钠盐(100mg，0.129mmol)，加入苯基乙醛二甲基缩醛(64微升，0.386mmol)。在室温下搅拌过夜后，除去甲酸，剩余物在1M碳酸氢钠和乙酸乙酯之间分配。除去有机层，用制备级HPLC柱如前所述纯化产物。冻干后，获得40mg(36％)单缩醛和24mg(19％)二缩醛。

单缩醛：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ7.7s(d，2H)，7.54(d，2H)，7.16(s，5H)，5.70(m，3H)，5.31(s，1H)，5.23(s，1H)，4.66(m，2H)，4.10(m，8H)，2.93(d，2H).³¹PNMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.30(m，1P)，10.81(m，1P)，-21.99(m，1P)。

二缩醛：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ7.51(d，2H)，7.15(m，10H)，5.65(d，2H)，5.31(d，2H)，5.20(t，2H)，4.63(m，2H)，4.13(m，2H)，3.88(m，4H)，2.90(d，4H).³¹PNMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.75(m，2P)，-21.97(m，1P)。

实施例6

P¹-2′，3′-((苄基)亚甲基二氧)(尿苷5′-)P⁴-(脱氧胞苷5′-)四磷酸[“2′3′苯基乙醛缩醛Up4dC”]

在98％甲酸(1ml)中溶解P¹-(尿苷5′-)P⁴-(脱氧胞苷5′-)四磷酸四钠盐(100mg，0.16mmol)，加入苯基乙醛二甲基缩醛(57微升，0.384mmol)。搅拌过夜后，除去甲酸，剩余物在1M碳酸氢钠和乙酸乙酯之间分配。分离层后，用制各级HPLC柱如前所述纯化产物。产率40mg(36％)。该产品易于用实施例9-13所述的方法随后修饰脱氧胞苷碱基，产生在本发明范围内的亲脂性双功能分子。

单缩醛：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ7.98(d，1H)，7.62(d，1H)，7.21(m，5H)，6.11(m，2H)，5.74(d，1H)，5.39(d，1H)，5.31(t，1H)，4.77(m，2H)，4.45(m，1H)，4.32(m，1H)，4.03(m，5H)，2.99(d，2H)，2.29和2.21(M，2H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.15(m，1P)，-10.68(m，1P)，-21.98(m，2P)。

实施例7

3′-O-(苯基氨基羰基)-2′-脱氧(尿苷5′-)-单磷酸

将脱氧尿苷5′-单磷酸四丁基铵盐(135mg，0.274mmol；用Dowex 50Wx4H⁺处理，然后搅拌得到的中性物质和过量三丁胺，反萃取和冻干)溶于无水DMF(1ml)。加入异氰酸苯酯(60微升，0.547mmol)，并45℃加热过夜，此时TLC(硅胶，50％异丙醇/50％氢氧化铵)和HPLC(C18)表明基本转化成极性较小的产物。在旋转蒸发器上除去DMF，油状残余物在水(10ml)和乙酸乙酯(10ml)之间分配。分离层，重新用乙酸乙酯(2×10ml)洗涤水层。除去水并将剩余物溶于水(2ml)。通过重复注射入半制备级HPLC(Alltech核苷酸/核苷C18，7微米，10×250mm，0.1M乙酸铵到甲醇梯度，经30分钟，5ml/分钟，260nm监测)分离产物。产量为67mg二铵盐(53％)。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ2.21(m，2H)，3.84(s，2H)，4.13(s，1H)，5.08(d，1H)，5.63(d，1H)，6.06(t，1H)，6.89(br.t，1H)，7.10(m，4H)，7.72(d，1H)。

³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-2.31(s)。

P¹-(3′-O-(苯基氨基羰基)-2′-脱氧尿苷5′-)P⁴-(尿苷5′-)四磷酸

在室温下用1.5当量二环己基碳二亚胺的DMF溶液处理尿苷5′-三磷酸二三丁基铵盐(从三钠盐通过用Dowex 50Wx4H⁺处理，然后将得到的中性物质与过量三丁胺一起搅拌，反萃取并冻干制备)。滤去二环己基脲，用3′-O-(苯基氨基羰基)-2′-脱氧(尿苷5′)单磷酸(单三丁基铵盐形式)处理得到的尿苷5′-环三磷酸。45℃搅拌反应混合物数日，除去溶剂。如上所述用制备级HPLC分离产物。

实施例8

2′(3′)-(2-甲基氨基)苯甲酰基-P¹，P⁴-二(尿苷5′-)四磷酸(“MANT Up4U”)和P¹，P⁴-二-(2′(3′)-(2-甲基氨基)苯甲酰基尿苷5′-)四磷酸(“二MANT Up4U”)

将P¹，P⁴-二(尿苷5′-)四磷酸四钠盐(800mg，0.93mmol)溶于水(5ml)，通过加入固态碳酸氢钠将pH调节到7.6。加入N，N-二甲基甲酰胺(DMF，5ml)，然后加入N-甲基靛红酸酐(231mg，1.3mmol)，50℃加热悬液2.5小时。TLC(硅胶，50％异丙醇，50％氢氧化铵)表明此时不进行反应，因此加入另一份N-甲基靛红酸酐(100mg，0.56mmol)，反应物再加热一小时。在旋转蒸发器上除去DMF，并将剩余物溶于少量水，加到DEAE Sephadex A-25柱(3×60cm)上。用水到1M碳酸氢铵的分布梯度洗脱柱，用设定在254nm的UV检测仪监测洗脱液。洗脱出的两种产物分别收集，并从各自除去溶剂，剩余物冻干过夜。1H NMR表明洗脱的第一种产物是单酰化化合物，而后者是二酰化衍生物，而且它们都是在2′或3′羟基酰化的混合物，但在同一糖上没有两个氨基甲酸酯。一氨基苯甲酰化产物的产率是150mg(16％)；二氨基苯甲酰化化合物的产量是91mg(8.7％)。

一氨基苯甲酰化衍生物：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ2.70(s，3H)，4.09-4.55(m，9H)，5.34(m，1H)，5.71(m，2H)，5.83(dd，1H)，6.01(m，1H)，6.57(m，1H)，6.65(m，1H)，7.25(t，1H)，7.72(d，2H)，7.81(m，2H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.20(m，2P)，-21.83(m，2P)。

二氨基苯甲酰化衍生物：¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ2.69(s，6H)，4.15-4.51(m，8H)，5.27(m，2H)，5.86(m，4H)，6.60(m，4H)，7.30(m，2H)，7.79(m，4H).³¹PNMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.16(m，2P)，-21.76(m，2P)。

实施例9

P¹-(4-N-(4-甲氧基苯基)氨基羰基胞苷-5′-)-P⁴-(尿苷5′-)四磷酸

将P¹-(胞苷5′)-P⁴-(尿苷5′-)四磷酸二三丁基铵盐(50mg，0.043mmol；用Dowex50Wx4H⁺的水溶液处理四铵盐，然后混合质子化物质和过量三丁胺的甲醇溶液，反萃取和冻干制备)溶于无水DMF(1ml)，一次性加入三丁胺(10微升，0.43mmol)和异氰酸对甲氧基苯酯(8.4微升，0.648mmol)。均匀反应混合物在35℃加热过夜，此时TLC(硅胶，50％异丙醇/50％氢氧化铵)和HPLC(C18)表明基本转化成单一产物。在旋转蒸发器上除去溶剂，剩余物溶于水(1ml)。通过重复注射入半制备级HPLC(Alltech核苷酸/核苷C18，7微米，10×250mm，0.1M乙酸铵到甲醇梯度，经30分钟，5ml/分钟，260nm监测)分离产物。反萃取和冻干得到作为四铵盐的对甲氧基苯基脲(24mg，55％产率)。

获得的产物可根据上述方法(例如实施例2-6)在2′和/或3′羟基上衍生化。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ3.59(s，3H)，4.01-4.20(m，10H)，5.68(m，3H)，6.19(d，1H)，6.71(d，2H)，7.18(d，2H)，7.67(d，1H)，8.06(d，1H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.13(m，2P)，-21.76(m，2P)。

实施例10

P¹-((4-溴苯基)亚乙烯基胞苷5′-)-P⁴-(尿苷5′-)四磷酸

将P¹-(胞苷5′)-P⁴(尿苷5′-)四磷酸四钠盐(500mg，0.57mmol)溶于水(5ml)，加入2，4′-二溴苯乙酮(792mg，2.85mmol)的DMF(15ml)溶液。40℃加热混合物过夜，加入另一份二溴酮(400mg，1.44mmol)的DMF(5ml)溶液。再加热反应物5小时，蒸发除去溶剂。剩余物在水(20ml)和乙酸乙酯(25ml)之间分配并分离层。再用乙酸乙酯(2×15ml)洗涤水层，蒸发水层至干。剩余物溶于水(5ml)，通过重复注射入半制各级HPLC(条件见实施例6)分离产物。纯亚乙烯化合物的产量为80mg(13.5％)。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ4.06(m，8H)，4.36(m，2H)，5.64(dd，2H)，6.07(d，1H)，6.74(d，1H)，7.45(d，2H)，7.54(d，2H)，7.59(d，1H)，7.63(d，1H)，7.93(s，1H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.09(m，2P)，-21.59(m，2P)。

实施例11

P¹-((4-溴苯基)亚乙烯基-2′-脱氧胞苷5′-)-P⁴(尿苷5′-)四磷酸

根据实施例10的通用方法，用100mg P¹-(2′-脱氧胞苷5′)-P⁴-(尿苷5′-)四磷酸四钠盐和2，4′-二溴苯乙酮制备实施例11的产物。产率＝35mg(30％)。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ2.31(m，2H)，4.03(m，8H)，5.60(dd，2H)，6.41(t，1H)，6.73(d，1H)，7.53(m，5H)，7.65(d，1H)，7.93(s，1H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.11(m，2P)，-21.58(m，2P)。

实施例12

P¹，P⁴-二((4-溴苯基)亚乙烯基胞苷5′-)-四磷酸

根据实施例10的通用方法，用50mgP¹，P⁴-二(胞苷5′-)四磷酸四钠盐和2，4′-二溴苯乙酮制备实施例12的产物。产率＝20mg(29％)。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ4.24(m，10H)，5.98(d，2H)，6.39(d，2H)，7.14(m，8H)，7.45(m，4H).).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.13(m，2P)，-21.68(m，2P)。

实施例13

P¹-((4-苯基苯基)亚乙烯基胞苷5′-)-P⁴-(胞苷5′-)四磷酸

根据实施例10的通用方法，用50mg P¹，P⁴-二(胞苷5′-)四磷酸四钠盐和2-溴-4′-苯基苯乙酮制备实施例13的产物。产率＝15mg(13％)。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ4.10(m，10H)，5.48(d，1H)，5.87(m，2H)，6.68(d，1H)，7.20(m，3H)，7.36(m，6H)，7.68(m，3H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ-10.08(m，2P)，-21.78(m，2P)。

可根据实施例1-8的方法进一步衍生化实施例11-13的产物，得到在本发明范围内的双功能分子。

实施例14

2’，3’-苯基乙醛缩醛腺苷5’-单磷酸

将腺苷5’-单磷酸的游离酸(10.0g，28.8mmol)溶于三氟乙酸(50mL)中，加入苯基乙醛二甲基乙缩醛(18.50mL，121mmol)。在室温下搅拌反应物3小时，然后蒸发三氟乙酸，在1M碳酸氢钠(80mL)和乙酸乙酯(40mL)中分配剩余物。分离各层，以C₁₈制备型HPLC从水层中分离产物。产率＝7.50g(59％)。如下所述将由此获得的铵盐通过用稍许过量的三丁胺的水性N，N-二甲基甲酰胺溶液处理而转化为单-三丁基铵盐：，然后蒸发和干燥。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ3.06(d，2H)，3.86(m，2H)，4.39(m，1H)，4.91(m，1H)，5.18(m，1H)，5.36(t，1H)，5.63(d，1H)，7.23(m，5H)，8.09(s，1H)，8.20(s，1H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ2.17(s).

实施例15

2’，3’-肉桂基缩醛腺苷5’-单磷酸

将腺苷5’-单磷酸的游离酸(1.0g，2.88mmol)溶于98％甲酸(5mL)，加入肉桂醛(1.14g，8.65mmol)。在室温下搅拌反应物3小时，然后蒸发甲酸，在1M碳酸氢钠(25mL)和乙酸乙酯(20mL)中分配剩余物。分离各层，以制备型HPLC从水层中分离产物。产率＝0.202g(15％)。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ3.97(m，2H)，4.50(m，1H)，5.04(m，1H)，5.29(m，1H)，5.65(d，0.4H)，5.86(d，0.6H)，6.24(m，2H)，6.87(dd，1H)，7.27(m，3H)，7.43(m，2H)，8.12(d，1H)，8.28(d，1H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ1.42(d).

实施例16

2’，3’-苯基乙醛缩醛-6-N-苯脲腺苷5’-单磷酸(化合物22)

将2’，3’-苯基乙醛缩醛腺苷5’-单磷酸三丁基铵盐(按照实施例14制备，1.0g，2.15mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)，加入异氰酸苯酯(1.17g，10.72mmol)。将反应物在35℃加热4小时，然后去除溶剂，在1M碳酸氢钠(30mL)和乙酸乙酯(25mL)中分配剩余物。分离各层，以制备型HPLC从水层中分离产物。产率＝0.85g(68％)。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ2.97(d，2H)，3.81(m，2H)，4.31(m，1H)，4.78(m，1H)，4.98(m，1H)，5.23(t，1H)，5.63(d，1H)，6.74(m，1H)，6.96(m，4H)，7.19(m，5)，8.12(s，1H)，8.30(s，1H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ1.19(s).

实施例17

2’，3’-肉桂基缩醛-6N-乙脲腺苷5'-单磷酸(化合物27)

按照实施例16制备化合物27，以2’3’肉桂基缩醛腺苷5’-单磷酸(实施例15)起始，并用异氰酸乙酯代替异氰酸苯酯。产率＝65％。

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ1.07(t，3H)，3.21(q，2H)，3.93(m，2H)，4.45(m，1H)，4.99(m，1H)，5.28(m，1H)，5.54(d，0.3H)，5.70(d，0.7H)，5.95(m，1H)，6.14(m，1H)，6.61(dd，1H)，7.14(m，5H)，8.29(m，2H).³¹P NMR(D₂O，121.47MHz)：δ1.93(d).

实施例18

反式-2’，3’-肉桂基缩醛-6N-乙脲腺苷5’-单磷酸(化合物41)

采用HPLC分离包含在化合物27(实施例17)中的两种非对映体，获得化合物41(反式-2’，3’-肉桂基缩醛-6N-乙脲腺苷5’-单磷酸)。典型地将化合物41转化为二钠盐形式以促进其从溶液中分离，并由此提高所得干燥粉末的稳定性。

HPLC方法：色谱柱：Phenomenex Synergi Polar RP，4μm，80埃，150x3.0mm；流动相：0.1M醋酸铵缓冲液(pH＝5)∶乙腈(70∶30)；检测：UV，254nm；柱温：室温；流速：1.5mL/分钟；化合物41的保留时间＝6.4分钟。

实施例19

反式-2’，3’-肉桂基缩醛-6N-乙脲腺苷5’-单磷酸(化合物41)的NMR数据

化学名：磷酸单-{6-[6-(3-乙基-脲基)-嘌呤-9-基]-2-苯乙烯基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基甲基}酯二钠盐

分子式：C₂₂H₂₃N₆Na₂O₈P

分子量：576.41

¹H NMR(D₂O，300MHz)：δ1.11(t，3H，J＝7.3Hz)，3.24(q，2H，J＝3.27Hz)，3.90(d，2H)，4.49(m，1H)，4.99(m，1H)，5.07(dd，1H，J＝3.3Hz)，5.32(dd，1H，J＝6.4Hz)，5.79(d，1H，J＝6.6Hz)，6.02(dd，1H，J＝6.6 and 16.0Hz)，6.18(d，1H，J＝3.7Hz)，6.62(d，1H，J＝16.0Hz)，7.14-7.23(m，5H)，8.33(s，1H)，8.47(s，1H).¹³CNMR(D₂O，121MHz)：14.2，63.9，80.24，83.54，83.9，87.83，119.23，142.11，149.27，149.34，150.87 ³¹PNMR(D₂O，75MHz)：δ5.168(s)。5mg/mL水溶液的旋光度＝-0.201°(比旋＝-50.4°)

实施例20

化合物31-40

根据实施例15所述，使腺苷5’-单磷酸的游离酸和苯甲醛在三氟乙酸中反应，制备2’，3’-苯基缩醛腺苷5’-单磷酸；产率为82％。

将2’，3’-苯基缩醛腺苷5’-单磷酸进一步加工为化合物36-40。根据实施例16的通用方法，使腺苷的6位与异氰酸乙酯发生酰化来制备化合物36。也可用2’，3’-苯基缩醛腺苷5’-单磷酸和适宜的异氰酸酯(分别为丙酯、丁酯、己酯和环戊酯)的类似反应制备化合物37-40。

类似地，如下所述制备化合物31、32、33和35：首先使腺苷5’-单磷酸的游离酸和苯基炔丙基醛在甲酸中反应(产率为35％)，然后使腺苷的6位与和适宜的异氰酸酯(分别为苯酯、己酯、丁酯或乙酯)发生酰化。用2’，3’-苯基炔丙基缩醛腺苷5’-单磷酸和异氰酸丙酯类似地制备化合物34。

实施例21

血小板聚集分析

从健康志愿者中将血液采集入注射器中，所述注射器中含有1/6最终血液体积的抗凝血ACD(65mM柠檬酸、85mM柠檬酸钠、110mM右旋糖)以用于制备洗出的血小板(WP)，或所述注射器中含有终浓度为10单位/mL肝素或300μM PPACK以用于全血(WB)分析。将收集用于全血分析的血液保持在室温下，并立即进行如下所述的分析。将收集用于WP的血液以180g离心15分钟，取出上清(富含血小板的血浆)。离心所述富含血小板的血浆，血小板形成块状，将其重新悬浮在含有以下物质的缓冲液中：NaCl(137)、KCl(2.7)、CaCl₂(2)、MgCl₂(1)、NaH₂PO₄(3)、葡萄糖(5)、HEPES(10)，pH 7.4的0.2％BSA。重复离心和洗涤两次，然后在含有0.25 U三磷酸腺苷双磷酸酶/mL的上述介质中重新悬浮。采用ChronoLog集合度计(Havertown，PA)的光学模式(optical mode)测定血小板聚集。将含有1mg/mL纤维蛋白原的500μl血小板悬液温热到37℃，以1000rpm搅拌。将标示浓度的ADP加入到样品中，监测聚集8分钟。用同样的方案研究本发明所述化合物的效果，除了在加入最大有效浓度的ADP之前，先将抑制剂孵育2-5分钟。对于全血聚集，用盐水1∶1稀释血液，然后使用集合度计的阻抗模式以上述相同的方式进行聚集。采用了GraphPad软件包(GraphPad Corp.San Diego，CA)使数据与四参数对数方程式拟合，从聚集率和每种测定所获得的最大聚集程度来计算血小板聚集激动剂和抑制剂的效力。

在本申请中将P2Y₁₂拮抗剂对血小板聚集的抑制能力表示为由最大有效浓度的ADP诱导的聚集的抑制百分比。当测试了很大浓度范围的P2Y₁₂拮抗剂(通常为1nM-100μM)时，还获得IC₅₀值。IC₅₀值表示抑制50％由给定浓度ADP诱导的聚集所需的拮抗剂浓度。

实施例22

不同化合物对ADP-诱导的聚集的作用

对不同化合物进行了它们对ADP-诱导的聚集的抑制试验，并根据实施例19的方案测定了IC₅₀；结果如图1所示。附图中的柱状图表明了100μM浓度的化合物对ADP-诱导的血小板聚集的作用，该数据以对ADP应答的抑制％表示。

图1显示了各化合物的结构和简要命名以及它们的活性。为了简便起见，省略了可理解存在的氢。例如，对于图中的第一个结构，其隐含了嘧啶环中3-位的氢、核糖3′-位氧上的氢以及核糖2′-位氨基甲酸酯的氮上的氢。此外，如本发明范围所揭示，隐含了不以双键形式连接于磷原子的氧可以离子化形式作为带有抗衡离子的盐存在，或于氢原子连接。为了简便起见，将附图中的某些结构描述成盐的形式，但不应将其解释为排除了氢可替代存在的可能性。

在呋喃糖的羟基上不带有修饰的多种母体化合物——Up4U、Ip4U、Up3U和Cp4U已包括在附图的最末以说明本发明的用途。然而，这些未经修饰的母体化合物不能抑制由ADP-诱导的聚集，不包含在本发明的范围内。

实施例23

钙动员分析

关于钙动员分析，将表达P2Y₁、P2Y₂和P2Y₆的细胞接种入黑壁/透明底的细胞培养板中(Corning Inc.，Corning，NY)，接种后48小时进行分析。在分析当天，吸弃生长培养基，更换为含有Fluo-3 AM(2.5μM的终浓度)的分析缓冲液溶液，所述分析缓冲液由以下成分组成(mM)：KCl(10.0)、NaCl(118)、CaCl₂(2.5)、MgCl₂(1.0)、HEPES(20)、葡萄糖(10)，pH7.4。与Fluo-3 AM在25℃共同孵育60分钟后，清洗细胞去除染料。用不同浓度的受试化合物处理细胞，1-2分钟后再加入最大有效浓度的同源受体(cognate receptor)激动剂。通过用荧光图像读板仪(FLIPR，MolecularDevices Corp.，Sunnyvale，CA)测定荧光强度的变化，同时连续监测各孔中应答以受试化合物和受体激动剂进行的细胞处理的细胞内钙水平。本分析的结果示于表1中。

实施例24

不同化合物对ADP-诱导的聚集和对P2Y受体激活的作用

采用实施例21中所述的洗出的血小板制备方法，测试了不同化合物对ADP-诱导的血小板聚集的抑制作用。此外，还按照实施例23所述的钙动员方法，评估了这些化合物对P2Y₁、P2Y₂、P2Y₄和P2Y₆受体激活的作用。结果示于表1中。所有经测试的化合物对P2Y₁、P2Y₂、P2Y₄和P2Y₆受体均无应答(NR)。数据表示为至少两个单独试验的平均值。

表1

化合物#	血小板聚集IC₅₀(nM)	钙动员
		钙动员				P2Y₁	P2Y₂	P2Y₄	P2Y₆
		22	160±27	NR	NR	P2Y₁	P2Y₂	P2Y₄	P2Y₆	NR	NR
23	53±16	22	160±27	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
23	53±16	24	41±7	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
25	36±9	24	41±7	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
25	36±9	26	36±9	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
27	9±3	26	36±9	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
27	9±3	28	209	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
31	230	28	209	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
31	230	32	210	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
33	67	32	210	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
33	67	35	25	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
36	13±3	35	25	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
36	13±3	41	13±2	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
42	12	41	13±2	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
42	12	43	11	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
45	10	43	11	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
45	10	46	53	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR
47	55	46	53	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR	NR

实施例25

化合物对体内血小板聚集的效果

为了评估这些化合物在体内抑制血小板聚集的能力，进行了与R.G.Humphries等(Br.J.Pharmacol.115：1110-1116，1995)的方法相似的实验方案。

手术准备和仪器：麻醉雄性斯普拉—道来(Sprague-Dawley)大鼠。用加热灯将体温维持在37℃±5℃。动物自主呼吸，并进行气管切开以确保开放气道。将含有肝素化的盐水的套管插入左侧股动脉，并与传感器连接，以记录血压和心跳速率。将含有非肝素化盐水的套管插入左总颈动脉和左颈静脉，分别用于抽取动脉血样并静脉施用化合物。

实验方案：各化合物或载体通过输液施给各动物。在第一次输液前，每次输液结束时和最后一次输液停止后20分钟立即抽取血样，以测定体外血小板聚集。采样结束后，立即以一式两份在0.5ml用盐水1∶1稀释的血样中测定ADP-诱导的血小板聚集，并在37℃孵育4分钟。对于该阶段的最后一分钟，将比色杯转移到聚集度计中，900rpm搅拌样品。以20微升体积加入ADP(3lμM)，记录聚集反应。

实施例26

麻醉的大鼠中血栓形成的抑制

为了评估这些化合物对于体内血栓形成的作用，进行了下列实验方案：

用戊巴比妥钠(70mg/kg腹膜内)麻醉大鼠(CD-1；雄性；约350g；Charles River，Raleigh，NC)。腹部剃毛，在侧尾静脉中插入22口径静脉内导管。进行中线切割，将小肠包扎在浸渍盐水的纱布中，放置成可接触腹主动脉。小心分离下腔静脉和腹主动脉，解剖一段(约1cm)腹主动脉(远离肾动脉，靠近分叉)。将该段主动脉中的所有分枝用4-0丝缝合线连接。在动脉上安装与Transonic流量表连接的2.5mm直径流量探头，记录基线(狭窄前)流量。用两个夹子夹住动脉，将血管直径减少约80％。记录第二基线流量(狭窄后)，测试充血反应。然后用化合物或盐水通过尾静脉导管静脉内处理动物。用止血钳重复外部压缩血管后5分钟引起血栓。受伤2分钟后，重复压缩血管，开始10分钟的流量监测期。连续监测动物受伤后的最初10分钟的最小值。20分钟(受伤后)后，重复流量测定，使动物安乐死。收集包括受伤区段的动脉区段，并置于10％福尔马林中用于可能的组织学评估。

实施例27

在麻醉的犬中对血栓形成的抑制

为了评估这些化合物对于体内动态血栓形成的作用，进行了与J.L.Romson等(Thromb.Res.17：841-853，1980)的方法相似的下列实验方案。

手术准备和仪器：简单说，麻醉为特定目的而饲养的犬，插管并通室内空气。在第15根肋骨空间左侧切开胸廓，暴露心脏，并用心脏吊架悬挂。通过钝头分离分离左冠状动脉回旋支(LCCA)的2-3cm区段。动脉从近端到远端装有流量探头、刺激电极和Goldblatt夹。流量探头监测平均和阶段LCCA血流速度。刺激电极和它在LCCA中的位置和诱导阻塞性冠状动脉血栓的方法如先前所述(J.K.Mickelson等，Circulation 81：617-627，1990；R.J.Shebuski等，Circulation 82：169-177，1990；J.F.Tschopp等，Coron.Artery Dis.4：809-817，1993)。

实验方案：随即对狗进行4种处理方案之一(每处理组n＝6)，其中对照组静脉内接受盐水，三个药物处理组静脉内施用化合物。在手术干预稳定化后，犬接受盐水或化合物。约30分钟后，将阳极电流施加到LCCAl80分钟。记录在形成阻塞性血栓前循环流动变化(CFV)的数量和频率。这些循环现象是由于血小板聚集在狭窄的管腔中形成的血小板血栓导致的(J.D.Folts等，Circulation 54：365-370，1976；Bush等，Circulation 69：1161-l170，1984)。LCCA中的0流动最少30分钟表明缺乏抗血栓形成效力(L.G.Frederick等，Circulation 93：129-134，1996)。

实施例28

小鼠中的血小板聚集剂量依赖性抑制作用

为了评估本发明化合物对体内血小板聚集的作用，进行了如Leon等(Circulation 103：718-723，2001)所述的类似试验方案。

将盐水或不同剂量(通常为1-100μg/kg)的反式-2’，3’-肉桂基缩醛-6N-乙脲腺苷5′-单磷酸二钠盐(化合物41，也称INS50589)静脉注射入麻醉小鼠中。给予化合物5分钟后，从各动物获取700μL血液。合并两只动物的血液，立即进行处理，获得富含血小板的血浆，以用于对由1和5μM ADP激发的血小板聚集的评估。采用实施例21所述的光学集合度计测定血小板聚集。本文所述且用于该离体模型测试的P2Y₁₂受体拮抗剂对血小板聚集产生了剂量依赖性抑制作用。

实施例29

P2Y₁₂受体拮抗剂对小鼠血小板聚集的可逆抑制作用

本发明所述化合物的一个重要特征在于其对血小板聚集的可逆抑制性质。在对所选化合物对体内血小板聚集抑制的动力学研究中也使用了实施例28所述的模型系统。简而言之，静脉内给予最大有效浓度的受试化合物，在给予反式-2’，3’-肉桂基缩醛-6N-乙脲腺苷5’-单磷酸二钠盐(化合物41，也称INS50589)之前以及之后的不同时间(通常为0、1、5、15和30分钟)获取血样。立即对血样进行处理，如实施例28所述评估由1μM和5μM ADP诱导的聚集。给予受试化合物5分钟后观察到对ADP诱导的血小板聚集的完全抑制，而30分钟内对ADP的聚集反应回复到接近对照动物中观察到的值，这表明受试化合物在小鼠中的作用是可逆的(图2)。

实施例30

P2Y₁₂受体拮抗剂处理对小鼠中由血栓形成诱导的死亡的预防作用

用载体(对照)或单剂静脉内给予的受试化合物(通常为10-25mg/kg)处理10只麻醉的小鼠。处理后5分钟，将0.3mg/kg胶原和60μg/kg肾上腺素的混合物注射入动物。图3中以卡普兰-迈耶曲线显示了用盐水或25mg/kg的受试化合物(INS50589)预处理的动物，在给予胶原和肾上腺素后的存活时间。90％用载体预处理的动物在静脉注射胶原和肾上腺素后6分钟内死亡。相反，仅观察到20％用受试化合物预处理的动物因全身性血管内血栓栓塞而死亡。这些结果证明了体内给予本发明所述化合物的显著抗凝血作用。

实施例31

给予狗P2Y₁₂拮抗剂对血小板聚集的抑制作用

在研究前两周，将颈静脉导管和血管通孔植入小猎犬(beagle dog)。给4只狗(每种性别2只)的组穿上护套(jacket)，连接到用于给药的可走动输液泵。

在研究当天，以3mL/kg/h的速率，用不同浓度(通常为0.1-1.5mg/kg/h)的测试化合物连续输液90分钟对狗进行处理。在开始输液前约30分钟和15分钟(剂量前样品)、各输液阶段中的不同时间(通常为10、30、60和90分钟)以及输液终止后(通常为5、10、20、30、40、60、120和240分钟以及18、20、22和24小时)，从头部静脉导管取血用于离体全血血小板聚集分析和/或用于通过生物检测测定受试化合物的血浆水平。用如实施例21中所述的CronoLog集合度计的阻抗模式评估血小板聚集，在连接有Agilent 1100系列液相色谱仪的API 4000 LC/MS/MS系统上分析受试化合物的血浆水平。

如图4所示，连续静脉给予化合物41(INS50589)对血小板聚集产生了剂量依赖性抑制作用。在浓度为0.3mg/kg/h时，观察到了最大抑制效果。

还研究了由受试化合物引起的对血小板聚集的抑制的动力学和可逆性。如图5A所示，受试化合物的药效学效果在30分钟时达到稳态，输液终止后血小板聚集抑制迅速逆转。这些结果表明受试化合物可在起始连续静脉输液后数分钟内迅速抑制血小板聚集，而在终止输液后一小时内可几乎完全恢复血小板聚集。

给予受试化合物的药理学作用与所述化合物的血浆水平密切相关。受试化合物的总血浆浓度在30-60分钟达到稳态，而在停止给予所述化合物后迅速降低。如图5B所示，输液后的受试化合物单室模型分析显示所述化合物以约7分钟的估计半衰期从血浆中清除。

综上所述，化合物41(INS50589)的药代动力学和药效学数据与使得对血小板功能进行快速控制和容易逆转的快速起始和消除作用是一致的。

虽然已参考目前优选的实施方式对本发明进行了描述，应理解的是可不脱离本发明的范围而作出不同的改变。

Claims

1.式Ib-2的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；

式Ib-2

其中：

R₁₈是苯基、苄基或苯乙烯基；

R₁₉是C₂-C₆烷基；C₃-C₆环烷基；在烷基部分含有1-2个碳原子，在环烷基部分含有3-6个碳的烷基环烷基；苯基；它们是取代或未取代的。

2.如如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R₁₉是乙基、丙基、丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基、环戊基或苯基。

3.如权利要求1所述的化合物1，所述化合物为：2’3’苯基乙醛缩醛-6-N-苯脲AMP；2’3’苯基乙醛缩醛-6-N-正己脲AMP；2’3’苯基乙醛缩醛-6-N-乙脲AMP；2’3’苯基乙醛缩醛-6-N-环戊脲AMP；2’3’肉桂基缩醛-6-N-正己脲AMP；2’3’肉桂基缩醛-6-N-乙脲AMP；2’3’肉桂基缩醛-6-N-苯脲AMP；2’3’肉桂基缩醛-6-N-正丙脲AMP；2’3’肉桂基缩醛-6-N-正丁脲AMP；2’3’苯基炔丙基缩醛-6-N-苯脲AMP；2’3’苯基炔丙基缩醛-6-N-正己脲AMP；2’3’苯基炔丙基缩醛-6-N-正丁脲AMP；2’3’苯基炔丙基缩醛-6-N-正丙脲AMP；2’3’苯基炔丙基缩醛-6-N-乙脲AMP；2’3’苯甲醛缩醛-6-N-乙脲AMP；2’3’苯甲醛缩醛-6-N-正丙脲AMP；2’3’苯甲醛缩醛-6-N-正丁脲AMP；2’3’苯甲醛缩醛-6-N-正己脲AMP；2’3’苯甲醛缩醛-6-N-环戊脲AMP；2’3’-(反式)肉桂基缩醛-6-N-乙脲AMP；2’3’-(反式)苯基缩醛-6-N-乙脲AMP；2’3’-(顺式)苯基缩醛-6-N-乙脲AMP。

4.如权利要求3所述的化合物，所述化合物为2’3’-(反式)肉桂基缩醛-6-N-乙脲AMP；2’3’-(反式)苯基缩醛-6-N-乙脲AMP；或2’3’-(顺式)苯基缩醛-6-N-乙脲AMP。

5.式Ia-2的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物；

式Ia-2

其中：

R₁₈和R_18′独立地为苯基、苄基或苯乙烯基；和

6.如权利要求5所述的化合物，其特征在于，所述R₁₉和R_19’独立地为乙基、丙基、丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基、环戊基或苯基。

7.如权利要求5或6所述的化合物，其特征在于，R₁₈和R_18′、R₁₉和R_19′为相同的对。

8.如权利要求5所述的化合物，所述化合物为P¹，P²-二-(2’，3’-肉桂基缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸、P¹，P²-二-(2’，3’-苯基炔丙基缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸、P¹，P²-二-(2’，3’-苯基乙醛缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸或P¹，P²-二-(2’，3’-苯基缩醛-6-N-乙脲腺苷5’-)二磷酸。

9.一种药物制剂，所述药物制剂包含药学上可接受的载体和权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。

10.如权利要求9所述的药物制剂，其特征在于，所述化合物为2’3’-(反式)肉桂基缩醛-6-N-乙脲AMP；2’3’-(反式)苯基缩醛-6-N-乙脲AMP；或2’3’-(顺式)苯基缩醛-6-N-乙脲AMP。

11.一种预防或治疗与血小板聚集和/或血小板活化有关的疾病或病况的方法，所述方法包括：

给予对象权利要求9或10所述的药物制剂，其中所述化合物有效地结合于血小板上的P2Y₁₂受体并抑制ADP-诱导的血小板聚集。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述化合物可逆地抑制ADP-诱导的血小板聚集。

13.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述药物组合物是与其它抗血小板和/或抗凝血药物联合给药的。

14.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述与血小板聚集有关的疾病或病况是特征如下的病症或过程：血栓形成、动脉硬化疾病的原发性动脉血栓并发症、动脉粥样硬化疾病干预的血栓并发症、手术或机械损伤的血栓并发症、机械性诱导的血小板活化、分流堵塞、血管损伤和炎症继发性的血栓形成、弥散性血栓/血小板消耗性成分的适应症、静脉血栓形成、冠状动脉血栓形成、动脉粥样硬化和动脉硬化的病理作用、血液和血产品在储藏过程中的血小板聚集和凝块形成、超聚集性的慢性或急性状态、动脉或静脉在溶纤维蛋白治疗后的重新阻塞、与体外循环有关的血小板粘附、与溶栓治疗有关的血栓并发症、与冠状和其它血管成形术有关的血栓并发症、或与冠状动脉分流术有关的血栓并发症。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述与血栓形成有关的病症或过程是不稳定性心绞痛、冠状动脉血管成形术或心肌梗塞；所述动脉硬化的原发性动脉血栓并发症是血栓性中风、周围血管疾病或没有血栓溶解的心肌梗塞；所述动脉粥样硬化疾病干预的血栓并发症是血管成形术、动脉内膜切除术、支架放置、冠状或其它血管移植手术；所述手术或机械损伤的血栓并发症是手术或偶然创伤后的组织补救，重建性手术包括皮瓣或还原性手术；所述机械性诱导的血小板活化是由导致微血栓栓塞的心肺分流术和血制品储藏引起的；所述分流堵塞是肾透析和血浆置换；所述血管损伤和炎症继发性的血栓形成是血管炎、动脉炎、肾小球肾炎或器官移植排斥；所述弥散性血栓/血小板消耗性成分的适应症是播散性血管内凝结、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒症综合征、肝素诱导的血小板减少症或先兆子痫/子痫；所述静脉血栓形成是深静脉血栓、静脉栓塞疾病、血液学病况或偏头痛；和所述冠状动脉血栓形成是与不稳定性心绞痛、冠状动脉血管成形术或急性心肌梗塞有关。

16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述动脉硬化和动脉粥样硬化的所述病理学作用是动脉粥样硬化、急性心肌梗死、慢性稳定性心绞痛、不稳定性心绞痛、短暂性局部缺血发作、中风、周围血管疾病、动脉血栓形成、先兆子痫、栓塞、或是血管成形术或颈动脉内膜切除术或血管移植吻合术后的再狭窄或突然闭合；所述超聚集性的慢性或急性状态是由于DIC、败血症、手术或感染性休克、手术后创伤、产后创伤、心肺分流术、不兼容输血、胎盘早期脱离、血栓性血小板减少性紫癜、蛇毒或免疫疾病导致的。

17.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述与血小板聚集和/或血小板活化有关的疾病或病况是因血液与人造装置的接触而产生的。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述人造装置是血液透析仪、体旁人造肺和体外膜产氧装置、可植入的人造心脏、用于去除或分离血液中特定成分并将其余的血液成分返还给供血者的血液成分部分清除仪器。

19.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述给药是将所述化合物给予对象的全身性给药。

20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述全身性给药是口服给药。

21.一种用于体外抑制血液或血制品中血小板聚集的方法，所述方法包括将权利要求1-8中任一项所述的化合物或其盐、溶剂化物或水合物给予所述血液或血制品的步骤。

22.一种药物制剂，所述药物制剂包括：0.0005-0.3％w/v的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物、缓冲剂、螯合剂、非离子型张力调节剂，其中所述药物制剂的张力为250-350mOsm/kG，pH为4-9：

式I

其中：

X₁、X₂和X₃独立地为氧、亚甲基、一氯亚甲基、二氯亚甲基、一氟亚甲基、二氟亚甲基或亚氨基；

T₁、T₂、W和V独立地为氧或硫：

m＝0、1或2；

n＝0或1；

p＝0、1、或2；

其中m+n+p之和是0-5；

M＝H或药物学上可接受的无机或有机抗衡离子；

D₁＝O或CH₂；

B′是通式IV和V的嘌呤或嘧啶残基，它分别通过碱基的9-或1-位与呋喃糖或碳环的1′-位连接；

Y′＝H、OH或OR₁；

Z′＝H、OH或OR₂；条件是当A＝M时，Y′和Z′中的至少一个是OR₁或OR₂；

A＝M，或

A是如下定义的核苷残基：

其通过呋喃糖或碳环的5′-位与磷酸链连接，

其中D₂＝O或CH₂；

Z＝H、OH或OR₃；

Y＝H、OH或OR₄；

条件是Y′、Z′、Y和Z中的至少一个分别等于OR₁、OR₂、OR₄或OR₃；

B是通式IV和V的嘌呤或嘧啶残基，它分别通过碱基的9-或1-位与呋喃糖或碳环的1′位连接；

R₁、R₂、R₃和/或R₄是如通式II的通过碳原子直接与呋喃糖或碳环各自的2′-和/或3′-羟基连接的残基，或如通式III的通过共用碳原子与呋喃糖或碳环各自的两个(2′-和3′-)羟基直接连接的残基，从而存在1-4个符合式II定义的R₁、R₂、R₃和R₄独立残基，或存在1-2个由R₁+R₂和/或R₃+R₄构成的独立残基；

式II

其中：

O是各呋喃糖或碳环相应的的2′-和/或3′-氧；

C是碳原子；

R₅、R₆和R₇是H、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基或取代的芳基，从而使得式II定义的部分是醚；或

R₅和R₆是H、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基或取代的芳基，R₇是烷氧基、环烷氧基、芳烷氧基、芳氧基、取代的芳烷氧基或取代的芳氧基，从而使得式II定义的部分是非环状缩醛或缩酮；或

R₅和R₆合起来作为与C双键键合的氧或硫，R₇是烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基或取代的芳基，从而使得式II定义的部分是酯或硫代酸酯；或

R₅和R₆合起来作为与C双键键合的氧或硫，R₇是氨基或一或二取代的氨基，其中取代基是烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基或取代的芳基，从而使得式II的部分是氨基甲酸酯或硫代氨基甲酸酯；或

R₅和R₆合起来作为与C双键键合的氧或硫，R₇是烷氧基、环烷氧基、芳烷氧基、芳氧基、取代的芳烷氧基或取代的芳氧基，从而使得式II的部分是碳酸酯或硫代碳酸酯；或

R₇不存在，R₅和R₆合起来作为与C双键键合的氧或硫，呋喃糖或碳环各自的两个2′-和3′-氧直接与C键合，形成环状碳酸酯或硫代碳酸酯；

式III

其中：

所述O原子是呋喃糖或碳环的2′-和3′-氧；呋喃糖或碳环的2′-和3′-氧与共用碳原子(C)连接，形成环状缩醛、环状缩酮或环状原酸酯；

对于环状缩醛和环状缩酮，R₈和R₉独立地为氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基、取代的芳基，或能合起来形成由3-8个原子，优选3-6个原子组成的碳环或杂环；

对于环状原酸酯，R₈是氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、取代的芳烷基、或取代的芳基，R₉是烷氧基、环烷氧基、芳烷氧基、芳氧基、取代的芳烷氧基或取代的芳氧基。

23.如权利要求22所述的药物制剂，其特征在于，所述非离子型张力调节剂是甘露醇或右旋糖。

24.如权利要求23所述的药物制剂，其特征在于，所述非离子型张力调节剂的量为3-5％。