CN101012267A - 甘草酸苦参碱盐和甘草酸苦参素盐及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了新的化合物甘草酸苦参碱盐和甘草酸苦参素盐，及其差向异构体18－β或18－α甘草酸苦参碱盐苦参素盐，以及它们的生产方法和用于制备治疗肝病药物的用途。

Description

甘草酸苦参碱盐和甘草酸苦参素盐及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及可用于肝病治疗的药物，具体是甘草酸与苦参碱或苦参素结合所成的盐，该盐为甘草酸的不同差向异构体18-α甘草酸或18-β甘草酸与苦参碱或苦参素结合所成的盐。

背景技术

甘草酸(G1ycyrrhizin，GC)是由甘草中提取的有效活性成分，国内外已对其生物活性进行了广泛研究并用于临床多年，其具有抗炎、抗变态反应、抗生物氧化、调节免疫功能、阻止Ca²⁺内流、肾上腺皮质激素的解离作用以及稳定溶酶体膜等多方面的药理作用，其中抗炎作用是甘草酸抗肝损伤的主要机理。

苦参碱和苦参素是豆科槐属植物苦豆子的主要活性成分，苦参素即氧化苦参碱，他们均具有抗炎、抗病毒、免疫抑制、抗肿瘤等生物活性，现代药理学研究表明，苦参碱和苦参素对于病毒性肝炎具有明确的疗效，能抑制肝炎病毒的复制，同时还具有抗肝纤维化的作用。

中国发明专利申请CN1583783A“一种甘草酸复盐及其制备方法和用途”公开了一种甘草酸与苦参碱制成的复盐，但是他只公开了甘草酸与苦参碱在一定重量比范围内的组合物，并没有给出能达到最佳治疗效果的比例，也没有公开甘草酸与苦参素可以得到稳定的复盐。

按该专利申请所公开的内容，其中复盐的结构特征是以甘草酸分子甙元上的羧基为成盐位点，而甘草酸分子中有三个羧酸，其中甙元上的羧基活性最差，最难解离；同时，苦参碱有两个N原子都可作为成盐位点，而在该专利申请中未对它所描述的成盐位点作任何的说明。

甘草酸为五环三萜皂甙，甘草酸三萜组成部分中D/E环由于相邻环之间旋转空间受阻使C17-C18键方向改变，D/E环的连接为顺式或反式，即C18的氢为β构型或α构型。天然甘草酸主要为18β-甘草酸，18α-甘草酸在甘草中的含量仅为痕量，一般须由18β-甘草酸通过构象转化制得。现代大量的药理、生化研究表明，18α-甘草酸与18β-甘草酸在药理药效上存在很多差异(参见：中国临床药理学与治疗学9(6)：619-622，2004)。因此，甘草酸的不同差向异构体与苦参碱或苦参素成盐后具有不同的性质。

发明内容

本发明的目的是提供一种甘草酸苦参碱盐或甘草酸苦参素盐。

本发明的另一个目的是对甘草酸苦参碱盐或甘草酸苦参素盐的不同差向异构体即18α-甘草酸苦参碱盐、18α-甘草酸苦参素盐、18β-甘草酸苦参碱盐和18β-甘草酸苦参素盐进行优选，提供对于肝病具有更好治疗作用的甘草酸苦参碱盐。

本发明的再一个目的是提供制备甘草酸苦参碱盐或甘草酸苦参素盐，特别是18α-甘草酸苦参碱盐或18α-甘草酸苦参素盐的工艺方法。

本发明的目的还在于提供甘草酸苦参碱盐或甘草酸苦参素盐，特别是18α-甘草酸苦参碱盐或18α-甘草酸苦参素盐在制备治疗肝病药物中的应用。

本发明提供的甘草酸苦参碱盐的化学结构为：

甘草酸苦参素盐的化学结构为：

上述技术方案提供的两个复盐化合物中，甘草酸部分具有两种差向异构体，它们与苦参碱或苦参素成盐得到如下两对差向异构体，即(1)18α，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参碱盐；(2)18α，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参素盐；(3)18β，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参碱盐；(4)18β，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参素盐。

结合甘草酸、苦参碱和苦参素本身的结构和性质，再经过我们仔细的测定和分析，认定它们分别具有如下的化学结构：

18α，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参碱盐：

18α，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参素盐：

18β，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参碱盐：

18β，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参素盐：

以上化合物的制备方法如下：

将甘草酸与苦参碱按摩尔比1∶1溶解在有机溶剂中，搅拌数分钟后缓慢加入剧烈搅拌的丙酮中，析出白色结晶性粉末，即为甘草酸苦参碱盐。

如上所述的制备方法，甘草酸可以是18α-甘草酸、18β-甘草酸或其混合物，有机溶剂选自甲醇或乙醇等既能溶解甘草酸又能溶解苦参碱的有机溶剂中的一种或其混合物。

将甘草酸与苦参素按摩尔比1∶2溶解在有机溶剂中，搅拌数分钟后缓慢加入剧烈搅拌的丙酮中，析出白色结晶性粉末，即为甘草酸苦参素盐。

如上所述的制备方法，甘草酸可以是18α-甘草酸、18β-甘草酸或其混合物，有机溶剂选自甲醇或乙醇等既能溶解甘草酸又能溶解苦参素的有机溶剂中的一种或其混合物。

公开号为CN1583783A的专利申请公开了甘草酸与苦参碱按重量比1∶1～10所制成的复合物在治疗肝病中的应用，此复合物中除甘草酸苦参碱复盐外还有大量的游离苦参碱存在。而在对比实验中我们惊喜的发现，使用单一的甘草酸苦参碱盐或甘草酸苦参素盐，可以得到比单独使用甘草酸、苦参碱或苦参素更为优良的治疗作用，这可能与成盐后两者产生的协同治疗作用有关；并且由于成盐，降低了甘草酸、苦参碱或苦参素在单独使用时的副作用。将其用于制备治疗肝病的药物，具有更好的治疗作用、方便性和顺应性；且由于所成甘草酸苦参碱盐或甘草酸苦参素盐具有唯一的、确定的结构，易于作为药品控制其质量。

我们又对化合物18α-甘草酸苦参碱盐、18α-甘草酸苦参素盐、18β-甘草酸苦参碱盐、18β-甘草酸苦参素盐分别进行药效学研究，发现其中18α-甘草酸苦参碱盐、18α-甘草酸苦参素盐相对于18β-甘草酸苦参碱盐、18β-甘草酸苦参素盐在保肝和退黄方面具有更好的药效；18α-甘草酸苦参碱盐和18α-甘草酸苦参素盐还具有显著的抗乙肝病毒的作用，因此本发明进一步优选18α-甘草酸苦参碱盐、18α-甘草酸苦参素盐作为制备治疗乙肝的药物。

本发明还提供以甘草酸苦参碱盐或甘草酸苦参素盐作为药物活性成分的药物组合物。优选18α-甘草酸苦参碱盐、18α-甘草酸苦参素盐作为药物活性成分的药物组合物。

此活性成分可以根据公知技术制成任何一种药剂学上所说剂型的药物，所述的剂型包括各种口服剂型和注射剂型。口服剂型包括片剂，胶囊剂和口服液，注射剂型包括水针剂和粉针剂。

本发明提供的甘草酸与苦参碱或苦参素的成盐产物，具有合理的成盐比例和位点，适宜制备治疗肝病的药物。特别是经过优选的构型异构体18α-甘草酸苦参碱盐和18α-甘草酸苦参素盐，具有比其差向异构体18β-甘草酸苦参碱盐、18β-甘草酸苦参素盐和非单一异构体的甘草酸苦参碱盐或苦参素盐具有更好的疗效。

具体实施例

以下实施例是对本发明的举例说明，并非对本发明的限制。所用原料由江苏正大天晴药业股份有限公司提供。

实施例1  18β-甘草酸苦参碱盐

取18β-甘草酸165g和苦参碱49.7g加入适量无水甲醇中，室温下搅拌溶解，继续搅拌数分钟后缓慢加入剧烈搅拌的3000ml丙酮中，析出大量白色结晶性粉末，过滤，于60℃真空干燥，得白色结晶性粉末172g，收率为80.1％。

mp：204℃分解

$[C{]}_{20}^D=+24.5$ (1％乙醇)

元素分析	测定值(％)	计算值(％)
			C	63.88	63.91
H	8.12	8.09
			N	2.70	2.61

实施例2  18β-甘草酸苦参素盐

取18β-甘草酸165g和苦参素106g加入适量无水乙醇中，室温下搅拌溶解，继续搅拌数分钟后缓慢加入剧烈搅拌的3000ml丙酮中，析出大量白色结晶性粉末，过滤，于60℃真空干燥，得白色结晶性粉末188g，收率为69.4％。

mp：206℃分解

$[C{]}_{20}^D=+42.4$ (1％乙醇)

元素分析	测定值(％)	计算值(％)
			C	63.91	63.98
H	8.3 1	8.20
			N	4.12	4.15

实施例3  18α-甘草酸苦参碱盐

取18α-甘草酸165g和苦参碱49.7g加入适量无水甲醇中，室温下搅拌溶解，继续搅拌数分钟后缓慢加入剧烈搅拌的3000ml丙酮中，析出大量白色结晶性粉末，过滤，于60℃真空干燥，得白色结晶性粉末180g。收率为83.8％。

mp：208℃分解

$[C{]}_{20}^D=+23.6$ (1％乙醇)

元素分析	测定值(％)	计算值(％)
			C	63.78	63.91
H	8.10	8.09
			N	2.59	2.61

实施例4  18α-甘草酸苦参素盐

取18α-甘草酸165g和苦参素106g加入适量无水甲醇中，室温下搅拌溶解，继续搅拌数分钟后缓慢加入剧烈搅拌的3000ml丙酮中，析出大量白色结晶性粉末，过滤，于60℃真空干燥，得白色结晶性粉末198g。收率为73.1％。

mp：210℃分解

$[C{]}_{20}^D=+24.2$ (1％乙醇)

元素分析	测定值(％)	计算值(％)
			C	63.79	63.98
H	8.31	8.20
			N	4.19	4.15

实施例5  对大鼠肝损伤和胆汁淤滞性黄疸模型的作用

用异硫氰酸苯酯(APIT)造成大鼠肝损伤和胆汁淤滞性黄疸模型，观察18β-甘草酸苦参碱盐、18β-甘草酸苦参素盐、18α-甘草酸苦参碱盐和18α-甘草酸苦参素盐的保肝、退黄作用。由表1可见，静脉给予各化合物100mg/kg可使APIT模型大鼠血清总胆红素(TB)、谷丙转氨酶(ALT)和肝重系数明显降低。由表2可见，各化合物对大鼠肝脏病变也具有明显的改善作用。表1和表2表明，18α-甘草酸苦参碱盐和18α-甘草酸苦参素盐的保肝和退黄作用相比于18β-甘草酸苦参碱盐、18β-甘草酸苦参素盐有更突出的疗效；且它们的疗效都要优于单独使用甘草酸。

表1  静脉注射对大鼠口服APIT后TB、ALT和肝重系数的影响(n＝8，

)

组别	剂量(mg/kg)	TB(μmol/L)	ALT(nmol·s-1/L)	肝重系数(g/100g体重)
					正常对照组		2.48±0.56	257.48±74.68	3.72±0.21
模型组		118.32±34.25△△	2619.94±60.90△△	5.01±0.39△△
					18β-甘草酸苦参碱	100	79.32±28.56	2080.38±1 36.28**	4.55±0.35
18β-甘草酸苦参素	100	75.21±20.14	2011.20±125.36**	4.41±0.25
					18α-甘草酸苦参碱	100	71.89±11.21*	2004.32±96.77**	4.25±0.34*
18α-甘草酸苦参素	100	73.24±35.27	2021.36±150.71**	4.08±0.51
					甘草酸	100	98.12±19.58	2315±158.15**	4.69±0.21

^△△P＜0.01与正常对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01与模型组比较

表2  对APIT所致大鼠肝脏病变的影响(n＝8)

组别	肝细胞坏死				肝细胞肿胀				胆管炎
													-	+	++	+++	-	+	++	+++	-	+	++	+++
	正常对照组	8				8				8
模型组															8					8				8
	18β-甘草酸苦参碱		7	1			1	7			5	3
18β-甘草酸苦参素														6	2			1	7			4	4
	18α-甘草酸苦参碱		7	1			2	6			3	5
18α-甘草酸苦参素														8				4	4			4	5

实施例6：对鸭乙型肝炎模型的抗病毒作用

1日龄北京鸭，经腿胫静脉注射DHBV-DNA阳性鸭血清，待DHBV感染雏鸭7d血清检测为阳性后，随机分成4组，病毒对照组、18α-甘草酸苦参素盐高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组6只。3个剂量组分别IP给予18α-甘草酸苦参素盐12.5mg/kg，25mg/kg和50mg/kg，Bid×10。病毒对照组给予等量生理盐水。在感染后7d即用药前(T0)，用药5d(T5)，用药10d(T10)和停药后3d(P3)，自鸭腿径静脉取血，分离血清，测定DHBA-DNA含量，计算DHBA-DNA水平抑制率。

试验结果：18α-甘草酸苦参素盐治疗组与病毒感染对照组比较能显著降低鸭血清DHBA-DNAOD值，明显提高DHBA-DNA水平抑制率。结果表明18α-甘草酸苦参素盐有明显抑制肝内DHBV-DNA复制的作用。结果见表4、5。

表4  18α-甘草酸苦参素盐对鸭乙型肝炎模型DHBA-DNAOD的影响(n＝6， ))

组别	剂量mg/kg(Bid×10)	鸭血清DHBV-DNAOD值
						给药前(T0)	给药第5天(T5)	给药第10天(T10)	给药后第3天(P3)
		病毒对照18α-甘草酸苦参素盐	12.52550	1.256±0.250.885±0.070.875±0.131.019±0.10	1.045±0.130.979±0.150.777±0.070.617±0.07**					1.010±0.130.908±0.130.593±0.07**0.569±0.03**	1.048±0.110.985±0.100.778±0.280.798±0.19**

^**P＜0.01与T0比较(T0配对t检验.)

表5  18α-甘草酸苦参素盐对鸭乙型肝炎模型DHBA-DNA水平抑制率的影响(n＝6)

药物	剂量mg/kg(Bid×10)	抑制率(％)
					T5	T10	P3
		病毒对照18α-甘草酸苦参素盐	12.52550	15.08-10.7213.3642.14**				17.82-2.9641.14*46.49**	14.39-12.0210.2824.36

^**P＜0.01与病毒对照组比较(成组t检验)

Claims (15)

1、一种化合物，化学名称为：20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参碱盐，结构式为：

2、一种化合物，化学名称为：20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参素盐，结构式为：

3、如权利要求1所述的化合物，其中所述盐的化学名称和化学结构分别为：

1)18α，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参碱盐，

2)18β，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参碱盐，

4、如权利要求1所述的化合物，其中所述盐的化学名称和化学结构分别为：

1)18α，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参素盐，

2)18β，20β-羧基-11-氧代正齐墩果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸苦参素盐，

5、权利要求1或2所述的化合物，其中为18-α甘草酸的盐，其化学结构式为：

或

6、一种治疗肝病的药物组合物，其特征在于以权利要求1或2的化合物为药物活性成分。

7、一种治疗肝病的药物组合物，其特征在于以权利要求3或4的化合物为药物活性成分。

8、一种治疗肝病的药物组合物，其特征在于以权利要求5的化合物为药物活性成分。

9、权利要求6、7或8所述的药物组合物，其特征在于为口服制剂或注射制剂。

10、权利要求9的药物组合物，其中口服制剂为片剂、胶囊或口服液。11、权利要求9的药物组合物，其中注射制剂为水针或粉针。

12、如权利要求1或3所述化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

将18α-甘草酸，18β-甘草酸或其混合物和苦参碱按摩尔比1∶1溶解于有机溶剂中，搅拌数分钟后缓慢加入剧烈搅拌的丙酮中，析出结晶性粉末18α-甘草酸苦参碱盐或18β-甘草酸苦参碱盐。

13、如权利要求2或4所述化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

将18α-甘草酸、18β-甘草酸或其混合物和苦参素按摩尔比1∶2溶解于有机溶剂中，搅拌数分钟后缓慢加入剧烈搅拌的丙酮中，析出结晶性粉末18α-甘草酸苦参素盐或18β-甘草酸苦参素盐。

14、如权利要求12或13所述的制备方法，其特征在于有机溶剂为甲醇或乙醇。

15、权利要求1、2、3或4所述的化合物在制备治疗肝病药物中的应用。