CN101007038B - 河北香菊花降压有效部位提取物及其在药物制剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及河北香菊花降压有效部位提取物及其分离提取方法和其在药物制剂中的应用。该有效部位提取物是采用河北香菊花提取液经大孔树脂吸附,经≤60%的乙醇洗脱所得。其制备方法是:将按常规方法制得河北香菊花提取液,提取液经大孔树脂吸附、洗脱,洗脱剂为浓度≤60%的乙醇,收集洗脱液,浓缩、干燥。在制备降压药物的应用中,可按照常规的制剂方法以河北香菊花降压有效部位提取物为活性成分制成各种药物剂型,如软胶囊剂、片剂、滴丸、注射剂、缓控释剂等等。本发明为临床提供了一种新的且作用稳定的降压药物。
Description
技术领域
本发明涉及植物的药用有效成份及其提取制备方法和用途,具体地说是菊花降压有效部位提取物及其分离提取方法和其在药物制剂中的应用。
背景技术
菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)为菊科植物菊的头状花序,其具有疏风、清热、明目、解毒之功效。临床上主要用于治疗头痛、眩晕、目赤、心胸烦热、疔疮、肿毒。研究表明,菊花含有多种药用活性成份,通常认为黄酮类化合物、三萜类化合物、挥发油是其主要的有效成份。药理实验表明,菊花总提取物对防治心血管疾病具有积极的作用。如杭白菊可增加大鼠心脏冠脉流量;增强大鼠心肌收缩力。研究人员在研究中还发现,不同溶剂萃取的菊花总提取物,对大鼠心脏冠脉流量的增加幅度有显著的差异(蒋惠娣等,杭白菊的心血管药理作用及其机制研究进展,[J]世界科学技术.中药现代化,2002,4(2):31)。这说明菊花防治心血管疾病的有效部位尚不确定。近年来,许多科研人员都在积极寻求探索菊花的药用有效部位。如CN1660378A的发明人经研究发现,在制备治疗缺血性心脏病药物应用中,菊花的有效部位为总黄酮。关于菊花总黄酮的提取方法的研究,现有技术基本侧重于解决如何提高总黄酮得率的技术问题。如黄保民采用均匀设计法对怀菊花总黄酮提取工艺进行了研究,研究认为提高溶媒中乙醇的含量,可使怀菊花总黄酮类的溶出增加,同时也可加快溶解扩散速度,增加溶出量(黄保民[J]中医1996,9(4):8)。CN1193993C公开的菊花总黄酮树脂纯化方法,也是利用大孔树脂具有吸附量大、解吸率大的特点来提高纯化总黄酮的含量。目前关于不同方法提取制备的菊花有效成份的功效研究鲜有报道。菊花化学成份复杂,其产地不同,品种不同,其化学成份也有所不同。如现市场销售的菊花商品有多种,如杭菊、毫菊、贡菊、滁菊、祁菊、怀菊、济菊、黄菊等等;从怀菊花挥发油中可鉴定出40个化合物,从大怀菊中可鉴定出27个化合物(黄何民等,气质联用法对怀菊及“大怀菊”挥发油化学成份的分析与比较,[J]中医研究,1997,10(5):14;)。从杭白菊挥发油中可鉴定出50个化合物(鲍忠定等,杭白菊挥发油化学成份的气相色谱-质谱联用技术分析[J]食品科学,2003,24(6):120)。河北香菊花是近年来市售的一种新的浓香型菊花品种。该植物株型直立,高80mm左右,茎粗而硬直,叶厚硬,不披散下垂,缺裂浅而圆,柄较短,色深而有光泽。花期较晚,一般开花在11月上旬至12月上旬。花序较大,平均直径8.6cm左右,花序初开,花梢呈粉红色,开到中期,白色间黄,舌状花瓣完全展开后,变成雪白色。北京大学药学院从河北香菊挥发油中检测到72种化合物,其挥发油含量是同类菊花挥发油含量的三倍左右;总黄酮含量高达5.1%,比含量较高的祁白菊(2.01%)、杭白菊(2.79%)等菊花品种高出两倍左右。目前,关于河北香菊花降压药用有效部位的确定及分离提取尚未见报道。
发明内容
本发明的目的就是提供一种河北香菊花降压有效部位的提取物,同时提供一种提取制备该提取物的方法,以及该提取物在制备降压药物中的应用。
本发明的目的是这样实现的:
本发明人对不同工艺提取制备的河北香菊花提取物分别进行了药理实验研究,发现有些提取物降压效果非常明显,有些则差强人意。而对同一工艺方法以不同浓度的洗脱剂进行洗脱、浓缩提取的提取物,其降压幅度也有显著的差异。进一步的药理实验表明,河北香菊花总提取物兼有收缩和舒张血管,抑制和增强心肌收缩力的作用。因此,本发明人希望通过研究探索,确定河北香菊花降压的有效部位。
本发明用不同浓度的洗脱剂对其提取物进行分离、纯化、试验,从而确定了河北香菊花降压有效部位。
河北香菊花降压有效部位提取物是采用河北香菊花提取液经大孔树脂吸附,经≤60%的乙醇洗脱所得。洗脱剂乙醇优选浓度20-60%,最优选浓度为20-40%。
提取制备河北香菊花降压有效部位提取物的方法是:
将按常规方法制得河北香菊花提取液,提取液经大孔树脂吸附、洗脱,洗脱剂为浓度≤60%的乙醇,收集洗脱液,浓缩、干燥。洗脱剂优选浓度为20-40%的乙醇。
本发明方法中提取液的制备以及提取液上样量、洗脱流速均可参照常规技术处理。大孔树脂可选用HPD-100、HPD-400、HPD-600、HPD-700、D-101各种型号的树脂。
本发明通过以下试验,证明了本发明所分离、提取的河北香菊花降压有效部位提取物是具有显著降压作用的。
河北香菊花降压药效部位筛选试验:
实验动物:新西兰大耳白兔,雄性,体重2.5±0.3kg,由河北医科大学实验动物中心提供。实验期间饲以该中心提供的饲料,自由饮水。
血管营养液的配制
选用Krebs-Henseleit液,其成分为(单位mmol·L-1):NaCl 118.3,KCl 4.7,CaCl2 2.5,MgSO4 1.2,NaH2PO4 1.2,NaHCO3 25.0,glucose 5.5。营养液均用三重蒸馏水配制,其各种电解质成分首先配制成浓度较高的母液,临用前稀释至所需浓度。CaCl2、NaHCO3和葡萄糖临用前加入。用95%O2和5%CO2的混合气体充分饱和后,将pH调至7.2。配制的营养液当天使用。
实验方法
离体胸主动脉环的制备:兔耳静脉注射2ml/kg 30%乌拉坦,麻醉后击昏,颈动脉放血致死,迅速开胸,取胸主动脉及周围组织置于以95%O2和5%CO2的混合气体预先饱和的4℃K-H液中。仔细剥离血管周围结缔组织,依次截取四段4mm主动脉环。分别于管腔中平行穿入两个钨丝环,置于含10mlK-H液的浴槽中。主动脉环的一侧借助钨丝环连接于固定支撑点,另一侧借助钨丝环连接于张力换能器,其收缩产生的机械能经换能器通过MedLab-U/4cs生物信号采集处理系统纪录。标本持续通以95%O2+5%CO2的混合气,施以前负荷4.0g,于K-H液(37±0.5℃)中平衡1h,平衡期间,每15min换一次营养液。平衡后标本加入EC50浓度的NA预收缩血管,待张力稳定后,加入ACh 1μmol·L-1以检验内皮完整性。
给药方法:用微量进样器取一定的药物,注射到浴槽底部。
实验设计
1、20%、40%、60%及80%乙醇洗脱提取物对保留内皮胸主动脉静息张力的影响
实验分五组:20%醇组、40%醇组、60%醇组、80%醇组及溶剂对照组。分别将一定量的20%、40%、60%、80%乙醇洗脱提取液,浓缩、干燥,制成干粉,以二甲基亚砜为溶剂配制成一定浓度的溶液,用微量进样器将各浓度20%、40%、60%、80%乙醇洗脱提取物分别加入浴槽中,使终浓度为0.3~15mg/10mL。每一剂量达最大反应并稳定后,加入下一剂量,每个标本只接触一种提取物。观察不同洗脱提取物对主动脉环静息张力的影响。
2、20%、40%、60%及80%乙醇洗脱提取物对保留内皮胸主动脉去氧肾上腺素(PE,1μmol·L-1)预收缩的影响
实验分组同上。记录PE 1μmol·L-1诱发血管收缩反应,共3轮,前后两轮间隔35min;第1轮反应弃去,第2轮作为对照,第3轮给予PE 1μmol·L-1预收缩血管,待张力达最大并稳定后,分别将各浓度20%、40%、60%、80%乙醇洗脱提取物及溶剂加入浴槽,使终浓度为0.3~15mg/10mL。每一剂量达最大反应并稳定后,加入下一剂量,每个标本只接触一种提取物。观察不同洗脱提取物对PE 1μmol·L-1诱发血管收缩反应的影响。
3、60%醇部位对保留内皮胸主动脉静息张力及去氧肾上腺素预收缩的影响
实验分两组:60%醇部位(即60%乙醇洗脱液的提取物,包括60%乙醇及以下浓度的洗脱物)组和溶剂对照组。实验设计同上。
实验观察
(1)20%、40%、60%及80%乙醇洗脱提取物对血管的收缩效应;
(2)20%、40%、60%及80%乙醇洗脱提取物对血管的舒张效应;
(3)≤60%醇洗脱提取物对血管的收缩和舒张效应;
实验表明
(1)0.3~15mg/10mL 20%、40%和60%乙醇洗脱提取物对保留内皮的血管环静息张力无明显影响,15mg/10mL 80%乙醇洗脱提取物引起较明显的血管收缩,达0.33g(详见图1)。
(2)0.3~15mg/10mL 20%、40%和60%乙醇洗脱提取物对PE(1μmol/L)诱发的保留内皮血管收缩反应有舒张作用,15mg/10mL的20%、40%、60%和80%乙醇洗脱提取物的舒张血管幅度分别为26.52%、28.64%、21.10%、26.82%。但0.3~10mg/10mL 80%乙醇洗脱提取物引起预收缩血管的进一步收缩(详见图2)。
(3)0.3~30mg/10mL≤60%乙醇洗脱提取物对保留内皮的血管环静息张力无显著影响(详见图3)。对PE诱发的保留内皮血管收缩:10和30mg/10mL的≤60%乙醇洗脱提取物表现为明显的浓度依赖性舒张血管作用,30mg/10mL的≤60%乙醇洗脱提取物舒张血管的作用为56.5%(详见图4)。
上述实验结果表明,对兔保留内皮的胸主动脉环静息张力的影响,不同浓度乙醇洗脱提取物对血管的收缩效应不同,80%乙醇洗脱提取物在较高浓度(15mg/10mL)具有明显的血管收缩作用;对PE诱发的保留内皮血管收缩反应,20%、40%和60%乙醇洗脱提取物舒张血管的作用相近,0.3~10mg/10mL80%乙醇洗脱提取物引起预收缩血管的进一步收缩。因此,我们去除了80%乙醇洗脱提取物,合并20%、40%和60%乙醇洗脱提取物(即≤60%乙醇洗脱提取物),进一步进行血管收缩和舒张效应研究。实验结果表明,≤60%乙醇洗脱提取物基本不具有收缩血管的作用,且舒张血管的作用较强。
≤60%乙醇洗脱提取物对麻醉大鼠颈总动脉血压和心率的影响
实验方法
雄性Wistar大鼠及SHR大鼠,实验前禁食24h,用25%乌拉坦(2g·kg-1,其中1g·kg-1皮下注射,1g·kg-1腹腔注射)麻醉,仰位固定,颈前正中做纵行皮肤切口,气管插管以保持呼吸道通畅。用镊子分离筋膜、肌间隙,游离出左侧颈总动脉后,细线结扎远心端,动脉夹固定近心端。用眼科剪刀在动脉壁上作一小切口,将充有肝素(12500U/500mL)生理盐水的硬质聚乙烯导管插入动脉,细线结扎固定,管的另一侧经三通、压力换能器与八道生理记录仪相连,用以测定颈总动脉血压和心率。行十二指肠切口手术,将聚乙烯导管插入十二指肠中,缝合十二指肠及腹部切口,以备给药用。每只大鼠平衡半小时记录给药前血压和心率值,十二指肠给予0.14g/kg体重的≤60%乙醇洗脱提取物,对照组注入相同容积蒸馏水,记录给药后30、60、90、120min时的血压和心率值。
实验结果:十二指肠给予0.14g/kg体重的≤60%乙醇洗脱提取物,明显降低正常大鼠和高血压大鼠收缩压和舒张压,对心率无明显影响。
由此可见,去掉80%乙醇洗脱提取物,并将20%、40%和60%乙醇洗脱液合并后的提取物,该部分不引起血管收缩,且舒张血管的作用明显增强,整体实验证实该部位降压效果明显。
河北香菊花降压有效部位提取物在制备降压药物的应用中,可按照常规的制剂方法以河北香菊花降压有效部位提取物为活性成分制成各种药物剂型,如软胶囊剂、片剂、滴丸、注射剂、缓控释剂等等。
在用于防治高血压疾病时,口服河北香菊花降压片的用量为,每日3次,每次2~5片。其他制剂的用量可参考该用量。本发明的药物用法用量,也不完全限于此,临床医师也可以根据病人的具体情况决定药物的用法用量。
本发明剔除了河北香菊花中对降压有负性作用的成分,从而保证了河北香菊花降压有效部位提取物具有稳定的降压效果。再则,菊花本身就是食药同源的植物,故其在制备降压药物制剂中的应用具有显著的有益效果。
本发明为临床提供了一种新的且作用稳定的降压药物。
附图说明:
图1:20%、40%、60%及80%乙醇洗脱提取物对血管的收缩效应曲线图
其中:横坐标显示的数据为所述提取物的终浓度(mg/10ml);
纵坐标显示的数据为所述提取物引起血管的收缩幅度(g)。
20%乙醇洗脱液提取物
图2:20%、40%、60%及80%乙醇洗脱液提取物对血管的舒张效应曲线图
其中:横坐标显示的数据为所述提取物的终浓度(mg/10ml);
纵坐标显示的数据为所述提取物对PE诱发保留内皮血管收缩后的相对舒张度(%)。
40%乙醇洗脱液提取物
60%乙醇洗脱液提取物
图3:≤60%乙醇洗脱提取物的血管收缩效应曲线图
其中:其中:横坐标显示的数据为所述提取物的终浓度(mg/10ml);
纵坐标显示的数据为所述提取物引起血管的收缩幅度(g)。
图4:≤60%乙醇洗脱提取物的血管舒张效应曲线图
其中:横坐标显示的数据为所述提取物的终浓度(mg/10ml);
纵坐标显示的数据为所述提取物对PE诱发保留内皮血管收缩后的相对舒张度(%)。
溶剂对照
具体实施方式
实施例1:
河北香菊花降压有效部位提取物的制备
(1)河北香菊花经70%乙醇回流提取两次,合并滤液,减压浓缩制得菊花提取液,备用。
(2)树脂预处理:D-101型大孔树脂用95%乙醇浸泡24小时后,用95%乙醇冲洗至乙醇无色透明,收取最后50ml,挥干,无白色粉末状物质。用2倍树脂床体积的5%氢氧化钠冲洗,蒸馏水冲洗至中性,再用2倍树脂床体积的5%HCl溶液冲洗,蒸馏水冲洗至中性。
(3)按照上样量为菊花提取液(折合为生药量)∶树脂=1∶2~1∶4,将菊花提取液上柱,控制流出液流速,至提取液全部进入树脂床,静置0.5~1小时,充分吸附。
(4)洗脱:蒸馏水冲洗树脂床,控制一定流速,直至流出液无色,然后分别以20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇及80%乙醇各2~3倍树脂床体积冲洗树脂床,用容器收集不同的洗脱液;分别将各种洗脱液按照常规减压浓缩、干燥,制得相应洗脱液的提取物。
实施例2
河北香菊花≤60%乙醇洗脱提取物的制备
(1)河北香菊花(从石家庄香菊科技开发有限公司购得)经70%乙醇回流提取两次,合并滤液,减压浓缩制得菊花提取液,备用。
(2)树脂预处理:HPD-600型大孔树脂用90%乙醇浸泡24小时后,用95%乙醇冲洗至乙醇无色透明,收取最后50ml,挥干,无白色粉末状物质。用2倍树脂床体积的5%氢氧化钠冲洗,蒸馏水冲洗至中性,再用2倍树脂床体积的5%HCl溶液冲洗,蒸馏水冲洗至中性。
(3)按照上样量为菊花提取液(折合为生药量)∶树脂=1∶3,将菊花提取液上柱,控制流出液流速,至提取液全部进入树脂床,静置0.5~1小时,充分吸附。
(4)洗脱:蒸馏水冲洗树脂床,控制一定流速,直至流出液无色,然后以60%乙醇10~15倍树脂床体积冲洗树脂床,用容器收集洗脱剂为60%乙醇的洗脱液,按照常规减压浓缩、干燥,得≤60%乙醇洗脱提取物。
实施例3
河北香菊花降压有效部位提取物为活性成份制备的降压片
采用实施例1方法制备的≤40%乙醇洗脱提取物2000公斤,按常规片剂制备方法,加入淀粉,糊精、硬酯酸镁等,混合制成湿粒,机器冲压成片,每片含总黄酮10mg。
实施例4
河北香菊花降压有效部位提取物为活性成份制备的降压片颗粒剂
将采用实施例2方法制备的≤60%乙醇洗脱提取物2000公斤粉碎成粉,加入乙醇作黏合剂,加入淀粉作填充剂,压制成颗粒,每10克颗粒含总黄酮100mg
实施例5
河北香菊花降压有效部位提取物为活性成份制备的降压口服液
将采用实施例1方法制备的20%乙醇洗脱提取物溶于1000ml水中,制成2.5%浓度的水溶液,加热溶解,混合均匀,装入20ml药瓶中,封口、消毒。含总黄酮50mg/瓶。
以上实施例是本发明制剂的实施例,该实施例只是对本发明作进一步的说明,但对本发明的制剂应用不具有任何限制作用。
Claims (4)
1.河北香菊花降压有效部位提取物,其特征在于该提取物是采用河北香菊花提取液经大孔树脂吸附,经≤60%的乙醇洗脱所得。
2.根据权利要求1所述的河北香菊花降压有效部位提取物,其特征在于所说的乙醇浓度为20-60%。
3.根据权利要求1所述的河北香菊花降压有效部位提取物,其特征在于所说的乙醇浓度为20-40%。
4.采用河北香菊花乙醇提取液经大孔树脂吸附、经≤60%的乙醇洗脱剂洗脱所得的提取物在制备降压药物制剂中的应用。
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