CN101001642A

CN101001642A - 使用gdf－8抑制剂对糖尿病、肥胖症和心血管病的联合治疗

Info

Publication number: CN101001642A
Application number: CNA2005800272679A
Authority: CN
Inventors: J·F·托宾
Original assignee: Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 2004-08-12
Filing date: 2005-08-11
Publication date: 2007-07-18
Also published as: CA2575563A1; EP1778275A2; BRPI0514253A; WO2006020884A2; JP2008509927A; WO2006020884A3; US20060034831A1; AU2005272646A1; MX2007000976A

Abstract

治疗受试者中肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍的方法，包括向受试者施用治疗有效量的GDF－8抑制剂和治疗有效量的至少一种治疗目标综合征的其它治疗剂。

Description

使用GDF-8抑制剂对糖尿病、肥胖症和心血管病的联合治疗

相关案例

本申请要求于2004年8月12日提交的美国临时申请号60/600,784(其内容在本文中完整引用作为参考)的权利。

技术领域

本发明涉及使用联合治疗治疗肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍如糖尿病和X综合征中至少一种疾病的方法。新的联合治疗采用至少一种生长和分化因子-8(GDF-8)的抑制剂和至少一种其它治疗剂。

发明背景

生长和分化因子-8(GDF-8)，也称作氯化筒箭毒碱，是分泌的蛋白质并且是结构相关生长因子的转化生长因子-β(TGF-β)超家族的成员，它们均具有生理重要的生长调节和形态发生特性(Kingsley等，Genes Dev.8：133-146(1994)；Hoodless等，Curr.Topics Microbiol.Immunol.228：235-272(1998))。与TGF-β相类似，合成的人GDF-8为长375个氨基酸的前体蛋白。GDF-8前体蛋白形成同二聚体。加工期间，氨基末端前肽在Arg-266处切除。切下的前肽称作“潜伏相关肽”(LAP)，仍可与同二聚体保持非共价结合，因此使该复合体失活(Miyazono等，J.Biol.Chem.263：6407-6415(1988)；Wakefield等，J.Biol.Chem.263：7646-7654(1988)；Brown等，Growth Factors 3：35-43(1990)和Thies等，Growth Factors18：251-259(2001))。通常将具有前肽的成熟GDF-8的复合体称作“小潜伏复合体”(Gentry等，Biochemistry 29：6851-6857(1990)；Derynck等，Nature，316：701-705(1995)和Massague，Ann.Rev.Cell Biol.12：597-641(1990))。还已知其它蛋白质与成熟GDF-8结合并抑制它的生物学活性。此类抑制性蛋白质包括促滤泡素抑制素和促滤泡素抑制素相关蛋白(Gamer等，Dev.Biol.，208：222-232(1999))。

对来自多种物种的所推导氨基酸序列比对证实，GDF-8在进化中高度保守(McPherron等，Proc.Nat.Acad.Sci U.S.A.94：12457-12461(1997))。事实上，人、小鼠、大鼠、猪和鸡的GDF-8序列在C-末端区域100％相同，而狒狒、牛和羊的GDF-8序列相差3个氨基酸或更少。斑马鱼GDF-8差异最大，但是它依然与人88％相同。

高度保守性提示GDF-8具有必需的功能。GDF-8在发育中的骨骼肌和成年骨骼肌内高度表达，并且发现其参与对肌肉和骨发生中重要生物学过程的调节。例如，敲除GDF-8的转基因小鼠的特征为骨骼肌显著肥大和增生(McPherron等，Nature 387：83-90(1997))以及皮质骨结构的改变(Hamrick等，Bone 27：343-349(2000))。类似地，在天然出现GDF-8突变的牛中骨骼肌质量增加明显(Ashmore等，Growth，38：501-507(1974)；Swatland等，J.Anim.Sci 38：752-757(1994)；McPherron等，Proc.Nat.Acad.Sci U.S.A.94：12457-12461(1997)和Kambadur等，Genome Res.7：910-915(1997))。研究显示，与HIV感染相关的肌肉消耗伴随着GDF-8表达的增加(Gonzalez-Cadavid等，Proc.Nat.Acad.Sci U.S.A.95：14938-14943(1998))。GDF-8还与肌肉特异性酶(例如肌酸激酶)的产生和成肌细胞增殖有关(WO 00/43781)。除了其具有生长调节和形态发生的特性以外，认为GDF-8还参与众多其它生理过程，包括2型糖尿病、糖耐量受损、代谢综合征(例如X综合征)、由创伤如烧伤或氮失衡诱导的胰岛素抵抗以及脂肪组织病症(例如肥胖症)发展中的葡萄糖稳态(Kim等BBRC281：902-906(2001))。

其它研究扩展了GDF-8在脂肪生成和葡萄糖稳态中的作用。例如，向小鼠注射分泌GDF-8的肿瘤细胞提高了小鼠的血糖水平(高血糖症)并降低其体重和肌肉质量。GDF-8还阻断了胰岛素诱导的GLUT4表达，并且它阻断了胰岛素介导的前脂肪细胞分化。总之，GDF-8研究表明抑制GDF-8将降低血糖和体脂，并增加胰岛素介导的葡萄糖运输，这些条件可能对患有或可能最终患有2型糖尿病或X综合征、或涉及葡萄糖稳态的其它综合征的患者有益。

肥胖症、心血管病和/或胰岛素代谢障碍(如糖尿病)和/或X综合征已使用多种不同疗法治疗。这些疗法包括血管紧张肽转换酶抑制剂、磺酰脲药剂、抗血脂剂、双胍药剂、噻唑烷二酮类药剂、胰岛素、α-葡萄糖苷酶抑制剂和醛糖还原酶抑制剂，但并没有将这些疗法全部认可用于治疗所述的全部疾病和病症。这些疗法通过与GDF-8无关的多种机制起作用。

发明简述

本发明涉及通过施用有效量的GDF-8抑制剂联合至少一种其它治疗剂来治疗肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍(包括糖尿病和X综合征)中至少一种疾病的方法。

肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍(包括糖尿病和X综合征)中至少一种疾病可以用GDF-8抑制剂与治疗这些目标综合征的其它治疗剂联合治疗。该治疗方法称作联合治疗。多种其它治疗法已经用于治疗与这些目标综合征相关的不同病因和疾病，包括刺激葡萄糖运输的药剂(例如胰岛素、磺酰脲药剂、双胍药剂、噻唑烷二酮类药剂)、控制血糖的药剂(例如α-葡萄糖苷酶抑制剂)、改善心血管健康的药剂(例如抗血脂剂和ACE抑制剂)以及降低眼和神经中毒性山梨醇产生的药剂(例如醛糖还原酶抑制剂)。因此，本发明的主要目的是提供使用GDF-8抑制剂联合至少一种治疗目标综合征的其它治疗剂、以联合治疗形式对肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍(如糖尿病和X综合征)中至少一种疾病的改进治疗。

本发明的一个目标是创建一种治疗受试者中肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍中至少一种疾病的方法，包括向该受试者施用治疗有效量的GDF-8抑制剂以及治疗有效量的至少一种治疗目标综合征的其它治疗剂。

本发明的又一目标是产生用于治疗受试者中肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍中至少一种疾病的药物组合物，包括向该受试者施用治疗有效量的GDF-8抑制剂以及治疗有效量的至少一种治疗目标综合征的其它治疗剂。

本发明的其它目的和优势将在后续描述中部分陈述，并且一部分从描述中是显而易见的，或可以通过实施本发明进行了解。本发明的目的和优势将通过后附权利要求书中特别指出的组成部分和组合而实现并达到。

需要理解的是，如所要求的那样，前面的概括描述和此后的详细描述仅为示例性的和解释性的且对于本发明不是限制性的。

本说明书包含的并构成本说明书部分的附图连同描述一起用于解释本发明的原理。

序列简述

表1：Myo片段的DNA序列和氨基酸序列

	Myo29	Myo28	Myo22
	Myo29	Myo28	Myo22	scFv的DNA序列	SEQ ID NO：4	SEQ ID NO：5	SEQ ID NO：6
scFv的氨基酸序列	SEQ ID NO：7	SEQ ID NO：8	SEQ ID NO：9	scFv的DNA序列	SEQ ID NO：4	SEQ ID NO：5	SEQ ID NO：6
scFv的氨基酸序列	SEQ ID NO：7	SEQ ID NO：8	SEQ ID NO：9	VH的DNA序列	SEQ ID NO：10	SEQ ID NO：11	SEQ ID NO：12
VH的氨基酸序列	SEQ ID NO：13	SEQ ID NO：14	SEQ ID NO：15	VH的DNA序列	SEQ ID NO：10	SEQ ID NO：11	SEQ ID NO：12
VH的氨基酸序列	SEQ ID NO：13	SEQ ID NO：14	SEQ ID NO：15	VL的DNA序列	SEQ ID NO：16	SEQ ID NO：17	SEQ ID NO：18
VL的氨基酸序列	SEQ ID NO：19	SEQ ID NO：20	SEQ ID NO：21	VL的DNA序列	SEQ ID NO：16	SEQ ID NO：17	SEQ ID NO：18
VL的氨基酸序列	SEQ ID NO：19	SEQ ID NO：20	SEQ ID NO：21	scFv的种系DNA序列	SEQ ID NO：22	SEQ ID NO：23
scFv的种系氨基酸序列	SEQ ID NO：24	SEQ ID NO：25		scFv的种系DNA序列	SEQ ID NO：22	SEQ ID NO：23
scFv的种系氨基酸序列	SEQ ID NO：24	SEQ ID NO：25		VH的种系DNA序列	SEQ ID NO：26	SEQ ID NO：27
VH的种系氨基酸序列	SEQ ID NO：28	SEQ ID NO：29		VH的种系DNA序列	SEQ ID NO：26	SEQ ID NO：27
VH的种系氨基酸序列	SEQ ID NO：28	SEQ ID NO：29		VL的种系DNA序列	SEQ ID NO：30	SEQ ID NO：31
VL的种系氨基酸序列	SEQ ID NO：32	SEQ ID NO：33		VL的种系DNA序列	SEQ ID NO：30	SEQ ID NO：31
VL的种系氨基酸序列	SEQ ID NO：32	SEQ ID NO：33		H1的氨基酸序列	SEQ ID NO：34	SEQ ID NO：35	SEQ ID NO：36
H2的氨基酸序列	SEQ ID NO：37	SEQ ID NO：38	SEQ ID NO：39	H1的氨基酸序列	SEQ ID NO：34	SEQ ID NO：35	SEQ ID NO：36
H2的氨基酸序列	SEQ ID NO：37	SEQ ID NO：38	SEQ ID NO：39	H3的氨基酸序列	SEQ ID NO：40	SEQ ID NO：41	SEQ ID NO：42
L1的氨基酸序列	SEQ ID NO：43	SEQ ID NO：44	SEQ ID NO：45	H3的氨基酸序列	SEQ ID NO：40	SEQ ID NO：41	SEQ ID NO：42
L1的氨基酸序列	SEQ ID NO：43	SEQ ID NO：44	SEQ ID NO：45	L2的氨基酸序列	SEQ ID NO：46	SEQ ID NO：47	SEQ ID NO：48
L3的氨基酸序列	SEQ ID NO：49	SEQ ID NO：50	SEQ ID NO：51	L2的氨基酸序列	SEQ ID NO：46	SEQ ID NO：47	SEQ ID NO：48

表2：序列表

成熟GDF-8的氨基酸序列	SEQ ID NO：1
成熟GDF-8的氨基酸序列	SEQ ID NO：1	在含有可变Xaa位置的GDF-8上结合Myo-29的表位的氨基酸序列	SEQ ID NO：2
GDF-8上特异性结合Myo-29的表位的氨基酸序列	SEQ ID NO：3	在含有可变Xaa位置的GDF-8上结合Myo-29的表位的氨基酸序列	SEQ ID NO：2
GDF-8上特异性结合Myo-29的表位的氨基酸序列	SEQ ID NO：3	IgG₁轻链λ的C-末端片段的DNA序列	SEQ ID NO：52
IgG₁轻链λ的C-末端片段的氨基酸序列	SEQ ID NO：53	IgG₁轻链λ的C-末端片段的DNA序列	SEQ ID NO：52
IgG₁轻链λ的C-末端片段的氨基酸序列	SEQ ID NO：53	IgG₁重链λ的C-末端片段的DNA序列	SEQ ID NO：54
IgG₁重链λ的C-末端片段的氨基酸序列	SEQ ID NO：55	IgG₁重链λ的C-末端片段的DNA序列	SEQ ID NO：54
IgG₁重链λ的C-末端片段的氨基酸序列	SEQ ID NO：55	任意TGF-β家族成员上结合JA16的表位的氨基酸序列	SEQ ID NO：56
GDF-8上结合JA16的表位的氨基酸序列	SEQ ID NO：57	任意TGF-β家族成员上结合JA16的表位的氨基酸序列	SEQ ID NO：56
GDF-8上结合JA16的表位的氨基酸序列	SEQ ID NO：57	任意TGF-β家族成员上结合JA16的表位的氨基酸序列，较长	SEQ ID NO：58
GDF-8上结合JA16的表位的氨基酸序列，较长	SEQ ID NO：59	任意TGF-β家族成员上结合JA16的表位的氨基酸序列，较长	SEQ ID NO：58
GDF-8上结合JA16的表位的氨基酸序列，较长	SEQ ID NO：59	ActRIIB融合蛋白的氨基酸序列	SEQ ID NO：60
ActRIIB融合蛋白的DNA序列	SEQ ID NO：61	ActRIIB融合蛋白的氨基酸序列	SEQ ID NO：60
ActRIIB融合蛋白的DNA序列	SEQ ID NO：61	ActRIIB的氨基酸序列	SEQ ID NO：62
ActRIIB融合蛋白接头的氨基酸序列	SEQ ID NO：63	ActRIIB的氨基酸序列	SEQ ID NO：62
ActRIIB融合蛋白接头的氨基酸序列	SEQ ID NO：63	ActRIIB肠激酶切割位点的氨基酸序列	SEQ ID NO：64
GDF-8前肽	SEQ ID NO：65	ActRIIB肠激酶切割位点的氨基酸序列	SEQ ID NO：64
GDF-8前肽	SEQ ID NO：65	IgG₁ Fc片段	SEQ ID NO：66
为效应子功能降低的Fc片段修饰的IgG₁	SEQ ID NO：67	IgG₁ Fc片段	SEQ ID NO：66
为效应子功能降低的Fc片段修饰的IgG₁	SEQ ID NO：67	切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：68
切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：69	切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：68
切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：69	切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：70
切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：71	切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：70
切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：71	切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：72
切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：73	切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：72
切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：73	切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：74

切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：75
切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：75	切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：76
切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：77	切割GDF-8前肽的蛋白酶的抑制剂	SEQ ID NO：76

发明详述

I.定义

为了可以更容易理解本发明，首先定义某些术语。更多术语在详细描述中陈述

术语“抗体”指免疫球蛋白或其片段，并且包括包含抗原结合位点的任意多肽。此术语包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体、非特异性抗体、人源化抗体、人抗体、单链抗体、嵌合抗体、合成抗体、重组抗体、杂合抗体、突变抗体、移植抗体和体外产生的抗体。除非前面有“完整的”一词，否则术语“抗体”包括抗体片段，如Fab、F(ab’)₂、Fv、scFv、Fd、dAb和保留抗原结合功能的其它抗体片段。一般地，此类片段将包含抗原结合结构域。

术语“有效量”指在患有肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍(如糖尿病和X综合征)中至少一种疾病的个体中使用联合治疗足以改善临床症状或实现所需要的生物学结果的剂量和数量。

术语“GDF-8”指特异的生长和分化因子-8，并且根据需要还指与GDF-8在结构或功能上相关的因子(如BMP-11)以及属于TGF-β超家族的其它因子。此术语指GDF-8的全长的未加工前体形式以及源自翻译后切割的成熟形式和前肽形式。该术语还指如本文中所讨论的保留至少某些与成熟GDF-8相关的生物学活性的GDF-8任意片段和变体，包括已经修饰的片段。成熟人GDF-8的氨基酸序列在SEQ ID NO：1中提供。本发明涉及来自全部脊椎动物物种的GDF-8，包括但不限于人、牛、鸡、小鼠、大鼠、猪、羊、火鸡、狒狒和鱼(对于序列信息参见例如McPherron等，Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.94：12457-12461(1997))。

术语“GDF-8抑制剂”包括能够抑制GDF-8的活性、表达、加工或分泌的任意药剂或其可药用衍生物。此类抑制剂包括GDF-8抑制剂，如抗GDF-8抗体(如Myo-29、Myo-28、Myo-22和JA-16)、抗GDF-8受体的抗体、修饰的可溶性受体(包括受体融合蛋白，如ActRIIB-Fc融合蛋白)、与GDF-8结合的其它蛋白质(如GDF-8前肽、GDF-8前肽的突变体、促滤泡素抑制素、含有促滤泡素抑制素结构域的蛋白质和这些蛋白质的Fc融合蛋白)、与GDF-8受体结合的蛋白质以及这些蛋白质的Fc融合蛋白、以及前述所有蛋白质的模拟物。非蛋白质抑制剂(如核酸)也包括在术语GDF-8抑制剂中之内。据称，此类抑制剂“抑制”、“中和”或“降低”至少一种与活性GDF-8蛋白质相关的生理性生长调节或形态发生活性。例如，GDF-8可以提高血糖水平(高血糖症)或降低重量或肌肉质量。GDF-8还可以阻断胰岛素诱导的GLUT4表达并且它阻断胰岛素介导的前脂肪细胞分化。活性的降低可以是大约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。

术语“特异性结合”，如在关于GDF-8抑制剂的上下文环境中使用时，意思是指抑制剂与至少一种GDF-8抗原结合。当例如抗体或其它抑制剂的抗原结合结构域对众多抗原上所呈现的特定表位具有特异性，并且携带抗原结合结构域的特异性结合的抑制剂将能够与多种携带该表位的抗原结合时，该术语也适用。一般认为，当亲和性常数Ka大于10⁸M^-1时，结合是特异性的。如果在合适的所选择条件下，结合基本上不受抑制，而与此同时非特异性结合受到抑制，则将抗体或其它抑制剂称为与抗原“特异性地”结合。

术语“高度严格”或“高严格性”描述用于测定核酸-核酸相互作用的杂交和洗涤条件。此类条件是本领域内技术人员已知的并且可在例如“Current Protocols in Molecular Biology”，John Wiley & Sons，N.Y.6.3.1-6.3.6(1989)中找到。如本领域内所述的水性条件和非水性条件均可以使用。高度严格杂交条件的一个实例是在大约45℃于6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)内杂交，随后在50℃于0.2×SSC、0.1％SDS内洗涤至少一次。高度严格杂交条件的第二个实例是在大约45℃于6×SSC内杂交，随后在55℃于0.2×SSC、0.1％SDS内洗涤至少一次。高度严格杂交条件的另一个实例是在大约45℃于6×SSC内杂交，随后在60℃于0.2×SSC、0.1％SDS内洗涤至少一次。高度严格杂交条件的又一个实例是在大约45℃于6×SSC内杂交，随后在65℃于0.2×SSC、0.1％SDS内洗涤至少一次。高度严格条件包括在65℃于0.5M磷酸钠、7％SDS内杂交，随后在65℃于0.2×SSC、1％SDS内洗涤至少一次。

短语“中等严格的”或“中等严格”杂交指允许核酸与同该核酸的同一性至少大约60％、至少大约75％、至少大约85％、或同该核酸的同一性至少大约90％的互补核酸结合的条件。中等严格的条件包括但不限于例如在42℃于50％甲酰胺、5×Denhart氏溶液、5×SSPE、0.2％SDS中杂交，随后在65℃于0.2×SSPE、0.2％SDS中洗涤(见例如Sambrook等，MolecularCloning A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989))。

短语“基本相同”或“基本相似”意思是指相关的氨基酸或核苷酸序列，例如本发明的GDF-8抑制剂的氨基酸或核苷酸序列，与所公开序列相比是相同的或者没有实质差异(经过保守氨基酸的置换)。本发明的核苷酸和多肽包括例如在序列上与所公开核酸分子和多肽的同一性至少大约50％、至少大约55％、至少大约60％、至少大约65％、至少大约70％、至少大约75％、至少大约80％、至少大约85％、至少大约90％、至少大约92％、至少大约93％、至少大约94％、至少大约95％、至少大约96％、至少大约97％、至少大约98％或至少大约99％的那些核苷酸和多肽。

对于多肽，在原始多肽和与原始多肽基本相同的变异多肽间比较至少20、30、50、100或更多个氨基酸。对于核酸，在原始核酸和与原始核酸基本相同的变异核酸间比较至少50、100、150、300或更多个核苷酸。因此，变体可以在一个或多个区域内基本相同，但在其它区域不同，同时仍然满足“基本相同”的定义。两个序列间的同一性百分数通过标准比对算法，例如Altschul等，J.MoI.Biol.215：403-410(1990)中所述的基本局部比对工具(BLAST)、Needleman等，J.MoI.Biol.48：444-453(1970)的算法或Meyers等，Comput.Appl.Biosci.4：11-17(1988)的算法确定。

术语“治疗”指治疗性或预防性措施。可以对具有医学病症或最终会具有病症的受试者进行治疗，以防止、治愈、推迟、降低病症或复发病症的严重性，或改善病症或复发病症的一种或多种症状，或者延长受试者存活超过在无这种治疗下的预期时间。

术语“目标综合征”指将通过本文中公开的方法和组合所治疗的肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍中的至少一种疾病。

心血管病的实例包括冠心病(动脉粥样硬化)、心绞痛(包括急性心绞痛和不稳定型心绞痛)、心脏病发作、中风(包括缺血性卒中)、心血管病相关的高血压、冠状动脉疾病、高血压、高血脂症、外周动脉疾病和外周血管疾病。胰岛素代谢障碍的实例包括2型糖尿病、X综合征、糖耐量受损、创伤如烧伤或氮失衡诱导的胰岛素抵抗、代谢综合征、前驱糖尿病、糖耐量受损和异常血脂症。

术语“治疗剂”是在治疗医学病症中用于治疗或辅助的物质。

如本文中所用，GDF-8抑制剂和治疗剂“治疗有效量”指当向受试者(如人患者)施用单剂量或多剂量时有效治疗、防止、治愈、推迟、降低病症或复发病症的严重性，或改善病症或复发病症的至少一种症状，或延长受试者存活超过在无这种治疗下的预期时间。

术语“变体”指分别与所提供GDF-8抑制剂(以及GDF-8本身)的核苷酸序列和氨基酸序列基本相同或相似的核苷酸序列和氨基酸序列。变体可以是天然发生的(例如天然发生的人或非人核苷酸序列)或者人工生成的。变体的实例是源自mRNA可变剪接(包括3′和5′剪接变体)、点突变和其它突变或者由蛋白酶剪切蛋白质所产生的那些变体。变体包括当优化比对时(根据需要插入或缺失)分别与其它核酸序列(或其互补链)或氨基酸序列基本相同或类似的核酸分子或其片段以及氨基酸序列和其片段。在一个实施方案中，在优化比对时，本发明的核酸分子或蛋白质与另一核酸分子和蛋白质之间的同一性分别为至少大约50％、至少大约55％、至少大约60％、至少大约65％、至少大约70％、至少大约75％、至少大约80％、至少大约85％、至少大约90％、至少大约92％、至少大约93％、至少大约94％、至少大约95％、至少大约96％、至少大约97％、至少大约98％或至少大约99％。此外，如本申请中所讨论，变体包括具有GDF-8活性或抑制GDF-8活性的蛋白质或多肽。

II.GDF-8抑制剂

GDF-8抑制剂可用于治疗肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍(如糖尿病和X综合征)。这些抑制剂的用途尤其用于本发明的联合治疗中。GDF-8抑制剂包括抗体(抗GDF-8和/或GDF-8受体)、修饰的可溶性受体、其它蛋白质(包括与GDF-8和/或GDF-8受体结合的那些蛋白质)、前肽、肽和所有这些抑制剂的模拟物。非蛋白质抑制剂包括例如核酸。

阻止GDF-8结合至ActRIIB(一种GDF-8受体)的抑制剂可使用ActRIIB测定法测试。可以将GDF-8以20摩尔EZ-link Sulfo-NHS-Biotin生物素(Pierce，Rockford，Illinois，目录编号21217)对1摩尔GDF-8的比例在冰上生物素化2小时。通过使用0.5％TFA降低pH终止反应，并将复合物在C4 Jupiter 250×4.6mm柱(Phenomenex)上层析以便从GDF-8前肽中分离成熟GDF-8。将以TFA/CH₃CN梯度洗脱的生物素化的成熟GDF-8级分混合、浓缩并且通过MicroBCA蛋白质测试试剂盒(Pierce，Rockford，IL，目录编号23235)定量。

将重组ActRIIB-Fc嵌合体(R & D Systems，Minneapolis，MN，目录编号339-RB/CF)在0.2 M碳酸钠缓冲液中以1μg/ml在96孔平底分析平板(Costar，NY，目录编号3590)上4℃包被过夜。随后按照标准ELISA方法用1mg/ml牛血清白蛋白封闭平板并洗涤。将100μl的多种浓度(如10ng/ml)的生物素化GDF-8(具有或不具有GDF-8抑制剂(如在浓度范围10^-11M至10^-7M))的加至封闭的ELISA平板中，温育1小时，洗涤，并且通过链亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP，BD PharMingen，San Diego，CA，目录编号13047E)以及随后加入TMB(KPL，Gaithersburg，MD，目录编号50-76-04)检测结合的GDF-8的量。可以在Molecular Devices微量平板读数仪中在450nM完成显色测量。

还可以使用报告基因测定法测试本发明的抑制剂。见Thies等，GrowthFactors 18：251-259(2001)。例如，为证实GDF-8的活性，已开发出了使用表达萤光素酶的报告载体pGL3(CAGA)₁₂的报告基因测定法(RGA)。先前报道，CAGA序列是TGF-β诱导型基因PAI-1的启动子内的TGF-β应答序列(Denner等，EMBO J.17：3091-3100(1998))。

使用基本的萤光素酶报告质粒pGL3(Promega，Madison，W1)产生含有12个CAGA盒的报告载体。将TATA盒以及来自腺病毒主要晚期启动子的转录起始位点(-35/+10)插入到BglII和HindIII位点之间。将含有12个CAGA盒(AGCCAGAC)重复的寡核苷酸复性并克隆至Xhol位点。随后使用FuGENE 6转染试剂(Boehringer Manheim，德国)将pGL3(CAGA)₁₂瞬时转染人横纹肌肉瘤细胞系A204(ATCC HTB-82)。转染后，细胞在48孔平板中的补充有2mM谷氨酰胺、100U/ml链霉素、100μg/ml青霉素和10％胎牛血清的McCoy′s 5A培养基中培养16小时。随后使用或不使用10ng/ml GDF-8并且使用或不使用测试用的多种浓度GDF-8抑制剂(在含有谷氨酰胺、链霉素、青霉素和1mg/ml牛血清白蛋白的McCoy′s 5A培养基中)(根据抑制剂类型)于37℃下将细胞处理6小时含。抑制剂浓度选自例如大约50nM至50μM。GDF-8抑制剂的示例性浓度包括1nM、10nM、50nM、100nM、500nM、1μM、5μM、10μM和50μM。可以使用萤光素酶分析系统(Promega)定量所处理细胞中的萤光素酶。GDF-8活性的这类测定将显示GDF-8抑制剂是否有效地发挥作用。

可以使用基于动物的测试，如在Park等，Circulation 104：815-819(2001)中所述的肥胖Zucker糖尿病大鼠。肥胖Zucker糖尿病大鼠特征在于过量体重、胰岛素抵抗、高胰岛素血症和轻度高血糖症，并且是2型糖尿病的良好模型。例如，使用8至9周龄的肥胖Zucker大鼠作为糖尿病模型，并且使用13至14周龄的瘦Zucker大鼠作为对照。可以按照寻求评估的治疗计划将本发明的联合治疗应用于大鼠。随后研究人员追踪血液化学和形态学随时间的变化以评估GDF-8抑制剂的效果。

A.GDF-8抑制剂

可以阻止GDF-8活性的GDF-8抑制剂在本发明中是有用的。此类抑制剂可以与GDF-8本身相互作用。备选地，例如抑制剂可以与GDF-8受体(如ActRIIB)或其它结合配偶体相互作用。抑制剂可以减少或阻止GDF-8与其受体的结合和/或结合GDF-8后受体的活性。当然，抑制可以与GDF-8和第二因子如其受体均相互作用。就此而言，GDF-8抑制剂包括抗体(抗GDF-8和/或GDF-8受体)、修饰的可溶性受体、其它蛋白质(包括与GDF-8和/或GDF-8受体结合的那些蛋白质)、GDF-8或其片段的修饰形式、前肽、肽和所有这些抑制剂的模拟物。非蛋白质抑制剂包括例如核酸。

本发明的GDF-8抑制剂的施用剂量为大约1μg/kg至大约20mg/kg，这取决于症状的严重性和疾病进展。适宜有效剂量由治疗临床医生从如下范围选择：大约1μg/kg至大约20mg/kg、大约1μg/kg至大约10mg/kg、大约1μg/kg至大约1mg/kg、大约10μg/kg至大约1mg/kg、大约10μg/kg至大约100μg/kg、大约100μg/kg至大约1mg/kg以及大约500μg/kg至大约1mg/kg。GDF-8抑制剂可以通过局部、口服、静脉内、腹膜内、肌内、腔内、皮下或经皮方式施用。

本领域内的普通技术人员将会理解，可以将任何蛋白质序列中的某些氨基酸替换为其它氨基酸而不会不利地影响该蛋白质的活性。因此考虑在本发明GDF-8抑制剂的氨基酸序列或编码该GDF-8抑制剂的DNA序列中产生多种改变而没有可察觉的生物学活性或用途的丢失。此类改变可以包括，但不限于缺失、插入、截短和替换。

任选地，将GDF-8抑制剂糖基化、聚乙二醇化或连接于其它非蛋白质的聚合物。可以修饰本发明的GDF-8抑制剂以具有改变了的糖基化模式(即从原始或天然糖基化模式发生改变)。如本文中所用，“改变了的”意思是指与原始抑制剂相比具有一个或多个所添加和删除的糖部分和/或具有一个或多个所添加和删除的糖基化作用位点。可以通过改变氨基酸序列以含有本领域内众知的糖基化作用位点共有序列实现向GDF-8抑制剂中加入糖基化作用位点。提高糖部分数目的另一种方法是通过将糖苷化学偶联或酶偶联至抑制剂的氨基酸残基上。这些方法在WO 87/05330和Aplin等，Crit.Rev.Biochem.22：259-306(1981)中描述。去除存在于受体上的任意糖部分可以如Sojar等，Arch.Biochem.Biophys.259：52-57(1987)；Edge等，Anal.Biochem.118：131-137(1981)和Thotakura等，Meth.Enzymol.138：350-359(1987)所述以化学或酶方式实现。

还可以使用可检测标记或功能性标记将本发明的GDF-8抑制剂加上标签。可检测标记包括放射性标记如¹³¹I或⁹⁹Tc，其可以使用本领域内已知的常规化学方法附加至GDF-8抑制剂。标记也包括酶标记，如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。标记还包括化学部分，如生物素，其可以通过结合至特异性相关的可检测部分例如标记的亲和素进行检测。

1.抗体

抑制GDF-8活性的抗体处于本发明的范围内。抗体可以通过传统杂交瘤技术(Kohler等，Nature 256：495-499(1975))、重组DNA方法(美国专利4,816,567)或使用抗体文库的噬茵体展示技术(Clackson等，Nature352：624-628(1991)；Marks等，J.Mol.Biol.222：581-597(1991))产生。对于多种其它抗体产生技术，见例如Antibodies：A Laboratory Manual，Harlow等编辑，Cold Spring Harbor Laboratory，(1988)和Antibody Engineering，第二版，Oxford University Press，Borrebaeck编辑，(1995)。抗体可以是完全的或部分的人抗体或人源化抗体。在某些实施方案中，抗体可以具有如下部分中所述的改变的或突变的Fc区域。

在本文中所述联合治疗中使用的抗体的亲和性可以在10⁶每摩尔和10¹¹每摩尔之间，并且可以在10⁸每摩尔和10¹⁰每摩尔之间。在某些例子中，如所示抗体可以体外和/或体内(in vivo)抑制GDF-8活性，例如通过ActRIIB结合的抑制和报告基因分析。所公开的抗体可以抑制与骨骼肌质量和骨密度负调节相关的GDF-8活性。抗GDF-8序列的抗体在例如美国专利号5,827,733和6,096,506中讨论。

a.抗GDF-8抗体

根据如上所述方法，可以开发与GDF-8蛋白质本身结合的抗体。如果这些抗体抑制GDF-8活性，例如它们阻止GDF-8与其受体结合，则这些抗体在本发明中是有效的。在本发明中最有效的抗体将具有特异性结合至GDF-8或GDF-8/GDF-8受体复合体的特性。此类抗体可能能够以高亲和性结合成熟GDF-8，并且可以结合单体形式、活性二聚体形式和/或作为GDF-8潜伏复合体的部分的成熟蛋白质。

i.Myo-29、Myo-28和Myo-22

可在本发明的方法使用Myo-29、Myo-28和Myo-22抗体，这些抗体进一步详细描述于美国专利公开号2004/0142382-A1(中请号10/688,925)中(其相关部分本文中引用作为参考)。这些抗体能够以高亲和性结合成熟GDF-8、体外或体内抑制GDF-8活性(例如通过ActRIIB结合的抑制和报告基因分析所证实)，并且能够抑制与骨骼肌质量和骨密度负调节相关的GDF-8活性。

Myo-29、Myo-28和Myo-22抗体、它们的scFv片段、VH和VL结构域和CDR的示例性DNA序列和氢基酸(AA)序列列于序列表中并列举于表1中。除VH和VL结构域之外，Myo29、 Myo28和Myo22中的重链和轻链序列完全相同。

ii.JA-16

JA-16抗体与如SEQ ID NO：1中所述的成熟GDF-8蛋白质结合，该抗体在Whittemore等，Bioch.Biophys.Res.Commun.300：965-971(2003)以及在美国专利公开号2003/0138422-A1(申请号10/253,532)中进一步详细描述，两文献的相关部分在本文中引用作为参考。

b.抗GDF-8受体的抗体

根据如上所述方法，可以开发与GDF-8受体结合的抗体。如果它们阻止GDF-8与其受体的结合或如果它们封闭受体结合GDF-8后的活性，则这些抗体在本发明中是有效的。可以开发抗完整的受体蛋白质或仅抗细胞外结构域的抗体。可以开发抗ActRIIB、ActRIIB变体和抗其它GDF-8受体的抗体(见例如美国专利公开号2004/0223966-A1；美国专利公开号2004/0077053-A1；WO 00/43781)。

2.修饰的可溶性受体

在本发明中可以使用GDF-8的修饰的可溶性受体。可溶性受体可以包含GDF-8受体(如ActRIIB)细胞外结构域的全部或部分。例如在美国专利号6,656,475中描述了ActRIIB受体的序列，包括细胞外结构域的描述、该受体的特异性片段和变体。对于其它GDF-8受体的结构和功能特征还参见美国专利号6,696,260和美国专利公开号2004/0077053-A1。

此类受体可以重组产生或通过完整受体的化学或酶切割产生。本发明的修饰的可溶性受体将结合血流中的GDF-8，降低GDF-8与身体中天然GDF-8受体结合的能力。以这种方式，这些修饰的可溶性受体抑制GDF-8活性。

a.受体融合蛋白

可以通过与其它蛋白质或其它蛋白质的部分融合使本发明的修饰的可溶性受体更稳定。提高的稳定性对治疗有利，因为它们可以在较低剂量或以较少频率的间隔期施用。与免疫球蛋白的至少一部分如抗体恒定区、任选免疫球蛋白的Fc片段融合可以提高本发明的修饰的可溶性受体或其它蛋白质的稳定性(见例如Spiekermann等，J.Exp.Med.196：303-310(2002))。

i.ActRIIB Fc融合蛋白

ActRIIB Fc融合蛋白抑制剂包括结合GDF-8并抑制其体内或体外活性的修饰的激活蛋白II型受体ActRIIB，所述的ActRIIB Fc融合蛋白抑制剂进一步详细描述于美国专利公开号2004/0223966-A1(申请号10/689,677)中，其相关部分在本文中引用作为参考。特别地，ActRIIB融合多肽抑制与骨骼肌质量和骨密度负调节相关的GDF-8活性。本文中所述的ActRIIB融合多肽是可溶性的并且具有使它们适用于治疗用途的药物动力学特性，如延长的循环半衰期和/或改善的抗蛋白酶降解的保护。

待用于本发明组合物和方法中的ActRIIB融合多肽包含衍生自ActRIIB细胞外结构域的第一氨基酸序列和起稳定作用的部分或第二氨基酸序列，如衍生自抗体恒定区的序列。ActRIIB融合蛋白的特定说明性实施方案的完整氨基酸序列和DNA序列分别列于SEQ ID NO：60和SEQ IDNO：61。

第一氨基酸序列衍生自全部或部分的ActRIIB细胞外结构域并且能够特异性结合GDF-8。在某些实施方案中，ActRIIB细胞外结构域的这个部分还可以结合BMP-11和/或激活蛋白，或其它生长因子。在某些实施方案，第一氨基酸序列是相同的或着基本上如SEQ ID NO：60中大约第23位氨基酸(aa)至大约第138位氨基酸或SEQ ID NO：62中大约第19位氢基酸至大约第144位氨基酸所列。SEQ ID NO：62和SEQ ID NO：60之间的差异在于SEQ ID NO：62中第64位氨基酸是Ala，而SEQ ID NO：60中的相应氨基酸是Arg。此外，ActRIIB序列中的其它差异也是可能的，例如SEQ IDNO：62中第16位氨基酸和第17位氨基酸可以分别用Cys和Ala替换。在一些其它实施方案中，第一氨基酸序列包含来自SEQ ID NO：60的大约第23位氨基酸至大约第138位氨基酸或SEQ ID NO：62的大约第19位氨基酸至大约第144位氨基酸的至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、110或120个连续氨基酸。这种序列可以为截短序列，只要截短序列能够特异性结合GDF-8即可。

第二氨基酸序列衍生自抗体恒定区，特别是Fc部分，或是此序列的突变。在一些实施方案中，第二氨基酸序列衍生自IgG的Fc部分。在相关的实施方案中，Fc部分衍生自IgG₁、IgG₄或其它IgG同种型IgG。在特定实施方案中，第二氨基酸序列包含如SEQ ID NO：60(第148至378位氨基酸)中所列的人IgG₁的Fc部分，其中人IgG₁的Fc部分已经被修饰以使Fc部分的效应子功能最小化。此类修饰包括变换可能改变效应子功能(如Fc受体结合)的特定氨基酸残基(Lund等，J.Immun.147：2657-2662(1991)和Morgan等，Immunology 86：319-324(1995))，或改变自其中衍生恒定区的物种。抗体可以在重链C_H2区域内具有降低效应子功能(即Fc受体结合和补体活化)的突变。例如，抗体可以具有突变，如美国专利号5,624,821和5,648,260中所述的那些突变。在IgG₁或IgG₂重链中，例如可以在对应于IgG₁或IgG₂全长序列中第234和237位氨基酸处产生此类突变。抗体还可以具有稳定免疫球蛋白两条重链间二硫键的突变，如在Angal等，Mol.Immunol.30：105-108(1993)中所公开的IgG₄铰链区内的突变。

在某些实施方案中，将第二氨基酸序列连接至第一氨基酸序列羧基末端或氨基末端，连接可以通过接头序列或不通过接头序列进行实现。接头的序列和确切长度以及其相对于所连接序列的方向可以变化。接头可以是例如(Gly-Ser)₂(SEQ ID NO：63)。接头可以包含2、10、20、30或更多个氨基酸并且基于所需要特性如溶解性、长度和空间距离、免疫原性等选择。在某些实施方案中，接头可以包含蛋白酶剪切位点如肠激酶切割位点Asp-Asp-Asp-Lys(SEQ ID NO：64)的序列，或其它用于例如融合蛋白纯化、检测或修饰的功能性序列。

3.其它蛋白质

抑制GDF-8活性的其它蛋白可以在本发明的组合物和方法中使用。此类蛋白质可以与GDF-8本身相互作用，抑制GDF-8活性或与其受体的结合。备选地，如果抑制剂阻止GDF-8与其受体的结合或如果它们阻止受体在结合GDF-8后的活性，则抑制剂可以与GDF-8受体(如ActRIIB)相互作用并且在方法和组合物中是有效的。当然抑制剂可以与GDF-8和其受体均相互作用。抑制剂还可以以其它方式影响GDF-8活性，如通过抑制可切割前肽(与成熟GDF-8结合并抑制其活性)的金属蛋白酶(见例如美国专利公开号2004/0138118-A1)

a.与GDF-8结合的蛋白质

与GDF-8结合并抑制其活性(或与其受体结合)的蛋白质可用于本发明的组合物和方法中。在已知某些蛋白质的同时，可以使用如上所述的筛选技术、ActRIIB结合测定法或报告基因分析法分离其它蛋白质。可以筛选蛋白质样品，以及蛋白质文库。

i.GDF-8前肽

GDF-8前肽可用作GDF-8的抑制剂。因为天然存在的GDF-8前肽具有较短的体内半衰期，因而降低了作为GDF-8活性的药物抑制剂的效果，所以GDF-8前肽抑制剂包括已修饰和稳定化的GDF-8前肽，其具有改善的药物动力学特性，特别是提高的循环半衰期。见美国专利公开号2003/0104406-A1(申请号10/071,499)，其相关部分在本文中引用作为参考的。

此类修饰的GDF前肽包括含有GDF前肽和IgG分子Fc区(作为起稳定作用的蛋白质)的融合蛋白。这些GDF抑制剂可以包含GDF前肽(例如在SEQ ID NO：5或11中所述)或者保留GDF前肽的一种或多种生物学活性的该前肽的片段或变体。本发明中所用的GDF-8前肽可以通过合成产生，可以从天然存在(天然)的GDF-8前肽衍生，或可以使用遗传工程领域内众所周知的任意多种试剂、宿主细胞和方法重组产生。在一个实施方案中，修饰的GDF-8前肽包含共价连接至IgG分子或其片段的人GDF-8前肽。GDF-8前肽可以直接连接至IgG分子的Fc区，或通过接头肽连接至IgG分子的Fc区。在WO 00/43781中提供了与GDF-8(包括GDF-8前肽)结合的其它蛋白质。

iii.促滤泡素抑制素和含有促滤泡素抑制素结构域的蛋白质

包含至少一个促滤泡素抑制素结构域的蛋白质调节生长和分化因子-8(GDF-8)的活性或水平并且可以用于治疗与GDF-8活性或水平的调节有关的病症。促滤泡素抑制素本身和含有促滤泡素抑制素结构域的蛋白质(在美国专利公开号2003/0162714-A1和2003/0180306-A1(申请号10/369,736和10/369,738)中所描述，其相关部分在本文中引用作为参考)可以在本发明的组合物和方法中使用。

含有至少一个促滤泡素抑制素结构域的蛋白质将结合并抑制GDF-8。具有至少一个促滤泡素抑制素结构域的蛋白质的实例包括，但不限于促滤泡素抑制素、促滤泡素抑制素样相关基因(FLRG)、FRP(nik、tsc 36)、聚集蛋白、骨粘连蛋白(SPARC、BM40)、hevin(SC1、mast9、QR1)、IGFBP7(mac25)和U 19878。包含至少一个促滤泡素抑制素结构域的蛋白质的其它实例是GASP1和GASP2。

如上所述，将促滤泡素抑制素结构域定义为由富含半胱氨酸的重复所表征的氨基酸结构域或编码氨基酸结构域的核苷酸域。促滤泡素抑制素结构域一般包含65-90个氨基酸并且含有10个保守半胱氨酸残基和类似于Kazal丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域的区域。通常，促滤泡素抑制素结构域内的半胱氨酸残基间的环区具有序列变异性，但是某些保守性明显。第4个和第5个半胱氨酸间的环通常小，仅含有1个或2个氨基酸。第7个和第8个半胱氨酸间的环通常最为高度保守，含有共有序列(G，A)-(S，N)-(S，N，T)-(D，N)-(G，N)，后面是(T，S)-Y基序。第9个和第10个半胱氨酸间的区域通常含有包含由另外氨基酸分隔的两个疏水残基(具体是V、I或L)的基序。

含有促滤泡素抑制素结构域的蛋白质将包含至少(但可能超过)一个促滤泡素抑制素结构域。本术语还指此类蛋白质的任意变体(包括片段；带有替换、添加或缺失突变的蛋白质；和融合蛋白)，包括已经对氨基酸序列进行保守性或非保守性改变修饰序列，其中所示的变体保持了与天然蛋白质相关的已知生物学活性，尤其是与GDF-8结合活性有关的那些生物学活性。这些蛋白质可以自任意来源(天然来源或合成来源)衍生。蛋白质可以是人蛋白质或自动物来源，包括牛、鸡、小鼠、大鼠、猪、羊、火鸡、狒狒和鱼衍生的蛋白质。

可以使用多种方法分离可以结合GDF-8的包含至少一个促滤泡素抑制素结构域的蛋白质。例如，可以采用利用GDF-8的亲和层析。此外，可以利用对cDNA文库的低严格性筛选和使用针对促滤泡素抑制素结构域的探针的简并PCR技术。因为可获得更多基因组数据，可以将使用众多序列谱和分析程序如MotifSearch(Genetics Computer Group，Madison，W1)、ProfileSearch(GCG)和BLAST(NCBI)的相似性搜索用来发现具有与已知促滤泡素抑制素结构域显著同源性的新蛋白质。

本领域内技术人员将认识到，GDF-8或包含至少一个促滤泡素抑制素结构域的蛋白质以及本文中所述其它蛋白质可以含有对它们各自氨基酸序列进行的任意保守性变化而不改变它们的生物学特性。此类保守性氨基酸修饰基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如它们的疏水性、亲水性、电荷、大小等等。将前述多种特征考虑在内的示例性保守替换对本领域内的技术人员是众所周知的并且包括：精氨酸和赖氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；丝氨酸和苏氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；以及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨间的替换。此外，包含至少一个促滤泡素抑制素结构域的蛋白质可以用来生成包含至少一个促滤泡素抑制素结构域的功能性片段。预期此类片段将结合并抑制GDF-8。在本发明的一个实施方案中，包含至少一个促滤泡素抑制素结构域的蛋白质以0.001至100nM间或0.01至10nM间或0.1至1nM间的亲和性与成熟GDF-8或其片段(不管其为单体形式、活性二聚体形式还是GDF-8潜伏复合体中的复合形式)特异性结合。

b.与GDF-8受体结合的蛋白质

与GDF-8受体(如ActRIIB)结合并抑制GDF-8与受体结合或受体本身活性的蛋白质可在本发明范围内使用。可以使用如上所述的筛选技术以及ActRIIB结合测定法或报告基因分析法分离此类蛋白质。可以筛选蛋白质样品，以及蛋白质文库。

c.与结合GDF-8或GDF-8受体的任意蛋白质融合的融合蛋白

可以通过与另一蛋白质或另一蛋白质的部分融合使得与结合GDF-8或GDF-8受体的任意蛋白质融合的融合蛋白更稳定。提高的稳定性对治疗有利因为它们可以在较低剂量或以较少频率的间隔期施用。与免疫球蛋白的至少部分如抗体恒定区、任选免疫球蛋白Fc片段融合可以提高这些蛋白质的稳定性。制备此类融合蛋白质在本领域内众所周知并且可以容易开展(见例如Spiekermann等，J.Exp.Med.，196：303-310(2002))。

GDF-8前肽Fc融合蛋白抑制剂包含自GDF-8前体蛋白氨基末端结构域切下的、与IgG分子Fc区或其片段共价连接的多肽，所述抑制剂更详细描述于美国专利公开号2003/0104406-A1(申请号10/071,499)，其相关部分在本文中引用作为参考。

GDF-8前肽Fc融合蛋白抑制剂包含人GDF-8前肽或GDF-8前肽的突变体，以及IgG₁(SEQ ID NO：66)、IgG₄或经修饰以减弱效应子功能的IgG₁(SEQ ID NO：67)的Fc区。可以对GDF-8前肽进行修饰，包括起稳定作用的修饰。

可以以治疗有效量施用每种GDF-8前肽抑制剂。如本文中所用，GDF-8前肽抑制剂的“有效量”是足以降低GDF-8蛋白质活性以实现所需要生物学效果(如增加骨骼肌质量)的剂量。通常，治疗有效量可以随受试者的年龄、体重、身体状况和性别以及受试者的医学状况变化。剂量可以由内科医生决定并且根据需要调整以适应所观察到的治疗效果。组合物可以以大约50μg/kg至20mg/kg，如从大约50μg/kg至大约10mg/kg、大约1mg/kg至大约10mg/kg和大约5mg/kg至大约10mg/kg的剂量施用。GDF-8前肽抑制剂可以作为大丸剂剂量给药，以使得对于给予该剂量后的最长时间而言GDF-8前肽的循环水平最大化。还可以在大丸剂剂量后使用连续灌注。

d.GDF-8小潜伏复合体GDF-8小潜伏复合体蛋白酶活化的抑制剂

GDF-8小潜伏复合体蛋白酶活化的抑制剂描述于美国专利公开号2004/0138118-A1(申请号10/662,438)，其相关部分在本文中引用作为参考。某些蛋白酶切割游离形式或与成熟GDF-8二聚体结合的前肽，使其不能与成熟GDF-8二聚体结合并抑制成熟GDF-8的活性。如此，蛋白酶可以将小潜伏复合体(与前肽结合并受其抑制的成熟GDF-8)转换为活性的GDF-8。前肽一旦切除即不能与成熟GDF-8二聚体结合并使其失活。GDF-8小潜伏复合体GDF-8小潜伏复合体蛋白酶活化的抑制剂将增强前肽与成熟GDF-8二聚体结合并抑制GDF-8活性。这些抑制剂可以竞争性结合蛋白酶，阻止其与天然的小潜伏复合体结合，或它们还可以结合成熟GDF-8二聚体，产生抑制剂-成熟二聚体复合体，其为失活的并且任选地可以抵抗蛋白酶切割。

金属蛋白酶的例子是金属蛋白酶BMP-1/TLD家族，该家族包括四种哺乳动物蛋白质：BMP-1(Wozney等，Science 242：1528-1534(1988))；哺乳动物Tolloid(mTLD)(Takahara等，J.Biol.Chem.269：32572-32578(1994))；哺乳动物Tolloid样1(mTLL-1)(Takahara等，Genomics34：157-165(1996))和哺乳动物Tolloid样2(mTLL-2)(Scott等，Devel.Biol.213：283-300(1999))，每一篇文献在本文中引用作为参考。

金属蛋白酶的BMP-1/TLD家族本身是更大的蛋白质家族-虾红素家族的成员，该家族包括在多种脊椎生物和无脊椎生物包括例如爪蟾(Xenopus)(Xolloid；UVS.2)、鱼(choriolysin H和L；斑马鱼Tolloid)、海胆(BP-10和SpAN)和水螅(HMP-1；见例如Li等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA93：5127-5130(1996)，其在本文中引用作为参考)中表达的蛋白酶。

根据本发明可使用GDF-8小潜伏复合体蛋白酶活化的抑制剂以治疗病症。多种调节GDF-8的金属蛋白酶抑制剂在美国专利公开号2004/0138118-A1中描述，其包括抗体、核酸和基于肽的药剂。抑制金属蛋白酶活性的药剂可以包括任何类型的分子，包括例如肽、肽衍生物如氧肟肽(peptide hydroxamate)或次膦肽(phosphinic peptide)、或拟肽，并且可以例如通过美国专利公开号2004/0138118-A1的筛选测定法鉴定。(还参见美国专利公开号2005/0043232-A1)。

抑制GDF-8小潜伏复合体的蛋白酶活化的特定药剂包括与前肽GDF-8竞争金属蛋白酶的肽。这些肽可以包含一部分前肽、含有前肽部分的部分全长GDF-8多肽或具有金属蛋白酶切割位点突变的GDF-8多肽的衍生物。在一个实施方案中，GDF-8肽部分的衍生物是对应于GDF-8前肽的肽。在该实施方案的一个方面，衍生物是这样的前肽，其具有金属蛋白酶切割位点突变，例如在切割位点中或与该切位点足够接近处替换、缺失或插入氨基酸以至于对于该肽药剂而言金属蛋白酶的切割活性发生改变。在一个方面，抗金属蛋白酶切割的药剂抑制或调节金属蛋白酶介导的GDF-8活化。在该实施方案的另一个方面，GDF-8的肽部分的衍生物是可以含有一个或多个D-氨基酸和/或L-氨基酸；和/或一个或多个氨基酸类似物(例如在其反应性侧链或其肽键上已衍生或修饰的氨基酸)的肽试剂。衍生或修饰的肽可以具有改善的对在生物环境中肽可能遇到的蛋白酶、氧化剂或其它反应性材料的稳定性。

调节天然存在前肽的金属蛋白酶切割的药剂可以有效地连接至第二个分子，该第二个分子促进该药剂作用或活性、改变药剂的生物学定位或提高药剂在特定环境中的稳定性。例如，肽试剂可以通过将肽试剂与多肽如异源肽有效连接而稳定。例如可以将其连接至抗体分子的Fc结构域，由此提高肽试剂的体内半衰期。

抗金属蛋白酶的抑制性抗体也可以用于本发明中并且可以容易地通过本领域的已知技术产生。

肽试剂可以是包含野生型或突变型序列或其衍生物的、长为10、20、30、40或50个的氨基酸残基。例如，在P1位置(紧邻切割位点的上游)或P1′位置(紧邻切割位点的下游)具有一个或多个氢基酸改变的肽可以加以改变。在与野生型GDF-8前肽序列相关的长10、20、30、40和50个氨基酸的一系列肽中测试了在P1′位置上的天冬氨酸至丙氨酸的替换。此外，在P1位置具有精氨酸至谷氨酰胺替换的肽可以用于体外或体内抑制剂，如同野生型肽GDF-8前肽序列那样。特别地，考虑了具有提高的稳定性和/或对蛋白酶切割抵抗的改变和衍生肽试剂。

金属蛋白酶的各个肽抑制剂包括但不限于：

(1)在P1′位置具有天冬氨酸至丙氨酸替换的肽，如：

KDVIRQLLPKAPPLRELIDQYDVQRADSSDGSLEDDDYHATTETIITMPT(SEQ ID NO：68)；

QLLPKAPPLRELIDQYDVQRADSSDGSLEDDDYHATTETI(SEQID NO：69)；

APPLRELIDQYDVQRADSSDGSLEDDDYHA(SEQ ID NO：70)；

ELIDQYDVQRADSSDGSLED(SEQ ID NO：71)；和

YDVQRADSSD(SEQ ID NO：72)。

(2)在P1和P1′位置具有野生型金属蛋白酶切割序列的肽，如：

KDVIRQLLPKAPPLRELIDQYDVQRDDSSDGSLEDDDYHATTETIITMPT(SEQ ID NO：73)；

QLLPKAPPLRELIDQYDVQRDDSSDGSLEDDDYHATTETI(SEQID NO：74)；

APPLRELIDQYDVQRDDSSDGSLEDDDYHA(SEQ ID NO：75)；

ELIDQYDVQRDDSSDGSLED(SEQ ID NO：76)；和

YDVQRDDSSD(SEQ ID NO：77)。

4.GDF-8抑制剂的模拟物

可以使用本发明的GDF-8抑制剂的模拟物。这些GDF-8抑制剂的任何合成性类似物，尤其是具有改善的体外特性如具有较长半衰期或更不易受消化系统降解的那些的类似物是有用的。

抗GDF-8抗体、抗GDF-8受体抗体、修饰的可溶性受体和受体融合蛋白以及与GDF-8结合的其它蛋白质如GDF-8前肽、突变的GDF-8前肽、促滤泡素抑制素和含有促滤泡素抑制素结构域的蛋白质以及其Fc融合蛋白的模拟物均可以在本发明中使用。

如果这些模拟物阻断GDF-8的活性，即如果它们阻断GDF-8与其受体的结合，则在本发明中这些模拟物将是有效的。在本发明中最有效的抗体将具有特异性地结合至GDF-8或GDF-8/GDF-8受体复合体的特性。此类模拟物能够以高亲和性结合成熟GDF-8，并且可以结合单体形式、活性二聚体形式或作为GDF-8潜伏复合体部分的成熟蛋白质。本发明的模拟物可以抑制GDF-8的体外和体内活性，如通过例如ActRIIB结合的抑制和报告基因分析法证实。此外，所公开的模拟物可以抑制与骨骼肌质量和骨密度负调节相关的GDF-8活性。

B.非蛋白质抑制剂

非蛋白质抑制剂包括例如核酸。

1.核酸

术语“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸”指脱氧核糖核酸(DNA)并且根据需要指核糖核酸(RNA)或肽核酸(PNA)。应当理解，该术语包括核苷酸类似物以及单链或双链多核苷酸(例如siRNA)。多核苷酸的实例包括但不限于质粒DNA或其片段、病毒DNA或RNA、反义RNA等。术语“质粒DNA”指呈环状的双链DNA。如本文中所用，“反义”指能够与一部分mRNA编码区和/或非编码区通过序列互补性杂交由此干扰mRNA翻译的核酸。术语“siRNA”和“RNAi”指具有诱导mRNA降解的能力因而使基因表达“沉默”的双链RNA核酸。通常，siRNA长至少15-50个核苷酸，例如长20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。

可阻断GDF-8活性的核酸可用于本发明。此类抑制剂可以编码与GDF-8本身相互作用的蛋白质。备选地，此类抑制剂可以编码与GDF-8受体(如ActRIIB)相互作用的蛋白质，并且如果所编码蛋白质阻断GDF-8与其受体的结合或者如果它们阻断受体在结合GDF-8后的活性，则在本发明中是有效的。当然，抑制剂可以编码与GDF-8和其受体相互作用的蛋白质。可以使用此类核酸以便表达本发明的GDF-8抑制剂。

备选地，可以使用反义核酸以抑制GDF-8或GDF-8受体(如ActRIIB)的产生。反义序列可以与互补的编码序列相互作用以干扰功能，其可以起抑制GDF-8或GDF-8受体产生的作用。

在本发明中使用的核酸可以使用如上所述的ActRIIB结合测定法和报告基因分析法鉴定

核酸可以从其天然环境，以基本纯的形式或均一形式得到、分离和/或纯化。用于在多种不同宿主细胞内克隆和表达多肽的系统众所周知。合适的宿主细胞包括细菌、哺乳动物细胞、酵母和杆状病毒系统。本领域内可获得的用于表达异源多肽的哺乳动物细胞系包括中国仓鼠卵巢细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾细胞、NS0小鼠黑色素瘤细胞和众多其它细胞。常用的细菌宿主是大肠杆菌(E.coli)。对于适合从核酸产生蛋白质的其它细胞见Gene Expression Systems，Fernandez等编辑，Academic Press(1999)。

可以选择或构建合适的载体，其包含包括启动子序列、终止子序列、聚腺苷酸化序列、增强子序列在内的适宜调节序列、选择基因或标志基因以及根据需要的其它序列。根据需要载体可以是质粒或病毒载体，例如噬茵体或噬粒。对于其它细节，见例如Molecular Cloning：A LaboratoryManual，Sambrook等，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)。众多用于操作核酸，例如制备核酸构建体、诱变、测序、将DNA导入细胞和基因表达以及蛋白质分析的已知技术和方案在CurrentProtocols in Molecular Biology，编者Ausubel等，第二版，John Wiley &Sons(1992)中详细描述。

可以将核酸与编码另外多肽序列，例如作为标志或报告分子起作用的序列的其它序列融合。标志或报告分子的实例包括β-内酰胺酶、氯霉素乙酰转移酶(CAT)、腺苷脱氨酶ADA)、氨基糖苷磷酸转移酶(负责新霉素(G418)抗性)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、潮霉素B磷酸转移酶(HPH)、胸苷激酶(TK)、lacZ(编码β-半乳糖苷酶)、黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(XGPRT)、萤光素酶和本领域内众多其它标志或报告分子。

本发明的方法还包括减弱B7-H3表达以增强免疫反应的短干扰性RNA(siRNA)和反义寡核苷酸的用途。可以使用如Hannon，Nature418：244-251(2002)；McManus等，Nat.Reviews 3：737-747(2002)；Heasman，Dev。Biol.243：209-214(2002)；Stein，J.Clin.Invest.108：641-644(2001)和Zamore，Nat.Struct.Biol.，8：746-750(2001)中所述的标准技术产生siRNA。可以使用如Antisense Drug Technology：Principles，Strategies，andApplications，第一版，编者Crooke，Marcel Dekker(2001)中所述的标准技术产生反义核酸。

可以将核酸在从大约1μg/kg至大约20mg/kg的剂量施用，这取决于症状严重性和疾病进展。适宜的有效剂量通过进行治疗的临床医生从如下范围选择：大约1μg/kg至大约20mg/kg、大约1μg/kg至大约10mg/kg、大约1μg/kg至大约1mg/kg、大约10μg/kg至大约1mg/kg、大约10μg/kg至大约100μg/kg、大约100μg/kg至大约1mg/kg以及大约500μg/kg至大约1mg/kg。核酸抑制剂可以通过局部、口服、静脉内、腹膜内、肌内、腔内、皮下或经皮的方法施用。

III.与GDF-8抑制剂联合使用的其它治疗剂

A.胰岛素

用于本发明的方法和组合的胰岛素包括速效胰岛素、中效胰岛素、长效胰岛素以及中效和速效胰岛素的组合。胰岛素疗法替代身体不能产生的胰岛素。速效或短效与中效或长效胰岛素组合助于将血糖水平维持在正常范围内或接近于正常水平。这些药剂的用途进一步详细描述于美国专利公开号2002/0187980-A1(申请号10/164,235)中，其相关部分在本文引用作为参考。

商业可获得的速效胰岛素产品包括来自EIi Lilly and Co.的HUMALOG^牌赖脯人胰岛素注射液(重组DNA来源)、HUMULIN^R常规人注射液(USP)[重组DNA来源]、HUMULIN^R常规U-500浓缩人注射液(USP)[重组DNA来源]、REGULAR ILETIN^II(胰岛素注射液，USP，从猪中纯化)以及Novo Nordisk Pharmaceuticals的NOVOLIN^人胰岛素注射液和VENOSULIN^BR缓冲的常规人注射液。

与本发明使用的商业可得到的中效胰岛素包括但不限于，来自EIiLilly and Company的HUMULIN^L牌LENTE^人胰岛素(重组DNA来源)锌混悬液、HUMULIN^N NPH人胰岛素(重组DNA来源)鱼精蛋白锌混悬液、LENTE^ILETIN^II胰岛素锌混悬液(USP，从猪中纯化)以及NPHILETIN^II鱼精蛋白锌胰岛素混悬液(USP，从猪中纯化)、来自AventisPharmaceuticals的LANTUS^胰岛素glargine(重组DNA来源)注射液以及来自Novo Nordisk Pharmaceuticals，Inc(Princeton New Jersey)的NOVOLIN L Lente^人胰岛素锌混悬液(重组DNA来源)和NOVOLIN^NNPH人胰岛素鱼精蛋白锌混悬液(重组DNA来源)产品。

还可与本发明的方法和制剂使用的是中效和速效胰岛素组合，如HUMALOG^Mix 75/25^TM(75％赖脯胰岛素鱼精蛋白混悬液和25％赖脯胰岛素注射液)、HUMULIN^50/50^(50％人胰岛素鱼精蛋白锌混悬液和50％人胰岛素注射液)和HUMULIN^70/30^(70％人胰岛素鱼精蛋白锌混悬液和30％人胰岛素注射液)，每种均来自EIi Lilly and Company。还可使用组合产品NOVALIN^70/30(70％NPH，人胰岛素鱼精蛋白锌混悬液和30％常规人胰岛素注射液)系列，其是来自Novo Nordisk Pharmaceuticals的中效和速效胰岛素。

与本发明一起使用的商业可得到的示例性长效胰岛素是HUMULIN^U Ultralente^人胰岛素(重组DNA来源)长效锌混悬液，其来自EIi Lillyand Company。

还可在本发明的方法中使用的是吸入型胰岛素产品，如由Pfizer Inc.和Aventis SA开发的EXUBERA^吸入型胰岛素产品。

这些胰岛素产品中的每一种可以按照医学专家的指导，使用本领域内已知的使用法、剂量和方案施用，对于每一产品的使用法、剂量和方案公布于如Medical Economics Company，Inc.(Montvale，New Jersey)于2001年出版的Physicians′Desk Reference，第55版中，其相关部分在本文中引用作为参考。

B.磺酰脲药剂

磺酰脲药剂提高胰腺产生的胰岛素量。它们还通过提高胰岛素受体的功能性并刺激产生更多胰岛素受体来提高遍及全身的胰岛素的效果。这些药剂还降低胰岛素抵抗并且可以降低肝脏产生的糖量。

与本发明的方法和组合物一起使用的磺酰脲药剂包括格列吡嗪、格列本脲(乙磺己脲)、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、格列美脲或其可药用盐。这些药剂的用途进一步详细描述于美国专利公开号2003/008869-A1(申请号10/163,783)中，其相关部分在本文中引用作为参考。

本发明的磺酰脲药剂可以按照本领域内已知的剂量和方案施用，对于相关化合物的剂量和方案公布于如Medical Economics Company，Inc.(Montvale，New Jersey)于2001年出版的Physicians′Desk Reference，第55版中。。例如，来自Aventis Pharmaceuticals的AMARYL^片剂中的格列美脲在成人中可以以每天大约1至大约2mg的起始日剂量给药。该剂量可以逐步提高至每天大约8mg，并且常用维持剂量为每天大约2至4mg。格列本脲可在来自Aventis Pharmaceuticals的DIAβETA^片剂中得到，并且具有范围从每天大约2.5至大约5mg的起始剂量和每天大约1.25至大约20mg的常用维持剂量。氯磺丙脲可在来自Pfizer Inc.的DIABINESE^片剂中得到，并且在人中可以具有大约100至大约500mg的日剂量，这取决于受者的各自特征。格列吡嗪可在来自Pfizer Inc.的GLUCOTROL^片剂和GLUCOTROL XL^延迟释放片剂中商业性得到。可以将它以大约2.5至大约5mg的起始日剂量施用并且以2.5至5mg的增量提高至每天大约15至40mg间的维持剂量。妥拉磺脲通常在每天大约100mg至500mg间的日剂量施用，平均维持剂量为每天大约250mg至500mg，每天服用一次或在一天时间内分多次施用。250mg和500mg妥拉磺脲片剂以及500mg甲苯磺丁脲片剂可自Mylan PharmaceuticalsInc.(Morgantown，WV，U.S.A)得到。

C.双胍药剂

双胍药剂通过减少肝脏在糖生成中产生的糖量降低血糖。它们还提高肌肉细胞吸收的糖量并且降低胰岛素抵抗。这些药剂可以降低血液中三酰甘油水平并减少可能导致动脉粥样硬化的某些异常凝血因子和炎症标志分子。

与本发明的方法和组合物一起使用的双胍药剂包括二甲双胍及其可药用盐。这些药剂的用途进一步详细描述于美国专利公开号2003/0018028-A1(申请号10/163,707)中，其相关部分在本文中引用作为参考。

用于本发明方法和用于组合使用的盐酸二甲双胍可从来自BristolMyers Squibb的商品名为GLUCOPHAGE^的500mg、850mg和1000mg片剂中得到。可以将盐酸二甲双胍在人中以500mg至大约800mg的起始日剂量施用并根据需要提高至最大日剂量2550mg。

D.噻唑烷二酮类药剂

噻唑烷二酮类药剂通过降低胰岛素抵抗改善体内细胞响应于胰岛素的方式。它们还可以通过减少血液中的三酰甘油并提高高密度脂蛋白质(HDL)辅助治疗高胆固醇。

与本发明的方法和组合物一起使用的噻唑烷二酮类药剂是非限制性的吡格列酮或罗格列酮类，或这些药剂的可药用盐。这些药剂的用途进一步详细描述于美国专利公开号2002/0198203-A1(申请号10/164,233)中，其相关部分在本文中引用作为参考。这些药剂中每一种可以通过本领域内已知的方法产生。这些药剂还可以按照本领域内已知的这类化合物的药学或治疗有效剂量或量施用，如描述于Medical Economics Company，Inc.(Montvale，New Jersey)于2001年出版的Physicians′Desk Reference，第55版中的那些，描述这些产品中的每一种的相关部分在本文中引用作为参考。

吡格列酮可以来自Swiss Bioceutical International，Ltd的15mg、30mg和45mg ACTOS^牌盐酸吡格列酮片剂形式得到。吡格列酮及其可药用盐可以在人中以从大约15mg或30mg的起始日剂量施用并根据需要提高至最大日剂量45mg。

罗格列酮可以来自GlaxoSmithKline的2mg、4mg和8mgAVANDIA^马来酸罗格列酮片剂形式得到。罗格列酮可以在人中以分开的剂量大约4mg单一剂量或分开剂量的起始日剂量施用并根据需要提高直至最大日剂量8mg。

E.α-葡萄糖苷酶抑制剂

α-葡萄糖苷酶抑制剂延缓体内糖的消化并降低小肠从食物吸收葡萄糖的速率。这降低了餐后进入血液的糖量并预防高血糖症期。

可以与本文中所述的本发明方法和组合物使用的α-葡萄糖苷酶抑制剂是米格列醇或阿卡波糖，或一个或多个这类化合物的可药用盐。这些药剂的用途进一步详细描述于美国专利公开号2003/0013709-A1(申请号10/164,232)中，其相关部分在本文中引用作为参考。

阿卡波糖片剂可从来自Bayer Corporation的PRECOSE^商品得到，其可以在人中以每天大约25mg的起始剂量(每天一次至三次)施用并且随时间提高至每天大约50至100mg(每天三次)。

25mg、50mg和100mg剂量的米格列醇片剂可从来自Pharmacia &Upjohn的GLYSET^TM商品得到，并且可以以每天大约25mg的起始剂量施用并且根据需要提高至每日100mg的最大剂量(每天施用三次)。

F.PTP酶抑制剂

蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP酶)是可以在调节广泛类型的细胞反应中起重要作用的多种分子的大家族。PTP酶家族分为三个主要的亚类：典型PTP酶、低分子量PTP酶和双特异性PTP酶。典型PTP酶可进一步分为两类：胞内PTP酶(例如PTP1B、TC-PTP、大鼠脑PTP酶、STEP、PTPMEG1、PTPH1、PTPD1、PTPD2、FAP-1/BAS、PTP1C/SH-PTP1/SHP-1和PTP1D/Syp/SH-PTP2/SHP2)以及受体型PTP酶(例如CD45、LAR、PTPI、PTPυ、PTPΛ、PTPM、PTPK、SAP-1和DEP-1)。双特异性磷酸酶具有将磷酸基团自丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸残基上移去的能力。PTP酶家族的成员作为重要调节物或调节剂参与广泛类型的细胞反应，包括胰岛素信号作用、瘦蛋白信号作用、T细胞活化和T细胞介导的信号级联、成纤维细胞生长、血小板凝集和成骨细胞增殖调节。

某些PTP酶抑制剂详细描述于美国专利申请号60/547,071和60/547,049中，其相关部分在本文中引用作为参考。而其它PTP酶抑制剂也可以用于本发明中。

在一个方面，PTP酶抑制剂具有式(I)：

R₁是C(O)OR₇、5至6元杂环、H、卤素、CN和C(O)NR₇R₈。

R₂是C(O)ZR₄或CN。

Z是-O-或-NR₅-。

X是-O-C_1-3亚烷基-、-NR₈--C_1-3亚烷基-、-SO-C_1-3亚烷基-、-SO-C_1-3亚烷基-、-SO₂-C_1-3亚烷基-、-C_1-4亚烷基-、-C_2-4亚链烯基-或-C_2-4亚炔基-。任何亚烷基、亚链烯基和亚炔基可以任选地用一个或多个卤素、氧代、HN＝、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、R₄或Q取代。

每一Y₁、Y₂、Y₃、Y₄和Y₅独立地是CR₃、N、S或O。Y₁、Y₂、Y₃、Y₄和Y₅的一个或两个可以不存在。

每一R₃独立地是H、芳基、5至8元杂环基、C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、卤素、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂或Q。任何芳基、杂环基、烷基、链烯基或炔基可以任选地用一个或多个卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、N₃、R₄或Q取代。

每一Q独立地是-OC(O)NR₄R₅、-OR₄、-OC(O)R₄、-COOR₄、-C(O)NR₄R₅、-C(O)R₄、-C(＝N-OH)R₄、-NR₄R₅、-N⁺R₄R₅R₆、-NR₄C(O)R₅、-NR₄C(O)NR₅R₆、-NR₄C(O)OR₅、-NR₄S(O)₂R₅、-SR₄、-S(O)R₄、-S(O)₂R₄或-S(O)₂NR₄R₅。

每一R₄、R₅和R₆独立地是H、C_1-16烷基、C_2-12链烯基、C_2-12炔基、C_3-8环烷基、环烷基C_1-6烷基、5至8元杂环、杂环C_1-6烷基、芳基、芳基C_1-6烷基、芳基C_2-6链烯基或芳基C_2-6炔基。每一R₄、R₅和R₆可以任选地用一个或多个C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、N₃、-OC(O)NR₇R₈、-OR₇、-OC(O)R₇、-COOR₇、-C(O)NR₇R₈、-C(O)R₇、-NR₇R₈、-N⁺R₇R₈R₉、-NR₇C(O)R₈、-NR₇C(O)NR₈R₉、-NR₇C(O)OR₈、-NR₇S(O)₂R₈、-SR₇、-S(O)R₇、-S(O)₂R₇或-S(O)₂NR₇R₈取代。

每一R₇、R₈或R₉独立地是H、C_1-12烷基、C_2-12链烯基、C_2-12炔基、C_3-12环烷基、芳基或芳基C_1-12烷基。每一R₇、R₈和R₉可以任选地用一个或多个卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂或NO₂取代。

当环系统是1-苯并噻吩时，R₁是C(O)OCH₃，并且X是-OCH₂-，而R₂不是C(O)OCH₃。

当环系统是1-苯并噻吩时，R₁是C(O)OH，并且X是-OCH₂-，而R₂不是C(O)OH。

当环系统是噻吩并[2，3-b]吡啶时，R₁是异丙基酯，并且X是-OCH₂-，而R₂不是C_1-3烷基酯。

当环系统是噻吩并[2，3-b]吡啶时，R₁是C(O)OC_1-4烷基，并且X是-OCH₂-或-OCH(CH₃)-，而R₂不是CN。

当环系统是噻吩并[2，3-b]吡啶时，R₁是异丙基酯，并且X是-SCH₂CH₂-，而R₂不是CN。

当环系统是噻吩并[2，3-b]吡啶时，R₁是异丙基酯，并且X是-SCH₂-，而R₂不是异丙基酯。

在某些实施方案中，R₁是5或6元杂环。优选的5元杂环可以包括如下：

在某些实施方案中，R₁和R₂是-C(O)OH或-C(O)OC_1-4烷基。在另一个方面，X是O-C_1-3亚烷基-、-NR₈-C_1-3亚烷基-、-S-C_1-3亚烷基-、-SO-C_1-3亚烷基-或-SO₂-C_1-3亚烷基-，其中任何亚烷基可以任选地用一个或多个F、Cl、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、CHO或Q取代。在某些实施方案中，X是-O-CH₂-。在另一个方面，稠杂环是苯并噻吩或噻吩并吡啶。

式(I)化合物可以是盐。它还可以作为可药用盐或其前体药物与可药用的赋形剂或载体组合包含在药物组合物中，。该化合物可以抑制PTP酶如PTP1 B。

在本发明的另一实施方案中，PTP酶抑制剂还可以是具有式(II)的化合物：

R₁是R₅、OR₅、C(O)OR₅、C(O)R₅或C(O)NR₅R₆。

R₂是R₅。

X是-O-C_1-3亚烷基-、-NR₈-C_1-3亚烷基-、-S-C_1-3亚烷基-、-SO-C_1-3亚烷基-、-SO₂-C_1-3亚烷基-、-C_1-4亚烷基-、-C_2-4亚链烯基-或-C_2-4亚炔基-。任何亚烷基、亚链烯基或亚炔基可以任选地用一个或多个卤素、氧代、亚氨基、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂或Q取代。

Y是-O-或-NR₆-或不存在。

R₃是H、卤素、CN、CF₃、OCF₃、C_1-3烷基、C_3-4环烷基、C_1-3烷氧基或芳基。

R₄是A-B-E-D，其中A不存在不存在或者是亚芳基、杂亚芳基、C_1-6亚烷基、C_2-6链二烯基或C_2-6炔基。每一个A可以任选地用一个或多个C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、卤素、CN、OCF₃、OH、NH₂、CHO、NO₂或Q取代。任何烷基、链烯基或炔基可以任选地用一个或多个卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、N₃或Q取代。每一个A可以任选地以一个或多个亚芳基、亚烷基或亚链烯基结尾。

B不存在或者是-NR₅-、-NR₇-、-N(R₅)CH₂-、-N(R₇)CH₂-、-N(R₉)-、-N(R₉)C(O)-、-N(R₉)C(O)C(R₁₁)(R₁₂)-、-N(R₉)C(O)C(O)-、-N(R₉)C(O)N(R₁₀)-、-N(R₉)SO₂-、-N(R₉)SO₂C(R₁₀)(R₁₁)-、-N(R₉)(R₁₀)C(R₁₁)(R₁₂)-、-N(R₉)C(R₁₁)(R₁₂)C(R₁₃)(R₁₄)-、-O-、-O-C(R₁₁)(R₁₂)、-O-C(R₁₁)(R₁₂)C(R₁₃)(R₁₄)-、-C(R₁₁)(R₁₂)-O-、-C(R₁₁)(R₁₂)-O-C(R₁₃)(R₁₄)-、-C(R₁₁)(R₁₂)N(R₉)-、-C(R₁₁)(R₁₂)N(R₉)C(R₁₃)(R₁₄)-、-C(R₁₁)(R₁₂)S-、-C(R₁₁)(R₁₂)SC(R₁₃)(R₁₄)-或-C(R₁₁)(R₁₂)SO₂C(R₁₃)(R₁₄)-。

E不存在或者是C_3-12环亚烷基、3至12元杂二环基、亚芳基、C_1-12亚烷基、C_2-12亚链烯基或C_2-12亚炔基，其中每一个E任选地用一个或多个C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、卤素、CN、OH、NH₂或NO₂取代。

D是一个或多个H、卤素、OH、NH₂、CHO、CN、NO₂、CF₃或Q。

当A、B和E不存在时，R₁是C(O)OH或C(O)OCH₃，R₂是H，并且R₃是H或氯，D不是H或氯；并且当A、B和E不存在时，R₁是C(O)OH或C(O)OCH₃，R₂是H，并且R₃是H或溴，D不是H或溴。

每一个Q独立地是-R₅、-R₇、-OR₅、-OR₇、-NR₅R₆、-NR₅R₇、-N⁺R₅R₆R₈、S(O)_nR₅或-S(O)_nR₇，并且n是0、1或2。

每一R₅、R₆和R₈独立地是H、C_1-12烷基、C_2-12链烯基、C_2-12炔基、C_3-12环烷基、C_1-12烷氧基C_1-12烷基、环烷基C_1-6烷基、3至8元杂环基、杂环基C_1-6烷基、芳基、芳基C_1-6烷基、芳基C_2-6链烯基或芳基C_2-6炔基。每一R₅、R₆和R₈可以任选地周一个或多个R₉、-OR₉、-OC(O)OR₉、-C(O)R₉、-C(O)OR₉、-C(O)NR₉R₁₀、-SR₉、-S(O)R₉、-S(O)₂R₉、-NR₉R₁₀、-N⁺R₉R₁₀R₁₁、-NR₉C(O)R₁₀、-NC(O)NR₉R₁₀、-NR₉S(O)₂R₁₀、氧代、卤素、CN、OCF₃、CF₃、OH或NO₂取代。

R₇是-C(O)R₅、-C(O)OR₅、-C(O)NR₅R₆、-S(O)₂R₅、-S(O)R₅或-S(O)₂NR₅R₆。

每一R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃和R₁₄独立地是H、C_1-12烷基、C_2-12链烯基、C_2-12炔基、C_3-12环烷基、芳基或芳基C_1-12烷基。任何烷基、链烯基、炔基、环烷基、芳基或芳基烷基任选地用一个或多个卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂或NO₂取代。

在某些实施方案中，R₁是C(O)OH、C(O)OCH₃、C(O)OCH₂CH₃或C(O)NH。在另一个实施方案中，R₂是H、CH₃、CH₂CH₃或叔丁基。在某些实施方案中，X是-O-C_1-3烷基-、-N-C_1-3烷基-、-S-C_1-3烷基-、-SO-C_1-3烷基-或-SO₂-C_1-3烷基。在另外的实施方案中，R₃是H、F、Cl、Br、甲基或CF₃。

在一个实施方案中，A是用B取代的芳基并且可以任选地用一个或多个OH、NH₂、CHO、CN、NO₂、卤素、C₁-C₄烷基或Q取代；B可以不存在或者是1-3个原子的接头，如C₁-C₃烷基、C₂-C₃链烯基、NH、NHCO、NHCONH、NHSO₂、NHSO₂CH₂、NHCH₂、NHCH₂CH₂、O、OCH₂、OCH₂CH₂、CH₂O、CH₂OCH₂、CH₂NH、CH₂NHCH₂、CH₂S、CH₂SCH₂或CH₂SO₂CH₂。

在如下实例中，为将B-E-D连接至A，已证实当A是6元芳基时，优选相对于A和噻吩环间连接的间位(C-3或C-5)。当A是5元芳基时，优选相对于A和噻吩间连接的C-3或C-4位置。

在另一个实施方案中，E不存在或者是C_3-8环亚烷基、C_3-8杂二环基、亚芳基、C_1-6亚烷基、C_2-6亚链烯基或C_2-6亚炔基，并且任选地用一个或多个C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、卤素、CN、OH、NH₂或NO₂取代。在某些实施方案中，E可以是环丙二基、环己二基、环庚二基、哌啶二基、哌嗪二基、吡咯烷二基、四氢呋喃二基、吗啉二基、亚苯基、吡啶二基、嘧啶二基、噻吩二基、呋喃二基、咪唑二基、吡咯二基、苯咪唑二基、四氢噻喃二基或四氢吡喃二基。

在一个实施方案中，D是一个或多个H、卤素、OH、NH₂、CHO、CN、NO₂、CF₃、芳基或Q。在某些实施方案中，D是SO₂R₇、-C(O)R₇、-OC(O)NR₅R₆、-OR₇、-COOR₇、-C(O)NR₅R₆、-C(O)R₇、嘧啶基或吡啶基。

式(II)化合物可以是盐。它还可以作为可药用盐或其前体药物与可药用的赋形剂或载体组合包含于药物组合物中。该化合物可以抑制PTP酶如PTP1 B。

这些化合物的有效施用可以以例如大约1mg/kg至大约250mg/kg的日剂量给予，并且可以以单次剂量或两次或多次分开的剂量给予。这类剂量可以以指导本文中活性化合物进入受者体内血液的任何方式施用，包括口服施用、通过植入物施用、肠胃外(包括静脉内，腹膜内和皮下注射)施用、直肠施用、阴道施用以及经皮肤施用。为本公开目的，将经皮施用理解包括经过体表和体内管道内衬层(inner lining)的施用，包括经过表皮和粘膜组织。此类施用可以使用洗剂、乳膏、泡沫、贴剂、混悬剂、溶液和(直肠和阴道)栓剂中的本化合物或其可药用盐实施。

G.抗血脂剂

可与本发明本文中所述的本发明方法和组合物一起使用的抗血脂剂(也称作抗高血脂剂)是胆汁酸螯合剂、纤维酸衍生物、HMG-CoA还原酶抑制剂和烟酸化合物。抗血脂剂通过多种机制降低血液中胆固醇和脂肪的量。例如，胆汁酸螯合剂在小肠内与胆汁酸结合并阻止后者被再吸收回血液。随后肝脏产生更多胆汁以替代丢失的胆汁。因为身体需要胆固醇以制造胆汁，故肝脏用尽血液中的胆固醇，从而降低血液循环中的LDL胆固醇的量。

与本发明一起使用的胆汁酸螯合剂包括考来替泊和考来维仑及它们的可药用盐。可以与本发明一起使用的纤维酸衍生物包括clifofibrate、吉非贝齐和非诺贝特。与本发明一起使用的HMG-CoA还原酶抑制剂(也称作他汀类)包括西立伐他汀、氟伐他汀、阿伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀或者其可药用盐。烟酸(Niacin)是可以与本发明方法一起使用的烟酸化合物的实例。还可使用脂酶抑制剂如奥利司他。这些药剂的用途进一步详细描述于美国专利公开号2002/0198202-A1(申请号10/164,231)中，其相关部分在本文中引用作为参考。

与本发明一起使用的胆汁酸螯合剂包括考来替泊和考来维仑以及它们的可药用盐。考来替泊可在来自Pharmacia & Upjohn的1mg COLESTID^微粉化盐酸考来替泊片剂中得到，推荐起始剂量为每天大约2g，该剂量可以根据需要提高至每天2至16g，以分开的剂量服用。盐酸考来维仑可在来自Sankyo Pharma，Inc.的625mg WELCHOL^TM片剂中得到，推荐开始剂量是3片，每天随餐服用二次，或者6片，每天随餐服用一次。根据需要，可以提高到每天7片。推荐用液体送服片剂。

可以与本发明一起使用的纤维酸衍生物包括clifofibrate、吉非贝齐和非诺贝特。Clifofibrate可以以来自Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals的500mg ATROMID-S^胶囊形式商业性得到，推荐日剂量为大约2g以分开的量施用。吉非贝齐可在来自Parke-Davis的600mg LOPID^片剂中得到，用于成人的推荐剂量为每天大约1200mg，以分开的剂量在早餐和晚餐前两次施用。非诺贝特可在来自Abbott Laboratories Inc.的67mg、134mg和200mg TRICOR^片剂中得到，推荐起始剂量为每天67mg至200mg，直至每天最大日剂量200mg。

与本发明一起使用的HMG-CoA还原酶抑制剂包括西立伐他汀、氟伐他汀、阿伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀或者其可药用盐。0.2mg、0.3mg、0.4mg和0.8mg片剂剂量的BAYCOL^西立伐他汀钠片剂可自Bayer Corporation得到，推荐开始剂量为0.4mg，每天晚上服用一次，维持剂量每天0.2mg至0.8mg。含有相当于20mg或40mg氟伐他汀的氟伐他汀钠的LESCOL^氟伐他汀钠胶囊可从Novartis PharmaceuticalsCorporation得到，推荐开始剂量为20mg至40mg，每天睡觉时服用一次，并且推荐每天维持剂量为20mg至80mg，80mg的日剂量以分开的剂量服用。LIPITOR^阿托伐他汀钙片剂可从来自Parke Davis或Pfizer Inc.的10mg、20mg、40mg或80mg剂量中得到，推荐起始剂量为10mg，每天服用一次，最终剂量范围为10mg至80mg，每天服用一次。MEVACOR^洛伐他汀片剂可从来自Merck & Co.，Inc的10mg、20mg和40mg片剂中得到，推荐起始剂量为20mg，每天随晚餐服用一次，并且推荐剂量范围为每天10mg至80mg，以单次剂量或两次分开的剂量服用。PRAVACHOL^普伐他汀钠片剂可从Bristol-Myers Squibb公司的作为10mg、20mg或40mg片剂获得，推荐起始剂量为10mg、20mg或40mg，每天服用一次。ZOCOR^辛伐他汀片剂可以来自Merck & Co.的5mg、10mg、20mg、40mg或80mg剂量得到，推荐起始剂量为每天20mg并且维持剂量范围为每天5mg至80mg。

烟酸(Niacin)是可以与本发明的方法和组合物一起使用的烟酸药剂实例。其可以从Kos Pharmaceuticals，Inc.(1001 Brickell Bay Drive，25^thFloor，Miami，Florida 33131)以NIASPAN^商品名的500mg、750mg和1,000mg延迟释放片剂商业性获得。

奥利司他是脂酶抑制剂，其可以从Roche Pharmaceuticals以XENICAL^商品名的120mg胶囊获得。推荐剂量是一个120mg的片剂，每天在含脂肪主餐后服用三次。

H.血管紧张肽转换酶(ACE)抑制剂

ACE抑制剂扩张血管以改善心脏泵送的血液量并降低血压。ACE抑制剂还提高血流，这有助于降低心脏必须完成的工作量。

可用于本文所公开方法和组合物的ACE抑制剂包括喹那普利、雷米普利、维拉帕米、卡托普利、地尔硫、可乐定、盐酸噻嗪、贝那普利、哌唑嗪、福辛普利、赖诺普利、阿替洛尔、依那普利、培哚普利、叔丁胺培哚普利、群多普利和莫昔普利或一种或多种这些化合物的可药用盐。这些药剂的用途进一步详细描述于美国专利公开号2003/0055058-A1(申请号10/163,704)中，其相关部分在本文中引用作为参考。

实例包括由Parke-Davis以ACCUPRIL^商品名投放市场的盐酸喹那普利，其可以在人中以大约10至大约20mg的起始剂量每天施用并且随时间提高至每天大约20至80mg的范围。含有1-[(2S)-3-巯基-2-甲基丙酰]-L-脯氨酸作为活性成分的卡托普利片剂可以以25至50mg的剂量每天两次或每天三次施用。从AstraZeneca Pharmaceuticals LP作为ZESTRIL^片剂得到的赖诺普利可以开始以每天大约10mg的剂量施用并且提高至大约20至40mg的日剂量。雷米普利在ALTACE^胶囊中可得到并且可以以每天大约2.5至大约20mg的常用维持剂量以单一剂量或分开的剂量施用。烟酸维拉帕米片剂以来自G.D.Searle & Co.的CALAN^商品的40mg、80mg和120mg浓度得到，并且开始以大约40mg的剂量施用，每天施用三次，可以增加至大约480mg的总的每日剂量。盐酸地尔硫胶囊可从AventisPharmaceuticals以CARDIZEM^商品名得到。

I.醛糖还原酶抑制剂

醛糖还原酶抑制剂预防患有糖尿病患者中的眼和神经损伤。醛糖还原酶是通常存在于眼中并引起葡萄糖代谢为可能损伤眼睛的山梨醇的酶。醛糖还原酶抑制剂减缓该过程。

用于本发明方法和组合物的醛糖还原酶抑制剂包括本领域内已知的那些抑制剂。这些抑制剂包括如下非限制性实例：

a)美国专利号4,927,831(Malamas)(其内容在本文中引用作为参考)中所公开的螺-异喹啉-吡咯烷四酮化合物，包括ARI-509，也称作米那司他或螺[异喹啉-4(1H)，3′-吡咯烷]-1，2′，3，5′(2H)-四酮，2-[(4-溴-2-氟苯基)甲基]-6-氟-(9Cl)；

b)美国专利号4,439,617(其内容在本文中引用作为参考)的化合物，包括托瑞司他，也称作甘氨酸，N-[[6-甲氧基-5-(三氟甲基)-1-萘基]硫代甲基]-N-甲基-(9Cl)或AY-27773，

c)索比尼尔(登记号68367-52-2)，也称作螺[4H-1-苯并吡喃-4，4′-咪唑烷]-2′，5′-二酮，6-氟-2，3-二氢-，(4S)-(9Cl)或CP 45634；

d)甲索比尼尔；

e)唑泊司他，其为1-(2，3-二氮杂萘)乙酸，3，4-二氢-4-氧代-3-[[5-(三氟甲基)-2-苯并噻唑基]甲基]-(9Cl)(登记号110703-94-1)；

f)依帕司他，其为3-噻唑烷乙酸，5-[(2E)-2-甲基-3-苯基-2-亚丙烯基]-4-氧代-2-硫代-(5Z)-(9Cl)(登记号82159-09-9)；

g)折那司他(登记号112733-40-6)或3-[(4-溴-2-氟苯基)甲基]-7-氯-3，4-二氢-2，4-二氧代-1(2H)-喹唑啉乙酸；

h)咪瑞司他，也称作2，7-二氟螺(9H-芴-9，4′-咪唑烷)-2′，5′-二酮；

i)泊那司他(登记号72702-95-5)，其为1-(2，3-二氮杂萘)乙酸，3-[(4-溴-2-氟苯基)甲基]-3，4-二氢-4-氧代-(9Cl)并且也称作波来瑞斯或奈喹酯；

j)ONO-2235，其为3-噻唑烷乙酸，5-[(2E)-2-甲基-3-苯基-2-亚丙烯基]-4-氧代-2-硫代-，(5Z)-(9Cl)；

k)GP-1447，其为{3-[(4，5，7-三氟苯并噻唑-2-基)甲基]-5-甲基苯基乙酸}；

l)CT-112，其为5-(3-乙氧基-4-戊氧苯基)-2，4-噻唑烷二酮；

m)BAL-ARI 8，其为甘氨酸，N-[(7-氟-9-氧代-9H-呫吨-2-基)磺酰基]-N-甲基-(9Cl)，(登记号124066-40-6)；

n)AD-5467，其为2，3-二氢-2，8-双(1-甲基乙基)-3-硫代-4H-1，4-苯并嗪-4-乙酸或的氯盐形式(4H-1，4-苯并嗪-4-乙酸，2，3-二氢-2，8-双(1-甲基乙基)-3-硫代-(9Cl)；

o)ZD5522，其为(3′，5′-二甲基-4′-硝基甲磺酰-2-(2-甲苯基)N-乙酰苯胺)；

p)3，4-二氢-2，8-二异丙基-3-硫代-2H-1，4-苯并嗪-4-乙酸；

q)1-[(3-溴-2-苯并呋喃基)磺酰基]-2，4-咪唑烷二酮(M-16209)：NZ-314，其为1-咪唑烷乙酸，3-[(3-硝基苯基)甲基]-2，4，5-三氧代-(9Cl)(登记号128043-99-2)；

r)1-(2，3-二氮杂萘)乙酸，3，4-二氢-4-氧代-3-[[5-三氟甲基)-2-苯并噻唑基]甲基]-；

s)M-79175，其为螺[H-1-苯并吡喃-4，4′-咪唑烷]2，5′-二酮，6-氟-2，3-二氢-2-甲基-，(2R，4S)-(9Cl)(登记号102916-95-0)；

t)SPR-210，其为2H-1，4-苯并噻嗪-2-乙酸，3，4-二氢-3-氧代-4-[(4，5，7-三氟-2-苯并噻唑基)甲基]-(9Cl)；

u)螺[吡咯烷-3，6′(5′H)-吡咯并[1，2，3-de][1，4]苯并嗪]-2，5，5′-三酮，8′-氯-2′，3′-二氢-(9Cl)(也称作ADN 138或8-氯-2′，3′-二氢螺[吡咯烷-3，6′(5，H)-吡咯并[1，2，3-de]-[1，4]苯并嗪]2，5，5′-三酮)；

v)6-氟-2，3-二氢-2′，5′-二氧代-(2S-顺)-螺[4H-I-苯并吡喃-4，4′-咪唑烷]-2-甲酰胺(也称作SNK-860)；

类似物以及一种或多种这些化合物的可药用盐。这些药剂的用途进一步详细描述于美国专利公开号2002/0198201-A1(申请号10/164,214)中，其相关部分在本文中引用作为参考。

在本发明的醛糖还原酶抑制剂中有米那司他、托瑞司他、索比尼尔、甲索比尼尔、唑泊司他、依帕司他、折那司他、咪瑞司他和泊那司他或者它们的可药用盐。

与本发明一起使用的醛糖还原酶抑制剂可以通过本领域内已知的剂量和方案施用。例如，米那司他(ARI-509)可以以每天大约0.1mg/kg体重至大约1.0mg/kg体重的口服剂量施用。在人患者中已经以200mg的单次日口服剂量(Troy等，CHn.Pharmacol.Ther.51：271-277(1992)或每天两次200mg(van Griensven等，Clin.Pharmacol.Ther.58：631-640(1995))施用托瑞司他。在人中已经以50mg和200mg的日剂量施用索比尼尔(Christensen等，Acta Neurologica Scandinavica 71：164-167(1985))。在人中已经以每天50mg至1200mg的剂量施用唑泊司他(Inskeep等，J.CHn.Pharmacol.34：760-766(1994))。已经向人患者以150mg、300mg和600mg的剂量施用折那司他，每天两次施用(Greene等，Neurology 53：580-591(1999))。已经向人以每天2mg至50mg的剂量施用咪瑞司他(Brazzell等，Pharm.Res.8：112-118(1991))。已经向人以600mg的日剂量施用泊那司他(Airey等，Diabetic Medicine 6：804-808(1989))。

IV.联合治疗

A.治疗肥胖症、心血管病或胰岛素代谢障碍

在本文中所述的联合治疗中，将至少一种GDF-8抑制剂与至少一种如上提供的其它治疗剂一起施用。该联合治疗还可以包括一种以上以上的GDF-8抑制剂和/或一种以上治疗剂的组合。

联合治疗可以同时和依次施用。同时施用需要在相同时间施用每一种GDF-8抑制剂和至少一种治疗剂的至少一次剂量。依次施用可以包括GDF-8抑制剂的大丸剂剂量，随后随时间施用至少一种治疗剂的多次剂量；它还可以包括两种化合物的多次剂量。改变剂量形式可能改变实现所需要治疗目标的结果。

B.联合治疗的评估

可以将自细胞培养测定法和动物研究中得到的数据用于制定用于人的剂量范围。此类化合物的剂量可以在包括ED₅₀(具有轻微毒性或无毒性)在内的循环浓度范围内。剂量可以在该范围内根据应用的剂型和所采用的施用途径变化。对于本发明中所用的任意化合物，治疗有效量可以从细胞培养测定法初步评估。可以在动物模型中制定剂量以实现包括如细胞培养中所测定的IC₅₀(即获得症状的最大半数抑制的试验化合物浓度)在内的循环血浆浓度。血浆中的水平可以例如通过高效液相层析法测量。任意特定剂量的效果可以通过合适的生物测定法监测。合适生物测定法的实例包括DNA复制测定法、基于转录的测定法、GDF-8蛋白质/受体结合测定法、肌酸激酶测定法、基于前脂肪细胞分化的测定法、基于脂肪细胞中葡萄糖摄取的测定法和免疫学测定法。

在向患者施用前，可以在治疗性动物模型中评价指定的联合治疗，如在Park，Circulation 104：815-819(2001)中所述的肥胖Zucker糖尿病大鼠中评价。肥胖Zucker糖尿病大鼠特征在于体重过量、胰岛素抵抗、高胰岛素血症和轻度高血糖症，并且是确认的2型糖尿病模型。使用8至9周龄的肥胖Zucker大鼠作为糖尿病模型，并且使用13至14周龄的瘦Zucker大鼠作为对照。可以将联合治疗按照寻求评估的治疗计划施与大鼠。随后研究人员追踪血液化学和形态学随时间的变化以评估效果。(Park，在818页)。

在任意给定患者中，或作为临床研究的部分，联合治疗的效果可以使用包括血浆LDL胆固醇水平、总胆固醇水平、三酰甘油水平、胰岛素摄入、血压和血液葡萄糖水平在内的参数进行测量。作为对任意患者进行评估和跟踪的临床方案的部分，此类测试可容易地实施。联合治疗中每一治疗剂的剂量可以根据该评估进行调整。

实施例

实施例1：治疗糖尿病的联合治疗

将患有糖尿病的患者以抗GDF-8抗体如Myo-29(每周以1mg/kg大丸剂施用持续4周)和二甲双胍(施用500mg，每天2次)组合治疗。

实施例2：治疗肥胖症联合治疗

将患有肥胖症的患者以抗GDF-8抗体如JA-16(每周以1mg/kg大丸剂施用持续4周)和阿托伐他汀钙(每天施用10mg)组合治疗。

实施例3：治疗糖尿病的联合治疗

将患有糖尿病的患者以修饰的可溶性受体融合蛋白如ActRIIB-Fc融合蛋白(每周以100μg/kg施用持续4周)和吡格列酮(施用50mg，每天2次)组合治疗。

实施例4：治疗心血管病的联合治疗

将患有糖尿病继发心血管疾病的患者以LOPID(600mg，每天2次)和GDF-8前肽Fc融合蛋白抑制剂(每周5mg/kg大丸剂施用持续4周)组合治疗。

实施例5：治疗2型糖尿病的联合治疗

将患有2型糖尿病的患者以突变的GDF-8前肽，如具有至少一个氨基酸突变的前肽(每周10mg/kg大丸剂施用持续4周)、AMARYL(每天1mg)和胰岛素(根据需要使用)组合治疗，其中相对于相应未修饰GDF-8前肽而言，在对应于SEQ ID NO：65中Asp-19的天冬氨酸残基上对该突变前肽的蛋白酶水解切割降低。

根据本说明书中所引用参考文献的教授，对本说明书进行最彻底的理解。本说明书中的实施方案提供了对本发明实施方案的说明并且不应当被解释为限制本发明的范围。技术人员将容易地认识到在本发明所包含的众多其它实施方案。将本公开中所引用的全部公开和专利完整地引用作为参考。当参考文献所包括的材料有悖于本说明书或与本说明书不一致时，本说明书将优先于任何此类材料。引用本文中的任意参考文献并不承认此类参考文献是本发明的现有技术。

除非另外指出，在所有情况下，将本说明书(包括权利要求书)中所用的表示成分数量、反应条件等的全部数字理解为由术语“大约”修饰。因此，除非另外相反地指出，数字性参数为近似值并且根据本发明所欲得到的目的特性而变化。在最低限度，并且不是试图对所要求保护的范围进行等效原则应用的限制，每一数字参数应当按照有效数字和常规舍入方法进行解释。

除非另外指出，在一系列成分前的术语“至少”应当理解为指该系列中的每一成分。本领域内技术人员将识别到，或使用不超过常规的实验法能够确定与本文所述的本发明特定实施方案的众多等效物。此类等效物将旨在包含于如下权利要求书中。

序列表

<110>惠氏公司(WYETH)

<120>使用GDF-8抑制剂对糖尿病、肥胖症和心血管病的联合治疗

<130>08702.0106-00304

<140>

<141>

<150>60/600,784

<151>2004-08-12

<160>77

<170>PatentIn 3.2版

<210>1

<211>109

<212>PRT

<213>人(Homo sapiens)

<400>1

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys

1 5 10 15

Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile

20 25 30

Ile Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu

35 40 45

Phe Val Phe Leu Gln Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala

50 55 60

Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser

65 70 75 80

Pro Ile Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly

85 90 95

Lys Ile Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Set

100 105

<210>2

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的肽

<220>

<221>MOD_RES

<222>(2)..(3)

<223>可变氨基酸

<220>

<221>MOD_RES

<222>(5)

<223>可变氨基酸

<400>2

Lys Xaa Xaa Pro Xaa Asn

1 5

<210>3

<211>17

<212>PRT

<213>人

<400>3

Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr Phe

1 5 10 15

Asn

<210>4

<211>747

<212>DNA

<213>人

<400>4

caggtgcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagacgag 300

aactgggggt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcgag tggaggcggc 360

ggttcaggcg gaggtggctc tggcggtggc ggaagtgcac tttcctatga gctgactcag 420

ccaccctcag tgtccgtgtc tccaggacag acagccacca ttacctgctc tggacatgca 480

ctgggggaca aatttgtttc ctggtatcag cagggatcag gccagtcccc tgtattggtc 540

atctatgacg atacccagcg gccctcaggg atccctgggc gattctctgg ctccaactct 600

gggaacacag ccactctgac catcagcggg acccaggcta tggatgaggc tgactatttt 660

tgtcaggcgt gggacagcag cttcgtattc ggcggaggga ccaaggtcac cgtcctaggt 720

gcggccgcac atcatcatca ccatcac 747

<210>5

<211>774

<212>DNA

<213>人

<400>5

caggtcacct tgaaggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agatatgtca tcaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggaatg ggtctcagct attagtgtta ctggtggtag cacggcctac 180

gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ttgcaaatga atagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtac gaaaggacag 300

tgggaacggg gaagttacta ctttgactac tggggccggg gaaccctggt caccgtctcg 360

agtggaggcg gcggttcagg cggaggtggc tctggcggtg gcggaagtgc acagtctgtg 420

ctgacgcagc cgccctcagt gtctggggcc ccagggcaga gggtcaccat ctcctgcact 480

gggagcagct ccaacatcgg ggacggttat gatgtacact ggtatcagca gcttccagga 540

acagccccca aactcctcat ctatggtaac agtcatcggc cctcaggggt ccctgaccga 600

ttctctggct ccaagtctga cacctctgcc tccctggcca tcactgggct ccaggttgag 660

gatgaggctg attatttctg ccactcctat gacggcagtg tgagtggctg gattttcggc 720

ggagggacca agctgaccgt cctaggtgcg gccgcacatc atcatcacca tcac 774

<210>6

<211>786

<212>DNA

<213>人

<400>6

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtga gagaatgggg 300

ccctgtactg gtggaagctg ctacgacacc cttggcaact ggggccgggg caccctggtc 360

accgtctcga gtggaggcgg cggttcaggc ggaggtggct ctggcggtgg cggaagtgca 420

cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 480

tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcaa 540

cttccaggcg cggcccccaa actcctcatc aggggtaatg gcaatcggcc ctcaggggtc 600

cctgaccgat tctctgtctc caagtctggc tactcagcct ccctggccat cactgggctg 660

cagcctgccg atgagggtgt ttattactgc cagtcctatg acagcagtct gagtggttcg 720

aaggtgttcg gccaagggac caagctgacc gtcctaggtg cggccgcaca tcatcatcac 780

catcac 786

<210>7

<211>249

<212>PRT

<213>人

<400>7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Asn Trp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val

130 135 140

Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Thr Cys Ser Gly His Ala

145 150 155 160

Leu Gly Asp Lys Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln Gly Ser Gly Gln Ser

165 170 175

Pro Val Leu Val Ile Tyr Asp Asp Thr Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro

180 185 190

Gly Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile

195 200 205

Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Ala Trp

210 215 220

Asp Ser Ser Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

225 230 235 240

Ala Ala Ala His His His His His His

245

<210>8

<211>258

<212>PRT

<213>人

<400>8

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Val Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Val Thr Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Lys Gly Gln Trp Glu Arg Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro

130 135 140

Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr

145 150 155 160

Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Gly Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln

165 170 175

Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Asn Ser His

180 185 190

Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Asp Thr

195 200 205

Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Val Glu Asp Glu Ala Asp

210 215 220

Tyr Phe Cys His Ser Tyr Asp Gly Ser Val Ser Gly Trp Ile Phe Gly

225 230 235 240

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ala Ala Ala His His His His

245 250 255

His His

<210>9

<211>262

<212>PRT

<213>人

<400>9

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

l 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Glu Arg Met Gly Pro Cys Thr Gly Gly Ser Cys Tyr Asp Thr Leu Gly

100 105 110

Asn Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ser Val Leu

130 135 140

Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile

145 150 155 160

Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

165 170 175

Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu Ile Arg Gly

180 185 190

Asn Gly Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Val Ser Lys

195 200 205

Ser Gly Tyr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Pro Ala Asp

210 215 220

Glu Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser

225 230 235 240

Lys Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ala Ala Ala

245 250 255

His His His His His His

260

<210>10

<211>351

<212>DNA

<213>人

<400>10

caggtgcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagacgag 300

aactgggggt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcgag t 351

<210>11

<211>363

<212>DNA

<213>人

<400>11

caggtcacct tgaaggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agatatgtca tcaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggaatg ggtctcagct attagtgtta ctggtggtag cacggcctac 180

gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ttgcaaatga atagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtac gaaaggacag 300

tgggaacggg gaagttacta ctttgactac tggggccggg gaaccctggt caccgtctcg 360

agt 363

<210>12

<211>372

<212>DNA

<213>人

<400>12

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtga gagaatgggg 300

ccctgtactg gtggaagctg ctacgacacc cttggcaact ggggccgggg caccctggtc 360

accgtctcga gt 372

<210>13

<211>117

<212>PRT

<213>人

<400>13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Asn Trp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210>14

<211>121

<212>PRT

<213>人

<400>14

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Val Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Val Thr Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Lys Gly Gln Trp Glu Arg Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>15

<211>124

<212>PRT

<213>人

<400>15

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Glu Arg Met Gly Pro Cys Thr Gly Gly Ser Cys Tyr Asp Thr Leu Gly

100 105 110

Asn Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>16

<211>315

<212>DNA

<213>人

<400>16

tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtctc caggacagac agccaccatt 60

acctgctctg gacatgcact gggggacaaa tttgtttcct ggtatcagca gggatcaggc 120

cagtcccctg tattggtcat ctatgacgat acccagcggc cctcagggat ccctgggcga 180

ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg 240

gatgaggctg actatttttg tcaggcgtgg gacagcagct tcgtattcgg cggagggacc 300

aaggtcaccg tccta 315

<210>17

<211>336

<212>DNA

<213>人

<400>17

cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60

tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gacggttatg atgtacactg gtatcagcag 120

cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gtcatcggcc ctcaggggtc 180

cctgaccgat tctctggctc caagtctgac acctctgcc tccctggccat cactgggctc 240

caggttgagg atgaggctga ttatttctgc cactcctatg acggcagtgt gagtggctgg 300

attttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc ctaggt 336

<210>18

<211>336

<212>DNA

<213>人

<400>18

cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60

tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcaa 120

cttccaggcg cggcccccaa actcctcatc aggggtaatg gcaatcggcc ctcaggggtc 180

cctgaccgat tctctgtctc caagtctggc tactcagcct ccctggccat cactgggctg 240

cagcctgccg atgagggtgt ttattactgc cagtcctatg acagcagtct gagtggttcg 300

aaggtgttcg gccaagggac caagctgacc gtccta 336

<210>19

<211>105

<212>PRT

<213>人

<400>19

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Thr Ile Thr Cys Ser Gly His Ala Leu Gly Asp Lys Phe Val

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Gly Ser Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Asp Asp Thr Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Phe Val Phe

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Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105

<210>20

<211>111

<212>PRT

<213>人

<400>20

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Asp Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Val Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Ser Tyr Asp Gly Ser

85 90 95

Val Ser Gly Trp Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210>21

<211>112

<212>PRT

<213>人

<400>21

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Arg Gly Asn Gly Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Val Ser Lys Ser Gly Tyr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Pro Ala Asp Glu Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Ser Lys Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210>22

<211>747

<212>DNA

<213>人

<400>22

caggtgcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagacgag 300

aactgggggt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcgag tggaggcggc 360

ggttcaggcg gaggtggctc tggcggtggc ggaagtgcac tttcctatga gctgactcag 420

ccaccctcag tgtccgtgtc tccaggacag acagccagca ttacctgctc tggacatgca 480

ctgggggaca aatttgtttc ctggtatcag cagaagccag gccagtcccc tgtattggtc 540

atctatgacg atacccagcg gccctcaggg atccctgagc gattctctgg ctccaactct 600

gggaacacag ccactctgac catcagcggg acccaggcta tggatgaggc tgactattac 660

tgtcaggcgt gggacagcag cttcgtattc ggcggaggga ccaaggtcac cgtcctaggt 720

gcggccgcac atcaccatca ccatcac 747

<210>23

<211>774

<212>DNA

<213>人

<400>23

gaggtccagt tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agatatgtca tcaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggaatg ggtctcagct attagtgtta ctggtggtag cacggcctac 180

gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ttgcaaatga atagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggacag 300

tgggaacggg gaagttacta ctttgactac tggggccggg gaaccctggt caccgtctcg 360

agtggaggcg gcggttcagg cggaggtggc tctggcggtg gcggaagtgc acagtctgtg 420

ctgacgcagc cgccctcagt gtctggggcc ccagggcaga gggtcaccat ctcctgcact 480

gggagcagct ccaacatcgg ggacggttat gatgtacact ggtatcagca gcttccagga 540

acagccccca aactcctcat ctatggtaac agtcatcggc cctcaggggt ccctgaccga 600

ttctctggct ccaagtctgg tacctctgcc tccctggcca tcactgggct ccaggctgag 660

gatgaggctg attattactg ccactcctat gacggcagtg tgagtggctg gattttcggc 720

ggagggacca agctgaccgt cctaggtgcg gccgcacatc atcatcacca tcac 774

<210>24

<211>249

<212>PRT

<213>人

<400>24

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Asn Trp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val

130 135 140

Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly His Ala

145 150 155 160

Leu Gly Asp Lys Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser

165 170 175

Pro Val Leu Val Ile Tyr Asp Asp Thr Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro

180 185 190

Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile

195 200 205

Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp

210 215 220

Asp Ser Ser Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

225 230 235 240

Ala Ala Ala His His His His His His

245

<210>25

<211>258

<212>PRT

<213>人

<400>25

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Val Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Val Thr Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Gln Trp Glu Arg Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro

130 135 140

Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr

145 150 155 160

Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Gly Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln

165 170 175

Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Asn Ser His

180 185 190

Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr

195 200 205

Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp

210 215 220

Tyr Tyr Cys His Ser Tyr Asp Gly Ser Val Ser Gly Trp Ile Phe Gly

225 230 235 240

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ala Ala Ala His His His His

245 250 255

His His

<210>26

<211>351

<212>DNA

<213>人

<400>26

caggtgcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagacgag 300

aactgggggt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcgag t 351

<210>27

<211>363

<212>DNA

<213>人

<400>27

gaggtccagt tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agatatgtca tcaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggaatg ggtctcagct attagtgtta ctggtggtag cacggcctac 180

gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ttgcaaatga atagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaggacag 300

tgggaacggg gaagttacta ctttgactac tggggccggg gaaccctggt caccgtctcg 360

agt 363

<210>28

<211>117

<212>PRT

<213>人

<400>28

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Asn Trp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210>29

<211>121

<212>PRT

<213>人

<400>29

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Val Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Val Thr Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp ASn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Gln Trp Glu Arg Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>30

<211>315

<212>DNA

<213>人

<400>30

tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtctc caggacagac agccagcatt 60

acctgctctg gacatgcact gggggacaaa tttgtttcct ggtatcagca gaagccaggc 120

cagtcccctg tattggtcat ctatgacgat acccagcggc cctcagggat ccctgagcga 180

ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg 240

gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagcagct tcgtattcgg cggagggacc 300

aaggtcaccg tccta 315

<210>31

<211>333

<212>DNA

<213>人

<400>31

cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60

tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gacggttatg atgtacactg gtatcagcag 120

cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gtcatcggcc ctcaggggtc 180

cctgaccgat tctctggctc caagtctggt acctctgcct ccctggccat cactgggctc 240

caggctgagg atgaggctga ttattactgc cactcctatg acggcagtgt gagtggctgg 300

attttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc cta 333

<210>32

<211>105

<212>PRT

<213>人

<400>32

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly His Ala Leu Gly Asp Lys Phe Val

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Asp Asp Thr Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Phe Val Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105

<210>33

<211>111

<212>PRT

<213>人

<400>33

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Ser Tyr Asp Gly Ser

85 90 95

Val Ser Gly Trp Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210>34

<211>5

<212>PRT

<213>人

<400>34

Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210>35

<211>5

<212>PRT

<213>人

<400>35

Arg Tyr Val Ile Asn

1 5

<210>36

<211>5

<212>PRT

<213>人

<400>36

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210>37

<211>17

<212>PRT

<213>人

<400>37

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210>38

<211>17

<212>PRT

<213>人

<400>38

Ala Ile Ser Val Thr Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val Arg

1 5 10 15

Gly

<210>39

<211>17

<212>PRT

<213>人

<400>39

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210>40

<211>8

<212>PRT

<213>人

<400>40

Asp Glu Asn Trp Gly Phe Asp Pro

1 5

<210>41

<211>12

<212>PRT

<213>人

<400>41

Gly Gln Trp Glu Arg Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210>42

<211>15

<212>PRT

<213>人

<400>42

Met Gly Pro Cys Thr Gly Gly Ser Cys Tyr Asp Thr Leu Gly Asn

1 5 10 15

<210>43

<211>11

<212>PRT

<213>人

<400>43

Ser Gly His Ala Leu Gly Asp Lys Phe Val Ser

1 5 10

<210>44

<211>14

<212>PRT

<213>人

<400>44

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210>45

<211>14

<212>PRT

<213>人

<400>45

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210>46

<211>7

<212>PRT

<213>人

<400>46

Asp Asp Thr Gln Arg Pro Ser

1 5

<210>47

<211>7

<212>PRT

<213>人

<400>47

Gly Asn Ser His Arg Pro Ser

1 5

<210>48

<211>7

<212>PRT

<213>人

<400>48

Gly Asn Gly Asn Arg Pro Ser

1 5

<210>49

<211>7

<212>PRT

<213>人

<400>49

Gln Ala Trp Asp Ser Ser Phe

1 5

<210>50

<211>6

<212>PRT

<213>人

<400>50

His Ser Tyr Asp Gly Ser

1 5

<210>51

<211>12

<212>PRT

<213>人

<400>51

Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Lys Val

1 5 10

<210>52

<211>320

<212>DNA

<213>人

<400>52

gtcagcccaa ggctgccccc tcggtcactc tgttcccgcc ctcctctgag gagcttcaag 60

ccaacaaggc cacactggtg tgtctcataa gtgacttcta cccgggagcc gtgacagtgg 120

cctggaaggc agatagcagc cccgtcaagg cgggagtgga gaccaccaca ccctccaaac 180

aaagcaacaa caagtacgcg gccagcagct atctgagcct gacgcctgag cagtggaagt 240

cccacagaag ctacagctgc caggtcacgc atgaagggag caccgtggag aagacagtgg 300

cccctacaga atgttcatag 320

<210>53

<211>106

<212>PRT

<213>人

<400>53

Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser

1 5 10 15

Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp

20 25 30

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro

35 40 45

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn

50 55 60

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys

65 70 75 80

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val

85 90 95

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

100 105

<210>54

<211>992

<212>DNA

<213>人

<400>54

cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg 60

gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt 120

ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag 180

gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct 240

acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaaa gttgagccca 300

aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac 360

cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg 420

aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt 480

acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca 540

gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg 600

agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca 660

aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga 720

tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg 780

ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc 840

tggactccga cggctccttc ttcctctata gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc 900

agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc 960

agaagagcct ctccctgtcc ccgggtaaat ga 992

<210>55

<211>330

<212>PRT

<213>人

<400>55

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210>56

<211>5

<212>PRT

<213>人

<220>

<221>MOD_RES

<222>(4)

<223>可变氨基酸

<400>56

Asp Glu His Xaa Thr

1 5

<210>57

<211>5

<212>PRT

<213>人

<400>57

Asp Glu His Ser Thr

1 5

<210>58

<211>15

<212>PRT

<213>人

<220>

<221>MOD_RES

<222>(10)

<223>可变氨基酸

<400>58

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Xaa Thr Glu Ser Arg Cys

1 5 10 15

<210>59

<211>15

<212>PRT

<213>人

<400>59

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys

1 5 10 15

<210>60

<211>378

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的嵌合融合蛋白

<400>60

Met Lys Phe Leu Val Asn Val Ala Leu Val Phe Met Val Val Tyr Ile

1 5 10 15

Ser Tyr Ile Tyr Ala Thr Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu

20 25 30

Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser

35 40 45

Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr

50 55 60

Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly

65 70 75 80

Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala

85 90 95

Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe

100 105 110

Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val

115 120 125

Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Arg Gly Asp Asp

130 135 140

Asp Asp Lys Thr Arg Ser Arg Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

145 150 155 160

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

165 170 175

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

180 185 190

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

195 200 205

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

210 215 220

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

225 230 235 240

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

245 250 255

Lys Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

260 265 270

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

275 280 285

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

290 295 300

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

305 310 315 320

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

325 330 335

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

340 345 350

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

355 360 365

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Pro Lys

370 375

<210>61

<211>1134

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的嵌合融合核苷酸序列

<400>61

atgaaattct tagtcaacgt tgcccttgtt tttatggtcg tgtacatttc ttacatctat 60

gcgactagtg ggcgtgggga ggctgagaca cgggagtgca tctactacaa cgccaactgg 120

gagctggagc gcaccaacca gagcggcctg gagcgctgcg aaggcgagca ggacaagcgg 180

ctgcactgct acgcctcctg gcgcaacagc tctggcacca tcgagctcgt gaagaagggc 240

tgctggctag atgacttcaa ctgctacgat aggcaggagt gtgtggccac tgaggagaac 300

ccccaggtgt acttctgctg ctgtgaaggc aacttctgca acgagcgctt cactcatttg 360

ccagaggctg ggggcccgga agtcacgtac gagccacccc cgacagcccc caccggcggc 420

cgcggagacg acgacgacaa gacgcgttct agagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 480

ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 540

accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 600

gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 660

aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 720

caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 780

gtccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 840

accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 900

aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 960

aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag 1020

ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1080

gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtccccgcc taaa 1134

<210>62

<211>512

<212>PRT

<213>人

<400>62

Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys

1 5 10 15

Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr

20 25 30

Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg

35 40 45

Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn

85 90 95

Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg

100 105 110

Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro

115 120 125

Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu

130 135 140

Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr

145 150 155 160

Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro

165 170 175

Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu

180 185 190

Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln

195 200 205

Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys

210 215 220

Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys

225 230 235 240

His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn

245 250 255

Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser

260 265 270

Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys

275 280 285

His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp

290 295 300

Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg

305 310 315 320

Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val

325 330 335

Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro

340 345 350

Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu

355 360 365

Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile

370 375 380

Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys

385 390 395 400

Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu

405 410 415

Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val

420 425 430

His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro

435 440 445

Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp

450 455 460

Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu

465 470 475 480

Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu

485 490 495

Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile

500 505 510

<210>63

<211>4

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的gly-ser接头

<400>63

Gly Ser Gly Ser

1

<210>64

<211>4

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的肠激酶切割位点连接序列

<400>64

Asp Asp Asp Lys

1

<210>65

<211>243

<212>PRT

<213>人

<400>65

Asn Glu Asn Ser Glu Gln Lys Glu Asn Val Glu Lys Glu Gly Leu Cys

1 5 10 15

Asn Ala Cys Thr Trp Arg Gln Asn Thr Lys Ser Ser Arg Ile Glu Ala

20 25 30

Ile Lys Ile Gln Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn

35 40 45

Ile Ser Lys Asp Val Ile Arg Gln Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu

50 55 60

Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp

65 70 75 80

Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile

85 90 95

Thr Met Pro Thr Glu Ser Asp Phe Leu Met Gln Val Asp Gly Lys Pro

100 105 110

Lys Cys Cys Phe Phe Lys Phe Ser Ser Lys Ile Gln Tyr Asn Lys Val

115 120 125

Val Lys Ala Gln Leu Trp Ile Tyr Leu Arg Pro Val Glu Thr Pro Thr

130 135 140

Thr Val Phe Val Gln Ile Leu Arg Leu Ile Lys Pro Met Lys Asp Gly

145 150 155 160

Thr Arg Tyr Thr Gly Ile Arg Ser Leu Lys Leu Asp Met Asn Pro Gly

165 170 175

Thr Gly Ile Trp Gln SerIle Asp Val Lys Thr Val Leu Gln Asn Trp

180 185 190

Leu Lys Gln Pro Glu Ser Asn Leu Gly Ile Glu Ile Lys Ala Leu Asp

195 200 205

Glu Asn Gly His Asp Leu Ala Val Thr Phe Pro Gly Pro Gly Glu Asp

210 215 220

Gly Leu Asn Pro Phe Leu Glu Val Lys Val Thr Asp Thr Pro Lys Arg

225 230 235 240

Ser Arg Arg

<210>66

<211>232

<212>PRT

<213>人

<400>66

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210>67

<211>227

<212>PRT

<213>人

<400>67

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Leu Gly

1 5 10 15

Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

20 25 30

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

35 40 45

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

85 90 95

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly Lys

225

<210>68

<211>50

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的人氯化筒箭毒碱的突变体肽部分

<400>68

Lys Asp Val Ile Arg Gln Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu

1 5 10 15

Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val Gln Arg Ala Asp Ser Ser Asp Gly Ser

20 25 30

Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile Thr Met

35 40 45

Pro Thr

50

<210>69

<211>40

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的人氯化筒箭毒碱的突变体肽部分

<400>69

Gln Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr

1 5 10 15

Asp Val Gln Arg Ala Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp

20 25 30

Tyr His Ala Thr Thr Glu Thr Ile

35 40

<210>70

<211>30

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的人氯化筒箭毒碱的突变体肽部分

<400>70

Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val Gln Arg Ala

1 5 10 15

Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His Ala

20 25 30

<210>71

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的人氯化筒箭毒碱的突变体肽部分

<400>71

Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val Gln Arg Ala Asp Ser Ser Asp Gly

1 5 10 15

Ser Leu Glu Asp

20

<210>72

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>人工序列描述：合成的人氯化筒箭毒碱的突变体肽部分

<400>72

Tyr Asp Val Gln Arg Ala Asp Ser Ser Asp

1 5 10

<210>73

<211>50

<212>PRT

<213>人

<400>73

Lys Asp Val Ile Arg Gln Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu

1 5 10 15

Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser

20 25 30

Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile Thr Met

35 40 45

Pro Thr

50

<210>74

<211>40

<212>PRT

<213>人

<400>74

Gln Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr

1 5 10 15

Asp Val Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp

20 25 30

Tyr His Ala Thr Thr Glu Thr Ile

35 40

<210>75

<211>30

<212>PRT

<213>人

<400>75

Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val Gln Arg Asp

1 5 10 15

Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His Ala

20 25 30

<210>76

<211>20

<212>PRT

<213>人

<400>76

Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly

1 5 10 15

Ser Leu Glu Asp

20

<210>77

<211>10

<212>PRT

<213>人

<400>77

Tyr Asp Val Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp

1 5 10

Claims

1.治疗受试者中目标综合征的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种GDF-8抑制剂和治疗有效量的至少一种治疗目标综合征的其它治疗剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中目标综合征选自肥胖症、心血管病和胰岛素代谢障碍中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其中GDF-8抑制剂选自抗GDF-8抗体、抗GDF-8受体抗体、修饰的可溶性受体、与GDF-8结合的蛋白质、与GDF-8受体结合的蛋白质、GDF-8小潜伏复合体蛋白酶活化的抑制剂及其抑制GDF-8的模拟物中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的方法，其中GDF-8抑制剂特异性地结合成熟GDF-8蛋白质。

5.根据权利要求1所述的方法，其中治疗剂选自血管紧张肽转换酶(ACE)抑制剂、磺酰脲药剂、抗血脂剂、双胍药剂、噻唑烷二酮类药剂、胰岛素、α-葡萄糖苷酶抑制剂、醛糖还原酶抑制剂或PTP酶抑制剂中的至少一种。

6.权利要求5所述的方法，其中血管紧张肽转换酶(ACE)抑制剂选自喹那普利、雷米普利、维拉帕米、卡托普利、地尔硫、可乐定、盐酸噻嗪、贝那普利、哌唑嗪、福辛普利、赖诺普利、阿替洛尔、依那普利、培哚普利、叔丁胺培哚普利、群多普利和莫昔普利以及其合适的可药用盐中的至少一种。

7.权利要求5所述的方法，其中磺酰脲药剂选自格列吡嗪、格列本脲(乙磺己脲)、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲和格列美脲以及其可药用盐中的至少一种。

8.权利要求5所述的方法，其中抗血脂剂选自胆汁酸螯合剂、纤维酸衍生物、HMG-CoA还原酶抑制剂和烟酸化合物以及其可药用盐中的至少一种。

9.权利要求5所述的方法，其中双胍药剂选自二甲双胍及其可药用盐中的至少一种。

10.权利要求5所述的方法，其中噻唑烷二酮类药剂选自吡格列酮和罗格列酮以及其可药用盐中的至少一种。

11.权利要求5所述的方法，其中胰岛素选自速效胰岛素、中效胰岛素、长效胰岛素以及中效和速效胰岛素组合中的至少一种。

12.权利要求5所述的方法，其中α-葡萄糖苷酶抑制剂选自米格列醇和阿卡波糖以及其可药用盐中的至少一种。

13.权利要求5所述的方法，其中醛糖还原酶抑制剂选自如下至少之

a)螺-异喹啉-吡咯烷四酮化合物；

b)2-[(4-溴-2-氟苯基)甲基]-6-氟-(9Cl)；

c)托瑞司他；

d)索比尼尔；

e)甲索比尼尔；

f)唑泊司他；

g)依帕司他；

h)折那司他；

i)咪瑞司他；

j)泊那司他；

k)ONO-2235；

l)GP-1447；

m)CT-112；

n)BAL-ARI8；

o)AD-5467；

p)ZD5522；

q)3，4-二氢-2，8-二异丙基-3-硫代-2H-1，4-苯并嗪-4-乙酸；

r)1-[(3-溴-2-苯并呋喃基)磺酰基]-2，4-咪唑烷二酮(M-16209)：NZ-314，其为1-咪唑烷乙酸，3-[(3-硝基苯基)甲基]-2，4，5-三氧代-(9Cl)；

s)1-(2，3-二氮杂萘)乙酸，3，4-二氢-4-氧代-3-[[5-三氟甲基)-2-苯并噻唑基]甲基]-；

t)M-79175；

u)SPR-210；

v)螺[吡咯烷-3，6′(5′H)-吡咯并[1，2，3-de][1，4]苯并嗪]-2，5，5′-三酮，8′-氯-2′，3′-二氢-(9Cl)；

w)6-氟-2，3-二氢-2′，5′-二氧代-(2S-顺)-螺[4H-I-苯并吡喃-4，4′-咪唑烷]-2-甲酰胺；和

x)其类似物以及可药用盐。

14.权利要求5所述的方法，其中PTP酶抑制剂选自具有式(I)的至少一种化合物：

R₁是C(O)OR₇、5至6元杂环、H、卤素、CN或C(O)NR₇R₈；

R₂是C(O)ZR₄或CN；

Z是-O-或-NR₅-；

X是-O-C_1-3亚烷基-、-NR₈-C_1-3亚烷基-、-S-C_1-3亚烷基-、-SO-C_1-3亚烷基-、-SO₂-C_1-3亚烷基-、-C_1-4亚烷基-、-C_2-4亚链烯基-或-C_2-4亚炔基-，其中可以任何亚烷基、亚链烯基和亚炔基可以任选地用一个或多个卤素、氧代、HN＝、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、R₄或Q取代；

每一Y₁、Y₂、Y₃、Y₄和Y₅独立地是CR₃、N、S或O，Y₁、Y₂、Y₃、Y₄和Y₅中的一个或两个可以不存在；

每一R₃独立地是H、芳基、5至8元杂环基、C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、卤素、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂或Q，其中任何芳基、杂环、烷基、链烯基或炔基可以任选地用一个或多个卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、N₃、R₄或Q取代；

每一Q独立地是-OC(O)NR₄R₅、-OR₄、-OC(O)R₄、-COOR₄、-C(O)NR₄R₅、-C(O)R₄、-C(＝N-OH)R₄、-NR₄R₅、-N⁺R₄R₅R₆、-NR₄C(O)R₅、-NR₄C(O)NR₅R₆、-NR₄C(O)OR₅、-NR₄S(O)₂R₅、-SR₄、-S(O)R₄、-S(O)₂R₄或-S(O)₂NR₄R₅；

每一R₄、R₅和R₆独立地是H、C_1-16烷基、C_2-12链烯基、C_2-12炔基、C_3-8环烷基、环烷基C_1-6烷基、5至8元杂环、杂环C_1-6烷基、芳基、芳基C_1-6烷基、芳基C_2-6链烯基或芳基C_2-6炔基，每一R₄、R₅和R₆可以任选地用一个或多个C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、N₃、-OC(O)NR₇R₈、-OR₇、-OC(O)R₇、-COOR₇、-C(O)NR₇R₈、-C(O)R₇、-NR₇R₈、-N⁺R₇R₈R₉、-NR₇C(O)R₈、-NR₇C(O)NR₈R₉、-NR₇C(O)OR₈、-NR₇S(O)₂R₈、-SR₇、-S(O)R₇、-S(O)₂R₇或-S(O)₂NR₇R₈取代；

每一R₇、R₈和R₉独立地是H、C_1-12烷基、C_2-12链烯基、C_2-12炔基、C_3-12环烷基、芳基或芳基C_1-12烷基，每一R₇、R₈和R₉可以任选地用一个或多个卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂或NO₂取代；

当环系统是1-苯并噻吩时，R₁是C(O)OCH₃，并且X是-OCH₂-，而R₂不是C(O)OCH₃；

当环系统是1-苯并噻吩时，R₁是C(O)OH，并且X是-OCH₂-，而R₂不是C(O)OH；

当环系统是噻吩并[2，3-b]吡啶时，R₁是异丙基酯，并且X是-OCH₂-，而R₂不是C_1-3烷基酯；

当环系统是噻吩并[2，3-b]吡啶时，R₁是C(O)OC_1-4烷基，并且X是-OCH₂-或-OCH(CH₃)-时，而R₂不是CN；

当环系统是噻吩并[2，3-b]吡啶时，R₁是异丙基酯，并且X是-SCH₂CH₂-，而R₂不是CN；和

15.权利要求5所述的方法，其中PTP酶抑制剂选自具有式(II)的至少一种化合物：

R₁是R₅、OR₅、C(O)OR₅、C(O)R₅或C(O)NR₅R₆；

R₂是R₅；

X是-O-C_1-3亚烷基-、-NR₈-C_1-3亚烷基-、-S-C_1-3亚烷基-、-SO-C_1-3亚烷基-、-SO₂-C_1-3亚烷基-、-C_1-4亚烷基-、-C_2-4亚链烯基-或-C_2-4亚炔基-，其中任何亚烷基、亚链烯基或亚炔基可以任选地用一个或多个卤素、氧代、亚氨基、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂或Q取代；

Y不存在或者是-O-或-NR₆-；

R₃是H、卤素、CN、CF₃、OCF₃、C_1-3烷基、C_3-4环烷基、C_1-3烷氧基或芳基；

R₄是A-B-E-D，其中A不存在或者是亚芳基、杂亚芳基、C_1-6亚烷基、C_2-6二链烯基或C_2-6炔基，每一A可以任选地用一个或多个C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、卤素、CN、OCF₃、OH、NH₂、CHO、NO₂或Q取代，任何烷基、链烯基或炔基任选地用一个或多个卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、N₃或Q取代；

每一A可以任选地以一个或多个亚芳基、亚烷基或亚链烯基终止；

B不存在或者是-NR₅、-NR₇-、-N(R₅)CH₂-、-N(R₇)CH₂-、-N(R₉)-、-N(R₉)C(O)-、-N(R₉)C(O)C(R₁₁)(R₁₂)-、-N(R₉)C(O)C(O)-、-N(R₉)C(O)N(R₁₀)-、-N(R₉)SO₂-、-N(R₉)SO₂C(R₁₀)(R₁₁)-、-N(R₉)(R₁₀)C(R₁₁)(R₁₂)-、-N(R₉)C(R₁₁)(R₁₂)C(R₁₃)(R₁₄)-、-O-、-O-C(R₁₁)(R₁₂)-、-O-C(R₁₁)(R₁₂)C(R₁₃)(R₁₄)-、-C(R₁₁)(R₁₂)-O-、-C(R₁₁)(R₁₂)-O-C(R₁₃)(R₁₄)-、-C(R₁₁)(R₁₂)N(R₉)-、-C(R₁₁)(R₁₂)N(R₉)C(R₁₃)(R₁₄)-、-C(R₁₁)(R₁₂)S-、-C(R₁₁)(R₁₂)SC(R₁₃)(R₁₄)-或-C(R₁₁)(R₁₂)SO₂C(R₁₃)(R₁₄)-；

E不存在或者是C_3-12环亚烷基、3至12元杂二环基、亚芳基、C_1-12亚烷基、C_2-12亚链烯基或C_2-12亚炔基、其中每一E任选地用一个或多个C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、卤素、CN、OH、NH₂或NO₂取代；

D是一个或多个H、卤素、OH、NH₂、CHO、CN、NO₂、CF₃或Q；

当A、B和E不存在时，R₁是C(O)OH或C(O)OCH₃，R₂是H，并且R₃是H或氯，D不是H或氯；并且当A、B和E不存在时，R₁是C(O)OH或C(O)OCH₃，R₂是H，并且R₃是H或溴，D不是H或溴；

每一Q独立地是-R₅、-R₇、-OR₅、-OR₇、-NR₅R₆、-NR₅R₇、-N⁺R₅R₆R₈、S(O)_nR₅或-S(O)_nR₇，并且n是0、1或2；

每一R₅、R₆和R₈独立地是H、C_1-12烷基、C_2-12链烯基、C_2-12炔基、C_3-12环烷基、C_1-12烷氧基C_1-12烷基、环烷基C_1-6烷基、3至8元杂环基、杂环基C_1-6烷基、芳基、芳基C_1-6烷基、芳基C_2-6链烯基或芳基C_2-6炔基，每一R₅、R₆和R₈可以任选地用一个或多个R₉、-OR₉、-OC(O)OR₉、-C(O)R₉、-C(O)OR₉、-C(O)NR₉R₁₀、-SR₉、-S(O)R₉、-S(O)₂R₉、-NR₉R₁₀、-N⁺R₉R₁₀R₁₁、-NR₉C(O)R₁₀、-NC(O)NR₉R₁₀、-NR₉S(O)₂R₁₀、氧代、卤素、CN、OCF₃、CF₃、OH或NO₂取代；

R₇是-C(O)R₅、-C(O)OR₅、-C(O)NR₅R₆、-S(O)₂R₅、-S(O)R₅或-S(O)₂NR₅R₆；

每一R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃和R₁₄独立地是H、C_1-12烷基、C_2-12链烯基、C_2-12炔基、C_3-12环烷基、芳基或芳基C_1-12烷基，任何烷基、链烯基、炔基、环烷基、芳基或芳基烷基任选地用一个或多个卤素、氧代、CN、OCF₃、OH、NH₂或NO₂取代。

16.权利要求1所述的方法，其中施用为依次施用。

17.权利要求1所述的方法，其中施用为同时施用。

18.权利要求1所述的方法，其中至少一种治疗剂的施用为口服。

19.权利要求1所述的方法，其中施用为肠胃外施用。

20.权利要求19所述的方法，其中肠胃外施用为静脉内施用。

21.对用于治疗目标综合征的药物组合物，其包含治疗有效量的GDF-8抑制剂和治疗有效量的至少一种治疗目标综合征的其它治疗剂的组合。

22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中GDF-8抑制剂选自抗GDF-8抗体、抗GDF-8受体抗体、修饰的可溶性受体、与GDF-8结合的蛋白质、与GDF-8受体结合的蛋白质、GDF-8小潜伏复合体蛋白酶活化的抑制剂和其抑制GDF-8的模拟物中的至少一种。

23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中与GDF-8结合的蛋白质选自具有SEQ ID NO：65的GDF-8前肽、突变的GDF-8前肽、促滤泡素抑制素、合有促滤泡素抑制素结构域的蛋白质以及其Fc融合蛋白中的至少一种。

24.根据权利要求22所述的药物组合物，其中GDF-8抑制剂特异性地结合成熟GDF-8蛋白质。

25.根据权利要求21所述的药物组合物，其中治疗剂选自血管紧张肽转换酶(ACE)抑制剂、磺酰脲药剂、抗血脂剂、双胍药剂、噻唑烷二酮类药剂、胰岛素、α-葡萄糖苷酶抑制剂、醛糖还原酶抑制剂或PTP酶抑制剂中的至少一种。

26.权利要求25所述的药物组合物，其中血管紧张肽转换酶(ACE)抑制剂选自喹那普利、雷米普利、维拉帕米、卡托普利、地尔硫、可乐定、盐酸噻嗪、贝那普利、哌唑嗪、福辛普利、赖诺普利、阿替洛尔、依那普利、培哚普利、叔丁胺培哚普利、群多普利和莫昔普利或者一种或多种这些化合物的可药用盐中的至少一种。

27.权利要求25所述的药物组合物，其中磺酰脲药剂选自格列吡嗪、格列本脲(乙磺己脲)、氯磺丙脲，甲苯磺丁脲、妥拉磺脲和格列美脲以及其可药用盐中的至少一种。

28.权利要求25所述的药物组合物，其中抗血脂剂选自胆汁酸螯合剂、纤维酸衍生物、HMG-CoA还原酶抑制剂和烟酸化合物以及其可药用盐中的至少一种。

29.权利要求25所述的药物组合物，其中双胍药剂选自二甲双胍及其可药用盐中的至少一种。

30.权利要求25所述的药物组合物，其中噻唑烷二酮类药剂选自吡格列酮和罗格列酮以及其可药用盐中的至少一种。

31.权利要求25所述的药物组合物，其中胰岛素选自胰岛素选自速效胰岛素、中效胰岛素、长效胰岛素以及中效和速效胰岛素组合中的至少一种。

32.权利要求25所述的药物组合物，其中α-葡萄糖苷酶抑制剂选自米格列醇和阿卡波糖以及其可药用盐中的至少一种。

33.权利要求25所述的药物组合物，其中醛糖还原酶抑制剂选自如下至少一种：

a)螺-异喹啉-吡咯烷四酮化合物；

b)2-[(4-溴-2-氟苯基)甲基1-6-氟-(9Cl)；

c)托瑞司他；

d)索比尼尔；

e)甲索比尼尔；

f)唑泊司他；

g)依帕司他；

h)折那司他；

i)咪瑞司他；

j)泊那司他；

k)ONO-2235；

l)GP-1447；

m)CT-112；

n)BAL-ARI 8；

o)AD-5467；

p)ZD5522；

q)3，4-二氢-2，8-二异丙基-3-硫代-2H-1，4-苯并嗪-4-乙酸；

t)M-79175；

u)SPR-210；

其类似物以及可药用盐。

34.权利要求25所述的药物组合物，其中PTP酶抑制剂选自具有式(I)的至少一种化合物：

R₁是C(O)OR₇、5至6元杂环、H、卤素、CN或C(O)NR₇R₈；

R₂是C(O)ZR₄或CN；

Z是-O-或-NR₅-；

X是-O-C_1-3亚烷基-、-NR_a-C_1-3亚烷基-、-S-C_1-3亚烷基-、-SO-C_1-3亚烷基-、-SO₂-C_1-3亚烷基-、-C_1-4亚烷基-、-C_2-4亚链烯基-或-C_2-4亚炔基-，其中可以任何亚烷基、亚链烯基和亚炔基可以任选地用一个或多个卤素、氧代、HN＝、CN、OCF₃、OH、NH₂、NO₂、R₄或Q取代；

35.权利要求25所述的药物组合物，其中PTP酶抑制剂选自具有式(II)的至少一种化合物：

R₁是R₅、OR₅、C(O)OR₅、C(O)R₅或C(O)NR₅R₆；

R₂是R₅；

Y不存在或者是-O-或-NR₆-；

B不存在或者是-NR₅-、-NR₇-、-N(R₅)CH₂-、-N(R₇)CH₂-、-N(R₉)-、-N(R₉)C(O)-、-N(R₉)C(O)C(R₁₁)(R₁₂)-、-N(R₉)C(O)C(O)-、-N(R₉)C(O)N(R₁₀)-、-N(R₉)SO₂-、-N(R₉)SO₂C(R₁₀)(R₁₁)-、-N(R₉)(R₁₀)C(R₁₁)(R₁₂)-、-N(R₉)C(R₁₁)(R₁₂)C(R₁₃)(R₁₄)-、-O-、-O-C(R₁₁)(R₁₂)-、-O-C(R₁₁)(R₁₂)C(R₁₃)(R₁₄)-、-C(R₁₁)(R₁₂)-O-、-C(R₁₁)(R₁₂)-O-C(R₁₃)(R₁₄)-、-C(R₁₁)(R₁₂)N(R₉)-、-C(R₁₁)(R₁₂)N(R₉)C(R₁₃)(R₁₄)-、-C(R₁₁)(R₁₂)S-、-C(R₁₁)(R₁₂)SC(R₁₃)(R₁₄)-或-C(R₁₁)(R₁₂)SO₂C(R₁₃)(R₁₄)-；

D是一个或多个H、卤素、OH、NH₂、CHO、CN、NO₂、CF₃或Q；