CN100596307C - 一种鸡丝羽性状基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种鸡丝羽性状基因及该基因编码的蛋白，并公开了该基因在制备检测鸡丝羽性状的生物芯片中的应用，同时公开了该基因编码的蛋白在制备检测鸡丝羽性状的试剂盒中的应用，为鸡丝羽性状的深入研究和开发应用开辟了新的途径。

Description

一种鸡丝羽性状基因及其应用

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地涉及一种鸡丝羽性状基因及其应用。

背景技术

丝羽乌骨鸡由于其自身的特征，在遗传发育研究中很早就被作为研究对象用来揭示遗传学现象和规律。在丝羽乌骨鸡众多的性状中，关于丝羽和缨头的性状研究最多。1907年Davenport在题为《Heredity and Mendel′s Law》的论文中提及丝羽性状，指出用丝羽鸡和片羽鸡杂交的后代中有25％个体表型为丝羽，表明丝羽性状可能是隐性性状丝羽性状通过多年来的研究也将其在遗传学上进行定位，与裸颈性状连锁，并推断可能在3号染色体上。

羽毛是表皮附属物中一个非常特殊的结构，而丝羽又是一种极为特殊的羽毛类型。尽管在这一方面已经进行了很长时间的研究，但是目前在分子方面的研究现在还是比较零散，主要集中在对一些发育上比较保守的调控基因如Shh、Bmps、Wnt等的研究，此外还有对一些EGF、FGF等因子的研究。BMP家族在羽毛的发育研究中已经得到了较为广泛的研究。在关于羽毛发育研究中Harris等人报道边缘基板表皮细胞羽构间Shh-Bmp2的横向表达形成了羽轴和羽钩的前表达模式，Shh-BMP2信号通路的调控是决定羽毛形态(如，绒羽和片羽)机制的最基本的元件。Yu等人的研究结果表明在飞羽发生发育中BMP2、BMP4、noggin是动态表达的，而且它们表达平衡决定勒羽毛的形态。BMP4转录本在真皮毛乳头和其下的毛球区域有表达。羽毛发生的早期羽小枝板细胞中有BMP2出现，而且快速的转化到羽小支基板上皮细胞。Noggin转录本在毛球细胞中检测到，且过量表达但是在真皮毛乳头处没有表达。此外，其它研究结果还表明β-catenin在调节shh-bmp2信号中是一个关键的调节蛋白，其过量表达诱导羽毛基板上皮细胞中shh和bmp2的表达，并且起始了shh和bmp2表达的极性。细胞间的信号转导受到胞质中的β-catenin稳定的调节，鸡皮肤的β-catenin免疫组织化学定位揭示了这个信号通路在早期羽芽发育的动力模式中有积极的作用，所以β-catenin通路起始了胚胎批复中毛囊的发育而且在羽芽的后续发育中有重要的作用。β-catenin位于WNT信号通路中，WNT信号通路包括WNT规范通路和WNT非规范通路。WNT规范通路是分泌型的WNT蛋白与Friizzled受体结合，激活胞间蛋白Dishevelled，从而稳定β-catenin蛋白，进而与LEF/TCF结合成为复合物，激活WNT靶基因的转录。WNT非规范通路不需要β-catenin蛋白或LEF/TCF信号，其通过Jun amino-terminal kinase(JNK)作用于WNT靶基因。WNT信号通路对于细胞的发育发育、皮肤及其衍生物的发育起到重要的作用。其中Wnt3可以改变生长性状和毛发轴的分化；Wnt6可以在羽毛芽表皮细胞和基板细胞中特异性表达，促进羽毛细胞增殖从而对羽毛发育产生影响。

然而，对鸡丝羽性状相关基因的克隆及应用尚未见报道。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明的目的是提供一种鸡丝羽性状基因，本发明的又一目的是提供该基因及其编码的蛋白的应用。

(二)技术方案

本发明利用5’RACE法(具体操作参见《分子克隆》第三版，科学出版社，2002年8月出版)首次克隆到了一种鸡丝羽性状基因，该基因的DNA序列如SEQ ID NO：1所示。该基因由6个外显子组成，开放阅读框为2622bp碱基，编码874氨基酸残基。将该基因开放阅读框部分的序列在GenBank数据库用BLATSx进行比对，发现其同在鸡中已经克隆的cDNA(CR387020)有一定的同源性，期望值为2e-11。

本发明还提供了该基因编码形成的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。该蛋白含有135个氨基酸残基，占全部氨基酸的15.48％，并且在500氨基酸残基附近含有一个PRO-Rich结构，该结构是DNA的特定结合区域，与皮肤保护，免受外界伤害有关系。

本发明还根据该基因的外显子序列设计引物，研究该基因在不同品种及组织间的表达情况。引物的上游序列：5′-AATGAGCTCCTTGGCTGGTA-3′，下游序列：5′-ATATGCTCTTCGGCAAGCTG-3′，PCR扩增片段大小为441bp，退火温度为60℃。PCR产物跨外显子2、3、4，持家基因为GAPDH。结果表明该基因在鸡的不同品种和组织间表达情况不同，特别是在皮肤组织中，在片羽鸡皮肤组织中表达，而在丝羽鸡皮肤组织中不表达。

根据该基因在不同品种及组织间的表达情况，本发明公开了该基因在制备检测鸡丝羽性状的生物芯片中的应用，同时公开了该基因编码的蛋白在制备检测鸡丝羽性状的试剂盒中的应用。制备生物芯片和检测试剂盒的方法都是本领域技术人员熟知的常规方法。

(三)有益效果

本发明提供了一种鸡丝羽性状基因及该基因编码的蛋白，并公开了该基因在制备检测鸡丝羽性状的生物芯片中的应用，同时公开了该基因编码的蛋白在制备检测鸡丝羽性状的试剂盒中的应用，为鸡丝羽性状的深入研究和开发应用开辟了新的途径。

附图说明

图1A表示出生一天片羽鸡和丝羽鸡不同组织中GAPDH基因表达情况，B表示出生一天片羽鸡和丝羽鸡不同组织中本发明克隆基因的表达情况；其中数字编号为：1表示片羽鸡心脏、2表示片羽鸡肝脏、3表示片羽鸡皮肤、4表示片羽鸡肌肉、5表示片羽鸡眼睛、6表示丝羽鸡心脏、7表示丝羽鸡肝脏、8表示丝羽鸡皮肤、9表示丝羽鸡肌肉、10表示丝羽鸡眼睛；

图2是出生胚胎12天、胚胎8天片羽鸡和丝羽鸡不同组织中GAPDH基因表达情况，其中数字编号为：11表示片羽鸡皮肤、12表示丝羽鸡皮肤、13表示片羽鸡肌肉、14表示丝羽鸡肌肉、15表示片羽鸡皮肤、16表示丝羽鸡皮肤、17表示片羽鸡肌肉、18表示丝羽鸡肌肉；

图3是出生胚胎12天片羽鸡和丝羽鸡不同组织中本发明克隆基因的表达情况，图4是出生胚胎8天片羽鸡和丝羽鸡不同组织中本发明克隆基因的表达情况，其中数字编号为：11表示片羽鸡皮肤、12表示丝羽鸡皮肤、13表示片羽鸡肌肉、14表示丝羽鸡肌肉、15表示片羽鸡皮肤、16表示丝羽鸡皮肤、17表示片羽鸡肌肉、18表示丝羽鸡肌肉。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1鸡丝羽性状基因的克隆

1.1实验材料

CAU资源家系，白菜航蛋鸡种蛋、丝羽乌骨鸡种蛋取自中国农业大学小牧场。

1.2实验试剂及溶液

反转录酶、RNA酶抑制剂RNasout购自Invitrogen公司。

5’RACE试剂盒购自Invitrogen公司。

DEPC水：去离子水中加入0.1％DEPC，37℃过夜，高压灭菌。

RNA操作所用枪头、离心管经0.1％DEPC水浸泡过夜，去离子水冲洗2-3遍，高压灭菌。

RNA操作所用75％乙醇：以DEPC处理的水配制乙醇。

RNA操作所用的研钵、量筒、药匙等，洗净，晾干，铝箔纸包裹，180℃干烤8小时。

2M葡萄糖溶液：19.82g葡萄糖溶于50ml去离子水中，过滤灭菌，贮存于-20℃。

1M MgCl₂：11.5g MgCl₂·6H₂O溶于50ml去离子水中，过滤灭菌，贮存于-20℃。

1.32M Kac：19.5g KAc，10.5ml冰乙酸，以去离子水定容至100ml，调pH值至4.8。

250mM/L KCl：1.86gKCl溶于100mL去离子水中。

质粒提取溶液I：50mM葡萄糖，2.5mM Tris·Cl(pH8.0)，10mM EDTA(pH8.0)。

质粒提取溶液II：0.2M NaOH，1％SDS，现配现用。

质粒提取溶液III：1.32M Kac(pH＝4.8)。

液体LB培养基：细菌培养用胰化蛋白胨10g，细菌培养用酵母提取物5g，NaCl 10g溶于800ml去离子水中，用0.5M NaOH调节pH值至7.4，定容至1L，高压灭菌。

固体LB培养基：细菌培养用胰化蛋白胨10g，细菌培养用酵母提取物5g，NaCl10g溶于800ml去离子水中，用0.5M NaOH调节pH值至7.4，加入细胞培养用琼脂15g/L，定容至1L，高压灭菌。

氨苄青霉素：100mg/ml，溶于水中，过滤灭菌，-20℃保存。

IPTG溶液：1g IPTG溶于5ml双蒸水中，过滤除菌分装成1ml/份，贮存于-20℃。

X-gal：用二甲基甲酰胺溶解5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，配成20mg/ml贮存液，避光保存于-20℃。

1.3实验仪器

孵化器：北京海江孵化器制造有限公司

恒温水浴仪：美国LIFESCIENCE公司

-80℃低温冰箱：美国Forma公司

1.4实验方法

1.4.4RT-PCR

1.4.4.1RNA的一链合成

(1)在管中混匀下列试剂

primer(T 18，25pmol/μl)     2μl

RNA                          (＞400ng)

10mMdNTP mix                 1.25μl

DEPC处理的水                 至18μl

(2)70℃变性5min，迅速置冰上，使RNA变性。

(3)在反应管中加入下列试剂

5×cDNA反应buffer                5μl

RNaseout(or RNasin)              1μl

M-MLV RT                         1μl

(4)37℃延伸120min

(5)72℃，15min，终止反应。

(6)cDNA可保存于-20℃保存或立即PCR。

1.4.4.2根据目的基因设计引物进行PCR：由华美生物技术公司完成。

1.4.55’RACE

5’RACE的基本原理是反转录PCR，与普通的反转录PCR不同的是需要第一链产物cDNA的纯化和加尾反应。再利用加上去的接头与基因特异性引物扩增。

具体步骤如下：

(1)cDNA第一链的合成

先在一0.5ml的离心管中加入以下组分：

将以上组分混匀，70℃水浴10min变性RNA，冰上速冷1min，离心将溶液收集至管底。按顺序加入以下组分：

将以上24μl混合物42℃水浴1min，加入1μlSμperScriptTMII反转录酶，混匀，42℃反应50min，70℃保温15min终止反应，离心，将反转录产物温度降至37℃后加入1μlRNase mix，37℃反应30min以降解RNA。将以上cDNA第一链完全按照试剂盒说明书用Invitrogen公司GLASSMAX Spin Cartridge纯化。

(2)TdT Tailing ofcDNA

在0.5ml离心管中加入以下组分：

将以上混合液在94℃加热2-3min，冰上速冷1分钟，离心将溶液收集至管底。加入1μlTdT，混匀，37℃反应10min，65℃加热2-3分钟，离心将溶液收集至管底，置于冰上。

(3)PCR of dC-Tailed cDNA

进行第一轮扩增，预先将PCR仪加热至94℃。

0.2mlPCR管中依次加入以下组分：

将以上混合物放入已预热好的PCR仪中，按照以下程序进行扩增：94℃变性3min；94℃变性1min，65℃退火1min，72℃延伸1min，30个循环；72℃延伸7min，4℃保存。

1.4.6pMD-T18载体的连接反应

10μl连接体系                      Solution I  5.0μl

                                   载体        0.5μl

                                   DNA         适量

                                   水          适量

混匀，16℃水浴连接过夜，准备转化。

1.4.7感受态细胞的制备、效价的测定及质粒DNA的转化

1.4.7.1感受态细胞的制备：CaCl₂法

(1)从新鲜平板上挑取E.coli DH5α单菌落，转到一含有50mlLB培养基的200ml的三角瓶中，于37℃以200rpm转速摇7hr左右，直到透过培养基可以模糊看清放在其下的四号字。

(2)在无菌的条件下将细菌转移到一个无菌，用冰预冷的50ml离心管中，在冰上放置10min，使培养物冷却到0℃。

(3)于4℃以4000rpm离心10min，回收菌体。

(4)倒出培养液，将离心管倒置，使最后残留的痕量培养液流尽。

(5)用10ml 0.1Mol/L CaCl2.2H₂O重悬菌体沉淀，冰浴15min。

(6)于4℃以4000rpm离心10min，回收菌体。

(7)倒出培养液，将离心管倒置以使最后残留的痕量洗液流尽。

(8)用2ml冰预冷的0.1Mol/L CaCl₂重悬细菌沉淀。

(9)分装细菌细胞，每管约200μl，存于-80℃。

1.4.7.2感受态效价的测定

感受态的效价是指1μg质粒DNA所能转化出来的细菌数，其测定方法为如下：

(1)用冷却的无菌吸头从每种感受态细胞悬液中各取200μl转移到无菌的1.5ml微量离心管中，每管加1μl 20ng/μl质粒DNA，轻弹外管壁以混匀内容物，之后于冰上放置30min。

(2)将管放到预加热到42℃的水浴中试管架上，放置90sec。

(3)快速将管置于冰上，冷却90sec。

(4)每管加800μl LB液体培养基，然后将管转移到37℃摇床，温育45min。

(5)颠倒离心管数次，各取50，200μl涂Amp板(其中Amp的含量为100ng/ml)。

(6)将涂好的平板于37℃培养12-16h，计数平板上菌落的数目，然后根据

公式E＝1000*N(50μl)及E＝250*N(200μl)进行计算，其中N代表LB平板上菌落的数目。取两个E的平均值即可作为其效价。

1.4.7.2质粒DNA的转化：

遵循感受态细胞效价的测定方法

1.4.8质粒DNA提取

(1)将3ml含抗生素(60-80ng/ml)的LB培养基加入到容量为10ml通气良好的试管中，然后接入转化后的单菌落，37℃摇床培养过夜

(2)将1.5ml菌液倒入1.5mlEppendorf管中，12000rpm离心30秒，收集菌体

(3)将菌体沉淀重悬于0.5ml STE中，振荡洗涤，重新离心收集菌体

(4)加入100μl冰预冷的溶液I，剧烈振荡

(5)加入200μl新配制的溶液II，缓慢颠倒2～3次，静置1～2min，待溶液变得清亮

(6)加入150μl冰预冷的溶液III，缓慢颠倒数次，将管于冰上放置10min

(7)用微量离心机于4℃，12000rpm离心10min，将上清转移到另一离心管中

(8)加等量酚：仿，充分摇荡10分钟，12000rpm离心10min，将上清转移到另一离心管中

(9)加等量的氯仿，充分摇荡10分钟，12000rpm离心10min，将上清转移到另一离心管中

(10)加入2倍体积的乙醇，振荡混匀，-20℃冰箱放置30min

(11)12000rpm离心15min

(12)吸弃上清，用70％的乙醇洗涤DNA沉淀数分钟

(13)吸弃70％乙醇溶液，真空抽干2min

(14)溶于20μl灭菌双蒸水中，加入1μl10mg/ml的无DNase的RNase，37℃水浴放置1小时

(15)取1μl质粒DNA电泳，检查质粒提取的效果

1.4.9PCR反应体系及反应条件

PCR反应体系系为15μl，其中含有40ng基因组DNA、1×PCR Buffer(1.5mM MgCl2、50mM KCl、10mM Tris·HCl、0.1％Triton X-100、0.01％明胶)、200mM dNTP、1U Taq酶、正反向引物各8pmol。

PCR反应条件：94℃预变性5min，94℃变性30sec、退火30sec(57～62℃)、72℃延伸30sec～1min 30sec，反应35个循环，最后72℃延伸10min。

1.4.10PCR产物回收

(1)照5∶1的比例往PCR反应体系中加入PCR Binding Solution，充分混匀；

(2)将吸附柱放入收集管中，把混合液转移到柱内，12,000rpm离心30sec；

(3)倒掉收集管中的废液，加入500μl Column Wash Solution，12,000rpm离心30sec；

(4)重复步骤(3)一次；

(5)倒掉收集管中的废液，12,000rpm离心2min；

(6)将吸附柱放入一支新的1.5ml离心管中，在吸附柱膜中央加入30μlDP洗脱液，室温或37℃放置2min，12,000rpm离心1min。离心管中的液体即为回收的DNA片段，可立即使用或保存于-20℃备用。

1.4.11序列测定

测序反应体系为10μl，其中包括：5×buffer 1.2μl、测序引物1.0μl、模板1.0μl、Mix 1.5μl、H2O 5.3μl。(1μl PCR产物模板中DNA的量约为20ng)。测序PCR反应条件：96℃2min，循环95℃20sec；52℃15sec；60℃4min；35个循环。测序产物经纯化后跑测序胶，分析。

结果：克隆到鸡丝羽性状基因，该基因的DNA序列如SEQ ID NO：1所示。

该基因由6个外显子组成，开放阅读框为2622bp碱基，编码874氨基酸残基。

实施例2鸡丝羽性状基因的表达分析实验

根据鸡丝羽性状基因的外显子序列设计引物，研究该基因在不同品种及组织间的表达情况。

引物的上游序列：5′-AATGAGCTCCTTGGCTGGTA-3′，下游序列：5′-ATATGCTCTTCGGCAAGCTG-3′，PCR扩增片段大小为441bp，退火温度为60℃。PCR产物跨外显子2、3、4，持家基因为GAPDH。

结果如附图1-4所示，表明该基因在鸡的不同品种和组织间表达情况不同，特别是在皮肤组织中，在片羽鸡皮肤组织中表达，而在丝羽鸡皮肤组织中不表达。

序列表

<110>李宁，胡晓湘

<120>一种鸡丝羽性状基因及其应用

<130>L0701

<160>2

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>2622

<212>DNA

<213>鸡(chicken)

<400>1

atggcagaaa tggagaaaga agggagacct cccgaaaata aaaggagcag gaagccggcg     60

cacccggtga agcgggagat caacgaggag atgaagaact tcgcagaaaa cactatgaat    120

gagctccttg gctggtatgg ttatgataag gttgaactga aagatggaga agatattgaa    180

ttcaggaact actctgcaga tggggaaagc cgccagcaca tttctgttct caaagaaaat    240

tctttgccaa aaccaaaatt acctgaggac agtgttattt caccatacaa tataaacaca    300

agctacccag ggcttgccac gggaaatgga ctttcagact caccagcagg gtcaaaggat    360

cacgggaatg tacctattat tgtcccatta attccgccgc ctttcataaa gccaccagca    420

gaagatgatg tgtcaaatgt acaaataatg tgtgcctggt gccagaaagt tggaatcaag    480

cgctattccc tgagtatggg aagtgaagtg aaatgcttct gcagcgagaa gtgctttgca    540

gcttgccgaa gagcatattt caagagaaac aaggctagag atgaagatgg acatgctgaa    600

aattttcccc agcagcacta tgctaaggaa actccaagac ttgccttcaa gaataactgc    660

gaactacttg tatgtgactg gtgtaagcac ataagacaca caaaagagta tctggatttt     720

ggggacgggg aaagaaggct tcagttctgc agtgcaaaat gtctcaatca gtacaaaatg     780

gacattttct acaaagagac acaggccaat cttccagctg gactgtgcag tacattacat     840

cctccagtcg aaaataaagc agaaggcact ggagtacagc tgctgactcc agattcttgg     900

aatataccgc tagcagatgc tcggagaaaa gccccatccc cagcgtctgc agctggccaa     960

attcaaggtc ctggaccatc agcgtctacc actgcctctc cgtctgacac tgccaactgc    1020

tctgtcacta aaatccccac gccagttccc aaacctattc ccatcagtga gaatccaaat    1080

attccaccag tttctgtcca gccacctgct agtatcgtgc ctccaattgg tgtcccacct    1140

cgcagtcctc ccatggtgat gacaaaccgt gggccagttc cgctgcccat attcatggaa    1200

cagcaaatta tgcagcaaat ccgtccgcca tttatccgtg ggccgcctca ccatgcctca    1260

aatcctaaca gccctctgtc aaatccaatg atccctggaa tcggtccacc accaggtggc    1320

cccagaaata tgggtcccac ctccagcccc atgcacaggc caatgctttc cccacacatc    1380

caccccccca cgacaccgac catgcctggg aaccctccag gcttgctgcc accccctcct    1440

cctggcgccc ctttgcccag tcttcccttt cctcccgtca gcatgatgcc aaatggtcct    1500

atgcctatgc cacaaatgat gaactttggg ctgccatccc ttgccccgct ggtgccaccc    1560

ccaactctac tagtgccata tcctgtcatt gtccctttgc ccgtccccat ccccattccc    1620

atccctatcc ctcacatcaa tgattccaaa ccccccagcg gtttctctag caacggcgaa    1680

aacttcattc cgagtaactc cagtgagacg cctggaggaa agccacccaa tagctcttcg    1740

tcccctcgag agtcaaaaca aggatcgtcc aaaccctccg actcctctcc gagctgctca    1800

ggccagtccc taaatcaagc tcaagtgctt caggagcaca gtaaaaatga agttgttgac  1860

ttgactgtca gacctagtag tcctgtgaac agtaagtttg gtttccccag tgtgctacag  1920

ggtccgcagg atggtgtgat agacctaacg gtaggccacc ggtctaggct gcacaatgtt  1980

atccacaggg ctctacatgc ccaagtgaaa gtcgagcgtg agcctaacag tgttgtaaat  2040

ttggctttcg gtagctcaga caaaaggaac tgcagcgact gcagggacaa ttgcagccca  2100

gttgactcaa aaacattacc atgcggtgat gcagcccatt gctgccctgt ctccttggcc  2160

tccggcacac cgggactgga agccggagca gctgtgtgca atgtcattgt gaatggcaca  2220

aagagcacag agggttccaa gaacccggag ccaccccagg atccgaaaaa gccacagccc  2280

ccagaggagc tggcggtgag cgagctggag tctgtgaagg agaacaactg cgcatcgaac  2340

tgccacctcg agggagacac tggcaagaag gctggggaag agcctcttgc cggaggagac  2400

aagcaggacc ccaacctcaa caatccggca gatgaggacc atgcgtatgc tttgcggatg  2460

ctgcccaaga caggttgtgt gatccagcct gtgccaaaac cagcagaaaa gactgctatc  2520

gcaccgtgta ttatgtcaac gccaatcctc agcacagggc cagaggatct ggagccacca  2580

ttgaaaagga ggtgtctccg aattcgaaat cagaataagt aa                     2622

<210>2

<211>873

<212>PRT

<213>鸡(chicken)

<400>2

Met Ala Glu Met Glu Lys Glu Gly Arg Pro Pro Glu Asn Lys Arg Ser

1               5                   10                  15

Arg Lys Pro Ala His Pro Val Lys Arg Glu Ile Asn Glu Glu Met Lys

            20                  25                  30

Asn Phe Ala Glu Asn Thr Met Asn Glu Leu Leu Gly Trp Tyr Gly Tyr

        35                  40                  45

Asp Lys Val Glu Leu Lys Asp Gly Glu Asp Ile Glu Phe Arg Asn Tyr

    50                  55                  60

Ser Ala Asp Gly Glu Ser Arg Gln His Ile Ser Val Leu Lys Glu Asn

65                  70                  75                  80

Ser Leu Pro Lys Pro Lys Leu Pro Glu Asp Ser Val Ile Ser Pro Tyr

                85                  90                  95

Asn Ile Asn Thr Ser Tyr Pro Gly Leu Ala Thr Gly Asn Gly Leu Ser

            100                 105                 110

Asp Ser Pro Ala Gly Ser Lys Asp His Gly Asn Val Pro Ile Ile Val

        115                 120                 125

Pro Leu Ile Pro Pro Pro Phe Ile Lys Pro Pro Ala Glu Asp Asp Val

    130                 135                 140

Ser Asn Val Gln Ile Met Cys Ala Trp Cys Gln Lys Val Gly Ile Lys

145                 150                 155                 160

Arg Tyr Ser Leu Ser Met Gly Ser Glu Val Lys Cys Phe Cys Ser Glu

                165                 170                 175

Lys Cys Phe Ala Ala Cys Arg Arg Ala Tyr Phe Lys Arg Asn Lys Ala

            180                 185                 190

Arg Asp Glu Asp Gly His Ala Glu Asn Phe Pro Gln Gln His Tyr Ala

        195                 200                 205

Lys Glu Thr Pro Arg Leu Ala Phe Lys Asn Asn Cys Glu Leu Leu Val

    210                 215                 220

Cys Asp Trp Cys Lys His Ile Arg His Thr Lys Glu Tyr Leu Asp Phe

225                 230                 235                 240

Gly Asp Gly Glu Arg Arg Leu Gln Phe Cys Ser Ala Lys Cys Leu Asn

                245                 250                 255

Gln Tyr Lys Met Asp Ile Phe Tyr Lys Glu Thr Gln Ala Asn Leu Pro

            260                 265                 270

Ala Gly Leu Cys Ser Thr Leu His Pro Pro Val Glu Asn Lys Ala Glu

        275                 280                 285

Gly Thr Gly Val Gln Leu Leu Thr Pro Asp Ser Trp Asn Ile Pro Leu

    290                 295                 300

Ala Asp Ala Arg Arg Lys Ala Pro Ser Pro Ala Ser Ala Ala Gly Gln

305                 310                 315                 320

Ile Gln Gly Pro Gly Pro Ser Ala Ser Thr Thr Ala Ser Pro Ser Asp

                325                 330                 335

Thr Ala Asn Cys Ser Val Thr Lys Ile Pro Thr Pro Val Pro Lys Pro

            340                 345                 350

Ile Pro Ile Ser Glu Asn Pro Asn Ile Pro Pro Val Ser Val Gln Pro

        355                 360                 365

Pro Ala Ser Ile Val Pro Pro Ile Gly Val Pro Pro Arg Ser Pro Pro

    370                 375                 380

Met Val Met Thr Asn Arg Gly Pro Val Pro Leu Pro Ile Phe Met Glu

385                 390                 395                 400

Gln Gln Ile Met Gln Gln Ile Arg Pro Pro Phe Ile Arg Gly Pro Pro

                405                 410                 415

His His Ala Ser Asn Pro Asn Ser Pro Leu Ser Asn Pro Met Ile Pro

            420                 425                 430

Gly Ile Gly Pro Pro Pro Gly Gly Pro Arg Asn Met Gly Pro Thr Ser

        435                 440                 445

Ser Pro Met His Arg Pro Met Leu Ser Pro His Ile His Pro Pro Thr

    450                 455                 460

Thr Pro Thr Met Pro Gly Asn Pro Pro Gly Leu Leu Pro Pro Pro Pro

465                 470                 475                 480

Pro Gly Ala Pro Leu Pro Ser Leu Pro Phe Pro Pro Val Ser Met Met

                485                 490                 495

Pro Asn Gly Pro Met Pro Met Pro Gln Met Met Asn Phe Gly Leu Pro

            500                 505                 510

Ser Leu Ala Pro Leu Val Pro Pro Pro Thr Leu Leu Val Pro Tyr Pro

        515                 520                 525

Val Ile Val Pro Leu Pro Val Pro Ile Pro Ile Pro Ile Pro Ile Pro

    530                 535                 540

His Ile Asn Asp Ser Lys Pro Pro Ser Gly Phe Ser Ser Asn Gly Glu

545                 550                 555                 560

Asn Phe Ile Pro Ser Asn Ser Ser Glu Thr Pro Gly Gly Lys Pro Pro

                565                 570                 575

Asn Ser Ser Ser Ser Pro Arg Glu Ser Lys Gln Gly Ser Ser Lys Pro

            580                 585                 590

Ser Asp Ser Ser Pro Ser Cys Ser Gly Gln Ser Leu Asn Gln Ala Gln

        595                 600                 605

Val Leu Gln Glu His Ser Lys Asn Glu Val Val Asp Leu Thr Val Arg

    610                 615                 620

Pro Ser Ser Pro Val Asn Ser Lys Phe Gly Phe Pro Ser Val Leu Gln

625                 630                 635                 640

Gly Pro Gln Asp Gly Val Ile Asp Leu Thr Val Gly His Arg Ser Arg

                645                 650                 655

Leu His Asn Val Ile His Arg Ala Leu His Ala Gln Val Lys Val Glu

            660                 665                 670

Arg Glu Pro Asn Ser Val Val Asn Leu Ala Phe Gly Ser Ser Asp Lys

        675                 680                 685

Arg Asn Cys Ser Asp Cys Arg Asp Asn Cys Ser Pro Val Asp Ser Lys

    690                 695                 700

Thr Leu Pro Cys Gly Asp Ala Ala His Cys Cys Pro Val Ser Leu Ala

705                 710                 715                 720

Ser Gly Thr Pro Gly Leu Glu Ala Gly Ala Ala Val Cys Asn Val Ile

                725                 730                 735

Val Asn Gly Thr Lys Ser Thr Glu Gly Ser Lys Asn Pro Glu Pro Pro

            740                 745                 750

Gln Asp Pro Lys Lys Pro Gln Pro Pro Glu Glu Leu Ala Val Ser Glu

        755                 760                 765

Leu Glu Ser Val Lys Glu Asn Asn Cys Ala Ser Asn Cys His Leu Glu

    770                 775                 780

Gly Asp Thr Gly Lys Lys Ala Gly Glu Glu Pro Leu Ala Gly Gly Asp

785                 790                 795                 800

Lys Gln Asp Pro Asn Leu Asn Asn Pro Ala Asp Glu Asp His Ala Tyr

                805                 810                 815

Ala Leu Arg Met Leu Pro Lys Thr Gly Cys Val Ile Gln Pro Val Pro

            820                 825                 830

Lys Pro Ala Glu Lys Thr Ala Ile Ala Pro Cys Ile Met Ser Thr Pro

        835                 840                 845

Ile Leu Ser Thr Gly Pro Glu Asp Leu Glu Pro Pro Leu Lys Arg Arg

    850                 855                 860

Cys Leu Arg Ile Arg Asn Gln Asn Lys

865                 870

Claims (4)

1、一种鸡丝羽性状基因，其DNA序列如SEQ ID NO：1所示。

2、根据权利要求1所述的基因编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3、根据权利要求1所述的基因在制备检测鸡丝羽性状的生物芯片中的应用。

4、根据权利要求2所述的蛋白在制备检测鸡丝羽性状的试剂盒中的应用。

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