CN100582747C - 一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法及其检测装置 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法及其检测装置，主要用于解决现有多元待测物检测实施难度大、操作繁琐、检测灵敏度与准确性低等技术问题。检测方法包括：在狭槽内表面的不同检测带区域固定多种特异性结合物质，制成捕获探针；以荧光物质标记与捕获探针相匹配的其它特异性结合物质，制成信号报告分子；将样品、信号报告分子吸入狭槽，使样本中的待测物质与捕获探针、信号报告分子发生结合反应，使待测物和信号报告分子富集在狭槽的检测带区域；通过洗涤除去未结合的信号报告分子，直接检测狭槽内表面不同检测带的荧光强度，实现对多个不同待测物的同时测定。检测装置为一槽形器件，槽形器件为上、下二端或左、右二端相通、中间呈狭槽状空腔的容器，本发明用于检测蛋白质、核酸、寡核苷酸、农药、毒品、小分子激素、微生物等物质。

Description

一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法及其检测装置

技术领域

本发明涉及一种多元待测物检测方法及其检测装置，特别涉及一种基于透明狭槽器件的多元待测物非均相检测方法及其检测装置。

背景技术

多元待测物检测(Multi-Analyte Analysis，MAA)指通过一次加样、一次分析同时对二种或二种以上待测物进行测定(定性、定量或半定量)的分析方法。同传统的生物分析相比，MAA的优越性主要体现在提高了分析效率、简化了分析过程和降低了分析成本等三个方面。通过MAA，可以在较短的时间内为临床诊断或科学研究提供更多有价值的信息。

MAA在临床诊断、药物筛选、环境保护、毒物检测、血液筛查等方面均有广泛的应用价值。例如，对前列腺癌的诊断，fPSA/tPSA联合检测可以有效改善临床灵敏性和特异性；对于血检，采用MAA方式对HCV抗体/HIV抗体/HBsAg/TP抗体进行联合检测将大大提高血检效率，而同时检测HIV/HBV/HCV三种病原体的DNA/RNA将有效降低窗口期HIV/HBV/HCV感染。由于MAA广泛的应用价值，长期以来一直是临床检验中研究十分活跃的领域。

根据实施方式的不同，MAA一般可分为多探针信号识别法和单一探针空间识别法。多探针信号识别法研究较早[Clin.Chem.，1986，32，887-890；Clin.Chem.，1985，31，2014-2017；Clin.Chem.，1986，32，2191-2194；1982，28，1469-1473]，现已有成型的商品试剂盒[Clin.Chem.，2006；52：235-239]。同多探针信号识别法相比，单一探针空间识别法无须区分不同标记物信号，完全避免了不同标记物信号之间的相互干扰，更容易制备高活性的固相试剂，各试剂之间相容性及质控问题的处理也相对简单，因此更有利于建立灵敏、准确、测量范围宽阔的MAA方法。

单一探针空间识别法的实施方式灵活多变，比较成熟的技术主要运用于斑点试验[J.Clin.Microbiol.，Mar 1993；31：717-719]、免疫层析[J.Clin.Microbiol.，Jul 2001；39：2572-2575]等“简易”的免疫分析装置及芯片检测装置；Kakabakos SE等以稀土螯合物BCPDA为标记建立的MAA也采用了类似原理[Clin Chem.，1992；.38：338-342]：将四种分别抗LH、HCG、FSH、催乳素的单克隆抗体分别包被四个微池，封闭后将微池的上端截去，成为四个较浅的微池；将四微池底部粘于塑料条的二面(每面二个)制成微池条；将5个微池条分别置于5个试管，在5个试管中分别加入校准品(或样品)和生物素化抗体，温育并洗涤后，加入检测试剂SBMC，再次温育并洗涤后，将微池条取出，干燥后测量荧光。该方法可同时检测LH、HCG、FSH、催乳素，四种待测物的分析都具有良好的灵敏度和精密度，但需用较大量的样品和检测试剂，操作非常繁琐。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于狭槽器件的多元待测物非均相检测方法及其检测装置，主要解决现有多元待测物检测实施难度大、操作繁琐、检测灵敏度与准确性低等技术问题。本发明通过一种简单装置方便地实施MAA。该方法既保持了常规非均相生物分析的高度灵敏性和特异性，又在标记物分离、结合反应的促进、本底校正、信号测量、自动化难易程度等方面具有常规非均相生物分析所不具备的优点，因此可简便、有效地实现MAA；同时，对于单一待测物的检测，本发明所述装置也比常规非均相生物分析更具方法学优势。

本发明的技术方案：一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法，该方法包括以下步骤：

a)在狭槽内表面多个检测带(T带)区域固定特异性结合物质，制备捕获探针；

b)以荧光物质标记与捕获探针相匹配的其它特异性结合物质，制备信号报告分子；

c)将样品、信号报告分子吸入狭槽，使样本中的待测物质与捕获探针、信号报告分子发生结合反应，使待测物和信号报告分子富集在狭槽的检测带(T带)；

d)洗涤除去未结合的信号报告分子，直接检测狭槽内T带的荧光强度，实现待测物的定量或定性测定。

所述的狭槽指由聚苯乙烯、聚丙烯或以它们为主材的塑料制成的双侧或单侧透明的反应容器；狭槽内空间厚度约0.2-3mm，空间宽度约2-8mm，空间长度约1-100mm；狭槽长度或狭槽串联数量与需要检测的待测物种数相关，狭槽也可以是由其它材料制作或采用其它形状但用于同一目的的器件；

所述的捕获探针指固定在狭槽内表面T带的抗体、抗原、抗体/抗原以外的其它结合蛋白、半抗原、核酸、寡核苷酸、(链)亲合素、微生物中的一种或多种或其它特异性结合物质；用于特异地捕获其所针对的结合分子；

所述的荧光物质指稀土离子螯合物或能发出稀土离子螯合物荧光的纳米微粒；

所述的信号报告分子指连接有上述荧光物质的抗体、抗原、抗体/抗原以外的其它结合蛋白、半抗原、核酸、寡核苷酸、(链)亲合素、微生物中的一种或多种或其它特异性结合物质；

所述的待测物指蛋白质、核酸、寡核苷酸、农药、毒品、小分子激素、微生物或其它能与所述捕获探针和所述信号报告分子结合的物质。

所述的洗涤采用一次性的喷流方式。

下面对上述检测步骤做进一步叙述：

(1)样本制备与处理：样品包括全血、血清或血浆、尿液、样品试子、粪便、动植物组织提取液、微生物培养液、脊液或上述样品经过核酸扩增后的溶液；

(2)信号报告分子的制备：

在荧光物质上引入反应活性官能团，或直接使用连接有活性官能团的荧光物质，通过活性官能团与特异性结合物质的连接反应，完成信号报告分子的制备。活性官能团指-NH₂、-COOH、-SH、-NHNH₂、-NCS、-CHO、-CO-等基团。也可以通过物理吸附方式使特异性结合物质吸附于荧光物质表面。

(3)捕获探针的制备：

将特异性结合物质溶解于相应缓冲溶液，令其与狭槽内表面T带接触；静置1～24小时，使缓冲溶液中的特异性结合物质通过物理吸附、特异性结合或化学连接等方式结合于狭槽内表面T带；经洗涤和封闭，完成捕获探针的制备。

(4)结合反应：在反应容器中加入样品和信号报告分子，将其吸入透明狭槽内，使样品中的待测物质、信号报告分子、捕获探针之间发生特异性结合反应；信号报告分子通过非竞争或竞争方式被捕获探针结合，富积在固定有捕获探针的T带上；

(5)洗涤：将洗涤溶液从透明狭槽的一端连续喷入，使狭槽内的反应溶液与T带上捕获的信号报告分子分离；

(6)测定：检测校准品(或阴阳性对照)狭槽T带和样品狭槽T带的荧光信号，对比二者荧光强度，得出样本中待测物浓度或判断阴阳性。

本发明还提供了一种用于多元待测物检测的装置，为一槽形器件，槽形器件为上、下二端或左、右二端相通、中间呈狭槽状空腔的容器，器件一端连接端口可与仪器或加样器相连，另一端管嘴呈Tip头(吸嘴)形状，可与Tip头相连，通过推吸方式实现吸取、释放、混合溶液等操作，所述狭槽为单一狭槽或多个固定有不同捕获探针的狭槽串联。

本发明能方便地实现多种待测物的同时检测；但对于单一待测物的检测，通过在狭槽内固定单一捕获探针和使用单一信号报告分子，本发明同样也可以方便地应用于单一待测物的检测。

通过上述狭槽器件实现的多元待测物检测属于非均相生物分析，但同目前普遍采用的基于微孔板或试管的非均相生物分析相比，本发明所述方式在不降低检测精密性和测量范围的前提下，可更方便地实施多元待测物或单一待测物的检测，并有效改善检测灵敏度。

本发明的优点或效果如下：

a)使用透明狭槽作为捕获探针载体和免疫反应/核酸杂交反应的场所，通过特异性结合反应使信号报告分子富集、浓缩于狭槽内小面积的捕获探针上，改善了体系的分析灵敏度；

b)使用透明狭槽作为捕获探针载体和免疫反应/核酸杂交反应的场所，无须使用专用的洗涤设备，无须多次洗涤，通过简便的一次性喷流方式洗涤去除未结合的信号报告分子，简便、高效而且快速；

c)使用透明狭槽作为捕获探针载体和免疫反应/核酸杂交反应的场所，通过在狭槽内表面不同位置固定多种捕获探针，只需一次反应，一次洗涤，并对同一狭槽多个T带进行荧光检测，便可以方便地在一次检测中得到多个待测物的检测结果；

d)使用透明狭槽作为捕获探针载体和免疫反应/核酸杂交反应的场所，通过对反应狭槽空白部分进行检测，可实现本底自动校正，无需另设反应容器；

e)采用具有高度可检测性的长寿命荧光物质作为标记物，信号测量可直接在固相表面进行，使操作更加简单，并缩短了检测时间；

f)无须使用专门的振荡装置，通过简单的推吸方式使反应溶液在狭槽内上下移动，可有效实现狭槽内表面液相分子的快速更新，从而实现快速的特异性结合反应；

g)使用透明狭槽作为捕获探针载体和免疫反应/核酸杂交反应的场所，具有洗涤简单、无须振荡设备、信号可直接测量等特点，因此该方法及其装置比常规非均相生物分析更容易实现自动化；

h)使用透明狭槽作为捕获探针载体和免疫反应/核酸杂交反应的场所，可以方便地实现多种待测物的同时检测；对于单一待测物的检测，与常规方法相比，本方法也更具优越性。

附图说明

图1：本发明检测装置结构示意图；

图1中，1-连接端口，2-狭槽，3-下端管嘴。

图2：癌胚抗原(CEA)/甲胎蛋白(AFP)TRIFMA狭槽装置对47例血清标本AFP测量值与WALLAC AFP-DELFIA测量值的相关性；

图3：CEA/AFP TRIFMA狭槽装置对47例血清标本CEA测量值与WALLAC CEA-DELFIA测量值的相关性；

图4：沙眼衣原体(CT)/解脲支原体(UU)DNA联合检测狭槽装置对129份健康人标本、56份CT阳性标本、29份UU阳性标本的联检结果；

注：TRIFMA：Time-resolved immunofluorometric immunoassay(时间分辨免疫荧光测定)

DELFIA：Dissociation-enhanced lanthanide fluorescence immunoassay(解离增强镧系离子荧光免疫分析)

WALLAC：Perkin-Elmer公司属下的从事诊断试剂研究、开发、生产的公司名称。

具体实施方式

以下二例仅为本发明的内容和实施方式提供更详细的说明；由于本领域专业人员可依照本发明的概念设计多种不同形状但实施效果相同或相似的装置，本发明不限于所提及装置的特定外形和以下二例所涉及特定待测物的检测。依照同一概念设计的其它形状的装置或用于其它待测物检测的装置用也属于本发明范畴。参照图1，检测装置为一槽形器件，槽形器件为上、下二端相通、中间呈狭槽2状空腔的容器，槽形器件上端有与仪器或加样器相连的连接端口1，槽形器件下端管嘴3呈Tip头形状。

实施例1  以稀土螯合物为标记物的AFP/CEATRIFMA；步骤如下：

1)固相抗体制备

将抗AFP单克隆抗体(Biodesign，Clone：1301)、抗CEA单克隆抗体(Biodesign，Clone：12-140-10)以0.1M NaHCO₃-Na₂CO₃缓冲液(pH9.6，含0.9％NaCl)稀释，使之浓度为5μg/ml；将其小心注入狭槽2，使其分别与相邻二个狭槽(狭槽A与狭槽B)的T区(狭槽下半部分，1/2狭槽高度)内表面接触；静置12小时；用洗涤缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.5，含0.05％Tween-20，0.9％NaCl)以喷流方式洗涤狭槽一次；在狭槽内注入封闭缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.5，含1％BSA，0.9％NaCl，1％蔗糖)，使封闭缓冲液充满狭槽内容积；静置5小时；以空气排出封闭缓冲液；通入N₂干燥狭槽内表面；铝铂袋密封，贮存于4℃。

2)Eu³⁺螯合物的制备

Eu³⁺螯合物4，4’-双(1”，1”，1”-三氟-2”，4”-丁二酮)-氯磺酰基-O-三苯(BTBCT)的制备：

按Yuan JL等的方法制备4，4’-二乙酰基-O-三苯[J Yuan，K Matsumoto.Anal Chem.，1998，70，596-601]，收率～65％。在装有80ml乙醚的单口圆底烧瓶中依此加入3.5g 4，4’-二乙酰基-O-三苯和3g三氟乙酸甲酯，搅拌下在20min内分五次加入5g乙醇钠。室温下搅拌反应36h。在搅拌过程中加入100ml 15％的H₂SO₄，反应10min以耗尽未反应的乙醇钠；分离醚相，蒸溜，得粘性棕色物质；以10ml热乙醇溶解粘性物质，加入200ml石油醚，摇允，滤除杂质固体；蒸干石油醚，置于P₂O₅干燥器中，真空干燥48h，得黄色粉状BTBT(收率～63％)。搅拌下，在装有10ml氯磺酸的圆底烧瓶中分三批加入2g BTBT，45℃反应5h。剧烈搅拌下将反应溶液滴加到500ml冰水，过滤收集沉淀，真空干燥；以氯仿重结晶，得灰黄色粉状固体BTBCT，收率～59％；置于充氩气的玻璃小瓶，-20℃贮存干燥环境中。

3)BTBCT标记抗AFP多克隆抗体和抗CEA多克隆抗体

在0.1M pH9.2的NaHCO₃-Na₂CO₃缓冲溶液中加入抗AFP多克隆抗体和抗CEA多克隆抗体(自制)，使之浓度为2mg/ml；搅拌下，在2ml抗体溶液中滴加50μl 10mg/ml的BTBCT乙醇溶液，室温反应6h。0.2μm滤器过滤，透析除去BTBCT。在BTBCT标记的抗体溶液中加入0.05％BSA，4℃贮存。

4)免疫反应

在微孔中依此加入50μl校准品或标本、150μl BTBCT标记的抗AFP多克隆抗体和抗CEA多克隆抗体混合物(二种标记抗体工作浓度均为800ng/ml)，混匀后；将其吸入狭槽并按～20次/min重复推吸操作，使液相的AFP/CEA与狭槽内表面T带上的AFP/CEA固相抗体充分反应，室温反应30min；以洗涤缓冲液(50mmol/L Tris-HCl，pH7.5，含0.05％Tween-20，0.9％NaCl)以喷流方式洗涤狭槽一次。

5)荧光检测与定量

将狭槽置于荧光检测仪Anytest 2000(上海新波生物技术有限公司)，仪器分别检测AFP/CEA所对应的狭槽T带与空白带的荧光强度。仪器检测参数：激发波长为334nm，检测波长613nm；单循环延迟时间200μs，检测时间400μs；1000循环/S。采用二点定标方式，确定标本中AFP/CEA的浓度。

6)AFP/CEA检测结果及其与WALLAC DELFIA试剂检测结果的相关性

按上述上述狭槽方式实现的AFP/CEA TRIFMA，AFP、CEA的检测灵敏度分别为0.36ng/ml、0.75ng/ml，AFP、CEA的检测线性范围分别达0-1000ng/ml、800ng/ml；AFP检测的实验内与实验间精密性分别为CV＜5.2％、9.0％，CEA检测的实验内与实验间精密性分别为CV 4.8％、7.2％。

使用上述狭槽方式同时检测了17份不同类型肿瘤患者和30份肝病患者(其中急性肝炎8例，肝纤维化13例，肝硬化9例)的血清标本，将所得AFP/CEA测量值与WALLAC公司进口的AFP-DELFIA及CEA-DELFIA试剂的测量值进行对比，并以Origin软件作相关性分析；结果示于图2、图3。数据表明，以本发明所述的狭槽方式同时检测血清标本中的AFP/CEA，AFP/CEA测量值与WALLC公司的单一检测试剂AFP-DELFIA、CEA-DELFIA测量值呈显著相关，R值分别达0.998、0.994。

实施例2  沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)/解脲支原体(Ureaplasma urealyticum，UU)核酸的联合检测

1)制备固相探针

将链亲合素(Streptavidin，Sigma)溶解于0.1M(pH9.6，含0.9％NaCl)的NaHCO3-Na2CO3缓冲溶液，使之浓度为10μg/ml，将其小心注入狭槽A与狭槽B的T区(狭槽下半部分)，静置12小时；用洗涤缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.5，含0.05％Tween-20，0.9％NaCl)以喷流方式洗涤狭槽一次；在狭槽内注入封闭缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.5，含1％BSA，0.9％NaCl)，静置5小时；以洗涤缓冲液洗涤狭槽一次；将含有100nM生物素化CT、UU特异性捕获探针(探针序列见表1；上海申友生物技术责任有限公司合成)的Tris-HCl缓冲液(50mML，pH 7.5，0.9％NaCl，0.05％Tween 20)注入狭槽内的T区部分，使其与狭槽T区固定的链亲合素接触并反应；静置12小时；将洗涤缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.5，含0.05％Tween-20，0.9％NaCl)的以喷流方式洗涤狭槽一次；通入N₂干燥狭槽内表面。

表1狭槽T带固定的CT/UU特异性捕获探针的核苷酸序列

病原体	探针序列
		CT	Biotin-CTATTTCTCTTGACCACAGCGAATCTTTGT
UU	Biotin-ATGAAGGTCTTATAGATTGTAAAGTTCTTT

2)PCR引物与荧光纳米微粒连接

使用OLIGO、DNASIS软件设计CT/UU待扩增目标片段的特异性引物，CT、UU引物分别位于内源性质粒PL GV440序列和16sRNA序列；引物5’端带有-NH₂，用于连接荧光纳米微粒。双重PCR引物序列示于下表：

表2PCR引物序列

病原体	探针序列
		CT-1	NH<sub>2</sub>-TATCTCATCTAACTAGAAAA
CT-2	NH<sub>2</sub>-TGAAAGATATGTAGCATGCC
		UU-1	NH<sub>2</sub>-GTATCAGATAGTTGGTGAGGTAA
UU-2	NH<sub>2</sub>-TACAGCATGACGTTAAGCAT

使用EDC-Sulfo-NHS法将CT/UU目的核酸引物与表面羧基化、内部包裹了Eu³⁺螯合物的荧光纳米微粒(107nm，Seradyn Inc.，芬兰)连接：a)在2ml荧光纳米微粒(0.1M PBS，pH 7.5)中依此加入20mg EDC和15mg Sulfo-NHS，室温反应30min；b)50000RPM离心70min(日立CP70-MX)；弃上清，以蒸溜水洗涤沉淀二次；c)在离心管中加入蒸溜水2ml，0.1M硼酸钠(pH 6.0)0.5ml，引物CT-2和UU-2各0.2ml；d)超声10min(JY92-II超声波细胞粉碎机；宁波新芝生物科技有限公司)，使离心管中沉淀微粒分散，室温反应2h；c)50000RPM离心70min；弃上清，以蒸溜水洗涤沉淀二次；d)超声10min，使其分散于50mM Tris-HCl缓冲液(含0.1％BSA，pH 7.8)中。

3)DNA模板的制备

阳性对照：以标准品制备插入子，采用TA粘端克隆法制备阳性对照重组质粒；标本模板：将尿道或子宫颈标本拭子浸于1ml 0.9％NaCl溶液，贴离心管壁挤出棉拭子水分，弃拭子。15000RPM离心5min，弃上清；加入50μl裂解液振荡混匀，100℃煮沸15min，15000RPM离心5min，取上清2μl作为反应模板。

4)双重PCR

在PCR试管中加入2μl模板、2U热启动Taq聚合酶、1.2U尿嘧啶DNA糖基化酶(UNG)、1×PCR缓冲液、50pmol CT-1/UU-1、纳米微粒标记的CT-2/UU-2(1.6×10⁸CPS；CPS：Countsper second)、200μM dNTP、2mM MgCl₂和液体石蜡油50μl。37℃保温10min，在DNA热循环仪上94℃预变性5min，94℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸45s，共35循环，最后于72℃延伸5min以确保扩增片段充分延伸。反应总体积50μl。

5)杂交

在扩增产物中加入变性剂40μl，混匀；取变性后的扩增产物25μl与杂交缓冲液100μl混合，将其吸入狭槽并按～10次/min重复推吸操作，使扩增产物与狭槽内表面T带上的CT/UU捕获探针充分接触并反应，37℃反应1h；以洗涤缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.5，含0.05％Tween-20，0.9％NaCl)以喷流方式洗涤狭槽一次。

6)荧光检测与判读

将狭槽置于荧光检测仪Anytest 2000，仪器分别检测CT/UU对应的狭槽T带和空白带的荧光强度。仪器检测参数：激发波长为334nm，检测波长613nm；单循环延迟时间200μs，检测时间400μs；1000循环/S。

判读临界值Cut-off＝N+20000，其中N为空白带的荧光强度，即本底荧光信号。当样本荧光强度≥Cut off，该样本判为阳性，否则为阴性。

7)检测结果

以上述方法检测129份健康人标本、56份经培养/Roche COBAS-Amplicor确证为CT阳性的拭子标本和36份经支原体培养/Roche LightCycle确证为UU阳性的拭子标本，以临界值Cut-off＝N+20000进行判读；结果129份健康人标本检测均为阴性，特异性为100％；56份CT阳性标本和40份UU阳性标本均被检出；其中3份Roche COBAS-Amplicor检测结果为弱阳性的CT阳性标本，本方法的检测结果为明显阳性；所有阳性标本的S/Co均≥3.1。结果示于图4。

上述实验结果表明，本发明需要分离结合的信号报告分子与游离的信号报告分子，属于非均相生物分析方法，但同常规非均相生物分析方法相比，其具有多种优点：1)可在狭槽内壁不同位置固定多种捕获探针，方便地实现MAA；2)狭槽设计和试剂混合方式可使反应体系的待测物和示踪分子富集、浓缩于狭槽内小面积的T带捕获探针上，从而有效改善了体系的分析灵敏度；3)可通过简单的推吸操作实现狭槽内表面液相分子的快速更新，加快结合反应，避免了振荡器的使用；4)通过对狭槽内空白部分的检测，可实现本底自动校正，无需另设反应器；5)采用具有高度可检测性、可直接检测的长寿命荧光物质作为标记物，信号检测在固相表面直接进行，无须信号增强，使操作更加简单，有效缩短了检测时间；6)常规非均相生物分析需多次洗涤固相载体，测量结果易受洗涤效果影响；本发明采用一次性连续洗涤方式，高效、简单、快速；7)由于洗涤简单高效、无须使用振荡装置、信号可直接测量等特点，本发明所述方法及装置比常规非均相生物分析更容易实现自动化检测。

Claims (8)

1、一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：

a)在狭槽内表面的不同检测带区域固定多种特异性结合物质，制成捕获探针；

b)以荧光物质标记与捕获探针相匹配的其它特异性结合物质，制成信号报告分子；

c)将样品、信号报告分子吸入狭槽，使样本中的待测物质与捕获探针、信号报告分子发生结合反应，使待测物和信号报告分子富集在狭槽的检测带区域；

d)通过洗涤除去未结合的信号报告分子，直接检测狭槽内表面不同检测带的荧光强度，实现对多个不同待测物的同时测定。

2、根据权利要求1所述的一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法，其特征在于，所述的特异性结合物质指抗体、抗原、抗体/抗原以外的其它结合蛋白、半抗原、核酸、寡核苷酸、亲合素、微生物中的一种或几种。

3、根据权利要求1所述的一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法，其特征在于，所述的荧光物质指稀土离子螯合物或能发出稀土离子螯合物荧光的纳米微粒。

4、根据权利要求3所述的一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法，其特征在于，所述的稀土离子螯合物指强荧光的Eu³⁺、Sm³⁺、Tb³⁺、Dy³⁺螯合物，或包裹、浸入或吸附有上述稀土离子螯合物的荧光纳米微粒。

5、根据权利要求1所述的一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法，其特征在于，所述的信号报告分子指标记有上述荧光物质的抗体、抗原、抗体/抗原以外的其它结合蛋白、半抗原、核酸、寡核苷酸、亲合素、微生物中的一种或几种。

6、根据权利要求1所述的一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法，其特征在于，所述的洗涤采用一次性的喷流方式。

7、根据权利要求1所述的一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法，其特征在于，所述的待测物质指蛋白质、核酸、寡核苷酸、农药、毒品、小分子激素、微生物中的一种或其它能与所述捕获探针和所述信号报告分子结合的物质。

8、一种用于权利要求1所述的一种基于狭槽器件的多元待测物检测方法的检测装置，其特征在于，该检测装置为一具有两个端口的槽形器件，槽形器件为上、下二端或左、右二端相通、中间呈狭槽状空腔的容器，槽形器件一端有与仪器或加样器相连的连接端口，槽形器件另一端管嘴呈吸嘴形状。

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