CN100577210C - 利用免疫应答系统的药物传递系统 - Google Patents

利用免疫应答系统的药物传递系统 Download PDF

Info

Publication number
CN100577210C
CN100577210C CN200580008728A CN200580008728A CN100577210C CN 100577210 C CN100577210 C CN 100577210C CN 200580008728 A CN200580008728 A CN 200580008728A CN 200580008728 A CN200580008728 A CN 200580008728A CN 100577210 C CN100577210 C CN 100577210C
Authority
CN
China
Prior art keywords
liposome
oligosaccharide
parcel
drug delivery
anticarcinogen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN200580008728A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1953736A (zh
Inventor
小岛直也
清水佳隆
池原让
中西速夫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ai Zhixian
Tokai University Educational System
Original Assignee
Ai Zhixian
Tokai University Educational System
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ai Zhixian, Tokai University Educational System filed Critical Ai Zhixian
Publication of CN1953736A publication Critical patent/CN1953736A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100577210C publication Critical patent/CN100577210C/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明的目的在于提供一种可以将抗癌剂等给药物质有效地聚集在靶向部位的药物传递组合物。本发明提供一种含有低聚糖包裹的脂质体和给药物质，用于将给药物质传送至靶向部位的药物传递脂质体组合物。

Description

利用免疫应答系统的药物传递系统
技术领域
本发明涉及一种使用低聚糖包裹脂质体的药物传递脂质体组合物。更详细体，本发明涉及一种使用低聚糖包裹脂质体的药物传递脂质体组合物，其特征在于于腹腔给药时，通过腹腔内巨噬细胞的摄取而传送至靶向部位。
背景技术
癌症术后的复发是阻碍提高癌症患者生存率的最大障碍，抑制该复发成为癌症临床上最重要的课题之一。认为根治手术后复发的主要原因是手术时已经扩散的游离癌细胞或肉眼不可见的微小转移引起的，检查出该微小转移并治疗，是与癌症患者的预后有直接关系的重要课题。胃癌中作为根治手术后的复发形式腹膜复发占50％以上，是决定患者预后的最重要的因素。通过目前的Golden standard、腹腔清洗细胞学诊断得出的细胞学诊断阳性的诊断意味着预后不良。
但是，发现细胞学诊断阴性的症例中腹腔复发也不少等，所以上述方法的检测灵敏度较低，检出腹膜微小转移事实上是不可能的。至今为止，建立了腹腔内游离癌细胞的高灵敏度检测法，即，使用以癌胚抗原(CEA)作为指标的RT-PCR法。自1995年开始经过8年使用临床样品进行解析的结果，明确腹膜复发的高危险性与生命预后有直接关系。现在，作为高度先进的医疗，进行腹腔内复发的危险性评价，同时研究开发用于改善胃癌患者的预后的治疗方法。
另外，抗癌剂给药时，使用脂质体能更有选择性地使抗癌剂到达癌病灶部位，达到提高治疗效果并且抑制在正常组织聚集而降低副作用的目的。脂质体血管内给药，具有在血管通透性亢进的肿瘤血管中泄漏至癌组织中，并在局部滞留的性质。因此，作为药剂传递系统，称为被动靶向。另外，利用抗体等的特异性结合能力的药物传递系统称为主动靶向。以前的方法的目的是将脂质体直接传递至癌细胞。该情形的目的是使脂质体以不被血中的巨噬细胞摄取而是随血液循环传送至癌部位。
发明内容
如上所述，腹膜微小转移的有无的检测正在变为可能，但确定腹膜微小转移的局部的方法还不存在。临床上众所周知，胃癌的主要腹腔内转移，在称为乳斑的大网膜以及散布的肠系膜结外小淋巴结(節外性小リンバ節)上产生。本发明人至今通过组合导入GFP基因的转移性细胞以及简单的GFP检测系统，建立了非侵袭地可视乳斑上产生的微小转移的微小转移小鼠模型，发现微小转移在大网膜以及肠系膜淋巴结上产生，进一步用小鼠进行实验发现在初期腹腔内转移的早期给予抗癌剂是有效的。但是，在腹腔较广的空间内给药不能达到药物的有效浓度，或欲维持有效浓度需给予高浓度的药物，而产生药物向血中转移等次要的问题，所以并不现实，现状是不存在有效的给药方法。因此，如果可以用药物传递系统将药物集中在腹膜微小转移相的局部，那么就是有效的给药方法。即，本发明要解决的技术问题是提供一种可将抗癌剂等给药物质有效地聚集在靶向部位的药物传递组合物。
本发明人为解决上述问题进行潜心研究，结果发现如果向腹腔内给予用低聚甘露糖包裹的脂质体，可非常特异且迅速地被腹腔内经常存在的巨噬细胞摄取(图1)。另外，特异地摄取该低聚甘露糖包裹的脂质体的巨噬细胞可在12小时至24小时的短时间内聚集在产生初期腹腔内转移局部的称为乳斑的大网膜以及在肠系膜淋巴结之间散布的结外淋巴结上(图2)。还发现实际上腹腔内摄取了低聚甘露糖包裹的脂质体的巨噬细胞的聚集场所与产生癌细胞的微小转移的场所相同。本发明基于这些观察到的事实而完成。
即，本发明提供一种含有低聚糖包裹的脂质体及给药物质，用于将给药物质传送至靶向部位的药物传递脂质体组合物。
低聚糖优选低聚甘露糖，更优选甘露五糖(mannopentaose)或甘露三糖。
给药物质优选药物、标记物或造影剂。
药物优选抗癌剂。
本发明的药物传递脂质体组合物，优选腹腔给药，由腹腔内的巨噬细胞摄取而传递至靶向部位。
靶向部位优选腹腔内的结外小淋巴组织或肠系膜淋巴组织。
本发明的药物传递脂质体组合物，优选与包入磁性化合物的低聚糖包裹脂质体一起组合给药。
本发明的另一方面，提供一种包括将含有低聚糖包裹的脂质体与给药物质的药物传递脂质体组合物给予包括人在内的哺乳动物，传递给药物质至靶向部位的方法。
本发明的药物传递脂质体组合物，优选与包入磁性化合物的低聚糖包裹脂质体一起组合给予包括人在内的哺乳动物之后，可从外部进行磁场照射。
附图说明
图1表示将用M3-DPPE包裹的脂质体与未用M3-DPPE包裹的脂质体给予小鼠，1小时后回收细胞观察摄取到腹腔内细胞(F4/80阳性细胞)中的结果。
图2表示用M3-DPPE包裹的脂质体向大网膜聚集的经时观察结果。
图3表示包封入了抗癌剂的糖链包裹脂质体与包封入了磁性微粒的糖链包裹脂质体吸收到大网膜内的最适摄取条件的研究结果。
图4表示将抗癌剂(5FU)给药小鼠与未给药的小鼠打开腹腔以GFP的荧光为指标观察癌的增殖的结果。
图5表示将抗癌剂(5FU)给药小鼠与未给药的小鼠打开腹腔以GFP的荧光为指标观察癌的增殖的结果。
图6表示将抗癌剂(5FU)给药小鼠与未给药的小鼠打开腹腔以GFP的荧光为指标观察癌的增殖的结果
具体实施方式
以下，对本发明的实施方式进行具体的说明。
本发明的药物传递脂质体组合物，其特征在于含有给药物质和低聚糖包裹的脂质体，用于将给药物质传递至靶向部位。更具体的是，本发明的药物传递脂质体组合物，在腹腔给药时，被腹腔内的巨噬细胞摄取而传送至靶向部位。本发明的靶向部位，优选癌的初期腹腔内转移病灶大网膜及肠系膜的结外小淋巴组织。
作为本发明中使用的低聚糖包裹的脂质体，可使用例如日本专利第2828391号公报中公开的脂质体。构成低聚糖的糖成分的种类没有特别的限制，例如可列举出：D-甘露糖(D-Man)、L-岸藻糖(L-fucose)(L-Fuc)、D-乙酰葡糖胺(D-GlcNAc)、D-葡萄糖(D-Glc)、D-半乳糖(D-Gal)、D-乙酰半乳糖胺(D-GalNAc)、D-鼠李糖(D-Rha)等。
低聚糖中，各构成糖通过α1→2结合、α1→3结合、α1→4结合、α1→6结合或β1→4结合等或者这些的组合进行结合。例如，甘露糖可以通过上述结合构成单链，也可以通过α1→3结合和α1→6结合的组合形成支链结构。低聚糖中的单糖数优选2～11个。作为具体的低聚糖，例如可列举出：甘露二糖(Man2)、甘露三糖(Man3)、甘露四糖(Man4)、甘露五糖(Man5)、甘露六糖(Man6)、甘露七糖(Man7)、各种的混合低聚糖，例如下面表示的M5(式1)以及RN(式2)等。
式1
Figure C20058000872800061
式2
Figure C20058000872800062
(式中，α1→2结合的Man，分别独立地可以存在或不存在)。
另外，作为含葡萄糖的低聚糖可列举具有式3所示结构的低聚糖，作为含N-乙酰葡糖胺的低聚糖可列举式4所示的低聚糖，作为含岩藻糖的低聚糖可列举式5所示的低聚糖。
式3
Figure C20058000872800071
(m+m’+n为1～10)
式4
Figure C20058000872800072
(n为0～4)
(p为0或1，n分别独立地为0～3。式中右侧的4GlcNAcβ1→4GlcNAc表示的2个GlcNAc残基，分别独立地可以存在或不存在。另外，(GlcNAcβ1→)n表示的每一个GlcNAc均可与右侧相邻的Man上的任何游离羟基以糖苷键键合。)
Figure C20058000872800081
(p为0或1，n分别独立地为0～3。另外，(GlcNAcβ1→)n表示的GlcNAc的任何一个均可与右侧相邻的Man上的任何游离羟基以糖苷键键合。)
Figure C20058000872800082
R为H、GlcNAc、或(GlcNAcβ1→6)p(GlcNAcβ1→3)pGal(p为0或1。)
式5
Figure C20058000872800083
(k为1～5，p分别独立地为0或1。箭头顶端没有序号的表示可与任何游离羟基以糖苷键键合。)
Figure C20058000872800084
(p分别独立地为0或1，n分别独立地为0～3。箭头顶端没有序号的表示可与任何游离羟基以糖苷键键合。另外，式中右侧的4GlcNAcβ1→4GlcNAc表示的2个GlcNAc残基，分别独立地可以存在或不存在。)
Figure C20058000872800091
(p分别独立地为0或1，n分别独立地为0～3。箭头顶端没有序号的表示可与任何游离羟基以糖苷键键合。另外，式中右侧的4GlcNAcβ1→4GlcNAc表示的2个GlcNAc残基，分别独立地可以存在或不存在。)
本发明中使用的低聚糖优选低聚甘露糖，特别优选甘露五糖或甘露三糖。
上述低聚糖都具有1个还原末端醛基。因此，该醛基可以作为将低聚糖导入到脂质体表面的一个手段。即，该醛基与具有氨基的脂质之间发生反应形成希夫氏碱，继而根据常法将该希夫氏碱还原，优选化学还原，例如用NaBH3CN还原，从而可以使低聚糖与脂质结合(水落次男，糖质工学，224-232页，产业调查会Biotechnology情报中心，1992)。
上述具有氨基的脂质，优选具有氨基的磷脂，例如磷脂酰胺，如可使用二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)等。如上所述得到的低聚糖与脂质的结合物在本发明中有时称为人工糖脂质。
作为构成脂质体的脂质，可单独使用或组合使用多种用于构成脂质体的已知的任意常用的脂质。例如天然物，如可使用蛋黄、大豆，或其他的从动植物得到的脂质，这些脂质经修饰的脂质，例如通过氢化降低不饱和度的脂质，或化学合成的脂质。具体的例如可列举出甾醇类，如胆固醇(Chol)；磷脂酰乙醇胺类，如二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)；卵磷脂类，如二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)；磷脂酰丝氨酸类，如二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸(DPPS)、二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸(DSPS)；磷脂酸类，如二棕榈酰基磷脂酸(DPPA)、二硬脂酰基磷脂酸(DSPA)等。
可使公周知的方法[D.W.Deeamer，P.S.Uster，“Liposome”ed.ByM.J.Ostro，Marcel Dekker Inc.，N.Y.Basel，1983，p27]制备脂质体。涡旋法以及超声法为一般的方法，其他的可采用乙醇注入法、醚法以及反相蒸发法等，也可将这些方法组合使用。
例如，涡旋法以及超声法中，将预定的脂质溶于有机溶剂，如甲醇、乙醇、氯仿或这些的混合物例如甲醇和氯仿的混合物中，然后蒸发除去该有机溶剂而得到脂质薄层。接着，往该脂质薄层中加入水性介质通过涡旋处理或超声处理形成脂质体。此时，在上述水性介质中混入药物、标记物或造影剂等给药物质，通过例如溶解或混悬，可将该给药物质包入脂质体中。
为了往脂质体表面导入低聚糖，例如可采用下面2种方法中的任何一种。上述的人工糖脂为水溶性而在有机溶剂中不能充分溶解时，例如使用上述的M5与DPPE的结合物(M5-DPPE)、RN与DPPE的结合物(RN-DPPE)时，可制备它们的水性溶液，将该水性溶液与形成的脂质体混合，在例如4℃至室温下保温24～120小时，如可孵化72小时即可。
另一方面，在有机溶剂中溶解人工糖脂时，可将该人工糖脂与用于构成脂质体的脂质一起在脂质体制备过程中如上所述地溶解在有机溶剂中，然后按照常规方法形成脂质体。相对于脂质体的量，低聚糖的量根据低聚糖的种类，欲包入的抗原的种类，脂质体的组合结构等而不同，一般相对于构成脂质体的脂质1mg，为5μg～500μg。
本发明中使用的脂质体，可为多层型(multilamella vesicle)或单层型(unilamella vesicle)。可根据已知的常规方法制备这些脂质体，并可按照常规方法将一种类型转换为另一种类型，例如将多层脂质体转换为单层脂质体。本发明中使用的脂质体的粒径没有特别的限制，可根据需要按照常规方法，例如可通过具有所需孔径的过滤器过滤来调整粒径。
本发明中使用的给药物质，优选药物、标记物、或造影剂。作为药物，可列举：抗癌剂、癌症疫苗、抗原肽、免疫活化剂(溶血链球菌(Picibanil)等)、细胞因子、血管新生抑制剂等。
本发明中可使用的抗癌剂的种类没有特别的限制，可列举出：烷化剂(例如环磷酰胺、盐酸尼莫司汀(nimustine hydrochloride)、异环磷酰胺(ifosfamicle)、雷莫司汀(ranimustine)、三胺硫磷(thiotepa)、美法仑(melphalan)、白消安(busulfan)、达卡巴嗪(dacarbazine)、卡波醌(carboguone)、盐酸甲基苄肼(procabazine hydrochloride)等)、抗代谢药(例如阿糖胞苷(cytarabine)、替加氟(tegafur)、阿糖胞苷酯(cytarabineoctosfate)、依诺他滨(enocitabine)、磷酸氟达拉滨(fludarabinephosphate)、左亚叶酸钙(levofolinate calcium)、盐酸吉西他滨(gemcitabine hydrochloride)、氨甲蝶呤(folinate calcium)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、卡莫氟(carmofur)、6-氨甲蝶呤核苷(6-mercaptopurine riboside)、羟基脲(hydroxycarbamide)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、亚叶酸钙(folinate calcium)、去氧氟尿苷(doxifluridine)等)、分子靶向治疗药物(酪氨酸激酶抑制剂)或生物碱(硫酸长春新碱、硫酸长春地辛、硫酸长春碱等)。
作为标记物，可列举GFP等荧光蛋白质、氟·脱氧·葡萄糖等。作为造影剂，可列举出：非离子性水溶性碘造影剂、水溶性碘造影剂、低渗透压水溶性碘造影剂等。
相对于脂质体的量，给药物质的量只要可以得到本发明的效果，即给药的脂质体组合物被腹腔内的巨噬细胞摄取而传送至靶向部位，则给药物质的量并无特别限制，可根据给药物质的种类或脂质体的组成或构造等适宜地设定。一般地，相对于构成脂质体的脂质1mg，给药物质的量为1μg～100μg。
本发明的脂质体组合物，根据需要可含有药学上允许的载体。作为载体，可使用灭菌水、缓冲液或食盐水。另外，本发明的脂质体组合物，根据需要也可以含有盐类、糖类、蛋白质、淀粉、明胶、植物油以及聚乙二醇等。
本发明的脂质体组合物的给药途径没有特别的限制，可优选腹腔给药。本发明的脂质体组合物的给药量，根据给药物质的种类、给药途径、症状的严重程度、患者的年龄以及状态、副作用的程度等变化，一般为0.1～100mg/kg/日的范围。
本发明的脂质体组合物给药时，可与包入了磁性化合物的低聚糖包裹的脂质体一起组合给药。作为本发明中使用的磁性化合物，优选使用在磁场中可发热或振动的磁性微粒。此时，可将含抗癌剂和低聚糖包裹的脂质体的脂质体组合物以及含磁性化合物和低聚糖包裹的脂质体的脂质体组合物混合而得到的混合物给药至杨体。此时，通过外加外部磁场，可将抗癌剂从摄取到大网膜上的吞噬了该脂质体组合物的巨噬细胞中释放出来，因此可有效地抑制转移到该部位的肿瘤组织。
下面对本发明的药物传递脂质体组合物的利用方法进行说明。
(1)以腹腔内巨噬细胞作为转运载体，向腹腔内结外淋巴组织转运抗癌剂的药物传递系统
将M3脂质体(包入FITC-BSA)腹腔给药，随时间经过其向大网膜以及肠系膜淋巴组织(乳斑)聚集。腹腔内的免疫系统被破坏的小鼠，脂质体有一部分传送至脾脏，在没有被破坏的情形下，完全没有发现脾脏内存在的巨噬细胞进行摄取。因此，若往该脂质体内包入抗癌剂，则抗癌剂可聚集到腹腔内淋巴结上产生的转移初期病变的部位并发挥作用。有效的抗癌剂大多具有较强的副作用，为改善这点设计了各种药物传递系统。抗肿瘤效果一般依赖于肿瘤内的药物浓度，因此通过使用M3脂质体而可在肿瘤局部聚集的技术，作为抗癌剂传递系统可广泛地利用。本发明的系统，以下述3个基于免疫学机理的步骤为基础。
(i)表面含有甘露糖的M3脂质体被遇到的巨噬细胞特异地、迅速地吞噬，并蓄积到溶酶体中。
(ii)甘露糖受体介导的细胞内摄取使巨噬细胞活化，由于该活化，巨噬细胞为了进行抗原呈递而在局部淋巴结边缘窦聚集。
(iii)到达淋巴结的巨噬细胞将溶酶体不能消化的物质排列接触面细胞之外。
通过使用该方法，可有效地将高浓度的抗癌剂聚集于肿瘤局部，聚集后抗癌剂经过较长时间缓慢地从巨噬细胞排出，由此可以只将肿瘤局部长时间暴露在抗癌剂中。进一步通过对聚集的巨噬细胞从体外施加热等控制的压力，可积极且主动地排出。
(2)以腹腔内巨噬细胞作为转运载体，向腹腔内结外淋巴组织转运癌疫苗的传递系统
低聚糖包裹的脂质体的使用，是也可用于癌疫苗的技术。癌疫苗的效果，认为如何有效地向抗原呈递细胞输入癌抗原的抗原情报，可否更有效地诱导攻击癌细胞的免疫活性方面是很重要的。在这方面，如果在低聚甘露糖包裹的脂质体中包入癌抗原及免疫激活剂，然后散布在腹腔内，则这些药物由巨噬细胞传送，到达癌的转移灶所在部位的淋巴组织，可在局部使免疫活性亢进。之前的癌免疫疗法存在问题，由于免疫反应的活化不充分使疫苗的效果较弱，这可通过癌病灶局部的抗肿瘤免疫活化而改善。
(3)通过包入了荧光物质等的低聚甘露糖包裹脂质体检测初期腹腔内转移危险部位
藉由采用了RT-PCR法的高灵敏度检验法可确认腹腔内游离癌细胞的存在，即使在判断腹膜微小转移可能性较高的情况下，生存率仍为50％左右。这与不能确定腹膜微小转移局部不无关系。因为事实上摄取了低聚甘露糖包裹的脂质体的巨噬细胞的聚集场所与产生癌细胞的微小转移的场所相同，所以通过将包入了荧光蛋白质等手术中容易识别的物质的脂质体在手术前24小时前给药，可检出腹膜微小转移的高发部位，从而可以预防性地以最小限度的侵袭进行切除。
(4)其他的应用
(A)在对癌淋巴结转移的治疗上的应用
近年正在增加的乳腺癌中，淋巴结转移是对患者预后有较大影响的一个方面，原因是即使在广范围内切除淋巴结预后也未得到改善，主要的治疗方法正在向缩小手术与化学疗法的组合转变。乳腺癌中，腋下、锁骨上窝、胸骨旁淋巴结为局部淋巴结，因此时常发现来自这些部位的复发。通过将包入了抗癌剂的M3脂质体，或包入了作为癌免疫疗法的癌抗原及免疫激活剂的M3脂质体，在手术后注入至病灶附近，期待通过巨噬细胞有效地将药剂送达至局部淋巴结，从而期待药物疗法的更好的效果。基于同样的机理，也适用于其他的易转移至淋巴结的癌症即黑素瘤、甲状腺癌、肺癌的治疗。
(B)对血液系统肿瘤的适应
血液系统肿瘤中，以表现出单核细胞、巨噬细胞类的分化的肿瘤为治疗适应对象。发果本发明的M3脂质体中包入的抗癌剂具有高的分子靶向性，则尽管有被肿瘤以外的巨噬细胞摄取的情形，但仍可减轻副作用，可以期待其仅对肿瘤细胞产生药效。
以下通过实施例进一步具体地说明本发明，本发明并不局限于实施例。
实施例
实施例1：低聚糖包裹的脂质体的制备方法以及药物、标记物或造影剂的包入方法
根据以下的方法，使甘露五糖(M5)(化1所示化合物)或甘露三糖(M3)(具有Manα1→6(Manα1→3)Man结构的甘露三糖(Man3))和二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)发生还原氨化反应进行化学结合，从而合成M5-DPPE以及M3-DPPE。
首先，往甘露五糖(M5)或甘露三糖(M3)2.5mg中加入600μl蒸馏水并搅拌溶解制备低聚糖溶液。然后，在氯仿/甲醇(1∶1，体积比)混合物中以5mg/ml的浓度溶解DPPE制备DPPE溶液。在甲醇中以10mg/ml的浓度溶解NaBH3CN制备NaBH3CN溶液。往上述低聚糖的各溶液600μl中加入上述DPPE溶液9.4ml以及上述NaBH3CN溶液1ml并搅拌混合。将该反应混合液于60℃下保温16小时，生成人工糖脂。合成的人工糖脂采用HPLC进行高纯度精制。
如下制备包入用TRITC标记的蛋白质(实施例2)或者用FITC或若丹明标记的蛋白质(实施例3)的脂质体。
首先，将以1∶1∶0.1的比例混合二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、胆固醇以及人工糖脂(M5-DPPE或M3-DPPE)的氯仿/甲醇溶液或乙醇溶液装入梨形瓶中，用旋转蒸发仪在减压下使其干固，制备脂质薄膜。然后，往脂质薄膜中加入含有用TRITC标记的蛋白质(实施例2)或者用FITC或若丹明标记的蛋白质(实施例3)的PBS溶液(5mg/ml)0.3ml，使用涡旋混合器激烈搅拌，制备M5-DPPE包裹的脂质体或M3-DPPE包裹的脂质体。作为用TRITC标记的蛋白质或者FITC或若丹明标记的蛋白质，使用FITC-BSA或者TRITC-BSA。
然后，以PBS数次清洗脂质体，通过离心除去未包入到脂质体中的可溶性物质。进一步使用1μm的滤膜调整脂质体的粒径。包入蛋白质的量通过蛋白质定量，脂质体中的脂质组成比以及药物采用HPLC定量。
实施例2：被巨噬细胞摄取的评价方法及简单的结果说明
将包入了用TRITC标记的BSA的M5-DPPE包裹脂质体或M3-DPPE包裹脂质体(作为胆固醇为100微克)对小鼠腹腔给药，在30分钟、60分钟、120分钟、180分钟后通过常规方法回收腹腔内细胞。将回收的细胞用FITC标记的抗CD11c抗体或F4/80染色，然后使用FACS测定摄取到细胞中的若丹明以及细胞表面抗原(FITC)的荧光强度。
图1为用M3-DPPE包裹的脂质体以及未用M3-DPPE包裹的脂质体给药1小时后回收细胞观察腹腔内细胞摄取的结果。给药M3-DPPE包裹的脂质体时，巨噬细胞的标记物，即，用F4/80染色的细胞的78％具有TRITC的强荧光，所以可确定巨噬细胞摄取了包入用TRITC标记蛋白质的M3-DPPE包裹脂质体。另外，给药未用M3-DPPE包裹的脂质体时完全不能看见摄取行为。如图1下部分所示，M3-DPPE包裹的脂质体以颗粒状被摄取到巨噬细胞中。
实施例3：巨噬细胞或者脂质体向靶向部位聚集的评价方法及简单的说明
将包入了用FITC或若丹明标记的蛋白质的M3-DPPE包裹脂质体100微克(按胆固醇换算)用生理盐水稀释，将总量0.5毫升接种到裸小鼠腹腔内。然后经时地(3小时、6小时、12小时、24小时)处死小鼠，并观察。打开小鼠腹腔后，用蓝色光(150W卤素光源，LGPS-2上装有420-480的带通滤波器的装置)照射包含小鼠腹腔内的大网膜的上腹部，用装有黄色滤波器(通过500nm以上波长可见光的长通滤波器)的立体显微镜(Olympus GFP Specific Checker，SZ40-GFP)在暗视野下以M3脂质体向大网膜上聚集为绿色(FITC)，通过数码相机导入计算机并进行评价。
当为若丹明时，150W卤素光源，使用带通滤波器545-580，使用长通滤波器(590nm以上)作为吸收滤波器进行观察。
图2为经时观察M3-DPPE包裹的脂质体向大网膜聚集的图。确认3小时后开始聚集，12小时后表现出最大聚集，之后至24小时为止仍有聚集。结外淋巴组织形成少的γδT细胞缺失小鼠中几乎未看到聚集，所以明确M3-DPPE包襄的脂质体聚集在结外淋巴组织。另一方面，完全没有发现未用M3-DPPE包裹的脂质体的聚集。
实施例4：包入了抗癌剂的脂质体及包入了磁性微粒的脂质体对胃癌腹膜转移的抗癌效果的确认实验
(1)通过将包入了抗癌剂的糖链包裹脂质体及包入了磁性微粒的糖链包裹脂质体混合给药使脂质体向大网膜上聚集
分别制备包入抗癌剂的糖链包裹脂质体(5FU 120μg/ml，胆固醇2mg/ml)以及包入磁性微粒的糖链包裹脂质体(磁铁矿1.5mg/ml，胆固醇2mg/ml)，按以下所示的比例混合，并对小鼠进行腹腔给药。24小时后，摘取小鼠大网膜，测定其中含有的5FU以及铁离子(图3)。
A：含240μg胆固醇的M3/5-FU
含20μg胆固醇的M3/ML
B：含320μg胆固醇的M3/5-FU
含40μg胆固醇的M3/ML
C：含480μg胆固醇的M3/5-FU
含20μg胆固醇的M3/ML
D：含480μg胆固醇的M3/5-FU
含40μg胆固醇的M3/ML
5-FU浓度：120μg/ml；M3/ML浓度：1.5mg/ml；胆固醇：2mg/ml
结果表明，包入抗癌剂的糖链包裹脂质体以240μg胆固醇，包入磁性微粒的糖链包裹脂质体以20μg胆固醇的形式混合给药时，聚集效率最好。
(2)研究上述条件之后，进行抗癌效果的研究
首先，将导入了GFP的胃癌细胞株MKN28投入3×106裸小鼠的腹腔内。以24小时后GFP的荧光作为指标确认癌细胞的生存，往确认有生存的小鼠腹腔内，将包入了抗癌剂的糖链包裹脂质体以240μg胆固醇，包入了磁性微粒的糖链包裹脂质体以20μg胆固醇的形式混合给药。脂质体给药24小时后，以交变磁照射装置(第一高频制造)、高频感应加热装置(富士电波工机株式会社制造，型号F1H-153HH、输出功率：15Kw、400KHz)进行交变磁场照射30分钟。然后经1周之后，打开小鼠腹腔以GFP的荧光为指标观察癌的增殖，同时测定肿瘤的重量。上述方法以及结果如图4～图6所示。相对于对照小鼠的肿瘤重量36.6mg，用抗癌剂(5FU)处理的小鼠肿瘤重量为5.2mg，通过给药本发明的脂质体可显著地抑制肿瘤重量。另外，由GFP的荧光观察也发现经抗癌剂(5FU)处理的小鼠癌增殖得到抑制。
工业适用性
本发明可提供一种药物传递脂质体组合物，其可使抗癌剂等给药物质高效地聚集到靶向部位并释放。

Claims (5)

1.含有给药物质和低聚糖包裹的脂质体的药物传递脂质体组合物在制备腹腔给药用药物中的应用，其中给药物质为抗癌剂、癌症疫苗、抗原肽、免疫活化剂、细胞因子、血管新生抑制剂、标记物或造影剂，低聚糖为低聚甘露糖。
2.根据权利要求1所述的应用，其中低聚糖为甘露五糖或甘露三糖。
3.根据权利要求1所述的应用，其中给药物质为抗癌剂。
4.根据权利要求1所述的应用，其中药物传递脂质体组合物通过腹腔给药，由腹腔内的巨噬细胞摄取而传送至靶向部位。
5.根据权利要求4所述的应用，其中靶向部位为腹腔内的癌初期腹腔内转移病灶大网膜或肠系膜的结外小淋巴结。
CN200580008728A 2004-03-17 2005-03-17 利用免疫应答系统的药物传递系统 Expired - Fee Related CN100577210C (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2004076804 2004-03-17
JP076804/2004 2004-03-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1953736A CN1953736A (zh) 2007-04-25
CN100577210C true CN100577210C (zh) 2010-01-06

Family

ID=34975301

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200580008728A Expired - Fee Related CN100577210C (zh) 2004-03-17 2005-03-17 利用免疫应答系统的药物传递系统

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20080020029A1 (zh)
JP (1) JPWO2005087196A1 (zh)
KR (1) KR20070057701A (zh)
CN (1) CN100577210C (zh)
CA (1) CA2559800A1 (zh)
HK (1) HK1105861A1 (zh)
WO (1) WO2005087196A1 (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005092288A1 (en) * 2004-03-19 2005-10-06 Let There Be Hope Medical Research Institute Carbohydrate-derivatized liposomes for targeting cellular carbohydrate recognition domains of ctl/ctld lectins, and intracellular delivery of therapeutically active compounds
WO2005107712A1 (en) 2004-05-03 2005-11-17 Hermes Biosciences, Inc. Liposomes useful for drug delivery
WO2007018272A1 (ja) * 2005-08-11 2007-02-15 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology 糖鎖修飾リポソーム及び該リポソームを含有する薬剤送達組成物
JP2007223966A (ja) * 2006-02-24 2007-09-06 Pentax Corp 細胞表面又は組織表面染色剤組成物及びこれを用いた染色方法
JP2008179563A (ja) * 2007-01-24 2008-08-07 Cosmo Shokuhin Kk 有用リン脂質組成物を含む機能性素材及び機能性食品
KR100945271B1 (ko) * 2007-12-28 2010-03-04 에치엔지화장품주식회사 유효성 보존 기간이 개선된 나노 막 리포솜
AU2008361497B2 (en) * 2008-09-04 2014-07-17 Takeshi Kobayashi Methods and kits for hyperthermia and CTLA4 inhibitory therapy
JP6062360B2 (ja) * 2011-05-02 2017-01-18 株式会社バイオメッドコア 改良された糖被覆リポソーム組成物
WO2012153493A1 (ja) * 2011-05-06 2012-11-15 国立大学法人東京工業大学 赤外域光による光線力学的治療又は診断剤
AU2016298606A1 (en) * 2015-07-27 2018-02-22 Augustus Biotarget, Inc. Immunotherapies for malignant, neurodegenerative and demyelinating diseases by the use of targeted nanocarriers
MA42991A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Ipsen Biopharm Ltd Stabilisation de compositions pharmaceutiques de camptothécine

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4356167A (en) * 1978-01-27 1982-10-26 Sandoz, Inc. Liposome drug delivery systems
FR2596651B1 (fr) * 1986-04-08 1989-11-10 Centre Nat Rech Scient Nouveaux liposomes a base de phosphatidylinositolmannosides, et compositions pharmaceutiques les contenant
JP2828391B2 (ja) * 1993-10-29 1998-11-25 東燃株式会社 オリゴ糖を表面に有するリポソーム
JP2001081044A (ja) * 1999-09-14 2001-03-27 Tokai Univ リポソームおよびそれからなるワクチン
US20060193906A1 (en) * 2002-01-30 2006-08-31 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Sugar-modified liposome and products comprising the liposome

Also Published As

Publication number Publication date
US20080020029A1 (en) 2008-01-24
WO2005087196A1 (ja) 2005-09-22
HK1105861A1 (en) 2008-02-29
JPWO2005087196A1 (ja) 2008-01-24
CN1953736A (zh) 2007-04-25
CA2559800A1 (en) 2005-09-22
KR20070057701A (ko) 2007-06-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100577210C (zh) 利用免疫应答系统的药物传递系统
Lai et al. Light‐triggered efficient sequential drug delivery of biomimetic nanosystem for multimodal chemo‐, antiangiogenic, and anti‐mdsc therapy in melanoma
Rychahou et al. Delivery of RNA nanoparticles into colorectal cancer metastases following systemic administration
Xia et al. Low molecular weight heparin-coated and dendrimer-based core-shell nanoplatform with enhanced immune activation and multiple anti-metastatic effects for melanoma treatment
Wahab et al. Current trends and future perspectives of nanomedicine for the management of colon cancer
Song et al. Self-assembled polymeric nanocarrier-mediated co-delivery of metformin and doxorubicin for melanoma therapy
CN103221070A (zh) 用于狭窄病变和溶解血栓疗法的切变控制释放
CN106794164A (zh) 脂质体包封的亲和性药物
CN102630175B (zh) Spla2可水解脂质体的医药用途
JP2003530362A (ja) 診断剤をターゲッティングするための脂質ベースの系
Jiang et al. Combating multidrug resistance and metastasis of breast cancer by endoplasmic reticulum stress and cell-nucleus penetration enhanced immunochemotherapy
Han et al. Therapeutic efficacy of doxorubicin delivery by a CO2 generating liposomal platform in breast carcinoma
Jeong et al. Effect of space length of mannose ligand on uptake of mannosylated liposome in RAW 264.7 cells: In vitro and in vivo studies
CN110152012A (zh) 聚唾液酸与阳离子化合物形成的聚离子复合物及其制备方法和应用
WO2005011633A1 (ja) 標的指向性リポソームを含む炎症性疾患治療薬または診断薬
Sadoughi et al. The potential role of chitosan‐based nanoparticles as drug delivery systems in pancreatic cancer
US20230054210A1 (en) Compositions and methods for nanoparticle-based drug delivery and imaging
CN111888336A (zh) 碳酸钙聚(乳酸-羟基乙酸)复合物微粒及其制备和应用
CN101208075A (zh) 用于诱导免疫的脂质体组合物
WO2005011632A1 (ja) 糖鎖を有する標的指向性および腸管吸収制御性リポソームならびにそれを含む癌治療薬および診断薬
de Morais et al. Stable dipalmitoylphosphatidylcholine liposomes coated with an F127 copolymer for hypericin loading and delivery
CN102319214B (zh) 去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物的脂质微球注射液及制备方法
CN104203251B (zh) 内包紫杉醇单糖苷和/或紫杉萜单糖苷的脂质体的制造方法
Santos et al. Osteosarcoma from the unknown to the use of exosomes as a versatile and dynamic therapeutic approach
CN106554425B (zh) 一种聚唾液酸的脂质接枝衍生物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1105861

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1105861

Country of ref document: HK

C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20100106

Termination date: 20130317