CN100560730C

CN100560730C - 一种类肝素的制备方法

Info

Publication number: CN100560730C
Application number: CNB2007100138238A
Authority: CN
Inventors: 杨清宝; 齐东绮; 杨晓兵; 由守谊
Original assignee: 由守谊
Current assignee: YANTAI DONGCHENG PHARMACEUTICAL GROUP CO., LTD.
Priority date: 2007-03-16
Filing date: 2007-03-16
Publication date: 2009-11-18
Anticipated expiration: 2027-03-16
Also published as: CN101033480A

Abstract

本发明公开了一种类肝素的制备方法，该方法是以健康动物的带软骨的肺为原料，经过脏器预处理、酶解、去杂蛋白、乙醇沉淀、溶解、脱色、乙醇沉淀干燥、磺化反应、乙醇沉淀、溶解、脱色和乙醇沉淀干燥而得到的，采用本发明方法得到的类肝素具有采用动物肺为原料、生产工艺简化、易于掌握、制备的类肝素分子量范围稳定、杂质含量低的特点。

Description

一种类肝素的制备方法

技术领域

本发明属于化工技术领域，涉及到一种生化药物类肝素的制备方法。

背景技术

类肝素(heparinoid)是在结构上与肝素由一定程序的类似、具有抗凝血活性的粘多糖。它是近十几年来发展起来的药物，它具有显著的抗炎活性。最新研究表明，类肝素对于整个炎症过程都有抑制作用，包括：

(1)通过与选择素的特异性结合来抑制白细胞沿血管内皮滚动的产生从而抑制炎症的初始过程。

(2)通过抑制内皮细胞表达黏附分子和能激活白细胞的化学因子，来抑制白细胞和内皮细胞之间的黏附，从而抑制炎症过程。

(3)类肝素能抑制补体激活级联放大系统的早期步骤，能够防止过敏毒素的形成，使得它成为有吸引力的补体抑制剂。

(4)类肝素还能加速分泌型白细胞蛋白抑制剂及黏液蛋白酶抑制剂对组织蛋白酶的抑制。

目前已有采用壳聚糖、魔芋、藻类、香豆胶生产类肝素的文献报道。关于类肝素的发明专利已有报道，例如中国专利88109686.5制取古罗糖醛酸丙酯硫酸酯钠盐的工艺，该专利技术公开的是一种由植物提取物经化学修饰而成的类肝素，该方法要对植物提取物经过水解、酯化、磺化等步骤，步骤复杂，操作控制点难于掌握。

发明内容

本发明的目的在于改进已有技术存在的缺点而提供一种采用动物肺为原料、生产工艺简化、易于掌握、制备的类肝素分子量范围稳定、杂质含量低的类肝素制备方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：本发明以动物带气管的脏器为原料，利用可控制的磺酸化方法进行修饰，制备类肝素，其制备工艺步骤如下：以健康动物的带软骨的肺为原料，是将脏器加入氯化钠预处理，预处理后的原料加入胰酶酶解得到上清液、上清液在碱性环境下加入氯化钙和碳酸钠去杂蛋白得滤液、滤液在中性条件下乙醇沉淀、沉淀加入纯化水溶解、加入氯化钠和过氧化氢脱色、滤液在中性条件下乙醇沉淀干燥得到类肝素粗品、类肝素粗品经过磺化反应、沉淀加入纯化水溶解、加入氯化钠和过氧化氢脱色、滤液在中性条件下乙醇沉淀干燥得到类肝素。

本发明生产工艺制得的类肝素的主要理化指标如下：

外观：微黄的白色粉末

比旋：-11.7°～-14.7°

pH：6.0～7.0

氮：1.6～2.0％

干燥失重：≤5％

炽灼残渣：38％～48％

重金属：≤20ppm

D-葡萄糖醛酸：19.0～24.0％

有机硫酸根：25.8～37.3％

400nm透过率＞90％(10％溶液)

600nm透过率＞95％(10％溶液)

具体实施方式

实施例1，一种类肝素的制备方法，是以健康动物的带软骨的肺为原料，本实施例采用健康猪的带软骨的肺，是将肺加入氯化钠预处理，预处理后的原料加入胰酶酶解得到上清液、上清液在碱性环境下加入氯化钙和碳酸钠去杂蛋白得滤液、滤液在中性条件下乙醇沉淀、沉淀加入纯化水溶解、加入氯化钠和过氧化氢脱色、滤液在中性条件下乙醇沉淀干燥得到类肝素粗品、类肝素粗品经过磺化反应、沉淀加入纯化水溶解、加入氯化钠和过氧化氢脱色、滤液在中性条件下乙醇沉淀干燥得到类肝素，上述制备过程采用的酶解、去杂蛋白、乙醇沉淀、溶解、脱色和磺化反应都是在常规已有技术下进行。

实施例2，一种类肝素的制备方法，是将健康猪的带软骨的肺20kg绞碎投入反应罐中，加入10kg的水和0.2kg的氯化钠，浸泡8h；升温至60℃，用20％氢氧化钠溶液调节pH8.0～8.5，加入原料重量0.1kg的胰酶，酶解12h，用6mol/L盐酸调节pH6.0～7.0，升温至80～85℃，保温30min使酶灭活，过滤，分离上清液和沉淀；上清液调节pH9.0～9.5，添加150g氯化钙，反应30min，添加150g碳酸钠继续反应30min，过滤；滤液用6mol/L盐酸调节pH6.0～7.0，添加乙醇至溶液乙醇浓度至60％(20℃)，收集沉淀；用纯化水溶解沉淀使浓度至20％，添加重量/溶液体积(W/V)比为1.5％氯化钠及溶液体积/溶液体积比(V/V)为1.5％过氧化氢，调节pH9.5～10.5，反应24h，过滤；滤液用6mol/L盐酸调节pH 6.0～7.0，添加乙醇在温度20℃下乙醇浓度至60％，进行乙醇沉淀，收集沉淀，用乙醇洗涤，干燥得类肝素粗品；类肝素粗品加3倍量甲酰胺，溶解，另将1倍量氯磺酸和2倍量甲酰胺预先混合，将类肝素粗品的甲酰胺溶液加入至氯磺酸-甲酰胺溶液中，30℃反应8h；加入4倍体积的乙醇终止反应，过滤，收集沉淀；用纯水溶解沉淀使浓度至20％，添加重量/溶液体积(W/V)比为1.5％氯化钠及溶液体积/溶液体积比(V/V)为1.0％过氧化氢，调节pH9.5～10.5，反应24h，过滤；滤液加3倍体积乙醇沉淀，收集沉淀物用无水乙醇洗涤2～4遍，干燥，得类肝素产品。

实施例3，一种类肝素的制备方法，是取健康牛的带软骨的肺80kg绞碎投入反应罐中，加入120kg的水和4800g的氯化钠，浸泡12h；升温至50℃，用15％氢氧化钠溶液调节pH8.0～8.5，加入0.8kg的胰酶，酶解8h，用6mol/L盐酸调节pH6.0～7.0，升温至80～85℃，保温30min使酶灭活；过滤，分离上清液和沉淀；上清液调节pH9.0～9.5，添加3kg氯化钙，反应30min，添加3kg碳酸钠继续反应30min，过滤；滤液用6mol/L盐酸调节pH6.0～7.0，添加乙醇至溶液乙醇浓度在温度20℃至60％，收集沉淀；用纯化水溶解沉淀使浓度至40％，添加1.5％氯化钠(W/V)及1.5％过氧化氢(V/V)，调节pH9.5～10.5，反应24h，过滤；滤液用6mol/L盐酸调节pH6.0～7.0，添加乙醇至乙醇浓度在温度20℃至60％，进行乙醇沉淀，收集沉淀，用乙醇洗涤，干燥得类肝素粗品；类肝素粗品加5倍量甲酰胺，溶解，另将2倍量氯磺酸和5倍量甲酰胺预先混合，将类肝素粗品的甲酰胺溶液加入至氯磺酸-甲酰胺溶液中，20℃反应8h；加入4倍体积的乙醇终止反应，过滤，收集沉淀；用纯水溶解沉淀使浓度至40％，添加1.5％氯化钠(W/V)及1.0％过氧化氢(V/V)，调节pH 9.5～10.5，反应24h，过滤；滤液加3倍体积乙醇沉淀，收集沉淀物用无水乙醇洗涤2～4遍，干燥，得类肝素产品。

Claims

1、一种类肝素的制备方法，其特征是该方法包括以下步骤：

a、将健康动物的带软骨的肺投入反应罐中，加入投入肺的重量0.5～1.5倍的水，再加入投入水的重量2％～4％的氯化钠，浸泡8～12小时；

b、升温至50～60℃，调节pH值为8.0～8.5，加入原料重量0.2％～1％的胰酶，酶解8～12小时，然后调节pH值为6.0～7.0，升温至80～85℃，保温30分钟使酶灭活，过滤，分离上清液和沉淀；

c、上清液调节pH值为9.0～9.5，添加1.5～2.5％W/V的氯化钙，反应30分钟，添加1.5～2.5％W/V的碳酸钠继续反应30分钟，过滤；

d、滤液调节pH值为6.0～7.0，添加乙醇至溶液乙醇浓度在20℃条件下为60％，收集沉淀；

e、用纯化水溶解沉淀使浓度至20～40％W/V，添加1.5％W/V的氯化钠及1.5％V/V的过氧化氢，调节pH值为9.5～10.5，反应24小时，过滤；

f、滤液调节pH值为6.0～7.0，添加乙醇至乙醇浓度在20℃条件下为60％，进行乙醇沉淀，收集沉淀，用乙醇洗涤，干燥得类肝素粗品；

g、类肝素粗品加3～5倍量甲酰胺，溶解，另将1～2倍量氯磺酸和2～5倍量甲酰胺预先混合，将类肝素粗品的甲酰胺溶液加入至氯磺酸-甲酰胺溶液中，20～30℃反应4～8小时；

h、加入4倍体积的乙醇终止反应，过滤，收集沉淀；

i、用纯水溶解沉淀使浓度至20～40％W/V，添加1.5％W/V的氯化钠及1.0％V/V的过氧化氢，调节pH值为9.5～10.5，反应24小时，过滤；

j、滤液加3倍体积乙醇沉淀，收集沉淀物用无水乙醇洗涤2～4遍，干燥，得类肝素产品。