CN100522987C - 蛇目白尼参中的一种皂苷类抗肿瘤化合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体为从蛇目白尼参中分离的一种皂苷类抗肿瘤化合物Arguside B或Arguside C，化学结构式通式为：其中R₁表示OH或H；R₂表示CH₃或CH₂OH；当R₁为OH、R₂为CH₃时，化合物为Arguside B；当R₁为H、R₂为CH₂OH时，化合物为Arguside C。经多种现代光谱分析，特别是综合应用多种先进的二维核磁共振波谱的解析，确定了这两种化合物的化学结构和立体构型。体外抗肿瘤实验表明，这两种化合物对A-549人肺癌和MCF-7(乳腺癌)等7种人肿瘤细胞株有明显的抑制作用。因此可用于制备抗肿瘤药物。本发明为研制新的抗肿瘤药物提供先导化合物，对开发利用中国的海洋药用生物资源具有重要价值。

Description

蛇目白尼参中的一种皂苷类抗肿瘤化合物

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是从海洋动物蛇目白尼参中分离到的皂苷类新的抗肿瘤化合物Arguside B和C。

背景技术

蛇目白尼参(Bohadschia argus Jaeger)是一种大量生长于我国南海海域的海参纲动物，属海参科白尼参属。体长一般40～50cm，宽约10cm，体呈圆筒状。背面有许多蛇目状斑纹，排列为不规则的纵行。蛇目白尼参是一种大形食用海参。有关所含的皂苷类成分的化学结构及抗肿瘤活性迄今尚未见有过报道。

发明内容

本发明提供一种从生长于中国海南省南海海域的蛇目白尼参中提取分离到的新的皂苷类化合物，分别命名为Arguside B和Arguside C，它们的化学结构式通式如下：

其中R₁表示OH或H

R₂表示CH₃或CH₂OH

当R₁为OH R₂为CH₃时，化合物为Arguside B

当R₁为H R₂为CH₂OH时，化合物为Arguside C

本发明化合物的制备方法如下：

(1)制备总皂苷提取物：将蛇目白尼参干品粉碎，按常规用50％～90％乙醇浸泡提取，浓缩提取液，得到流浸膏。将流浸膏均匀分散于水中，依次用石油醚、水饱和正丁醇分别萃取。将正丁醇萃取液浓缩至干，得总皂苷提取物。

(2)分离纯化：上述总皂苷提取物进行硅胶柱层析，以氯仿∶甲醇∶水＝8～6.5∶2～3.5∶1混合溶剂洗脱，根据薄层层析检测，收集含有皂苷的流分，再进行C₁₈反相柱层析，以甲醇：水为9～7:1～3进行梯度洗脱，根据薄层层析检测，分别收集Arguside B和C流份，浓缩至干得Arguside B和C。经多种现代光谱分析，特别是综合应用多种先进的二维核磁共振波谱的解析，确定了这两种化合物的化学结构和立体构型。

1.Arguside B为无色结晶性粉末，熔点220-222℃，分子式C₆₇H₁₁₀O₃₃；Liebermann-Burchard反应和α-萘酚反应阳性。电喷雾阳离子质谱ESI-MS⁺m/z：1465[M+Na]⁺；电喷雾阴离子质谱ESI-MS^-m/z：1441[M-H]^-。IR(KBr)cm^-1：3410(羟基)，1765(酯羰基)，1625(双键)，1235(酯键)，1074。¹³C NMR与¹HNMR数据见表1和表2。以15％HCl水解皂苷后得到组成皂苷糖链的单糖，将其制备成糖腈乙酸酯衍生物，进行气相色谱-质谱联用分析，经与标准糖的糖腈乙酸酯衍生物对照，确定Arguside A的糖链由木糖、奎诺糖、葡萄糖、3-O-甲基葡萄糖组成，比例为1:1:2:2。核磁共振氢谱和碳谱数据见表1和表2。

2.Arguside C为无色结晶性粉末，熔点221-223℃，分子式C₆₇H₁₁₀O₃₃；Liebermann-Burchard反应和α-萘酚反应阳性。电喷雾阳离子质谱ESI-MS⁺m/z：1465[M+Na]⁺；电喷雾阴离子质谱ESI-MS^-m/z：1441[M-H]^-。IR(KBr)cm^-1：3422(羟基)，1760(酯羰基)，1623(双键)，1078。¹³C NMR与¹H NMR数据见表3和表4。以15％HCl水解皂苷后得到组成皂苷糖链的单糖，将其制备成糖腈乙酸酯衍生物，进行气相色谱-质谱联用分析，经与标准糖的糖腈乙酸酯衍生物对照，确定Arguside B的糖链由木糖、葡萄糖、3-O-甲基葡萄糖组成，比例为1:3:2。核磁共振氢谱和碳谱数据见表3和表4。

表1.Arguside B苷元部分的¹³C NMR与¹H NMR数据

表2.Arguside B糖链部分的¹³C NMR与¹H NMR数据

表3.Arguside C苷元部分¹³C NMR与¹H NMR数据

表4.Arguside C糖链部分的¹³C NMR与¹H NMR数据

Xyl：木糖；Glc：葡萄糖；Qui：奎诺糖；J：偶合常数

本发明化合物Arguside B和C经体外抗肿瘤活性实验，表明这些化合物有明显的抑制肿瘤细胞生长的效果。实验所用的细胞株为国际通用的肿瘤细胞株，即：

A-549(肺癌)

MCF-7(乳腺癌)

DU145(前列腺癌)

KB(鼻咽癌)

HepG2(肝癌)

HCT-116(肠癌)

HT-29(肠癌)

试验方法为国际通用的磺酰罗单明B法：根据细胞生长速率，将处于对数生长期的肿瘤细胞以90μl/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24小时再加本发明化合物样品10μl/孔。每个浓度设3复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO₂的条件下培养72小时，然后倾去培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1小时后，用蒸馏水洗涤5次，空气干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶标仪520nm波长下测定OD值。实验结果见表5。

表5.Arguside B和C对肿瘤细胞株的抑制作用(ID₅₀，μg/ml)

ID₅₀：半数有效抑制浓度

从表5可见，这两种化合物对7种肿瘤细胞株的半数有效抑制浓度(ID₅₀)均小于2.63μg/ml，通常ID₅₀<10μg/ml浓度为有效。上述实验结果表明，Arguside B和C对7种不同的肿瘤细胞株均显示明显的抑制作用。因而可用于制备抗肿瘤药物。

本发明为研制新的抗肿瘤药物提供了新的先导化合物，对开发利用中国的海洋药用生物资源具有重要意义。

具体实施方式

实施例1：Arguside B和C的分离制备

选择生长于中国海南省南海海域的蛇目白尼参干品2200克，粉碎后分别用5倍重量85％的乙醇依次浸泡提取3次，每次浸泡7天。合并乙醇提取液，减压回收乙醇，得流浸膏。将流浸膏溶于3倍量的水中，过滤，滤液通过D101大孔树脂柱，依次用石油醚和水饱和的正丁醇各萃取4次，每次500ml。合并正丁醇萃取液，减压回收溶剂至干，得到总皂苷28克。将总皂苷进行硅胶柱(200-300目)层析，以氯仿∶甲醇∶水＝8～6.5∶2～3.5∶1混合溶剂约1500ml洗脱，根据薄层层析检测，收集含有皂苷的部分，再进行C₁₈反相柱层析，以甲醇：水为9～7:1～3进行梯度洗脱，根据薄层层析检测，分别收集Arguside B和C流份，浓缩至干得到Arguside B0.015克和C0.03克。

Claims (3)

1.一种皂苷类抗肿瘤化合物Arguside B或Arguside C，其特征在于化学结构通式如下：

其中R₁表示OH或H，R₂表示CH₃或CH₂OH，基团搭配为：

当R₁为OH时，R₂为CH₃，化合物为Arguside B；

当R₁为H时，R₂为CH₂OH，化合物为Arguside C。

2.权利要求1所述抗肿瘤化合物Arguside B或Arguside C的制备方法，步骤如下：

(1)制备总皂苷提取物：蛇目白尼参干品粉碎后按常规用50～90％乙醇浸泡提取；浓缩提取液，得流浸膏；将流浸膏溶于水中，过滤，滤液通过D101大孔树脂柱，依次用石油醚和水饱和的正丁醇分别萃取，将正丁醇萃取液浓缩至干，得到总皂苷；

(2)分离纯化：将上述总皂苷提取物进行硅胶柱层析，以氯仿∶甲醇∶水＝8～6.5∶2～3.5∶1混合溶剂洗脱，根据薄层层析检测，收集含有皂苷的流分，再进行C₁₈反相柱层析，以甲醇：水为9～7∶1～3进行梯度洗脱，根据薄层层析检测，分别收集Arguside B和C流份浓缩至干即可。

3.权利要求1所述抗肿瘤化合物Arguside B或Arguside C在制备抗肿瘤药物中的应用。