CN100488970C - 匹伏阿德福韦的晶型 - Google Patents

Abstract

本发明涉及9-[2-[[双(新戊酰氧基)甲氧基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤(Adefovir dipivoxil，匹伏阿德福韦)的晶型。另外，本发明还涉及匹伏阿德福韦晶型在治疗病毒性肝炎等肝脏疾病中的应用，含有匹伏阿德福韦晶型的药物组合物和制备匹伏阿德福韦晶型的方法。

Description

匹伏阿德福韦的晶型

本发明是一项分案申请，原申请的申请号为：02137905.X，申请日为：2002.7.8，发明创造名称为：“匹伏阿德福韦的晶型”。

技术领域

本发明涉及9-[2-[[双(新戊酰氧基)甲氧基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤的晶型E。9-[2-[[双(新戊酰氧基)甲氧基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤通用名为匹伏阿德福韦(Adefovir dipivoxil，简称AD)。另外，本发明还涉及E型匹伏阿德福韦在治疗病毒性肝炎等肝脏疾病中的应用，含有E型匹伏阿德福韦的药物组合物和制备E型匹伏阿德福韦的方法。

背景技术

在中国专利CN1251592A(公开号)中记载了美国吉尔利特科学股份公司发明的9-[2-[[双(新戊酰氧基)甲氧基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤的四种结晶形态及其盐。其中，结晶“形态1”AD基本不含水及其它结晶化溶剂；结晶“形态2”是AD的二水合物，除水外，通常不含其它结晶化溶剂；结晶“形态3”在晶格中约含1个当量的甲醇；结晶“形态4”为含富马酸的AD。本发明的E型匹伏阿德福韦不同于该专利四种晶型中任一种，为一种新的基本不含水及其它溶剂的结晶形态。

另外，专利CN1251592A提供的制备AD结晶的方法中使用了昂贵、易燃对人体有害的有机溶剂如正丁醚、乙酸异丙酯等。

发明内容

本发明目的提供一种基本不含水及其它溶剂的E型匹伏阿德福韦。

本发明另一个目的是提供制备基本不含水及其它溶剂的E型匹伏阿德福韦的方法。

本发明另一个目的提供含有E型匹伏阿德福韦的药物组合物。

另外，本发明还有一个目的是含有E型匹伏阿德福韦的组合物在治疗病毒性肝炎等肝脏疾病中的应用。

E型匹伏阿德福韦的特征：

本发明提供非溶剂化的E型匹伏阿德福韦，使用Cu-Ka辐射，其X-射线衍射图见图1，以度表示的2θ在7.4、7.8、10.1、12.4、15.2、16.4、17.3、18.0、18.6、20.1、20.4、21.3、21.6、22.3、22.8、23.4、24.4、26.1、27.5、28.5、30.1有吸收峰。相对于专利CN1251592A报道的非溶剂化的晶型“形态1”，其典型的特征为，在15.2，16.4有吸收峰，而专利中“形态1”有吸收峰的12.7、15.7、20.7位置，本发明的E型匹伏阿德福韦无吸收峰。

本发明的E型匹伏阿德福韦的DSC图谱见图2，其吸热转变在约94℃，而专利中“形态1”的吸热转变在约102℃。

本发明的E型匹伏阿德福韦用KBr压片测得的红外吸收图谱见图3，其特征为在约3323cm^-1、3166cm^-1、1652cm^-1、1592cm^-1处有吸收峰。

E型匹伏阿德福韦的性质及其药效学研究：

一、溶解性：参照中国药典2000年版二部凡例进行试验，方法：精密称取E型匹伏阿德福韦适量，缓慢加入一定量的溶剂，每隔5分钟强力振摇30秒，观察30分钟内的溶解情况，结果见表1。

表1 匹伏阿德福韦溶解度试验

 

溶剂	溶质量(g)	溶剂量(ml)	溶剂/溶质	现象	结论
						甲醇	2.08	1.4	0.67	溶解	极易溶解
无水乙醇	2.16	5.6	2.59	溶解	易溶
						0.1N HCl	0.48	20	23.8	溶解	溶解
水	0.11	1100	10000	不溶	难溶
						0.1N NaOH	0.21	2100	10000	不溶	难溶

E型匹伏阿德福韦极易溶于甲醇，易溶于无水乙醇，在0.1N HCl溶液中溶解，在水及0.1N NaOH溶液中难溶。

二、稳定性

1、光照试验

将E型匹伏阿德福韦原料均匀分摊至敞口培养皿中，厚度≤5mm，调节距离，使光照强度为4500±500Lx，分别于5，10天取样检测，并与0天的结果进行对照。结果见表2。10天的x-射线衍射图见图4。

表2 光照试验(4500±500lx)

注：温度变化23～26℃；相对湿度变化 56％～63％

2、高温试验

将E型匹伏阿德福韦原料放置于密封洁净玻璃瓶中，置于60℃恒温干燥箱中，分别于5，10天取样检测，并与0天的结果进行对照。结果见表3。10天的x-射线衍射图见图5。

表3 高温试验(60℃)

注：相对湿度变化 54％～62％

3、高湿试验

将E型匹伏阿德福韦原料均匀分摊至敞口培养皿中，厚度≤5mm，置于室温(25℃左右)，相对湿度为75±5％的恒温恒湿培养箱中，分别于5，10天取样进行测定，并与0天的结果进行对照。结果见表4。10天的x-射线衍射图见图7。

表4 高湿试验(室温，相对湿度75±5％)

注：温度变化23～26℃

4、加速试验

将E型匹伏阿德福韦原料用聚乙烯薄膜塑料袋密封包装，置于40±2℃，相对湿度为75±5％的恒温恒湿培养箱中，放置六个月，分别于1，2，3，6个月末取样检测，并与0月的结果进行对照。结果见表5。6个月的X-射线衍射图见图7。

表5 加速试验(40℃，相对湿度75％)

由上述结果可知，本发明得到的E型匹伏阿德福韦在光照试验和高温试验中(60℃)，外观和含量均无较大改变，说明其性质稳定；本品在高湿试验中其外观和含量均没有明显变化，但有一定吸湿性，其熔点降低。本品在高湿空气中，易转化为含结晶水的结晶。所以，为了防止本品与水结合，应密封保存。除高湿条件外，没有发现晶型的转变，表明在干燥条件下，此结晶形态稳定。

三、药效学研究

E型匹伏阿德福韦能够被制成一种有效治疗动物，特别是人病毒性肝炎等肝脏疾病的制剂，对E型匹伏阿德福韦进行药效学研究，结果如下：

1、体外抗病毒试验：在乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系2.2.15细胞中，研究匹伏阿德福韦对细胞的毒性和对HBsAg、HBeAg及HBV DNA分泌的抑制效果。两批试验表明：匹伏阿德福韦16.0μg/ml开始两倍稀释，加入细胞培养8天，对细胞半数中毒浓度TC₅₀为20μg/ml，最大无毒浓度TC₀为10μg/ml。最大无毒浓度时对HBsAg分泌的抑制率为15.3±6.9％；对细胞HBeAg分泌无抑制作用，对HBV DNA的抑制率为59.3％，抑制HBV DNA的IC₅₀为6.1μg/ml。

2、体内抗病毒试验：在鸭乙型肝炎病毒感染鸭体内进行治疗试验，观察药效。试验结果表明：鸭乙型肝炎病毒感染鸭在感染后第7天口服匹伏阿德福韦，30mg/Kg组一天2次，10天给药后对鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著，三批试验统计学处理结果都有非常显著作用(P<0.01)。15mg/Kg组给药后第10天对感染鸭血清DHBV-DNA水平也有显著抑制效果，统计学处理两批(P<0.05)，一批(P<0.01)。但停药3天抑制％与对照组对比，仅1批效果显著(P<0.01)。7.5mg/Kg组一天2次10天对感染鸭血清DHBV-DNA效果不稳定。试验说明有效剂量在15-30mg/Kg 1天2次10天组。30mg/Kg口服1天2次10天未见毒付反应。

E型匹伏阿德福韦的制备方法：

据文献^1、2、3报道，制备匹伏阿德福韦的方法主要有两种，一种为在N，N-二甲基甲酰胺中，加入9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤(PMEA)与新戊酸氯甲酯，用N，N—二环己基—4—吗啉作缩合剂，三乙胺作催化剂，反应制得。另一种为在1-甲基-2-吡咯烷酮中，加入9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤与新戊酸氯甲酯，三乙胺作缩合剂，反应制得。为了提高产物的纯度，本发明对9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤进行了纯化。本发明对这两种方法的后处理进行优化改进，减低了成本，提高了收率，避免了使用对人体有害的有机溶剂正丁醚、乙酸异丙酯等，并且获得了新晶型E型匹伏阿德福韦，使本发明更适宜于工业化生产。

方法一：根据文献^1、2报道的方法，先制得9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤，然后用N，N-二甲基甲酰胺作溶剂，N，N—二环己基—4—吗啉作缩合剂，三乙胺作催化剂，使9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤与新戊酸氯甲酯反应，反应完全后，用甲苯提取产物，然后浓缩甲苯，得到含有AD的油状物。本发明采用向含有AD的油状物中加入适量水或向油状物中加入一定量的有机溶剂，搅拌使油状物溶解在溶剂中，然后加入水，搅拌至有大量白色固体析出，过滤，将滤饼溶于甲醇中，加无水硫酸镁干燥后，减压蒸干，即得E型匹伏阿德福韦。用HPLC法检测，纯度达98.0％以上。

其中，加入的水量为PMEA投入量的1～30倍(包括以下提到的加入的量均以重量计)，以使析出的固体容易搅拌。向油状物中加入的有机溶剂对匹伏阿德福韦有较好的溶解性，如甲醇、乙醇、丙酮等，加入有机溶剂的量一般为PMEA量的0.5～5倍，加入水的量一般为加入水量的5～20倍。干燥剂为无水硫酸镁或无水硫酸钠等能够干燥甲醇中水分并且不与匹伏阿德福韦反应的固体干燥剂，或分子筛。其加入的量以能够将甲醇中水分完全干燥为准，一般为PMEA量的2～10倍。减压的真空度一般为-0.1MPa，也可以较低，均可达到很好的制备效果。蒸干时的外浴温度一般为30～60℃。甲醇溶剂的量一般为PMEA的1～10倍，使滤出固体溶解并便于操作即可。

方法二：用1-甲基-2-吡咯烷酮作溶剂，三乙胺作缩合剂，使9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤与新戊酸氯甲酯反应，反应完全后，加入乙酸乙酯，用水洗涤，浓缩乙酸乙酯，得到含有AD的油状物。由油状物制得E型匹伏阿德福韦的方法同方法一。纯度达98.0％以上。

本发明的制剂包含E型匹伏阿德福韦和一种或多种药用赋形剂的组合物，视需要，还可含其它治疗成分。其赋形剂包括粘合剂、稀释剂、崩解剂、防腐剂、分散剂、助流剂和润滑剂等。本发明的制剂包括片剂和胶囊。这些组合物可以是含E型匹伏阿德福韦约5～250mg的片剂或胶囊。

其片剂可通过任选地与一种或多种赋形剂一起制粒压模而成，视需要可以对片剂进行包衣或压花。胶囊也一样可以与一种或多种赋形剂混合，由制粒或不制粒填充于胶囊壳制得。

附图说明

图1是本发明E型匹伏阿德福韦x-射线衍射图。

图2是本发明E型匹伏阿德福韦差示扫描量热测定图(DSC图)。

图3是本发明E型匹伏阿德福韦红外吸收光谱图。

图4是本发明E型匹伏阿德福韦强光照射10天的x-射线衍射图。

图5是本发明E型匹伏阿德福韦60℃考察10天的x-射线衍射图。

图6是本发明E型匹伏阿德福韦高湿考察10天的x-射线衍射图。

图7是本发明E型匹伏阿德福韦置40℃环境中考察6月的x-射线衍射图。

具体实施方式

实施例1

9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤纯化方法：

于100L反应锅中，将9—(2—膦酰甲氧乙基)—腺嘌呤粗品1.0Kg，加入50L的水中，加热至回流，溶解后，保持温度，加100g活性碳脱色10min，过滤，放冷析晶，过滤，将结晶80℃烘干即得纯品。

实施例2

匹伏阿德福韦晶形E的制备

在10L反应锅中，将纯化的9—(2—膦酰甲氧乙基)—腺嘌呤0.5Kg(1.8mol)悬浮于5L N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌，加入1.044KgN，N—二环己基—4—吗啉、三乙胺100ml及1.382Kg(9.2mol)新戊酸氯甲酯，升温至50℃，保温搅拌3小时，滤去不溶物，滤液在真空度-0.1Mpa下减压浓缩，浓缩液用甲苯提取(10L×2)。在真空度-0.1Mpa下减压回收甲苯，向剩余的油状液中加入纯水5L，搅拌5小时，有大量白色固体析出，滤出，将其溶解在1.5L无水甲醇中，加无水硫酸镁1.0Kg搅拌2小时，过滤，母液加入活性碳50g，于50℃脱色10min，外浴50℃，减压蒸干得白色固体，50～70℃干燥8小时，即得匹伏阿德福韦结晶E 553g，收率58％，Mp.92～94℃，HPLC法测含量为：98.6％。

实施例3

匹伏阿德福韦晶形E的制备

在10L反应锅中，将纯化的9—(2—膦酰甲氧乙基)—腺嘌呤0.5Kg(1.8mol)悬浮于5L N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌，加入1.044KgN，N—二环己基—4—吗啉、三乙胺100ml及1.382Kg(9.2mol)新戊酸氯甲酯，升温至50℃，保温搅拌3小时，滤去不溶物，在真空度-0.1Mpa下减压浓缩，浓缩液用甲苯提取(10L×2)。在真空度-0.1Mpa下减压回收甲苯，向剩余油状液中加入乙醇0.5L，搅拌使油状物溶解，然后加入水4L，搅拌5小时，有大量白色固体析出，滤出，将其溶解在1.5L无水甲醇中，加无水硫酸镁1.0Kg，干燥水分，过滤，母液加入活性碳50g，于50℃脱色10min，外浴60℃，在真空度-0.1Mpa下减压蒸干得白色固体，50～70℃干燥8小时，即得匹伏阿德福韦结晶E 548g。收率57％，Mp.92～94℃，HPLC法测含量为：99.3％。

实施例4

匹伏阿德福韦晶形E的制备

在10L反应锅中，将纯化的9—(2—膦酰甲氧乙基)—腺嘌呤0.5Kg(1.8mol)加入1-甲基-2-吡洛烷酮中，氮气保护，然后加入三乙胺0.927Kg(9mol)，搅拌下加入新戊酸氯甲酯1.377Kg(1.296mol)，升温至60℃，反应2小时，加入6.8L乙酸乙酯终止反应，搅拌半小时，过滤，母液用水洗涤(5L×2)，在真空度-0.1Mpa下减压回收乙酸乙酯，向剩余的油状液中加入纯水5L，搅拌4小时，有大量白色固体析出，滤出固体，溶解于1.5L无水甲醇中，加无水硫酸镁1.0Kg，干燥2小时，过滤，母液加入活性碳50g，于50℃脱色10min，外浴50℃，在真空度-0.1Mpa下减压蒸干得白色固体，50～70℃干燥8小时，得匹伏阿德福韦结晶E 534g。收率56％。Mp.92～94℃。

实施例5

片剂的制备

按下述方法用几种赋形剂将E型匹伏阿德福韦配制成每片含10mg的片剂。

含E型匹伏阿德福韦的片剂的制造方法是将上述赋形剂与E型匹伏阿德福韦混合均匀，加入1％羟甲基纤维素钠溶液适量，制成软材，过筛制粒，湿颗粒烘干，过筛整粒，加入硬脂酸镁和滑石粉混合均匀，压片。

实施例6

胶囊的制备

按下述方法用几种赋形剂将E型匹伏阿德福韦配制成每粒含10mg的胶囊。

含E型匹伏阿德福韦的胶囊的制造方法是将上述赋形剂与E型匹伏阿德福韦混合均匀，加入1％羟甲基纤维素钠，制成湿颗粒，烘干，过筛整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，插入胶囊制得。或不制粒，将E型匹伏阿德福韦与上述赋形剂混合均匀，过筛，直接插囊制得。

参考文献：

1、刘晓辉，王琳，贯宝和等：药学学报1996；31(2)：112～117；

2、张勇，李欣，宫平等：沈阳药科大学学报2001；18(2)95～97

3、中国专利，公开号CN1251592A

Claims (7)

1、一种含10mg匹伏阿德福韦晶体的片剂组合物，其中使用Cu-Ka辐射该晶体的X-射线粉末衍射图谱以度2θ表示，在7.4、7.8、10.1、12.4、15.2、16.4、17.3、18.0、18.6、20.1、20.4、21.3、21.6、22.3、22.8、23.4、24.4、26.1、27.5、28.5、30.1处有峰，其DSC吸热转变在约94℃，红外吸收图谱约在3323cm^-1、3166cm^-1、1652cm^-1、1592cm^-1处有吸收峰，该组合物组成为匹伏阿德福韦晶体10.0毫克，乳糖100.0毫克，低取代羟丙基纤维素3.0毫克，微晶纤维素3.0毫克，滑石粉6.0毫克，硬脂酸镁1.0毫克，1％羟甲基纤维素钠适量。

2、一种含10mg匹伏阿德福韦晶体的片剂组合物，其中使用Cu-Ka辐射该晶体的X-射线粉末衍射图谱以度2θ表示，在7.4、7.8、10.1、12.4、15.2、16.4、17.3、18.0、18.6、20.1、20.4、21.3、21.6、22.3、22.8、23.4、24.4、26.1、27.5、28.5、30.1处有峰，其DSC吸热转变在约94℃，红外吸收图谱约在3323cm^-1、3166cm^-1、1652cm^-1、1592cm^-1处有吸收峰，该组合物组成为匹伏阿德福韦晶体10.0毫克，乳糖100.0毫克，淀粉30.0毫克，低取代羟丙基纤维素3.0毫克，滑石粉6.0毫克，硬脂酸镁1.0毫克，1％羟甲基纤维素钠适量。

3、一种含10mg匹伏阿德福韦晶体的胶囊剂组合物，其中使用Cu-Ka辐射该晶体的X-射线粉末衍射图谱以度2θ表示，在7.4、7.8、10.1、12.4、15.2、16.4、17.3、18.0、18.6、20.1、20.4、21.3、21.6、22.3、22.8、23.4、24.4、26.1、27.5、28.5、30.1处有峰，其DSC吸热转变在约94℃，红外吸收图谱约在3323cm^-1、3166cm^-1、1652cm^-1、1592cm^-1处有吸收峰，该组合物组成为匹伏阿德福韦晶体10.0毫克，淀粉139.0毫克，硬脂酸镁1.0毫克，1％羟甲基纤维素钠适量。

4、一种含10mg匹伏阿德福韦晶体的胶囊剂组合物，其中使用Cu-Ka辐射该晶体的X-射线粉末衍射图谱以度2θ表示，在7.4、7.8、10.1、12.4、15.2、16.4、17.3、18.0、18.6、20.1、20.4、21.3、21.6、22.3、22.8、23.4、24.4、26.1、27.5、28.5、30.1处有峰，其DSC吸热转变在约94℃，红外吸收图谱约在3323cm^-1、3166cm^-1、1652cm^-1、1592cm^-1处有吸收峰，该组合物组成为匹伏阿德福韦晶体10.0毫克，微晶纤维素139.0毫克，硬脂酸镁1.0毫克。

5、一种含10mg匹伏阿德福韦晶体的胶囊剂组合物，其中使用Cu-Ka辐射该晶体的X-射线粉末衍射图谱以度2θ表示，在7.4、7.8、10.1、12.4、15.2、16.4、17.3、18.0、18.6、20.1、20.4、21.3、21.6、22.3、22.8、23.4、24.4、26.1、27.5、28.5、30.1处有峰，其DSC吸热转变在约94℃，红外吸收图谱约在3323cm^-1、3166cm^-1、1652cm^-1、1592cm-^-1处有吸收峰，该组合物组成为匹伏阿德福韦晶体10.0毫克，微晶纤维素139.0毫克，硬脂酸镁1.0毫克，1％羟甲基纤维素钠适量。

6、权利要求1或2所述的片剂组合物在制备治疗病毒性肝炎疾病药物中的应用。

7、权利要求3、4或5所述的胶囊剂组合物在制备治疗病毒性肝炎疾病药物中的应用。

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