CN100462435C

CN100462435C - 赋予植物再生能力的基因及其应用

Info

Publication number: CN100462435C
Application number: CNB2004800222181A
Authority: CN
Inventors: 西村明日香; 松冈信; 芦苅基行
Original assignee: Honda Motor Co Ltd; Nagoya University NUC
Current assignee: Honda Motor Co Ltd; Nagoya University NUC
Priority date: 2003-07-31
Filing date: 2004-07-30
Publication date: 2009-02-18
Anticipated expiration: 2024-07-30
Also published as: US7790957B2; DE602004019783D1; KR20060052938A; JP3979431B2; US20070186302A1; EP1650301B8; KR101192258B1; WO2005012520A1; EP1650301B1; JPWO2005012520A1; AU2004261892A1; AU2004261892B2; EP1650301A1; EP1650301A4; CN1842592A

Abstract

本发明应用连锁分析成功地分离并鉴定到与植物的再生能力有关的基因。此外，本发明还公开了用于培育高再生性品种的方法、用于转化不可栽培品种的方法和用于选择转化细胞的方法，这些方法都应用了这些基因。本发明在例如栽培品种改良和使用转化方法的基因分析等领域中是有用的。

Description

赋予植物再生能力的基因及其应用

技术领域

本发明涉及赋予植物再生能力的基因的分离和鉴定，以及应用这些基因提高再生能力和选择转化细胞的方法。本发明可使得植物的培养特性得到改良并可基于安全性方面的特别考虑而开发转化方法。

背景技术

在适当的条件下，分化的植物组织去分化并在经过细胞分裂后形成愈伤组织(去分化细胞群)。依赖于所述的条件，愈伤组织可以进一步再分化以再生为完整的植物体。这种分化细胞或去分化细胞再生为个体的能力被称为分化全能性，在1930-1950年代对烟草、番茄等的培养研究中最初证实了这一点。组织培养技术是基于这一分化全能性，且已被广泛应用，尤其是在植物育种方面。例如，组织培养技术已经被用于通过细胞融合和胚珠培养生产新品种、缩短育种年限和固定遗传特性。近年来，组织培养技术作为以基因功能分析为目的的人工基因转移(转化方法)中的关键技术已成为分子育种和植物的基础研究所必需的。

分化全能性通常被认为是所有植物都拥有的能力。事实上，已知对于某些植物来说展示这一能力是容易的，对于其它植物来说则是困难的，这取决于植物种类、品种或器官。与双子叶植物相比，单子叶植物包括主要农作物例如水稻、小麦和玉米的组织培养和再生是困难的，因此对于培养包括转化方法的分析而言，再三反复实验是必需的。在水稻中，已经利用特定品种的成熟种子确立了一个相对简单的培养系统，但是具有足够的再生能力的品种是有限的。特别地，可食品种例如Koshihikari和Sasanishiki，以及在热带地区广泛栽培的IR品系品种的再生能力低且通过组织培养再生为植物体困难。提高这些品种的再生能力将不仅对于选择育种和基因特性的研究有用，而且还有可能阐明再生过程的机制。此外，其它不可培养的植物种和品种的再生能力也可能得到提高。

此外，近年来已开发了大量经遗传修饰的农产品(GMO)，且它们的栽培面积正逐年增加。同时，许多消费者担心这些农产品的安全性。在GMO的安全性问题的讨论中最主要的问题是它们掺入了抗生素抗性基因。因此，开发不使用抗生素抗性基因的转化方法将减轻目前消费者对GMO的担忧，同时作为无需昂贵的抗生素的简单转化方法对于研究人员可能也是有利的。

发明内容

再生能力取决于作为数量性状(QTL：数量性状基因座)的众多基因间的相互作用，但是迄今为止未有关于从那样的基因的基因座成功分离出具有再生能力的基因的报道。本发明的一个目的是分离和鉴定与植物的再生能力有关的基因、提供应用这些基因改良植物的方法以及应用这些基因作为选择标记的转化方法。

在繁殖用于检测具有再生能力的QTL的杂种群体之前，本发明人选择了将用做该杂种群体的亲本的品种。本发明人选择了在再生能力上有明显差异的两个品种：日本水稻(japonica rice)“Koshihikari”和印度水稻(indica rice)“Kasalath”(图1)。将这两个栽培种杂交产生F1个体，然后用Koshihikari作为回归亲本对它们进行回交，并进行自体受精。生成了BCF1群体的99个品系，并收集BC1F2种子。用每一品系的20粒BC1F2种子在诱导培养基中培养愈伤组织30天后，将生长的愈伤组织转移到再生培养基中并再培养30天。30天之后，测量每粒种子的愈伤组织重量和苗数，用每一品系的20粒种子测定平均值。该平均值被当作再生能力(图1)。采用262个PCR标记得出每一品系的基因型。当基于这些数据进行关于再生能力的QTL分析时，检出了4个具有再生能力增加效应的QTL(图2)。在其中一个QTL中，靠近1号染色体的短臂上的TGS2451标记(PSR1；苗再生启动子1)处，成功地发现Kasalath基因组在Koshihikari的再生能力上具有很大的增加效应(图2)。其次，为了鉴定出PSR1基因的大致基因座，从BC2F1群体中选择出其PSR1区域已被Kasalath的PSR1区域取代的30株个体，用来自这些个体的每一株的10粒种子(BC2F2种子)诱导产生愈伤组织。从生长的愈伤组织提取DNA以利用分子标记测定基因型，通过研究再生能力进行连锁分析。此外，为了对该基因座进行详细说明，采用分子标记对大约3,800粒其中PSR1被隔离的BC3F2种子进行基因型调查，并进行高分辨连锁分析。结果，发现PSR1定位于分子标记3132和P182间的大约50.8kb的区域(图3)。在该区域的基因预测表明在该区域存在4个基因，包括一假定的蛋白质。为了测定这些基因中的哪一个是具有再生能力的基因，构建了Kasalath BAC文库(平均长度120kb)，通过PCR筛选分离出了一个包含PSR1区域(BHAL15)的BAC克隆。将位于BHAL15克隆中的合适的限制性酶切位点用以制备包含每一候选基因区域的Kasalath基因组片段，并将它们导入到Koshihikari中。结果发现仅当导入了包含被认为编码铁氧还蛋白亚硝酸还原酶(NiR)的基因的Kasalath基因组片段(图3中的3F)时，Koshihikari的再生能力才提高(图4)。铁氧还蛋白亚硝酸还原酶是一种亚硝酸还原酶，其利用铁氧还蛋白作为电子供体发挥功能，并具备将亚硝酸盐转换为氨的作用。测定了被认为是铁氧还蛋白亚硝酸还原酶基因的遗传区域及其大约2kb的上游区的核苷酸序列并与Kasalath和Koshihikari进行比较，在该核苷酸序列内发现了许多的突变(图5)此外，当通过半定量RT-PCR和实时定量PCR对位于愈伤组织中的这一基因的mRNA表达水平进行测定时，Kasalath中的mRNA的量大约是Koshihikari中的该量的2.5倍(图6中左侧照片的顶部和中部和右侧照片)。使用特异于NiR蛋白的抗体进行的Western印迹分析也表明该NiR蛋白在Kasalath中的储存量比在Koshihikari中的储存量更大(图6中左侧照片的底部)。此外，使用萘乙二胺法和在E.coli中表达的NiR重组蛋白比较每单位蛋白的NiR酶活性，Kasalath的NiR酶活性显示出高于Koshihikari的NiR酶活性大约1.6倍(图7)。上述结果表明Koshihikari和Kasalath之间在再生能力上的差异首先归因于两者在NiR基因的转录调节水平上的差异，其次归因于每分子该合成蛋白在活性上的差异。

将Kasalath PSR1基因的基因组区域导入中赋予了不能再生的Koshihikari以再生能力。这表明当转化Koshihikari时Kasalath PSR1基因可以被用做一个选择标记。更特别地，当将已同时插入了KasalathPSR1基因和一靶基因的载体导入到Koshihikari中时，仅已被导入了PSR1基因的那些细胞将获得再生能力，因此再生的植物体将同时具有被掺入的靶基因。为了证明这一观点，构建了携带有于pBI101二元载体的T-DNA区域中的Kasalath NiR基因组+35S启动子GUS、Kasalath NiR启动子::NiR cDNA::NiR终止子+35S启动子GUS、水稻Actinl启动子::NiR cDNA::NiR终止子+35S启动子GUS的载体和未携带NiR基因的载体，并将其导入到Koshihikari中。当导入3种类型的包含NiR基因的载体时，在所有情况下都获得了大量的再生个体，且在这些再生个体自其衍生而来的愈伤组织中观察到由于GUS基因所产生的着色(图8)。此外，NiR基因具有代谢对植物有毒性的亚硝酸的特性，应用这一特性也使得NiR基因能被用作高再生性品种的转化标记。更特别地，位于肌动蛋白启动子(该启动子是水稻中的一个高表达启动子)控制下的过表达NiR基因的载体被导入到一个高再生性的Kasalath品种中，并在添加有亚硝酸的培养基中进行培养，所添加的亚硝酸的浓度能抑制普通野生型的生长。只有被转化的细胞由于过表达的NiR基因的效应而生长，且GUS染色仅在这些生长的细胞中被观测到(图9)。这一选择方法的使用使得生产不使用衍生自微生物的抗生素抗性基因(转化细胞的选择标记)的更安全的重组植物成为可能，这被认为是传统的遗传修饰的农产品中的问题所在。此外，因为昂贵的抗生素是不必要的，开发转化体的费用被降低。

更特别地，本发明涉及提高植物再生能力的基因的分离和鉴定和通过应用这些基因提高植物的培养特性，以及使用这些基因作为选择标记的转化。本发明提供了下述[1]-[22]个方面：

[1]涉及植物的再生能力的DNA，其中所述DNA是(a)-(d)中的任一个：

(a)编码一种包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列的蛋白质的DNA；

(b)包含SEQ ID NO：1或2的核苷酸序列的编码区的DNA；

(c)编码包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代、缺失、添加和/或插入的氨基酸序列的蛋白质的DNA；和

(d)在严格条件下与包含SEQ ID NO：1或2的核苷酸序列的DNA杂交的DNA；

[2]编码包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列的蛋白质的部分肽的DNA；

[3]包含SEQ ID NO：1或2的核苷酸序列的启动子区域的DNA；

[4]包含[1]或[2]的DNA的载体；

[5]包含[3]的DNA的载体；

[6]携带[4]的载体的宿主细胞；

[7]携带[4]的载体的植物细胞；

[8]包含[7]的植物细胞的植物转化体；

[9]是[8]的植物转化体的后代或克隆的植物转化体；

[10][8]或[9]的植物转化体的繁殖材料；

[11]一种用于制备植物转化体的方法，该方法包括将[1]或[2]的DNA导入植物细胞和从所述植物细胞再生植物的步骤；

[12]由[1]或[2]的DNA所编码的蛋白质；

[13]一种用于制备[12]的蛋白质的方法，该方法包括培养[6]所述的宿主细胞并从所述细胞或其培养物上清收集重组蛋白质的步骤；

[14]与[12]的蛋白质结合的抗体；

[15]包含至少15个与SEQ ID NO：1或2的核苷酸序列互补的连续核苷酸的多核苷酸，或与其互补的序列；

[16]一种用于提高植物的再生能力的方法，该方法包括在植物的细胞中表达[1]或[2]的DNA的步骤；

[17]一种用于改变植物的再生能力的制剂，该制剂包含[1]或[2]的DNA或[4]的载体做为活性成分；

[18]一种用于测定植物细胞的再生能力的方法，该方法包括检测[1]的DNA或[12]的蛋白质在植物细胞中的表达的步骤；

[19]一种用于测定植物细胞的再生能力的方法，该方法包括检测[12]的蛋白质在植物细胞中的活性的步骤；

[20]一种用于提高植物的再生能力的方法，该方法包括调节[12]的内源蛋白在该植物中的活性的步骤；

[21]一种用于选择转化的植物细胞的方法，该方法包括以下步骤：

(a)将包含用做选择标记的[1]或[2]的DNA的载体导入植物细胞中；和(b)培养所述植物细胞并选择已经获得再生能力的植物细胞；和

[22]一种用于改变植物的再生能力的方法，该方法包括通过杂交取代植物中的[1]或[2]的内源DNA的步骤。

本发明提供了编码水稻来源的NiR蛋白的DNA。“Kasalath”的基因组DNA的核苷酸序列示于SEQ ID NO：1中，“Kasalath”的cDNA的核苷酸序列示于SEQ ID NO：2中，由该DNA所编码的蛋白质的氨基酸序列示与SEQ ID NO：3中。“Koshihikari”的基因组DNA的核苷酸序列示于SEQ ID NO：4中，“Koshihikari”的cDNA的核苷酸序列示于SEQ ID NO：5中，由该DNA所编码的蛋白质的氨基酸序列示与SEQ ID NO：6中。

本发明表明了植物的再生能力可以通过调节PSR1基因在植物中的表达或活性而提高。这使得不可培养品种例如Koshihikari的培养成为可能，并使得生产稳定且高再生性的品种成为可能。

术语“再生能力的提高”在本发明中仅指在培养条件下植物的再生能力被提高，且再生个体的形式未改变。这一在再生能力上的提高使得可以将所期望的品种用于各种培养试验中，结果使得新品种和基因的功能性分析得到有效的发展。

在本发明中，术语“植物的PSR1基因”指编码植物的铁氧还蛋白亚硝酸还原酶的NiR基因。“植物的PSR1基因”包含水稻的PSR1基因(图5)和来源于其他植物的PSR1基因。编码本发明的PSR1蛋白的DNA包括基因组DNA、cDNA和化学合成的DNA。基因组DNA和cDNA可以根据本领域技术人员所熟知的常规方法制备。更特别的，基因组DNA可以例如按照如下制备：(1)从具有PSR1基因的水稻品种(例如Koshihikari)提取基因组DNA；(2)构建一个基因组文库(应用载体例如质粒、噬菌体、粘粒、BAC和PAC)；(3)发展所述文库；和(4)用基于编码本发明的蛋白质的DNA(例如SEQID qNO：1或2)制备的探针进行克隆杂交或噬菌斑杂交。或者，可以通过使用特异于编码本发明的蛋白质的DNA(例如SEQ ID NO：1或2)的引物进行PCR植被基因组DNA。另一方面，可以例如按照如下制备cDNA：(1)基于从具有PSR1基因的水稻品种(例如Koshihikari)提取的mRNA合成cDNA；(2)通过将该合成的cDNA插入到载体例如λZAP中制备一个cDNA文库；(3)发展所述cDNA文库；和(4)如上述进行克隆杂交或噬菌斑杂交。或者，也可以通过PCR制备cDNA。

本发明包括编码SEQ ID NO：3的PSR1蛋白的功能性等价物的蛋白(Kasalath)的DNA。在本申请中，术语“PSR1蛋白的功能性等价物”是指对目标蛋白的表达或活性的修饰使得再生能力提高。

这样的DNA的例子包括编码突变体、衍生物、等位基因、变异体和包含SEQ ID NO：3中一个或多个氨基酸被取代、删除、添加和/或插入的氨基酸序列的同源物的那些DNA。

本领域技术人员所熟知的用于制备编码包含被改变的氨基酸的DNA的方法的例子包括定点诱变(Kramer，W.和Fritz，H.-J.，(1987)“Oligonucleotide-directed construction of mutagenesis via gapped duplexDNA.”Methods in Enzymology，154：350-367)。蛋白质的氨基酸序列也可以在自然界中由于核苷酸序列的突变发生突变。编码其中具有一个或多个氨基酸被取代、缺失和/或添加的天然PSR1蛋白的氨基酸序列的蛋白质的DNA也包括在本发明的DNA中，只要它们编码与天然PSR1蛋白(SEQ ID NO：3)功能性等价的蛋白质。此外，不增加蛋白质的氨基酸序列的改变的核苷酸突变体(退行性突变体)也包括在本发明的DNA的范围内。

编码与SEQ ID NO：3中所述的PSR1蛋白的功能性等价性蛋白的DNA可以通过例如本领域技术人员所熟知的方法来制备，包括使用杂交技术的方法(Southern，E.M.，Journal of Molecular Biology，Vol.98，503，1975.)和聚合酶链式反应(PCR)技术(Saiki，R.K.et al.Science，vol.230，1350-1354，1985；Saiki，R.K.et al.Science，vol.239，487-491，1988)。也就是说，通过使用PSR1基因的核苷酸序列(SEQID NO：2)或其一部分作为探针，并使用与PSR1基因的核苷酸序列(SEQ ID NO：2)特异性杂交的寡核苷酸作为引物，从水稻和其他植物分离出与PSR1基因具有高度同源性的DNA对于本领域技术人员来说是很常规的。这样的可通过杂交技术或PCR技术获得的编码与PSR1蛋白功能性等价的蛋白质的DNA也包括在本发明的DNA的范围内。

优选在严格条件下进行杂交反应以分离这样的DNA。本发明的严格杂交条件包括例如6M尿素、0.4％SDS和0.5x SSC这样的条件，和那些产生相似的严格性的条件。期望当在具备较高的严格性的条件下，例如6M尿素、0.4％SDS、和0.1x SSC的条件下进行杂交时获得具有较高同源性的DNA。在这种条件下分离出的那些DNA被期望编码与PSR1蛋白(SEQ ID NO：3或6)具有高水平的氨基酸同源性蛋白质。在本申请中，高同源性的意思是在整个氨基酸序列上具有至少50％或更高的同一性，更优选70％或更高，更加优选90％或更高(例如95％、96％、97％、98％、99％或更高)。一条氨基酸序或核苷酸序列与另一条氨基酸序列或者核苷酸序列的同源性的程度可以遵循由Karlin和Altschul建立的BLAST算法进行测定(Proc.Natl.Acad.Sci.USA87：2264-2268，1990；Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：5873，1993)。基于BLAST算法开发了例如BLASTN和BLASTX这样的程序(Altschul SF，etal.J.Mol.Biol.215：403，1990)。为了根据BLASTN对核苷酸序列进行测定，参数被设置为例如得分＝100和字长＝12。另一方面，用于通过BLASTX对氨基酸序列进行分析的参数包括例如得分＝50和字长＝3。当应用BLAST和缺口BLAST程序时，使用每一程序的缺省值。用于这种分析的特定技术是本领域中已知的。

可以按照如下评估某一特定的DNA是否编码与植物的再生能力有关的蛋白质。最为常规的方法包括检测DNA的功能，然后进行培养并对再生的能力进行调查。更特别低，所述方法包括在维持了DNA的功能的条件下和在DNA失去功能的条件下进行培养，并比较结果产生的再生能力。如果再生能力不发生变化或几乎相同，则该DNA与再生能力无关。当DNA与再生能力相关时，再生率被进一步提高，这一差别被认为是再生能力的程度。

本发明的DNA可以被用于例如制备重组蛋白和生产再生能力被改变的植物转化体。通常通过以下步骤制备重组蛋白：将编码本发明的蛋白质的DNA插入到一合适的表达载体中；将该载体导入到一合适的细胞中；培养该转化细胞；使得所述细胞能够表达所述重组蛋白并纯化所表达的蛋白质。重组蛋白可以与其他蛋白质一起作为融合蛋白被表达以使得能够容易地被纯化，例如作为与麦芽糖结合蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)中的融合蛋白(New England Biolabs，USA，Pmal载体系列)、作为与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的融合蛋白(Amersham Pharmacia Biotech，pGEX载体系列)或用组氨酸标签(Novagen，pET系列)。对宿主细胞没有限制，只要该细胞适于表达该重组蛋白即可。有可能利用酵母或各种动物、植物或昆虫细胞以及上述的大肠杆菌。可以通过多种本领域技术人员已知的方法将载体导入到宿主细胞当中。例如，利用钙离子的转化方法可以被用于将载体导入E.coli中(Mandel，M.和Higa，A.(1970)Journal of MolecularBiology，53，158-162，Hanahan，D.(1983)Journal of Molecular Biology，166，557-580)。在宿主细胞中表达的重组蛋白可以通过已知的方法进行纯化并从宿主细胞或其培养物上清进行回收。当重组蛋白作为与麦芽糖结合蛋白或其他配偶体(partner)的融合蛋白被表达时，所述重组蛋白能够通过亲合层析容易地被纯化。本发明的蛋白质可以从按照下述通过将本发明的DNA导入到植物中所产生的转化植物来制备。因此，如下述，本发明的转化植物不仅包括导入了本发明的DNA以改变其再生能力的植物，而且包括了导入了本发明的DNA以制备本发明的蛋白质的植物。

所得蛋白质可以用于制备与所述蛋白质结合的抗体。例如，可以通过用本发明的纯化蛋白或其一部分对免疫动物例如兔进行免疫、在一定时期后采集血液并除去血液凝块来制备多克隆抗体。可以通过将骨髓瘤细胞与被上述蛋白质或其一部分免疫的动物的抗体生成细胞相融合、分离表达所需抗体的单克隆细胞(杂交瘤)并从所述细胞除去回收所述抗体来制备单克隆抗体。所获得的抗体可以被用于纯化或检测本发明的蛋白质。因此，本发明包括了与本发明的蛋白质相结合的抗体。这些抗体的使用使得可以将与植物体的再生能力相关的蛋白质的表达位点区分出来，或能够测定某一植物种是否表达与再生能力相关的蛋白质。

当应用本发明的DNA来制备再生能力被提高的转化植物时，将编码本发明的蛋白质的DNA被插入到一合适的载体中，随后将该载体导入到植物细胞中。通过这些步骤所获得的转化的植物细胞随后被再生。导入了所述载体的植物细胞优选具有本发明的DNA的低表达的植物细胞。因此，术语“植物细胞”包括各种形式的植物细胞，例如悬浮培养细胞、原生质体、叶的切片(leaf sections)和愈伤组织。

对用于植物细胞转化的载体没有特别的限制，只要它们能在细胞中表达被插入的基因即可。实例包括“pBI121”、“pBI221”和“pBI101”质粒(全部来自Clontech)。

本发明的载体可以包含一个用于组成型或诱导型表达本发明的蛋白质的启动子。用于组成型表达的启动子的例子包括花椰菜花叶病毒的35S启动子(Odell et al.1985 Nature 313：810)，水稻的肌动蛋白启动子(Zhang et al.1991 Plant Cell 3：1155)和玉米的遍在蛋白启动子(Comejo et al.1993Plant Mol.Biol.23：567)。

用于诱导型表达的启动子的实例包括已知的由于外因启动表达的启动子，例如丝状真菌、细菌和病毒的感染和入侵、低温、高温、干燥、紫外线照射和特殊化合物的喷射。这样的启动子的实例包括通过丝状真菌、细菌和病毒的感染和入侵导入的几丁质基因启动子(Xuet al.1996 Plant Mol.Biol.30：387)和烟草PR蛋白基因启动子(Ohshima et al.1990 Plant Cell 2：95)、低温所诱导的水稻“lip19”基因启动子(Aguan et al.1993 Mol.Gen Genet.240：1)、高温所诱导的水稻＂hsp80＂基因和＂hsp72＂基因启动子(Van Breusegem et al.1994 Planta193：57)、干燥所诱导的拟南芥＂rab16＂基因启动子(Nundy et al.，1990Proc.Natl.Acad.Sci.USA87：1406)、紫外线照射所诱导的查耳酮合酶基因启动子(Schulze-Lefert et al.1989 EMBO J.8：651)和厌氧条件所诱导的玉米乙醇脱氢酶基因启动子(Walker et al.，1987 Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：6624)。此外，水稻的几丁质基因启动子和烟草的PR蛋白基因启动子也能被特定的化合物例如水杨酸所诱导，＂rab 16＂也能通过喷射脱落酸，一种植物激素被诱导。

此外，所述载体可以包含编码本发明的蛋白质的DNA的启动子。编码本发明的蛋白质的DNA的启动子区域可以通过例如用包含SEQID NO：1或2的核苷酸序列或其一部分的DNA作为探针对基因组文库进行筛选获得。

此外，本发明提供了导入了本发明的载体的转化细胞。除了上述用于制备重组蛋白的细胞外，导入了本发明的载体的细胞包括用于制备转化植物的植物细胞。对于所述植物细胞的类型没有特殊的限制，其实例有拟南芥、水稻、玉米、马铃薯和烟草的细胞。除培养的细胞外，本发明的植物细胞包括植物中的细胞以及原生质体、shootprimordia、multiple shoots和发根(hairy root)中的细胞。可以通过已知的方法将载体导入植物细胞中，例如聚乙烯乙二醇方法、电穿孔、农杆菌介导的转移和微粒轰击。根据植物细胞的类型，可以通过已知的方法从转化的植物细胞再生植物(Toki et al.，(1995)Plant Physiol.100：1503-1507)。例如，用于水稻类植物的转化和再生方法包括：(1)用聚乙烯乙二醇将基因导入原生质体中并再生植物体(适于indica水稻品种)(Datta，S.K.(1995)in“Gene Transfer To Plants”，Potrykus Iand Spangenberg Eds.，pp66-74)；(2)用电脉冲将基因导入原生质体中并再生植物体(适于japonica水稻品种)(Toki et al.(1992)Plant Physiol.100，1503-1507)；(3)通过微粒轰击直接将基因导入细胞中并再生植物体(Christou et al.(1991)Bio/Technology，9：957-962)；和(4)用农杆菌将基因导入并再生植物体(Hiei et al.(1994)Plant J.6：271-282)。这些方法是现有技术中已经建立起来的方法并被广泛地应用于本发明所属的技术领域中。这样的方法可以被适当地用于本发明。

已经获得了在其基因组中含有本发明的DNA的转化植物，因而有可能通过有性繁殖或无性繁殖获得该植物的后代。也有可能从所述植物或其后代或克隆获得繁殖材料(例如种子、果实、穗、块茎、块茎状的根、残株、愈伤组织、和原生质体)以基于这样的材料大量生产所述植物。因此，本发明包括导入了本发明的DNA的植物细胞、含有这些细胞的植物、这些植物的后代或克隆以及该植物及其后代和克隆的繁殖材料。

以这种方式制备的其再生能力被修饰的植物相对于野生型植物其再生能力和产量发生变化。例如，其中导入了位于水稻肌动蛋白启动子控制下的编码PSR1蛋白的DNA的植物被期望在其再生能力上有所提高。本发明的方法的使用可以提高水稻的再生能力，这对于农作物而言是有益的。本发明还有益于高再生型水稻品种的开发。

此外，本发明提供了包含与SEQ ID NO：1或2的核苷酸序列互补的至少15个连续核苷酸的多核苷酸或其互补序列。因此，术语“互补序列”是包含A:T和G:C碱基对的双链DNA的一条链的序列相对于另一条链的序列而言。术语“互补”不限制于某一序列与至少15个连续的核苷酸完全互补的情形，还包括其中核苷酸序列同一性为至少70％、优选至少80％、更优选90％、再更优选95％或更高(例如96％或更高、97％或更高、98％或更高、或99％或更高)。这些DNA作为探针有益于检测或分离本发明的DNA，和用做引物扩增所述DNA。

本发明还提供了用于测在植物中是否存在再生能力的遗传诊断方法。在本发明中，“测定在植物中是否存在再生能力”不仅对于测定迄今为止所栽培的品中是否存在再生能力是有效的，而且还包括了测定在通过杂交和遗传工程技术所制备的新品种中是否存在再生能力。这些方法对于测定japonica水稻品种中是否存在再生能力由其有效。

本发明的用于评估在植物中是否存在再生能力的方法包括检测编码PSR1蛋白的DNA和PSR1蛋白的植物表达水平。例如，如果编码PSR1的DNA或PSR1蛋白的表达水平高于在Koshihikari中的表达水平，则所检测的植物被测定为是拥有再生能力的一个品种。

本发明提供了用于在植物的转化中将PSR1基因作为选择标记的方法。先前被用作转化的植物细胞的选择标记基因的实例包括提供对抗生素潮霉素的抗性的潮霉素磷酸转移酶基因、提供对卡那霉素或庆大霉素的抗性的新霉素磷酸转移酶、提供对除草剂膦丝菌素的抗性的乙酰转移酶基因和提供对双丙氨膦(bialaphos)的抗性的双丙氨膦抗性基因。当使用这些基因时，通过在一种已知的选择培养基中进行培养获得转化的植物细胞，所述选择性培养基包含一种与选择标记基因的类型匹配的选择剂。当将PSR1基因而不是这些药物抗性基因用作选择标记时，如果待转化的植物细胞不具备再生能力，如在Koshihikari中，可以使用所获得的再生能力作为选择性状对转化体进行选择，而不使用用于选择的特殊制剂。也就是说，由于非转化体不能够再生，由于PSR1基因的效应而再生的个体被假定为转化体。此外，当使用PSR1基因作为具有再生能力的植物细胞的选择标记时，可以通过向选择培养基中添加一定浓度的亚硝酸盐对具有再生能力的转化细胞进行选择，该亚硝酸盐将抑制非转化体的生长。上述被用于选择转化体的常规药物抗性基因衍生自微生物；因此，保留了这些抗性基因的经遗传修饰的农产品(GMO)已经增加了人们对于其对生态系统和人体所产生的副作用的担忧。但是，使用本发明的PSR1基因用于选择转化体的方法在减轻此类担忧和开发廉价的遗传修饰农作物方面具有优势。

本申请中所引用的所有现有技术文献通过引用合并到本发明中。

附图说明

图1是表示Koshihikari和Kasalath的基因型的一组照片。左侧的照片表示Koshihikari，右侧的照片表示Kasalath。该图将Koshihikari和Kasalath的再生能力用每克愈伤组织的再生个体数表示。

图2表示染色体上的再生能力QTL的位置。

图3表示再生能力QTL的高精度连锁图谱。

图4是表示互补测验结果的一组照片。左侧的照片表示当载体被单独插入Koshihikari中时的结果，右侧照片表示当Kasalat的3F片段被插入到Koshihikari中时发生的再生。

图5表示与Koshihikari NiR基因组序列相比Kasalath NiR基因组的突变位点。示意图中的阿拉伯数字表示插入或缺失的核苷酸数目。黑框表示编码区。垂直线表示取代位点。加外框部分表示在Koshihikari(顶部)和Kasalath(底部)中的NiR基因序列的比较。框内围住的部分表示Koshihikari和Kasalath间的不同氨基酸。粗斜体所示区域表示叶绿体转运肽结构域，虚线下划线所示区域表示铁氧还蛋白结合域，下划线部分表示4Fe-4S簇。

图6是一组照片和比较Koshihikari和Kasalath的愈伤组织中的NiR基因和NiR蛋白的表达水平的图。在左侧照片中，顶部的一行表示由半定量RT-PCR所检测到的NiR基因，中间一行表示用做表达对照组并由定量RT-PCR所检测到的水稻遍在蛋白1基因(Rubq1)，底部一行表示使用NiR蛋白抗体进行的Western印迹杂交所检测到的NiR蛋白。右侧图表示将Rubq1基因的表达水平用做内标通过实时定量RT-PCR测量NiR基因的表达水平的结果。RT-PCR引物位点示于图5中。

图7是比较Koshihikari和Kasalath NiR重组蛋白的酶活性的图。

图8是一张示意图和一组表示用于确认NiR基因作为选择标记的效力的试验结果的照片。该示意图表示用于转化的二元载体的T-DNA区域。照片表示当每一载体被导入Koshihikari中时的再生状态。表格表示再生个体中GUS-染色个体的比例。

图9是显示当由于肌动蛋白启动子而过表达NiR基因的载体被导入Kasalath中时，选择愈伤组织的结果的照片。顶部的照片表示愈伤组织选择的结果。由于亚硝酸盐被添加到培养基中，转化体“a”由于过表达的NiR基因效应而生长，而非转化体“b”的愈伤组织生长被抑制。底部的照片表示愈伤组织“a”和“b”的GUS染色结果。

具体实施方式

本发明将用以下实施例进行详细描述，但其不应被理解为对本发明的限制。

实施例1：测验材料的选择和近-同源品系的制备

在培育用于QTL分析的杂种群体之前，选择用做群体亲本的品种。首先研究了水稻的几个品种和印度水稻的几个品种的平均再生能力，并选择了在再生能力上具有显著差别的两个品种：日本水稻“Koshihikari”和印度水稻“Kasalath”(图1)。将日本品种“Koshihikari”和印度品种“Kasalath”杂交制备F1个体。然后用Koshihikari作为回归亲本对这些个体进行回交，并进行自体受精。生成BC1F1群体后，收集BC1F2种子。用来自每一品系的20粒BC1F2种子在诱导培养基中培养愈伤组织30天，然后将生长的愈伤组织转移至再生培养基中。转移30天之后，测量每粒种子的愈伤组织重量和苗数，用每一品系的20粒种子测定平均值。该平均值被当作再生能力(图1)。采用262个PCR标记测定出每一品系的基因型。

当基于这些数据进行关于再生能力的QTL分析时，检出了4个具有再生能力增加效应的QTL(图2)。在其中一个QTL中，靠近1号染色体的短臂上的TGS2451标记(PSR1；苗再生启动子1)处，成功地发现Kasalath基因组在Koshihikari的再生能力上具有很大的增加效应。用重复回交和MAS制备了一个PSR1近-同源品系(Nil-PSR1：用靠近Kasalath染色体1的TGS2451标记的一个区域对Koshihikari染色体进行了取代的一个品系)。对Nil-PSR1和Koshihikari(对照)的再生能力进行调查，确认了QTL(PSR1)的存在。在其中靠近染色体1的短臂上的TGS2451的一个区域被Kasalath的相应区域取代的一个品系中，其再生能力平均增加了14.7倍。

实施例2 使用PSR1的隔离群体进行高精度连锁分析

从BC2F1群体中选择出30个其PSR1区域已被Kasalath的相应区域取代的个体。使用每种种子(BC2F2种子)的10粒种子，并从愈伤组织提取DNA。使用分子标记阐明基因型，并通过调查再生能力进行连锁分析。此外，为了对具体基因座进行详细说明，约3,800粒其中PSR1被分离的BC3F2种子被用于使用分子标记调查基因型，并进行高精度连锁分析。结果，发现PSR1定位于分子标记3132和P182间的约50.8kb区域(图3)。在这一区域的基因预测表明存在4个基因，包括一假定的蛋白质。为了测定这些基因中的那些是再生能力型基因，构建Kasalath BAC文库(平均长度120kb)，通过PCR筛选将一包含PSR1区域(BHAL15)的BAC克隆分离出来。BHAL15克隆中合适的限制性酶切位点被用于制备含有各后选基因区域的Kasalath基因组片段，并将它们导入Koshihikari中。结果发现仅当导入了包含被认为编码了铁氧还蛋白亚硝酸还原酶(NiR)的基因的Kasalath基因组片段(图3中的3F)时，Koshihikari的再生能力才提高(图4)。测定了被认为编码了铁氧还蛋白亚硝酸还原酶的遗传区域及其约2kb的上游区的核苷酸序列并与Kasalath和Koshihikari进行比较，在该核苷酸序列内发现了许多的突变(图5)。

实施例3 提高不可栽培品种的培养特性

Kasalath的PSR1基因区域(或使用基因组序列或使用cDNA序列)被导入Koshihikari中以赋予Koshihikari以再生能力，生成高再生性Koshihikari(图4、8和9)。在这种情形中，PSR启动子和一种组成型启动子例如肌动蛋白启动子作为用于表达PSR1基因的启动子是有效的。

实施例4 PSR1基因和PSR1蛋白的表达分析

当通过半定量RT-PCR和实时定量PCR测定愈伤组织中的NiRmRNA表达水平时，Kasalath中的mRNA的量约为Koshihikari中的2.5倍(图6中左侧照片的顶部和中部的行及右图)。使用特异于NiR蛋白的抗体进行的Western印迹分析也表明NiR蛋白在Kasalath中的储存量较Koshihikari中的储存量更大(图6中左侧照片的底部一行)。此外，用萘基乙二胺方法和其表达由大肠杆菌所诱导的NiR重组蛋白比较每单位蛋白的NiR酶活性，Kasalath NiR蛋白显示出比Koshihikari的NiR蛋白的酶活性高约1.6倍(图7)。上述结果表明Koshihikari和Kasalath间在再生能力上的差异主要是由于在NiR基因的转录调节水平上的差异，其次是由于每分子合成蛋白在活性上的差异。

实施例5 使用再生能力作为选择性状进行转化

将Kasalath PSR1基因导入Koshihikari中能够赋予不能再生的Koshihikari以再生能力。这表明当对Koshihikari进行转化时，KasalathPSR1基因可以被用做一个选择标记。更特别地，当串联插入了Kasalath PSR1基因和一靶基因的载体被导入Koshihikari中时，仅那些导入了PSR1基因的细胞将获得再生能力。因此，再生的植物体应该已经同时掺入了靶基因。为了证明这一观点，构建了携带KasalathNiR基因组+35S启动子GUS、Kasalath NiR启动子::NiR cDNA::NiR终止子+35S启动子GUS、水稻Actin1启动子::NiR cDNA::NiR终止子+位于pBI101二元载体中的T-DNA区域中的35S启动子GUS的载体和不携带NiR基因的载体，并将它们导入Koshihikari中。结果，当导入3种类型的包含NiR基因的载体时，获得了大量的再生个体，且在这些再生个体自其衍生的愈伤组织中观察到由于GUS基因所产生的着色(图8)。

此外，NiR基因具有代谢对植物有毒性的亚硝酸的特性，应用这一特性也使得NiR基因能被用作高再生性品种的转化标记。更特别地，位于肌动蛋白启动子(该启动子是水稻中的一个高表达启动子)控制下的过表达NiR基因的载体被导入到一个高再生性的Kasalath品种中，并在添加有亚硝酸的培养基中进行培养，所添加的亚硝酸的浓度能抑制普通野生型的生长。只有被转化的细胞由于过表达的NiR基因的效应而生长，且GUS染色仅在这些生长的细胞中被观测到(图9)。这一选择方法的使用相对于其中使用衍生自微生物的抗生素抗性基因作为选择标记的传统方法抗生素的费用减低。此外，该方法使得可以生产更加环保的重组植物，因为该再生植物不含有微生物基因。

工业实用性

近来，应用转化方法开发有用的植物和对基因进行功能分析进展迅速。由于转化方法允许超越生理种类的界限使用基因从而可以制备新的植物，这在基于杂交和选择的传统育种中是不可能实现的。此外，由于基因组序列被接连阐明，转化方法也正被用于基因破裂、表达调节分析等以阐明每一基因的功能。通常，当制备植物转化体时，将同时包含待导入的基因和药物抗性标记基因例如抗生素抗性基因的质粒载体通过农杆菌方法或通过电穿孔导入植物细胞中，并通过药物处理选择出转化细胞。选择出来的转化细胞经过细胞生长再生为植物体。因此，为了应用这样的转化方法，必须建立组织培养技术。组织培养技术不仅在转化方法中尤其有用，而且在使用体细胞克隆变异制备突变体、使用细胞融合或胚珠培育栽培品种、遗传特性的固定、缩短育种年限等方面也尤其有用。

培育技术使用得最多的谷物是水稻，但是在品种间存在的在培育特性上的巨大差异被认为是一个问题。特别地，很难在日本培育主要的品种例如Koshihikari和Akitakomachi，以及许多在热带地区栽培的印度品种，因此这些品种不能被用做组织培养的材料。在品种之间在培育特性上的这些差异是在众多的植物中普遍观察到的现象而并非仅限于水稻，但在阐明其原因方面还没有进展。

本申请的发明人分离了与再生能力有关的基因，使得可以通过使用分子标记对高再生性性状进行有效的选择(标记选择育种)，并使得可以应用分子生物学方法提高再生能力(分子育种)。此外，将PSR1基因用做选择标记已经使得生产廉价且兼顾环境的植物转化体成为可能。

谷物例如水稻、玉米、小麦和大麦是人类的主要能量来源，也是对人类最重要的植物。这些谷物都属于Poaceae家族，且可能是从一个共同的祖先进化而来。它们相互间具有高度的遗传同源性(基因组同线性)。在这些谷物中，水稻的基因组最小，这也就是为什么水稻被用做谷物的模型植物的原因。水稻基因存在于水稻的亲缘植物例如小麦和玉米的基因组中，分离自水稻的基因可以容易地分离自小麦和玉米。此外，水稻基因可以被直接用于小麦、玉米等的培育。因此，本发明的基因不仅可以应用于水稻还可应用于多种植物品种。

<110>本田技研工业株式会社

<120>赋予植物再生能力的基因及其应用

<130>H3-A0301P

<150>US 60/491837

<151>2003-07-31

<160>6

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>12161

<212>DNA

<213>Oryza sativa

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<221>exon

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<400>1

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1 5 10

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Pro Val Gln Ser Ser Thr Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Thr Pro Ala

35 40 45

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50 55 60

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Arg Glu Gly Arg Tyr Trp Val Leu Lys Glu Lys Tyr Arg Thr Gly Leu

65 70 75

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Asn Pro Gln Glu Lys Val Lys Leu Gly Lys Glu Pro Met Ser Leu Phe

80 85 90

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Met Glu Gly Gly Ile Lys Glu Leu Ala Lys Met Pro Met Glu Glu Ile

95 100 105 110

gag gcc gac aag ctc tcc aag gag gac atc gac gtg cgg ctc aag tgg 6387

Glu Ala Asp Lys Leu Ser Lys Glu Asp Ile Asp Val Arg Leu Lys Trp

115 120 125

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Leu Gly Leu Phe His Arg Arg Lys His Gln

130 135

tcctctgatc aacacatttt cttgctttcg ttcggttatt tgtcgcgccg aggaagttaa 6498

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caggctctac caagtaacac tagtaatatg cccgtgctac gacacggtgg cataataaat 6738

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acaatttgtt tctcctcttt atctaagngt tttggccagg ttaaaagcat atatcactat 7218

gttccaagca aacatcggca atggacacgt caaaaataaa tgatcaattg tttctttgag 7278

tacaaaattg acaatggaca ctatgttcct ttgttagaat tctatttgtc agggtaggat 7338

gtagaaaaac ttaactttta gaggaagctt aaatatccgg cataaacttg ctttttcagc 7398

gctctataaa ataattcaac agtgaattgt ccatcttttc taagtgctcc aaaagacact 7458

aagttgaaaa accaggtgaa ccaacagatt gatccacaaa atcttattat tagattattc 7518

acttaaaagc ctgtctttat ttcaaacata taaaaacaga agttattaat cagggaagcg 7578

cttatggcag cctgagcgaa ccagtgatag caagtggtga aaacagtaaa taggatacat 7638

aaaaattata caaggtttct actgtttatc gaaaaaaaat atttgaaaac agtaaatagg 7698

atacataatc gacttccaac ttgtccttat cataacatcc agaatcacaa caagaattgc 7758

aacgaataca tagtcgactt gagctaagaa gtcacaagac ctgtcaaagt aagctgccct 7818

tgatcttgaa gtgaaaggca tattttattg tcttccttgg caaacagata tcactgtctt 7878

cagcagttca gttagataat ccaagatttc tcacggagaa gagcatatca ctcacatcag 7938

tgttgtgccc tccaaatact gagataaact gaattttgtt ctctttgaag catctgcagg 7998

cattaacaat aataatactt tacaaagttt cattgggtct aaactattgt ttgcacatca 8058

tatatatgcc cagaactttt tagcatgata caagggtcct gttcataact catgcctaaa 8118

tctgacaaat ttgtcaaacg acaatataag tcgaattata atgcgtttta gaattgacgc 8178

caaaactttt gctagcgtaa gtaactcttc cacctcccag catgcataca accaacaagc 8238

taaacttttg ttcaaaaaaa tgtacattta tttccttgaa cacagccttt gtagaatatg 8298

attaaaaact catggatgaa tgaaataatg taaaagaatg gtcaaaatga tgaatagtac 8358

aagaagcaac tgtgaacatt tcacctttac ctgactgttc gcaagaaggc cacgtggcag 8418

aaaagccaga aatgcaagaa gcttccctaa ttgatacacc atcaagaaat caatggactc 8478

aacaccagcg tccgcccaga caaaatgaat gcaggcacct aaaatataga accattgact 8538

tttcaacact gaattatata acctgaatat cttgttttgt taacacatct gacaaaatca 8598

gtgcattctg ttccatatag atgtatgcat agctcccata tgttagttga tcgatgagca 8658

tgcaaactat acacacctta cgttactccc tctgtcaaaa aaaatataag cttgtctaga 8718

tacatagcta caaatgctta tatttttgga ttctcttaaa gctgtagaaa cttttatcgc 8778

cccgccatgg caagtcgagc tgccatcccc aatgaaagcc cccacacagg tttcatgccc 8838

tgctgcacaa tattgagcaa ccaaaaatat aataatattt gtgtcagaat ttgaatcaac 8898

cttacagata ctgggtggcc agaaaatcta gtccaagtaa tatcctgaaa aatagcaact 8958

ggcaaatact aaaggcagtg aagagtttcc tttagatcag atgataaaaa aaaatcatat 9018

gttcaatagc aataatcact cacatttttt ttgctgttta gaatttagat aaatagtagt 9078

taaacttcta tagcttgcgt agctaagatc aatggtgatt attagttgaa aaaataatca 9138

aatcatcaaa ctgaggagac ttatacctgc cataagttct gaaatttcaa tgatcctagt 9198

caatatttac tgtatatata gaattaggtc caaaagatga tacttacaat taaggatgtt 9258

gtattgatcg gttcataact caagcttcta tttatcatta atcaaaagct ggatcattca 9318

tgcatatacc tttgccgcac tcaacatagc agctcggagt cttctttgtt cagaagcgag 9378

gaaggagtca acaaataagt actgcaatgt taaacaaacc gacatatcaa atcccaaatt 9438

aagaatgcat gatttattaa tacaggaaat atatgatcaa gtcccaaaaa gtgagtcatg 9498

ttatgtacac tcagtcatca atttcaataa gaatattaac ttgctcattg gtatatggat 9558

ttgattatga cataatttga caatacattt acagaataaa cttgcagtgc tgtgagcata 9618

tgttactaac atgtaaggac cttgttttgc tctgttcaat actcatgttg atcttgatct 9678

gtgtccacat atacctaaat gaaatgaaat caaagaatga ggtttgtagg agtggagttg 9738

gtgaattata gggtagataa tgtcggcaca accgtttgat aagtagtacg agtactttat 9798

ttggcgccac cgcgccagca tcagatgtgt ggcctttgca ctgattgaac ccaaaagaaa 9858

aaaaaaagtc gttttggtcc cacacaattc tacttcatct gcaggatgta cagaaggtta 9918

catatctatt ctgttctatg ctctgtttac atttataagg gctcacttgg tggctgtcat 9978

tggttggctg gtgcggtata ttactaatag gttttttaat ggcatatatg ttcttaaaat 10038

aaaccagaaa agcaaaagat caactatctt agccacacca atgaaatgga atatactgaa 10098

ctgtcacggc taaaattctc ttcagtcacc tggcccagct ggagccgtgg gctcgtcgtc 10158

ttttctaaac atgtactagt attttggggg cccacagtga atttggccca aaatgctgac 10218

agccgctcta cggctctacg ctgtgcag at ggg cgg ttc atg atg cgg ctg 10269

Tyr Gly Arg Phe Met Met Arg Leu

140

aag ctg cca aac ggt gtg acg acg agc gag cag acg agg tac ctg gcg 10317

Lys Leu Pro Asn Gly Val Thr Thr Ser Glu Gln Thr Arg Tyr Leu Ala

145 150 155 160

agc gtg atc gag gcg tac ggc aag gag ggc tgc gcc gac gtg aca acc 10365

Ser Val Ile Glu Ala Tyr Gly Lys Glu Gly Cys Ala Asp Val Thr Thr

165 170 175

cgc cag aac tgg cag atc cgc ggc gtc acg ctc ccc gac gtg ccg gcc 10413

Arg Gln Asn Trp Gln Ile Arg Gly Val Thr Leu Pro Asp Val Pro Ala

180 185 190

atc ctc gac ggg ctc aac gcc gtc ggc ctc acc agc ctc cag agc ggc 10461

Ile Leu Asp Gly Leu Asn Ala Val Gly Leu Thr Ser Leu Gln Ser Gly

195 200 205

atg gac aac gtc cgc aac ccc gtc ggc aac ccg ctc gcc ggc atc gac 10509

Met Asp Asn Val Arg Asn Pro Val Gly Asn Pro Leu Ala Gly Ile Asp

210 215 220

ccc gac gag atc gtc gac acg cga tcc tac acc aac ctc ctc tcc tcc 10557

Pro Asp Glu Ile Val Asp Thr Arg Ser Tyr Thr Asn Leu Leu Ser Ser

225 230 235 240

tac atc acc agc aac ttc cag ggc aac ccc acc atc acc aac ct 10601

Tyr Ile Thr Ser Asn Phe Gln Gly Asn Pro Thr Ile Thr Asn Leu

245 250

gtgagtgatc gaatcaactt gatcatgctc tgtgctgtgc tgttcgtgtc gtctctgacg 10661

acatgtttgt tgaatttgtt gttgctgcgt gctgttggca g g ccg agg aag tgg 10715

Pro Arg Lys Trp

aac gtg tgc gtg atc ggg tcg cac gat ctg tac gag cac ccg cac atc 10763

Asn Val Cys Val Ile Gly Ser His Asp Leu Tyr Glu His Pro His Ile

260 265 270 275

aac gac ctc gcg tac atg ccg gcg gtg aag ggc ggc aag ttc ggg ttc 10811

Asn Asp Leu Ala Tyr Met Pro Ala Val Lys Gly Gly Lys Phe Gly Phe

280 285 290

aac ctc ctt gtc ggc ggg ttc atc agc ccc aag agg tgg gag gag gcg 10859

Asn Leu Leu Val Gly Gly Phe Ile Ser Pro Lys Arg Trp Glu Glu Ala

295 300 305

ctg ccg ctg gac gcc tgg gtc ccc ggc gac gac atc atc ccg gtg tgc 10907

Leu Pro Leu Asp Ala Trp Val Pro Gly Asp Asp Ile Ile Pro Val Cys

310 315 320

aag gcc gtt ctc gag gcg tac cgc gac ctc ggc acc agg ggc aac cgc 10955

Lys Ala Val Leu Glu Ala Tyr Arg Asp Leu Gly Thr Arg Gly Asn Arg

325 330 335

cag aag acc cgc atg atg tgg ctc atc gac gaa ctt gtgagcctcc 11001

Gln Lys Thr Arg Met Met Trp Leu Ile Asp Glu Leu

340 345 350

attcatccac gccattgact gaattacgta tgtcccaatg ttcttatcag ttaattgcgg 11061

tgttggcatt gcag gga atg gag gct ttt cgg tcg gag gtg gag aag agg 11111

Gly Met Glu Ala Phe Arg Ser Glu Val Glu Lys Arg

355 360

atg ccg aac ggc gtg ctg gag cgc gct gcg ccg gac gac ctc atc gac 11159

Met Pro Asn Gly Val Leu Glu Arg Ala Ala Pro Asp Asp Leu Ile Asp

365 370 375

aag aaa tgg cag agg agg gac tac ctc ggc gtg cac ccg cag aag cag 11207

Lys Lys Trp Gln Arg Arg Asp Tyr Leu Gly Val His Pro Gln Lys Gln

380 385 390 395

gaa ggg atg tcc tac gtc ggc ctg cac gtg ccc gtc ggc cgg gtg cag 11255

Glu Gly Met Ser Tyr Val Gly Leu His Val Pro Val Gly Arg Val Gln

400 405 410

gcg gcg gac atg ttc gag ctc gcc cgc ctt gcc gac gag tat ggc tcc 11303

Ala Ala Asp Met Phe Glu Leu Ala Arg Leu Ala Asp Glu Tyr Gly Ser

415 420 425

ggc gag ctc cgc ctc acc gtg gag cag aac atc gtg atc ccg aac gtc 11351

Gly Glu Leu Arg Leu Thr Val Glu Gln Asn Ile Val Ile Pro Asn Val

430 435 440

aag aac gag aag gtg gag gcg ctg ctc gcc gag ccg ctg ctt cag aag 11399

Lys Asn Glu Lys Val Glu Ala Leu Leu Ala Glu Pro Leu Leu Gln Lys

445 450 455

ttc tcc ccg cag ccg tcg ctg ctg ctc aag ggc ctg gtc gcg tgc acc 11447

Phe Ser Pro Gln Pro Ser Leu Leu Leu Lys Gly Leu Val Ala Cys Thr

460 465 470 475

ggc aac cag ttc tgc ggc cag gcc atc atc gag acg aag cag cgg gcg 11495

Gly Asn Gln Phe Cys Gly Gln Ala Ile Ile Glu Thr Lys Gln Arg Ala

480 485 490

ctg ctg gtg acg tcg cag gtg gag aag ctc gtg tcg gtg ccc cgg gcg 11543

Leu Leu Val Thr Ser Gln Val Glu Lys Leu Val Ser Val Pro Arg Ala

495 500 505

gtg cgg atg cac tgg acc ggc tgc ccc aac agc tgc ggc cag gtg cag 11591

Val Arg Met His Trp Thr Gly Cys Pro Asn Ser Cys Gly Gln Val Gln

510 515 520

gtc gcc gac atc ggc ttc atg ggc tgc ctc acc aag gat agc gcc ggc 11639

Val Ala Asp Ile Gly Phe Met Gly Cys Leu Thr Lys Asp Ser Ala Gly

525 530 535

aag atc gtc gag gcg gcc gac atc ttc gtc ggc ggc cgc gtc ggc agc 11687

Lys Ile Val Glu Ala Ala Asp Ile Phe Val Gly Gly Arg Val Gly Ser

540 545 550 555

gac tcg cac ctc gcc ggc gcg tac aag aag tcc gtg ccg tgc gac gag 11735

Asp Ser His Leu Ala Gly Ala Tyr Lys Lys Ser Val Pro Cys Asp Glu

560 565 570

ctg gcg ccg atc gtc gcc gac atc ctg gtc gag cgg ttc ggg gcc gtg 11783

Leu Ala Pro Ile Val Ala Asp Ile Leu Val Glu Arg Phe Gly Ala Val

575 580 585

cgg agg gag agg gag gag gac gag gag tag gagcacagac tggggtggtt 11833

Arg Arg Glu Arg Glu Glu Asp Glu Glu

590 595

tgcttgctcc ggtgatctct cgccgtcctt gtaaagtaga cgacaatatg ccttcgccca 11893

tggcacgctt gtactgtcac gttttggttt gatcttgtag cccaaaagtt gtgttcattc 11953

tcgttacagt cttacagagg atgattgatt gataaataaa naagaaacag attctgcaac 12013

tgttcatcgc tgttcctaaa tctgatttcg cgatagtatc ttgtctgacc tgtcccaatc 12073

gcagtgctaa aaccatataa tcttgcaagc aaatgaaatt gaaagagttc aatgcaacca 12133

ctaacggtct aacaacatga taaggcct 12161

<210>2

<211>2519

<212>DNA

<213>Oryza satiVa

<220>

<221>CDS

<222>(532)..(2322)

<223>

<400>2

tatctccttc tctctcgtcg ctttctgcgt ctccccgtct ctccttcgcc aacagccgag 60

aagaggcaga gagagcgccg ccccccgtcc ctctctctcc ctctcgtcct cgcccccatc 120

cctctcgtct ttcccttgcc ggcagcagag gaggcggcag cgacggcttc agctgctccc 180

acgggccgga tcgggcagtg gcggtggcgt cggcggcttc cgctggcgaa tccggcgggt 240

gaatcgggtg aaatttgggt gacccccgat acaaatcagt gttccgatag gtaataccct 300

gctctcagca tctgcccttt tgaattcgcc aagagccagc atctgccctt ttgaattcgc 360

caagggccag catctgccca tttgattttg aattcgccaa gagccagcaa cagcgccccc 420

gcgccccctc cctcctccgc aataaacagc cacacgcgcc gcccccatgt ccaccctcat 480

cgccacagcg caccaccacc accaccacca ccaccaccac cgtctccagc c atg gcc 537

Met Ala

1

tcc tcc gcc tcc ctg cag cgc ttc ctc ccc ccg tac ccc cac gcg gca 585

Ser Ser Ala Ser Leu Gln Arg Phe Leu Pro Pro Tyr Pro His Ala Ala

5 10 15

gca tcc cgc tgc cgc cct ccc ggc gtc cgc gcc cgc ccc gtg cag tcg 633

Ala Ser Arg Cys Arg Pro Pro Gly Val Arg Ala Arg Pro Val Gln Ser

20 25 30

tcg acg gtg tcc gca ccg tcc tcc tcg act ccg gcg gcg gac gag gcc 681

Ser Thr Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Thr Pro Ala Ala Asp Glu Ala

35 40 45 50

gtg tcg gcg gag cgg ctg gag ccg cgg gtg gag cag cgg gag ggc cgg 729

Val Ser Ala Glu Arg Leu Glu Pro Arg Val Glu Gln Arg Glu Gly Arg

55 60 65

tac tgg gtg ctc aag gag aag tac cgg acg ggg ctg aac ccg cag gag 777

Tyr Trp Val Leu Lys Glu Lys Tyr Arg Thr Gly Leu Asn Pro Gln Glu

70 75 80

aag gtg aag ctg ggg aag gag ccc atg tca ttg ttc atg gag ggc ggc 825

Lys Val Lys Leu Gly Lys Glu Pro Met Ser Leu Phe Met Glu Gly Gly

85 90 95

atc aag gag ctc gcc aag atg ccc atg gag gag atc gag gcc gac aag 873

Ile Lys Glu Leu Ala Lys Met Pro Met Glu Glu Ile Glu Ala Asp Lys

100 105 110

ctc tcc aag gag gac atc gac gtg cgg ctc aag tgg ctc ggc ctc ttc 921

Leu Ser Lys Glu Asp Ile Asp Val Arg Leu Lys Trp Leu Gly Leu Phe

115 120 125 130

cac cgc cgc aag cat cag tat ggg cgg ttc atg atg cgg ctg aag ctg 969

His Arg Arg Lys His Gln Tyr Gly Arg Phe Met Met Arg Leu Lys Leu

135 140 145

cca aac ggt gtg acg acg agc gag cag acg agg tac ctg gcg agc gtg 1017

Pro Asn Gly Val Thr Thr Ser Glu Gln Thr Arg Tyr Leu Ala Ser Val

150 155 160

atc gag gcg tac ggc aag gag ggc tgc gcc gac gtg aca acc cgc cag 1065

Ile Glu Ala Tyr Gly Lys Glu Gly Cys Ala Asp Val Thr Thr Arg Gln

165 170 175

aac tgg cag atc cgc ggc gtc acg ctc ccc gac gtg ccg gcc atc ctc 1113

Asn Trp Gln Ile Arg Gly Val Thr Leu Pro Asp Val Pro Ala Ile Leu

180 185 190

gac ggg ctc aac gcc gtc ggc ctc acc agc ctc cag agc ggc atg gac 1161

Asp Gly Leu Asn Ala Val Gly Leu Thr Ser Leu Gln Ser Gly Met Asp

195 200 205 210

aac gtc cgc aac ccc gtc ggc aac ccg ctc gcc ggc atc gac ccc gac 1209

Asn Val Arg Asn Pro Val Gly Asn Pro Leu Ala Gly Ile Asp Pro Asp

215 220 225

gag atc gtc gac acg cga tcc tac acc aac ctc ctc tcc tcc tac atc 1257

Glu Ile Val Asp Thr Arg Ser Tyr Thr Asn Leu Leu Ser Ser Tyr Ile

230 235 240

acc agc aac ttc cag ggc aac ccc acc atc acc aac ctg ccg agg aag 1305

Thr Ser Asn Phe Gln Gly Asn Pro Thr Ile Thr Asn Leu Pro Arg Lys

245 250 255

tgg aac gtg tgc gtg atc ggg tcg cac gat ctg tac gag cac ccg cac 1353

Trp Asn Val Cys Val Ile Gly Ser His Asp Leu Tyr Glu His Pro His

260 265 270

atc aac gac ctc gcg tac atg ccg gcg gtg aag ggc ggc aag ttc ggg 1401

Ile Asn Asp Leu Ala Tyr Met Pro Ala Val Lys Gly Gly Lys Phe Gly

275 280 285 290

ttc aac ctc ctt gtc ggc ggg ttc atc agc ccc aag agg tgg gag gag 1449

Phe Asn Leu Leu Val Gly Gly Phe Ile Ser Pro Lys Arg Trp Glu Glu

295 300 305

gcg ctg ccg ctg gac gcc tgg gtc ccc ggc gac gac atc atc ccg gtg 1497

Ala Leu Pro Leu Asp Ala Trp Val Pro Gly Asp Asp Ile Ile Pro Val

310 315 320

tgc aag gcc gtt ctc gag gcg tac cgc gac ctc ggc acc agg ggc aac 1545

Cys Lys Ala Val Leu Glu Ala Tyr Arg Asp Leu Gly Thr Arg Gly Asn

325 330 335

cgc cag aag acc cgc atg atg tgg ctc atc gac gaa ctt gga atg gag 1593

Arg Gln Lys Thr Arg Met Met Trp Leu Ile Asp Glu Leu Gly Met Glu

340 345 350

gct ttt cgg tcg gag gtg gag aag agg atg ccg aac ggc gtg ctg gag 1641

Ala Phe Arg Ser Glu Val Glu Lys Arg Met Pro Asn Gly Val Leu Glu

355 360 365 370

cgc gct gcg ccg gac gac ctc atc gac aag aaa tgg cag agg agg gac 1689

Arg Ala Ala Pro Asp Asp Leu Ile Asp Lys Lys Trp Gln Arg Arg Asp

375 380 385

tac ctc ggc gtg cac ccg cag aag cag gaa ggg atg tcc tac gtc ggc 1737

Tyr Leu Gly Val His Pro Gln Lys Gln Glu Gly Met Ser Tyr Val Gly

390 395 400

ctg cac gtg ccc gtc ggc cgg gtg cag gcg gcg gac atg ttc gag ctc 1785

Leu His Val Pro Val Gly Arg Val Gln Ala Ala Asp Met Phe Glu Leu

405 410 415

gcc cgc ctt gcc gac gag tat ggc tcc ggc gag ctc cgc ctc acc gtg 1833

Ala Arg Leu Ala Asp Glu Tyr Gly Ser Gly Glu Leu Arg Leu Thr Val

420 425 430

gag cag aac atc gtg atc ccg aac gtc aag aac gag aag gtg gag gcg 1881

Glu Gln Asn Ile Val Ile Pro Asn Val Lys Asn Glu Lys Val Glu Ala

435 440 445 450

ctg ctc gcc gag ccg ctg ctt cag aag ttc tcc ccg cag ccg tcg ctg 1929

Leu Leu Ala Glu Pro Leu Leu Gln Lys Phe Ser Pro Gln Pro Ser Leu

455 460 465

ctg ctc aag ggc ctg gtc gcg tgc acc ggc aac cag ttc tgc ggc cag 1977

Leu Leu Lys Gly Leu Val Ala Cys Thr Gly Asn Gln Phe Cys Gly Gln

470 475 480

gcc atc atc gag acg aag cag cgg gcg ctg ctg gtg acg tcg cag gtg 2025

Ala Ile Ile Glu Thr Lys Gln Arg Ala Leu Leu Val Thr Ser Gln Val

485 490 495

gag aag ctc gtg tcg gtg ccc cgg gcg gtg cgg atg cac tgg acc ggc 2073

Glu Lys Leu Val Ser Val Pro Arg Ala Val Arg Met His Trp Thr Gly

500 505 510

tgc ccc aac agc tgc ggc cag gtg cag gtc gcc gac atc ggc ttc atg 2121

Cys Pro Asn Ser Cys Gly Gln Val Gln Val Ala Asp Ile Gly Phe Met

515 520 525 530

ggc tgc ctc acc aag gac agc gcc ggc aag atc gtc gag gcg gcc gac 2169

Gly Cys Leu Thr Lys Asp Ser Ala Gly Lys Ile Val Glu Ala Ala Asp

535 540 545

atc ttc gtc ggc ggc cgc gtc ggc agc gac tcg cac ctc gcc ggc gcg 2217

Ile Phe Val Gly Gly Arg Val Gly Ser Asp Ser His Leu Ala Gly Ala

550 555 560

tac aag aag tcc gtg ccgtgc gac gag ctg gcg ccg atc gtc gcc gac 2265

Tyr Lys Lys Ser Val Pro Cys Asp Glu Leu Ala Pro Ile Val Ala Asp

565 570 575

atc ctg gtc gag cgg ttc ggg gcc gtg cgg agg gag agg gag gag gac 2313

Ile Leu Val Glu Arg Phe Gly Ala Val Arg Arg Glu Arg Glu Glu Asp

580 585 590

gag gag tag gagcacagac tggggtggtt tgcttgctcc ggtgatctct 2362

Glu Glu

595

cgccgtcctt gtaaagtaga cgacaatatg ccttcgccca tggcacgctt gtactgtcac 2422

gttttggttt gatcttgtag cccaaaagtt gtgttcattc tcgttacagt cttacagagg 2482

atgattgatt gataaataaa gaagaaacag attctgc 2519

<210>3

<211>596

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>3

Met Ala Ser Ser Ala Ser Leu Gln Arg Phe Leu Pro Pro Tyr Pro His

1 5 10 15

Ala Ala Ala Ser Arg Cys Arg Pro Pro Gly Val Arg Ala Arg Pro Val

20 25 30

Gln Ser Ser Thr Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Thr Pro Ala Ala Asp

35 40 45

Glu Ala Val Ser Ala Glu Arg Leu Glu Pro Arg Val Glu Gln Arg Glu

50 55 60

Gly Arg Tyr Trp Val Leu Lys Glu Lys Tyr Arg Thr Gly Leu Asn Pro

65 70 75 80

Gln Glu Lys Val Lys Leu Gly Lys Glu Pro Met Ser Leu Phe Met Glu

85 90 95

Gly Gly Ile Lys Glu Leu Ala Lys Met Pro Met Glu Glu Ile Glu Ala

100 105 110

Asp Lys Leu Ser Lys Glu Asp Ile Asp Val Arg Leu Lys Trp Leu Gly

115 120 125

Leu Phe His Arg Arg Lys His Gln Tyr Gly Arg Phe Met Met Arg Leu

130 135 140

Lys Leu Pro Asn Gly Val Thr Thr Ser Glu Gln Thr Arg Tyr Leu Ala

145 150 155 160

Ser Val Ile Glu Ala Tyr Gly Lys Glu Gly Cys Ala Asp Val Thr Thr

165 170 175

Arg Gln Asn Trp Gln Ile Arg Gly Val Thr Leu Pro Asp Val Pro Ala

180 185 190

Ile Leu Asp Gly Leu Asn Ala Val Gly Leu Thr Ser Leu Gln Ser Gly

195 200 205

Met Asp Asn Val Arg Asn Pro Val Gly Asn Pro Leu Ala Gly Ile Asp

210 215 220

Pro Asp Glu Ile Val Asp Thr Arg Ser Tyr Thr Asn Leu Leu Ser Ser

225 230 235 240

Tyr Ile Thr Ser Asn Phe Gln Gly Asn Pro Thr Ile Thr Asn Leu Pro

245 250 255

Arg Lys Trp Asn Val Cys Val Ile Gly Ser His Asp Leu Tyr Glu His

260 265 270

Pro His Ile Asn Asp Leu Ala Tyr Met Pro Ala Val Lys Gly Gly Lys

275 280 285

Phe Gly Phe Asn Leu Leu Val Gly Gly Phe Ile Ser Pro Lys Arg Trp

290 295 300

Glu Glu Ala Leu Pro Leu Asp Ala Trp Val Pro Gly Asp Asp Ile Ile

305 310 315 320

Pro Val Cys Lys Ala Val Leu Glu Ala Tyr Arg Asp Leu Gly Thr Arg

325 330 335

Gly Asn Arg Gln Lys Thr Arg Met Met Trp Leu Ile Asp Glu Leu Gly

340 345 350

Met Glu Ala Phe Arg Ser Glu Val Glu Lys Arg Met Pro Asn Gly Val

355 360 365

Leu Glu Arg Ala Ala Pro Asp Asp Leu Ile Asp Lys Lys Trp Gln Arg

370 375 380

Arg Asp Tyr Leu Gly Val His Pro Gln Lys Gln Glu Gly Met Ser Tyr

385 390 395 400

Val Gly Leu His Val Pro Val Gly Arg Val Gln Ala Ala Asp Met Phe

405 410 415

Glu Leu Ala Arg Leu Ala Asp Glu Tyr Gly Ser Gly Glu Leu Arg Leu

420 425 430

Thr Val Glu Gln Asn Ile Val Ile Pro Asn Val Lys Asn Glu Lys Val

435 440 445

Glu Ala Leu Leu Ala Glu Pro Leu Leu Gln Lys Phe Ser Pro Gln Pro

450 455 460

Ser Leu Leu Leu Lys Gly Leu Val Ala Cys Thr Gly Asn Gln Phe Gys

465 470 475 480

Gly Gln Ala Ile Ile Glu Thr Lys Gln Arg Ala Leu Leu Val Thr Ser

485 490 495

Gln Val Glu Lys Leu Val Ser Val Pro Arg Ala Val Arg Met His Trp

500 505 510

Thr Gly Cys Pro Asn Ser Cys Gly Gln Val Gln Val Ala Asp Ile Gly

515 520 525

Phe Met Gly Cys Leu Thr Lys Asp Ser Ala Gly Lys Ile Val Glu Ala

530 535 540

Ala Asp Ile Phe Val Gly Gly Arg Val Gly Ser Asp Ser His Leu Ala

545 550 555 560

Gly Ala Tyr Lys Lys Ser Val Pro Cys Asp Glu Leu Ala Pro Ile Val

565 570 575

Ala Asp Ile Leu Val Glu Arg Phe Gly Ala Val Arg Arg Glu Arg Glu

580 585 590

Glu Asp Glu Glu

595

<210>4

<211>12179

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>exon

<222>(6001)..(6409)

<223>

<220>

<221>exon

<222>(10255)..(10609)

<223>

<220>

<221>exon

<222>(10712)..(11000)

<223>

<220>

<221>exon

<222>(11094)..(11831)

<223>

<400>4

ctcgagcttt tttgactgcc ctaatcaggc gggttccttg tgggacccac ataatgcttt 60

ttttaatcgc cttcacgggc tgcatgcaaa ctatacggcg tggtacttcc actactagaa 120

aaaacgggct tttcgcaggc gggcaaacct tccgcatgta tattaacgac cgtaaaaatc 180

tccaattttc acaggtggac cccagcaccg cctgcgaaaa taattttcgc aggctgcatt 240

tcgaatcttc ctgggtgcta cagtaaacca cctgcgaaaa tactcacggc gccaaaaaaa 300

aaatttccgc cagccccgcc ccctccctat tcaaatcaca aattctcaca aatctcatcc 360

aaaaacaaaa ttcaatccaa aaatccatac atcaacacaa agcattggat tcaaatccac 420

aacatcaatt tacaagttaa catcaatcaa catgtaagct ttaaaacgaa acgtcgtcgt 480

cgccggcaaa ctccttttgc atgcggtgcc gccgccgccc ccctcccccc tctgtccgga 540

tttgggaggg agggaggtgt ttgccgccac caccgccctc ccctctcctc gtagggccgg 600

atctcgggag ggaggagagg ggagccgcct ccgcacagcc atcaacgtcc gtgccgccgt 660

cgcctcgttc gcaccaccgc cgttgcttcc cctcctccgg ccagatctag gagcggggag 720

gaagagaggg ggagccaccg ccaccgtcgc cccctcgcgt ccgcgccgtc gtcaccgtcc 780

acgccgccgc gtccgtgccg ccgctgtcgc tccccctcct ctggcgagga gggagagaga 840

gggagccgtc gcgccgccgt cgctcccctc cttcggcgag gagggagaga gggggaggga 900

agagggatgg aggggaggag agtggcgctg agagagagag agagagacgc tgaggagagg 960

aaatgagtgg tggggagggg tggaggagaa gataaggagg acttagattt tttttttggg 1020

taagtatgat ttttgcaggc ggaccacata aggttccgcc tgcgaaaatc aattttttcg 1080

cgcagaccac ttaagaggtc cgcatgcgaa aataaaggta tttttttagg cggacctctt 1140

aagtggtccg cctggaaaaa ttgattttcg caagcggatg acgaaaattc accccggttt 1200

atattttcga agatgcttca tcgacgacat cgactgcgtc ctctatgaca gcaacgaccg 1260

cgtcaccgac gacggcatcg atcacgtcat ctacgatgac aatgactgca tcaactccgc 1320

atcactattg tgatgactgt tacacggcgt agaagaacca accaaagtgg tggcttcatc 1380

gccaacgacg tcctctaaca tatgcaagac gtccccaatg gcatcctctg acatctacaa 1440

ggtgcaagat gctaacaatt acagtttttg tcttcacact gtggcataaa tatttttttt 1500

caccttcggc tatatgcggc tacacctaca accacggtta ctacatgatc ggctccatca 1560

acgaacatct ataacaacaa tcattgatgg aaactctagt caaagcgtct gtgtcatcgc 1620

tatcatccat gacactcccg ctatgactac gtgagggaat agataagagt caagggacga 1680

cacggaagga gacgtaggca ccaggtggag gaccatccat caaagatgca attgatgatg 1740

gtgagttgaa gaagatgaag aaataaaata tttcaaatcc agtcgcaatc attcgcttcg 1800

ctcccgttac gactgagggg gaatgttaga agcatagata tattaattgg agataagagt 1860

catacaaata tagagataag atatcatcct agagatagaa tcctagagat aaaatatagt 1920

cctagagata aatctactct tacttgtacc cctatatata ccccatgaga ggatcaatgc 1980

aatacaccga gaatacaaca attagatttt tctacggttg taactataat acgctgtaat 2040

atgctggatc ggggaagagc gcccgtaatc agtgccccag agatgtaggt ctcggttgaa 2100

ctccattatc aaataccgta cctcggtgtc gtcatcatgt ttgaatcttc tatgacgttt 2160

cttttgcatt cggttttcga tgtgacttcg gggctggttt tataacaatg attatagtgc 2220

tgttgacggc aatcggttgt gagaattagc tattcgggtc cctccatgtg attttcttgt 2280

gattgggatg tatggtaatg ctagggtttt aaggtgtagg attggtgcat gagagatcat 2340

cacttcactt gtatgacctt ctctcctttt atattttttt atcattctct cctttttttt 2400

ataatgctac tgaactagtg gaatacaggg gactaatgca aaataaaaga aaagtatcac 2460

tggtcacggc atataattta gaaagtgtgt gatttaggca tagggctgac catgaccctt 2520

tacgacttgg tcgctcggtt tgttagacga tagatcaacc aacaaaagct acgatacatg 2580

atgtacgtgt caggatacaa atccttacaa ataacaacag ttattgttcg ataactatca 2640

gttgtctagg cttaccaatg tataatagaa gatgaaaatt ccatattact ggtatcgttc 2700

aatgctagta actctttgag ctttgtctag gttaaaaaaa aaattatgga tccaccatca 2760

caaaaatgaa aaacaccggg gaaaacaaaa aaccatttga tagcagcaca agacaaaatg 2820

atgttaccgt ctacccgagc tcctactccg taccagcaca accaaacgaa cagtacccgc 2880

cggaccaggg gcacgttcgt aaatttccct cccgtggctg gctggctgcc atctctctca 2940

accagggttg gtaatttcgg ccgtttcggt gggtcccgat agtaaatgag ctccggtcaa 3000

aacgccctcc gcctcccctc attgcgccgc acgcacaccg catctagatc cagatcgaaa 3060

aaatcgctat ctcgccgagt cgccagtcac cgcctcgacg ccggtcgccg taccgccggc 3120

gctgcacgcc cccctccaag ccgtcgcccc atcgccccca gccgcccagt ggtggggcgg 3180

cggatgccga gcttggcgag gttgccgagg acgaaccagg cgaggaggac gaggatcttg 3240

tcgacgagcc agagcgggag ccacgccatg agcaacacgg cgagctcgaa cgtggacttg 3300

ccgagcacct cgccagggag gacgtggacg gcgtcgcgca ccaccatcgc cgggagggcg 3360

ctgtggtcgc acaggtcgag cgacaccacc atgccggagt tgccgcaccc gacgacgagc 3420

accttcttgc cgcggtacgc ctcgccggac ttgtagaccg cgacatgcat cacctcgctg 3480

ctatatttgt tcttggactg tggagacttg ctgtcagtgg gtgtgttcag aattgctgct 3540

gcagcttgca gcgaatttgt gatgcagcag ctgcagcttg tatggctgcc gagtagagcg 3600

agtgttgcta tctgtttttg ttctcttttt cagaaatttc gcccgcaaat tttaaatttg 3660

aattcaaatt tttaaaagaa ctagaaaata tgcccgtgcg ttgcaccggg tgaatatcaa 3720

acaaatattg atgggtaaga ttgcttgtgt acttataaca catatgcaca aaaatattga 3780

atatgtacat acctcgcaaa tatctccaaa ttttatacat atgagttgtg taaatcatgt 3840

gagttccata ttgtcatgtt aatatggagt attactgatg agcccatcta tggtgataat 3900

tttggaggtt gtagctcaac gaatttgtat ttgctatgta tctcaacgtt gataagtcac 3960

tactacaacc atcggcgacc tttctcggga tccaagcatg tcgaccccgc caacgtggcg 4020

tcggtgcagg gcaccgagat gaacaccacg gggctatttg cctgtccagg gtcatcctag 4080

gcttaaggcc acgacactca aggacgtggt aggcggcgtc acagaggtgc tcccagcgaa 4140

caagctggcc accaaggagg acgccgacaa ggtggcggcc accgctatgc agaaacgatg 4200

ggaggcatgc cggtgacgac aaggagctaa cacgatccat ttagtcccga tccgagttta 4260

tcaggaattc aatcctgcac cgtgcggtta cgtttttctt ttccgcggga aaagcaatca 4320

ccgatggtag ggacaaagtg cgtgtgagaa cagaggccag gccaaagtgc gtgcgagaac 4380

ggaggctagg ccatcgctgg attggattta cgaatgaaat atcgatgtga cgaacagaaa 4440

attatcagtt tgatttaatt ttcataatca gaactcttta ataggaaaaa aattacatgt 4500

acgttccttc atcgtgccca tgtccatctg ggagtccagg tttattcaca aagacccaat 4560

caacagccag gaatccatgt ccttccccgc cgttccctac tctgcttttt tttctttcat 4620

ttgaaacctt ccgctatgaa tttctagtcg ttcctagcat ccacgcacac aaaatagatt 4680

tccctcgcaa ggcaaaacat acaaatatga gtgcatgcaa gatattacaa acccaatcca 4740

ttaaaaatag aaaataatta actttagcct acctatctca atattggtat atgcccaaac 4800

tcaaaaggag aaaaaccaaa ctaaaacttt taataaagtg aacccaagag ataaaaaggt 4860

gatagtaaca acaaaatctc acttgacaat gtcgttaatc aacactgttt ttaaatatta 4920

cttaaaaatc tttatattta cctattaaaa caatgaaaaa cagaagatgt ttctttttta 4980

tttacaacag cgttgtattt agtcatgtcc tatctaagag agaaaaatga atttaacgaa 5040

aagaagctca gaaaaaaaaa gagaacaggg ccaccacacc agtaatccct atgttatcaa 5100

tgaaaaaaaa tttcaatgct aggtttttta taagaaaagg tgataaagtg ttgaaaaaat 5160

acagcaggaa attatatatc ttgctggttt aacatgaatt caagcatata gatataaaaa 5220

tatatcaggc taggaaagga aaaggataaa attggagaga aaaaggaaaa gaacagtaga 5280

ggataaccag caaaaagatg aaaggattcg aacccatgac ctagcggtac aattgtttca 5340

caggctaacc aattgagaat catcgacgtt gtgtcatctt gtgtagctac atttgaaaaa 5400

atatgttttg agctgaacgt tggtgtgtcc gcccctgcat ccgatacatg ttggagcgtg 5460

gagcgcggta aagaaaaaat cctatcgaac cttatctcct tctctctcgt cgctttctgc 5520

gtctccccgt ctctccttcg ccaacagccg agaagaggca gagagagcgc cgccccccgt 5580

ccctctctct ccctctcgtc ctcgccccca tccctctcgt ctttcccttg ccggcagcag 5640

aggaggcggc agcgacggct tcagctgctc ccacgggccg gatcgggcag tggcggtggc 5700

gtcggcggct tccgctggcg aatccggcgg gtggatacaa atcagtgttc cgataggtaa 5760

aaccctgctc tcagcatctg cccttttgaa ttcgccaaga gccagcatct gcccttttga 5820

attcgccaag ggccagcatc tgcccatttg attttgaatt cgccaagagc cagcaacagc 5880

gcccccgcgc cccctccctc ctccgcaata aacagccaca cgcgccgccc ccatgtccac 5940

cctcatcgcc acagcgcacc accaccacca ccaccaccac caccaccacc gtctccagcc 6000

atg gcc tcc tcc gcc tcc ctg cag cgc ttc ctc ccc ccg tac ccc cac 6048

Met Ala Ser Ser Ala Ser Leu Gln Arg Phe Leu Pro Pro Tyr Pro His

1 5 10 15

gcg gca gca tcc cgc tgc cgc cct ccc ggc gtc cgc gcc cgc ccc gtg 6096

Ala Ala Ala Ser Arg Cys Arg Pro Pro Gly Val Arg Ala Arg Pro Val

20 25 30

cag tcg tcg acg gtg tcc gca ccg tcc tcc tcg act ccg gcg gcg gac 6144

Gln Ser Ser Thr Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Thr Pro Ala Ala Asp

35 40 45

gag gcc gtg tcg gcg gag cgg ctg gag ccg cgg gtg gag cag cgg gag 6192

Glu Ala Val Ser Ala Glu Arg Leu Glu Pro Arg Val Glu Gln Arg Glu

50 55 60

ggc cgg tac tgg gtg ctc aag gag aag tac cgg acg ggg ctg aac ccg 6240

Gly Arg Tyr Trp Val Leu Lys Glu Lys Tyr Arg Thr Gly Leu Asn Pro

65 70 75 80

cag gag aag gtg aag ctg ggg aag gag ccc atg tca ttg ttc atg gag 6288

Gln Glu Lys Val Lys Leu Gly Lys Glu Pro Met Ser Leu Phe Met Glu

85 90 95

ggc ggc atc aag gag ctc gcc aag atg ccc atg gag gag atc gag gcc 6336

Gly Gly Ile Lys Glu Leu Ala Lys Met Pro Met Glu Glu Ile Glu Ala

100 105 110

gac aag ctc tcc aag gag gac atc gac gtg cgg ctc aag tgg ctc ggc 6384

Asp Lys Leu Ser Lys Glu Asp Ile Asp Val Arg Leu Lys Trp Leu Gly

115 120 125

ctc ttc cac cgc cgc aag cat cag t gtatgcctct cttctcttgc 6429

Leu Phe His Arg Arg Lys His Gln

130 135

tcctctgatc aacacatttt cttgctttcg ttcggttatt tgtcgcgccg aggaagttaa 6489

ttcgccaaga tattctgcag ttttttttct cgatgcacat tcagcaacct aattaagact 6549

gattaagttg ctgtgatttt tatagcttaa ttacggtctc gtgggtaatg actatttata 6609

ttgagtaaac atggttacct ttgatccaat cacttcacct ccatgtgcca tatatagcca 6669

caggctctac caagtaacac tagtaatatg cctgtgatac gccacggtgg cataataaat 6729

cattaaattt tattataatc aaattaagga tcctaaaatt ggtccaattg ggtgttaatt 6789

cgatgcaggt catataaaaa tatattttag gcaaggtgca attcaagagc atcaaccatt 6849

atatccaatc actttaatat atatttgaag ataacatatg tcggaaaaaa aatgatggag 6909

agctatttca ttaacttgtg agcataaaca gatcaccaga tgatgccacc ataagtcccg 6969

ccacagtaag tgatgcagct catcttgccc taggcgttcg gtctaaccag tagatagaaa 7029

gagtacaaca tagatcgaat gaaaaaaaaa atctccagaa gaaagctcaa ccacattgag 7089

taaattagag caacaatcaa atcgagtcag catatcgtta tgttagcaga accaatcacc 7149

acaatttgtt tctcctcttt atctaagtgt tttgccaggt taaaagcata tatcactatg 7209

ttccaagcaa acatcggcaa tggacatgtc aaaaataaat gatcaattgt ttctttgagt 7269

acaaaattga caatggacac tatgttcctt tgttagaatt ctatttgtca gggtaggatg 7329

tagaaaaact taacttttag aggaagctta aatatccggc ataaacttgc tttttcagcg 7389

ctctataaaa taattcaaca gtgaattgtc catcttttct aagtgctcca aaagacacta 7449

agttgaaaaa ccaggtgaac caacagattg atccacaaaa tcttattatt agattattca 7509

cttaaaagcc tgtctttatt tcaaacatat aaaaacagaa gttattaatc agggaagcgc 7569

ttatggcagc ctgagcgaac cagtgatagc aagtggtgaa aacagtaaat aggatacata 7629

aaaattatac aaggtttcta ctgtttatca aaaaaaaata tttgaaaaca gtaaatagga 7689

tacataatcg acttccaact tgtccttatc ataacatcca gaatcacaac aagaattgca 7749

acgaatacat agtcgacttg agctaagaag tcacaagacc tgtcaaagta agctgccctt 7809

gatcttgaag tgaaaggcat attttattgt cttccttggc aaacagatat cactgtcttc 7869

agcagttcag ttagataatc caagatttct cacggagaag agcatatcac tcgcatcagt 7929

gttgtgccct ccaaatactg agataaactg aattttgttc tctttgaagc atctgcaggc 7989

attaacaatt ataatacttt acaaagtttc attgggtcta aactattgtt tgcacatcat 8049

atatatgccc agaacttttt agcatgatac aagggtcctg ttcataactc atgcctaaat 8109

ctgacaaatt tgtcaaacga caatataagt cgaattataa tgcgttttag aattgacgcc 8169

aaaacttttg ctagcgtaag taactcttcc acctcccagc atgcatacaa ccaacaagct 8229

aaacttttgt tcaaaaaaat gtacatttat ttccttgaac acagcctttg tagaatatga 8289

ttaaaaactc atggatgaat gaaataatgt aaaagaatgg tcaaaatgat gaatagtaca 8349

agaagcaact gtgaacattt cacctttacc tgactgttcg caagaaggcc acgtggcaga 8409

aaagccagaa atgcaagaag cttccctaat tgatacacca tcaagaaatc aatggactca 8469

acaccagcgt ctgcccagac aaaatgaatg caggcaccta aaatatagaa ccattgactt 8529

ttcaacactg aattatataa cctgaatatc ttgttttttt aacacatctg acaaaatcag 8589

tgcattctgt tccatataga tgtatgcata gctcccatat gttagttgat cgatgagcat 8649

gcaaactata cacaccttac gttactccct ctgtcaaaaa aaatataagc ttgtctagat 8709

acatagctac aaatgcttat atttttggat tctcttaaag ctgtagaaac ttttatcgcc 8769

ccgccatggc aagtcgagat gccatcccca atgaaagccc ccacacaggt ttcatgccct 8829

gctgcacaat attgagcaac caaaaatata ataatatttg tgtcagaatt tgaatcaacc 8889

ttacagatac tgggtggcca gaaaatctag tccaagtaat atcctgaaaa atagcaactg 8949

gcaaatacta aaggcagtga agagtttcct ttagatcaga tgataaaaaa aaatcatatg 9009

ttcaatagca ataatcactc acattttttt tgctgtttag aatttagata attagtagtt 9069

aaacttctat agcttgcgta gctaagatca atggtgatta ttagttgaaa aaataatcaa 9129

atcatcaaac tgaggagact tatacctgcc ataagttctg aaatttcaat gatcctagtc 9189

aatatttact gtatatatag aattaggtcc aaaagatgat acttacaatt aaggatgttg 9249

tattgatcgg ttcataactc aagcttctat ttatcattaa tcaaaagctg gatcattcat 9309

gcatatacct ttgccgcact caacgtagca gctcggagtc ttctttgttc agaagcgagg 9369

aaggagtcaa caaataagta ctgcaatgtt aaacaaaccg acatatcaaa tcccaaatta 9429

agaatgcatg atttattaat acaggaaata tatgatcaag tcccaaaaag tgagtcatgt 9489

tatgtacact cagtcatcaa tttcaataag aatattaact tgctcattgg tatatggatt 9549

tgattatgac ataatttgac aatacattta cagaataaac ttgcagtgct gtgagcatat 9609

gttactaaca tgtaaggacc ttgttttgct ctgttcaata ctcatgttga tcttgatctg 9669

tgtccacata tacctaaatg aaatgaaatc aaagaatgag gtttgtagga gtggagttgg 9729

tgaattatag ggtagataat gtcggcacaa ccgtttgata agtagtacga gtactttatt 9789

tggcgccacc gcgccagcat cagatgtgtg gcctttgcac tgattgaatc caaaagaaaa 9849

aaaaagtcgt tttggtccca cacaattcta cttcatctgc aggatgtaca gaaggttaca 9909

tatctattct gttctatgct ctgtttacat ttatatttat agtactaggt tgaaagggct 9969

cacttggtgg ctgtcattgg ttggctggtg cggtatatta ctaataggtt ttttaatggc 10029

atatatgttc ttaaaataaa ccagaaaagc aaaagatcaa ctatcttagc cacaccaatg 10089

aaatggaata tactgaactg tcacggctaa aattctcttc agtcacctgg cccaactgga 10149

gccgtgggct cgtcgtcttt tctaaacatg tactagtatt ttgggggccc acagtgaatt 10209

tggcccaaaa tgctgacagc cgctctacgg ctctacgctg tgcag at ggg cgg ttc 10265

Tyr Gly Arg Phe

140

atg atg cgg ctg aag ctg cca aac ggt gtg acg acg agc gag cag acg 10313

Met Met Arg Leu Lys Leu Pro Asn Gly Val Thr Thr Ser Glu Gln Thr

145 150 155

agg tac ctg gcg agc gtg atc gag gcg tac ggc aag gag ggc tgc gcc 10361

Arg Tyr Leu Ala Ser Val Ile Glu Ala Tyr Gly Lys Glu Gly Cys Ala

160 165 170

gac gtg aca acc cgc cag aac tgg cag atc cgc ggc gtc acg ctc ccc 10409

Asp Val Thr Thr Arg Gln Asn Trp Gln Ile Arg Gly Val Thr Leu Pro

175 180 185

gac gtg ccg gcc atc ctc gac ggg ctc aac gcc gtc ggc ctc acc agc 10457

Asp Val Pro Ala Ile Leu Asp Gly Leu Asn Ala Val Gly Leu Thr Ser

190 195 200

ctc cag agc ggc atg gac aac gtc cgc aac ccc gtc ggc aac ccg ctc 10505

Leu Gln Ser Gly Met Asp Asn Val Arg Asn Pro Val Gly Asn Pro Leu

205 210 215 220

gcc ggc atc gac ccc gac gag atc gtc gac acg cga tcc tac acc aac 10553

Ala Gly Ile Asp Pro Asp Glu Ile Val Asp Thr Arg Ser Tyr Thr Asn

225 230 235

ctc ctc tcc tcc tac atc acc agc aac ttc cag ggc aac ccc acc atc 10601

Leu Leu Ser Ser Tyr Ile Thr Ser Asn Phe Gln Gly Asn Pro Thr Ile

240 245 250

acc aac ct gtgagtgatc gaatcaaatt gatcatgctc tgtgctgtgc 10649

Thr Asn Leu

tgtttcgtgt cgtctctgac gacatgtttg ttgaatttgt tgttgctgcg tgctgttggc 10709

ag g ccg agg aag tgg aac gtg tgc gtg atc ggg tcg cac gat ctg tac 10757

Pro Arg Lys Trp Asn Val Cys Val Ile Gly Ser His Asp Leu Tyr

260 265 270

gag cac cca cac atc aac gac ctc gcg tac atg ccg gcg gtg aag ggc 10805

Glu His Pro His Ile Asn Asp Leu Ala Tyr Met Pro Ala Val Lys Gly

275 280 285

ggc aag ttc ggg ttc aac ctc ctc gtc ggc ggg ttc ata agc ccc aag 10853

Gly Lys Phe Gly Phe Asn Leu Leu Val Gly Gly Phe Ile Ser Pro Lys

290 295 300

agg tgg gag gag gcg ctg ccg ctc gac gcc tgg gtc ccc ggc gac gac 10901

Arg Trp Glu Glu Ala Leu Pro Leu Asp Ala Trp Val Pro Gly Asp Asp

305 310 315

atc atc ccg gtg tgc aag gcc gtt ctc gag gcg tac cgc gac ctc ggc 10949

Ile Ile Pro Val Cys Lys Ala Val Leu Glu Ala Tyr Arg Asp Leu Gly

320 325 330

acc agg ggc aac cgc cag aag acc cgc atg atg tgg ctc atc gac gaa 10997

Thr Arg Gly Asn Arg Gln Lys Thr Arg Met Met Trp Leu Ile Asp Glu

335 340 345 350

ctt gtgaaccatt tttttctcca ttcatccacg ccattgactg aattacgtat 11050

Leu

gtcccaatgt tcttatcagt taattgcggt gttggcattg cag gga atg gag gct 11105

Gly Met Glu Ala

355

ttt cgg tcg gag gtg gag aag agg atg ccg aac ggc gtg ctg gag cgc 11153

Phe Arg Ser Glu Val Glu Lys Arg Met Pro Asn Gly Val Leu Glu Arg

360 365 370

gcg gcg ccg gag gac ctc atc gac aag aaa tgg cag agg agg gac tac 11201

Ala Ala Pro Glu Asp Leu Ile Asp Lys Lys Trp Gln Arg Arg Asp Tyr

375 380 385

ctc ggc gtg cac ccg cag aag cag gaa ggg atg tcc tac gtc ggc ctg 11249

Leu Gly Val His Pro Gln Lys Gln Glu Gly Met Ser Tyr Val Gly Leu

390 395 400

cac gtg ccc gtc ggc cgg gtg cag gcg gcg gac atg ttc gag ctc gca 11297

His Val Pro Val Gly Arg Val Gln Ala Ala Asp Met Phe Glu Leu Ala

405 410 415

cgc ctc gcc gac gag tac ggc tcc ggc gag ctc cgc ctc acc gtg gag 11345

Arg Leu Ala Asp Glu Tyr Gly Ser Gly Glu Leu Arg Leu Thr Val Glu

420 425 430 435

cag aac atc gtg atc ccg aac gtc aag aac gag aag gtg gag gcg ctg 11393

Gln Asn Ile Val Ile Pro Asn Val Lys Asn Glu Lys Val Glu Ala Leu

440 445 450

ctc tcc gag ccg ctg ctt cag aag ttc tcc ccg cag ccg tcg ctg ctg 11441

Leu Ser Glu Pro Leu Leu Gln Lys Phe Ser Pro Gln Pro Ser Leu Leu

455 460 465

ctc aag ggc ctc gtc gcg tgc acc ggc aac cag ttc tgc ggc cag gcc 11489

Leu Lys Gly Leu Val Ala Cys Thr Gly Asn Gln Phe Cys Gly Gln Ala

470 475 480

atc atc gag acg aag cag cgg gcg ctg ctg gtg acg tcg cag gtg gag 11537

Ile Ile Glu Thr Lys Gln Arg Ala Leu Leu Val Thr Ser Gln Val Glu

485 490 495

aag ctc gtg tcg gtg ccc cgg gcg gtg cgg atg cac tgg acc ggc tgc 11585

Lys Leu Val Ser Val Pro Arg Ala Val Arg Met His Trp Thr Gly Cys

500 505 510 515

ccc aac agc tgc ggc cag gtg cag gtc gcc gac atc ggc ttc atg ggc 11633

Pro Asn Ser Cys Gly Gln Val Gln Val Ala Asp Ile Gly Phe Met Gly

520 525 530

tgc ctc acc aag gac agc gcc ggc aag atc gtt gag gcg gcc gac atc 11681

Cys Leu Thr Lys Asp Ser Ala Gly Lys Ile Val Glu Ala Ala Asp Ile

535 540 545

ttc gtc ggc ggc cgc gtc ggc agc gac tcg cac ctc gcc ggc gcg tac 11729

Phe Val Gly Gly Arg Val Gly Ser Asp Ser His Leu Ala Gly Ala Tyr

550 555 560

aag aag tcc gtg ccg tgc gac gag ctg gcg ccg atc gtc gcc gac atc 11777

Lys Lys Ser Val Pro Cys Asp Glu Leu Ala Pro Ile Val Ala Asp Ile

565 570 575

ctg gtc gag cgg ttc ggg gcc gtg cgg agg gag agg gag gag gac gag 11825

Leu Val Glu Arg Phe Gly Ala Val Arg Arg Glu Arg Glu Glu Asp Glu

580 585 590 595

gag tag gaacacagac tggggtgttt tgcttgctcc ggtgatctct cgccgtcctt 11881

Glu

gtaaagtaga cgacaatatg ccttcgccca tggcacgctt gtactgtcac gttttggttt 11941

gatcttgtag cccaaaagtt gtgttcattc tcgttacagt cttacagagg atgattgatt 12001

gataaataaa gaagaaacag attctgcaac tgttcatcgc tgttcctaaa tctgatttag 12061

cgaaagtatc ttgcctgacc tgtcccaatc gcagtgctaa aaccatataa tcttgcaagc 12121

aaatgaaatt gaaagagttc aatgcaacca ctaacagtct aacaacatga taaggcct 12179

<210>5

<211>2508

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>CDS

<222>(519)..(2309)

<223>

<400>5

tatcgaacct tatctccttc tctctcgtcg ctttctgcgt ctccccgtct ctccttcgcc 60

aacagccgag aagaggcaga gagagcgccg ccccccgtcc ctctctctcc ctctcgtcct 120

cgcccccatc cctctcgtct ttcccttgcc ggcagcagag gaggcggcag cgacggcttc 180

agctgctccc acgggccgga tcgggcagtg gcggtggcgt cggcggcttc cgctggcgaa 240

tccggcgggt ggatacaaat cagtgttccg ataggtaaaa ccctgctctc agcatctgcc 300

cttttgaatt cgccaagagc cagcatctgc ccttttgaat tcgccaaggg ccagcatctg 360

cccatttgat tttgaattcg ccaagagcca gcaacagcgc ccccgcgccc cctccctcct 420

ccgcaataaa cagccacacg cgccgccccc atgtccaccc tcatcgccac agcgcaccac 480

caccaccacc accaccacca ccaccaccgt ctccagcc atg gcc tcc tcc gcc tcc 536

Met Ala Ser Ser Ala Ser

1 5

ctg cag cgc ttc ctc ccc ccg tac ccc cac gcg gca gca tcc cgc tgc 584

Leu Gln Arg Phe Leu Pro Pro Tyr Pro His Ala Ala Ala Ser Arg Cys

10 15 20

cgc cct ccc ggc gtc cgc gcc cgc ccc gtg cag tcg tcg acg gtg tcc 632

Arg Pro Pro Gly Val Arg Ala Arg Pro Val Gln Ser Ser Thr Val Ser

25 30 35

gca ccg tcc tcc tcg act ccg gcg gcg gac gag gcc gtg tcg gcg gag 680

Ala Pro Ser Ser Ser Thr Pro Ala Ala Asp Glu Ala Val Ser Ala Glu

40 45 50

cgg ctg gag ccg cgg gtg gag cag cgg gag ggc cgg tac tgg gtg ctc 728

Arg Leu Glu Pro Arg Val Glu Gln Arg Glu Gly Arg Tyr Trp Val Leu

55 60 65 70

aag gag aag tac cgg acg ggg ctg aac ccg cag gag aag gtg aag ctg 776

Lys Glu Lys Tyr Arg Thr Gly Leu Asn Pro Gln Glu Lys Val Lys Leu

75 80 85

ggg aag gag ccc atg tca ttg ttc atg gag ggc ggc atc aag gag ctc 824

Gly Lys Glu Pro Met Ser Leu Phe Met Glu Gly Gly Ile Lys Glu Leu

90 95 100

gcc aag atg ccc atg gag gag atc gag gcc gac aag ctc tcc aag gag 872

Ala Lys Met Pro Met Glu Glu Ile Glu Ala Asp Lys Leu Ser Lys Glu

105 110 115

gac atc gac gtg cgg ctc aag tgg ctc ggc ctc ttc cac cgc cgc aag 920

Asp Ile Asp Val Arg Leu Lys Trp Leu Gly Leu Phe His Arg Arg Lys

120 125 130

cat cag tat ggg cgg ttc atg atg cgg ctg aag ctg cca aac ggt gtg 968

His Gln Tyr Gly Arg Phe Met Met Arg Leu Lys Leu Pro Asn Gly Val

135 140 145 150

acg acg agc gag cag acg agg tac ctg gcg agc gtg atc gag gcg tac 1016

Thr Thr Ser Glu Gln Thr Arg Tyr Leu Ala Ssr Val Ile Glu Ala Tyr

155 160 165

ggc aag gag ggc tgc gcc gac gtg aca acc cgc cag aac tgg cag atc 1064

Gly Lys Glu Gly Cys Ala Asp Val Thr Thr Arg Gln Asn Trp Gln Ile

170 175 180

cgc ggc gtc acg ctc ccc gac gtg ccg gcc atc ctc gac ggg ctc aac 1112

Arg Gly Val Thr Leu Pro Asp Val Pro Ala Ile Leu Asp Gly Leu Asn

185 190 195

gcc gtc ggc ctc acc agc ctc cag agc ggc atg gac aac gtc cgc aac 1160

Ala Val Gly Leu Thr Ser Leu Gln Ser Gly Met Asp Asn Val Arg Asn

200 205 210

ccc gtc ggc aac ccg ctc gcc ggc atc gac ccc gac gag atc gtc gac 1208

Pro Val Gly Asn Pro Leu Ala Gly Ile Asp Pro Asp Glu Ile Val Asp

215 220 225 230

acg cga tcc tac acc aac ctc ctc tcc tcc tac atc acc agc aac ttc 1256

Thr Arg Ser Tyr Thr Asn Leu Leu Ser Ser Tyr Ile Thr Ser Asn Phe

235 240 245

cag ggc aac ccc acc atc acc aac ctg ccg agg aag tgg aac gtg tgc 1304

Gln Gly Asn Pro Thr Ile Thr Asn Leu Pro Arg Lys Trp Asn Val Cys

250 255 260

gtg atc ggg tcg cac gat ctg tac gag cac cca cac atc aac gac ctc 1352

Val Ile Gly Ser His Asp Leu Tyr Glu His Pro His Ile Asn Asp Leu

265 270 275

gcg tac atg ccg gcg gtg aag ggc ggc aag ttc ggg ttc aac ctc ctc 1400

Ala Tyr Met Pro Ala Val Lys Gly Gly Lys Phe Gly Phe Asn Leu Leu

280 285 290

gtc ggc ggg ttc ata agc ccc aag agg tgg gag gag gcg ctg ccg ctc 1448

Val Gly Gly Phe Ile Ser Pro Lys Arg Trp Glu Glu Ala Leu Pro Leu

295 300 305 310

gac gcc tgg gtc ccc ggc gac gac atc atc ccg gtg tgc aag gcc gtt 1496

Asp Ala Trp Val Pro Gly Asp Asp Ile Ile Pro Val Cys Lys Ala Val

315 320 325

ctc gag gcg tac cgc gac ctc ggc acc agg ggc aac cgc cag aag acc 1544

Leu Glu Ala Tyr Arg Asp Leu Gly Thr Arg Gly Asn Arg Gln Lys Thr

330 335 340

cgc atg atg tgg ctc atc gac gaa ctt gga atg gag gct ttt cgg tcg 1592

Arg Met Met Trp Leu Ile Asp Glu Leu Gly Met Glu Ala Phe Arg Ser

345 350 355

gag gtg gag aag agg atg ccg aac ggc gtg ctg gag cgc gcg gcg ccg 1640

Glu Val Glu Lys Arg Met Pro Asn Gly Val Leu Glu Arg Ala Ala Pro

360 365 370

gag gac ctc atc gac aag aaa tgg cag agg agg gac tac ctc ggc gtg 1688

Glu Asp Leu Ile Asp Lys Lys Trp Gln Arg Arg Asp Tyr Leu Gly Val

375 380 385 390

cac ccg cag aag cag gaa ggg atg tcc tac gtc ggc ctg cac gtg ccc 1736

His Pro Gln Lys Gln Glu Gly Met Ser Tyr Val Gly Leu His Val Pro

395 400 405

gtc ggc cgg gtg cag gcg gcg gac atg ttc gag ctc gca cgc ctc gcc 1784

Val Gly Arg Val Gln Ala Ala Asp Met Phe Glu Leu Ala Arg Leu Ala

410 415 420

gac gag tac ggc tcc ggc gag ctc cgc ctc acc gtg gag cag aac atc 1832

Asp Glu Tyr Gly Ser Gly Glu Leu Arg Leu Thr Val Glu Gln Asn Ile

425 430 435

gtg atc ccg aac gtc aag aac gag aag gtg gag gcg ctg ctc tcc gag 1880

Val Ile Pro Asn Val Lys Asn Glu Lys Val Glu Ala Leu Leu Ser Glu

440 445 450

ccg ctg ctt cag aag ttc tcc ccg cag ccg tcg ctg ctg ctc aag ggc 1928

Pro Leu Leu Gln Lys Phe Ser Pro Gln Pro Ser Leu Leu Leu Lys Gly

455 460 465 470

ctc gtc gcg tgc acc ggc aac cag ttc tgc ggc cag gcc atc atc gag 1976

Leu Val Ala Cys Thr Gly Asn Gln Phe Cys Gly Gln Ala Ile Ile Glu

475 480 485

acg aag cag cgg gcg ctg ctg gtg acg tcg cag gtg gag aag ctc gtg 2024

Thr Lys Gln Arg Ala Leu Leu Val Thr Ser Gln Val Glu Lys Leu Val

490 495 500

tcg gtg ccc cgg gcg gtg cgg atg cac tgg acc ggc tgc ccc aac agc 2072

Ser Val Pro Arg Ala Val Arg Met His Trp Thr Gly Cys Pro Asn Ser

505 510 515

tgc ggc cag gtg cag gtc gcc gac atc ggc ttc atg ggc tgc ctc acc 2120

Cys Gly Gln Val Gln Val Ala Asp Ile Gly Phe Met Gly Cys Leu Thr

520 525 530

aag gac agc gcc ggc aag atc gtt gag gcg gcc gac atc ttc gtc ggc 2168

Lys Asp Ser Ala Gly Lys Ile Val Glu Ala Ala Asp Ile Phe Val Gly

535 540 545 550

ggc cgc gtc ggc agc gac tcg cac ctc gcc ggc gcg tac aag aag tcc 2216

Gly Arg Val Gly Ser Asp Ser His Leu Ala Gly Ala Tyr Lys Lys Ser

555 560 565

gtg ccg tgc gac gag ctg gcg ccg atc gtc gcc gac atc ctg gtc gag 2264

Val Pro Cys Asp Glu Leu Ala Pro Ile Val Ala Asp Ile Leu Val Glu

570 575 580

cgg ttc ggg gcc gtg cgg agg gag agg gag gag gac gag gag tag 2309

Arg Phe Gly Ala Val Arg Arg Glu Arg Glu Glu Asp Glu Glu

585 590 595

gaacacagac tggggtgttt tgcttgctcc ggtgatctct cgccgtcctt gtaaagtaga 2369

cgacaatatg ccttcgccca tggcacgctt gtactgtcac gttttggttt gatcttgtag 2429

cccaaaagtt gtgttcattc tcgttacagt cttacagagg atgattgatt gataaataaa 2489

gaagaaacag attctgcaa 2508

<210>6

<211>596

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>6

Met Ala Ser Ser Ala Ser Leu Gln Arg Phe Leu Pro Pro Tyr Pro His

1 5 10 15

Ala Ala Ala Ser Arg Cys Arg Pro Pro Gly Val Arg Ala Arg Pro Val

20 25 30

Gln Ser Ser Thr Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Thr Pro Ala Ala Asp

35 40 45

Glu Ala Val Ser Ala Glu Arg Leu Glu Pro Arg Val Glu Gln Arg Glu

50 55 60

Gly Arg Tyr Trp Val Leu Lys Glu Lys Tyr Arg Thr Gly Leu Asn Pro

65 70 75 80

Gln Glu Lys Val Lys Leu Gly Lys Glu Pro Met Ser Leu Phe Met Glu

85 90 95

Gly Gly Ile Lys Glu Leu Ala Lys Met Pro Met Glu Glu Ile Glu Ala

100 105 110

Asp Lys Leu Ser Lys Glu Asp Ile Asp Val Arg Leu Lys Trp Leu Gly

115 120 125

Leu Phe His Arg Arg Lys His Gln Tyr Gly Arg Phe Met Met Arg Leu

130 135 140

Lys Leu Pro Asn Gly Val Thr Thr Ser Glu Gln Thr Arg Tyr Leu Ala

145 150 155 160

Ser Val Ile Glu Ala Tyr Gly Lys Glu Gly Cys Ala Asp Val Thr Thr

165 170 175

Arg Gln Asn Trp Gln Ile Arg Gly Val Thr Leu Pro Asp Val Pro Ala

180 185 190

Ile Leu Asp Gly Leu Asn Ala Val Gly Leu Thr Ser Leu Gln Ser Gly

195 200 205

Met Asp Asn Val Arg Asn Pro Val Gly Asn Pro Leu Ala Gly Ile Asp

210 215 220

Pro Asp Glu Ile Val Asp Thr Arg Ser Tyr Thr Asn Leu Leu Ser Ser

225 230 235 240

Tyr Ile Thr Ser Asn Phe Gln Gly Asn Pro Thr Ile Thr Asn Leu Pro

245 250 255

Arg Lys Trp Asn Val Cys Val Ile Gly Ser His Asp Leu Tyr Glu His

260 265 270

Pro His Ile Asn Asp Leu Ala Tyr Met Pro Ala Val Lys Gly Gly Lys

275 280 285

Phe Gly Phe Asn Leu Leu Val Gly Gly Phe Ile Ser Pro Lys Arg Trp

290 295 300

Glu Glu Ala Leu Pro Leu Asp Ala Trp Val Pro Gly Asp Asp Ile Ile

305 310 315 320

Pro Val Cys Lys Ala Val Leu Glu Ala Tyr Arg Asp Leu Gly Thr Arg

325 330 335

Gly Asn Arg Gln Lys Thr Arg Met Met Trp Leu Ile Asp Glu Leu Gly

340 354 350

Met Glu Ala Phe Arg Ser Glu Val Glu Lys Arg Met Pro Asn Gly Val

355 360 365

Leu Glu Arg Ala Ala Pro Glu Asp Leu Ile Asp Lys Lys Trp Gln Arg

370 375 380

Arg Asp Tyr Leu Gly Val His Pro Gln Lys Gln Glu Gly Met Ser Tyr

385 390 395 400

Val Gly Leu His Val Pro Val Gly Arg Val Gln Ala Ala Asp Met Phe

405 410 415

Glu Leu Ala Arg Leu Ala Asp Glu Tyr Gly Ser Gly Glu Leu Arg Leu

420 425 430

Thr Val Glu Gln Asn Ile Val Ile Pro Asn Val Lys Asn Glu Lys Val

435 440 445

Glu Ala Leu Leu Ser Glu Pro Leu Leu Gln Lys Phe Ser Pro Gln Pro

450 455 460

Ser Leu Leu Leu Lys Gly Leu Val Ala Cys Thr Gly Asn Gln Phe Cys

465 470 475 480

Gly Gln Ala Ile Ile Glu Thr Lys Gln Arg Ala Leu Leu Val Thr Ser

485 490 495

Gln Val Glu Lys Leu Val Ser Val Pro Arg Ala Val Arg Met His Trp

500 505 510

Thr Gly Cys Pro Asn Ser Cys Gly Gln Val Gln Val Ala Asp Ile Gly

515 520 525

Phe Met Gly Cys Leu Thr Lys Asp Ser Ala Gly Lys Ile Val Glu Ala

530 535 540

Ala Asp Ile Phe Val Gly Gly Arg Val Gly Ser Asp Ser His Leu Ala

545 550 555 560

Gly Ala Tyr Lys Lys Ser Val Pro Cys Asp Glu Leu Ala Pro Ile Val

565 570 575

Ala Asp Ile Leu Val Glu Arg Phe Gly Ala Val Arg Arg Glu Arg Glu

580 585 590

Glu Asp Glu Glu

595

Claims

1.一种与植物再生能力有关的DNA，所述DNA是：

(a)编码由SEQ ID NO：3的氨基酸序列组成的蛋白质的DNA；或

(b)由SEQ ID NO：1或2的核苷酸序列的编码区组成的DNA。

2.包含权利要求1的DNA的载体。

3.携带权利要求2的载体的宿主细胞。

4.携带权利要求2的载体的植物细胞。

5.一种用于制备植物转化体的方法，该方法包括将权利要求1的DNA导入植物细胞和从所述植物细胞再生植物的步骤。

6.由权利要求1的DNA所编码的蛋白质。

7.一种用于制备权利要求6的蛋白质的方法，该方法包括培养权利要求3的宿主细胞并从所述细胞或其培养物上清中收集重组蛋白质的步骤。

8.与权利要求6的蛋白质结合的抗体。

9.一种用于提高植物的再生能力的方法，该方法包括在植物的细胞中表达权利要求1的DNA的步骤。

10.一种用于改变植物的再生能力的制剂，该制剂包含权利要求1的DNA或权利要求2的载体作为活性成分。

11.一种用于测定植物细胞的再生能力的方法，该方法包括检测权利要求1的DNA或权利要求6的蛋白质在植物细胞中的表达的步骤。

12.一种用于测定植物细胞的再生能力的方法，该方法包括检测权利要求6的蛋白质在植物细胞中的活性的步骤。

13.一种用于提高植物的再生能力的方法，该方法包括调节该植物中的内源性的权利要求6的蛋白质的活性的步骤。

14.一种用于选择转化的植物细胞的方法，该方法包括以下步骤：

(a)将包含用作选择标记的权利要求1的DNA的载体导入植物细胞中；和

(b)培养所述植物细胞并选择已经获得再生能力的植物细胞。

15.一种用于改变植物的再生能力的方法，该方法包括通过杂交取代植物中的内源性的权利要求1的DNA的步骤。

16.包含权利要求4的植物细胞的植物转化体在制备所述植物转化体的后代或克隆中的用途。

17.包含权利要求4的植物细胞的植物转化体在制备所述植物转化体的繁殖材料中的用途。