CN100443894C - 治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂及制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂及制备方法和质量控制方法，它是用熟大黄240g、土鳖虫200g、水蛭200g、桃仁180g、蒲黄160g、黄芩120g、枳实180g、牡蛎240g、地黄240g、白芍180g、甘草60g和适当的辅料制备而成的；与现有技术相比，本发明分散片遇水即迅速崩解并均匀分散，具有崩解时间短，分散状态佳；药物溶出迅速，吸收快，生物利用度高；适宜于工业化大生产；服用方便；吸收快且生产、携带、运输方便、质量稳定等优点。本发明质量控制方法科学合理，精密度高，稳定性强，可有效保证其临床疗效。

Description

治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂及制备方法和质量控制方法

技术领域：

本发明涉及一种治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂及制备方法和质量控制方法，属于中药的技术领域。

背景技术：

子宫肌瘤是妇科常见的良性肿瘤，在生育期妇女中其发病率为25％左右，是导致育龄妇女子宫全切除的主要原因之一。传统医学认为其发病原因源于气机阻滞、瘀血内停。目前市场上治疗子宫肌瘤的药物比较多，其中常用的宫瘤清胶囊具有活血逐瘀，消癥破积，养血清热功效，用于瘀血内停所致的小腹胀痛，经色紫黯有块，以及子宫壁间肌瘤及浆膜下肌瘤见上述症状者，有一定的治疗效果；但此胶囊剂存在患者服药后局部药物浓度过高等不足之处，而分散片制剂是近年来发展起来的一种速效制剂，有“固体口服液”之美誉，集片剂与口服液制剂的优点于一身，并克服了两者的不足，能解决现有胶囊制剂存在的问题。另外，为了全面考察和控制产品的质量，保证药品的临床疗效，必须制定合理的质量控制标准。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂及制备方法和质量控制方法，本发明针对现有技术，将现有的宫瘤清胶囊制剂改剂为宫瘤清分散片制剂，克服了现有胶囊剂的不足，又集片剂与口服液制剂的优点于一身，显著提高了其生物利用度，更加方便患者用药；而且制定了科学合理的质量控制标准，可有效保证制剂的临床疗效，为企业及社会带来良好的经济效益与社会效益。

本发明是这样构成的：它是用熟大黄240g、土鳖虫200g、水蛭200g、桃仁180g、蒲黄160g、黄芩120g、枳实180g、牡蛎240g、地黄240g、白芍180g、甘草60g和交联聚乙烯吡咯烷酮225g、低取代羟丙基纤维素100g、微粉硅胶20g、硬脂酸镁2g、阿司帕坦3g制备而成的。

具体的制备方法为：取熟大黄、土鳖虫、水蛭、枳实、地黄、蒲黄、白芍、甘草八味药，加水煎煮两次，第一次先加水浸泡2小时，煮沸后加入桃仁、黄芩煎煮1小时，滤过；第二次加水煎煮1小时，滤过，合并两次煎液，于65℃下减压浓缩至60℃±5℃相对密度为1.20的稠膏；牡蛎加水煎煮两次，第一次加水浸泡2小时后，煎煮1小时，滤过；第二次加水煎煮1小时，滤过，合并两次煎液，于65℃下减压浓缩至60℃±5℃相对密度为1.20的稠膏，与上述稠膏合并，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛，备用；称取处方量的低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、阿司帕坦及105g交联聚乙烯吡咯烷酮，混合均匀，用95％乙醇制软材，30目筛网制粒，于60℃±5℃干燥，干颗粒用30目筛网整粒，整粒后的颗粒中加入硬脂酸镁及剩余的交联聚乙烯吡咯烷酮，混合均匀，压成1000片，包装，即得。

本发明制剂的质量控制方法：主要包括性状、检查，以及鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括以大黄对照药材和大黄素对照品、芍药苷对照品、辛弗林对照品、黄芩苷对照品为对照的薄层鉴别；含量测定包括以大黄素对照品为对照的含量测定方法。

大黄的鉴别方法是以大黄对照药材、大黄素对照品为对照，以30-60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂的薄层鉴别方法；白芍的鉴别方法是以芍药苷对照品为对照，以氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10的下层溶液为展开剂的薄层鉴别方法；枳实的鉴别方法是以辛弗林对照品为对照，以氯仿∶丙酮∶甲醇∶浓氨试液＝13∶4∶3∶0.5为展开剂的薄层鉴别方法；黄芩的鉴别方法是以黄芩苷对照品为对照，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂的薄层鉴别方法。

具体的说，鉴别方法包括以下项目的部分或全部：

(1)取本品2片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.2g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30-60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相应的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；

(2)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，加适量100-200目中性氧化铝在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的100-200目、1g、内径10-15mm中性氧化铝柱上，以醋酸乙酯∶甲醇＝1∶1的溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本品8片，甲醇20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿∶丙酮∶甲醇∶浓氨试液＝13∶4∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

大黄素的含量测定方法是以甲醇∶水＝75∶25为流动相的高效液相测定方法。

具体的含量测定方法为：

照附录VID高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝75∶25为流动相；检测波长为286nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本品，研细，取约0.8g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，置水浴上回流30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加1∶10盐酸溶液10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次，每次分别为20ml、120ml、10ml、10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄素C₁₅H₁₀O₅不得少于0.20mg。

本发明所述质量控制方法包括以下内容：

性状：药物为棕色至棕褐色片；气微香，味微甜、略苦；

鉴别：(1)取本品2片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.2g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30-60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相应的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；

(2)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，加适量100-200目中性氧化铝在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的100-200目、1g、内径10-15mm中性氧化铝柱上，以醋酸乙酯∶甲醇＝1∶1的溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本品8片，甲醇20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿∶丙酮∶甲醇∶浓氨试液＝13∶4∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查：

分散均匀性：取本品2片，置20℃±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过二号筛；

其他应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定：照附录VID高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝75∶25为流动相；检测波长为286nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本品，研细，取约0.8g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，置水浴上回流30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加1∶10盐酸溶液10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次，每次分别为20ml、120ml、10ml、10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄素C₁₅H₁₀O₅不得少于0.20mg。

本发明处方由熟大黄、土鳖虫、水蛭等11味中药组成，诸药合用，起活血逐瘀，消癥破积，养血清热作用，主要用于瘀血内停所致的小腹胀痛，经色紫黯有块有及子宫壁间肌瘤及浆膜下肌瘤见上述症状者。

与现有技术相比，本发明分散片制剂治疗子宫肌瘤的效果比较显著；且产品遇水即迅速崩解并均匀分散，具有下列优点：崩解时间短，分散状态佳；药物溶出迅速，吸收快，生物利用度高；生产设备与普通片剂相同，适宜于工业化大生产；服用方便且方法多样，可以直接吞服或在水中分散后与果汁、牛奶等并服，尤其适合老、幼及吞咽困难的患者；不仅吸收快，而且生产、携带、运输方便、质量稳定。此外，本发明质量控制方法精密度高，重现性好，可操作性强，可有效保证该制剂的临床疗效。

本申请人进行了一系列的实验研究，以保证本制剂及其制备工艺科学、合理、可行，并具有良好的治疗效果。

一、制备工艺

1.提取加水量的确定

试验方法：取一个处方量药材，分别加12倍、10倍、8倍、6倍量的水提取，以出膏率为评价指标，选择最佳加水量，试验结果如下：

加水量(倍)	熟大黄等10味药材提取出膏率(％)	牡蛎提取出膏率(％)
			12	52.3	31.6
10	51.2	30.2
			8	45.7	23.9
6	38.6	20.8

试验结果表明，采用加10倍量水提取最为合适，其出膏率明显高于加8倍量、6倍量提取时的出膏率，与加12倍量水的提取出膏率无显著差别，因此确定提取加水量为10倍量。

2.制剂工艺处方的筛选与研究

表1制剂处方工艺筛选

制法：将以上各方除硬脂酸镁及部分交联聚乙烯吡咯烷酮外，其余各味均匀混合，分别加如上表所述润湿剂制软材，用30目筛制粒，60℃±5℃烘干，30目筛整粒，混入硬脂酸镁和剩余的交联聚乙烯吡咯烷酮，压片，结果表明：硬度＞4kg时处方2最为理想，因此确定处方2为宫瘤清分散片最终处方，采用处方2进行中试生产，结果成品收得率较高，说明该工艺可行，适合工业化大生产要求，三批中试产品的试验数据见表2。

宫瘤清分散片最终确定处方如下：

宫瘤清浸膏粉(一个处方药材所提)

交联聚乙烯吡咯烷酮        225g

低取代羟丙基纤维素        100g

微粉硅胶                  20g

硬脂酸镁                  2g

阿司帕坦                  3g

共制成1000片，每片重0.70g。

制备工艺：取处方量的干浸膏粉，低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、部分交联聚乙烯吡咯烷酮(105g)及阿司帕坦，混合均匀，用95％乙醇制软材，30目筛网制粒，于60℃±5℃干燥，干颗粒用30目筛网整粒，整粒后的颗粒中加入处方量的硬脂酸镁及剩余的交联聚乙烯吡咯烷酮(120g)，混合均匀，压成1000片，包装，即得。

表2三批中试产品的试验结果

结论：本品三批中试产品试验结果表明，本品工艺基本合理，工艺稳定，成品收得率较高，所得成品经质量检验，结果表明均符合规定。

二、药效学研究

本发明处方中的熟大黄、土鳖虫等几味主药中，熟大黄(熟军)提取液可减少扭体反应次数，对在鼠蛋清性足柘肿胀有显著的对抗作用，提示熟大黄有一定的解热镇痛及消炎作用。土鳖虫提取物可延长夹闭小鼠气管后心电消失时间，可对给予异丙肾上腺素增加小鼠耗氧量，延长存活时间，并可明显对抗垂体后叶引起的大鼠ST-T的变化，提高动物的耐缺氧能力，并有降脂、溶解血栓等作用。水蛭的主要成份水蛭素是很强的凝血酶特效抑制剂，可阻止纤维蛋白凝固，也能阻止凝血酶催化的进一步的血瘀反应，并能抑制凝血酶与血小板的作用；水蛭素有抑制大鼠由ADP诱导的血小板聚集作用，其抑制率随药物浓度的提高而提高；同时对实验性血栓形成有明显的抑制血栓形成作用(Teruhiko法)；对溶解溶血酶所致实验性静脉血栓有溶栓作用；水蛭对TC、TG的升高有较好的抑制作用，经水蛭粉治疗后，TC、TG下降非常明显；6-酮-PGF1a值上升，而TXB2明显下降，提示水蛭主要有抗凝、抗栓、降低血脂等作用。

动物实验表明：宫瘤清胶囊在对抗乙烯雌酚所致小鼠子宫增重的作用和降低外源性雌二醇的作用，且对小鼠有一定的抗炎、止血作用，可在一定程度上加强免疫抑制小鼠巨噬细胞的吞噬能力。

本申请人还对质量控制方法进行了研究，以确保其科学、合理、有效。

一、样品及对照药来源

样品：本公司自制，批号为：050301、050302、050303。

芍药苷对照品来源于中国药品生物制品检定所，批号：110736-200422

辛弗林对照品来源于中国药品生物制品检定所，批号：110727-200306

黄芩苷对照品来源于中国药品生物制品检定所，批号：110715-200212

大黄素对照品来源于中国药品生物制品检定所，批号：0756-200009

大黄对照药材来源于中国药品生物制品检定所，批号：1249-0301

二、含量限度

本品规格为0.70g，本发明分散片含量测定采用高效液相色谱法，每片含大黄素(C₁₅H₁₀O₅)，不得少于0.20mg。

三、性状

本品为分散片，由浸膏粉加适量辅料经制粒后压片而成，浸膏粉本身为棕色或棕褐色，所用辅料为白色或类白色，本品性状应为棕色至棕褐色片；气微香，味微甜、略苦。

四、鉴别

参考国家食品药品监督管理局国家药品标准WS₃-362(Z-076)-2001(Z)宫瘤清胶囊鉴别项下内容，用薄层的方法对本品主药熟大黄、黄芩、枳实、白芍进行鉴别。

1、大黄的薄层鉴别：

(1)提取溶剂的选择

a、取本品2片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.2g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相应的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

b、取本品2片，加乙醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.2g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相应的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

c、取本品2片，加乙酸乙酯20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.2g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。在供试品斑点中，没有与对照品对应的主斑点，此提取方法不可行。

综合考虑上述三种提取溶剂，考虑效果与习惯，选择甲醇作为提取溶剂较好。

(2)点样量的选择

经实验选择供试品溶液与对照品溶液各点样2μl、5μl、10μl，结果发现供试品溶液与对照品溶液点样5μl、10μl时斑点较好，较为清晰。故本标准对照品溶液与供试品溶液选用5μl作为点样量。

(3)专属性实验

取缺大黄的阴性样品1.14g，同提取a项法操作制成阴性供试品溶液，展开后在对照品处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。

2、白芍的薄层鉴别

(1)提取溶剂的选择

a、取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，加适量中性氧化铝(100-200目)在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的中性氧化铝柱(100-200目，1g，内径10-15mm)上，以醋酸乙酯-甲醇(1∶1)30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

b、取本品6片，加乙醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，加适量中性氧化铝(100-200目)在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的中性氧化铝柱(100-200目，1g，内径10-15mm)上，以醋酸乙酯-甲醇(1∶1)30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

c、取本品6片，加丙酮20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，加适量中性氧化铝(100-200目)在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的中性氧化铝柱(100-200目，1g，内径10-15mm)上，以醋酸乙酯-甲醇(1∶1)30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，没有对应的斑点，此提取方法不可行。

综合考虑上述三种提取溶剂，考虑效果与习惯，选择甲醇作为提取溶剂较好。

(2)点样量的选择

经实验选择供试品溶液与对照品溶液各点样5μl、10μl，结果发现供试品溶液与对照品溶液点样10μl时斑点较好，较为清晰。故本标准对照品溶液与供试品溶液选用10μl作为点样量。

(3)专属性实验

取缺白芍的阴性样品2.0g，同提取a项法操作制成阴性供试品溶液，展开后在对照品处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。

3、枳实的薄层鉴别

(1)提取溶剂的选择

a、取本品8片，加甲醇20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-浓氨试液(13∶4∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

b、取本品8片，加无水乙醇20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-浓氨试液(13∶4∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

c、取本品8片，加乙酸乙酯20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇-浓氨试液(13∶4∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，没有显现对应的斑点，此提取方法不可行。

综合考虑上述三种提取溶剂，考虑效果与习惯，选择甲醇作为提取溶剂较好。

(2)点样量的选择

经实验选择供试品溶液与对照品溶液各点样2μl、5μl、10μl，结果发现供试品溶液与对照品溶液点样5μl、10μl时斑点较好，较为清晰。故本标准对照品溶液与供试品溶液选用5μl作为点样量。

(3)专属性实验

取缺枳实的阴性样品3g，同提取a项法操作制成阴性供试品溶液，展开后在对照品处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。

4、黄芩的薄层鉴别

(1)提取溶剂的选择

a、取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

b、取本品6片，加乙醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

c、取本品6片，加丙酮20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，没有出现对应的斑点，此提取方法不可行。

综合考虑上述三种提取溶剂，考虑效果与习惯，选择甲醇作为提取溶剂较好。

(2)点样量的选择

经实验选择供试品溶液与对照品溶液各点样2μl、5μl、10μl，结果发现供试品溶液与对照品溶液点样5μl时斑点较好，较为清晰，2μl时斑点较浅，10μl时出现了两个对照品斑点，故本标准对照品溶液与供试品溶液选用5μl作为点样量。

(3)专属性实验

取缺黄芩的阴性样品约2g，同提取a项法操作制成阴性供试品溶液，展开后在对照品处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。

五、检查

1、分散均匀性取本品两片，置100ml水中振摇，在20℃±1℃水中，3分钟应全部崩解并通过2号筛。

表3分散时间考察结果

批号	050301	050302	050303
				时间(min)	1	1	1

2、砷盐  按中国药典2000年版一部附录IX F砷盐检查法第一法进行检查，结果符合规定。

表4砷盐测定结果

批号	050301	050302	050303
				砷盐	＜2ppm	＜2ppm	＜2ppm

3、重金属按中国药典2000年版一部附录IX E重金属检查法第二法进行检查，结果符合规定。

表5重金属测定结果

批号	050301	050302	050303
				重金属	＜40ppm	＜40ppm	＜40ppm

4、片重差异

本品片重大于0.3g，按2000年版中国药典一部规定片重差异应在±5％以内，取本品三批样品20片检查，结果见下表6。

表6片重差异检查结果

本品三批样品测定结果表明，片重差异均在规定范围之内。

5、微生物限度

照微生物限度检查法(中国药典2000年版一部附录XIII)检查，三批样品的检查结果见下表。

表7微生物限度检查结果

批号	050301	050302	050303
				细菌数(个/g)	符合规定	符合规定	符合规定
霉菌数(个/g)	符合规定	符合规定	符合规定
				大肠杆菌(个/g)	未检出	未检出	未检出
活螨(个/g)	未检出	未检出	未检出

六、含量测定

1、方法

(1)仪器与试药：

HP1100高效液相色谱仪，HP色谱工作站。

大黄素对照品来源于中国药品生物制品检定所，批号：0756-200009

甲醇、冰乙酸为色谱纯，水为重蒸馏水，其余为分析纯。

供试品(宫瘤清分散片)批号：050301、050302、050303。

(1)色谱条件：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(75∶25)为流动相；检测波长为286nm。理论板数按大黄素峰计算应不不低于4000。色谱柱型号：Hypersil ODS25μmφ4.6×250mm。

(2)对照品溶液的配制

精密称取大黄素对照品5mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(制成每1ml中含大黄素10μg的溶液)。

(3)供试品溶液的配制

取本品，研细，取约0.8g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，置水浴上回流30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加盐酸溶液(1∶10)10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次(20m、120ml、10ml、10ml)，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

(4)检测波长的选择：

量取大黄素对照品溶液在紫外分光光度计上测定紫外光谱图，在400～200nm波长范围内扫描，结果在286nm波长处有最大吸收峰，故选择286nm作为本品的检测波长。

2、提取条件的选择：

(1)提取方法的比较

取本品，研细，取约0.8g两份，精密称定，分别置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，置水浴上回流30分钟及超声提取30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加盐酸溶液(1∶10)10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次(20ml、120ml、10ml、10ml)，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液20？l注入液相色谱仪，记录色谱图。

表8提取方法的比较结果

方法	含量(mg/g)
		超声	0.34
回流	0.36

结果显示两者的提取结果，加热回流提取比超声提取效率更高。因此选用加热回流提取。

(2)提取溶剂选择：

取本品，研细，取约0.8g两份，精密称定，分别置100ml锥形瓶中，分别加甲醇30ml和水30ml，置水浴上回流30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml和水分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇和水稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加盐酸溶液(1∶10)10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次(20ml、120ml、10ml、10ml)，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

表9提取溶剂的比较结果

溶媒	含量(mg/g)
		甲醇	0.36
水	0.20

结果显示甲醇提取的结果较大，因此选用甲醇作为提取溶剂。

(3)提取时间选择：

取本品，研细，取约0.8g三份，精密称定，分别置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，分别置水浴上回流10、30、60分钟，放冷，分别滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加盐酸溶液(1∶10)10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次(20ml、120ml、10ml、10ml)，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

表10提取时间的比较结果

时间(min)	含量(mg/g)
		10	0.36
30	0.36
		60	0.37

结果显示加热回流提取60min可以提取完全，因此选用甲醇回流提取30min作为提取时间。

3、空白试验

取缺大黄的阴性样品约0.8g，照样品含量测定项下提取，按上述色谱条件分析。与对照品相应的位置上，无明显其它峰出现。结果证明阴性样品对该试验无干扰。

4、标准曲线的绘制

精密称取大黄素对照品5mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分别置于50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，各进样20μl，测定峰面积，以浓度C为横坐标，峰面积为纵坐标，绘图得标准曲线，回归方程为：Y＝-4.64X+84.57，r＝0.9999测定结果见下表。

表11线性考察

浓度(μg/ml)	6.07	8.01	10.12	12.14	14.17
						峰面积	514.16	674.37	850.73	1019.43	1197.51

结果表明天麻素在6.07μg/ml～14.17μg/ml范围内峰面积与浓度具有良好的线性关系。

6、精密度试验：取本品(批号：050301)按上法配制供试品溶液，重复进样5次，结果RSD为1.07％(n＝5)结果见下表。

表12精密度试验结果

7、重现性试验

按供试品配制方法配制5份供试品，分别测定每份样品含量，结果平均含量为0.352mg/g，RSD为4.67％(n＝5)结果见下表。

表13重现性试验结果

8、回收率试验

精密称取一已知含量的供试品(批号：050301)，分别添加大黄素对照品(浓度为0.15mg/ml)1ml，按上述的方法制成供试品溶液，依法进行测定，计算回收率，测定结果见下表。

表14回收率试验结果

9、稳定性试验

取供试品溶液一份，每隔一定时间测定，测得大黄素峰面积如下表，结果表明，供试品溶液在室温下放置24小时内稳定。测定结果见下表。

表15稳定性试验结果

10、三批样品的测定及含量限度的确定

按供试品溶液的配制方法，对十批样品进行含量测定，以确定其含量限度，十批样品的含量测定结果见下表。

表16含量测定结果

最后确定其含量限度为0.20mg/片，应符合规定。

七、对比结果、结论

本品三批产品，按质量标准进行检测，结果表明都符合规定要求，无显著性差异。

具体实施方式：

本发明的实施例1：熟大黄240g、土鳖虫200g、水蛭200g、桃仁180g、蒲黄160g、黄芩120g、枳实180g、牡蛎240g、地黄240g、白芍180g、甘草60g、交联聚乙烯吡咯烷酮225g、低取代羟丙基纤维素100g、微粉硅胶20g、硬脂酸镁2g、阿司帕坦3g

取熟大黄、土鳖虫、水蛭、枳实、地黄、蒲黄、白芍、甘草八味药，加水煎煮两次，第一次先加水浸泡2小时，煮沸后加入桃仁、黄芩煎煮1小时，滤过；第二次加水煎煮1小时，滤过，合并两次煎液，于65℃下减压浓缩至60℃±5℃相对密度为1.20的稠膏；牡蛎加水煎煮两次，第一次加水浸泡2小时后，煎煮1小时，滤过；第二次加水煎煮1小时，滤过，合并两次煎液，于65℃下减压浓缩至60℃±5℃相对密度为1.20的稠膏，与上述稠膏合并，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛，备用；称取处方量的低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、阿司帕坦及105g交联聚乙烯吡咯烷酮，混合均匀，用95％乙醇制软材，30目筛网制粒，于60℃±5℃干燥，干颗粒用30目筛网整粒，整粒后的颗粒中加入硬脂酸镁及剩余的交联聚乙烯吡咯烷酮，混合均匀，压成1000片，包装，即得。本制剂口服，一次3片，一日3次。

本发明的实施例2：质量控制方法包括以下部分或全部内容：

性状：药物为棕色至棕褐色片；气微香，味微甜、略苦；

鉴别：(1)取本品2片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.2g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30-60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相应的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；

(2)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，加适量100-200目中性氧化铝在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的100-200目、1g、内径10-15mm中性氧化铝柱上，以醋酸乙酯∶甲醇＝1∶1的溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本品8片，甲醇20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿∶丙酮∶甲醇∶浓氨试液＝13∶4∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查：

分散均匀性：取本品2片，置20℃±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过二号筛；

其他应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定：照附录VID高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝75∶25为流动相；检测波长为286nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品，研细，取约0.8g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，置水浴上回流30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加1∶10盐酸溶液10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次，每次分别为20ml、120ml、10ml、10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄素C₁₅H₁₀O₅不得少于0.20mg。

本发明的实施例3：质量控制方法可包括以下内容：

性状：药物为棕色至棕褐色片；气微香，味微甜、略苦；

鉴别：(1)取本品2片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.2g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30-60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相应的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；

(2)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，加适量100-200目中性氧化铝在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的100-200目、1g、内径10-15mm中性氧化铝柱上，以醋酸乙酯∶甲醇＝1∶1的溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：照附录VID高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝75∶25为流动相；检测波长为286nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备 取本品，研细，取约0.8g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，置水浴上回流30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加1∶10盐酸溶液10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次，每次分别为20ml、120ml、10ml、10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄素C₁₅H₁₀O₅不得少于0.20mg。

本发明的实施例4：质量控制方法可包括以下内容：

性状：药物为棕色至棕褐色片；气微香，味微甜、略苦；

鉴别：(1)取本品8片，甲醇20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿∶丙酮∶甲醇∶浓氨试液＝13∶4∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查：

分散均匀性：取本品2片，置20℃±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过二号筛；

其他  应符合附录ID片剂项下有关的各项规定。

本发明的实施例5：质量控制方法可包括以下内容：

性状：药物为棕色至棕褐色片；气微香，味微甜、略苦；

鉴别：(1)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，加适量100-200目中性氧化铝在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的100-200目、1g、内径10-15mm中性氧化铝柱上，以醋酸乙酯∶甲醇＝1∶1的溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取本品8片，甲醇20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿∶丙酮∶甲醇∶浓氨试液＝13∶4∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查：

分散均匀性：取本品2片，置20℃±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过二号筛；

其他  应符合附录ID片剂项下有关的各项规定。

本发明的实施例6：质量控制方法可包括以下内容：

性状：药物为棕色至棕褐色片；气微香，味微甜、略苦；

鉴别：取本品2片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.2g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30-60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相应的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；

检查：

分散均匀性：取本品2片，置20℃±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过二号筛；

其他  应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定：照附录VID高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝75∶25为流动相；检测波长为286nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备  精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  取本品，研细，取约0.8g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，置水浴上回流30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加1∶10盐酸溶液10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次，每次分别为20ml、120ml、10ml、10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄素C₁₅H₁₀O₅不得少于0.20mg。

Claims (6)

1、治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂的质量控制方法，它是用熟大黄240g、土鳖虫200g、水蛭200g、桃仁180g、蒲黄160g、黄芩120g、枳实180g、牡蛎240g、地黄240g、白芍180g、甘草60g和交联聚乙烯吡咯烷酮225g、低取代羟丙基纤维素100g、微粉硅胶20g、硬脂酸镁2g和阿司帕坦3g按照下述方法制备：取熟大黄、土鳖虫、水蛭、枳实、地黄、蒲黄、白芍、甘草八味药，加水煎煮两次，第一次先加水浸泡2小时，煮沸后加入桃仁、黄芩煎煮1小时，滤过；第二次加水煎煮1小时，滤过，合并两次煎液，于65℃下减压浓缩至60℃±5℃相对密度为1.20的稠膏；牡蛎加水煎煮两次，第一次加水浸泡2小时后，煎煮1小时，滤过；第二次加水煎煮1小时，滤过，合并两次煎液，于65℃下减压浓缩至60℃±5℃相对密度为1.20的稠膏，与上述稠膏合并，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛，备用；称取低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、阿司帕坦及105g交联聚乙烯吡咯烷酮，混合均匀，用95％乙醇制软材，30目筛网制粒，于60℃±5℃干燥，干颗粒用30目筛网整粒，整粒后的颗粒中加入硬脂酸镁及剩余的交联聚乙烯吡咯烷酮，混合均匀，压成1000片，其特征在于：所述质量控制方法是性状、检查，以及鉴别和含量测定项目；其中的鉴别是以大黄对照药材和大黄素对照品、芍药苷对照品、辛弗林对照品、黄芩苷对照品为对照的薄层鉴别；含量测定是以大黄素对照品为对照的含量测定方法。

2.按照权利要求1所述的治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂的质量控制方法，其特征在于：大黄的鉴别方法是以大黄对照药材、大黄素对照品为对照，以30-60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂的薄层鉴别方法；白芍的鉴别方法是以芍药苷对照品为对照，以氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10的下层溶液为展开剂的薄层鉴别方法；枳实的鉴别方法是以辛弗林对照品为对照，以氯仿∶丙酮∶甲醇∶浓氨试液＝13∶4∶3∶0.5为展开剂的薄层鉴别方法；黄芩的鉴别方法是以黄芩苷对照品为对照，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂的薄层鉴别方法。

3.按照权利要求1或2所述的治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂的质量控制方法，其特征在于：鉴别方法包括以下项目：

(1)取本品2片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.2g，

加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30-60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相应的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；

(2)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至1ml，加适量100-200目中性氧化铝在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的100-200目、1g、内径10-15mm中性氧化铝柱上，以醋酸乙酯∶甲醇＝1∶1的溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本品8片，甲醇20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿∶丙酮∶甲醇∶浓氨试液＝13∶4∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4.按照权利要求1所述的治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂的质量控制方法，其特征在于：大黄素的含量测定方法是以甲醇∶水＝75∶25为流动相的高效液相测定方法。

5.按照权利要求1或4所述的治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂的质量控制方法，其特征在于：含量测定方法为：

照附录VID高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝75∶25为流动相；检测波长为286nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本品，研细，取0.8g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，置水浴上回流30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加1∶10盐酸溶液10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次，每次分别为20ml、120ml、10ml、10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄素C₁₅H₁₀O₅不得少于0.20mg。

6.按照权利要求1所述的治疗子宫肌瘤的中药分散片制剂的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法中的性状为：

药物为棕色至棕褐色片；气微香，味微甜、略苦；

鉴别为：(1)取本品2片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液5ml蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.2g，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30-60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相应的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；

(2)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至1ml，

加适量100-200目中性氧化铝在水浴上拌匀，干燥，置已处理好的100-200目、1g、内径10-15mm中性氧化铝柱上，以醋酸乙酯∶甲醇＝1∶1的溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本品8片，甲醇20ml，置水浴上回流20分钟，滤过，滤液蒸干，放冷，残渣加甲醇4ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取辛弗林对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一G薄层板上，以氯仿∶丙酮∶甲醇∶浓氨试液＝13∶4∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取本品6片，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，放冷，滴加盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯20ml提取，分取醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

检查为：

分散均匀性：取本品2片，置20℃±1℃的100ml水中，振摇3分钟，应全部崩解并通过二号筛；

其他应符合附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定为：照附录VID高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水＝75∶25为流动相；检测波长为286nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本品，研细，取0.8g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇30ml，置水浴上回流30分钟，放冷，滤入50ml量瓶中，用甲醇20ml分次洗涤残渣及滤器，洗液并入容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20ml，蒸干，残渣加1∶10盐酸溶液10ml，置水浴中回流20分钟，立即冷却，用乙醚振摇提取4次，每次分别为20ml、120ml、10ml、10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每片含大黄素C₁₅H₁₀O₅不得少于0.20mg。