CN100417664C - 一种白介素17受体及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种白介素17受体及其编码基因与应用。本发明所提供的白介素17受体，其氨基酸残基序列如SEQ ID NO：2所示。本发明的白介素17受体将在肿瘤诊断中发挥重要作用，并可以其编码基因mIL-17RE干扰RNA的编码基因作为活性成分制备成药物，用于治疗与RAS/MAPK信号通路相关的疾病，如前列腺肿瘤、白血病、及甲状腺肿瘤等疾病。本发明在医学和生物制药领域具有较大的实际意义和广阔的应用前景。

Description

一种白介素17受体及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及蛋白及其编码基因与应用，特别是涉及一种来源于小鼠的白介素17受体及其编码基因与其在制备肿瘤诊断标记物及与RAS/MAPK信号通路相关疾病的治疗性药物中的应用。

背景技术

白介素17(IL-17)及其受体(IL-17R)家族是一类独特的免疫分子-受体家族，在正常机体免疫、炎症反应及肿瘤的发生过程中发挥重要作用(J.K.Kolls，A.Linden，Interleukin-17 family members and inflammation.Immunity 21(4)(2004)467；T.A.Moseley，D.R.Haudenschild，L.Rose，A.H.Reddi，Interleukin-17 familyand IL-17 receptors.Cytokine Growth Factor Rev 14(2)(2003)155)。目前已知IL-17配体有6个成员，每种配体作用于不同的免疫过程。比如，最早发现的IL-17A可以刺激多种组织细胞释放趋化因子，以吸引中性粒细胞到炎症反应区域(M.Laan，Z.H.Cui，H.Hoshino，J.Lotvall，M.Sjostrand，D.C.Gruenert，B.E.Skoogh，A.Linden，Neutrophil recruitment by human IL-17 via C-X-C chemokine releasein the airways.J.Immunol.162(4)(1999)2347；J.Witowski，K.Pawlaczyk，A.Breborowicz，A.Scheuren，M.Kuzlan-Pawlaczyk，J.Wisniewska，A.Polubinska，H.Friess，G.M.Gahl，U.Frei，A.Jorres，IL-17 stimulatesintraperitoneal neutrophil infiltration through the release of GRO alphachemokine from mesothelial cells.J.Immunol.165(10)(2000)5814.)。此外，IL-17A还可以通过诱发骨髓造血因子参与骨髓内粒细胞的生成(P.Schwarzenberger，V.La Russa，A.Miller，P.Ye，W.Huang，A.Zieske，S.Nelson，G.J.Bagby，D.Stoltz，R.L.Mynatt，M.Spriggs，J.K.Kolls，IL-17 stimulatesgranulopoiesis in mice：use of an alternate，novel gene therapy-derived methodfor in vivo evaluation of cytokines.J.Immunol.161(11)(1998)6383.)。研究发现，类风湿性关节炎病人体内IL-17A表达量显著增高是关节组织破坏的主要原因之一(M.Ziolkowska，A.Koc，G.Luszczykiewicz，K.Ksiezopolska-Pietrzak，E.Klimczak，H.Chwalinska-Sadowska，W.Maslinski，High levels of IL-17 inrheumatoid arthritis patients：IL-15 triggers in vitro IL-17 production viacyclosporin A-sensitive mechanism.J.Immunol.164(5)(2000)2832.)。为此，利用IL-17A的特异性受体(IL-17RA)来阻断IL-17A的促炎症反应作用是目前研制抗类风湿药物的热点。与IL-17配体不同，目前只系统研究了4种IL-17R，即IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC和IL-17RD。可能是由于IL-17的配体及受体的作用方式具有多效性的特点，即某些IL-17R可以识别两个以上的配体(T.A.Moseley，D.R.Haudenschild，L.Rose，A.H.Reddi，Interleukin-17 family and IL-17 receptors.Cytokine Growth Factor Rev 14(2)(2003)155.)。例如，IL-17RB可以同时识别IL-17B和IL-17E，并且IL-17RB与IL-17E的亲和力比与IL-17B的亲和力高(J.Lee，W.H.Ho，M.Maruoka，R.T.Corpuz，D.T.Baldwin，J.S.Foster，A.D.Goddard，D.G.Yansura，R.L.Vandlen，W.I.Wood，A.L.Gurney，IL-17E，a novelproinflammatory ligand for the IL-17 receptor homolog IL-17Rh1.J.Biol.Chem.276(2)(2001)1660.)。目前对于IL-17配体-受体相互作用的认识尚处于初期阶段，许多问题还需要进一步深入研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种来源于小鼠的白介素17受体。

本发明所提供的白介素17受体，名称为mIL-17RE(mIL-17RE1)，来源于小鼠属小鼠(Mus musculus)，是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质：

1)序列表中的SEQ ID №：2；

2)将序列表中SEQ ID №：2的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且通过激活RAS/MAPK信号通路而具有促有丝分裂作用的蛋白质。

序列表中的SEQ ID №：2由637个氨基酸残基组成，其中自氨基端(N端)第1至25位氨基酸残基为信号肽序列；自N端第26至413位氨基酸残基为胞外区序列；自N端第414至439位氨基酸残基为跨膜区序列；自N端第440至637位氨基酸残基为胞内区序列；自N端第352至366位氨基酸残基为Erk1激酶序列；自N端第297至311位氨基酸残基为PDK1结合位点；自N端第4至18位氨基酸残基为Erk D结构域；自N端第578至599位氨基酸残基为典型的亮氨酸拉链序列；自N端第278至281位氨基酸残基以及自N端第307至310位氨基酸残基为保守的N糖基化位点。

编码白介素17受体mIL-17RE的基因(mIL-17RE)，是下述核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ ID №：1的DNA序列；

2)编码序列表中SEQ ID №：2的DNA序列；

3)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №：1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。

所述高严谨条件为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

序列表中的SEQ ID №：1由1914个碱基组成，其编码序列为自5’端第1至1914位碱基，编码具有序列表中SEQ ID №：2的氨基酸残基序列的蛋白质。其中，自5′端第1至75位碱基为mIL-17RE信号肽编码序列；自5′端第76至1239位碱基为mIL-17RE胞外区编码序列；自5′端第1240至1317位碱基为mIL-17RE基因跨膜区编码序列；自5′端第1318至1914位碱基为mIL-17RE胞内区的编码序列；自5’端第1054至1098位碱基编码Erk1激酶，自5’端第889至933位碱基编码PDK1结合位点，自5’端第10至54位碱基编码Erk D结构域；自5’端第1732至1797位碱基编码典型的亮氨酸拉链序列；自5’端第832至843位碱基以及5’端第919至930位碱基编码保守的N糖基化位点。

含有本发明基因mIL-17RE的表达载体、转基因细胞系和宿主菌均属于本发明的保护范围。

扩增mIL-17RE中任一片段的引物对也在本发明的保护范围之内。

本发明提供了一种来源于小鼠的白介素17受体mIL-17RE及其编码基因。实验证明，mIL-17RE在小鼠的肺、肾、胃、小肠及睾丸中具有较高的表达量，并且在个别的肿瘤细胞系，如前列腺癌细胞系DU145、结肠癌细胞T84、和急性单核细胞白血病U937细胞等肿瘤细胞系内也检测到该基因的表达，因此可用RT-PCR方法检测该基因的表达以用于肿瘤的临床诊断；还可以按常规方法制备mIL-17RE的特异性抗体，并用其作为标记物检测肿瘤的发生。本发明将在免疫疾病和肿瘤诊断中发挥重要作用。此外，该蛋白是一个新型的增殖型受体样分子，通过激活RAS/MAPK信号通路而发挥促有丝分裂效应。因此将编码本发明蛋白的基因mIL-17RE的干扰RNA的编码基因导入宿主，使宿主细胞内mIL-17RE沉默，进而可抑制RAS/MAPK信号通路的激活。因此可以mIL-17RE干扰RNA的编码基因作为活性成分制备成药物，用于治疗与RAS/MAPK信号通路相关的疾病，如前列腺肿瘤、白血病、及甲状腺肿瘤等疾病。本发明在医学和生物制药领域具有较大的实际意义和广阔的应用前景。

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。

附图说明

图1为mIL-17RE编码蛋白的氨基酸残基序列的生物信息学分析结果

图2为小鼠、大鼠及人的IL-17RE的氨基酸残基序列的同源性比较结果

图3为鼠源IL-17RE与IL-17RC氨基酸残基序列的同源性比较结果

图4为IL-17RE受体家族成员进化树分析结果

图5为Northern杂交检测mIL-17RE基因在各主要脏器组织中表达情况的结果

图6为Northern杂交检测mIL-17RE基因在胚胎不同发育阶段中表达情况的结果

图7为mIL-17RE的亚细胞器定位结果

图8为利用荧光酶报告系统检测mIL-17RE是否具有激活Elk1转录活性的结果

图9为Western blot检测mIL-17RE激活ERK磷酸化水平的结果

图10为利用荧光酶报告系统检测mIL-17RE激活Elk1转录活性的剂量效应的结果

图11为Western blot检测mIL-17RE激活ERK磷酸化水平的剂量效应的结果

图12为利用荧光酶报告系统检测DnRAS和DnMEK是否抑制mIL-17RE对Elk1转录活性的激活的结果

图13为Western blot检测DnRAS和DnMEK是否抑制mIL-17RE对ERK磷酸化激活的结果

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所用引物合成及测序工作均由上海生工生物技术有限公司完成。

实施例1、mIL-17RE的克隆

按常规方法提取小鼠结肠组织的总RNA并以此为模板，在引物P1(上游引物)：5′-cagacaggaaagacatggtctc-3′和P2(下游引物)：5′-agacagctgaaaccacagggac-3′的引导下用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒并参照试剂盒说明书进行RT-PCR扩增。反应结束后，对PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，回收并纯化1914bp的目的片段。由于经Taq聚合酶扩增后产物的5′末端被加有一个A碱基，因此，将目的片段直接亚克隆到载体pGEM-T(购自Promega公司)中，将重组产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，经蓝白斑筛选得到阳性克隆，挑选阳性克隆摇菌提质粒，将含有目的片段的质粒载体命名为pGEM-T-mIL-17RE，用限制性内切酶Kpn I和BamH I对其进行酶切鉴定，将酶切产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，经酶切获得了5493bp和1914bp的酶切片段，表明扩增片段正确插入到载体中。对经酶切鉴定正确的阳性克隆质粒用测序的方法做进一步的鉴定，测序的结果表明所克隆的基因具有序列表中SEQID №：1的多核苷酸序列，序列表中的SEQ ID №：1由1914个碱基组成，其编码序列为自5’端第1至1914位碱基，编码具有序列表中SEQ ID №：2的氨基酸残基序列的蛋白质。将该基因命名为mIL-17RE，将其编码蛋白命名为mIL-17RE。

实施例2、mIL-17RE的生物信息学分析

对mIL-17RE的编码蛋白mIL-17RE的氨基酸残基序列(序列表中的SEQ ID №：2)进行生物信息学分析，分析结果如图2所示，mIL-17RE1的自氨基端(N端)第1至25位氨基酸残基为信号肽序列，由25位氨基酸残基组成；自N端第26至413位氨基酸残基为胞外区序列，由388个氨基酸残基组成；自N端第414至439位亮氨酸为跨膜区序列，由26个氨基酸残基组成；自N端第440至637位亮氨酸为胞内区序列，由198个氨基酸残基组成。ProSite分析结果表明mIL-17RE1的胞外区有两个典型的N-糖基化位点，分别位于自N端第278位至第281位氨基酸残基及自N端第307位至第310位氨基酸残基，而其胞内区靠近碳末端有一个典型的亮氨酸拉链(leucinezipper)，位于自N端第578位至599位氨基酸残基。胞内区的近膜端及羧基端各含一个由79/81个氨基酸组成的亮氨酸富含区，分别位于自N端第440位至518位氨基酸残基和自N端第537位至第617位氨基酸残基。ProFun2.2分析结果显示，mIL-17RE1是一个增长因子相关性的膜蛋白分子。MotifScan分析结果显示，序列表中SEQ ID №：2自5’端第1054至1098位碱基编码Erk1激酶，自5’端第889至933位碱基编码PDK1结合位点，自5’端第10至54位碱基编码Erk D结构域，表明mIL-17RE1很可能与RAS/MAPK信号通路相连。另外，将mIL-17RE1的氨基酸残基序列与大鼠及人的IL-17RE的氨基酸残基序列进行ClustalW分析，结果如图2所示(rIL-17RE：大鼠，hIL-17RE：人)，mIL-17RE与大鼠及人中的IL-17RE高度同源，氨基酸水平的同源性分别可达89％及71％。再将mIL-17RE1的氨基酸残基序列与其它IL-17R家族成员的氨基酸残基序列进行ClustalW分析，结果人及鼠的IL-17RE与其它IL-17R家族成员间的同源性很低，与IL-17RC的相似性最近，氨基酸水平的一致性仅有18％，如图3所示。对mIL-17RE1与其它IL-17R家族成员进行进化树分析，结果如图4所示，mIL-17RE1在进化的初期即与其它IL-17R家族成员分离，蛋白间亲缘关系很远，表明mIL-17RE1可能为一类独特的细胞因子受体。

实施例3、Northern杂交检测mIL-17RE基因的表达情况

用Northern杂交的方法检测mIL-17RE基因在正常小鼠组织及胚胎中的表达情况。具体方法为：将8周龄正常昆明种小白鼠断颈处死，取各主要脏器，包括心、肝、脾、肾、肺、脑、胃及睾丸。并在小鼠交配后，分别取7.5、8.5、9.5、10.5、11.5、12.5、13.5和14.5天胎龄的胚胎。将上述脏器及胚胎研磨匀浆后，用TRIzol(购自Invitrogen)处理提取组织总RNA。每种组织取约10μg总RNA在1.3％的甲醛胶上分离，然后转移到Hybond(购自Amersham Biosciences)的膜上。以mIL-17RE全长cDNA为模板，用Prime-A-gene试剂盒(购自Promega)合成[α³²P]dCTP标记的探针。杂交条件为：68℃杂交12-24小时。洗膜条件为：用洗脱液(2×SSC+0.1％SDS)在50℃下洗脱三次，每次15分钟。在各主要脏器的检测结果如图5所示，以18S rRNA和28SrRNA为参照，表明mIL-17RE基因在肺、肾、胃及睾丸组织中显著表达，而在心、肝、脾及脑组织中未检测出明显的信号。不同胎龄的胚胎的检测结果如图6所示，表明mIL-17RE基因在胚龄为9.5天前的小鼠胚胎中未检测出明显表达，从10.5天开始表达，12.5天达到平台期，并可持续至少2天以上。

实施例4、mIL-17RE在细胞内的定位

将实施例1获得全长mIL-17RE cDNA用限制性内切酶Kpn I和BamH I酶切后，与经相同酶双酶切的载体pcDNA3.1-Myc/his(购自Invitrogen)连接，将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，经蓝白斑筛选得到阳性克隆，挑选阳性克隆摇菌提质粒，经鉴定后得到带有Myc标签的mIL-17RE的重组表达质粒，命名为pcDNA3.1(mIL-17RE)。然后将约3μg的质粒pcDNA3.1(mIL-17RE)用磷酸钙试剂(购自Clontech)分别转染到293T和Cos7细胞中，再以鼠源抗Myc标签抗体(购自Santa Cruz公司)为一抗孵育杂交，以TRITIC(显红色)偶联的抗鼠抗体为二抗(购自Santa Cruz公司)进行荧光标记，最后用4，6-二脒基-二苯基吲哚(DAPI，购自Sigma)进行细胞核染色(兰色)，染色结果通过激光共聚焦仪进行观察，结果如图7所示(a、b、c分别表示DAPI细胞核染色，Myc抗体染色和a与b叠加图象；d、e、f分别表示DAPI细胞核染色，Myc抗体染色和d与e叠加图象)，表明mIL-17RE在293T细胞中主要分布于胞膜及胞浆；而在Cos7细胞中，mIL-17RE仅在胞浆表达，在细胞膜中未见明显分布。

实施例5、IL-17RE对RAS/MAPK信号通路激活作用的验证实验

在293细胞中过量表达mIL-17RE，以检测mIL-17RE对胞内细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase，ERK)磷酸化水平的影响。首先，用荧光酶(Luciferase)报告系统检测IL-17RE对RAS/MAPK信号通路的激活作用。转录因子Elk1是RAS/MAPK信号激活的靶基因。若IL-17RE可以激活RAS/MAPK信号通路，则Elk1-Luciferase的表达水平就会上调。具体方法为：将每孔4×10⁵个293细胞铺于6孔板，使其密度长到80％。分两组，用磷酸钙转染试剂(购自Clontech)将3.5μgpcDNA3.1空载体和pcDNA3.1(mIL-17RE)分别转染到不同孔中的293细胞，外加荧光酶报告系统质粒PFA-Elk-1、PFR-luciferase(参考文献：J Biol Chem.2001Sep28；276(39)：36804-8)，以及pGFP-ERK(参考文献：J Cell Biol.2000Mar20；148(6)：1267-81.)。与此同时，用海肾(Renilla)萤光素酶质粒(购自Promega)为内参照来进行定量标准化，荧光素酶活性检测结果如图8所示，表明mIL-17RE对荧光素酶基因的表达具有显著的激活作用。另外，用蛋白印迹杂交(Western Blot)检测ERK磷酸化水平的变化，具体方法为：等量的分别转染有pcDNA3.1-Myc/his空载体和pcDNA3.1(mIL-17RE)的293细胞的裂解液经10％SDS-PAGE分离后转到硝酸纤维素膜(Amersham Biosciences)上，然后分别以鼠源抗Myc标签、抗ERK、抗磷酸化ERK的单克隆抗体为一抗(购自Santa Cruz公司)进行杂交，以荧光素标记的羊源抗鼠抗体(Amersham Biosciences UK Limited)为二抗，最后用ECL化学发光的底物(Amersham Biosciences)进行杂交信号放大，结果如图9所示(anti：p-ERK、anti：ERK、anti：Myc、anti：β-actin分别表示抗磷酸化ERK、抗ERK、鼠源抗Myc标签、抗β-actin(对照)的单克隆抗体的实验组，pcDNA3.1-myc、mIL17RE-myc分别表示转染有pcDNA3.1-Myc/his空载体和pcDNA3.1(mIL-17RE)的293细胞，ERK-GFP表示共转染的可表达ERK与GFP(绿色荧光蛋白)融合基因的质粒；“+”“-”分别表示转染时添加或不添加相应质粒)，表明mIL-17RE可使外源性及内源性ERK的磷酸化水平明显上调，证明mIL-17RE可激活RAS/MAPK信号通路。为进一步证实此验证结果，用上述相同的转染293细胞的方式检测mIL-17RE对RAS/MAPK信号通路激活的剂量效应。转染pcDNA3.1空载体质粒的总量为3.5μg，而pcDNA3.1(mIL-17RE)的转染量依次为0μg、0.1μg、0.3μg、0.9μg，呈递增趋势，荧光素酶活性检测结果如图10所示(α-mIL-17RE表示鼠源抗Myc标签单克隆抗体；pcDNA3.1-myc表示转染有pcDNA3.1-Myc/his空载体的293细胞，mIL17RE-myc表示分别转染有0μg、0.1μg、0.3μg、0.9μg pcDNA3.1(mIL-17RE)的293细胞；“+”“-”分别表示转染时添加或不添加相应质粒)，表明Elk1的转录活性随mIL-17RE转染剂量增加而上升。再用与上述相同的Western Blot蛋白印迹杂交方法检测上述转染有不同剂量pcDNA3.1(mIL-17RE)的293细胞内ERK磷酸化水平的变化，结果如图11所示，ERK的磷酸化水平也随mIL-17RE的转染剂量增加而增强，再次证明mIL-17RE对RAS/MAPK信号通路具有激活作用。

实施例6、检测mIL-17RE在RAS/MAPK信号通路上的作用位点

通过表达RAS/MAPK信号通路上的两个重要蛋白的显性负基因，即显性负RAS(DnRAS)和显性负MEK(DnMEK)(参考文献：J Biol Chem.2002 Mar 29；277(13)：11107-15)，来抑制信号通路的激活，以检测mIL-17RE在RAS/MAPK信号通路上的作用位点。同时，共转染mIL-17RE，检测其对RAS/MAPK信号通路是否仍有激活作用，如果具有激活作用，表明mIL-17RE在信号分子RAS下游作用；如果没有激活作用，则表明mIL-17RE在信号分子的上游作用。具体方法为：将总量0.5μg的pcDNA3.1(mIL-17RE)、PFA-Elk-1和PFR-luciferase质粒分别与0μg、0.5μg、1μg、2μg的DnRAS或DnMEK共转染293细胞，以pcDNA3.1-Myc/his为对照，荧光酶报告系统的检测结果如图12所示(pcDNA3表示转染有pcDNA3.1-Myc/his空载体的293细胞，IL17RE表示转染有pcDNA3.1(mIL-17RE)的293细胞，DnMEK表示DnMEK共转染组，DnRAS表示DnRAS共转染组；“+”“-”分别表示转染时添加或不添加相应质粒)，表明增加DnRAS或DnMEK的转染剂量可显著抑制Elk1的转录活性。用与实施例5相同的Western Blot蛋白印迹杂交方法检测细胞内源性ERK磷酸化水平，检测结果如图13所示，表明共转染DnRAS或DnMEK表达质粒可显著抑制ERK的激活。上述实验结果表明，mIL-17RE的作用位点是在RAS或RAS上游水平来激活RAS/MAPK信号通路。

<160>2

<210>1

<211>1914

<212>DNA

<213>小鼠属小鼠(Mus musculus)

<400>1

atggggagcc ccagactggc agccttgctc ctgtctctcc cgctactgct catcggcctc     60

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aaagatgact accaaggctc aaccaatagt ccctgtggtt tcagctgtct gtag          1914

<210>2

<211>637

<212>PRT

<213>小鼠属小鼠(Mus musculus)

<400>2

Met Gly Ser Pro Arg Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Pro Leu Leu

1               5                   10                  15

Leu Ile Gly Leu Ala Val Ser Ala Arg Val Ala Cys Pro Cys Leu Arg

            20                  25                  30

Ser Trp Thr Ser His Cys Leu Leu Ala Tyr Arg Val Asp Lys Arg Phe

        35                  40                  45

Ala Gly Leu Gln Trp Gly Trp Phe Pro Leu Leu Val Arg Lys Ser Lys

    50                  55                  60

Ser Pro Pro Lys Phe Glu Asp Tyr Trp Arg His Arg Thr Pro Ala Ser

65                  70                  75                  80

Ser Gln Arg Lys Leu Leu Gly Ser Pro Ser Leu Ser Glu Glu Ser His

                85                  90                  95

Arg Ile Ser Ile Pro Ser Ser Ala Ile Ser His Arg Gly Gln Arg Thr

            100                 105                 110

Lys Arg Ala Gln Pro Ser Ala Ala Glu Gly Arg Glu His Leu Pro Glu

        115                 120                 125

Ala Gly Ser Gln Lys Cys Gly Gly Pro Glu Phe Ser Phe Asp Leu Leu

    130                 135                 140

Pro Glu Val Gln Ala Val Arg Val Thr Ile Pro Ala Gly Pro Lys Ala

145                 150                 155                 160

Ser Val Arg Leu Cys Tyr Gln Trp Ala Leu Glu Cys Glu Asp Leu Ser

                165                 170                 175

Ser Pro Phe Asp Thr Gln Lys Ile Val Ser Gly Gly His Thr Val Asp

            180                 185                 190

Leu Pro Tyr Glu Phe Leu Leu Pro Cys Met Cys Ile Glu Ala Ser Tyr

        195                 200                 205

Leu Gln Glu Asp Thr Val Arg Arg Lys Lys Cys Pro Phe Gln Ser Trp

    210                 215                 220

Pro Glu Ala Tyr Gly Ser Asp Phe Trp Gln Ser Ile Arg Phe Thr Asp

225                 230                 235                 240

Tyr Ser Gln His Asn Gln Met Val Met Ala Leu Thr Leu Arg Cys Pro

                245                 250                 255

Leu Lys Leu Glu Ala Ser Leu Cys Trp Arg Gln Asp Pro Leu Thr Pro

            260                 265                 270

Cys Glu Thr Leu Pro Asn Ala Thr Ala Gln Glu Ser Glu Gly Trp Tyr

        275                 280                 285

Ile Leu Glu Asn Val Asp Leu His Pro Gln Leu Cys Phe Lys Phe Ser

    290                 295                 300

Phe Glu Asn Ser Ser His Val Glu Cys Pro His Gln Ser Gly Ser Leu

305                 310                 315                 320

Pro Ser Trp Thr Val Ser Met Asp Thr Gln Ala Gln Gln Leu Thr Leu

                325                 330                 335

His Phe Ser Ser Arg Thr Tyr Ala Thr Phe Ser Ala Ala Trp Ser Asp

            340                 345                 350

Pro Gly Leu Gly Pro Asp Thr Pro Met Pro Pro Val Tyr Ser Ile Ser

        355                 360                 365

Gln Thr Gln Gly Ser Val Pro Val Thr Leu Asp Leu Ile Ile Pro Phe

    370                 375                 380

Leu Arg Gln Glu Asn Cys Ile Leu Val Trp Arg Ser Asp Val His Phe

385                 390                 395                 400

Ala Trp Lys His Val Leu Cys Pro Asp Val Ser His Arg His Leu Gly

                405                 410                 415

Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Thr Leu Thr Ala Leu Val Gly Val Val

            420                 425                 430

Leu Val Leu Leu Gly Arg Arg Leu Leu Pro Gly Ser Gly Arg Thr Arg

        435                 440                 445

Pro Val Leu Leu Leu His Ala Ala Asp Ser Glu Ala Gln Arg Arg Leu

    450                 455                 460

Val Gly Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg Thr Ala Leu Gly Gly Gly Arg

465                 470                 475                 480

Asp Val Ile Val Asp Leu Trp Glu Gly Thr His Val Ala Arg Ile Gly

                485                 490                 495

Pro Leu Pro Trp Leu Trp Ala Ala Arg Glu Arg Val Ala Arg Glu Gln

            500                 505                 510

Gly Thr Val Leu Leu Leu Trp Asn Cys Ala Gly Pro Ser Thr Ala Cys

        515                 520                 525

Ser Gly Asp Pro Arg Ala Ala Ser Leu Arg Thr Leu Leu Cys Ala Ala

    530                 535                 540

Pro Arg Pro Leu Leu Leu Ala Tyr Phe Ser Arg Leu Cys Ala Lys Gly

545                 550                 555                 560

Asp Ile Pro Arg Pro Leu Arg Ala Leu Pro Arg Tyr Arg Leu Leu Arg

                565                 570                 575

Asp Leu Pro Arg Leu Leu Arg Ala Leu Asp Ala Gln Pro Ala Thr Leu

            580                 585                 590

Ala Ser Ser Trp Ser His Leu Gly Ala Lys Arg Cys Leu Lys Asn Arg

        595                 600                 605

Leu Glu Gln Cys His Leu Leu Glu Leu Glu Ala Ala Lys Asp Asp Tyr

    610                 615                 620

Gln Gly Ser Thr Asn Ser Pro Cys Gly Phe Ser Cys Leu

625                 630                 635

Claims (8)

1. 一个白介素17受体，其氨基酸残基序列如SEQ ID NO：2所示。

2. 编码权利要求1所述的白介素17受体的基因，是下述核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ ID NO：1所示的DNA序列；

2)编码序列表中SEQ ID NO：2的DNA序列。

3. 根据权利要求2所述的编码白介素17受体的基因，其特征在于：所述基因的碱基序列如SEQID NO：1所示。

4. 含有权利要求2或3所述基因的表达载体。

5. 含有权利要求2或3所述基因的转基因细胞系。

6. 含有权利要求2或3所述基因的宿主菌。

7. 权利要求1所述的白介素17受体在制备RAS/MAPK信号通路激活制剂中的应用。

8. 权利要求2或3所述的白介素17受体的编码基因在制备RAS/MAPK信号通路激活制剂中的应用。

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